KR102147623B1 - Cosmetic composition for preventing and improving skin aging caused by ultraviolet rays containing Quercus acuta Thunb extract - Google Patents

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배동혁
임소정
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오둘리
김유진
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이경은
김영욱
김재용
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Abstract

The present invention relates to a cosmetic composition for preventing and alleviating skin aging caused by ultraviolet rays, the cosmetic composition comprising containing a Quercus acuta fruit extract as an active ingredient. It has been confirmed that in the cosmetic composition for preventing and alleviating skin aging caused by ultraviolet rays according to the present invention, when HaCaT cells, which are included in a human skin keratin cell line, is treated with a UVB, which is a control group, a collagenase activity is enhanced compared to that of a normal group. However, in the case of an experimental group simultaneously treated with a UVB and a Quercus acuta extract, it has been confirmed that the activity of collagenase decreases as the concentration of a Quercus acuta extract increases. Accordingly, the present invention can be used as a cosmetic composition for preventing and alleviating skin aging caused by UV rays having an excellent inhibitory effect on collagenase and capable of being safely used without toxicity and side effects.

Description

붉가시나무 열매추출물을 함유하는 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선용 화장료 조성물{Cosmetic composition for preventing and improving skin aging caused by ultraviolet rays containing Quercus acuta Thunb extract}Cosmetic composition for preventing and improving skin aging caused by ultraviolet rays containing Quercus acuta Thunb extract}

본 발명은 붉가시나무 (Quercus acuta Thunb) 열매 열수추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 본 발명에 따른 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선용 화장료 조성물은 사람 피부각질세포주인 HaCaT세포에 UV-B를 처리하는 경우, 콜라게나아제의 활성 저해 효과가 우수하며 콜라겐 합성을 증가시켜 독성 및 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있는 피부노화방지 및 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition for preventing and improving skin aging caused by ultraviolet rays, comprising a hot water extract of Quercus acuta Thunb fruit as an active ingredient. More specifically, the cosmetic composition for preventing and improving skin aging caused by ultraviolet rays according to the present invention is excellent in inhibiting the activity of collagenase when UV-B is treated on HaCaT cells, which is a human skin keratin cell line, and increases collagen synthesis. It relates to a cosmetic composition for preventing and improving skin aging that can be safely used without toxicity and side effects.

햇빛에는 가시광선, 적외선, 그리고 자외선이 존재하는데 자외선(Ultraviolet)은 그 파장에 따라 자외선 A(320-400nm), 자외선 B(280-320nm) 그리고 자외선 C(190-280nm) 등 세 가지로 나누어진다. 일반적으로 자외선 C는 대기권의 상층부에 있는 오존층에서 흡수, 산란되어 여과되므로 자연적 광화학 반응에 별다른 영향을 미치지 않는다. In sunlight, there are visible, infrared, and ultraviolet rays.Ultraviolet is divided into three types: ultraviolet A (320-400nm), ultraviolet B (280-320nm), and ultraviolet C (190-280nm) depending on the wavelength. . In general, ultraviolet C is absorbed, scattered and filtered in the ozone layer in the upper part of the atmosphere, so it does not affect the natural photochemical reaction.

인체에 주로 영향을 주는 자외선은 자외선 A(Ultraviolet-A)와 자외선 B(Ultraviolet-B)이다. 자외선 A는 일차적으로는 태양으로부터 방출되나 인공 램프 등에 의해서도 방출되며 피부의 표피와 진피층에 깊숙하게 투과한다. 따라서 자외선 A는 현재 피부에 가장 많은 영향을 주는 요소로서 주시되고 있다. 또한 자외선 B 조사는 자외선 A 보다 더 위험하다. 즉 자외선 B는 자외선 A 보다 파장이 짧아서 피부 깊숙이 침투하지는 못한다고 알려져 있으나 자외선A 보다 훨씬 강한 에너지를 가지고 있어서 피부 표면에 예리한 홍반을 발생시키는 한편 피부의 광노화를 촉진시키는 파장으로 알려져 있다.The ultraviolet rays that mainly affect the human body are ultraviolet A (Ultraviolet-A) and ultraviolet B (Ultraviolet-B). Ultraviolet A is primarily emitted from the sun, but it is also emitted by artificial lamps and penetrates deeply into the epidermis and dermis of the skin. Therefore, ultraviolet A is currently being watched as the factor that most affects the skin. Also, ultraviolet B irradiation is more dangerous than ultraviolet A. In other words, it is known that UV B has a shorter wavelength than UV A and cannot penetrate deep into the skin, but has much stronger energy than UV A, so it is known as a wavelength that causes sharp erythema on the skin surface and promotes photoaging of the skin.

자외선 B는 DNA와 결체조직에 손상을 주어 광노화(photoaging)를 일으킨다. 자외선이 강한 시기는 4월부터 9월이며, 그 중에서도 5~6월이 최고조에 이른다. 이러한 자외선에 지속적으로 노출되어 생긴 피부노화를 광노화(Photoaging)라 하는데, 상기 광노화의 가장 두드러진 증상은 미세주름, 반점, 및 색소침착 등이며, 태양에 노출된 시간과 강도에 비례한다.Ultraviolet B damages DNA and connective tissue, causing photoaging. The period of strong UV rays is from April to September, and the peak is from May to June. Skin aging caused by continuous exposure to such ultraviolet rays is called photoaging, and the most prominent symptoms of photoaging are fine wrinkles, spots, and pigmentation, which are proportional to the time and intensity of exposure to the sun.

자외선에 의한 피부 손상 원인 중 하나는 자외선에 의해 형성된 활성 산소종이 세포 신호체계에 신호를 보내어 결국 피부의 세포간물질 (extracellular matrix, ECM)의 성분인 콜라겐이나 젤라틴 등을 분해하는 효소인 메트릭스 메탈로프로티나제 (matrix metalloproteinase, MMP)를 생성하여 콜라겐이나 젤라틴을 파괴함으로서, 피부에 주름이 형성되게 하는 것이다. 만성적인 자외선의 영향을 상징적으로 나타내는 것으로 농부 혹은 어부의 피부를 들 수 있는데, 그 특징은 외형적으로는 피부의 색이 검고 촉감이 뻣뻣하며 깊은 주름이 생긴다. 이 상태가 더욱 심해지면 피부암을 유발하는데 이러한 피부의 변화를 자연노화와 구분하여 광노화라고 한다.One of the causes of skin damage caused by UV rays is Matrix Metal, an enzyme that breaks down collagen or gelatin, which are components of the skin's extracellular matrix (ECM), by sending a signal to the cell signaling system by reactive oxygen species formed by UV rays. By producing proteinase (matrix metalloproteinase, MMP), it destroys collagen or gelatin, causing wrinkles to form on the skin. The skin of a farmer or a fisherman is a symbolic indication of the effects of chronic UV rays. The characteristic features of the skin are black, stiff to the touch, and deep wrinkles. When this condition becomes more severe, it causes skin cancer. This change in skin is called photoaging, distinguishing it from natural aging.

한편, 국내 천연자원인 붉가시나무(Quercus acuta THUNB. )는 전라남도, 경상남북도 및 제주도의 표고 170~500m의 양지바른 산기슭과 계곡에서 많이 자라는 참나무과 참나무속의 상록활엽교목이다. 높이 20m, 지름 60㎝ 이상으로 자라는 나무로 어린 가지에는 갈색 털이 밀포한다. 잎은 어긋나며 긴 타원형 또는 긴 난형으로 길이 7∼13㎝이고 가장자리가 밋밋하다. 꽃은 1가화로서 5월에 피고 열매는 길이 2㎝로서 다음해 10월에 익는다. 목재의 빛깔이 붉은빛을 띄기 때문에 붉가시나무라는 이름이 붙었다. Meanwhile, the domestic natural resource, Quercus acuta THUNB. ) Is an evergreen broad-leaved arboreous tree of the genus of the oak family oak that grows a lot in the sunny foothills and valleys of 170-500m above sea level in Jeollanam-do, North Gyeongsang and Jeju-do. It is a tree that grows over 20m in height and 60cm in diameter, and brown hairs are densely spread on young branches. Leaves are alternate, long oval or long ovate, 7 to 13 cm long, and flat edges. The flower is a single family flower that blooms in May, and the fruit is 2cm long and ripens in October of the following year. Because the color of the wood has a reddish color, it was named red thorn.

본 발명에서는 우리나라의 천연 식물 원료인 붉가시나무를 이용한 조성물로 피부각질세포주인 HaCaT세포에 UV-B를 처리하는 경우, 콜라게나아제의 활성 저해 효과가 우수하며 콜라겐 합성을 증가시켜 독성 및 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있는 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선용 화장료 조성물을 제공하고자 한다.In the present invention, when UV-B is applied to HaCaT cells, a skin keratin cell line, with a composition using red thorn, a natural plant raw material in Korea, it has excellent inhibitory effect on collagenase activity and increases collagen synthesis so that it is safe without toxicity and side effects. It is intended to provide a cosmetic composition for preventing and improving skin aging caused by ultraviolet rays that can be used.

국내등록특허공보 제10-1068763호에는 엘라직산(ellagic acid)을 함유하는 자외선에 의한 피부노화 억제 효능을 갖는 조성물에 대한 것이다. 보다 구체적으로, 엘라직산을 함유함으로써 자외선 B 파장에 의한 피부 섬유아세포의 콜라겐(collagen) 분해와 메트릭스 메탈로프로티나제(MMP)인 콜라게나제(collagenase) 효소 활성을 억제하고, 무모쥐(hairless mouse)의 콜라겐 섬유조직(collagen fibers)을 지탱하며, 또한 각질형성세포(keratinocytes)의 유착분자 발현과 피부조직의 염증인자 분비를 감소시켜 자외선으로 인한 피부 주름과 염증을 개선시킬 수 있는 조성물이 개시되어있다.Korean Patent Publication No. 10-1068763 relates to a composition having an effect of inhibiting skin aging by ultraviolet rays containing elagic acid. More specifically, by containing ellagic acid, collagen degradation of skin fibroblasts by ultraviolet B wavelength and collagenase activity, which is matrix metalloproteinase (MMP), are inhibited, and hairless mice (hairless A composition that supports the collagen fibers of (mouse) and can improve skin wrinkles and inflammation caused by UV rays by reducing the expression of adhesion molecules in keratinocytes and secretion of inflammatory factors in the skin tissues. Is done. 국내등록특허공보 제10-1426592호에는 연자육 추출물을 유효성분으로 함유하는 자외선 유발 피부노화 억제용 조성물에 관한 것으로서, 연자육(Nelumbinis semen)을 분쇄하는 단계;상기 분쇄한 연자육에 물을 가하여 연자육 함량이 0.5 내지 4 중량%가 되도록 혼합하는 단계; 및 상기 혼합물을 10분 내지 40분간 가열하여 열수추출하는 단계를 포함하는 연자육 추출물의 제조방법이 개시되어있다.Korean Patent Publication No. 10-1426592 relates to a composition for inhibiting UV-induced skin aging containing a lotus meat extract as an active ingredient, comprising: pulverizing Nelumbinis semen; adding water to the pulverized lotus meat to have a lotus meat content Mixing to be 0.5 to 4% by weight; And heating the mixture for 10 to 40 minutes to extract hot water. 국내등록특허공보 제10-1223749호에는 율초 또는 붉가시나무 잎 추출물을 이용한 아토피 피부염 개선제 조성물을 개시한다.Korean Patent Publication No. 10-1223749 discloses a composition for improving atopic dermatitis using an extract of Yulcho or Redthorn. 국내등록특허공보 제10-0997674호에는 붉가시나무 잎이 달린 줄기를 음건한 다음, 마쇄기로 분쇄하여 분말로 만들고, 이 분말을 초음파를 이용하여 1 시간씩 3 회 에탄올로 추출한 다음, 추출물의 상층액을 회수하여 감압 농축하고, 농축물을 증류수에 현탁시킨 후, 현탁액을 용매인 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, 부탄올, 물로 순차적으로 추출하여 제조되는 붉가시나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 및 항암용 조성물이 개시된다.In Korean Patent Publication No. 10-0997674, the stem with red thorn leaves is shaded, then crushed with a grinder to make powder, and this powder is extracted with ethanol three times for 1 hour using ultrasonic waves, and then the supernatant of the extract Was recovered, concentrated under reduced pressure, and the concentrate was suspended in distilled water, and the suspension was sequentially extracted with solvents such as hexane, dichloromethane, ethyl acetate, butanol, and water. A dragon composition is disclosed.

우리나라의 천연 식물자원을 활용할 목적으로 천연원료인 붉가시나무 열매를 이용하여 독성 및 부작용 없이 안전하게 사용가능한 붉가시나무 열매 열수추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선용 화장료 조성물을 제공하고자 한다.To provide a cosmetic composition for preventing and improving skin aging caused by ultraviolet rays containing hot water extract of red thorn fruit that can be safely used without toxicity and side effects using red thorn fruit, a natural raw material, for the purpose of utilizing Korea's natural plant resources. do.

본 발명의 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 붉가시나무 (Quercus acuta Thunb) 열매 열수추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다. In order to achieve the object of the present invention, the present invention provides a cosmetic composition for preventing and improving skin aging due to ultraviolet rays, characterized in that it contains a hot water extract of Quercus acuta Thunb fruit.

상기 과제를 해결하기 위하여 본 발명의 붉가시나무는 물, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산, 디클로로메탄 및 이의 혼합물로 이루어 진 군 중에서 선택된 1종 이상을 추출용매로 추출한 붉가시나무 추출물을 함유하는 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In order to solve the above problem, the red thorn of the present invention extracts at least one selected from the group consisting of water, alcohol having 1 to 5 carbon atoms, ethyl acetate, acetone, ether, chloroform, benzene, hexane, dichloromethane, and mixtures thereof. It provides a cosmetic composition for preventing and improving skin aging due to ultraviolet rays containing a red thorn extract extracted with a solvent.

또한, 상기 추출용매를 사용하여 추출한 붉가시나무 조추출물에 비극성용매로서 헥산, 클로로포름, 디클로메탄 및 에틸아세테이트 중 어느 하나를 분획용매로 사용하여 분획한 붉가시나무 추출물을 함유하는 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In addition, prevention of skin aging by ultraviolet rays containing the red thorn extract fractionated by using any one of hexane, chloroform, dichloromethane and ethyl acetate as a non-polar solvent as a fractionation solvent in the crude red thorn extract extracted using the extraction solvent. And it provides a cosmetic composition for improvement.

본 발명의 붉가시나무 추출물을 함유하는 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선용 화장료 조성물을 0.01 내지 50.0 건 중량% 함유하는 피부외용제 제형인 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선용 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 선크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 린스, 헤어트리트먼트, 화장용물티슈, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형으로 이루어질 수 있다.It provides a cosmetic composition for preventing and improving skin aging caused by ultraviolet rays, which is an external formulation for skin containing 0.01 to 50.0% by weight of a cosmetic composition for preventing and improving skin aging by ultraviolet rays containing the red thorn extract of the present invention. The cosmetic composition for preventing and improving skin aging caused by UV rays of the present invention is a skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisture lotion, nutrition lotion, massage cream, nutrition cream, moisture cream, hand cream, sun cream , Foundation, essence, nutritional essence, pack, soap, shampoo, conditioner, hair treatment, cosmetic wipes, cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion and body cleanser I can.

본 발명의 붉가시나무 추출물을 함유하는 조성물은 사람 피부각질세포주인 HaCaT세포에 대조군인 UV-B를 처리한 경우, 콜라게네이즈 활성이 정상군의 활성에 비해 증가했음을 확인하였으나, UV-B와 붉가시나무 추출물을 동시에 처리한 실험군의 경우, 붉가시나무 추출물의 농도가 증가함에 따라 콜라게네이즈의 활성이 감소되는 것을 확인하여 콜라게네이즈의 활성 저해 효과가 우수하며, 콜라겐 합성을 증가시켜 독성 및 부작용 없이 안전하게 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선용 화장료 조성물로서 사용될 수 있는 것으로 확인하였다.The composition containing the red thorn extract of the present invention confirmed that when the human skin keratin cell line HaCaT cells were treated with UV-B as a control, collagenase activity was increased compared to that of the normal group, but UV-B and red thorns In the case of the experimental group treated with the tree extract at the same time, it was confirmed that the activity of collagenase decreased as the concentration of the red thorn extract increased, and the effect of inhibiting the activity of collagenase was excellent, and by increasing collagen synthesis, there was no toxicity and side effects. It was confirmed that it can be safely used as a cosmetic composition for preventing and improving skin aging due to ultraviolet rays.

도 1은 본 발명에서 사용된 붉가시나무의 원료인 열매의 사진이다.
도 2는 붉가시나무 원료를 용매를 이용하여 붉가시나무 (Quercus acuta Thunb) 추출물 및 분획물을 제조하는 과정을 나타낸 모식도이다.
도 3은 붉가시나무 추출물의 파우더 사진이다.
도 4는 붉가시나무 열수추출물의 세포 독성실험결과를 나타낸 것이다.
도 5은 붉가시나무 열수추출물의 콜라겐 합성 증진 효과를 나타낸 것이다.
도 6은 붉가시나무 열수추출물의 콜라게네이즈 활성저해 효과를 나타낸 것이다.
도 7은 본 발명의 붉가시나무 원물 및 추출물을 이용하여 제조한 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선용 화장품 로션 제형을 나타낸다.
1 is a photograph of a fruit that is a raw material of the red thorn used in the present invention.
2 is a schematic diagram showing a process of preparing extracts and fractions of Quercus acuta Thunb using a raw material of red thorns as a solvent.
3 is a photograph of the powder of red thorn extract.
Figure 4 shows the results of the cytotoxicity test of hot water extract of red thorns.
Figure 5 shows the effect of promoting collagen synthesis of hot water extract of red thorns.
Figure 6 shows the effect of inhibiting collagenase activity of hot water extract of red thorns.
7 shows a cosmetic lotion formulation for preventing and improving skin aging due to ultraviolet rays prepared using the original red thorn extract and extract of the present invention.

본 발명의 붉가시나무 열매추출물을 함유하는 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선용 화장료 조성물과 관련한 구체적인 구성과 첨부한 도면을 참조하여 상세히 설명하면 다음과 같다.The detailed configuration related to the cosmetic composition for preventing and improving skin aging by ultraviolet rays containing the red thorn fruit extract of the present invention and the accompanying drawings will be described in detail as follows.

도 1은 본 발명에서 사용된 붉가시나무의 원료인 열매의 사진을 나타내고, 도 2는 붉가시나무 원료를 용매를 이용하여 붉가시나무 (Quercus acuta Thunb) 추출물 및 분획물을 제조하는 과정을 나타낸 모식도이다. 본 발명에서 사용된 붉가시나무의 원료는 시중 약제상을 통해 공급받은 건조 원물을 사용하였다.FIG. 1 is a photograph of a fruit, which is a raw material of a red thorn, used in the present invention, and FIG. 2 is a schematic diagram showing a process of preparing extracts and fractions of Quercus acuta Thunb using a raw material of red thorn. As the raw material of the red thorn used in the present invention, a dried raw material supplied through a commercially available pharmaceutical company was used.

실시예 1. 붉가시나무 (Quercus acuta Thunb) 추출물과 분획물 제조Example 1. Preparation of extracts and fractions of Quercus acuta Thunb

붉가시나무 (Quercus acuta Thunb) 추출물은 물 또는 탄소수 1 내지 5의 알코올 및 이들의 혼합 용매 중에서 선택되는 어느 하나로부터 가용하여 제조한다. 건조된 붉가시나무 500g에 7.5L 증류수를 첨가하여 100℃에서 3시간동안 가열하여 열수 추출하였다. 상기 추출된 열수 추출물을 감압 농축 및 동결 건조하여 붉가시나무 (Quercus acuta Thunb) 열수 동결건조물 91.2g 얻었다. 도 3은 붉가시나무 추출물의 파우더 사진을 나타낸다.The extract of Quercus acuta Thunb is prepared by soluble in water or any one selected from alcohols having 1 to 5 carbon atoms and a mixed solvent thereof. 7.5L distilled water was added to 500 g of dried red thorns and heated at 100° C. for 3 hours to extract hot water. The extracted hot water extract was concentrated under reduced pressure and freeze-dried to obtain 91.2 g of a hot water freeze-dried product of Quercus acuta Thunb. 3 shows a picture of the powder of red thorn extract.

붉가시나무의 극성용매, 비극성용매 가용 분획물의 제조는 붉가시나무 열수 추출물을 증류수 1L에 완전히 용해시킨 후 분획 여두 깔대기에 넣고 헥산(Hexane) 1L를 첨가하여 water층과 hexane 층을 분리하였고 이와 같은 공정을 3번 반복하였다. 동일한 과정을 통해 클로로포름 (chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 부탄올(butanol)을 순차적으로 가하여 각 분획물을 얻었고, 얻어진 각각의 분획물을 감압여과 장치로 여과하여 농축한 후 동결건조하여 용매를 완전히 제거한 뒤 본 실험에 사용하였다. Preparation of polar solvent and non-polar solvent-soluble fractions of red thorn After completely dissolving the hot water extract of red thorn in 1 L of distilled water, it was put into a fractionation funnel and 1 L of hexane was added to separate the water layer and the hexane layer, and the same process was repeated three times. Through the same process, chloroform, ethyl acetate, and butanol were sequentially added to obtain each fraction, and each obtained fraction was filtered through a vacuum filtration device, concentrated, and freeze-dried to completely remove the solvent. It was used later in this experiment.

1.1. 헥산 가용성 분획 분리1.1. Hexane-soluble fraction separation

붉가시나무 열수 추출물을 lL의 증류수에 완전히 용해시킨 후에 분획 여두 깔대기에 넣고 헥산 1L를 첨가하여 헥산 불용성층(수층)과 헥산가용성층을 분리하였다. 다시 헥산 불용성층(수층)을 대상으로 동일한 공정을 3번 반복하여 헥산 불용성 분획 및 가용성 분획을 수집하였다. After completely dissolving the red thorn hot-water extract in 1 L of distilled water, it was placed in a fractionation funnel and 1 L of hexane was added to separate the hexane-insoluble layer (aqueous layer) and the hexane-soluble layer. Again, the same process was repeated three times for the hexane insoluble layer (aqueous layer) to collect the hexane insoluble fraction and the soluble fraction.

1.2.클로로포름 가용성 분획분리1.2. Chloroform soluble fraction separation

헥산불용성 분획(수층)에 클로로포름 5L를 가하여 섞은 후에 클로로포름가용성 분획 및 불용성 분획을 분리하였고, 클로로포름 불용성층(수층)을 대상으로 동일한 공정을 3번 반복하여 클로로포름 불용성 분획 및 가용성 분획을 수집하였다.After 5L of chloroform was added to the hexane-insoluble fraction (aqueous layer) and mixed, the chloroform-soluble fraction and the insoluble fraction were separated, and the same process was repeated three times for the chloroform insoluble layer (aqueous layer) to collect the chloroform insoluble fraction and the soluble fraction.

1.3.에틸아세테이트 가용성 분획분리1.3. Ethyl acetate soluble fraction separation

클로로포름 불용성 분획(수층)에 에틸아세테이트 5L를 가하여 섞은 후에 에틸아세테이트 가용성 분획 및 불용성 분획을 분리하였고, 에틸아세테이트 불용성층(수층)을 대상으로 동일한 공정을 3번 반복하여 에틸아세테이트 불용성 분획 및 가용성 분획를 수집하였다.After 5L of ethyl acetate was added to the chloroform insoluble fraction (aqueous layer) and mixed, the ethyl acetate soluble fraction and the insoluble fraction were separated, and the same process was repeated 3 times for the ethyl acetate insoluble layer (aqueous layer) to collect the ethyl acetate insoluble fraction and the soluble fraction I did.

1.4. 부탄올 가용성 분획분리1.4. Butanol-soluble fraction separation

에틸아세테이트 불용선 분획(수층)에 부탄올 5L를 가하여 섞은 후에 부탄올 가용성 분획 및 불용성 분획을 분리하였고, 부탄올 불용성층을 대상으로 동일한 공정을 3번 반복하여 부탄올 불용성 분획 및 가용성 분획을 수집하였다.After adding and mixing 5L of butanol to the ethyl acetate insoluble fraction (aqueous layer), the butanol-soluble fraction and the insoluble fraction were separated, and the butanol-insoluble fraction and the soluble fraction were collected by repeating the same process three times for the butanol-insoluble layer.

1.5 붉가시나무 열수추출물 및 분획물 수득1.5 Obtaining Hot Water Extract and Fraction from Redthorn

붉가시나무 열수추출물에서 헥산 가용성 분획, 클로로포름 가용성 분획, 에틸아세테이트 가용성 분획 및 부탄올 가용성 분획을 감압 농축한 후에 동결건조하여 헥산분획, 클로로포름 분획, 에틸아세테이트 분획, 부탄올 분획을 얻어 시료로 사용하였다.Hexane-soluble fraction, chloroform-soluble fraction, ethyl acetate-soluble fraction, and butanol-soluble fraction were concentrated under reduced pressure from the hot-water extract of red thorns, and then freeze-dried to obtain a hexane fraction, a chloroform fraction, an ethyl acetate fraction, and a butanol fraction and used as samples.

실시 예 2. 붉가시나무 추출물의 세포 독성실험결과. Example 2. Cytotoxicity test results of red thorn extract.

도 4는 붉가시나무 추출물의 세포 독성실험결과를 나타낸다. 붉가시나무 열수 추출물에 대한 사람피부각질세포(HaCaT)의 세포생존률을 측정하기 위해 MTT assay를 수행하였다. 우선, 세포배양 배지를 제거한 후 MTT를 1 ㎎/㎖로 포함하는 DMEM 배지를 웰 당 1 ㎖씩 처리하고, 37℃ 습윤한 CO₂배양기에서 4시간 더 배양하였다. 이후 배지를 제거한 후, tetrazolium bromide salt를 제거하고, DMSO 200 ㎕를 분주하여 각 웰에 생성된 포르마잔 크리스탈을 용해시키고, 마이크로 플레이트리더(microplate reader)에서 570 ㎚파장으로 흡광도를 측정하여 세포생존율을 확인하였다.붉가시나무 열수 추출물을 다양한 농도(10, 50, 100, 200 그리고 400μg/ml)별로 처리하고 24시간을 처리한 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 각각 97.86±0.54%, 96.21±1.88%, 95.32±1.37%, 90.50±2.13의 세포증식능을 확인하였다. 이는 시료를 처리하지 않은 정상군과 비교한 결과, 모두 세포독성에 별다른 영향을 나타내지 않는 것으로 확인되었다. Figure 4 shows the results of the cytotoxicity test of the red thorn extract. MTT assay was performed to measure the cell viability of human skin keratinocytes (HaCaT) for the hot water extract of Redthorn. First, after removing the cell culture medium, a DMEM medium containing 1 mg/ml of MTT was treated with 1 ml per well, and cultured for 4 hours in a CO2 incubator humidified at 37°C. After removing the medium, tetrazolium bromide salt was removed, and 200 µl of DMSO was dispensed to dissolve the formazan crystal generated in each well, and the cell viability was measured by measuring the absorbance at a wavelength of 570 nm in a microplate reader. As a result of treatment with various concentrations (10, 50, 100, 200, and 400 μg/ml) of the hot water extract of Red thorn and 24 hours, as shown in Fig. 4, respectively, 97.86±0.54% and 96.21±1.88% , 95.32±1.37%, 90.50±2.13 cell proliferation ability was confirmed. As a result of comparison with the normal group without treatment of the sample, it was found that none of the samples had a significant effect on cytotoxicity.

실시 예 3. 붉가시나무 추출물의 콜라겐 합성 증진효과 Example 3. The effect of enhancing collagen synthesis of red thorn extract

도 5는 붉가시나무 열수 추출물의 콜라겐 합성 촉진 효과를 나타낸 것이다. 붉가시나무 열수 추출물의 콜라겐 합성 촉진 효과를 평가하기 위해 Procollagen Type I C-Peptide Enzyme Immuno Assay 실험을 수행하였다.Figure 5 shows the effect of promoting collagen synthesis of hot water extract of red thorns. A Procollagen Type I C-Peptide Enzyme Immuno Assay experiment was performed to evaluate the collagen synthesis promoting effect of the hot water extract of Redthorn.

사람 피부각질세포인 HaCaT세포를 24-웰 마이크로 플레이트에 각 웰당 5x104 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에 37℃의 조건에서 70~80% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그 후 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체하고 UV-B를 30mJ/cm2처리하여 콜라겐 분해를 유발하였다. 붉가시나무 추출물을 농도별로 10, 50, 100 그리고 200μg/ml처리한 다음 48시간 동안 무혈청 배지에서 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 프로콜라겐 (procollagen) 타입 I C-펩타이드 (PICP) 양을 키트 (Takara, 일본국)를 이용하여 측정함으로써 새로 합성된 콜라겐 양을 측정하였다. HaCaT cells, which are human skin keratinocytes, were inoculated into a 24-well microplate so as to be 5×10 4 cells per well, and cultured in DMEM medium at 37° C. until about 70-80% growth. Then, it was replaced with serum-free DMEM medium, and UV-B was treated with 30mJ/cm 2 to induce collagen degradation. The red thorn extract was treated with 10, 50, 100 and 200 μg/ml for each concentration, and then further cultured in a serum-free medium for 48 hours. After incubation, the supernatant of each well was collected and the amount of procollagen type I C-peptide (PICP) was measured using a kit (Takara, Japan) to measure the amount of newly synthesized collagen.

대조군인 UV-B를 30mJ/cm2를 처리한 경우, PIP 생성량이 정상군의 PIP 생성량에 비해 감소했음을 확인하였다. 반면에 UV-B와 붉가시나무 추출물을 동시에 처리한 실험군의 경우, 붉가시나무 (Quercus acuta Thunb) 추출물의 농도가 증가함에 따라 콜라겐 합성정도가 회복되는 것을 확인할 수 있었고, 이에 본 발명의 붉가시나무 추출물이 탁월한 콜라겐 합성 증진 효과를 나타냄을 알 수 있었다.When the control group UV-B was treated with 30mJ/cm 2 , it was confirmed that the amount of PIP produced was decreased compared to that of the normal group. On the other hand, in the case of the experimental group treated with UV-B and red thorn extract at the same time, it was confirmed that the degree of collagen synthesis was recovered as the concentration of the extract of Quercus acuta Thunb was increased, and thus the red thorn extract of the present invention It was found that it exhibited excellent collagen synthesis enhancing effect.

실시 예 4. 붉가시나무 추출물의 콜라게네이즈 활성저해 효과Example 4. Effect of red thorn extract on inhibiting collagenase activity

도 6은 붉가시나무 열수 추출물의 콜라게네이즈(MMP-1) 활성저해 효과를 나타낸 것이다. 붉가시나무 열수 추출물의 콜라겐 분해 억제능을 평가하기 위해 MMP-1 활성저해 실험을 수행하였다. 6 shows the effect of inhibiting collagenase (MMP-1) activity of hot water extract of red thorns. In order to evaluate the ability to inhibit collagen degradation of the hot water extract of red thorns, an MMP-1 activity inhibition experiment was performed.

사람 피부각질세포주인 HaCaT세포를 96-웰 마이크로 플레이트에 각 웰당 1X 104세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에 37℃의 조건에서 70~80% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그 후 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체하고 UV-B를 30mJ/cm2처리하여 콜라게네이즈 활성증가를 유발하였다. 실험군으로 붉가시나무 10, 50, 100, 200㎍/㎖로 처리한 다음 48시간 동안 무혈청 배지에서 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 assay kit(R&D systems, 미국)를 사용하여 450nm에서 total MMP-1 효소의 활성을 확인하였다.HaCaT cells, a human skin keratin cell line, were inoculated in a 96-well microplate to 1×10 4 cells per well, and cultured in DMEM medium at 37° C. until about 70-80% growth. Then, it was replaced with serum-free DMEM medium, and UV-B was treated with 30mJ/cm 2 to induce an increase in collagenase activity. As an experimental group, red thorns were treated with 10, 50, 100, and 200 µg/ml, and then further cultured in a serum-free medium for 48 hours. After incubation, the supernatant of each well was collected and the activity of the total MMP-1 enzyme was confirmed at 450 nm using an MMP-1 assay kit (R&D systems, USA).

대조군인 UV-B를 30mJ/cm2를 처리한 경우, 콜라게네이즈 활성이 정상군의 활성에 비해 증가했음을 확인하였다. 반면에 UVB와 붉가시나무 추출물을 동시에 처리한 실험군의 경우, 붉가시나무 추출물의 농도가 증가함에 따라 콜라게네이즈의 활성이 감소되는 것을 확인할 수 있었다. 이에 본 발명의 붉가시나무 추출물이 UV-B에 의해 증가된 콜라게네이즈 활성 억제에 관여하고 콜라겐 분해 촉진 억제에 관여함으로서 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선에 효과가 있음을 확인하였다. 또한 탁월한 콜라겐 합성 증진 효과를 나타냄을 알 수 있었다.When the control group UV-B was treated with 30mJ/cm 2 , it was confirmed that the collagenase activity was increased compared to that of the normal group. On the other hand, in the case of the experimental group treated with UVB and red thorn extract at the same time, it was confirmed that the activity of collagenase decreased as the concentration of red thorn extract increased. Accordingly, it was confirmed that the red thorn extract of the present invention is effective in preventing and improving skin aging due to ultraviolet rays by being involved in inhibiting the collagenase activity increased by UV-B and inhibiting the promotion of collagen degradation. In addition, it was found that it exhibited excellent collagen synthesis enhancing effect.

실시 예 5. 붉가시나무 추출물을 이용한 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선용 화장품 제조Example 5. Manufacture of cosmetics for preventing and improving skin aging by ultraviolet rays using red thorn extract

도 7은 본 발명의 붉가시나무 원물 및 추출물을 이용하여 제조한 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선용 화장품 로션 제형을 나타낸다.7 shows a cosmetic lotion formulation for preventing and improving skin aging due to ultraviolet rays prepared using the original red thorn extract and extract of the present invention.

1) 붉가시나무 추출물을 포함하는 보습제 미스트의 제조1) Preparation of moisturizing mist containing red thorn extract

정제수 100 ml에 대해 상기 붉가시나무 열수 추출물 10 mg 및 pH 조절제로서 트리에탄올아민을 1 mg을 혼합하여 미스트를 제조하였다. 이 미스트의 pH는 7.5이고, 상기 미스트를 성인의 피부에 도포하여 하용하였다. Mist was prepared by mixing 10 mg of the hot water extract of Redthorn and 1 mg of triethanolamine as a pH adjuster with respect to 100 ml of purified water. The pH of this mist was 7.5, and the mist was applied and used on the skin of an adult.

2) 붉가시나무 추출물을 포함하는 로션의 제조2) Preparation of lotion containing red thorn extract

정제수 100 ml에 대해 실시예 1에서 제조된 붉가시나무 열수 추출물 10 mg, pH 조절제로서 트리에탄올아민 1 mg, 알로에 베라 추출물 0.5 mg, 살리실산 0.5 mg, 알란토인 0.5 mg, 호호바 오일 0.5 mg, 토코페롤 0.5 mg을 넣고, 50℃로 가열한 후, 식물성오일로서 시어버터(Shea butter) 20 ml 및 유화제로서 세틸알콜 20ml을 혼합한 유상층과 혼합하여 유화시킴으로써 로션을 제조하였다.With respect to 100 ml of purified water, 10 mg of the hot water extract of Redthorn prepared in Example 1, 1 mg of triethanolamine, 0.5 mg of aloe vera extract, 0.5 mg of salicylic acid, 0.5 mg of allantoin, 0.5 mg of jojoba oil, and 0.5 mg of tocopherol were added as a pH adjuster. , After heating to 50°C, a lotion was prepared by emulsifying by mixing with an oily layer in which 20 ml of shea butter as vegetable oil and 20 ml of cetyl alcohol as an emulsifier were mixed.

이외에도 본원발명의 붉가시나무 추출물을 이용하여 다음과 같은 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선용 화장품 제조할 수 있다. 화장품의 피부외용제 제형은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 선크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 린스, 헤어트리트먼트, 화장용물티슈, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형으로 이루어지는 것일 수 있다.In addition, it is possible to manufacture cosmetics for preventing and improving skin aging caused by ultraviolet rays as follows by using the red thorn extract of the present invention. The cosmetic formulation for external skin is skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisture lotion, nutrition lotion, massage cream, nutrition cream, moisture cream, hand cream, sun cream, foundation, essence, nutrition essence, pack , Soap, shampoo, conditioner, hair treatment, cosmetic wipes, cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion, and body cleanser.It may be made of any one formulation selected from the group consisting of.

본 발명은 붉가시나무 (Quercus acuta Thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부노화방지 및 개선용 화장료 조성물을 제공함으로서 콜라겐합성을 증가시키고, 콜라게나아제의 활성 저해 효과가 우수하며 독성 및 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있는 피부노화방지 및 개선용 화장료 제품 생산 및 관련 산업의 이윤을 창출할 수 있어 산업상 이용가능성이 있다.The present invention provides a cosmetic composition for preventing and improving skin aging caused by ultraviolet rays comprising an extract of Quercus acuta Thunb as an active ingredient, thereby increasing collagen synthesis, has excellent inhibitory effect on collagenase activity, and has toxicity and side effects. It has industrial applicability because it can produce profits in related industries and produce cosmetic products for preventing and improving skin aging that can be safely used without.

Claims (5)

붉가시나무 (Quercus acuta Thunb) 열매의 열수추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부손상 예방 또는 개선용 화장료 조성물A cosmetic composition for preventing or improving skin damage caused by ultraviolet rays, characterized in that it contains hot water extract of the fruit of Quercus acuta Thunb as an active ingredient 삭제delete 삭제delete 제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부외용제 제형인 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부손상 예방 또는 개선용 화장료 조성물The cosmetic composition for preventing or improving skin damage caused by ultraviolet rays according to claim 1, wherein the composition is an external preparation for skin. 제4항에 있어서 피부외용제 제형은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 선크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 린스, 헤어트리트먼트, 화장용물티슈, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부손상 예방 또는 개선용 화장료 조성물The formulation of claim 4, wherein the external preparation for skin is skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisture lotion, nutrition lotion, massage cream, nutrition cream, moisture cream, hand cream, sun cream, foundation, essence, nutrition. Essence, pack, soap, shampoo, conditioner, hair treatment, cosmetic wipes, cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion, and body cleanser. Cosmetic composition for preventing or improving skin damage caused by
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국내등록특허공보 제10-1068763호에는 엘라직산(ellagic acid)을 함유하는 자외선에 의한 피부노화 억제 효능을 갖는 조성물에 대한 것이다. 보다 구체적으로, 엘라직산을 함유함으로써 자외선 B 파장에 의한 피부 섬유아세포의 콜라겐(collagen) 분해와 메트릭스 메탈로프로티나제(MMP)인 콜라게나제(collagenase) 효소 활성을 억제하고, 무모쥐(hairless mouse)의 콜라겐 섬유조직(collagen fibers)을 지탱하며, 또한 각질형성세포(keratinocytes)의 유착분자 발현과 피부조직의 염증인자 분비를 감소시켜 자외선으로 인한 피부 주름과 염증을 개선시킬 수 있는 조성물이 개시되어있다.
국내등록특허공보 제10-1426592호에는 연자육 추출물을 유효성분으로 함유하는 자외선 유발 피부노화 억제용 조성물에 관한 것으로서, 연자육(Nelumbinis semen)을 분쇄하는 단계;상기 분쇄한 연자육에 물을 가하여 연자육 함량이 0.5 내지 4 중량%가 되도록 혼합하는 단계; 및 상기 혼합물을 10분 내지 40분간 가열하여 열수추출하는 단계를 포함하는 연자육 추출물의 제조방법이 개시되어있다.
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