KR102146422B1

KR102146422B1 - 정금나무 추출물을 포함하는 항암용 조성물

Info

Publication number: KR102146422B1
Application number: KR1020180117076A
Authority: KR
Inventors: 손호준; 김만조; 송정호; 정진부; 박광훈
Original assignee: 대한민국
Priority date: 2018-10-01
Filing date: 2018-10-01
Publication date: 2020-08-20
Also published as: KR20200037618A

Abstract

본 발명은 정금나무(Vaccinium oldhamii) 추출물을 포함하는 암 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 대한 것이다.
또한, 본 발명은 정금나무(Vaccinium oldhamii) 추출물을 포함하는 항암보조제 내지 항암용 화장료 조성물에 대한 것이다.
따라서, 본 발명의 정금나무(Vaccinium oldhamii) 추출물은 사이클린 D1의 mRNA 또는 단백질의 수준을 억제하여 여러 암세포주의 성장을 억제시키는 효과가 있으므로, 암 예방, 개선 또는 치료용 조성물로서 효과적이다.

Description

정금나무 추출물을 포함하는 항암용 조성물 {Anti-cancer composition comprising extract of Vaccinium oldhamii}

본 발명은 정금나무(Vaccinium oldhamii) 추출물을 포함하는 암 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 대한 것이다.

또한, 본 발명은 정금나무(Vaccinium oldhamii) 추출물을 포함하는 항암보조제 내지 항암용 화장료 조성물에 대한 것이다.

암은 전세계적으로 공중 보건 문제로 여겨지고 있는데, 우리나라의 경우 2018년에 새로운 암의 발생건수는 약 20만건 및 암 사망 건수는 약 8만건으로 예상된다. 암은 초기 진행, 증식 및 전이의 과정으로 진행된다; 초기 진행단계에서는 세포의 DNA 손상 내지 돌연변이가 발생하고, 증식 단계에서는 비정상적인 유전자발현 유도 내지 세포간의 신호전달과정 변화 등을 통하여 세포 증식이 증가하고 세포사멸이 억제되며, 전이 단계에서 유전자 발현을 더욱 증가되어 암세포의 전이가 유도된다. 암세포들은 비정상적인 세포 증식 및 세포 주기의 진행을 특징으로 하는데, 여기에는 종양 유전자 중 하나인 사이클린 D1(cyclin D1)이 관여한다. 사이클린 D1은 인간의 여러 암 종류에서 과생산되어 G1기에서 S기로 세포주기의 전이를 유도하여 세포 증식을 촉진시키는 역할을 하는 것으로 알려져 있다.

현재 사용되고 있는 항암제들은 효소 제제나 백신 등의 생물학적 제제, 화학 합성 의약품, 천연물 유래의 의약품 등으로 크게 구분할 수 있는데, 이 중 효소, 백신 등의 생물학적 제제는 실용 단계에 있는 상태는 아니며, 화학 합성 의약품의 경우 암의 종류에 따라 약리작용이 다양하고 독성에 의해 많은 부작용의 위험이 있기 때문에 문제점으로 지적되고 있다. 이러한 화학 합성 의약품의 부작용이 없는 식물 유래 천연 항암제의 개발이 요구된다.

정금나무(Vaccinium oldhamii Miquel)은 진달래과에 속하는 낙엽 관목으로 한국 남부와 제주도의 산 중턱에서 자란다. 정금나무는 임질, 구토 또는 설사를 치료하는데 사용되어왔으며, α-아밀라아제와 아세틸콜린에스테라아제(acetylcholinesterase)를 억제한다. 또한, 네이티브 블루베리라고 불리는 정금나무의 열매는 블루베리보다 많은 양의 폴리페놀과 항산화 작용을 한다고 보고되었다.

대한민국 공개특허 제 10-2014-0059959 호는 정금나무 열매 추출물을 포함하는 비만치료 및 개선용 조성물에 대한 것으로서, 정금나무 열매 추출물은 췌장 리파아제(pancreatic lipase)를 저해하여 지방 세포의 분화 및 지방의 생성을 억제하는 활성이 있음을 개시하고 있다.

그러나 정금나무의 추출물이 암세포의 증식을 억제하여 항암효과를 가질 수 있는지 여부에 대한 연구는 개시된 바 없다.

이에, 본 발명자들은 항암 효과가 있는 식물 유래 천연 항암제를 제공하기 위하여 노력한 결과, 정금나무(Vaccinium oldhamii)의 추출물이 사이클린 D1의 mRNA 내지 단백질 수준을 감소시킴으로써 암세포의 증식을 억제하는 효과가 있어 항암용 조성물로 효과적임을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 정금나무(Vaccinium oldhamii) 추출물을 포함하는 암 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은, 정금나무(Vaccinium oldhamii) 추출물을 포함하는 항암보조제 내지 항암용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 본 발명의 목적은 정금나무(Vaccinium oldhamii) 추출물을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 추출물은 정금나무의 잎, 열매 및 가지로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 부위에서 추출되는 것일 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 추출물은 물, C₁내지 C₄ 의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출되는 것일 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 추출물은 암세포의 사이클린 D1(cycline D1) 단백질을 분해하는 것일 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 추출물의 농도는 10 내지 130 ㎍/㎖ 인 것일 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 암은 갑상선암, 유방암, 전립선암, 폐암, 위암, 담낭암, 대장암, 췌장암 및 간암으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 암인 것일 수 있다.

본 발명은 또한, 정금나무(Vaccinium oldhamii) 추출물을 포함하는 암 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 또한, 정금나무(Vaccinium oldhamii) 추출물을 포함하는 항암보조제를 제공하는 것이다.

본 발명은 또한, 정금나무(Vaccinium oldhamii) 추출물을 포함하는 항암용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

따라서, 본 발명의 정금나무(Vaccinium oldhamii) 추출물은 사이클린 D1의 mRNA 또는 단백질의 수준을 억제하여 여러 암세포주의 성장을 억제시키는 효과가 있으므로, 암 예방, 개선 또는 치료용 조성물로서 효과적이다.

도 1은 대장암 세포주에 정금나무 가지 추출물(VOB), 잎 추출물(VOL) 또는 열매 추출물(VOF)를 각각 처리한 후 세포 증식률을 측정한 결과를 나타낸다. VOB를 처리한 경우 유의적으로 세포증식이 억제되었으나, VOL를 처리한 경우 증식억제 효과는 미미하였고, VOF를 처리한 경우에는 세포증식 억제 효과가 없었다.
도 2는 유방암 세포주에 정금나무 가지 추출물(VOB), 잎 추출물(VOL) 또는 열매 추출물(VOF)를 각각 처리한 후 세포 증식률을 측정한 결과를 나타낸다. MDA-MB-231 유방암 세포주에 VOB를 처리하는 경우 유의적으로 세포증식이 억제되었으나, VOL 또는 VOF를 처리한 경우에는 세포증식 억제 효과가 미미하였으며, MCF-7 유방암 세포주의 경우 VOB, VOL 및 VOF 모두 세포증식 억제 효과를 나타내지 않았다.
도 3은 전립선암 세포주에 정금나무 가지 추출물(VOB), 잎 추출물(VOL) 또는 열매 추출물(VOF)를 각각 처리한 후 세포 증식률을 측정한 결과를 나타낸다. VOB를 처리한 경우 유의적으로 세포증식이 억제되었으나, VOL 또는 VOF를 처리한 경우에는 세포증식 억제 효과가 미미하였다.
도 4는 비소세포성폐암, 췌장암 또는 간암 세포주에 정금나무 가지 추출물(VOB), 잎 추출물(VOL) 또는 열매 추출물(VOF)를 각각 처리한 후 세포 증식률을 측정한 결과를 나타낸다. A549 비소세포성폐암 세포주에 VOB를 처리한 경우 유의적으로 세포증식이 억제되었으나, VOL 또는 VOF를 처리한 경우에는 세포증식 억제 효과가 미미하였다. AsPC-1 췌장암 세포주 또는 HepG-2 간암 세포주에 각각 VOB를 처리한 경우 세포증식 억제 효과가 미미하였으며, VOL 또는 VOF를 처리한 경우에는 세포증식 억제 효과가 나타나지 않았다.
도 5는 대장암 세포주에 정금나무 가지 추출물(VOB)를 처리한 후 사이클린 D1의 단백질 또는 mRNA 수준을 측정한 결과를 나타낸다. 사이클린 D1의 단백질과 mRNA의 수준이 모두 감소하였으나, 단백질의 감소량이 더욱 유의적으로 나타났다.
도 6은 유방암 세포주에 정금나무 가지 추출물(VOB)를 처리한 후 사이클린 D1의 단백질 수준을 측정한 결과를 나타낸다. MDA-MB-231 유방암 세포주의 경우 사이클린 D1의 단백질 수준이 유의적으로 감소하였으나, MCF-7 유방암 세포주의 경우 사이클린 D1의 단백질 수준에 변화가 없었다.
도 7은 전립선암 세포주에 정금나무 가지 추출물(VOB)를 처리한 후 사이클린 D1의 단백질 수준을 측정한 결과를 나타낸다. VOB 처리로 인하여 사이클린 D1의 단백질 수준이 유의적으로 감소하였다.
도 8은 비소세포성폐암, 췌장암 또는 간암 세포주에 정금나무 가지 추출물(VOB)을 처리한 후 사이클린 D1 단백질 수준을 측정한 결과를 나타낸다. 비소세포성폐암 세포주에 대하여는 VOB 농도 의존적으로 사이클린 D1 단백질의 수준이 감소하였으며, 췌장암 또는 간암 세포주에 대하여는 VOB의 농도가 50㎍/㎖ 이상인 경우에 사이클린 D1 단백질의 수준이 감소한 것을 확인할 수 있었다.
도 9는 각 암세포주에 프로테아좀(proteasome) 억제자인 MG132로 전처리 한 후 정금나무 가지 추출물(VOB)로 처리한 경우 사이클린 D1 단백질의 수준을 측정한 결과를 나타낸다. MG132로 전처리하는 경우 VOB에 의한 사이클린 D1 단백질의 수준 감소 효과가 억제되는 것을 확인하였다.
도 10은 대장암 세포주에 정금나무 가지 추출물(VOB)를 처리하는 경우 사이클린 D1 단백질의 감소 효과와 트레오닌-286(T286)의 관계를 나타낸다. 사이클린 D1의 T286을 알라닌으로 점돌연변이 시키는 경우((A)) 또는 핵에서의 이주를 억제하는 LMB로 전처리하는 경우((B)) VOB에 의한 사이클린 D1 단백질 수준의 감소가 약화되는 것을 나타낸다.
도 11은 각 암세포주에 PD98059(ERK1/2 억제제), SB203580(p38 억제제), SP600125(JNK 억제제), LiCl(GSK3β 억제제), LY294002(PI3K 억제제) 또는 BAY 11-7082(IκK 억제제)를 각각 전처리한 후 정금나무 가지 추출물(VOB)를 처리하는 경우 사이클린 D1 단백질의 수준을 측정한 결과를 나타낸다. 상기 억제제들은 사이클린 D1 단백질의 수준에 영향을 주지 않는 것을 확인할 수 있었다.

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

상술한 바와 같이, 종래 항암제로서 사용되는 합성 항암제는 세포독성 등의 많은 부작용의 우려가 있다는 문제점이 있으므로 이를 해결하기 위하여 식물 유래의 천연 항암제에 대한 연구가 필요한 실정이다.

본 발명에 따른 정금나무(Vaccinium oldhamii) 추출물은 암세포 성장주기에 관여하는 사이클린 D1을 억제, 특히 사이클린 D1 단백질의 수준을 감소시켜 암세포의 성장을 억제하는 효과가 있으므로, 암의 예방, 개선 또는 치료용 조성물로서 효과적이다.

따라서, 본 발명은 정금나무(Vaccinium oldhamii) 추출물을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

상기 정금나무 추출물은 정금나무의 지상부에서 추출하여 제조될 수 있으나, 잎, 열매 및 가지로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 부위에서 추출되는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 정금나무의 가지에서 추출하여 제조되는 것이 가장 바람직하다.

상기 정금나무 추출물은 물, C₁내지 C₄ 의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출되는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 C₁내지 C₄ 의 저급 알코올을 용매로 하여 추출되는 것이 가장 바람직하고, 가장 바람직하게는 에탄올을 용매로 하여 추출되는 것이 가장 바람직하다.

본 발명의 정금나무 추출물은 여러 종류의 암세포주의 증식을 억제할 수 있으며(실시예 2), 이는 암세포의 성장주기와 관련있는 사이클린 D1(cycline D1) 억제를 통해 이루어진다. 상기 정금나무 추출물은 사이클린 D1의 mRNA 및 단백질의 수준 모두를 억제하는데, 특히 사이클린 D1 단백질의 수준을 더욱 유의적으로 저하시킨다(도 5). 이는 상기 정금나무 추출물이 사이클린 D1 유전자를 조절하기 보다는 사이클린 D1 단백질을 프로테아좀으로 분해하는 경로(proteasomal degradation)를 통해 사이클린 D1의 수준을 낮추는 것을 의미한다. 이는 프로테아좀 저해제인 MG132를 처리하는 경우 정금나무 추출물로 인한 사이클린 D1의 수준 저하가 억제되는 것을 통하여 뒷받침될 수 있다(실시예 4).

프로테아좀으로 사이클린 D1 단백질을 분해하기 위해서는 사이클린 D1이 핵에서 세포질로 이동되어야 하는데, 이는 사이클린 D1의 트레오닌-286(T286)이 인산화로 이루어진다. 이는 T286을 알라닌(Alanine)으로 점돌연변이 시키는 경우 또는 핵에서의 이주를 억제하는 NMB(Leptomycin B)를 처리하는 경우 정금나무 추출물로 인한 사이클린 D1의 수준 저하가 억제되는 것을 통하여 뒷받침될 수 있다(실시예 5).

암세포의 증식은 여러 종류의 신호전달을 통하여 일어나는데, 그 중 MAPKs(Mitogen-activated protein kinases)가 가장 잘 알려져 있다. 이는 세린-트레오닌 단백질 키나아제로서 세포 표면에서 핵으로의 신호전달에 중요한 역할을 한다. MAPKs는 성장인자와 관련된 ERKs(Estracellular signal-related kinases), 스트레스로 활성화되는 JNKs(c-jun NH₂-terminal kinases) 및 p38 등으로 구성된다. 활성산소(Reactive oxygen species; ROS)에 의한 산화스트레스는 MAPKs의 활성화를 유도할 수 있는데, 이 외에 GSK3β 또는 IκK 등의 키나아제들도 활성산소에 의해 활성화되는 것으로 알려져 있다.

다만, 본 발명의 정금나무 추출물로 인한 사이클린 D1 단백질 분해는 MAPK, GSK3β 또는 IκK 와 같은 상류 키나아제와는 무관한 것을 확인하였으며(실시예 6), 이는 정금나무 추출물의 사이클린 D1 단백질 분해 효과와 항산화활성이 무관하다는 것을 의미한다.

상기 정금나무 추출물의 농도는 10 내지 130 ㎍/㎖ 인 것이 바람직하나, 더욱 바람직하게는 30 내지 120 ㎍/㎖ 인 것이 바람직하고, 가장 바람직하게는 80 내지 110 ㎍/㎖ 인 것이 가장 바람직하다.

다만, 췌장암 또는 간암에 대하여는 정금나무 가지 추출물(VOB)의 농도는 30 내지 120 ㎍/㎖ 인 것이 바람직하고, 가장 바람직하게는 80 내지 110 ㎍/㎖ 인 것이 가장 바람직하다. 폐암에 대하여는 정금나무 잎 추출물(VOL)의 농도는 0 내지 110 ㎍/㎖ 인 것이 바람직하다.

본 발명의 상기 암은 갑상선암, 유방암, 전립선암, 폐암, 위암, 담낭암, 대장암, 췌장암 및 간암으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 암인 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 유방암, 전립선암, 폐암, 대장암, 췌장암 및 간암으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 암인 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 유방암 중 삼중음성유방암, 전립선암, 폐암 중 비소세포성폐암, 대장암, 췌장암 및 간암으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 암인 것이 가장 바람직하다.

따라서, 정금나무의 가지 추출물(VOB)는 대장암, 유방암, 전립선암, 폐암, 췌장암 및 간암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서 활용할 수 있으며; 정금나무의 잎 추출물(VOL)은 대장암, 유방암, 전립선암 및 폐암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서 활용할 수 있고; 정금나무의 열매 추출물(VOF)은 유방암 및 전립선암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서 활용할 수 있다.

본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 상기 조성물을 제형화할 경우에는 하나 이상의 완충제(예를 들어, 식염수 또는 PBS), 항산화제, 정균제, 킬레이트화제(예를 들어, EDTA 또는 글루타치온), 충진제, 증량제, 결합제, 아쥬반트(예를 들어, 알루미늄 하이드록사이드), 현탁제, 농후제 습윤제, 붕해제 또는 계면활성제, 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분(옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분 등 포함), 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose), 덱스트로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 말티톨, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 예컨대, 활성성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다.

또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 또는 보존제 등이 포함될 수 있다. 또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있으며, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제 또는 좌제 등이 포함된다. 비수성용제 및 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있으며, 비경구 투여시 피부외용; 복강내, 직장, 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사하는 주사제; 경피 투여제; 또는 비강 흡입제의 형태로 당업계에 공지된 방법에 따라 제형화할 수 있다.

상기 주사제의 경우에는 반드시 멸균되어야 하며 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염으로부터 보호되어야 한다. 주사제의 경우 적합한 담체의 예로는 이에 한정되지는 않으나, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 이들의 혼합물 및/또는 식물유를 포함하는 용매 또는 분산매질일 수 있다. 보다 바람직하게는, 적합한 담체로는 행크스 용액, 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS (phosphate buffered saline) 또는 주사용 멸균수, 10% 에탄올, 40% 프로필렌 글리콜 및 5% 덱스트로즈와 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 상기 주사제를 미생물 오염으로부터 보호하기 위해서는 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르빈산, 티메로살 등과 같은 다양한 항균제 및 항진균제를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 주사제는 대부분의 경우 당 또는 나트륨 클로라이드와 같은 등장화제를 추가로 포함할 수 있다.

경피 투여제의 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태가 포함된다. 상기에서 경피 투여는 약학 조성물을 국소적으로 피부에 투여하여 약학 조성물에 함유된 유효한 양의 활성성분이 피부 내로 전달되는 것을 의미한다.

흡입 투여제의 경우, 본 발명에 따라 사용되는 화합물은 적합한 추진제, 예를 들면, 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체를 사용하여, 가압 팩 또는 연무기로부터 에어로졸 스프레이 형태로 편리하게 전달 할 수 있다. 가압 에어로졸의 경우, 투약 단위는 계량된 양을 전달하는 밸브를 제공하여 결정할 수 있다. 예를 들면, 흡입기 또는 취입기에 사용되는 젤라틴 캡슐 및 카트리지는 화합물, 및 락토즈 또는 전분과 같은 적합한 분말 기제의 분말 혼합물을 함유하도록 제형화할 수 있다. 비경구 투여용 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour)에 기재되어 있다.

본 발명의 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 약제학적으로 유효한 양은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 즉, 본 발명의 조성물의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하다. 일일 투여량으로는, 비경구 투여 시 정금나무 추출물을 기준으로 하루에 체중 1 kg당 바람직하게 0.01 내지 50 mg, 더 바람직하게는 0.1 내지 30 mg의 양으로 투여되도록, 그리고 경구 투여 시는 본 발명의 정금나무 추출물을 기준으로 하루에 체중 1 kg당 바람직하게 0.01 내지 100 mg, 더 바람직하게는 0.01 내지 10 mg의 양으로 투여되도록 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 비만의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 또한 정금나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 외용제의 제형으로 제공할 수 있다. 본 발명의 암 예방 또는 치료용 약학 조성물을 피부외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 유화제, 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 활성제, 친유성 활성제 또는 지질 소낭 등 피부 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명의 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물이 피부 외용제로 제공될 경우, 이에 제한되는 것은 아니나, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제 등의 제형일 수 있다.

또한, 본 발명은 정금나무(Vaccinium oldhamii) 추출물을 포함하는 암 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

상기 정금나무 추출물은 상기 약학적 조성물에서 사용된 것과 동일하므로 설명은 그 기재로 대신한다.

본 발명에 따른 건강기능식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다. 일반 식품으로는 이에 한정되지 않지만 음료(알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예: 햄, 소시지 콘비프 등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게이트, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치즈 등), 식용식물 유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 본 발명의 정금나무 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 영양보조제로는 이에 한정되지 않지만 캡슐, 타블렛, 환 등에 본 발명의 정금나무 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 건강기능식품으로는 이에 한정되지 않지만 예를 들면, 본 발명의 정금나무 추출물 자체를 차, 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용(건강음료)할 수 있도록 액상화, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한, 본 발명의 정금나무 추출물을 식품 첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 정금나무 추출물과 암 예방 또는 개선 효과가 있다고 알려진 공지의 활성 성분과 함께 혼합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다.

본 발명의 정금나무 추출물을 건강음료로 이용하는 경우, 상기 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드; 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드; 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드; 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜일 수 있다. 감미제는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제; 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL 당 일반적으로 약 0.01 ～ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ～ 0.03 g 이다.

또한, 본 발명의 정금나무 추출물은 암 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물의 유효성분으로 함유될 수 있는데, 그 양은 암 예방 또는 개선 작용을 달성하기에 유효한 양으로 특별히 한정되는 것은 아니나, 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 100 중량%인 것이 바람직하다. 본 발명의 식품 조성물은 정금나무 추출물과 함께 암 예방 또는 개선용 조성물에 효과가 있는 것으로 알려진 다른 활성 성분과 함께 혼합하여 제조될 수 있다.

상기 외에 본 발명의 건강식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산, 펙트산의 염, 알긴산, 알긴산의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 또는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강식품은 천연 과일주스, 과일주스 음료, 또는 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

또한, 본 발명은 정금나무(Vaccinium oldhamii) 추출물을 포함하는 항암보조제를 제공한다.

본 발명의 항암보조제는 항암제의 항암효과를 증대시키거나 항암제의 부작용을 억제 또는 개선시키기 위한 모든 형태를 의미한다. 본 발명의 항암보조제는 다양한 종류의 항암제 또는 항암보조제와 병용투여될 수 있으며, 병용투여시 통상적인 항암제의 투여량보다 낮은 수준으로 항암제를 투여하더라도 동등한 수준의 항암치료효과를 나타낼 수 있으므로 보다 안전한 항암치료를 수행할 수 있다.

상기 항암보조제의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 본 발명의 항암보조제는 목적하는 바에 따라 복강 내 투여, 정맥 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여, 경구 투여, 폐 내 투여, 직장 내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 상기 항암보조제는 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.

본 발명의 항암보조제는 투여를 위해서 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 항암보조제로 바람직하게 제제화할 수 있다. 본 발명의 항암치료 보조제에 포함될 수 있는 담체, 부형제 또는 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 항암보조제는 경구 또는 비경구 투여를 위한 제제일 수 있으며, 제제에 대한 설명은 상기 약학적 조성물의 제제에 대한 기재로 대신한다.

또한, 본 발명은 정금나무(Vaccinium oldhamii) 추출물을 포함하는 항암용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 화장료 조성물은 정금나무 추출물을 유효성분으로 함유하며 피부학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 기초 화장품 조성물(화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼 및 클렌징 워터와 같은 세안제, 팩, 보디오일), 색조 화장품 조성물(화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발 제품 조성물(샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어젤) 및 비누 등의 형태로 제조될 수 있다.

상기 부형제로는 예를 들어, 피부연화제, 피부 침투 증강제, 착색제, 방향제, 유화제, 농화제 및 용매를 포함할 수 있으나 이에 한정되지는 않는다. 또한, 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제 및 보습제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 물성개선을 목적으로 점증제, 무기염류, 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 화장료 조성물로 세안제 및 비누를 제조하는 경우에는 통상의 세안제 및 비누 베이스에 상기 정금나무 추출물을 첨가하여 용이하게 제조할 수 있다. 크림을 제조하는 경우에는 일반적인 수중유적형(O/W)의 크림베이스에 정금나무 추출물 또는 이의 염을 첨가하여 제조할 수 있다. 여기에 향료, 킬레이트제, 색소, 산화방지제, 방부제 등과 물성개선을 목적으로 한 단백질, 미네랄, 비타민 등 합성 또는 천연소재를 추가로 첨가할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 정금나무 추출물의 함량은 이에 한정되지 않지만 전체 조성물 총중량에 대하여 0.001 내지 10 중량%인 것이 바람직하고, 0.01 내지 5중량%인 것이 더욱 바람직하다. 상기 함량이 0.001중량% 미만에서는 목적하는 항암 효과를 기대할 수 없고, 10중량% 초과에서는 안전성 또는 제형상의 제조에 어려움이 있을 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실험 준비

<1-1> 정금나무의 추출물 제조

정금나무(Vaccinium oldhamii; VO)는 영주 삼림 과학 연구소 산림 약제 연구 센터에서 제공받았다. 정금나무의 가지(branch), 잎(leaf) 또는 열매(fruit) 5g 을 70 % 에탄올 100㎖로 72 시간 동안 실온에서 진탕(shaking)추출 하였다. 72 시간 후, 에탄올 가용 분획을 여과하고 진공 증발기를 사용하여 약 30 ㎖ 부피로 농축한 후 동결건조 시켰다. 정금나무의 가지(VOB), 잎(VOL) 또는 과일(VOF)의 에탄올 추출물은 사용하기 전까지 냉장고에 보관했다.

<1-2> 세포 배양 및 정금나무 추출물 처리

인간 대장암 세포주(HCT116 및 SW480), 인간 유방암 세포주(MDA-MB-231 및 MCF-7), 인간 전립선암 세포주(PC-3/nKR 및 PC-3), 인간 비소세포폐암(A549), 인간 췌장암 세포(AsPC-1) 및 인간 간암 세포(HepG-2)를 한국 세포주 은행(Seoul, Korea)에서 구입하여 10 % 소태아혈청(FBS), 100 U/㎖ 페니실린 및 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신을 보충한 DMEM/F-12(Lonza; Walkersville, MD, USA) 배지에서 배양하였다. 세포들은 5 % CO₂의 습한 공기에서 37 ℃ 에서 보관되었다. 상기 실시예 <1-1>에서 제조한 VOB, VOL 및 VOF를 상기 여러 암세포주에 처리할 때에는, DMSO(Dimethyl sulfoxide)에 용해시켜 처리하였다. DMSO를 용매(vehicle)로 사용하였고 최종 DMSO 농도는 0.1 %(v/v)를 초과하지 않았다.

정금나무 추출물의 추출부위별 암세포 증식 억제 효과

정금나무 추출물을 제조하는데 사용된 정금나무의 추출부위별로 인간의 여러 암세포에 대한 증식 억제 효과를 확인하고자 하였다. 이는 MTT 분석 방법을 사용하였다.

구체적으로, 상기 실시예 <1-2>의 여러 암세포주를 96-웰 플레이트에 도말하고 하루동안 배양한 후, 정금나무 가지 추출물(VOB), 정금나무 잎 추출물(VOL) 또는 정금나무 열매 추출물(VOF)을 25, 50 또는 100 ㎍/㎖로 각각 24 시간 동안 처리하였다. 그 후 50 ㎕의 MTT 용액 (1 ㎎/㎖)과 함께 추가로 2 시간 배양 한 후, DMSO에 용해시켰다. 포르마잔의 형성은 파장 570 ㎚에서 흡광도를 판독하여 측정 하였다.

그 결과, 대장암 세포주에 대하여는 [도 1]에서 나타나는 바와 같이, VOB의 증식억제효과가 가장 유의적으로 높은 반면, VOL의 증식억제효과는 미미하였으며 VOF의 증식억제효과는 나타나지 않았다.

유방암 세포주에 대하여는 [도 2]에서 나타나는 바와 같이, 삼중음성유방암 세포주인 MDA-MA-231 에 대하여는 VOB에 의한 증식억제효과가 유의적으로 나타나고, VOL 또는 VOF에 의한 증식억제효과는 미미한 반면, 루미날 A 유방암 세포주인 MCF-7 에 대하여는 VOB, VOL 및 VOF 모두 증식억제효과를 나타내지 않았다.

전립선암 세포주에 대하여는 [도 3]에서 나타나는 바와 같이 VOB에 의한 증식억제효과가 유의적으로 나타나고, VOL 또는 VOF에 의한 증식억제효과는 미미하였다.

또한, [도 4]에서 나타나는 바와 같이 비소세포성폐암 세포주에 대하여 VOB는 유의적으로 증식억제효과를 나타내는 반면 VOL의 증식억제효과는 미미하였고 VOF는 증식억제효과를 나타내지 않았다. 췌장암 및 간암 세포주에 대하여 VOB는 증식억제효과를 나타내는 반면, VOL 또는 VOF는 증식억제효과를 나타내지 않았다.

결과적으로, 정금나무 가지 추출물(VOB)의 암세포주 증식억제효과가 가장 우수한 것으로 확인되어, 이하 VOB를 이용하여 실험하였다.

정금나무 가지 추출물의 사이클린 D1 수준 감소 효과

정금나무 가지 추출물(VOB)의 암세포 증식 억제효과가 사이클린 D1(Cycline D1)의 수준 감소에 의하여 일어나는 것인지 여부를 확인하고자 하였다. 사이클린 D1의 단백질 수준은 웨스턴 블랏팅(Western blotting) 분석으로, mRNA 수준은 RT-PCR 방법으로 확인하였다.

구체적으로, 웨스턴 블랏팅 분석은 상기 실시예 <1-2> 에서 VOB를 처리한 여러 암세포주를 1X 인산염 완충 생리 식염수(PBS)로 세척하고, 프로테아제(protease) 억제제 칵테일(Sigma-Aldrich) 및 포스파타아제(phosphatase) 억제제 칵테일(Sigma-Aldrich)이 보충된 방사면역침전분석(radioimmunoprecipitation; RIPA) 완충액(보스턴 바이오 프로덕츠, 애쉬랜드, Sigma-Aldrich)에 넣고 15,000 × g에서 10 분간 4 ℃에서 원심분리 하였다. 단백질 농도는 바이신코닉 산(bicinchoninic acid; BCA) 단백질 분석법 (Pierce, Rockford, IL, USA)으로 측정 하였다. 단백질을 SDS-PAGE에서 분리하고 PVDF 막(Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA)에 옮겼다. 막을 실온에서 0.05 % Tween 20(TBS-T)를 함유하는 Tris 완충 식염수 내의 5 % 탈지 우유와의 비특이적 결합을 위해 1시간 동안 블락시킨 다음 4 ℃에서 하루 동안 탈지 우유 내에서 특이적 1차 항체와 배양하였다. TBS-T로 3 회 세척한 후, 실온에서 1 시간 동안 겨자무과산화효소(horse radish peroxidase; HRP)가 결합된 면역 글로불린 G (IgG)와 함께 배양하고 ECL 웨스턴 블럿팅 기질(Amersham Biosciences, Piscataway, NJ, USA)으로 화학 발광을 검출한 후, 폴라로이드 필름으로 시각화하였다.

RT-PCR은 상기 실시예 <1-2> 에서 VOB를 처리한 대장암 세포주(HCT116 및 SW480)와 RNeasy Mini Kit(Qiagen, Valencia, CA, USA)을 사용하여 total RNA를 준비하고 Verso cDNA Kit(Thermo Scientific, Pittsburgh, PA, USA)를 사용하여 cDNA 합성을 위한 제조자의 프로토콜에 따라 total RNA(1㎍)를 역전사시켰다. 사이클린 D1 및 GAPDH에 대한 인간 프라이머를 갖는 PCR 마스터 믹스 키트(Promega, Madison, WI, USA)를 사용하여 PCR을 수행 하였다. 이에 사용된 프라이머 서열은 하기 [표 1]과 같다.

대상	프라이머 서열(5'→3')		서열번호
사이클린 D1	정방향	aactacctggaccgcttcct	1
사이클린 D1	역방향	ccacttgagcttgttcacca	2
GAPDH	정방향	acccagaagactgtggatgg	3
GAPDH	역방향	ttctagacggcaggtcaggt	4

그 결과, [도 5]에 나타나는 바와 같이 대장암 세포주에 VOB를 처리하는 경우 사이클린 D1의 단백질 및 mRNA의 수준이 모두 감소하는 것으로 나타났다. 다만, 사이클린 D1의 단백질이 mRNA보다 더 유의적으로 감소한 것을 확인할 수 있었다.

유방암 세포주에 대하여는 [도 6]에 나타나는 바와 같이, 삼중음성유방암 세포주인 MDA-MB-231은 사이클린 D1 단백질의 수준이 유의적으로 감소하였으나, 루미날 유방암 세포주인 MCF-7 은 사이클린 D1 단백질의 수준에 변화가 없는 것을 확인할 수 있었다.

전립선암 또는 비소세포성폐암 세포주에 대하여는 [도 7] 및 [도 8]에 나타나는 바와 같이 사이클린 D1 단백질의 수준이 유의적으로 감소한 것을 확인할 수 있었다.

췌장암 세포주에 대하여는 VOB의 농도가 50㎍/㎖ 이상인 경우에만 사이클린 D1 단백질의 수준이 감소한 것을 확인할 수 있었으며, 간암 세포주에 대하여는 사이클린 D1 단백질의 수준이 감소하긴 하였으나 미미한 수준이었다(도 8).

정금나무 가지 추출물로 인한 사이클린 D1의 프로테아좀 분해 효과

정금나무 가지 추출물(VOB)을 여러 암세포주에 처리하는 경우 사이클린 D1의 단백질 수준이 감소하는 원인이 프로테아좀(proteasome) 분해로 인한 것인지 여부를 확인하고자 하였다.

구체적으로, 상기 실시예 <1-2>의 여러 암세포주들에 VOB를 처리하기 전에 프로테아좀 억제자인 MG132로 전처리하여 준비하고, [실시예 3]의 웨스턴 블랏팅 방법과 동일한 방법으로 측정하여 사이클린 D1 단백질의 수준을 확인하였다.

그 결과, [도 9]에 나타나는 바와 같이, 각 암세포주에 MG132로 전처리하는 경우 VOB에 의한 사이클린 D1 단백질의 수준 감소 효과가 약화되는 것을 확인할 수 있었다. 즉, VOB는 사이클린 D1 단백질을 프로테아좀 분해를 통하여 그 수준을 감소시키는 것으로 판단하였다.

정금나무 가지 추출물로 인한 트레오닌-286 인산화 효과

정금나무 가지 추출물(VOB)이 사이클린 D1의 트레오닌-286(Threonine-286;T286)을 인산화시키는지 여부 및 인산화로 인해 사이클린 D1이 핵에서 세포질로 재분배되어 결과적으로 분해되는지 여부를 확인하고자 하였다.

구체적으로, 상기 실시예 <1-2>의 대장암 세포주들에 발현 벡터 및 Polyget DNA 형질감염 시약(SignaGen Laboratories, Ijamsville, MD, USA)을 이용하여 제조사의 지시에 따라 24시간 동안 일시적인 형질감염(Transient transfection)을 수행한 후 50 ㎍/㎖ VOB로 처리하였다. 사용된 벡터는 야생형 HA-표지된 사이클린 D1 또는 T286을 알라닌(Alanine)으로 점돌연변이 시킨 HA-표지된 T286A 사이클린 D1 벡터(Cambridge, MA, USA)이다. 세포 용해물은 HA-표지된 사이클린 D1 항체를 이용하여 상기 [실시예 3]의 웨스턴 블랏팅 방법으로 분석하였다. 엑틴(Actin)은 내부 대조군으로 사용되었다.

이때, 사이클린 D1의 세포질로의 재분배 여부를 확인하기 위하여 대장암 세포주들에 VOB를 처리하기 전 핵에서의 이주를 억제하는 LMB(Leptomycin B) 50ng/㎖를 처리하였다.

그 결과, [도 10]의 (A)에서 나타나는 바와 같이, VOB는 야생형-사이클린 D1 벡터로 형질 감염된 세포에서의 HA-사이클린 D1은 감소시켰지만, T286A-사이클린 D1 벡터로 형질 감염된 세포에서는 HA-사이클린 D1을 감소시키지 못했다. 이는 사이클린 D1의 T286 인산화가 VOB로 인한 사이클린 D1 분해에 기여할 수 있음을 나타낸다.

또한, [도 10]의 (B)에서 나타나는 바와 같이, LMB가 처리되지 않은 세포들에서는 사이클린 D1의 감소가 확인되었으나, LMB로 처리된 세포들에서는 사이클린 D1의 감소가 나타나지 않았다. 이는 VOB가 사이클린 D1의 T286을 인산화시키고 이어서 사이클린 D1을 핵에서 세포질로 재분배하여 사이클린 D1 분해를 유도할 수 있음을 시사한다.

정금나무 가지 추출물의 사이클린 D1 분해와 관련된 상류 키나아제 확인

정금나무 가지 추출물(VOB)의 사이클린 D1 분해효과가 MAPK(ERK1/2, p38 및 JNK), GSK3β, PI3K 또는 IκK와 같은 다양한 상류 키나아제(upstream kinase)에 의해 조절되는 것인지 여부를 확인하고자 하였다.

구체적으로, 상기 실시예 <2-1>의 여러 암세포주들에 50 ㎍/㎖ VOB를 처리하기 전 ERK1/2 억제자인 PD98059(20μM), p38 억제자인 SB203580(20μM), JNK 억제자인 SP600125(20μM), GSKβ 억제자인 LiCl(20mM), PI3K 억제자인 LY294002(20μM) 또는 IκK 억제자인 BAY 11-7082(10μM)으로 2시간동안 전처리하였다. 세포 용해물은 사이클린 D1 항체를 이용하여 상기 [실시예 3]의 웨스턴 블랏팅 방법으로 분석하였다. 엑틴(Actin)은 내부 대조군으로 사용되었다.

그 결과, [도 11]에 나타나는 바와 같이 상기 억제제들은 사이클린 D1의 분해를 억제하지 못했다. 이는 VOB로 인한 사이클린 D1의 분해가 MAPK(ERK1/2, p38 및 JNK), GSK3β, PI3K 및 IκK의 활성화에 독립적임을 나타낸다.

상기 데이터들의 통계 분석은 일원분산분석(one-way ANOVA)와 던네트 검증(Dunnett test)으로 수행되었고, 모든 데이터는 평균 ± SD (표준 편차)로 표시하였다. * P <0.05 차이는 통계적으로 유의한 것으로 간주하였다.

<110> KOREA FOREST RESEARCH INSTITUTE <120> Anti-cancer composition comprising extract of Vaccinium oldhamii <130> 1064265 <160> 4 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> cyclinD1_primer_F <400> 1 aactacctgg accgcttcct 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> cyclinD1_primer_R <400> 2 ccacttgagc ttgttcacca 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH_primer_F <400> 3 acccagaaga ctgtggatgg 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH_primer_R <400> 4 ttctagacgg caggtcaggt 20

Claims

정금나무(Vaccinium oldhamii) 가지 추출물을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서,
상기 암은 유방암, 전립선암, 폐암, 대장암, 췌장암 및 간암으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 암인 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
삭제
제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, C₁내지 C₄ 의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출되는 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 추출물은 암세포의 사이클린 D1(cycline D1) 단백질을 분해하는 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 추출물의 농도는 10 내지 130 ㎍/㎖ 인 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
삭제
정금나무(Vaccinium oldhamii) 가지 추출물을 포함하는 암 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물로서,
상기 암은 유방암, 전립선암, 폐암, 대장암, 췌장암 및 간암으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 암인 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
정금나무(Vaccinium oldhamii) 가지 추출물을 포함하는 항암보조제로서,
상기 암은 유방암, 전립선암, 폐암, 대장암, 췌장암 및 간암으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 암인 것을 특징으로 하는 항암보조제.
정금나무(Vaccinium oldhamii) 가지 추출물을 포함하는 항암용 화장료 조성물로서,
상기 암은 유방암, 전립선암, 폐암, 대장암, 췌장암 및 간암으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 암인 것을 특징으로 하는 항암용 화장료 조성물.