KR102056916B1 - Novel Lactobacillus bulgaricus UBC-U27 with anti-skin aging or anti-wrinkle activity, and compositions using the same - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 피부 노화 방지 또는 주름 개선 활성이 있는 신규한 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus) UBC-U27 및 이를 이용한 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus) UBC-U27(수탁번호 KCTC 13554BP) 균주, 그리고 상기 균주 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지 또는 주름 개선용, 특히 피부의 광노화 또는 자외선에 의한 주름 개선용 화장료와 식품용, 정장용, 그리고 생균제 조성물에 대한 것이다.The present invention relates to a novel Lactobacillus bulgaricus UBC-U27 and a composition using the same, which have anti-aging or anti-wrinkle activity, and more particularly, Lactobacillus bulgaricus UBC-U27 (trusted). No. KCTC 13554BP) strains, and for the anti-aging or wrinkle improvement of the skin comprising the strain or its culture as an active ingredient, in particular for cosmetics and food, formal, and probiotic composition for the photoaging or skin wrinkle improvement by UV light will be.
인간의 피부는 시간이 지남에 따라 생체 구성 단백질의 생합성 및 호르몬 분비가 감소하고, 면역 세포의 기능과 활성이 줄어들어 생기는 내인성 노화(intrinsic aging)와 외부 자외선에 의한 광노화(photo-aging), 그리고 오염된 공기와 약물로 인해 주름이 증가되고, 피부가 얇아지며, 탄력이 감소될 뿐만 아니라, 기미, 주근깨 및 검버섯이 증가하게 된다.Human skin over time reduces endogenous biosynthesis and hormone secretion, decreases the function and activity of immune cells, intrinsic aging, photo-aging, and contamination by external ultraviolet light. Air and medications increase wrinkles, thin skin, reduce elasticity, and increase blemishes, freckles, and blotch.
자외선은 태양광 스펙트럼에서 가시광선보다 짧은 파장대인 200~400nm 영역의 한 부분이다. 자외선은 파장의 길이에 따라 3가지로 분류되는데, 장파장의 UV-A(320~400nm), 중파장의 UV-B(280~320nm), 그리고 단파장의 UV-C(200~280nm)로 나누어진다. 그 중 특히 UV-B는 염증성 피부질환, 광노화 그리고 암을 유발할 수 있는 가장 중요한 위험 요소로 작용한다. UV-B에 급성이나 만성적으로 노출되었을 경우, 피부 진피 내 구성 성분인 콜라겐, 엘라스틴, 히알루론산 등이 파괴되어 피부의 탄력이 소실되고, 그 결과로 굵은 주름이 생성된다(Journal of the Korea Academia-Industrial cooperation Society Vol. 17, No. 3 pp. 611-621, 2016).Ultraviolet light is part of the 200-400nm region in the solar spectrum that is shorter than visible light. Ultraviolet rays are classified into three types according to the length of the wavelength, which is classified into long-wave UV-A (320-400 nm), medium-wave UV-B (280-320 nm), and short-wave UV-C (200-280 nm). Among them, UV-B is the most important risk factor for inflammatory skin disease, photoaging and cancer. In case of acute or chronic exposure to UV-B, collagen, elastin and hyaluronic acid, which are components in skin dermis, are destroyed and skin elasticity is lost, resulting in coarse wrinkles (Journal of the Korea Academia- Industrial cooperation Society Vol. 17, No. 3 pp. 611-621, 2016).
사람의 피부 중 중요 구성 성분은 콜라겐이며 특히 type I 콜라겐은 80%를 차지한다. MMP-1(matrix metalloproteinase-1)과 MMP-9(matrix metalloproteinase-9)은 콜라겐 분해효소이며, 이 중 MMP-1은 type I 콜라겐의 분해효소로서, 광노화된 피부에서는 MMP-1의 활성이 증가되며, 이는 type I 콜라겐의 분해를 유도하여 피부에 깊은 주름을 가져오게 되는 것이다. MMP-9(matrix metalloproteinase-9)은 세포의 생존, 면역 반응 등에 광범위하게 작용하는 단백질 분해 효소이며, 작용하는 세포의 종류와 작용시점 등에 따라 서로 다른 여러 가지 기능을 가지게 된다. MMP-9의 활성을 유도하는 자극，MMP-9의 비정상적 활동에 의해 유발되는 염증 및 질환은 매우 광범위하다. MMP-9는 외부 스트레스(광자극, ROS, 염증반응)에 의해 발현이 촉진되어 주변의 T lymphocyte 이동 촉진에 따른 염증 반응을 야기한다.An important component of human skin is collagen, with type I collagen accounting for 80%. Matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) are collagen degrading enzymes, of which MMP-1 is a type I collagen degrading enzyme, which increases MMP-1 activity in photoaged skin. This induces the breakdown of type I collagen, resulting in deep wrinkles on the skin. MMP-9 (matrix metalloproteinase-9) is a proteolytic enzyme that works extensively on cell survival, immune response, etc., and has various functions depending on the type and time of action of the cell. The stimuli that induce the activity of MMP-9, inflammation and disease caused by abnormal activity of MMP-9 are very extensive. MMP-9 is stimulated by external stress (photostimulation, ROS, inflammatory response), causing an inflammatory response due to the promotion of peripheral T lymphocyte migration.
한편 외부 자극 없이도 인간은 나이가 들면서 생체 면역체계 및 생리활성 체계가 노화되어 콜라겐이 분해되는 등 피부 구성요소를 원활히 회복하지 못하여 피부의 탄력이 감소되고 건조 현상이 일어나 주름 등의 피부 노화가 일어난다. 따라서 피부의 자연노화 및 광노화의 예방 및 개선을 위해 피부 세포 보호 효과는 물론이고, MMP-1과 MMP-9 두 가지 모두의 발현을 억제시킬 수 있는 물질의 개발이 필요하다.On the other hand, even without external stimulation, as the human body ages, the body's immune system and physiological activity system are aged and collagen is decomposed, and thus skin components are not recovered smoothly. Therefore, in order to prevent and improve the natural aging and photo aging of the skin, it is necessary to develop a substance capable of inhibiting the expression of both MMP-1 and MMP-9 as well as skin cell protection effects.
유산균은 GRAS(generally recognized as safe)균으로, 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 및 개선 목적으로 장기간 섭취 및 도포 시에도 안심하고 사용할 수 있다. 또한 단백질을 세포 밖으로 분비하는 분비 기작을 가지고 있어, 유산균을 이용한 백신개발, 효소, 항균제 등의 운반체 개발 등의 연구가 진행되고 있으며, 전세계적으로 생명공학기법을 이용하여 새로운 기능성을 가지는 유산균을 개발하려는 연구가 활발하게 시도되고 있다.Lactobacillus is a GRAS (generally recognized as safe) bacterium, which has little toxicity and side effects, so that it can be used safely for long-term ingestion and application for prevention and improvement purposes. In addition, it has a secretion mechanism of secreting proteins out of cells, and researches on the development of vaccines using lactic acid bacteria, carriers of enzymes, antibacterial agents, etc., and the development of lactic acid bacteria with new functionality using biotechnology techniques around the world. The research to be done is actively attempted.
최근에는 피부미용에 대한 관심의 증가로 유산균을 이용한 피부미용에 관련된 기술 및 제품의 개발이 활발하게 이루어지고 있으나, 광노화와 직접적 관련이 있는 MMP-1와 MMP-9 두 가지 모두의 발현 억제활성을 통해 피부노화 방지 또는 피부주름 개선 효과를 가지는 유산균에 대해서는 제시하지 못하고 있다.Recently, due to the increasing interest in skin care, the development of technologies and products related to skin care using lactic acid bacteria has been actively performed, but the expression inhibitory activity of both MMP-1 and MMP-9 which is directly related to photoaging Through lactic acid bacteria that have the effect of preventing skin aging or improving wrinkles has not been presented.
이에 본 발명자들은 자외선에 대한 피부 세포 보호 효과와 주름 형성에 관여하는 MMP 발현 억제 활성이 뛰어난 신규한 락토바실러스 불가리쿠스 (Lactobacillus bulgaricus)를 분리하여 본 발명을 완성하였다.Therefore, the present inventors have completed the present invention by separating a novel Lactobacillus bulgaricus excellent in the effect of protecting skin cells against UV rays and inhibiting the expression of MMP involved in wrinkle formation.
따라서 본 발명의 목적은 신규한 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus) UBC-U27(수탁번호 KCTC 13554BP) 균주를 제공하는 것이다.Therefore, an object of the present invention is to provide a novel Lactobacillus bulgaricus UBC-U27 (Accession No. KCTC 13554BP) strain.
본 발명의 다른 목적은 신규한 락토바실러스 불가리쿠스 균주 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a novel anti-aging or wrinkle cosmetic composition comprising Lactobacillus vulgaris strain or its culture as an active ingredient.
본 발명의 또 다른 목적은 신규한 락토바실러스 불가리쿠스 균주 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 피부의 광노화 방지 또는 자외선에 의한 주름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.Still another object of the present invention is to provide a cosmetic composition for preventing photoaging of skin or improving wrinkles by ultraviolet rays, which comprises a novel Lactobacillus vulgaris strain or a culture thereof as an active ingredient.
본 발명의 또 다른 목적은 신규한 락토바실러스 불가리쿠스 균주 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 식품용 조성물을 제공하는 것이다.Still another object of the present invention is to provide a composition for preventing skin aging or improving wrinkles, comprising a novel Lactobacillus vulgaris strain or a culture thereof as an active ingredient.
본 발명의 또 다른 목적은 신규한 락토바실러스 불가리쿠스 균주 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 정장용 조성물을 제공하는 것이다.Still another object of the present invention is to provide a formal composition comprising a novel Lactobacillus vulgaris strain or a culture thereof as an active ingredient.
본 발명의 또 다른 목적은 신규한 락토바실러스 불가리쿠스 균주 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 생균제 조성물을 제공하는 것이다.Still another object of the present invention is to provide a probiotic composition comprising the novel Lactobacillus vulgaris strain or its culture as an active ingredient.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 신규한 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus) UBC-U27(수탁번호 KCTC 13554BP) 균주를 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a novel Lactobacillus bulgaricus UBC-U27 (Accession No. KCTC 13554BP) strain.
본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 신규한 락토바실러스 불가리쿠스 균주 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In order to achieve another object of the present invention, the present invention provides a cosmetic composition for preventing skin aging or improving wrinkles comprising a novel Lactobacillus vulgaris strain or a culture thereof as an active ingredient.
본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여 신규한 락토바실러스 불가리쿠스 균주 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 피부의 광노화 방지 또는 자외선에 의한 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다. In order to achieve another object of the present invention provides a cosmetic composition for preventing photoaging of the skin or wrinkle improvement by ultraviolet rays comprising a novel Lactobacillus Bulgari strain or a culture thereof as an active ingredient.
본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 신규한 락토바실러스 불가리쿠스 균주 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 식품용 조성물을 제공한다.In order to achieve another object of the present invention, the present invention provides a food composition for preventing skin aging or improving wrinkles comprising a novel Lactobacillus vulgaris strain or a culture thereof as an active ingredient.
본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 신규한 락토바실러스 불가리쿠스 균주 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 정장용 조성물을 제공한다.In order to achieve another object of the present invention, the present invention provides a formal composition comprising a novel Lactobacillus vulgaris strain or a culture thereof as an active ingredient.
본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 신규한 락토바실러스 불가리쿠스 균주 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 생균제 조성물을 제공한다.In order to achieve another object of the present invention, the present invention provides a probiotic composition comprising a novel Lactobacillus vulgaris strain or a culture thereof as an active ingredient.
이하 본 발명을 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명은 피부 노화 방지 또는 피부 주름 개선 활성을 갖는 신규한 락토바실러스 불가리쿠스(The present invention is a novel Lactobacillus vulgaris having anti-aging or anti-wrinkle activity. Lactobacillus bulgaricusLactobacillus bulgaricus ) UBC-U27(수탁번호 KCTC 13554BP) 균주를 제공한다.) UBC-U27 (Accession No. KCTC 13554BP) strain is provided.
상기 락토바실러스 불가리쿠스는 피부 노화 방지 또는 주름 개선 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 균주로서, 특히 주름 개선 활성은 매트릭스 메탈로프로테아제-1(MMP-1) 또는 매트릭스 메탈로프로테아제-9(MMP-9)의 발현 또는 활성 억제에 의한 것을 특징으로 한다.The Lactobacillus vulgaris is a strain characterized by having anti-aging or anti-wrinkle activity, in particular the anti-wrinkle activity is matrix metalloprotease-1 (MMP-1) or matrix metalloprotease-9 (MMP-9) It is characterized by the suppression of expression or activity.
본 발명자들은 액체 배지 및 한천 평판 배지 배양을 통하여 브로콜리로부터 균주를 분리해 내고, UV-B에 대한 피부 세포 보호 및 MMP 발현 억제 활성을 나타내는 균주를 선별하였다. 선별된 균주는 16s rRNA 염기서열을 이용하여 분자생물학적으로 분석한 결과, 신규한 락토바실러스 불가리쿠스 균주인 것으로 확인하고, UBC-U27으로 명명하였다. 본 균주는 한국생명공학연구원에 2018년 6월 21일 기탁되었다(수탁번호 KCTC13554BP).We isolated strains from broccoli by culturing liquid medium and agar plate medium, and selected strains that exhibit skin cell protection against UV-B and inhibit MMP expression. The selected strain was identified as a novel Lactobacillus vulgaris strain as a result of molecular biological analysis using the 16s rRNA sequence, and was named UBC-U27. This strain was deposited with the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology on June 21, 2018 (Accession No. KCTC13554BP).
본 발명에 따른 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus)의 정식 학명은 락토바실러스 델브루키 불가리쿠스 아종(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)이다. 락토바실러스 델브루키 종에는 불가리쿠스 아종 외에, 델브루키 아종(L. delbrueckii subsp. delbruekii)와 락티스 아종(L.delbruekii subsp. lactis)이 있는 것으로 알려져 있다. The formal scientific name of Lactobacillus bulgaricus according to the present invention is Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus . In addition to the Bulgari subspecies, Lactobacillus delbruchy species are known to include L. delbrueckii subsp. Delbruekii and L. delbruekii subsp.lactis .
본 발명의 실시예에 따르면, 본 발명의 신규 균주는 자외선으로 유발되는 인간 피부 세포의 사멸을 억제하는 세포 보호 활성이 뛰어나다. 인간 피부 각질 형성 세포(keratinocyte)인 HaCaT 세포에 배양된 신규 균주를 처리하고 1시간 뒤 UV-B를 조사하고 48시간 동안 추가 배양한 결과, HaCaT 세포생존률은 UV-B만 조사한 세포군과 비교하여 2배 가까이 증가하였으며, 이러한 활성은 처리한 신규 균주의 농도에 의존적이었다.According to an embodiment of the present invention, the novel strain of the present invention is excellent in cell protective activity that inhibits the death of human skin cells induced by ultraviolet light. After treatment with a new strain cultured in HaCaT cells, which are human skin keratinocytes, and after 1 hour of irradiation with UV-B and further incubation for 48 hours, HaCaT cell survival rate was 2 compared with that of UV-B only cells. It increased nearly fold and this activity was dependent on the concentration of new strains treated.
본 발명의 또 다른 실시예에 따르면, 본 발명의 신규 균주는 자외선으로 유발되는 MMP의 발현을 억제하는데 강한 활성을 보인다. MMP는 피부 각질 형성 세포에서 생성되고 세포 외부로 분비되어 세포외 기질(extracellular matrix)의 주요 골격을 형성하는 콜라겐과 젤라틴 등을 분해하는 효소이다. 자외선에 의해 생성이 촉진된 MMP는 피부 세포외 기질의 콜라겐을 분해하여 피부 탄력을 감소시키고 결과적으로 피부에 주름이 생기게 한다. HaCaT 세포에 신규 균주를 처리하고 1시간 뒤UV-B를 조사하고 48시간 동안 추가 배양한 뒤, 배양 배지를 수득하여 MMP 단백질 수준을 측정한 결과, 신규 균주를 처리한 실험군에서는 UV-B로 유발되는 MMP-1 및 MMP-9의 발현 수준을 절반 이하로 감소시키는 것으로 나타났다. 신규 균주의 MMP 발현 억제 활성 역시 농도 의존적이었다. According to another embodiment of the present invention, the novel strain of the present invention has a strong activity in inhibiting the expression of MMP caused by ultraviolet light. MMP is an enzyme that breaks down collagen and gelatin, which are produced in skin keratinocytes and secreted outside the cell to form the main skeleton of the extracellular matrix. Promoted by UV light, MMPs break down collagen in the extracellular matrix of the skin, reducing skin elasticity and causing wrinkles on the skin. After 1 hour of treatment with new strains of HaCaT cells irradiated with UV-B and further incubation for 48 hours, the culture medium was obtained to measure the level of MMP protein, induced by UV-B in the experimental group treated with the new strain Has been shown to reduce the expression levels of MMP-1 and MMP-9 to less than half. MMP expression inhibitory activity of the new strain was also concentration dependent.
본 발명에 따른 신규 균주의 피부 세포에 대한 활성은 기존에 알려진 다른 유산균 균주들과 비교해서도 탁월한 것으로 확인되었다. The activity on the skin cells of the novel strain according to the present invention was confirmed to be excellent compared to other known lactic acid bacteria strains.
본 발명의 실시예에서는 신규 균주의 활성을 기존에 알려진 9종의 타유산균과 비교 분석하였다. 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis), 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus)) 등의 타유산균 균주들은 UV-B를 조사한 HaCaT 세포생존률에 큰 영향을 미치지 못하였으나, 같은 처리 농도(처리한 유산균 균주 밀도)에서 본 발명에 따른 신규 균주는 세포생존률을 2배 가까이 증가시키는 것으로 나타났다. In the embodiment of the present invention, the activity of the new strain was analyzed in comparison with nine known lactic acid bacteria. Lactobacillus reuteri , Lactobacillus gasseri , Lactobacillus bulgaricus , Lactobacillus rhamnosus , Lactobacillus plantarum Lactobacillus plant , Lactobacillus plant Lactobacillus paracasei , Lactobacillus acidophilus , Bifidobacterium lactis , Streptococcus thermophilus , and other strains of lactic acid bacteria such as HaCaT cells Although it did not significantly affect the survival rate, the new strain according to the present invention was shown to increase the cell survival rate by nearly two times at the same treatment concentration (treated lactic acid bacteria strain density).
또한 UV-B로 유발되는 MMP의 발현 억제 활성에 있어서도, 타유산균 균주들은 균주들 상호 간에도 차이를 나타내며, 어느 정도 MMP-1, MMP-9 발현량을 감소시키는 효과가 있었으나, 본 발명에 따른 신규 균주는 UV-B에 의한 MMP 발현량을 절반 이하 수준으로 감소시켰으며, 이는 비교 대상 타유산균 균주들보다 가장 강력한 것이었다.In addition, in the activity of inhibiting the expression of MMP induced by UV-B, the other strains of the lactic acid bacteria exhibited a difference between the strains, and had an effect of reducing the amount of MMP-1 and MMP-9 expression to some extent, but according to the present invention. The strain reduced the amount of MMP expression by UV-B to less than half the level, which was the most potent than the comparative lactic acid bacteria strains.
요컨대 본 발명에 따른 신규 균주는 타유산균 균주와 비교하여도 탁월한 피부 보호 및 MMP 발현 억제 활성을 가지고 있으며, 이를 이용하여 다른 성분을 추가하지 않더라도 본 발명에 따른 균주를 단독 유효성분으로 이용하여 자외선 등에 의한 피부 손상과 광노화를 지연시키고 피부 주름을 개선시키는 효과를 기대할 수 있다. 특히 유산균은 일반적으로 GRAS(generally recognized as safe) 균주로 받아들여지고 있는 독성 및 부작용이 거의 없는 미생물이므로, 예방 또는 개선의 목적으로 장기간 섭취 또는 도포하는 화장료 또는 기능성 식품으로의 활용이 용이하다.In short, the novel strain according to the present invention has excellent skin protection and MMP expression inhibitory activity even when compared to other lactic acid bacteria strains. It can be expected to delay skin damage and photoaging caused by the skin and to improve skin wrinkles. In particular, lactic acid bacteria are generally microorganisms having little toxicity and side effects that are generally accepted as GRAS (generally recognized as safe) strains, and thus are easily utilized as cosmetics or functional foods to be consumed or applied for a long time for the purpose of prevention or improvement.
이에 따라 본 발명은 신규한 락토바실러스 불가리쿠스(Accordingly, the present invention provides a novel Lactobacillus vulgaris ( Lactobacillus bulgaricusLactobacillus bulgaricus ) UBC-U27(수탁번호 KCTC 13554BP) 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.) Provides a cosmetic composition for preventing skin aging or improving wrinkles comprising UBC-U27 (Accession No. KCTC 13554BP) or a culture thereof as an active ingredient.
본 발명에 따른 ‘락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27 균주’또는 ‘락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27 균체’는 배양 배지(medium)로부터 분리 또는 정제된 생균 그 자체 뿐 아니라, 당업자에게 알려진 유산균의 임의의 가공형태(특히 생균의 가공 형태)를 포함하는 것으로, 예를 들어 건조물, 동결물 등을 포함하며 그 형태에 제한되지 않는다. 또한 배양 배지에서 상기 균주와 화합하기 쉬운 하나 이상의 화합물과 혼합되거나, 혼합되지 않은 형태로도 이용할 수 있다. The Lactobacillus vulgaris UBC-U27 strain or the Lactobacillus vulgaris UBC-U27 strain according to the present invention is not only the live bacteria isolated or purified from the culture medium, but also any processing of lactic acid bacteria known to those skilled in the art. Forms (particularly processed forms of live bacteria) include, but are not limited to, for example, dried products, frozen products, and the like. It may also be used in a mixed or unmixed form with one or more compounds that are easy to combine with the strain in the culture medium.
또한 본 발명에 따른 균주는 살아있는 형태, 준-활성(semi-active) 형태, 불활성화된 형태, 또는 사멸된 형태로도 이용될 수 있으나, 살아있는 형태인 것이 바람직하다. 본 발명에 따른 균주를 사멸된 형태로 이용할 때에는 당업계에 알려진 유산균 사균화 방법에 의한 것이라면 제한 없이 선택하여 이용할 수 있다.In addition, the strain according to the present invention may be used in a live form, a semi-active form, an inactivated form, or in a dead form, but is preferably a live form. When the strain according to the present invention is used in a killed form, any of the strains according to the lactic acid bacteria killing method known in the art may be selected and used without limitation.
또한 본 발명에서 ‘배양’이란, 미생물을 적절하게 인공적으로 조절한 환경에서 생육시키기 위하여 수행하는 모든 행위를 의미하며, 본 발명에서는 ‘발효’를 포함하는 개념으로서, ‘배양물’은 ‘발효물’을 포함하는 의미이고, 배지에서 배양한 배양액 자체(즉, 균을 포함하고 있는 배양액 자체), 또는 상기 배양액에 열처리 등의 가공을 가한 결과물 등 배양액 자체로부터 파생되는 가공물을 포함한다. In addition, in the present invention, 'culture' means all the activities performed to grow in an environment in which the microorganism is appropriately artificially controlled, and in the present invention, a concept including 'fermentation', 'culture' is a 'fermentation product' And a processed product derived from the culture solution itself, such as the culture solution itself (ie, the culture solution itself containing bacteria) grown in the medium, or the result of the heat treatment or the like applied to the culture solution.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 본 발명에 따른 신규 균주 또는 이의 배양물 이외에 피부과학적으로 허용 가능한 매질, 기제, 보조제, 부형제 등과 함께 피부과학 분야에서 통상적으로 제조되는 기초 화장품 조성물(화장수, 크림, 에센스, 클렌징폼 및 클렌징 워터와 같은 세안제, 팩, 보디오일), 색조 화장품 조성물(화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발 제품 조성물(샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어젤) 및 비누 등의 형태로 제조될 수 있다.The cosmetic composition according to the present invention may be prepared in any formulation conventionally prepared in the art, and in addition to the novel strain or culture thereof according to the present invention, dermatologically with a dermatologically acceptable medium, base, adjuvant, excipient, etc. Basic cosmetic compositions (cosmetics, creams, essences, cleansing foams and cleansing water, packs, body oils) commonly produced in the field, color cosmetic compositions (foundation, lipstick, mascara, makeup base), hair product compositions (shampoos) , Rinse, hair conditioner, hair gel) and soap, and the like.
상기 부형제로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들어, 피부연화제, 피부 침투 증강제, 착색제, 방향제, 유화제, 연화제, 농화제, 농축제, 겔화제, 현택화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 계면활성제, 충전제 또는 용매를 포함할 수 있다. 또한 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보조제 및 보습제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 물성 개선을 목적으로 점증제, 무기염류, 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 화장료 조성물로 세안제 및 비누를 제조하는 경우에는 통상의 세안제 및 비누 베이스에 본 발명의 추출물을 첨가하여 용이하게 제조할 수 있다. 크림을 제조하는 경우에는 일반적인 수중유적형(O/W)의 크림베이스에 본 발명의 균주 또는 그 배양물을 첨가하여 제조할 수 있다. 여기에 향료, 킬레이트제, 색소, 산화방지제, 방부제 등과 물성 개선을 목적으로 한 단백질, 미네랄, 비타민 등 합성 또는 천연소재를 추가로 첨가할 수 있다.The excipients include, but are not limited to, emollients, skin penetration enhancers, colorants, fragrances, emulsifiers, emollients, thickeners, thickeners, gelling agents, suspending agents, stabilizers, foaming agents, interfaces Active agents, fillers or solvents. In addition, fragrances, pigments, fungicides, antioxidants, preservatives, adjuvants and moisturizing agents may be further included, and may include thickeners, inorganic salts, synthetic polymer materials and the like for the purpose of improving physical properties. For example, when the face wash and the soap are manufactured with the cosmetic composition of the present invention, the extract of the present invention may be easily added to the conventional face wash and the soap base. When the cream is prepared, it can be prepared by adding the strain of the present invention or a culture thereof to a cream base of general oil-in-water type (O / W). To this, synthetic or natural materials, such as proteins, minerals, vitamins, etc., for the purpose of improving physical properties, such as flavors, chelating agents, pigments, antioxidants, and preservatives, may be added.
적합한 화장료 조성물의 제형으로는 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱(conceal stick)의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는 이에 한정되는 것은 아니나 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 수렴화장수, 유연화장수, 영양화장수, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 바디크림, 마사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 트리트먼트, 미용액, 유액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도 등의 제형을 포함한다.Formulations of suitable cosmetic compositions include, for example, emulsions, suspensions, microemulsions, microcapsules, microgranules or ionic (liposomes), nonionic, obtained by dispersing an oil phase in a solution, gel, solid or pasty anhydrous product, aqueous phase. It may be provided in the form of a vesicle dispersant, in the form of a cream, skin, lotion, powder, ointment, spray or conceal stick. It may also be prepared in the form of a foam or in the form of an aerosol composition further containing a compressed propellant. Products to which the cosmetic composition of the present invention may be added include, but are not limited to, skin lotions, skin softeners, skin toners, convergent cosmetics, softening cosmetics, nourishing cosmetics, astringents, lotions, milk lotions, moisturizing lotions, nutrition lotions, body Cream, Massage Cream, Nutrition Cream, Moisture Cream, Hand Cream, Essence, Nutrition Essence, Pack, Soap, Shampoo, Cleansing Foam, Cleansing Lotion, Cleansing Cream, Body Lotion, Body Cleanser, Treatment, Beauty Solution, Latex, Press Powder, Such as loose powder, eye shadow, and the like.
본 발명에 따른 신규한 락토바실러스 불가리쿠스(Novel Lactobacillus vulgaris according to the present invention ( Lactobacillus bulgaricusLactobacillus bulgaricus ) UBC-U27(수탁번호 KCTC 13554BP) 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 특히 피부의 광노화 방지 또는 자외선에 의한 주름 개선용 화장료 조성물일 수 있다. ) The cosmetic composition comprising UBC-U27 (Accession No. KCTC 13554BP) or a culture thereof as an active ingredient may be a cosmetic composition for preventing photoaging of skin or improving wrinkles by ultraviolet rays.
전술한 바와 같이, 본 발명에 따른 신규한 균주는 피부 자극 중에서도 특히 광노화의 주요 원인인 자외선 UV-B로부터 피부 세포를 보호하여 세포사멸을 억제하고, UV-B의 자극으로 생성이 유발되어 피부 세포 외부로 분비되는 MMP의 발현 수준을 크게 낮추는 활성이 뛰어나다. 따라서 본 발명에 따른 신규한 균주 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 자외선에 의한 피부 세포의 손상과 세포사멸을 경감시킴으로써 태양 광선을 주요 원인으로 하는 피부 광노화를 지연시키고, 자외선으로부터 초래되는 콜라겐 감소 및 피부 탄력 감소와 주름 개선에 특화된, 자외선에 의한 피부 손상 예방 또는 개선용 기능성 화장료 조성물로 제공될 수 있다. As described above, the novel strain according to the present invention inhibits apoptosis by protecting skin cells from ultraviolet UV-B, which is a major cause of photoaging, among skin irritation, and is induced by UV-B stimulation to produce skin cells. Excellent activity to significantly lower the expression level of externally secreted MMP. Therefore, the cosmetic composition comprising a novel strain or a culture thereof according to the present invention as an active ingredient retards skin photoaging due to the sun's rays as a main cause by reducing the damage and apoptosis of skin cells caused by ultraviolet rays, resulting from ultraviolet rays. It may be provided as a functional cosmetic composition for preventing or improving skin damage caused by ultraviolet rays, which is specialized in reducing collagen and reducing skin elasticity and improving wrinkles.
또한 본 발명은 신규한 락토바실러스 불가리쿠스(In addition, the present invention is a novel Lactobacillus vulgaris ( Lactobacillus bulgaricusLactobacillus bulgaricus ) UBC-U27(수탁번호 KCTC 13554BP) 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 식품용 조성물을 제공한다.) Provides a food composition for preventing skin aging or improving wrinkles comprising UBC-U27 (Accession No. KCTC 13554BP) or a culture thereof as an active ingredient.
본 발명에 따른 식품용 조성물은 기능성 식품(functional food), 영양 보조제(nutritional supplement), 건강식품(health food) 및 식품 첨가제(food additives) 등의 모든 형태를 포함한다. 상기 유형들은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다.The food composition according to the present invention includes all forms such as functional food, nutritional supplement, health food and food additives. These types can be prepared in various forms according to conventional methods known in the art.
예를 들면, 건강식품으로는 본 발명의 식품용 조성물 자체를 차, 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용하도록 하거나, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한 본 발명의 식품용 조성물은 피부 세포 보호나 주름 개선의 효과가 있다고 알려진 공지의 물질 또는 활성 성분과 함께 혼합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다.For example, as a health food, the composition for food itself of the present invention can be prepared in the form of tea, juice and drink for drinking, or granulated, encapsulated and powdered. In addition, the food composition of the present invention may be prepared in the form of a composition by mixing with a known substance or active ingredient known to have an effect of protecting skin cells or improving wrinkles.
또한 기능성 식품으로는 음료(알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품 (예: 과일 통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예: 햄, 소시지콘비이프 등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게티, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치이즈 등), 식용식물유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 본 발명의 식품용 조성물을 첨가하여 제조할 수 있다. 본 발명의 식품용 조성물을 식품첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다.Functional foods also include beverages (including alcoholic beverages), fruits and processed foods (e.g. canned fruit, canned foods, jams, marmalade, etc.), fish, meat and processed foods (e.g. ham, sausage cornebipe, etc.). ), Breads and noodles (e.g. udon, soba, ramen, spaghetti, macaroni, etc.), fruit juices, various drinks, cookies, syrups, dairy products (e.g. butter, cheese), edible vegetable oils, margarine, vegetable protein, It can be prepared by adding the food composition of the present invention to retort food, frozen food, various seasonings (for example, miso, soy sauce, sauce, etc.). In order to use the food composition of the present invention in the form of a food additive, it may be prepared and used in powder or concentrate form.
또한 본 발명은 신규한 락토바실러스 불가리쿠스(In addition, the present invention is a novel Lactobacillus vulgaris ( Lactobacillus bulgaricusLactobacillus bulgaricus ) UBC-U27(수탁번호 KCTC 13554BP) 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 생균제 또는 정장용 조성물을 제공한다. ) Provides a probiotic or formal composition comprising UBC-U27 (Accession No. KCTC 13554BP) or a culture thereof as an active ingredient.
본 발명에 따른 신규한 균주는 인간 및 동물의 건강 증진을 위한 정장용 생균제 또는 동물을 위한 사료용 생균제 조성물로 사용될 수 있다. 상기 조성물은 상기 균주 자체, 또는 이의 배양물 등을 유효성분으로 포함하며, 부형제 또는 담체를 추가로 포함할 수 있다. 조성물 내 본 발명의 신규한 균주의 함량은 조성물의 용도 및 제형에 따라 달라질 수 있다. The novel strains according to the invention can be used as formal probiotics for the promotion of human and animal health or as probiotic compositions for feed for animals. The composition includes the strain itself, or a culture thereof as an active ingredient, and may further include an excipient or a carrier. The content of the novel strains of the present invention in the composition may vary depending on the use and formulation of the composition.
본 발명에 따른 정장용 또는 생균제 조성물은 다양한 제형과 방법으로 제조 및 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 신규한 균주 또는 이의 배양물을 약제학적 분야에서 통상적으로 사용하는 담체 및 향료와 혼합하여 정제(tablet), 트로키(troche), 캡슐(capsule), 엘릭실(elixir), 시럽(syrup), 산제(powder), 현탁제(suspension) 또는 과립제(granule) 등의 형태로 제조 및 투여될 수 있다. 담체로는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제 등을 사용할 수 있다. Formal or probiotic compositions according to the invention may be prepared and administered in a variety of formulations and methods. For example, the novel strains or cultures thereof according to the present invention may be mixed with carriers and flavoring agents commonly used in the pharmaceutical field to form tablets, troches, capsules, elixirs. ), Syrup, powder, suspension or granule. As the carrier, binders, suspending agents, disintegrating agents, excipients, solubilizers, dispersants, stabilizers, suspending agents and the like can be used.
투여 방식은 경구, 비경구 또는 도포법 등을 사용할 수 있다. 또한, 투여용량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 불활성율 및 배설속도, 피투여자의 연령, 성별, 상태 등에 따라 적절히 선택할 수 있다. The mode of administration may be oral, parenteral or applied. In addition, the dosage may be appropriately selected depending on the absorbency, inactivation rate and excretion rate of the active ingredient in the body, age, sex, condition, etc. of the recipient.
또한 본 발명에 따른 신규한 균주 또는 이의 배양물은 김치, 음료, 이유식 등의 식품에 대한 식품첨가제로, 특히 발효제품 제조를 위한 스타터(starter)로 사용될 수 있다. 상기‘발효제품’은 본 명세서에서 용어‘발효식품’과 혼용되어 지칭될 수 있다. 상기 발효제품은 제조시 발효공정이 필요한 식품으로서 당업계에 알려진 것이라면 그 종류가 제한되지 않으나, 예를 들어, 치즈, 요거트, 버터, 크림, 아이스크림, 유산균 음료, 캐피어, 발효유, 김치, 발효생식제품 등을 포함한다. 본 발명의 신규한 균주를 이용한 발효제품은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라 제조될 수 있다. 발효제품의 제조방법은 통상적으로 원료의 준비, 유산균의 첨가, 발효, 완성된 제품의 회수 등의 과정으로 이루어진다. 원료의 준비 단계는 발효 대상이 되는 재료를 준비하고, 발효가 잘 이루어지도록 발효 조건을 준비하는 단계이다. 유산균의 첨가는 발효 대상의 양에 따라 적량의 균을 첨가하는 것이다. 발효는 통상의 발효균의 발효조건에 따라 수행되는 것으로 예를 들어 20℃ 내지 40℃에서 1 내지 168시간 동안 수행될 수 있다. 완성된 제품의 회수는 발효물에서 불필요한 부산물이나 미발효된 재료를 제거하는 것에서부터 저장, 운반을 용이하게 하기 위한 모든 후처리 과정 및 포장 등을 포함한다.In addition, the novel strains or cultures thereof according to the present invention may be used as food additives for foods such as kimchi, beverages, baby foods, and the like as starters for producing fermented products. The "fermented product" may be used interchangeably with the term "fermented food" herein. The fermentation product is a food that requires a fermentation process during manufacture, but is not limited in its kind if it is known in the art, for example, cheese, yogurt, butter, cream, ice cream, lactic acid bacteria drink, caper, fermented milk, kimchi, fermented reproduction Products and the like. Fermentation products using the novel strain of the present invention can be prepared according to conventional methods known in the art. The method for producing a fermented product usually consists of a process such as preparation of raw materials, addition of lactic acid bacteria, fermentation and recovery of the finished product. The preparation step of the raw material is a step of preparing the material to be fermented, and preparing the fermentation conditions so that the fermentation is well. The addition of lactic acid bacteria is the addition of an appropriate amount of bacteria according to the amount of the fermentation target. Fermentation is performed according to the fermentation conditions of conventional fermentation bacteria, for example, it may be carried out for 1 to 168 hours at 20 ℃ to 40 ℃. Recovery of the finished product includes all post-processing and packaging to facilitate storage and transport, from the removal of unnecessary by-products or unfermented materials from the fermentation.
나아가 본 발명에 따른 조성물은 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri) 균주, 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri) 균주 및 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 균주 또는 이들의 배양물을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 복합 유산균 조성물일 수 있다. 본 발명에 따른 신규한 균주는 그 자체로 단독으로도 충분히 자외선에 대한 피부 세포 보호 또는 주름 개선의 효과를 얻을 수 있지만, 다른 유산균을 추가하여 원하는 활성이 증진되는 것을 기대할 수 있다. Furthermore, the composition according to the present invention comprises one or more strains selected from the group consisting of Lactobacillus reuteri strain, Lactobacillus gasseri strain and Bifidobacterium lactis or cultures thereof. It may be a complex lactic acid bacteria composition characterized in that it further comprises. The novel strain according to the present invention alone can sufficiently achieve the effect of skin cell protection or wrinkle improvement against ultraviolet rays, but it can be expected that the desired activity is enhanced by adding other lactic acid bacteria.
특히 상기 복합 유산균 조성물에 추가적으로 포함되는 균주들은 본 발명자들이 분리 동정한 신규 균주일 수 있다. 즉, 복한 유산균 조성물에 포함되는 락토바실러스 루테리는 락토바실러스 루테리 UBC-U77(수탁번호 KCTC 13557BP), 상기 락토바실러스 가세리는 락토바실러스 가세리 UBC-U38(수탁번호 KCTC 13555BP), 상기 비피도박테리움 락티스는 비피도박테리움 락티스 UBC-U04(KCTC 13553BP)인 것을 특징으로 할 수 있다. In particular, the strains additionally included in the complex lactic acid bacteria composition may be a novel strain identified by the inventors. That is, the Lactobacillus ruterie included in the complex lactic acid bacteria composition is Lactobacillus ruteri UBC-U77 (Accession No. KCTC 13557BP), The Lactobacillus gasteria Lactobacillus gasteria UBC-U38 (Accession No. KCTC 13555BP), The Bifidobacterium The lactis may be characterized as Bifidobacterium lactis UBC-U04 (KCTC 13553BP).
따라서 본 발명은 피부 노화 방지 또는 주름 개선 활성이 있는 신규한 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus) UBC-U27(수탁번호 KCTC 13554BP) 및 이를 이용한 화장료, 식품용, 정장용 또는 생균제 조성물을 제공한다.Therefore, the present invention provides a novel Lactobacillus bulgaricus UBC-U27 (Accession No. KCTC 13554BP) having anti-aging or anti-wrinkle activity and a cosmetic, food, formal or probiotic composition using the same.
본 발명에 따른 신규한 균주는 자외선으로부터 피부 세포를 보호하여 세포사멸을 억제하고, 콜라겐을 분해하여 피부 탄력을 감소시키고 주름을 유발하는 효소인 MMP-1 및 MMP-9의 발현을 억제함으로써 피부 노화 방지 또는 주름 개선, 특히 자외선에 의한 피부 손상 방지에 효과가 탁월하다. 또한 그 효과는 기존에 알려진 다른 유산균 균주와 비교하여도 월등한 것으로 입증되었다. 본 발명에 따른 신규한 균주는 단독 조성물로 이용할 수 있으며, 그 효과를 배가하기 위하여 다른 유산균을 추가하여 복합 유산균 조성물로 이용할 수도 있다.The novel strain according to the present invention protects skin cells from ultraviolet rays, inhibits apoptosis, decomposes collagen, reduces skin elasticity, and inhibits the expression of enzymes MMP-1 and MMP-9, which cause wrinkles, thereby aging skin. It is excellent for preventing or improving wrinkles, especially skin damage caused by ultraviolet rays. In addition, the effect was proved to be superior to other known lactic acid bacteria strains. The novel strain according to the present invention can be used as a single composition, and in order to double the effect, other lactic acid bacteria can be added and used as a composite lactic acid bacteria composition.
도 1은 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27 균주가 UV-B에 의한 HaCaT 세포의 사멸에 미치는 영향을 나타낸다. 도면에서 ‘Cont’은 UV-B와 균주 모두 처리하지 않은 대조군, ‘UVB’는 균주 처리 없이 UV-B만 조사한 대조군, ‘UVB+LBU’는 UBC-U27을 1×109CFU/ml로 처리한 후 UV-B를 조사한 군, ‘UVB+2×LBU’은 UBC-U27을 2×109CFU/ml로 처리한 후 UV-B를 조사한 군을 나타낸다. 도면의 ‘*’는 Cont 대비 p value 값이 0.05 이하를 의미하고, ‘#’는 UVB 대비 p value 값이 0.05 이하를 의미한다.
도 2는 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27 균주가 HaCaT 세포에서 UV-B에 의한 MMP-1 발현 유도에 미치는 영향을 나타낸다. 도면의 범례는 도 1에서와 같다. 도면의 ‘*’는 Cont 대비 p value 값이 0.05 이하를 의미하고, ‘#’는 UVB 대비 p value 값이 0.05 이하를 의미한다
도 3은 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27 균주가 HaCaT 세포에서 UV-B에 의한 MMP-9 발현 유도에 미치는 영향을 나타낸다. 도면의 범례는 도 1에서와 같다. 도면의 ‘*’는 Cont 대비 p value 값이 0.05 이하를 의미하고, ‘#’는 UVB 대비 p value 값이 0.05 이하를 의미한다.
도 4는 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27 균주가 UV-B로 유도되는 HaCaT 세포사멸을 억제하는 활성을 다른 유산균 균주와 비교한 실험 결과를 나타낸다. 도면에서, ‘Lane 1’은 무처리 대조군, ‘Lane 2’는 UV-B 조사군, ‘Lane 3’은 UBC-U77와 UV-B 처리군, ‘Lane 4’는 UBC-U04과 UV-B 처리군, ‘Lane 5’는 UBC-U38과 UV-B 처리군, ‘Lane 6’은 UBC-U27과 UV-B 처리군, ‘Lane 7’은 락토바실러스 루테리와 UV-B 처리군, ‘Lane 8’은 비피도박테리움 락티스와 UV-B 처리군, ‘Lane 9’는 락토바실러스 가세리와 UV-B 처리군, ‘Lane 10’은 락토바실러스 불가리쿠스와 UV-B 처리군, ‘Lane 11’은 락토바실러스 람노서스와 UV-B 처리군, ‘Lane 12’는 락토바실러스 플란타룸과 UV-B 처리군, ‘Lane 13’은 락토바실러스 파라카제이와 UV-B 처리군, ‘Lane 14’는 스트렙토코커스 써모필러스와 UV-B 처리군, ‘Lane 15’는 락토바실러스 애시도필러스와 UV-B 처리군을 나타낸다. Lane 7부터 Lane 15에 사용된 유산균은 한국생명과학연구원(KCTC)나 한국미생물보존센터(KCCM)에서 구입할 수 있는 통상적으로 산업에 사용되는 유산균 균주이다. 도면의 ‘*’는 Cont 대비 p value 값이 0.05 이하를 의미하고, ‘#’는 UVB 대비 p value 값이 0.05 이하를 의미한다.
도 5는 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27 균주가 UV-B로 유도되는 MMP-1 발현을 억제하는 활성을 다른 유산균 균주와 비교한 실험 결과를 나타낸다. 도면의 범례는 도 4에서와 같다. 도면의 ‘*’,‘#’의 의미는 도 4에서와 같다.
도 6은 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27 균주가 UV-B로 유도되는 MMP-9 발현을 억제하는 활성을 다른 유산균 균주와 비교한 실험 결과를 나타낸다. 도면의 범례는 도 4에서와 같다. 도면의 ‘*’,‘#’의 의미는 도 4에서와 같다.
도 7은 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27 균주를 포함하는 복합 유산균 조성물의 UV-B에 대한 피부 세포 보호 활성을 나타낸다. 도 7의 A는 UV-B를 조사한 HaCaT 세포의 생존률을, 도 7의 B는 UV-B로 유도되는 MMP-1의 발현량을, 도 7의 C는 UV-B로 유도되는 MMP-9의 발현량을 나타낸다. 도면에서 ‘Cont’는 균주를 처리하지 않고 UV-B도 조사하지 않은 대조군, ‘UVB’는 복합 유산균 조성물을 처리하지 않고 UV-B만 조사한 UV-B 조사군, ‘UVB+LBU’는 UBC-U27 유산균을 1×109CFU/ml로 처리한 후 UV-B를 조사한 군, ‘UVB+LBU+LRE’는 UBC-U27, UBC-U77 복합유산균을 1×109CFU/ml로 처리한 후 UV-B를 조사한 군, ‘UVB+LBU+LGA’는 UBC-U27, UBC-U38 복합유산균을 1×109CFU/ml로 처리한 후 UV-B를 조사한 군, ‘UVB+LBU+BLA’는 UBC-U27, UBC-U04 복합유산균을 1×109CFU/ml로 처리한 후 UV-B를 조사한 군, ‘UVB+LBU+LRE+LGA’는 UBC-U27, UBC-U77, UBC-U38 복합유산균을 1×109CFU/ml로 처리한 후 UV-B를 조사한 군, ‘UVB+LBU+LRE+BLA’는 UBC-U27, UBC-U77, UBC-U04 복합유산균을 1×109CFU/ml로 처리한 후 UV-B를 조사한 군, ‘UVB+LBU+LGA+BLA’는 UBC-U27, UBC-U38, UBC-U04 복합유산균을 1×109CFU/ml로 처리한 후 UV-B를 조사한 군, ‘UVB+L4’는 UBC-U77, UBC-U04, UBC-U38, UBC-U27 복합유산균을 1×109CFU/ml로 처리한 후 UV-B를 조사한 군을 나타낸다.
1 shows the effect of Lactobacillus vulgaris UBC-U27 strain on the death of HaCaT cells by UV-B. In the figure, 'Cont' is a control group not treated with both UV-B and strain, 'UVB' is a control group irradiated with UV-B only without strain treatment, and 'UVB + LBU' is treated with 1 × 10 9 CFU / ml of UBC-U27. UV-B irradiated group, 'UVB + 2 × LBU' refers to the group irradiated with UV-B after treatment of UBC-U27 with 2 × 10 9 CFU / ml. '*' In the figure means that the p value value is 0.05 or less compared to Cont, and '#' means the p value value is 0.05 or less compared to UVB.
Figure 2 shows the effect of Lactobacillus Bulgaris UBC-U27 strain on the induction of MMP-1 expression by UV-B in HaCaT cells. The legend of the figure is the same as in FIG. '*' In the figure means that the p value is 0.05 or less compared to Cont, and '#' means the p value is 0.05 or less compared to UVB.
Figure 3 shows the effect of Lactobacillus vulgaris UBC-U27 strain on the induction of MMP-9 expression by UV-B in HaCaT cells. The legend of the figure is the same as in FIG. '*' In the figure means that the p value value is 0.05 or less compared to Cont, and '#' means the p value value is 0.05 or less compared to UVB.
4 shows the results of experiments in which the Lactobacillus vulgaris UBC-U27 strain inhibits UV-B-induced HaCaT apoptosis compared with other lactic acid bacteria strains. In the figure, 'Lane 1' is the untreated control, 'Lane 2' is the UV-B irradiation group, 'Lane 3' is the UBC-U77 and UV-B treatment group, 'Lane 4' is UBC-U04 and UV-B Treatment group, 'Lane 5' is UBC-U38 and UV-B treatment group, 'Lane 6' is UBC-U27 and UV-B treatment group, 'Lane 7' is Lactobacillus luteri and UV-B treatment group, 'Lane 8 'is Bifidobacterium lactis and UV-B treatment group,' Lane 9 'is Lactobacillus gastery and UV-B treatment group, and' Lane 10 'is Lactobacillus vulgaris and UV-B treatment group,' Lane '11' is Lactobacillus rhamnosus and UV-B treatment group, 'Lane 12' is Lactobacillus plantarum and UV-B treatment group, and 'Lane 13' is Lactobacillus paracaze and UV-B treatment group, 'Lane 14 'represents a group treated with Streptococcus thermophilus and UV-B, and' Lane 15 'represents a group treated with Lactobacillus ashdophyllus and UV-B. The lactic acid bacteria used in Lanes 7 to 15 are commonly used in industry, which can be purchased from Korea Life Science Research Institute (KCTC) or Korea Microorganism Conservation Center (KCCM). '*' In the figure means that the p value value is 0.05 or less compared to Cont, and '#' means the p value value is 0.05 or less compared to UVB.
5 shows the results of experiments in which the Lactobacillus vulgaris UBC-U27 strain inhibited UV-B-induced MMP-1 expression compared with other lactic acid bacteria strains. The legend of the figure is the same as in FIG. The meaning of '*' and '#' in the drawing is the same as in FIG. 4.
6 shows the results of experiments in which the Lactobacillus vulgaris UBC-U27 strain inhibits UV-B-induced MMP-9 expression compared with other lactic acid bacteria strains. The legend of the figure is the same as in FIG. The meaning of '*' and '#' in the drawing is the same as in FIG. 4.
Figure 7 shows the skin cell protective activity against UV-B of the composite lactic acid bacteria composition comprising Lactobacillus Bulgaricus UBC-U27 strain. 7A shows the survival rate of HaCaT cells irradiated with UV-B, FIG. 7B shows the expression level of MMP-1 induced by UV-B, and FIG. 7C shows the expression of MMP-9 induced by UV-B. The amount of expression is shown. In the figure, 'Cont' is a control group that does not treat the strain and does not irradiate UV-B. U27 lactic acid bacteria treated with 1 × 10 9 CFU / ml and UV-B irradiated group, 'UVB + LBU + LRE' treated UBC-U27, UBC-U77 complex lactic acid bacteria with 1 × 10 9 CFU / ml UV-B irradiated group, 'UVB + LBU + LGA' was treated with UBC-U27 and UBC-U38 complex lactic acid bacteria at 1 × 10 9 CFU / ml and then irradiated with UV-B, 'UVB + LBU + BLA' UBC-U27, UBC-U04 complex lactic acid bacteria treated with 1 × 10 9 CFU / ml and UV-B irradiation group, 'UVB + LBU + LRE + LGA' is UBC-U27, UBC-U77, UBC-U38 1 × 10 9 lactic acid bacteria a compound group after a review of the treatment with CFU / ml UVB, 'LBU UVB + + + LRE BLA' are UBC-U27, UBC-U77, UBC-U04 complex lactic acid bacteria 1 × 10 9 CFU UV-B after treatment with / ml, UVB + LBU + LGA + BLA was treated with 1 × 10 9 CFU / ml of UBC-U27, UBC-U38, and UBC-U04 complex lactic acid bacteria. In the group B, 'UVB + L4' is UBC-U77, UBC-U04, UBC-U38, The group treated with UBC-U27 lactic acid bacteria at 1 × 10 9 CFU / ml shows UV-B irradiation.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.However, the following examples are merely to illustrate the invention, but the content of the present invention is not limited to the following examples.
<실시예 1><Example 1>
신규한 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27의 분리Isolation of a Novel Lactobacillus Bulgaricus UBC-U27
브로콜리(Brassica Oleracea var. italica)를 MRS 액체 배지에 넣고 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 백금이를 사용하여 10μl의 배양액을 취하여 다시 MRS 한천 평판 배지에 도말하고 37℃에서 2일간 배양하였다. 배양을 통해 얻은 균락들은 자외선 UV-B에 대한 피부 세포 보호 효과 및 자외선 UV-B에 의해 유도된 MMP-1과 MMP-9의 발현 억제 활성을 시험하여 선별하였다.Broccoli ( Brassica Oleracea var. Italica ) was placed in MRS liquid medium and incubated at 37 ° C for 24 hours. 10 μl of the culture solution was taken using platinum teeth and plated on MRS agar plate medium again and incubated at 37 ° C. for 2 days. The colonies obtained through the culture were selected by testing the effect of protecting skin cells against ultraviolet UV-B and the inhibitory activity of expression of MMP-1 and MMP-9 induced by ultraviolet UV-B.
이같이 선별된 균주를 동정하고자 16S rDNA 분석을 통한 분자유전학적인 방법을 실시하였고, 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus) UBC-U27로 명명하였다. 분리, 동정된 신규한 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27 균주는 한국생명공학연구원에 2018년 6월 21일 기탁하였다(수탁번호 KCTC13554BP).Molecular genetic methods through 16S rDNA analysis were performed to identify the selected strains, and were named Lactobacillus bulgaricus UBC-U27. The isolated and identified novel Lactobacillus Bulgaricus UBC-U27 strain was deposited on June 21, 2018 by the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology (Accession No. KCTC13554BP).
<실시예 2> <Example 2>
락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27의 UV로 유도되는 세포사멸 억제 활성UV-induced Apoptosis Inhibitory Activity of Lactobacillus Bulgaricus UBC-U27
신규 균주가 갖는 자외선에 의한 세포사멸 억제 활성을 인간 피부 각질 형성세포인 HaCaT 세포에서 UV-B를 조사하고 세포생존률(cell viability, %)을 측정하여 평가하였다.The anti-apoptotic activity of the new strains was evaluated by irradiation of UV-B in HaCaT cells, which are human skin keratinocytes, and cell viability (%).
HaCaT 세포는 10% FBS, 100units/ml 페니실린 및 100mg/ml 스트렙토마이신이 포함된 DMEM에서 37℃를 유지하여 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기 내에서 24시간 동안 배양하고, 1×104cells/well이 되도록 96well plate에 준비하였다. 신규 균주는 각각 MRS 배지에서 37℃에서 24시간 동안 배양한 후, 균체를 8,000rpm에서 10분 동안 원심분리하고, PBS로 헹궈서 남아있는 배지 성분을 제거하였다. HaCaT 세포의 배지를 제거하고, 신규 균주를 1×109CFU/well 또는 2×109CFU/well의 농도로 처리하고 1시간 뒤에 UV-B를 60mJ/cm2로 조사한 후, 48시간 동안 배양하였다. HaCaT cells were maintained at 37 ° C. in DMEM containing 10% FBS, 100 units / ml penicillin and 100 mg / ml streptomycin for 24 hours in an incubator containing 5% carbon dioxide, and 1 × 10 4 cells / well Prepared in 96well plate as possible. Each new strain was incubated at 37 ° C. for 24 hours in MRS medium, and then the cells were centrifuged at 8,000 rpm for 10 minutes and rinsed with PBS to remove the remaining media components. Remove the medium of HaCaT cells, treat the new strain at a concentration of 1 × 10 9 CFU / well or 2 × 10 9 CFU / well, irradiate UV-B at 60mJ / cm 2 after 1 hour, and incubate for 48 hours. It was.
세포생존률은 아무 것도 첨가하지 않은 DMEM 배지에 WST-1 반응액을 1/10로 희석하고 이를 각 웰당 100μl씩 처리하여 1시간 동안 반응시킨 후, 450nm에서 흡광도를 측정하였다.The cell viability was diluted 1/10 of the WST-1 reaction solution in DMEM medium to which nothing was added, and 100 μl of each well was reacted for 1 hour, and then absorbance was measured at 450 nm.
도 1에 도시된 바와 같이, UV-B를 조사하지 않은 대조군의 세포생존률을 100%로 보았을 때, UV-B에 의하여 HaCaT 세포의 생존률이 50% 이하로 떨어졌으나, 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27 균주를 처리한 실험군에서는 세포생존률이 현저하게 증가하였다. 이러한 활성은 처리한 균주의 밀도가 높을수록 크게 나타나 농도 의존적임을 확인하였다. As shown in FIG. 1, when the cell survival rate of the control group not irradiated with UV-B was 100%, the survival rate of HaCaT cells was lowered to 50% or less by UV-B. However, Lactobacillus bulgaricus UBC-U27 In the experimental group treated with the strain, the cell survival rate was significantly increased. This activity was confirmed that the higher the density of the treated strain, the concentration-dependent.
<실시예 3> <Example 3>
락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27의 UV에 의한 MMP 발현 억제 활성Inhibition Activity of MMP Expression by Lactobacillus Bulgaricus UBC-U27 by UV
HaCaT 세포에서 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27이 자외선 조사에 의해 유도되는 MMP-1 발현을 억제시키는지 알아보기 위하여 Human MMP-1 ELISA Kit를 사용하여 MMP-1의 생성량을 정량하였다.To determine whether Lactobacillus vulgaris UBC-U27 inhibits MMP-1 expression induced by UV irradiation in HaCaT cells, the amount of MMP-1 production was quantified using the Human MMP-1 ELISA Kit.
<실시예 2>와 같은 방법으로 배양된 HaCaT 세포에 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27를 처리하고, 1시간 후 UV-B를 60mJ/cm2로 조사하여 48시간 동안 배양하였다. 배양한 세포의 배지로부터 100μl을 취하여 배지로 분비된 MMP-1의 양을 측정하였다.HaCaT cells cultured in the same manner as in <Example 2> were treated with Lactobacillus vulgaris UBC-U27, and after 1 hour, UV-B was irradiated at 60mJ / cm 2 and incubated for 48 hours. 100 μl was taken from the medium of the cultured cells, and the amount of MMP-1 secreted into the medium was measured.
도 2에 도시된 바와 같이, UV-B를 조사하지 않은 군에 비하여 UV-B 조사에 의해 MMP-1이 발현이 현저히 증가한 반면, UBC-U27을 처리한 군에서는 MMP-1의 수준이 크게 감소하였다. 또한 세포생존률과 마찬가지로, UBC-U27의 MMP-1 발현 억제 활성은 처리한 균주의 농도에 의존적으로 나타났다.As shown in FIG. 2, the expression of MMP-1 was significantly increased by UV-B irradiation compared to the group not irradiated with UV-B, whereas the level of MMP-1 was significantly decreased in the group treated with UBC-U27. It was. In addition, similar to the cell survival rate, UBC-U27 MMP-1 expression inhibitory activity was dependent on the concentration of the treated strain.
나아가, 같은 방법으로 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27이 자외선 조사에 의해 유도되는 MMP-9 발현을 억제시키는지 여부를 Human MMP-1 ELISA Kit를 사용하여 측정하였다.Furthermore, whether the Lactobacillus bulgaricus UBC-U27 inhibits MMP-9 expression induced by UV irradiation in the same manner was measured using the Human MMP-1 ELISA Kit.
도 3에 도시된 바와 같이, UV-B를 조사하지 않은 군에 비하여 UV-B 조사에 의해 세포 내 MMP-9의 발현이 현저히 증가하였고, UBC-U27을 처리한 군에서는 MMP-9의 발현이 크게 감소하였으며, 이러한 MMP-9 발현 억제 활성도 처리한 균주의 농도 의존적인 것으로 나타났다.As shown in FIG. 3, the expression of MMP-9 in the cells was significantly increased by UV-B irradiation compared to the group not irradiated with UV-B. In the group treated with UBC-U27, the expression of MMP-9 was increased. Significantly decreased, this MMP-9 expression inhibitory activity was shown to be concentration dependent of the strain treated.
<실시예 4> <Example 4>
락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27와 타유산균의 활성 비교 분석Comparative Analysis of Lactobacillus Bulgaricus UBC-U27 and Other Lactic Acid Bacteria
<실시예 2>와 <실시예 3>에서 확인한 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27의 자외선에 대한 피부 세포사멸 억제를 통한 피부 세포 보호 및 MMP 발현 억제 활성을 다른 유산균들과 비교하였다. Lactobacillus vulgaris UBC-U27 identified in <Example 2> and <Example 3>, skin cell protection and MMP expression inhibitory activity by inhibiting the skin apoptosis against UV light was compared with other lactic acid bacteria.
다양한 유산균 균주 간 활성 비교를 위하여, 기존에 알려진 유산균 균주 9종(락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis), 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus)), 그리고 본 발명자들이 추가로 분리, 동정한 신규한 유산균 균주 3종(락토바실러스 루테리 UBC-U77(수탁번호 KCTC13557BP), 락토바실러스 가세리 UBC-U38(수탁번호 KCTC13555BP), 비피도박테리움 락티스 UBC-U04(수탁번호 KCTC13553BP)) 등 총 12종의 유산균을 선택하여 활성을 비교 분석하였다. 도 4 내지 도 6의 Lane 7부터 Lane 15에 도시된 상기 유산균 균주들은 한국생명과학연구원(KCTC)나 한국미생물보존센터(KCCM)에서 구입할 수 있는 통상적으로 산업에 사용되는 유산균 균주이다.For comparison of activity between various lactic acid bacteria strains, nine known lactic acid bacteria strains ( Lactobacillus reuteri , Lactobacillus gasseri , Lactobacillus bulgaricus , Lactobacillus rhamnosus ( Lactobacillus rhamnosus) ), Lactobacillus plantarum , Lactobacillus paracasei , Lactobacillus acidophilus , Bifidobacterium lactis , Streptococcus thermophilus ( Lactobacillus plantarum ) Streptococcus thermophilus )), and three new lactic acid bacteria strains further isolated and identified by the present inventors (Lactobacillus ruteri UBC-U77 (Accession No. KCTC13557BP), Lactobacillus gasteria UBC-U38 (Accession No. KCTC13555BP), Bifidobacterium) A total of 12 kinds of lactic acid bacteria were selected, including Leeum lactis UBC-U04 (Accession No. KCTC13553BP). Analyzed. The lactic acid bacteria strains shown in Lanes 7 to Lane 15 of FIGS. 4 to 6 are lactic acid bacteria strains commonly used in industry, which can be purchased from Korea Life Science Research Institute (KCTC) or Korea Microorganism Conservation Center (KCCM).
<실시예 2>와 <실시예 3>에서 사용한 실험 방법에 따라, 각각의 유산균 균주는 1×109CFU/ml의 같은 농도로 처리하여 UV-B를 조사한 HaCaT 세포에서의 세포생존률(도 4) 및 MMP-1(도 5)과 MMP-9(도 6)의 발현량을 측정하였다. According to the experimental method used in <Example 2> and <Example 3>, each lactic acid bacteria strain was treated with the same concentration of 1 × 10 9 CFU / ml cell viability of the UV-B irradiated HaCaT cells (Fig. 4 ) And expression levels of MMP-1 (FIG. 5) and MMP-9 (FIG. 6) were measured.
세포 보호 효과에 대하여 도 4에서 확인할 수 있는 바와 같이, UV-B를 조사한 HaCaT 세포군(Lane 2)의 생존률은 아무런 처리를 하지 않은 대조군(Lane 1)와 비교하여 절반 이하로 크게 감소하였으며, 기존에 알려진 9종의 유산균(Lane 7 내지 Lane 15)들은 UV-B를 조사한 세포군(Lane 2)와 비교하여 세포생존률이 매우 유사하거나 근소한 차이만을 보여, UV-B에 대한 세포 보호 효과가 미미한 것으로 나타났다.As can be seen in Figure 4 with respect to the cell protective effect, the survival rate of the HaCaT cell group (Lane 2) irradiated with UV-B was significantly reduced to less than half compared to the control group (Lane 1) without any treatment, Nine known lactic acid bacteria (Lane 7 to Lane 15) showed a very similar or slight difference in cell viability compared to the UV-B irradiated cell population (Lane 2), indicating a minimal effect of protecting the cells against UV-B.
이에 반하여, 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27(Lane 6)은 UV-B 조사한 세포의 생존률을 약 2배 가량 큰 폭으로 증가시킨 것으로 측정되었다. 특히 비교 대상인 기존에 알려진 9종의 유산균 중 어느 것 보다도 UBV-U27을 처리한 실험군의 세포생존률이 가장 높아서, 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27(Lane 6)은 UV-B에 의한 세포 손상을 억제하고, 세포를 보호하는 효과가 현저하게 뛰어난 것으로 확인되었다. In contrast, Lactobacillus vulgaris UBC-U27 (Lane 6) was measured to significantly increase the survival rate of UV-B irradiated cells by about two times. In particular, the cell survival rate of the experimental group treated with UBV-U27 is higher than any of the nine known lactic acid bacteria to be compared, so Lactobacillus vulgaris UBC-U27 (Lane 6) inhibits cell damage caused by UV-B. It was confirmed that the effect of protecting the cells was remarkably excellent.
또한 발명자들이 분리, 동정한 다른 신규한 유산균들인 락토바실러스 루테리 UBC-U77(Lane 3), 락토바실러스 가세리 UBC-U38(Lane 5), 비피도박테리움 락티스 UBC-U04(Lane 4)도 UV-B에 의한 세포사멸을 억제하고 세포를 보호하는 효과가 기존에 알려진 유산균들보다 뛰어난 것으로 나타났다.In addition, other novel lactic acid bacteria identified and identified by the inventors, Lactobacillus ruteri UBC-U77 (Lane 3), Lactobacillus gasteria UBC-U38 (Lane 5), Bifidobacterium lactis UBC-U04 (Lane 4) are also UV Inhibition of apoptosis by -B and protection of cells were superior to the known lactic acid bacteria.
MMP 발현 억제 활성 비교 결과는 도 5(MMP-1) 및 도 6(MMP-9)에 도시되어 있다. 기존에 알려진 유산균들이 HaCaT 세포에서 UV-B가 유발하는 MMP-1 또는 MMP-9 발현량을 감소시키는 데 있어서 다소 간의 효과를 나타낸 데 반하여, 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27(Lane 6)은 MMP-1과 MMP-9의 발현량을 절반 이하로 감소시켰으며, 특히 기존에 알려진 타유산균(Lane 7 내지 Lane 15)들보다 큰 폭으로 MMP 발현을 억제한 것으로 나타났다. MMP expression inhibitory activity comparison results are shown in FIGS. 5 (MMP-1) and 6 (MMP-9). Lactobacillus vulgaris UBC-U27 (Lane 6) is known to have a slightly hepatic effect in reducing the amount of UV-B-induced MMP-1 or MMP-9 expression in HaCaT cells. 1 and MMP-9 expression levels were reduced to less than half, and in particular, MMP expression was suppressed to a greater extent than other known lactic acid bacteria (Lane 7 to Lane 15).
또한 발명자들이 분리, 동정한 다른 신규한 락토바실러스 루테리 UBC-U77(Lane 3), 락토바실러스 가세리 UBC-U38(Lane 5), 비피도박테리움 락티스 UBC-U04(Lane 4)도 UV-B에 의한 MMP 발현 억제 효과가 기존에 알려진 타유산균들보다 우수한 것으로 나타났다. Other novel Lactobacillus lusteres UBC-U77 (Lane 3), Lactobacillus gasteria UBC-U38 (Lane 5), and Bifidobacterium lactis UBC-U04 (Lane 4) were also identified and identified by the inventors. MMP expression inhibition effect was shown to be superior to other known lactic acid bacteria.
<실시예 5> Example 5
락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27를 포함하는 복합 유산균 조성물Complex lactic acid bacteria composition comprising Lactobacillus Bulgaricus UBC-U27
락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27에 본 발명자들이 추가로 분리, 동정한 신규한 유산균 균주를 더욱 포함하는 복합 유산균 조성물을 만들고, 자외선에 대한 피부 세포 보호 및 주름 개선의 활성을 알아보았다. The present inventors made a composite lactic acid bacterium composition further comprising the novel lactic acid bacteria strain isolated and identified by Lactobacillus bulgaricus UBC-U27, and examined the activity of skin cell protection and wrinkle improvement against ultraviolet rays.
복합 유산균 조성물에는 본 발명에 따른 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27 이외에, 본 발명자들이 추가로 분리, 동정한 락토바실러스 루테리 UBC-U77(수탁번호 KCTC13557BP), 락토바실러스 가세리 UBC-U38(수탁번호 KCTC13555BP) 또는 비피도박테리움 락티스 UBC-U04(수탁번호 KCTC13553BP)) 등 3종의 신규한 유산균 균주 중에 1 내지 3가지 유산균을 선택하여 첨가하였다. 총 2 내지 4종의 유산균 균주를 포함하는 복합 유산균 조성물은 조성물 내 각각의 유산균을 모두 동일한 비율로 포함하여 총 1×109CFU/ml의 농도로 처리하였다. 복합 유산균 조성물의 활성은 <실시예 2>와 <실시예 3>에서와 동일한 방법으로 측정하였다. In the complex lactic acid bacteria composition, in addition to Lactobacillus vulgaris UBC-U27 according to the present invention, the present inventors further isolated and identified Lactobacillus ruteri UBC-U77 (Accession Number KCTC13557BP), Lactobacillus gasteria UBC-U38 (Accession No. KCTC13555BP) Alternatively, one to three lactic acid bacteria were selected and added among three novel lactic acid bacteria strains including Bifidobacterium lactis UBC-U04 (Accession No. KCTC13553BP). Complex lactic acid bacteria composition comprising a total of 2 to 4 kinds of lactic acid bacteria strains were treated in a total concentration of 1 × 10 9 CFU / ml including each lactic acid bacteria in the composition in the same ratio. The activity of the composite lactic acid bacteria composition was measured in the same manner as in <Example 2> and <Example 3>.
도 7에 도시된 바와 같이, 복합 유산균 조성물은 HaCaT 세포에서 UV-B로 유발되는 세포사멸을 억제하는 피부 세포 보호 활성(도 7의 A)과 UV-B로 유발되는 MMP-1 및 MMP-9의 발현을 억제하는 활성(도 7의 B, C)이 매우 뛰어난 것을 알 수 있었다. 락토바실러스 불가리쿠스 UBC-U27의 단독 유산균 조성물보다 다른 유산균 균주를 추가적으로 포함하는 복합 유산균 조성물을 처리한 실험군에서 UV-B 조사한 세포생존률은 더욱 높아지고, UV-B로 유발된 MMP-1 및 MMP-9의 발현량은 감소하여, 단독 조성물보다 복합 조성물의 활성이 더욱 우수한 것을 알 수 있었다. As shown in Figure 7, the complex lactic acid bacteria composition is a skin cell protective activity that inhibits UV-B-induced apoptosis in HaCaT cells (A of Figure 7) and UV-B-induced MMP-1 and MMP-9 It was found that the activity of inhibiting the expression of (B, C in Fig. 7) was very excellent. UV-B-induced cell survival rate was higher in the experimental group treated with the composite lactic acid bacterium composition additionally containing other lactic acid bacteria strains than the Lactobacillus vulgaris UBC-U27 alone lactic acid composition, and UV-B-induced MMP-1 and MMP-9 The expression amount of was reduced, it was found that the activity of the composite composition is more excellent than the single composition.
본 발명에 따른 신규한 락토바실러스 불가리쿠스 균주 및 이의 배양물을 이용하여 독성이 없고 안전하며, 자외선으로부터의 피부 보호, 피부 노화 방지 또는 주름 개선 용도를 갖는 화장료, 식품용 조성물, 생균제 조성물 그리고 정장용 조성물을 개발할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 균주를 단독으로, 또는 다른 유산균 균주를 추가하여 복합 유산균 조성물로도 이용할 수 있다.Cosmetics, food compositions, probiotic compositions, and formal compositions that are nontoxic and safe using the novel Lactobacillus Bulgari strain and the culture thereof according to the present invention, and are used for protecting skin from ultraviolet rays, preventing skin aging or improving wrinkles. Can be developed. In addition, the strain according to the present invention can be used alone or as a complex lactic acid bacteria composition by adding other lactic acid bacteria strains.
Claims (13)
Lactobacillus bulgaricus UBC-U27 (Accession No. KCTC 13554BP) strain.
The strain of claim 1, wherein the Lactobacillus vulgaris has anti-aging or anti-wrinkle activity due to ultraviolet rays.
According to claim 2, wherein the anti-wrinkle activity is a strain characterized in that by inhibiting the expression or activity of matrix metalloprotease-1 (MMP-1) or matrix metalloprotease-9 (MMP-9).
A cosmetic composition for preventing skin aging or improving wrinkles by ultraviolet rays comprising the strain of claim 1 or a culture thereof as an active ingredient.
A composition for preventing skin aging or improving wrinkles by ultraviolet rays comprising the strain of claim 1 or a culture thereof as an active ingredient.
Probiotic composition comprising the strain of claim 1 or a culture thereof as an active ingredient.
The formal composition comprising the strain of claim 1 or its culture as an active ingredient.
The method of claim 4, wherein the composition is one or more strains selected from the group consisting of Lactobacillus reuteri strain, Lactobacillus gasseri strain and Bifidobacterium lactis strain or A composition comprising additionally a culture.
10. The method according to claim 9, wherein the Lactobacillus rutheri Lactobacillus ruteri UBC-U77 (Accession No. KCTC 13557BP), The Lactobacillus gasteria Lactobacillus gasteria UBC-U38 (Accession No. KCTC 13555BP), The Bifidobacterium lac Teeth is Bifidobacterium lactis UBC-U04 (KCTC 13553BP), characterized in that the composition.
According to claim 6, wherein the composition is one or more strains selected from the group consisting of Lactobacillus reuteri strain, Lactobacillus gasseri strain and Bifidobacterium lactis strain or their A composition comprising additionally a culture.
According to claim 7, wherein the composition is one or more strains selected from the group consisting of Lactobacillus reuteri strain, Lactobacillus gasseri strain and Bifidobacterium lactis strain or their A composition comprising additionally a culture.
The method of claim 8, wherein the composition is one or more strains selected from the group consisting of Lactobacillus reuteri strain, Lactobacillus gasseri strain and Bifidobacterium lactis strain or A composition comprising additionally a culture.
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