KR102131774B1 - Cosmetic Composition Containing Extract of Trichaptum Abietinum for Improving Skin Wrinkle - Google Patents

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Abstract

본 발명은 옷솔나무( Trichaptum abietinum) 발효 추출물을 유효 성분으로 함유하는 피부주름 개선용 또는 항산화용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 옷솔버섯 발효 추출물을 유효 성분으로 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0. 0001 ~ 30.0 중량% 를 함유하여 항산화 및 피부주름 개선에 우수한 효과가 있는 화장료 조성물을 제공한다. The present invention is a pine tree ( Trichaptum abietinum ) It relates to a cosmetic composition for improving or anti-wrinkle skin containing a fermented extract as an active ingredient, specifically, containing 0. 0001 to 30.0% by weight relative to the total weight of the cosmetic composition as an active ingredient of the ethanol extract By providing a cosmetic composition having an excellent effect on antioxidant and skin wrinkle improvement.

Description

옷솔버섯 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 화장료 조성물{Cosmetic Composition Containing Extract of Trichaptum Abietinum for Improving Skin Wrinkle}A cosmetic composition for improving skin wrinkles containing an extract of oleander mushroom {Cosmetic Composition Containing Extract of Trichaptum Abietinum for Improving Skin Wrinkle}

본 발명은 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention is a mushroom ( Trichaptum) abietinum ) It relates to a cosmetic composition for improving skin wrinkles containing a fermented extract as an active ingredient.

사람의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리·화학적인 변화가 일어난다. 그 원인으로는 크게 내적인 노화(intrinsic aging)와 광노화(photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 자외선, 스트레스, 질병 상태, 환경 인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 자유라디칼이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심해질 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 좀 더 구체적으로는 피부의 주요 구성 물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부 노화 현상이 생겨나는 것이다. Human skin undergoes various physical and chemical changes during the aging process. The causes are largely divided into intrinsic aging and photo-aging, and research on this has been actively conducted. UV rays, stress, disease states, environmental factors, wounds, and free radicals can be activated as they age, and when these conditions become severe, they destroy the antioxidant defense network in the living body and damage cells and tissues, resulting in adult diseases and It promotes aging. More specifically, skin, cells and tissues are destroyed by oxidation of lipids, proteins, polysaccharides, and nucleic acids, which are the main constituents of the skin, and eventually skin aging occurs.

단백질의 산화는 피부의 결합 조직인 콜라겐(collagen), 히아루론산(hyaluronic acid), 엘라스틴(elastin), 프로테오글리칸(proteoglycan), 피브로넥틴 (fibronectin) 등이 절단되어 심한 과다 염증 반응과 피부의 탄력에 지장을 주고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역 기능 저하의 사태에 이르게 된다. 그러므로, 신체의 대사 과정 중 발생하는 자유 라디칼이나 자외선 조사, 염증반응에 의해 매개되어 발생하는 자유 라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진 대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부는 빠르게 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다.Protein oxidation disrupts severe hyper-inflammatory reactions and elasticity of the skin by cutting the connective tissue of the skin, collagen, hyaluronic acid, elastin, proteoglycan, and fibronectin. If it gets worse, mutations in DNA can lead to mutations, cancer, and reduced immune function. Therefore, free radicals generated during metabolic processes in the body or ultraviolet radiation, free radicals mediated by an inflammatory reaction are eliminated to protect the cell membrane, and already damaged cells must be regenerated by active metabolism to proliferate the cells. The skin recovers quickly and can maintain healthy skin.

노화된 피부에서의 특징으로, 피부에서 엘라스틴 섬유는 콜라겐 섬유와 함께 진피 안쪽에서 가교 결합을 형성하며, 피부 탄력에 관여하고 있다. 나이가 들어감에 따라 피부는 조직학적으로 엘라스틴 섬유의 결핍과 응징, 콜라겐 섬유의 감소, 염증 세포 침윤증가와 엘라스틴 분해 효소인 엘라스타제의 활성의 급격한 증가를 보인다. 따라서 엘라스타제의 작용으로 피부의 탄력이 급격히 저하하게 된다. 엘라스타제를 저해함으로써 피부 노화를 근복적으로 줄일 수 있는 하나의 해결책으로 현재까지 엘라스틴 분해 효소 저해활성을 갖는 천연물에 대한 연구가 계속되고 있다. As a feature in aged skin, elastin fibers in the skin form cross-links inside the dermis along with collagen fibers and are involved in skin elasticity. With age, the skin histologically shows a deficiency and agglutination of elastin fibers, a decrease in collagen fibers, an increase in inflammatory cell infiltration and a dramatic increase in the activity of elastin, the elastin-degrading enzyme. Therefore, the elasticity of the skin is rapidly reduced by the action of elastase. As a solution that can reduce skin aging by inhibiting elastase, studies on natural products having elastin-degrading enzyme inhibitory activity have been continued to date.

뿐만 아니라 노화에는 자유 라디칼 뿐만 아니라 콜라겐 분해효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(Matrix Metalloproteinase; MMP)라는 효소도 관여한다. 즉, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나, 노화가 진행되면서 콜라겐 합성이 감소하고, 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한, 자외선 조사에 의해 이러한 분해 효소가 활성화되기도 한다. 그러므로, 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다.In addition, not only free radicals, but also an enzyme called matrix metalloproteinase (MMP), which is a collagen degrading enzyme, is involved in aging. In other words, the synthesis and decomposition of extracellular matrix such as collagen in vivo is appropriately controlled, but as aging progresses, collagen synthesis decreases, and the expression of matrix metal proteolytic enzyme (MMP), an enzyme that degrades collagen, is promoted to the skin. Its elasticity is reduced and wrinkles are formed. In addition, such degrading enzymes are also activated by ultraviolet irradiation. Therefore, there is a need to develop a substance capable of controlling or inhibiting the activity of MMP expression in which activation is induced in cells.

산소는 물과 더불어 우리가 살아가는데 없어서는 안 되는 물질이나, 그 산소가 일단 우리의 체내에 들어가면 여러 원인들에 의해 굉장히 활성이 강한 산소로 변하여 혈관 세포를 산화시킨다. 오늘날 질병의 원인의 약 90% 정도가 이 활성산소에 의한 것으로 규명되고 있다. 사람의 몸은 약 60조의 세포로 구성되어 있으며, 세포막은 임피질로 형성되어 있어 활성산소가 연결되기 쉽다. 산화반응이 발생하면 불포화 지방산은 과산화지질로 변화한다. 이 과산화지질이 유전자 DNA, RNA, 단백질, 세포막 및 세포 구조 등에 손상을 주어 암이 되거나 여러 성인병의 원인이 되며, 궁극적으로 노화의 원인이 된다. 바로 이러한 활성산소를 없애거나 중화시켜 세포가 산화하는 것을 막는 역할을 하는 물질을 항산화 물질이라고 한다. 일반적으로 피부세포의 구성성분인 지질의 활성산소로 인해 과산화가 일어나면 세포막의 구조가 변형되어 세포 투과성, 유동성, 막 효소와 운반 단백질의 불활성화, 단백질 사슬의 절단, DNA, RNA 손상 등이 발생하여 피부세포가 노화가 일어난다고 알려져 있다. 이러한 이유 때문에 활성산소를 제거하려고 하는 노력이 지속되었으며, 이러한 결과로 인해 많은 황산화 물질이 개발되었다. 지금까지 항산화 작용을 갖는 것으로 알려진 물질로는, 아스코르브산(ascorbic acid), 베타카로틴(β-carotene), 디부틸히드록실톨루엔(BHT), 디엘-알파 토코페롤(DL-α-tocopherol) 등이 있다. 그러나, 이러한 물질들은 합성물질로 사용되기 때문에, 장기 사용시 또는 다량 사용하여 피부에 사용 시 피부 안전성의 문제를 일으키거나, 화장품에 제형에 함유시 안정성에 문제가 있어 그 사용에 있어 제한을 받고 있는 실정이다. 이에 많은 연구자들이 이러한 문제점들을 해결하고자 많은 노력을 하고 있다.Oxygen, along with water, is an indispensable substance in our lives, but once it enters our body, it is transformed into highly active oxygen by various causes, oxidizing vascular cells. Today, about 90% of the causes of disease are attributed to this free radical. The human body is composed of about 60 trillion cells, and the cell membrane is formed of the cortex, so free radicals are easily connected. When an oxidation reaction occurs, unsaturated fatty acids are converted to lipid peroxide. This lipid peroxide damages gene DNA, RNA, protein, cell membrane and cell structure, causing cancer or several adult diseases, ultimately causing aging. It is the antioxidant that removes or neutralizes these free radicals to prevent the cells from oxidizing. In general, when peroxidation occurs due to free radicals of lipids, which are components of skin cells, the structure of the cell membrane is modified, resulting in cell permeability, fluidity, inactivation of membrane enzymes and transport proteins, cleavage of protein chains, DNA, RNA damage, etc. It is known that skin cells age. For this reason, efforts to remove free radicals continued, and as a result, many sulfated substances were developed. Materials that have been known to have antioxidant activity so far include ascorbic acid, beta-carotene, dibutylhydroxytoluene (BHT), and D-alpha-tocopherol. . However, since these substances are used as synthetic substances, there is a problem in skin safety when used for a long time or when used in a large amount, or when it is contained in a formulation in cosmetics, there is a problem in stability, which is limited in its use. to be. Therefore, many researchers are trying to solve these problems.

한국공개특허 제2018-0052151호에서는 꽃송이 버섯 추출물을 유효성분을 함유하는 화장료 조성물을 개시하면서, 상기 화장료 조성물이 콜라겐 생성 촉진, 엘라스타네 활성 억제 등의 효과를 갖는다고 개시하고 있다. 또한, 한국등록특허 제10-1456052호에서는 송로버섯 등을 포함하여 피부주름개선 효과를 갖는 화장료 조성물을 개시하고 있다.Korean Patent Publication No. 2018-0052151 discloses a cosmetic composition containing an active ingredient of a mushroom extract of zinnia, while the cosmetic composition has an effect of promoting collagen production and suppressing elastane activity. In addition, Korean Patent Registration No. 10-1456052 discloses a cosmetic composition having a skin wrinkle improvement effect, including truffles.

본 발명자는 노화를 개선하기 위해 천연 식물 성분들에 대한 다양한 피부 생리활성을 검색한 결과, 천연 식물 추출물 중에서 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 발효 추출물이 항산화, 엘라스타제(Elastase) 저해 활성, 콜라겐 합성 촉진 효과, MMP-1 생성 억제 효과를 보임으로써 효과적으로 피부를 개선할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다. The present inventors have search results for a variety of skin bioactive natural plant ingredients to improve the aging, clothes brush mushrooms from natural plant extracts (Trichaptum abietinum ) The present invention was completed by confirming that the fermented extract can effectively improve skin by showing antioxidant, elastase inhibitory activity, collagen synthesis promoting effect, and MMP-1 production inhibitory effect.

상기와 같은 목적은 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 발효 추출물을 포함하는 피부 주름 개선용 또는 항산화용 화장료 조성물에 의해 달성된다. Object of the clothes brush is mushroom (Trichaptum abietinum ) It is achieved by a cosmetic composition for improving or anti-wrinkle skin containing a fermented extract.

바람직하게는, 상기의 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 발효 추출물은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 ~ 30.0%(w/w)로 함유되는 것을 특징으로 한다. Preferably, the above mushroom ( Trichaptum abietinum ) Ferment extract is characterized in that it is contained in 0.0001 ~ 30.0% (w / w) relative to the total weight of the cosmetic composition.

또한 바람직하게는, 상기 옷솔버섯(Trichaptum abietinum)추출물은 콜라겐 생합성을 촉진하며 MMP-1의 활성을 저해하는 것을 특징으로 한다. In addition, preferably, the chamois mushroom ( Trichaptum abietinum ) extract promotes collagen biosynthesis and is characterized by inhibiting the activity of MMP-1.

또한 바람직하게는, 상기 옷솔버섯 발효 추출물은 옷솔버섯 용매 추출물을 락토바실러스 애씨도필루스(Lactobacillus acidophilus) 또는 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis)로 발효시킨 것일 수 있다.In addition, preferably, the fermented extract of oleander mushroom may be fermented with a solvent extract of oleander mushroom with Lactobacillus acidophilus or Bifidobacterium lactis .

또한 바람직하게는, 상기 옷솔버섯 발효 추출물은 옷솔버섯 용매 추출물을 락토바실러스 애씨도필루스(Lactobacillus acidophilus)와 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis)를 동일 중량비로 혼합한 혼합균주로 발효시킨 것일 수 있다.In addition, preferably, the fermented extract of oleander mushroom may be fermented with a mixed strain in which the solvent extract of oleander mushroom is mixed with Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium lactis in the same weight ratio. have.

또한 바람직하게는, 상기 옷솔버섯 용매 추출물은 물, 탄소수 1-4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸 아세테이트 및 부틸 아세테이트로 구성된 군으로부터 선택되는 추출용매로 추출될 수 있다. In addition, preferably, the solrush mushroom solvent extract may be extracted with an extraction solvent selected from the group consisting of water, anhydrous or hydrous lower alcohols having 1 to 4 carbon atoms, acetone, ethyl acetate, and butyl acetate.

본 발명은 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 중금속, 미세먼지 흡착 및 피부주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함된 유효성분인 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 발효추출물은 콜라겐 생합성, MMP-1생성억제 효과가 우수함으로 주름개선, 노화 방지의 효과가 우수하다.The present invention is a mushroom ( Trichaptum) abietinum ) It relates to a cosmetic composition for improving heavy metal, fine dust adsorption and skin wrinkles containing fermented extract as an active ingredient. Trichaptum , an active ingredient contained in the cosmetic composition of the present invention abietinum ) The fermented extract has excellent collagen biosynthesis and MMP-1 production inhibitory effect, so it has excellent wrinkle improvement and anti-aging effects.

본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 하기의 정의를 가지며 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미에 부합된다. 또한, 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다.All technical terms used in the present invention, unless defined otherwise, have the following definitions and conform to the meaning as commonly understood by those skilled in the art in the relevant field of the present invention. In addition, although a preferred method or sample is described herein, similar or equivalent ones are included in the scope of the present invention.

용어 "약"이라는 것은 참조 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 정도로 변하는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.The term “about” means 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, for reference amount, level, value, number, frequency, percent, dimension, size, amount, weight or length It means a quantity, level, value, number, frequency, percentage, dimension, size, quantity, weight or length that varies by 4, 3, 2 or 1%.

본 명세서를 통해, 문맥에서 달리 필요하지 않으면, "포함하다" 및 "포함하는"이란 말은 제시된 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군을 포함하나, 임의의 다른 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군이 배제되지는 않음을 내포하는 것으로 이해하여야 한다.Throughout this specification, the terms "comprises" and "comprising", unless the context requires otherwise, include the steps or components presented, or a group of steps or components, but any other steps or components, or It should be understood that it implies that a group of steps or components is not excluded.

본 발명은 옷솔버섯( Trichaptum abietinum) 발효 추출물을 유효 성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 항산화 및 피부주름개선 효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다. The present invention is a mushroom ( Trichaptum abietinum ) relates to a cosmetic composition comprising a fermented extract as an active ingredient, and relates to a cosmetic composition having antioxidant and skin wrinkle improvement effects.

본 발명에 사용된 옷솔버섯( Trichaptum abietinum)은 담자균류 민주름버섯목의 구멍장이버섯과의 버섯으로써 한국, 동아시아, 유럽 등 세계 각지에 분포하고 있는 버섯이다. 옷솔버섯은 죽은 침엽수에 배착하거나 반배착하여 무리지어 자라며, 버섯갓의 표면은 회색빛 또는 흰색이며 자실체의 조직은 아주 얇고 담홍색 또는 담자색의 자실층을 가지고 있다. 식독불명으로 약용 및 식용으로는 사용되지 않고 있어 이용가치와 연구가치가 높은 천연물이다.A clothes brush used in the present invention mushrooms (Trichaptum abietinum ) is a mushroom of the genus oleander mushroom of the genus genus genus, and is distributed in all parts of the world, including Korea, East Asia, and Europe. Oyster mushrooms are attached to dead conifers and grow in bunches by semi-adhesion. The surface of the mushroom cap is gray or white, and the tissue of the fruiting body is very thin and has a pink or light purple fruit layer. It is a natural product with high use value and research value because it is not used for medicinal and edible purposes due to unknown food poisoning.

본 발명의 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있으나, 바람직하게는 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 이용한 용매 추출법 (b) 이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 초임계 추출법 또는 (c) 초음파 추출법을 이용하여 추출한다. 본 발명에서는 바람직하게는 추출용매를 이용한 용매 추출법을 이용하였다. 본 발명에서 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 추출물은 다양한 추출용매, 예를 들어, 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출 용매를 사용하여 얻을 수 있으며, 바람직하게는 에탄올, 70%(v/v) 에탄올 또는 물을 사용하여 얻어진 것이고, 가장 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올을 사용하여 얻어진 것이다. 한편, 본 발명의 옷솔버섯(Trichaptum abietinum)추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다. Trichaptum of the present invention abietinum ) extract may be prepared according to conventional methods known in the art, that is, under conditions of conventional temperature and pressure, using a conventional solvent, but preferably (a) water, 1-4 carbon atoms. Anhydrous or hydrous lower alcohols (eg methanol, ethanol, propanol and butanol), propylene glycol, 1,3-butylene glycol, glycerin, acetone, diethyl ether, ethyl acetate, butyl acetate, dichloromethane, chloroform, hexane And a solvent extraction method using a solvent selected from the group consisting of mixtures thereof (b) extraction using a supercritical extraction method with reduced pressure and high temperature with carbon dioxide or (c) an ultrasonic extraction method. In the present invention, a solvent extraction method using an extraction solvent is preferably used. Tricotum abietinum extract in the present invention is a variety of extraction solvents, for example, water, anhydrous or hydrous lower alcohols having 1 to 4 carbon atoms (for example, methanol, ethanol, propanol and butanol), propylene glycol, 1, 3-butylene glycol, glycerin, acetone, diethyl ether, ethyl acetate, butyl acetate, dichloromethane, chloroform, hexane, and one or more extraction solvents selected from the group consisting of mixtures thereof. Is obtained using ethanol, 70% (v/v) ethanol or water, most preferably 70% (v/v) ethanol. On the other hand, it is apparent to those skilled in the art that the extract of the present invention can be obtained by using the extract of Trichaptum abietinum in addition to the above-mentioned extraction solvent, as well as other extraction solvents.

또한, 본 발명의 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 및 발효 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출, 초음파를 이용한 추출법에 의한 추출, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리하거나 자연 상태나 각종 미생물을 이용한 발효산물에 의한 추출물 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 및 추출방법을 통해 얻어진 활성 분획도 본 발명의 추출물에 포함된다.In addition, the clothes of the present invention ( Trichaptum) abietinum ) extract includes not only extracts by the above-described extraction solvent, but also extracts that have been subjected to conventional purification and fermentation processes. For example, decompression by carbon dioxide, extraction by supercritical extraction by high temperature, extraction by ultrasonic extraction, separation using an ultrafiltration membrane having a constant molecular weight cut-off value, various chromatography (size, charge, hydrophobicity or affinity) Active fractions obtained through various purification and extraction methods, such as separation by sex) or extraction by fermentation products using natural or various microorganisms, are also included in the extract of the present invention.

본 발명에 따른 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 추출물은 발효과정을 거친 추출물을 포함하는데, 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 발효 추출물은 다음과 같이 제조할 수 있다. 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 전초를 100~500 메쉬 정도로 미세하게 파쇄한 다음 통상적인 미생물 배양액을 1~50g/L를 첨가하고 효모 균주 또는 유산균 등의 미생물을 10,000~100,000 cfu/L의 양으로 첨가한다. 배양온도는 30~37℃의 통상적인 미생물 배양조건으로 배양한다. pH는 5~7로 호기적 또는 통상 혐기(anaerobic)적인 조건으로 약 5내지 10일간 배양한다. 이후 숙성 및 여과를 통해 얻을 수 있다. Clothes brush according to the invention mushrooms (Trichaptum abietinum ) extract contains fermented extracts, Trichaptum abietinum ) Ferment extract can be prepared as follows. Trichaptum abietinum ) After crushing the outpost finely to about 100 to 500 mesh, 1 to 50 g/L of a conventional microbial culture solution is added, and microorganisms such as yeast strains or lactic acid bacteria are added in an amount of 10,000 to 100,000 cfu/L. The culture temperature is cultured under normal microorganism culture conditions of 30~37℃. The pH is 5-7, and cultured for about 5 to 10 days under aerobic or normal anaerobic conditions. It can then be obtained through aging and filtration.

본 발명의 일 실시형태에 따르면, 옷솔버섯 발효 추출물은 옷솔버섯의 용매 추출물을 미생물로 발효시켜 제조할 수 있다. 바람직하게는, 상기 미생물은 락토바실러스 애씨도필루스(Lactobacillus acidophilus) 또는 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis)일 수 있으며, 보다 바람직하게는 락토바실러스 애씨도필루스와 비피도박테리움 락티스를 동일 중량으로 혼합하여 사용할 수 있다. According to an embodiment of the present invention, the fermented extract of oxen mushroom can be prepared by fermenting the solvent extract of oxen mushroom with microorganisms. Preferably, the microorganism may be Lactobacillus acidophilus or Bifidobacterium lactis , and more preferably Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium lactis . It can be used by mixing in the same weight.

본 발명에 따르면, 상기 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 발효 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.0001 ~ 30.0 중량% 함유되며, 더욱 바람직하게는, 상기 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 발효 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.01 ~ 10 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다. 상기 추출물의 함량이 0.001 중량% 미만인 경우에는 피부개선 효과가 나타나지 않으며, 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 개선 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다.According to the present invention, the ox mushroom ( Trichaptum abietinum) fermentation extract is contained 0.0001 ~ 30.0% by weight based on the total weight of the cosmetic composition, and more preferably, the clothes brush mushroom (Trichaptum abietinum ) Ferment extract is characterized in that it contains 0.01 to 10% by weight relative to the total weight of the cosmetic composition. When the content of the extract is less than 0.001% by weight, the skin improvement effect does not appear, and when it exceeds 30.0% by weight, the degree of improvement of the skin improvement effect on the increase in content is negligible, and there is a problem in the safety and stability of the formulation. Not even enemies

따라서, 이러한 다양한 기능을 가진 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 발효 추출물을 포함하는 본 발명의 화장료 조성물은 우수한 항산화 효과, 엘라스타제(elastase) 저해 활성, 콜라겐(collagen) 생합성 효과, MMP-1 생성억제 효과를 갖는 것을 특징으로 한다.Therefore, Trichaptum with various functions abietinum ) The cosmetic composition of the present invention comprising a fermented extract is characterized by having excellent antioxidant effect, elastase inhibitory activity, collagen biosynthesis effect, and MMP-1 production inhibitory effect.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다. 본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다. The components included in the cosmetic composition of the present invention, as active ingredients, may include ingredients commonly used in cosmetic compositions in addition to the active ingredients, such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments, and fragrances Adjuvants, and carriers. The cosmetic composition of the present invention may be prepared in any formulation conventionally prepared in the art, for example, solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing , Oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation, pack, massage cream and spray, but may be formulated, but is not limited thereto. More specifically, it can be prepared in the form of flexible lotion, nutrition lotion, nutrition cream, massage cream, essence, eye cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, spray or powder.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로 서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다. When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide are used as carrier components. Can be.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다. When the formulation of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, solubilizing agent or emulsifying agent is used as a carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1 , 3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan fatty acid ester.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다. When the formulation of the present invention is a suspension, liquid diluents such as water, ethanol or propylene glycol as carrier components, ethoxylated isostearyl alcohol, suspensions such as polyoxyethylene sorbitol esters and polyoxyethylene sorbitan esters, microcrystals Sex cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or trakant, etc. can be used.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다. When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate, or polyamide powder may be used as a carrier component. In particular, in the case of a spray, additionally chlorofluorohydrocarbon, propane /Propellant such as butane or dimethyl ether.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a surfactant-containing cleansing, aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivatives, methyltaurate, sarcosinate, fatty acid amide ether as a carrier component Sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters and the like can be used.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다. 한편, 본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 이용하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 이용하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다. 본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다. When the cosmetic composition of the present invention is a soap, a surfactant-containing cleansing formulation, or a surfactant-free cleansing formulation, it may be wiped, peeled off, or washed with water after application to the skin. As a specific example, the soap is liquid soap, powdered soap, solid soap and oil soap, and the surfactant-containing cleansing formulation is a cleansing foam, cleansing water, a cleansing towel and a cleansing pack, and the surfactant-free cleansing formulation is a cleansing cream , Cleansing lotions, cleansing water and cleansing gels, but are not limited thereto. Meanwhile, the cosmetic method of the present invention refers to all cosmetic methods using the cosmetic composition of the present invention. That is, all methods known in the art using a cosmetic composition belong to the cosmetic method of the present invention. The cosmetic composition of the present invention may be used alone or in combination, or may be used in combination with other cosmetic compositions other than the present invention. In addition, the cosmetic composition according to the present invention can be used according to a conventional method of use, and the number of uses can be varied according to the user's skin condition or taste.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are only intended to illustrate the present invention in more detail, and according to the gist of the present invention, the scope of the present invention is not limited by these examples.

제조예 1 - 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 용매 추출물 제조 Preparation Example 1- Trichaptum abietinum ) solvent extract preparation

옷솔버섯의 전초를 깨끗한 물로 씻어 충분히 건조시킨 다음 일정한 크기로 절단하여 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다. 건조한 추출물은 일정 농도로 희석하여 하기의 실험에 사용하였다.After washing the outsole of oxen mushrooms with clean water and drying it sufficiently, it was cut to a certain size and refluxed 3 times for 5 hours with 70% (V/V) ethanol aqueous solution, cooled, and filtered with Whatman #4 filter paper. . The filtered extract was concentrated under reduced pressure at 50°C or lower and freeze-dried. The dried extract was diluted to a constant concentration and used in the following experiment.

제조예 2 - 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 발효 추출물 제조 Preparation Example 2- Trichaptum abietinum ) fermentation extract preparation

제조예 1로부터 획득한 옷솔버섯 추출물을 10g/1L가 되게 배양액에 첨가하였으며, 탄소영양원으로는 글루코스, pH 조절제로 디포타슘 포스페이트를 첨가하였다. 배양액 당 Lactobacillus acidophilus(KTCT 3140)를 50,000cfu/L 첨가한 후, pH 5~7의 조건으로 37℃에서 7일간 배양하였다. 배양 후 배양액은 0.25μM 필터를 이용하여 여과한 후 여과액을 농축하여 발효 추출물을 1.0kg을 제조하였다.The extract of oxen mushroom obtained from Preparation Example 1 was added to the culture solution to be 10 g/1L, and dipotassium phosphate was added as a glucose and pH regulator as a carbon nutrient. After adding 50,000 cfu/L of Lactobacillus acidophilus per culture medium (KTCT 3140), the cells were cultured at 37°C for 7 days under conditions of pH 5-7. After incubation, the culture medium was filtered using a 0.25 μM filter, and the filtrate was concentrated to prepare 1.0 kg of fermentation extract.

제조예 3 - 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 발효 추출물 제조 Preparation Example 3- Trichaptum abietinum ) fermentation extract preparation

제조예 1로부터 획득한 옷솔버섯 추출물을 10g/1L가 되게 배양액에 첨가하였으며, 탄소영양원으로는 글루코스, pH 조절제로 디포타슘 포스페이트를 첨가하였다. 배양액 당 Bifidobacterium lactis(5854)를 50,000cfu/L 첨가 한 후, pH 5~7의 조건으로 37℃에서 7일간 배양하였다. 배양 후 배양액은 0.25μM 필터를 이용하여 여과한 후 여과액을 농축하여 발효 추출물을 1.0kg을 제조하였다.The extract of oxen mushroom obtained from Preparation Example 1 was added to the culture solution to be 10 g/1L, and dipotassium phosphate was added as a glucose and pH regulator as a carbon nutrient. After adding 50,000 cfu/L of Bifidobacterium lactis (5854) per culture medium, the cells were cultured at 37°C for 7 days under conditions of pH 5-7. After incubation, the culture medium was filtered using a 0.25 μM filter, and the filtrate was concentrated to prepare 1.0 kg of fermentation extract.

제조예 4 - 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 발효 추출물 제조 Preparation Example 4- Trichaptum abietinum ) fermentation extract preparation

제조예 1로부터 획득한 옷솔버섯 추출물을 10g/1L가 되게 배양액에 첨가하였으며, 탄소영양원으로는 글루코스, pH 조절제로 디포타슘 포스페이트를 첨가하였다. 배양액 당 Lactobacillus acidophilus(KTCT 3140)와 Bifidobacterium lactis(5854)을 동일 비율로 각 25,000cfu/L 첨가한 후, pH 5~7의 조건으로 37℃에서 7일간 배양하였다. 배양 후 배양액은 0.25μM 필터를 이용하여 여과한 후 여과액을 농축하여 발효 추출물을 1.0kg을 제조하였다.The extract of oxen mushroom obtained from Preparation Example 1 was added to the culture solution to be 10 g/1L, and dipotassium phosphate was added as a glucose and pH regulator as a carbon nutrient. After adding Lactobacillus acidophilus (KTCT 3140) and Bifidobacterium lactis (5854) per culture solution at the same rate, 25,000 cfu/L were added, followed by incubation at 37°C for 7 days at 37°C under pH 5-7. After incubation, the culture medium was filtered using a 0.25 μM filter, and the filtrate was concentrated to prepare 1.0 kg of fermentation extract.

실험예 1 - DPPH 라디칼 소거능 측정 Experimental Example 1- DPPH radical scavenging activity measurement

상기의 제조예 1에 대하여 항산화 효과를 측정하기 위해 실험실 조건에서 L-Ascorbic acid를 비교샘플로 하여 DPPH법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다. DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl) 프리라디칼이라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 활성을 측정한다. 피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율을 측정한다. In order to measure the antioxidant effect of Preparation Example 1, L-Ascorbic acid was compared as a comparative sample under laboratory conditions to measure antioxidant activity using the DPPH method. The DPPH method measures antioxidant activity by reducing power using a free radical called DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl) free radical. The free radical scavenging rate is measured at a wavelength of 560 nm by comparing the degree of decrease in absorbance due to the reduction of DPPH by the test substance with the absorbance of the blank test solution.

사용한 시약으로서는 2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl 프리라디칼(Aldrich Chem. Co., MW=618.76)0.2mM 용액으로서 메탄올에 용해하여 100ml로 한다 측정방법으로서, 96-웰 플레이트에 0.2mM DPPH 용액 0.15ml과 시료용액 0.15ml를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 10분간의 배양을 개시한다.그 후 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다. 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다. 시료용액의 블랭크(Blank)는 0.2mM DPPH 용액 대신에 메탄올을 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다. As a reagent used, 2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl free radical (Aldrich Chem. Co., MW=618.76) is dissolved in methanol as a 0.2 mM solution to make 100 ml. As a measurement method, 96-well 0.15 ml of 0.2 mM DPPH solution and 0.15 ml of sample solution are added to the plate, stirred quickly, and incubated for 10 minutes at 25° C. Absorbance St at 560 nm is then measured. In the blank test, absorbance Bt was measured by using distilled water instead of the sample solution in the same manner as above. The blank of the sample solution is operated in the same manner using methanol instead of the 0.2 mM DPPH solution to measure the absorbance Bo.

SC50 값을 산출하기 위하여 다양한 농도를 실험한 결과, 하기의 수학식 1의 계산식을 통하여 DPPH 라디칼 소거능을 확인하였으며, 그 결과는 표 1에 나타내었다. 비교군으로써 L-아스코르브산(L-ascorbic acid)을 사용하였다.As a result of experimenting with various concentrations to calculate the SC 50 value, the DPPH radical scavenging ability was confirmed through the following equation 1, and the results are shown in Table 1. L-ascorbic acid was used as a comparison group.

[수학식 1][Equation 1]

Figure 112018125593480-pat00001
Figure 112018125593480-pat00001

St : 시료용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도 St: absorbance at 560 nm after free radical scavenging of sample solution

Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도 Bt: Absorbance at 560 nm after free radical scavenging of the blank test solution

So : 시료용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도 So: Absorbance at 560 nm before reaction when free radicals are not added to the sample solution

Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도 Bo: Absorbance at 560nm before reaction when free radicals are not added to the blank test solution

시료명Sample name SC SC 5050 (ppm) (ppm) 제조예1Preparation Example 1 135.03 ± 2.18135.03 ± 2.18 제조예2Preparation Example 2 108.57 ± 3.47108.57 ± 3.47 제조예3Preparation Example 3 115.12 ± 3.52115.12 ± 3.52 제조예4Preparation Example 4 98.85 ± 2.7398.85 ± 2.73 L-ascorbic acidL-ascorbic acid 35.18 ± 3.1535.18 ± 3.15

실험예 2 - 엘라스타제(Elastase) 저해활성 측정 Experimental Example 2- Elastase inhibitory activity measurement

엘라스타제(Elastase)는 진피 내 피부탄력을 유지시키는 데 중요한 기질인 엘라스틴을 분해하는 효소이다. 또한, 엘라스타제는 다른 중요한 기질단백질인 콜라겐(collagen)을 분해할 수 있는 비특이적 가수분해 효소이다. 따라서 엘라스타제 저해제는 피부주름을 개선하는 작용을 나타내며, 우솔산(ursolic acid) 등이 엘라스타제 저해제로서 이용되고 있다. 엘라스타제는 동물 결합조직의 불용성 탄성 섬유 단백질인 엘라스틴(elastin)을 분해시켜 피부의 진피조기의 그물망 구조 결합을 끊어줌으로서 주름생성의 주원인인 효소로 알려져 있다. 피부의 진피 조직 속에는 콜라겐과 피부의 탄력성에 관련된 엘라스틴이 그물망 구조를 형성하고 있는데, 이러한 그물망 구조가 깨어지면서 즉 엘라스틴이 엘라스타제에 의해 분해되어 피부가 처지고 주름이 생기므로 내인성 피부노화가 발생한다. 그러므로 피부노화의 주원인 중의 하나인 엘라스틴 분해효소인 엘라스타제의 활성을 저하시킴으로서 피부노화를 억제할 수 있다. 기질로서 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide, S4760, Sigma)를 사용하여 37℃에서 20분간 기질로부터 생성되는 p-nitroanilide의 생성량을 445nm에서 측정하였다. 즉, 각 시험용액을 일정 농도가 되도록 조제하여 500μL씩 시험관에 취하고, 2mM tris-HCl buffer (pH8.6)에 녹인 porcine pancreas elastase(E1250, Sigma)2.5U/mL)용액 500μL을 가한 후 기질로 50mM tris-HCl buffer(pH8.6)에 녹인 N-succinyl-(L-Ala)3- p-nitroanilide(500μg/mL)을 첨가하여 20분간 반응시켜 측정하였다. Elastase 저해활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 하기 수학식 2에 따라 계산하여 나타내었다.Elastase is an enzyme that breaks down elastin, an important substrate for maintaining skin elasticity in the dermis. In addition, elastase is a non-specific hydrolase that can degrade collagen, another important matrix protein. Therefore, an elastase inhibitor has an effect of improving skin wrinkles, and ursolic acid is used as an elastase inhibitor. Elastase is known as an enzyme that is the main cause of wrinkle formation by breaking down the structure of the skin's dermal structure by breaking down elastin, an insoluble elastic fiber protein of animal connective tissue. In the dermal tissue of the skin, collagen and elastin related to the elasticity of the skin form a mesh structure. As the mesh structure is broken, that is, elastin is decomposed by elastase, the skin sags and wrinkles, resulting in endogenous skin aging. do. Therefore, it is possible to suppress skin aging by lowering the activity of elastin, an elastin degrading enzyme, which is one of the main causes of skin aging. Using N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide, S4760, Sigma) as a substrate, the amount of p-nitroanilide produced from the substrate at 37°C for 20 minutes was measured at 445 nm. That is, each test solution was prepared to have a constant concentration, and 500 μL of each was taken in a test tube, and 500 μL of porcine pancreas elastase (E1250, Sigma) 2.5 U/mL) dissolved in 2 mM tris-HCl buffer (pH8.6) was added to the substrate. It was measured by adding N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide (500μg/mL) dissolved in 50mM tris-HCl buffer (pH8.6) for 20 minutes. Elastase inhibitory activity was calculated according to the following Equation 2 as the absorbance reduction rate of the sample solution with and without additives.

[수학식 2][Equation 2]

Figure 112018125593480-pat00002
Figure 112018125593480-pat00002

시료명Sample name 처리농도(ppm)Treatment concentration (ppm) 엘라스타제Elastase 저해율( Inhibition rate ( %% )) 제조예 1Preparation Example 1 100100 9.08 ± 3.109.08 ± 3.10 10001000 22.48 ± 2.8122.48 ± 2.81 제조예 2Preparation Example 2 100100 14.47 ± 1.9814.47 ± 1.98 10001000 30.12 ± 2.1730.12 ± 2.17 제조예 3Preparation Example 3 100100 16.87 ± 2.8416.87 ± 2.84 10001000 34.47 ± 2.4634.47 ± 2.46 제조예 4Preparation Example 4 100100 27.21 ± 2.1527.21 ± 2.15 10001000 41.11 ± 2.0741.11 ± 2.07

실험예 3 - ELISA kit를 이용한 콜라겐(collagen) 생합성 측정 결과 Experimental Example 3- Collagen biosynthesis measurement result using ELISA kit

인간 섬유아세포(Human Skin Fibroblast)를 37℃, 5% CO2 배양기에서 일정한 습도를 유지하는 세포 배양기 내에서 10% FBS, Penicillin(50U/ml), Streptomycin(50/ml)를 함유하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Gibco, USA)으로 배양하여, 1× 105개/ml로 24 well plate에 500㎕씩 분주한 다음 24시간 배양하였다. 섬유아세포에서 콜라겔 타입 I(collagen type I) 의 정량은 'Procollagen Type I c-peptide EIAkit(TaKaRa, japan)'를 이용하여 효소면역분석법 (immunosorbent assay, ELISA)으로 실시하였는데, 분석을 위해 48시간 동안 배양한 상기의 세포 배양 상등액을 조심스럽게 수집하였다. 먼저 'Procollagen Type I cpeptide와 결합하는 항체 (antibody)가 코팅된 스트립(strip)에 48시간 배양된 배양 상등액을 각각 100 μl씩 첨가하고 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 워싱버퍼(washing buffer)를 이용하여 3회 세척하여 미반응 물질을 제거한 다음, 여기에 블라킹 버퍼(Blocking buffer) 100 ul씩 넣고, 다시 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 워싱버퍼(washing buffer)를 이용하여 3회 세척하여 미반응 물질을 제거하고, 'Procollagen Type I c-peptide'와 결합하는 또 다른 항체에 POD가 콘쥬게이트(conjugate)된 용액(Antiobody-POD conjugate solution) 100 ul씩 넣고 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 워싱 버퍼(washing buffer)를 이용하여 3회 세척하여 미반응 물질을 제거하고, 동량의 기질 (substrate) 용액 넣고, 30분간 반응시킨 다음 정지용액(stop solution, 1N H2SO4)을 넣고 실험을 종료하였다. 실험이 종료된 스트립(strip)을 450 nm에서 흡광도를 측정하여 콜라겐 표준품과 비교하여 새로 합성된 콜라겐 양을 PICP 양으로 측정하였으며 콜라겐의 합성효과를 표 3에 나타내었다.DMEM (Dulbecco's) containing 10% FBS, Penicillin (50U/ml), and Streptomycin (50/ml) in a cell incubator that maintains constant humidity in human skin fibroblasts at 37°C and 5% CO 2 incubator Cultured with Modified Eagle's Medium, Gibco, USA), dispensed 500 μl into a 24 well plate at 1×10 5 cells/ml and then incubated for 24 hours. The quantification of collagen type I in fibroblasts was carried out by an immunosorbent assay (ELISA) using'Procollagen Type I c-peptide EIAkit (TaKaRa, japan)', 48 hours for analysis. The cell culture supernatant cultured above was carefully collected. First, 100 μl of each culture supernatant cultured for 48 hours was added to a strip coated with'Procollagen Type I cpeptide, and the mixture was reacted at 37° C. for 2 hours. After the reaction, washing was performed three times using a washing buffer to remove unreacted substances, and then 100 ul of a blocking buffer was added thereto, followed by reacting at 37° C. for 2 hours. After the reaction, the unreacted material is removed by washing 3 times using a washing buffer, and a solution in which POD is conjugated to another antibody binding to'Procollagen Type I c-peptide' (Antiobody- POD conjugate solution) was added in 100 ul and reacted at 37°C for 2 hours. After the reaction, wash 3 times using a washing buffer to remove unreacted substances, add an equal amount of substrate solution, react for 30 minutes, then add a stop solution (1N H2SO4) to perform the experiment. Ended. After the experiment, the absorbed strip was measured at 450 nm, and the amount of newly synthesized collagen was measured as the amount of PICP compared to the collagen standard, and the synthesis effect of collagen is shown in Table 3.

시료명Sample name 처리농도(ppm)Treatment concentration (ppm) 콜라겐 합성량Collagen synthesis amount
(ng/2*10(ng/2*10 44 ))
제조예1Preparation Example 1 100100 73 ± 1.5473 ± 1.54 200200 91 ± 3.7491 ± 3.74 제조예2Preparation Example 2 100100 79 ± 2.1579 ± 2.15 200200 97 ± 3.2197 ± 3.21 제조예3Preparation Example 3 100100 76 ± 2.1776 ± 2.17 200200 92 ± 2.8792 ± 2.87 제조예4Preparation Example 4 100100 86 ± 2.0786 ± 2.07 200200 104 ± 2.48104 ± 2.48

실험예 4 - MMP-1 생성 억제 효과 Experimental Example 4- MMP-1 production inhibitory effect

본 실험예 4는 상기 제조예 1에서 수득한 옷솔버섯 출물을 이용하여 콜라겐 분해효소인 MMP-1 생성을 억제하는 효과가 있는지 여부를 측정하기 위해, MMP-1의 생성을 억제하는 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 TGF-β(10ng/ml, Roche, 미합중국)를 비교군으로 하여 MMP-1의 생성을 억제하는 효과를 측정하였다. 인간 정상 피부 세포인 섬유아세포(한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에 각 웰당 1×106 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma, 미합중국) 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 상기 제조예 1의 옷솔버섯 추출물의 최종 농도 100 ㎍/㎖로 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 옷솔버섯 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 킷트(Amersham,미합중국)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 수학식 3에 따라 MMP-1 생성 억제율(%)을 계산하였으며, 그 결과를 표 4에 나타내었다.Experimental Example 4 is to measure whether or not the effect of inhibiting the production of MMP-1, which is a collagen degrading enzyme, by using the extract of oleander mushroom obtained in Preparation Example 1, has an effect of inhibiting the production of MMP-1. The effect of inhibiting the production of MMP-1 was measured using a known substance, TGF-β (10 ng/ml, Roche, United States) as a comparison group. Human normal skin cells, fibroblasts (Korea Cell Line Bank, Korea), were inoculated into 48-well microplates (Nunc, Denmark) to be 1×10 6 cells per well, and conditions of DMEM medium (Sigma, United States) and 37° C. After incubation for 24 hours, serum-free DMEM medium added at a final concentration of 100 μg/ml of the extract of oxen mushroom of Preparation Example 1 and a control-free culture for 48 hours in serum-free DMEM medium not containing oxen mushroom extract as a control Did. After incubation, the supernatant of each well was collected to measure the amount of newly synthesized MMP-1 (ng/ml) using the MMP-1 analysis kit (Amersham, United States), and MMP-1 was generated according to Equation 3 below. The inhibition rate (%) was calculated, and the results are shown in Table 4.

[수학식 3][Equation 3]

Figure 112018125593480-pat00003
Figure 112018125593480-pat00003

시료명Sample name 처리농도(nM)Treatment concentration (nM) MMPMMP -1 생성 저해율(-1 production inhibition rate ( %% )) 제조예 1Preparation Example 1 100100 10.27 ± 2.1810.27 ± 2.18 200200 18.74 ± 3.0918.74 ± 3.09 제조예 2Preparation Example 2 100100 18.71 ± 2.9718.71 ± 2.97 200200 27.25 ± 3.3627.25 ± 3.36 제조예 3Preparation Example 3 100100 15.87 ± 2.4915.87 ± 2.49 200200 29.18 ± 2.8329.18 ± 2.83 제조예 4Preparation Example 4 100100 25.07 ± 3.1025.07 ± 3.10 200200 44.10 ± 2.5444.10 ± 2.54

상기의 실험예를 통하여 제조예들의 효능효과를 확인할 수 있었으며, 효능 효과가 우수한 제조예 4를 제형에 적용하여 효능 검증을 재실시하였다.Through the above experimental examples, it was possible to confirm the efficacy effects of the preparation examples, and efficacy verification was re-executed by applying the preparation example 4 having excellent efficacy effects to the formulation.

처방예Prescription example 1 - 화장수 1-lotion

옷솔버섯 발효 추출물을 함유한 화장료 중 화장수의 처방예는 다음 표 5와 같다. Table 5 shows a prescription example of a cosmetic lotion among cosmetic products containing a fermented extract of oleander mushroom .

성분ingredient 함량
(단위:중량%)
content
(Unit: weight%)
제형예 1Formulation Example 1 제형예 2Formulation Example 2 제조예4
글리세린
1.3-부틸렌글리콜
피이지1500
알란토인
DL-판테놀
EDTA-2Na
벤조페논-9
소듐 히아루로네이트
에탄올
옥틱도데세스-16
폴리솔베이트 20
방부제, 향, 색소
증류수
Preparation Example 4
glycerin
1.3-butylene glycol
Page 1500
Allantoin
DL-panthenol
EDTA-2Na
Benzophenone-9
Sodium hyaluronate
ethanol
Octic dodeceth-16
Polysorbate 20
Preservative, fragrance, coloring
Distilled water
-
글리세린
1.3-부틸렌글리콜
피이지1500
알란토인
DL-판테놀
EDTA-2Na
벤조페논-9
소듐 히아루로네이트
에탄올
옥틱도데세스-16
폴리솔베이트 20
방부제, 향, 색소
증류수
-
glycerin
1.3-butylene glycol
Page 1500
Allantoin
DL-panthenol
EDTA-2Na
Benzophenone-9
Sodium hyaluronate
ethanol
Octic dodeceth-16
Polysorbate 20
Preservative, fragrance, coloring
Distilled water
3.0
5.0
3.0
1.0
0.1
0.3
0.02
0.04
5.0
10.0
0.2
0.2
미량
잔량
3.0
5.0
3.0
1.0
0.1
0.3
0.02
0.04
5.0
10.0
0.2
0.2
a very small amount
Balance
합계Sum 100100

처방예Prescription example 2 - 크림 2-cream

옷솔버섯 발효 추출물을 함유한 화장료 중 크림의 처방예는 다음 표 6과 같다. Table 6 shows an example of the prescription of the cream in the cosmetic composition containing the fermented extract of oxal mushroom .

성분ingredient 함량
(단위:중량%)
content
(Unit: weight%)
제형예 3Formulation Example 3 제형예 4Formulation Example 4 제조예4
친유형 모노스테아린산글리세린
세테아릴알콜
스테아린산
밀납
폴리솔베이트 60
솔비탄스테아레이트
경화식물유
스쿠알란
광물유
트리옥타노인
디메치콘
소듐마그네슘실리케이트
글리세린
베타인
트리에타올아민
소듐히아루로네이트
방부제, 향, 색소
증류수
Preparation Example 4
Lipophilic glycerin monostearate
Cetearyl alcohol
Stearic acid
Wax
Polysorbate 60
Sorbitan stearate
Hydrogenated vegetable oil
Squalane
Mineral oil
Trioctanoin
Dimethicone
Sodium magnesium silicate
glycerin
Betaine
Triethanolamine
Sodium hyaluronate
Preservative, fragrance, coloring
Distilled water
-
친유형 모노스테아린산글리세린
세테아릴알콜
스테아린산
밀납
폴리솔베이트 60
솔비탄스테아레이트
경화식물유
스쿠알란
광물유
트리옥타노인
디메치콘
소듐마그네슘실리케이트
글리세린
베타인
트리에타올아민
소듐히아루로네이트
방부제, 향, 색소
증류수
-
Lipophilic glycerin monostearate
Cetearyl alcohol
Stearic acid
Wax
Polysorbate 60
Sorbitan stearate
Hydrogenated vegetable oil
Squalane
Mineral oil
Trioctanoin
Dimethicone
Sodium magnesium silicate
glycerin
Betaine
Triethanolamine
Sodium hyaluronate
Preservative, fragrance, coloring
Distilled water
3.0
2.0
2.2
1.5
1.0
1.5
0.6
1.0
3.0
5.0
5.0
1.0
0.1
5.0
3.0
1.0
4.0
미량
잔량
3.0
2.0
2.2
1.5
1.0
1.5
0.6
1.0
3.0
5.0
5.0
1.0
0.1
5.0
3.0
1.0
4.0
a very small amount
Balance
합계Sum 100100

처방예Prescription example 3 - 에센스 3-Essence

옷솔버섯 발효 추출물을 함유한 화장료중 에센스의 처방예는 다음 표 7과 같다.Prescription examples of the essence in the cosmetic composition containing the fermented extract of oleander mushroom are shown in Table 7 below.

성분ingredient 함량
(단위:중량%)
content
(Unit: weight%)
제형예 5Formulation Example 5 제형예 6Formulation Example 6 제조예 4
글리세린
베타인
피이지 1500
알란토인
DL-판테놀
이.디.티.에이-2Na
벤조페논 - 9
히드록시에칠 셀룰로오스
소듐히아루로네이트
카르복시비닐폴리머
트리에탄올아민
옥틸도데칸올
옥틸도데세스 -16
에탄올
방부제, 향, 색소
증류수
Preparation Example 4
glycerin
Betaine
PAGE 1500
Allantoin
DL-panthenol
E.D.T.A-2Na
Benzophenone-9
Hydroxyethyl cellulose
Sodium hyaluronate
Carboxyvinyl polymer
Triethanolamine
Octyldodecanol
Octyldodeseth -16
ethanol
Preservative, fragrance, coloring
Distilled water
-
글리세린
베타인
피이지 1500
알란토인
DL-판테놀
이.디.티.에이-2Na
벤조페논 - 9
히드록시에칠 셀룰로오스
소듐히아루로네이트
카르복시비닐폴리머
트리에탄올아민
옥틸도데칸올
옥틸도데세스 -16
에탄올
방부제, 향, 색소
증류수
-
glycerin
Betaine
PAGE 1500
Allantoin
DL-panthenol
E.D.T.A-2Na
Benzophenone-9
Hydroxyethyl cellulose
Sodium hyaluronate
Carboxyvinyl polymer
Triethanolamine
Octyldodecanol
Octyldodeseth -16
ethanol
Preservative, fragrance, coloring
Distilled water
3.0
10.0
5.0
2.0
0.1
0.3
0.02
0.04
0.1
8.0
0.2
0.18
0.3
0.4
6.0
미량
잔량
3.0
10.0
5.0
2.0
0.1
0.3
0.02
0.04
0.1
8.0
0.2
0.18
0.3
0.4
6.0
a very small amount
Balance
합계Sum 100100

실시예 1 - 옷솔버섯 발효 추출물을 함유하는 화장료의 주름 개선 효과 평가 Example 1 -Evaluation of wrinkle improvement effect of cosmetic products containing fermented extract of Oyster mushroom

본 발명의 옷솔버섯 추출물을 함유하는 화장료의 주름 개선 효과를 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다. 옷솔버섯 추출물을 3%(v/v)를 함유하고 있는 제형예 3의 크림과, 크림에서 추출물을 정제수로 대체한 제형예 4의 크림을 사용해 평가하였다. 30명의 30-40세 여성을 무작위로 2개군으로 나누어 제형예의 크림을 매일 아침 저녁 2회씩 세안 후 크림 적당량을 눈가를 중심으로 2개월간 연속적으로 바르게 하였다. 각 피검자의 주름 개선 효과를 육안 관찰을 통하여 평가하였다. 실험 결과는 하기의 표 8에 나타낸 바와 같다.The effect of improving the wrinkles of the cosmetic product containing the extract of the pine cone mushroom of the present invention was evaluated through an actual use test. It was evaluated using the cream of Formulation Example 3 containing 3% (v/v) of the extract of Oyster Mushroom and the cream of Formulation Example 4 in which the extract was replaced with purified water. Thirty 30-40-year-old women were randomly divided into two groups, and the cream of the formulation example was washed twice each morning and evening, and then the appropriate amount of cream was applied continuously for 2 months centering around the eyes. The wrinkle improvement effect of each subject was evaluated through visual observation. The experimental results are shown in Table 8 below.

구분division 주름개선효과 우수Excellent wrinkle improvement effect 주름개선효과 약간Wrinkle improvement effect 주름개선 효과 없음No wrinkle improvement effect 제형예 3Formulation Example 3 88 66 66 제형예 4
(비교제형예)
Formulation Example 4
(Comparative example)
33 44 1313

그 결과, 본 발명의 옷솔버섯 추출물을 함유한 화장료는 함유하지 않은 비교예에 비하여 높은 주름개선 효과를 나타내었으며, 본 발명의 화장료를 피부에 도포한 부분의 피검자들에서 피부 자극을 관찰할 수 없었다.As a result, the cosmetic composition containing the extract of the oleander mushroom of the present invention showed a higher wrinkle improvement effect compared to the comparative example, and the skin irritation could not be observed in the subjects who applied the cosmetic material of the present invention to the skin. .

실시예 2 - 옷솔버섯 발효 추출물을 함유하는 화장료의 주름 개선 효과 평가 Example 2 -Evaluation of wrinkle improvement effect of cosmetics containing fermented extract of Oyster mushroom

본 발명의 화장료의 피부 탄력 효과를 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다. 옷솔버섯 추출물을 각각 3%(v/v) 함유하고 있는 제형예 3의 크림과 옷솔버섯 추출물을 정제수로 대체한 제형예4의 크림을 사용해 평가하였다. 30명의 30-40세 여성을 무작위로 2개군으로 나누어 제형예 3과 제형예 4의 크림을 매일 아침 저녁 2회씩 세안 후 크림 적당량을 양볼을 중심으로 2개월간 연속적으로 바르게 하였다. 각 피검자의 피부 탄력 개선 효과를 Cutometer(C+K, 독일)를 이용하여 탄력 증진 유무를 평가하였다. 실험 결과는 하기의 표 9에 나타낸 바와 같다.The skin elasticity effect of the cosmetic of the present invention was evaluated through actual use tests. It was evaluated using the cream of Formulation Example 3 containing 3% (v/v) each of the extract of Osoleus Mushroom and the Cream of Formulation Example 4 in which the extract of Osoleus Mushroom was replaced with purified water. Thirty 30-40-year-old women were randomly divided into two groups, and the creams of Formulation Example 3 and Formulation Example 4 were washed twice each morning and evening, and the appropriate amount of cream was applied continuously for 2 months around the cheeks. The effect of improving the skin elasticity of each subject was evaluated by using a cutometer (C+K, Germany) to improve the elasticity. The experimental results are shown in Table 9 below.

구분division 주름개선효과 우수Excellent wrinkle improvement effect 주름개선효과 약간Wrinkle improvement effect 주름개선 효과 없음No wrinkle improvement effect 제형예 3Formulation Example 3 77 1010 33 제형예 4
(비교제형예)
Formulation Example 4
(Comparative example)
33 55 1212

표 9를 보면, 본 발명의 옷솔버섯 추출물을 함유한 제형예 3의 크림은 옷솔버섯 추출물을 함유하지 않은 제형예 4의 크림에 비하여 높은 피부 탄력 증진 효과를 보여주었으며, 본 발명의 화장료를 피부에 도포한 부분의 피검자들에게서 피부 자극을 관찰할 수 없었다.Looking at Table 9, the cream of the formulation example 3 containing the extract of the mushrooms of the present invention showed a higher skin elasticity promoting effect compared to the cream of the formulation example 4 without the extract of the pine mushrooms, and the cosmetic of the present invention was applied to the skin. Skin irritation could not be observed in the subjects in the applied area.

Claims (6)

옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물. Trichaptum abietinum ) A cosmetic composition for improving skin wrinkles containing fermented extract as an active ingredient. 옷솔버섯(Trichaptum abietinum) 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 화장료 조성물. Trichaptum abietinum ) Antioxidant cosmetic composition comprising fermented extract as an active ingredient. 제1항에 있어서, 상기 옷솔버섯 발효 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.0001 ~ 30.0 중량%로 함유되는 것을 특징으로 하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.The cosmetic composition for improving skin wrinkles according to claim 1, wherein the fermented extract of oleander mushroom is contained in an amount of 0.0001 to 30.0% by weight based on the total weight of the cosmetic composition. 제2항에 있어서, 상기 옷솔버섯 발효 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.0001 ~ 30.0 중량%로 함유되는 것을 특징으로 하는 항산화용 화장료 조성물.3. The cosmetic composition for antioxidant according to claim 2, wherein the fermented extract of oleander mushroom is contained in an amount of 0.0001 to 30.0% by weight relative to the total weight of the cosmetic composition. 제1항에 있어서, 상기 옷솔버섯 발효 추출물은 옷솔버섯 용매 추출물을 락토바실러스 애씨도필루스(Lactobacillus acidophilus), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis), 또는 락토바실러스 애씨도필루스(Lactobacillus acidophilus)와 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis)를 동일 중량비로 혼합한 혼합균주로 발효시킨 것을 특징으로 하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.The method of claim 1, wherein the fermented extract of oleander mushroom is Lactobacillus acidophilus , Bifidobacterium lactis , or Lactobacillus acidophilus . And Bifidobacterium lactis ( Bifidobacterium lactis ) cosmetic composition for improving skin wrinkles, characterized in that fermented with a mixed strain mixed in the same weight ratio. 제2항에 있어서, 상기 옷솔버섯 발효 추출물은 옷솔버섯 용매 추출물을 락토바실러스 애씨도필루스(Lactobacillus acidophilus), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis), 또는 락토바실러스 애씨도필루스(Lactobacillus acidophilus)와 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis)를 동일 중량비로 혼합한 혼합균주로 발효시킨 것을 특징으로 하는 항산화용 화장료 조성물.
The method according to claim 2, wherein the fermented extract of oleander mushroom is Lactobacillus acidophilus , Bifidobacterium lactis , or Lactobacillus acidophilus ( Lactobacillus acidophilus ). And Bifidobacterium lactis ( Bifidobacterium lactis ) is a cosmetic composition for antioxidant, characterized in that fermented with a mixed strain mixed in the same weight ratio.
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