KR102130332B1 - Health fuctional food composition for preventing or improving liver diseases comprising Gastrodia elata and larva - Google Patents

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Abstract

본 발명은 천마 및 굼벵이 혼합 발효물을 유효성분으로 함유하는 간질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 건강기능식품 조성물과 간기능 개선용 천마 및 굼벵이 혼합 발효물의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of liver disease containing a mixed fermentation product of cheonma and slug as an active ingredient and a composition of a health functional food composition and a method of manufacturing a mixed fermentation product of cheonma and slug for improvement of liver function.

Description

천마와 굼벵이를 유효성분으로 함유하는 간질환의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물{Health fuctional food composition for preventing or improving liver diseases comprising Gastrodia elata and larva}Health fuctional food composition for preventing or improving liver diseases comprising Gastrodia elata and larva}

본 발명은 천마와 굼벵이를 유효성분으로 함유하는 간질환의 예방 또는 치료용 건강식품 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 조성물은 혈중 알코올을 빠르게 감소시키면서, 알코올 탈수소효소(ADH) 및 아세트알데히드 탈수소효소(ALDH) 활성이 증가하며, 혈중 아스파라긴산 아미노전이효소(AST), 알라닌 아미노전이효소(ALT), 감마글루타밀트란스펩티다제(γ-GTP), 알칼리성 인산분해효소(ALP) 및 젖산탈수소효소(LDH) 활성이 감소하여, 간질환 예방 및 개선을 위한 건강기능식품으로 매우 유용하게 이용될 수 있다.The present invention relates to a health food composition for the prevention or treatment of liver disease containing cheonma and slug as an active ingredient, the composition of the present invention while rapidly reducing the alcohol in the blood, alcohol dehydrogenase (ADH) and acetaldehyde dehydrogenase ( ALDH) activity is increased, blood aspartic acid aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), gamma glutamyltranspeptidase (γ-GTP), alkaline phosphatase (ALP) and lactate dehydrogenase (LDH) ) As activity decreases, it can be very useful as a health functional food for prevention and improvement of liver disease.

최근 복잡한 사회구조로의 변화와 업무로 인한 스트레스를 해소하기 위한 하나의 방편으로 잦은 음주 자리를 갖는 현상이 늘어나는 추세이다. 이러한 잦은 음주로 인해 알코올에 의한 인체 건강에 심각한 문제가 제기되면서 건강기능 식품이나 약품 개발의 연구가 활발히 진행되고 있다. 현재까지 임상적으로 사용되고 있는 대표적인 간질환 치료제인 실리빈(silybin) 및 실리마린(silymarin)의 경우 국화과 식물인 마리아엉겅퀴(Silybum marianum)의 열매에서 분리되었으며, 차전자(Plantago asiatica)의 아우쿠빈(aucubin), 우르소데스옥시콜린산(ursodesoxycholic acid) 및 비타빈 B군 등이 간 독성 치료제로 사용되고 있으나, 이들 질환의 심각성과 빈도수에 비해 개발된 치료제가 많지 않은 실정을 감안하면 천연물에서의 간질환 치료제의 개발은 그 의미가 크다고 할 수 있다.In recent years, the phenomenon of having frequent drinking spots is increasing as a way to relieve stress due to changes in the social structure and work. Due to such frequent drinking, serious problems in human health caused by alcohol have been raised, and research on the development of health functional foods and drugs has been actively conducted. In the case of a representative liver disease that currently used in clinical treatments Sicily blank (silybin), and silymarin (silymarin) has been separated from the fruit of plants in the Asteraceae Mary thistle (Silybum marianum), secondary electron (Plantago Asiatica ), acubin, ursodesoxycholic acid, and vitamin B group are used as treatments for liver toxicity. It can be said that the development of therapeutic agents for liver disease in natural products has great significance.

천마(Gastrodia elata Blume)는 난초과(Orchidaceae)에 속하는 다년초로서, 뽕나무 버섯속 균사에 공생하며 땅속 괴경을 지니고 있고, 적극, 귀독우, 난모, 신초, 정풍초 등으로 부르기도 한다. 한방에서 천마는 고혈압, 중풍, 두통, 신경성질환, 당뇨병, 간질, 어지럼증에 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 이제까지 알려진 천마의 약리성분으로는 가스트로딘(gastrodine), p-히드록시 벤질 알콜, p-히드록시 벤질 알데히드, 바닐린 등이 보고되었다. Gastrodia elata Blume) is a perennial plant belonging to the Orchidaceae family, symbiotic with the mycelium of the mulberry mushroom and possessing tubers in the ground. Cheonma is known to be effective in hypertension, paralysis, headache, neurological diseases, diabetes, epilepsy, and dizziness. Gastrodine, p-hydroxy benzyl alcohol, p-hydroxy benzyl aldehyde, vanillin and the like have been reported as pharmacological components of Cheonma.

천마의 임상적 효능은 신농본초경, 향약집성방, 산림경제, 동의보감, 방약합편 등에 수록되어 있는바, 주로 피를 맑게 하고 어혈을 없애며, 담과 습을 제거하고, 풍을 치료, 염증을 삭이고, 진액을 늘리고, 피나기를 멎게 하고, 설사를 멈추고, 독을 풀어주고, 갖가지 약성을 중화 또는 완화, 아픔을 멎게 하는 등의 다양한 효능을 가지며, 혈압, 중풍, 두통, 당뇨 등에도 효능이 있는 한약재로 알려져 있다. Kisti NDSL을 통하여 1994년 이후 최근까지 검색된 천마의 효능에 관한 논문을 분석하면 논문 건수는 약 64건으로 검색되었다. 천마가 활용된 논문들의 주요한 효능으로는 뇌혈관 질환의 개선을 위주로 본 논문이 가장 많았고, 다음이 고혈압과 관련된 실험, 그리고 지질분해를 통한 비만개선효과를 본 논문 등 주로 상기 3가지 관점에서 본 논문이 많았으며, 신경안정작용, 심장혈류의 개선 작용, 콜레스테롤 저하 효과, 그리고 항산화 작용에 관해서도 보고된 바 있다.The clinical efficacy of Cheonma is included in Shinnongbon Carbide, Scented Herbs, Forest Economy, Donguibogam, and Pharm, etc., mainly clearing blood, removing blood and blood, removing phlegm and moisture, treating wind, cutting inflammation, and essence It is known as an herbal medicine that has various effects such as increasing the amount of blood, stopping the bleeding, stopping diarrhea, releasing poison, neutralizing or alleviating various medicinal properties, and stopping the pain, and is also effective in blood pressure, stroke, headache, and diabetes. have. When analyzing papers on the efficacy of Cheonma, which has been searched since 1994 through Kisti NDSL, the number of papers was found to be about 64. The main efficacy of the papers using Cheonma was mainly the improvement of cerebrovascular disease, and the following were mainly the three main points of view, including experiments related to hypertension and the effect of improving obesity through lipolysis. There were many, and it has been reported about neurostable action, cardiovascular improvement, cholesterol lowering effect, and antioxidant action.

천마에 함유되어 있는 성분은 대부분 페놀성 화합물로서 가스트로딘(gastrodin), 페놀성 배당체, 유황 함유 페놀성 화합물, 유기산, 당 및 베타-시토스테롤(β-sitosterol) 등이 분리되어 보고되었으며, 그 이외에도 스테롤(sterol)류, 콜레스테롤(cholesterol), p-하이드록시벤질 알콜(p-hydroxylbenvyl alcohol)과 바닐린(vanillin) 등의 성분에 대해서도 알려져 있으나, 천마에 대한 제품개발은 제대로 이루어지지 못하고 있는 상황이며, 종래에는 단지 약재상이나 한의원에서 절단하여 사용되었을 뿐이다.Most of the ingredients contained in Cheonma are phenolic compounds, and gastrodin, phenolic glycosides, sulfur-containing phenolic compounds, organic acids, sugars, and beta-sitosterol have been reported separately. (sterol), cholesterol (cholesterol), p-hydroxybenzyl alcohol (p-hydroxylbenvyl alcohol) and vanillin (vanillin) and other ingredients are known, but the development of products for Cheonma has not been done properly, conventional There was only a medicinal or oriental medicine clinic used for cutting.

천마는 90년대 중반에 인공재배기술이 개발되어 생산량이 증가하였으나 그 동안 식품의약품안전청의 식품으로 사용할 수 없는 원료의 규제에 묶여서 그 이용이 제한되어 왔었다. 그러나 2000년 9월 1일부로 규제가 풀려 상용이 가능해져 천마의 활용도를 높이는 것이 필요하다. 천마는 상기와 같이 그 생리활성 성분이나 약효가 가공제품소재로서 매우 뛰어나지만 맛이 너무 쓰고 이취가 강하여 전체적인 기호도 면에서 다른 생약소재보다 식품이나 약품소재로 이용하기에 어려운 점이 있다.In the mid-1990s, artificial cultivation technology was developed and production increased, but in the meantime, its use has been restricted due to restrictions on raw materials that cannot be used as food by the Korea Food and Drug Administration. However, as of September 1, 2000, regulations were lifted and commercialization became possible, and it is necessary to increase the utilization of Cheonma. As mentioned above, Cheonma has very excellent physiologically active ingredients or medicinal properties as a processed product material, but the taste is too strong and the odor is strong, making it difficult to use as a food or pharmaceutical material than other herbal materials in terms of overall preference.

한국공개특허 제2015-0127808호에는 초고압 처리 콩나물 추출물을 함유하는 간질환 치료 및 예방용 약학 조성물이 개시되어 있고, 한국등록특허 제0762448호에는 잔대를 포함하는 생약재 추출물을 유효성분으로 함유하는 간질환 예방 및 치료용 건강식품 조성물이 개시되어 있으나, 본 발명의 천마와 굼벵이를 유효성분으로 함유하는 간질환의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물과는 상이하다.Korean Patent Publication No. 2015-0127808 discloses a pharmaceutical composition for the treatment and prevention of liver disease containing ultra-high pressure treated bean sprout extract, and Korean Registered Patent No. 0762448 discloses a liver disease containing an herbal extract containing an active ingredient as an active ingredient. Although a health food composition for prevention and treatment has been disclosed, it is different from a health food composition for preventing or improving liver disease containing the thousand horses and slugs of the present invention as active ingredients.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 안출된 것으로서, 본 발명자는 천마 분말 및 굼벵이 분말을 혼합한 혼합물에 유산균 배양액을 첨가하여 발효한 혼합 발효물이 간질환에 대한 예방 또는 치료 효과가 증가함을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.The present invention was devised by the above-mentioned needs, and the present inventors confirmed that the mixed fermentation product fermented by adding a lactic acid bacteria culture solution to a mixture of cheonma powder and slug powder increases the effect of preventing or treating liver disease. By doing so, the present invention was completed.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 천마 및 굼벵이 혼합 발효물을 유효성분으로 함유하는 간질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.In order to solve the above problems, the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of liver disease containing a mixture of cheonma and slugs as an active ingredient.

또한, 본 발명은 천마 및 굼벵이 혼합 발효물을 유효성분으로 함유하는 간질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.In addition, the present invention provides a health functional food for the prevention or improvement of liver disease containing a mixture of cheonma and slug as an active ingredient.

또한, 본 발명은 (1) 천마 분말 및 굼벵이 분말을 혼합한 혼합물을 멸균하여 준비하는 단계; 및 (2) 상기 (1)단계의 준비한 혼합물에 물 및 유산균 배양액을 첨가한 후 발효하는 단계를 포함하는 간기능 개선용 천마 및 굼벵이 혼합 발효물의 제조방법을 제공한다.In addition, the present invention comprises the steps of (1) preparing sterilized mixture of Cheonma powder and slug powder; And (2) adding water and lactic acid bacteria culture solution to the mixture prepared in the step (1), followed by fermentation, thereby providing a method of manufacturing a mixture of fermented cheonma and slug for liver function improvement.

본 발명의 천마 및 굼벵이 혼합 발효물은 혈중 알코올을 빠르게 감소시키면서, 알코올 탈수소효소(ADH) 및 아세트알데히드 탈수소효소(ALDH) 활성이 증가하며, 혈중 아스파라긴산 아미노전이효소(AST), 알라닌 아미노전이효소(ALT), 감마글루타밀트란스펩티다제(γ-GTP), 알칼리성 인산분해효소(ALP) 및 젖산탈수소효소(LDH) 활성이 감소하여, 간질환 예방 및 개선을 위한 건강기능식품으로 매우 유용하게 이용될 수 있다.The cheonma and slug mixed fermentation product of the present invention rapidly decreases alcohol in the blood while increasing the activity of alcohol dehydrogenase (ADH) and acetaldehyde dehydrogenase (ALDH), blood aspartic acid aminotransferase (AST), alanine aminotransferase ( ALT), gamma glutamyltranspeptidase (γ-GTP), alkaline phosphatase (ALP) and lactic acid dehydrogenase (LDH) activity are reduced, which is very useful as a health functional food for prevention and improvement of liver disease Can be.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 천마 및 굼벵이 혼합 발효물을 유효성분으로 함유하는 간질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.In order to achieve the object of the present invention, the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of liver disease containing a mixture of cheonma and slug as an active ingredient.

본 발명의 간질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에서, 상기 천마 및 굼벵이 혼합 발효물은 바람직하게는 천마 분말 및 굼벵이 분말을 1~2:1 중량비율로 혼합한 혼합물을 멸균한 후, 여기에 물 및 유산균 배양액을 첨가한 후 36~38℃의 배양기에서 66~78시간 발효하여 제조된 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 천마 분말 및 굼벵이 분말을 1~2:1 중량비율로 혼합한 혼합물을 멸균한 후, 여기에 물 및 유산균 배양액을 첨가한 후 37℃의 배양기에서 72시간 발효하여 제조된 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In the pharmaceutical composition for preventing or treating liver disease of the present invention, the fermented mixture of cheonma and slug is preferably sterilized by mixing a mixture of cheonma powder and slug powder at a weight ratio of 1 to 2: 1, followed by water. And after adding the lactic acid bacteria culture solution may be prepared by fermentation for 66 to 78 hours in an incubator of 36 ~ 38 ℃, more preferably sterilized mixture of a thousand powder and slug powder in a weight ratio of 1 to 2: 1 Then, after adding water and lactic acid bacteria culture solution to this, it may be prepared by fermenting for 72 hours in a 37°C incubator, but is not limited thereto.

또한, 본 발명의 간질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에서, 상기 '굼벵이'는 흰점박이꽃무지(Protaetia brevitarsis)의 유충일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In addition, in the pharmaceutical composition for preventing or treating liver disease of the present invention, the'slugs' may be larvae of white spotted flower radish ( Protaetia brevitarsis ), but are not limited thereto.

또한, 본 발명의 간질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에서, 상기 간질환은 지방간, 알코올성 지방간, 만성 간염, 급성 간염, 알코올성 간염, 간경변 또는 알코올성 간경변일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In addition, in the pharmaceutical composition for preventing or treating liver disease of the present invention, the liver disease may be fatty liver, alcoholic fatty liver, chronic hepatitis, acute hepatitis, alcoholic hepatitis, cirrhosis or alcoholic cirrhosis, but is not limited thereto.

본 발명의 간질환의 예방 또는 치료용 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 포함할 수 있다.The composition for preventing or treating liver disease of the present invention may include suitable carriers, excipients, and diluents commonly used in the manufacture of pharmaceutical compositions.

본 발명의 간질환의 예방 또는 치료용 조성물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.The pharmaceutical dosage form of the composition for preventing or treating liver disease of the present invention can also be used in the form of their pharmaceutically acceptable salts, and can be used alone or in combination with other pharmaceutically active compounds as well as a suitable set. .

본 발명에 따른 간질환의 예방 또는 치료용 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 간질환의 예방 또는 치료용 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한 다양한 화합물 혹은 혼합물을 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.The composition for preventing or treating liver disease according to the present invention is an oral dosage form such as powder, granule, tablet, capsule, suspension, emulsion, syrup, aerosol, external preparation, suppository, and sterile injectable solution, respectively, according to a conventional method. It can be formulated in form and used. Carriers, excipients and diluents that can be included in the composition for the prevention or treatment of liver disease include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate , Various compounds or mixtures including calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. have. In the case of formulation, it is prepared using diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents and surfactants. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc. These solid preparations include at least one excipient in the extract, for example, starch, calcium carbonate, sucrose ) Or by mixing lactose, gelatin, and the like. In addition, lubricants such as magnesium stearate and talc are used in addition to simple excipients. Liquid preparations for oral use include suspensions, intravenous solutions, emulsions, syrups, etc. In addition to water and liquid paraffin, which are common diluents, various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, can be included. . Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories. Non-aqueous solvents and suspensions may include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate. As a base for suppositories, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, and glycerogelatin may be used.

본 발명의 간질환의 예방 또는 치료용 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 간질환의 예방 또는 치료용 조성물은 1일 0.0001 내지 100mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 100mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.The preferred dosage of the composition for preventing or treating liver disease of the present invention varies depending on the patient's condition and body weight, the degree of the disease, the drug form, the route and duration of administration, and may be appropriately selected by those skilled in the art. However, for the desired effect, the composition for preventing or treating liver disease of the present invention is preferably administered at 0.0001 to 100 mg/kg per day, preferably at 0.001 to 100 mg/kg per day. Administration may be administered once a day, or may be divided into several times. The above dosage does not limit the scope of the present invention in any way.

본 발명의 간질환의 예방 또는 치료용 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장, 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.The composition for preventing or treating liver disease of the present invention can be administered to various mammals, such as rats, mice, livestock, and humans. Any mode of administration can be expected, for example, oral, rectal, intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrathecal epidural or intracerebroventricular injection.

또한, 본 발명은 천마 및 굼벵이 혼합 발효물을 유효성분으로 함유하는 간질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.In addition, the present invention provides a health functional food for the prevention or improvement of liver disease containing a mixture of cheonma and slug as an active ingredient.

본 발명의 간질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품에서, 상기 간질환은 지방간, 알코올성 지방간, 만성 간염, 급성 간염, 알코올성 간염, 간경변 또는 알코올성 간경변일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In the health functional food for preventing or improving liver disease of the present invention, the liver disease may be fatty liver, alcoholic fatty liver, chronic hepatitis, acute hepatitis, alcoholic hepatitis, cirrhosis or alcoholic cirrhosis, but is not limited thereto.

본 발명의 상기 간질환의 예방 또는 개선용 혼합 발효물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 간질환의 예방 또는 개선용 혼합 발효물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 개선적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 추출물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.When the mixed fermentation product for prevention or improvement of liver disease of the present invention is used as a food additive, the mixed fermentation product for prevention or improvement of liver disease can be added as it is or used with other food or food ingredients, Depending on the method, it can be suitably used. The amount of the active ingredient to be mixed can be appropriately determined according to its purpose of use (prevention, health or improved treatment). In general, in the manufacture of food or beverage, the extract of the present invention is added in an amount of 15 parts by weight or less, preferably 10 parts by weight or less based on the raw material. However, in the case of long-term intake for health and hygiene purposes or for health control, the amount may be below the above range, and since there is no problem in terms of safety, the active ingredient may be used in an amount above the above range. .

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 혼합 발효물을 이용하여 농산물, 축산물 또는 수산물의 특성을 살려 변형시키는 동시에 저장성을 좋게 한 가공식품을 제조할 수 있다. 이런 가공식품에는 예를 들어, 과자, 발효식품, 통조림, 우유가공식품, 육류가공식품, 국수 등을 포함한다. 과자는 비스킷, 파이, 빵, 캔디, 젤리, 껌, 시리얼(곡물푸레이크 등의 식사대용품류 포함) 등을 포함한다. 발효식품은 간장, 된장, 고추장 등을 포함한다. 통조림은 수산물 통조림(예를 들어, 참치, 고등어, 꽁치, 소라 통조림 등), 축산물 통조림(쇠고기, 돼지고기, 닭고기, 칠면조 통조림 등), 농산물 통조림(옥수수, 복숭아, 파인애플 통조림 등)을 포함한다. 우유가공식품은 치즈, 버터, 요구르트 등을 포함한다. 육류가공식품은 돈까스, 비프까스, 치킨까스, 소세지, 탕수육, 너겟류, 너비아니 등을 포함한다. 밀봉포장생면 등의 국수를 포함한다. 이 외에도 상기 조성물은 레토르트식품, 스프류 등에 사용될 수 있다.There are no particular restrictions on the type of food. Using the mixed fermentation product, it is possible to manufacture processed foods having good storage characteristics while simultaneously transforming the characteristics of agricultural products, livestock products or aquatic products. Such processed foods include, for example, confectionery, fermented foods, canned foods, milk processed foods, meat processed foods, noodles, and the like. Cookies include biscuits, pies, breads, candies, jellies, chewing gum, and cereals (including meal substitutes such as cereal flakes). Fermented foods include soy sauce, miso, and red pepper paste. Canned foods include canned fish (eg, canned tuna, mackerel, saury, turban, etc.), canned livestock products (canned beef, pork, chicken, turkey, etc.), canned agricultural products (canned corn, peach, pineapple, etc.). Milk processed foods include cheese, butter, and yogurt. Meat processed foods include pork cutlet, beef cutlet, chicken cutlet, sausage, sweet and sour pork, nuggets, and bread, and so on. Contains noodles such as sealed packaging noodles. In addition to this, the composition may be used for retort foods, soups, and the like.

또한, 본 발명은 천마 및 굼벵이 혼합 발효물을 함유하는 간질환의 예방 또는 개선용 건강기능성 음료를 제공한다.In addition, the present invention provides a health functional beverage for preventing or improving liver disease containing a mixture of cheonma and slug.

본 발명의 혼합 발효물을 함유하는 건강기능성 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01~0.04 g, 바람직하게는 약 0.02~0.03 g 이다.The health functional beverage composition containing the mixed fermentation product of the present invention may contain various flavoring agents or natural carbohydrates, etc., as additional components, like a conventional beverage. The aforementioned natural carbohydrates are monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, and polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As the sweetener, natural sweeteners such as taumatin and stevia extract, and synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame can be used. The proportion of the natural carbohydrate is generally about 0.01 to 0.04 g per 100 ml of the composition of the present invention, preferably about 0.02 to 0.03 g.

상기 외에 본 발명의 간질환의 예방 또는 개선용 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 간질환의 예방 또는 개선용 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.In addition to the above, the composition for preventing or improving liver disease of the present invention includes various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acids and salts thereof, alginic acids and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusting agents, stabilizers , Preservatives, glycerin, alcohol, carbonic acid used in carbonated beverages, and the like. In addition, the composition for preventing or improving liver disease of the present invention may contain flesh for the preparation of natural fruit juice, fruit juice beverage and vegetable beverage. These ingredients may be used independently or in combination. The proportion of these additives is not critical, but is generally selected from 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.

본 발명은 또한, The present invention also

(1) 천마 분말 및 굼벵이 분말을 1~2:1 중량비율로 혼합한 혼합물을 멸균하여 준비하는 단계; 및(1) preparing a sterilized mixture of cheonma powder and slug powder in a 1 to 2: 1 weight ratio; And

(2) 상기 (1)단계의 준비한 혼합물에 물 및 유산균 배양액을 첨가한 후 36~38℃의 배양기에서 66~78시간 발효하는 단계를 포함하는 간기능 개선용 천마 및 굼벵이 혼합 발효물의 제조방법을 제공한다.(2) After adding water and lactic acid bacteria culture solution to the mixture prepared in the step (1), fermentation method for the improvement of hepatic function, including the step of fermenting for 66-78 hours in an incubator at 36~38°C. to provide.

본 발명의 간기능 개선용 천마 및 굼벵이 혼합 발효물의 제조방법은 더욱 바람직하게는The method for preparing a mixed fermentation product of Cheonma and slug for improving liver function of the present invention is more preferably

(1) 천마 분말 및 굼벵이 분말을 1~2:1 중량비율로 혼합한 혼합물을 멸균하여 준비하는 단계; 및(1) preparing a sterilized mixture of cheonma powder and slug powder in a 1 to 2: 1 weight ratio; And

(2) 상기 (1)단계의 준비한 혼합물에 물 및 유산균 배양액을 첨가한 후 37℃의 배양기에서 72시간 발효하는 단계를 포함하는 간기능 개선용 천마 및 굼벵이 혼합 발효물의 제조방법을 제공한다.(2) After adding water and lactic acid bacteria culture solution to the mixture prepared in the step (1), fermentation method for improving liver function, including fermentation for 72 hours in an incubator at 37° C., is provided.

이하, 본 발명의 실시예를 들어 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, examples of the present invention will be described in detail. However, the following examples are merely illustrative of the present invention, and the contents of the present invention are not limited to the following examples.

제조예Manufacturing example 1. 천마 및 굼벵이 혼합 1. Mixing thousand horses and slugs 발효물Fermentation

(1) 천마(Gastrodia elata) 분말 및 굼벵이 분말을 1:1 중량비율로 혼합한 혼합물을 고압증기멸균기(121℃ 및 1.2기압)를 이용하여 15분간 멸균하였다.(1) Gastrodia elata ) A mixture of powder and slug powder in a 1:1 weight ratio was sterilized for 15 minutes using a high pressure steam sterilizer (121°C and 1.2 atmospheres).

(2) 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) 및 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 3종의 유산균을 MRS 액체 배지에 접종하여 37℃의 배양기에서 24시간 배양한 후 106 CFU/ml 농도로 희석하여 유산균 배양액을 준비하였다.(2) Lactobacillus brevis ( Lactobacillus brevis ), Lactobacillus pertumum ( Lactobacillus fermentum ) and Lactobacillus plantarum ( Lactobacillus plantarum ) were inoculated into three types of lactic acid bacteria in an MRS liquid medium and incubated for 24 hours in an incubator at 37°C. Dilute to a concentration of 10 6 CFU/ml to prepare a culture medium for lactic acid bacteria.

(3) 상기 (1)단계의 멸균한 혼합물 30 g에 멸균수 70 mL를 첨가한 후 상기 (2)단계의 준비한 유산균 배양액 3 mL를 접종하여 37℃의 배양기에서 72시간 동안 배양하여 천마 및 굼벵이 혼합 발효물을 제조하였다.(3) After adding 70 mL of sterile water to 30 g of the sterilized mixture of step (1), inoculate 3 mL of the lactic acid bacteria culture solution prepared in step (2), and incubate for 72 hours in an incubator at 37° C. for millenium and slug. A mixed fermentation product was prepared.

제조예Manufacturing example 2. 천마 및 굼벵이 혼합 2. Cheonma and slug mix 발효물Fermentation

상기 제조예 1의 방법으로 천마 및 굼벵이 혼합 발효물을 제조하되, (1)단계의 천마 분말 및 굼벵이 분말을 2:1 중량비율로 혼합한 혼합물을 이용하여 천마 및 굼벵이 혼합 발효물을 제조하였다.In the method of Preparation Example 1, a fermented product of cheonma and slug was prepared, but a mixture of cheonma and slug powder of step (1) in a 2:1 weight ratio was used to prepare a mixture of cheonma and slug.

제조예Manufacturing example 3. 천마 및 굼벵이 혼합 3. Cheonma and slug mix 발효물을Fermentation 이용한 건강기능식품 Health functional foods used

상기 제조예 1의 방법으로 제조된 천마 및 굼벵이 혼합 발효물 30 g, 구기자 30 g 및 천궁 60 g을 혼합하여, 간질환 예방 및 개선 효과와 더불어 두통 및 어지러움 개선에 도움을 주는 건강기능식품을 제조하였다.Cheonma and slug mixed fermentation products prepared by the method of Preparation Example 1, 30 g, wolfberry 30 g, and 60 g of celestial arch are mixed to prepare a health functional food that helps to improve headache and dizziness as well as prevent and improve liver disease. Did.

제조예Manufacturing example 4. 천마 및 굼벵이 혼합 4. Cheonma and slug mix 발효물을Fermentation 이용한 건강기능식품 Health functional foods used

상기 제조예 2의 방법으로 제조된 천마 및 굼벵이 혼합 발효물 75 g, 형개 15 g, 목향 15 g, 계지 15 g 및 천궁 15 g을 혼합하여, 간질환 예방 및 개선 효과와 더불어 편두통, 심혈관질환 및 두목현훈 개선에 도움을 주는 건강기능식품을 제조하였다.Cheonma and slug mixed fermentation products prepared by the method of Preparation Example 2 75 g, hyeonggae 15 g, Mok 15 g, gyeji 15 g and 15 g of celestial arch are mixed to prevent and improve liver disease, migraine, cardiovascular disease and Manufactured health functional foods to help improve Boss Hyun-hoon.

제조예Manufacturing example 5. 천마 및 굼벵이 혼합 5. Cheonma and slug mix 발효물을Fermentation 이용한 건강기능식품 Health functional foods used

상기 제조예 2의 방법으로 제조된 천마 및 굼벵이 혼합 발효물 10 g, 야국화 4 g, 두충 4 g, 구기자 4 g 및 천궁 5 g을 혼합하여, 간질환 예방 및 개선 효과와 더불어 고혈압 개선에 도움을 주는 건강기능식품을 제조하였다.Cheonma and slug mixed fermentation products prepared by the method of Preparation Example 2, 10 g, wild chrysanthemum 4 g, wormworm 4 g, wolfberry 4 g, and 5 g of celestial arch are mixed to help improve liver disease and improve hypertension, as well as to prevent and improve liver disease. A health functional food was prepared.

제조예Manufacturing example 6. 천마 및 굼벵이 혼합 6. Mixing thousand and slugs 발효물을Fermentation 이용한 건강기능식품 Health functional foods used

상기 제조예 1의 방법으로 제조된 천마 및 굼벵이 혼합 발효물 15 g, 백출 9 g, 복령 9 g, 진피 6 g, 감초 6 g, 생강 6 g, 석창포 4 g 및 대추 3개를 혼합하여, 간질환 예방 및 개선 효과와 더불어 어지러움 및 기억력 개선에 도움을 주는 건강기능식품을 제조하였다.Cheonma and slug mixed fermentation products prepared by the method of Preparation Example 1 15 g, Baekchul 9 g, Bokryeong 9 g, Dermis 6 g, Licorice 6 g, Ginger 6 g, Seokchangpo 4 g and 3 jujubes are mixed, liver In addition to the disease prevention and improvement effect, a health functional food was prepared to help improve dizziness and memory.

비교예Comparative example 1. 천마 1. Cheonma 발효물Fermentation

(1) 천마 분말을 고압증기멸균기(121℃ 및 1.2기압)를 이용하여 15분간 멸균하였다.(1) Cheonma powder was sterilized for 15 minutes using a high-pressure steam sterilizer (121°C and 1.2 atmospheres).

(2) 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) 및 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 3종의 유산균을 MRS 액체 배지에 접종하여 37℃의 배양기에서 24시간 배양한 후 106 CFU/ml 농도로 희석하여 유산균 배양액을 준비하였다.(2) Lactobacillus brevis ( Lactobacillus brevis ), Lactobacillus pertumum ( Lactobacillus fermentum ) and Lactobacillus plantarum ( Lactobacillus plantarum ) were inoculated into three types of lactic acid bacteria in an MRS liquid medium and incubated for 24 hours in an incubator at 37°C. Dilute to a concentration of 10 6 CFU/ml to prepare a culture medium for lactic acid bacteria.

(3) 상기 (1)단계의 멸균한 천마 분말 30 g에 멸균수 70 mL를 첨가한 후 상기 (2)단계의 준비한 유산균 배양액 3 mL를 접종하여 37℃의 배양기에서 72시간 동안 배양하여 천마 발효물을 제조하였다.(3) After adding 70 mL of sterile water to 30 g of the sterilized cheonma powder in the step (1), inoculate 3 mL of the lactic acid bacteria culture solution prepared in the step (2) and incubating for 72 hours in an incubator at 37° C. to ferment cheonma Water was prepared.

비교예Comparative example 2. 굼벵이 2. Slugs 발효물Fermentation

(1) 굼벵이 분말을 고압증기멸균기(121℃ 및 1.2기압)를 이용하여 15분간 멸균하였다.(1) The slug powder was sterilized for 15 minutes using a high pressure steam sterilizer (121°C and 1.2 atmospheres).

(2) 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) 및 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 3종의 유산균을 MRS 액체 배지에 접종하여 37℃의 배양기에서 24시간 배양한 후 106 CFU/ml 농도로 희석하여 유산균 배양액을 준비하였다.(2) Lactobacillus brevis ( Lactobacillus brevis ), Lactobacillus pertumum ( Lactobacillus fermentum ) and Lactobacillus plantarum ( Lactobacillus plantarum ) were inoculated into three types of lactic acid bacteria in an MRS liquid medium and incubated for 24 hours in an incubator at 37°C. Dilute to a concentration of 10 6 CFU/ml to prepare a culture medium for lactic acid bacteria.

(3) 상기 (1)단계의 멸균한 굼벵이 분말 30 g에 멸균수 70 mL를 첨가한 후 상기 (2)단계의 준비한 유산균 배양액 3 mL를 접종하여 37℃의 배양기에서 72시간 동안 배양하여 굼벵이 발효물을 제조하였다.(3) After adding 70 mL of sterile water to 30 g of the sterilized slug powder of the step (1), inoculate 3 mL of the lactic acid bacteria culture solution prepared in the step (2) and incubating for 72 hours in an incubator at 37° C. to ferment the slug. Water was prepared.

비교예Comparative example 3. 천마 및 굼벵이 혼합 3. Cheonma and slug mix 발효물Fermentation

상기 제조예 1의 방법으로 혼합 발효물을 제조하되, (1)단계의 천마(Gastrodia elata) 분말 및 굼벵이 분말을 1:2 중량비율로 혼합한 혼합물을 이용하여 혼합 발효물을 제조하였다.A mixed fermentation product was prepared by the method of Preparation Example 1, but the step ( Gastrodia) elata ) A mixed fermentation product was prepared using a mixture of powder and slug powder in a 1:2 weight ratio.

비교예Comparative example 4. 4. 참마yam 및 굼벵이 혼합 And slug mix 발효물Fermentation

상기 제조예 1의 방법으로 혼합 발효물을 제조하되, 천마(Gastrodia elata) 분말을 사용하지 않고 참마(Dioscorea japonica) 분말을 사용하여 혼합 발효물을 제조하였다.A mixed fermentation product was prepared by the method of Preparation Example 1, but Chunma ( Gastrodia elata ) without using yam ( Dioscorea japonica ) powder to prepare a mixed fermentation.

1. 실험방법1. Experimental method

(1) 실험동물, 사육조건 및 식이 조성(1) Experimental animals, breeding conditions and dietary composition

실험동물은 5주령의 스프레이그-다우레이(Sprague-Dawley)계 수컷 흰쥐를 ㈜대한 바이오링크(충북 음성, 한국)에서 구입하였다. 일주일간 시판 고형사료를 급여하면서 환경에 적응시킨 후 본 실험에 사용하였다. 본 실험은 체중이 동일하게 난괴법(randomized complete block design)으로 분류하여 스테인레스 개별케이지에서 사육실 온도(22±2℃)와 습도(50±5%) 및 명암주기(명주기: 07:00~19:00)가 조절되는 동물사육실에서 사육하였다. 각 군마다 6마리씩 나누고, 식이와 물은 8주간 자유섭취시켰다. 사육기간 중 식이 섭취량은 매일 일정한 시간에 측정하고, 체중은 이틀에 한 번씩 측정하였다. 동물사육은 사육 및 실험동물의 사용에 대한 국립 보건 연구소의 지침에 따랐다. Experimental animals were purchased from 5 weeks old Sprague-Dawley-based male rats from Daehan Biolink (Eumseong, Chungbuk). It was used in this experiment after adapting to the environment while feeding commercial solid feed for a week. In this experiment, the body weight was equally classified as a randomized complete block design, and the breeding room temperature (22±2℃), humidity (50±5%) and contrast cycle (light cycle: 07:00~19) in a stainless individual cage. :00) was kept in a controlled animal breeding room. Six were divided into each group, and diet and water were freely consumed for 8 weeks. During the breeding period, dietary intake was measured at regular times every day, and body weight was measured every other day. Animal breeding was in accordance with the National Institutes of Health guidelines for breeding and use of laboratory animals.

(2) 동물실험, 시료채취 및 분석시료 조제(2) Animal experiment, sample collection and analysis sample preparation

동물실험은 10일간 각 군별로 조제사료를 급여하면서 사육한 후, 실험 최종일 12시간 이상 절식시킨 후 에테르로 가볍게 마취시켜 해부하였다. 개복 후 복부 대동맥으로부터 채혈하여 혈액을 채취하고, 약 30분간 실온에 방치시킨 후 3,000 rpm에서 20분간 원심분리하여 혈청을 얻어 혈청 효소 분석에 제공하였다. 채혈 후 각 조직을 적출하여 차가운 0.9% 생리식염수로 세척하고 여과지로 물기를 제거한 후 무게를 측정하고 분석시료로 제공하였다.The animal experiments were bred for 10 days while feeding the formula for each group, and after fasting for 12 hours or more on the last day of the experiment, they were dissected by light anesthesia with ether. After opening, blood was collected from the abdominal aorta and blood was collected, left at room temperature for about 30 minutes, and then centrifuged at 3,000 rpm for 20 minutes to obtain serum to provide for serum enzyme analysis. After blood collection, each tissue was extracted, washed with cold 0.9% physiological saline, dried with filter paper, weighed, and provided as an analysis sample.

(3) 혈중 알코올 및 아세트알데히드 농도 측정(3) Measurement of blood alcohol and acetaldehyde levels

혈청에 함유된 알코올 및 아세트알데히드 농도는 시판용 알-바이오팜(R-Biopharm)사의 유브이-테스트킷(UV-Test kit)를 이용하여 측정하였다. 즉 혈중 알코올 농도는 NAD와 인산염 버퍼(pH 9.0) 3 ㎖ 혼합액에 혈청 0.1 ㎖를 첨가한 후 약 3분간 반응하여 340 nm에서 흡광도를 측정하고, 혼합액에 ADH(Alcohol Dehydrogenase) 0.05 ㎖를 첨가하여 20℃에서 10분간 배양시켜 흡광도 340 nm에서 생성된 NADH의 농도에 따른 흡광도의 변화를 관찰하였다. 이때 혈액 중의 알코올 농도(%)는 표준용액을 이용하여 계산하였다. The concentration of alcohol and acetaldehyde contained in the serum was measured using a commercial UV-Test kit (R-Biopharm). That is, the concentration of alcohol in blood was measured by adding 0.1 ml of serum to a mixture of 3 ml of NAD and phosphate buffer (pH 9.0), reacting for about 3 minutes, measuring absorbance at 340 nm, and adding 0.05 ml of ADH (Alcohol Dehydrogenase) to the mixture. Incubation for 10 minutes at ℃ observed the change in absorbance according to the concentration of NADH generated at 340 nm. At this time, the alcohol concentration (%) in the blood was calculated using a standard solution.

(4) (4) ADHADH (alcohol (alcohol dehydrogenasedehydrogenase ) 및 ) And ALDHALDH (Acetaldehyde (Acetaldehyde dehydrogenasedehydrogenase ) 효소 활성 측정) Enzyme activity measurement

간 조직 유래 ADH의 활성 측정은 Bergmeyer's의 방법을 약간 변형하여 흡광도 340nm에서 NADH의 생성속도를 측정하였다. 즉, 반응액 조성은 증류수 1.5 ㎖, 1M Tris-HCl buffer(pH 8.8) 0.75 ㎖, 20mM NAD+0.3 ㎖, 에탄올 0.3 ㎖, 효소원 0.15 ㎖를 큐벳에 넣고 총 3 ㎖이 되도록 조절하여 30℃에서 5분간 전배양시킨 후 5분 동안 340 nm에서 흡광도의 변화를 측정하였다. 간 조직 유래의 ALDH 활성 측정은 코이불라(Koivula) 등의 방법을 약간 변형하여 아세트알데히드에서 아세테이트를 생성하는 효소 NAD로부터 NADH를 생성하는 원리를 이용하였다. 즉 반응액의 조성은 증류수 2.2 ㎖, 1M의 트리스-염산 버퍼(Tris-HCl buffer, pH 8.0) 0.3 ㎖, 20mM NAD+0.1 ㎖, 1M의 아세트알데히드 0.1 ㎖, 3M의 염화칼륨(KCl) 0.1 ㎖, 0.33M의 2-메르캅토에탄올(2-mercaptoethanol) 0.1 ㎖, 효소원 0.1 ㎖를 총 3 ㎖이 되도록 조절하여 큐벳에 넣고 30℃에서 5분간 전배양한 후, 5분 동안 340 nm에서 흡광도의 변화를 측정하였다.To measure the activity of ADH derived from liver tissue, Bergmeyer's method was slightly modified to measure the rate of NADH production at an absorbance of 340 nm. That is, the composition of the reaction solution was 1.5 ml of distilled water, 0.75 ml of 1M Tris-HCl buffer (pH 8.8), 20 mM NAD+0.3 ml, ethanol 0.3 ml, and 0.15 ml of enzyme source in a cuvette and adjusted to a total of 3 ml at 30°C. After pre-incubation for 5 minutes, the change in absorbance at 340 nm for 5 minutes was measured. For the measurement of ALDH activity derived from liver tissue, the principle of generating NADH from the enzyme NAD producing acetate in acetaldehyde was modified by slightly modifying a method such as Koivula. That is, the composition of the reaction solution is 2.2 ml of distilled water, 0.3 ml of 1M Tris-HCl buffer (pH 8.0), 20mM NAD+0.1 ml, 1M acetaldehyde 0.1 ml, 3M potassium chloride (KCl) 0.1 ml, 0.1 ml of 0.33M 2-mercaptoethanol and 0.1 ml of enzyme source were adjusted to a total of 3 ml, placed in a cuvette, pre-incubated at 30° C. for 5 minutes, and then changed in absorbance at 340 nm for 5 minutes. Was measured.

(5) 통계처리(5) Statistics processing

실험으로부터 얻어진 결과치는 일원배치분산분석(one-way ANOVA) 검정에 의한 평균치와 표준오차(mean±SE)로 표시하였으며, 각 실험군간의 유의성 검증은 던컨의 다중검정(Duncan's multiple range test)으로 하였다The results obtained from the experiments were expressed as mean and standard error (mean±SE) by one-way ANOVA test, and the significance test between each experimental group was done by Duncan's multiple range test.

실시예Example 1. 혈중 알코올 및 아세트알데히드 농도 변화 1. Changes in blood alcohol and acetaldehyde levels

본 발명에서는 혼합 발효물의 숙취해소 및 알코올 대사에 미치는 영향에 대하여 검토하였는데, 혈중 알코올 농도는 무처리군의 혈중에서는 검출되지 않았으며 알코올을 투여한 모든 실험군에서 알코올이 검출되었다. 하지만 알코올군에 비해 시료투여로 유의적으로 알코올 농도가 감소하였고, 그 중 제조예 1 투여군이 가장 많이 감소하였다. 혈중 아세트알데히드 농도는 무처리군에 비해 알코올 실험군 모든 군에서 유의적으로 증가하는 수치를 보였다.In the present invention, the effect of the mixed fermentation on hangover cancellation and alcohol metabolism was examined, and the blood alcohol concentration was not detected in the blood of the untreated group and alcohol was detected in all the experimental groups to which the alcohol was administered. However, compared to the alcohol group, the alcohol concentration was significantly decreased by the administration of the sample, and among them, the administration group of Production Example 1 decreased the most. The concentration of acetaldehyde in the blood increased significantly in all groups of the alcohol test group compared to the untreated group.

알코올 급여한 쥐에 발효물 투여에 따른 혈중 알코올 및 아세트알데히드 농도 변화Changes in blood alcohol and acetaldehyde levels according to the administration of fermentation products to alcohol-fed rats 구분division 혈중 알코올(%)Blood alcohol (%) 혈중 아세트알데히드(mg/L)Blood acetaldehyde (mg/L) 무처리No treatment 0.000±0.00a 0.000±0.00 a 2.32±0.12a 2.32±0.12 a 알코올 급여Alcohol benefits 0.051±0.00e 0.051±0.00 e 3.68±0.24b 3.68±0.24 b 알코올+제조예 1Alcohol + Production Example 1 0.030±0.00b 0.030±0.00 b 5.93±0.60e 5.93±0.60 e 알코올+비교예 1Alcohol + Comparative Example 1 0.041±0.00d 0.041±0.00 d 4.82±0.42c 4.82±0.42 c 알코올+비교예 2Alcohol + Comparative Example 2 0.038±0.00c 0.038±0.00 c 4.96±0.22c 4.96±0.22 c 알코올+비교예 3Alcohol + Comparative Example 3 0.036±0.00c 0.036±0.00 c 5.02±0.38d 5.02±0.38 d 알코올+비교예 4Alcohol + Comparative Example 4 0.035±0.00c 0.035±0.00 c 5.18±0.40d 5.18±0.40 d

실시예Example 2. 간 조직 2. Liver tissue ADHADH And ALDHALDH 활성 변화 Active change

본 동물 실험에서 간 조직 중의 ADH 활성은 무처리군에 비해 알코올군과 시료 투여군에서 증가 경향을 보였으며, 그 중 제조예 1 시료 투여군이 가장 활성이 증가하였다. ALDH 활성은 정상군과 알코올 대조군 사이에서는 차이가 없었으나, 시료 투여로 유의적으로 모두 활성이 증가된 것으로 나타났다. 이러한 결과는 혼합 발효물이 알코올 투여 흰쥐의 혈중 알코올 및 아세트알데히드 농도를 효과적으로 감소시키는 것은 간 조직 중의 알코올 대사 효소인 ADH 및 ALDH 활성을 촉진시키기 때문인 것으로 나타나, 앞선 결과에서의 높은 아세트알데히드 농도는 ALDH에 의해 대사과정을 거쳐 분해될 것으로 사료된다. In this animal experiment, the ADH activity in liver tissue showed a tendency to increase in the alcohol group and the sample administration group compared to the untreated group, of which the sample administration group in Production Example 1 showed the most activity increase. ALDH activity was not different between the normal group and the alcohol control group, but it was shown that the activity was significantly increased by the administration of the sample. These results show that the mixed fermentation product effectively reduces the concentration of alcohol and acetaldehyde in alcohol-treated rats because it promotes the activity of the alcohol metabolizing enzymes ADH and ALDH in liver tissue, and the high acetaldehyde concentration in the previous results is ALDH. It is thought to be degraded by metabolism.

알코올 급여한 쥐에 발효물 투여에 따른 간조직의 ADH 및 ALDH 활성 변화Changes in ADH and ALDH activity of liver tissue following administration of fermentation product to alcohol-fed rats 구분division ADH(nmol NADH/㎎ protein/min)ADH (nmol NADH/mg protein/min) ALDH(nmol NADH/㎎ protein/min)ALDH (nmol NADH/mg protein/min) 무처리No treatment 6.25±0.1a 6.25±0.1 a 7.34±0.2a 7.34±0.2 a 알코올 급여Alcohol benefits 6.38±0.5a 6.38±0.5 a 7.60±0.4a 7.60±0.4 a 알코올+제조예 1Alcohol + Production Example 1 10.30±0.6d 10.30±0.6 d 11.03±0.6e 11.03±0.6 e 알코올+비교예 1Alcohol + Comparative Example 1 7.86±0.1b 7.86±0.1 b 8.82±0.2b 8.82±0.2 b 알코올+비교예 2Alcohol + Comparative Example 2 7.94±0.6b 7.94±0.6 b 9.14±0.3b 9.14±0.3 b 알코올+비교예 3Alcohol + Comparative Example 3 8.82±0.8c 8.82±0.8 c 9.92±0.7c 9.92±0.7 c 알코올+비교예 4Alcohol + Comparative Example 4 9.16±0.9c 9.16±0.9 c 10.68±0.4d 10.68±0.4 d

실시예Example 3. 혈중 아스파라긴산 3. Blood aspartic acid 아미노전이효소Aminotransferase (( ASTAST ), 알라닌 ), Alanine 아미노전이효소Aminotransferase (ALT), (ALT), 감마글루타밀트란스펩티다제Gamma-glutamyltranspeptidase (γ-(γ- GTPGTP ), 알칼리성 인산분해효소(ALP) 및 젖산탈수소효소(), alkaline phosphatase (ALP) and lactate dehydrogenase ( LDHLDH ) 활성 변화) Active change

간 손상의 임상적 지표로 사용되고 있는 아스파라긴산 아미노전이효소(Aspartate aminotransferase, AST), 알라닌 아미노전이효소(Alanine aminotransferase, ALT), 감마글루타밀트란스펩티다제(γ-GTP), 알칼리성 인산분해효소(ALP) 및 젖산탈수소효소(LDH) 활성 측정을 통하여 간 기능 효능을 검증한 결과를 표 3에 나타내었다. 혈청 아스파라긴산 아미노전이효소(AST) 및 알라닌 아미노전이효소(ALT)의 활성은 간 손상으로 인한 간세포의 괴사와 간 조직의 파괴가 진행됨에 따라 아미노기 전이효소가 혈중으로 유리되어 높은 활성을 나타내는 것으로 간 손상 지표의 중요한 단서가 된다. Aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), gamma glutamyltranspeptidase (γ-GTP), alkaline phosphatase (ALP), used as clinical indicators of liver damage ) And Lactate Dehydrogenase (LDH) activity measurement, the results of verifying liver function efficacy are shown in Table 3. The activity of serum aspartic acid aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) is high because the aminotransferase is released into the blood as the necrosis of hepatocytes and the destruction of liver tissue progresses due to liver damage. This is an important clue to the indicator.

본 실험에서 아스파라긴산 아미노전이효소(AST), 알라닌 아미노전이효소(ALT), 감마글루타밀트란스펩티다제(γ-GTP)의 활성은 알코올 투여군에서 증가하였으나, 알코올 투여군에서의 아스파라긴산 아미노전이효소(AST), 알라닌 아미노전이효소(ALT), 감마글루타밀트란스펩티다제(γ-GTP)의 활성 증가는 시료 처리에 의해 감소 수치를 보였고, 그 중 제조예 1 투여군에서 현저히 감소하는 것으로 나타났다.In this experiment, the activity of aspartic acid aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), and gamma glutamyltranspeptidase (γ-GTP) was increased in the alcohol-administered group, but aspartic acid aminotransferase (AST) in the alcohol-administered group ), increased activity of alanine aminotransferase (ALT) and gamma glutamyltranspeptidase (γ-GTP) showed a decreased value by sample treatment, and among them, it was found to be significantly decreased in Preparation 1 administration group.

간 기능적 임상지표로 사용되고 있는 혈중 젖산탈수소효소(LDH) 및 알칼리성 인산분해효소(ALP) 활성도 알코올 섭취에 의해 증가됨으로 알코올성 간 독성 유발과 깊은 관련성을 가진 것으로 보고되고 있다. 본 실험에서도 젖산탈수소효소(LDH) 활성은 알코올 투여군에서 증가 경향을 보였으나, 이러한 알코올에 의한 증가는 시료 투여로 유의적으로 감소하였고, 그 중 제조에 1의 시료 투여 시 가장 낮은 수치를 보였다. 따라서 제조에 1의 혼합 발효물은 알코올성 간 질환을 개선할 수 있는 건강기능식품 소재로 활용할 가능성이 있는 것으로 판단된다.It has been reported that lactic acid dehydrogenase (LDH) and alkaline phosphatase (ALP) activities in the blood, which are used as clinical functional indicators of the liver, have been closely related to the induction of alcoholic liver toxicity due to increased alcohol consumption. In this experiment, lactic acid dehydrogenase (LDH) activity also showed a tendency to increase in the alcohol-administered group, but the increase by the alcohol was significantly decreased by sample administration, of which the lowest value was observed when the sample was administered to the preparation. Therefore, it is judged that the mixed fermentation product of 1 may be used as a health functional food material that can improve alcoholic liver disease.

알코올 급여한 쥐에 발효물 투여에 따른 혈중 AST, ALT, γ-GTP, ALP 및 LDH 활성 변화Changes in blood AST, ALT, γ-GTP, ALP and LDH activity according to the administration of fermentation product to alcohol-fed rats 구분division AST(IU/L)AST(IU/L) ALT(IU/L)ALT (IU/L) γ-GTP(IU/L)γ-GTP (IU/L) ALP(IU/L)ALP (IU/L) LDH(IU/L)LDH (IU/L) 무처리No treatment 122.2±7.8122.2±7.8 26.2±2.226.2±2.2 1.32±0.21.32±0.2 700.2±52.2700.2±52.2 1425.81425.8 알코올 급여Alcohol benefits 146.5±12.5146.5±12.5 43.1±3.243.1±3.2 1.55±0.21.55±0.2 902.8±32.2902.8±32.2 2255.62255.6 알코올+제조예 1Alcohol + Production Example 1 69.2±5.669.2±5.6 22.0±1.022.0±1.0 1.12±0.21.12±0.2 752.3±20.4752.3±20.4 941.5941.5 알코올+비교예 1Alcohol + Comparative Example 1 100.6±14.2100.6±14.2 34.5±0.934.5±0.9 1.43±0.11.43±0.1 860.5±14.8860.5±14.8 1721.61721.6 알코올+비교예 2Alcohol + Comparative Example 2 95.6±18.395.6±18.3 33.2±1.433.2±1.4 1.40±0.21.40±0.2 846.8±37.2846.8±37.2 1654.21654.2 알코올+비교예 3Alcohol + Comparative Example 3 90.1±10.190.1±10.1 29.8±1.629.8±1.6 1.33±0.11.33±0.1 812.6±42.1812.6±42.1 1358.21358.2 알코올+비교예 4Alcohol + Comparative Example 4 82.5±6.882.5±6.8 27.0±1.827.0±1.8 1.20±0.21.20±0.2 795.2±21.4795.2±21.4 1225.81225.8

이상에서 본 발명의 제조예 및 실시예가 제시되어 있지만 본 발명이 상기에 한정되는 것은 아니며 본 발명의 기술 사상 범위 내에서 다양하게 변형 가능하고 이러한 변형은 하기한 본 발명의 청구범위에 속한다 할 것이다.Although the production examples and examples of the present invention are presented above, the present invention is not limited to the above, and various modifications are possible within the technical spirit of the present invention, and such modifications will belong to the claims of the present invention described below.

Claims (6)

삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete (1) 천마(Gastrodia elata) 분말 및 굼벵이 분말을 1:1 중량비율로 혼합한 혼합물을 121℃ 및 1.2기압에서 15분간 멸균하여 준비하는 단계;
(2) 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) 및 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 3종의 유산균을 배지에 접종하여 37℃의 배양기에서 24시간 배양한 후 106 CFU/ml 농도로 희석하여 유산균 배양액을 준비하는 단계; 및
(3) 상기 (1)단계의 멸균하여 준비한 혼합물 30 g에 멸균수 70 mL를 첨가한 후 상기 (2)단계의 준비한 유산균 배양액 3 mL를 접종하여 37℃의 배양기에서 72시간 동안 배양하는 단계를 포함하는 간기능 개선용 천마 및 굼벵이 혼합 발효물의 제조방법.
(1) preparing a mixture of cheonma ( Gastrodia elata ) powder and slug powder in a 1:1 weight ratio by sterilizing at 121°C and 1.2 atmospheres for 15 minutes;
(2) Lactobacillus brevis ( Lactobacillus brevis ), Lactobacillus performance ( Lactobacillus fermentum ), and Lactobacillus plantarum ( Lactobacillus plantarum ) were inoculated into three types of lactic acid bacteria in a medium and cultured for 24 hours in a 37° C. incubator 10 6 Preparing a lactic acid bacteria culture solution by diluting to a concentration of CFU/ml; And
(3) After adding 70 mL of sterile water to 30 g of the sterilized mixture prepared in the step (1), inoculating 3 mL of the lactic acid bacteria culture solution prepared in the step (2) and incubating for 72 hours in an incubator at 37°C. A method of manufacturing a fermented mixture of cheonma and slug for improving liver function.
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