KR102244812B1 - Composition Comprising Mixed Culture Strain of Lactobacillus plantarum subsp. plantarum SDCM 1002 and Saccharomyce cerevisiae SDCM 3017, Culture Fluid, or Culture Fluid Extract thereof as Active Ingredient - Google Patents
Composition Comprising Mixed Culture Strain of Lactobacillus plantarum subsp. plantarum SDCM 1002 and Saccharomyce cerevisiae SDCM 3017, Culture Fluid, or Culture Fluid Extract thereof as Active Ingredient Download PDFInfo
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Abstract
Description
본 발명은 피부 미백, 주름개선, 보습, 피부 재생, 및 항여드름 활성을 갖는 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸 SDCM 1002 및 사카로마에세스 세르비지에 SDCM 3017의 혼합 균주, 그 배양액, 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백, 주름개선, 보습, 피부 재생, 및 항여드름용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition having skin whitening, wrinkle improvement, moisturizing, skin regeneration, and anti-acne activity, and more specifically, Lactobacillus plantarum subspecies Plantarum SDCM 1002 and Saccharomyces servise SDCM 3017. It relates to a composition for skin whitening, wrinkle improvement, moisturization, skin regeneration, and anti-acne, comprising a mixed strain, a culture solution thereof, or an extract thereof as an active ingredient.
생물체의 항상성(homeostasis)을 유지하기 위한 과정에서 중요한 역할을 담당하고 있는 물질 중 일부가 각종 생물체 유래의 생리 활성 물질이다. 지금까지 수많은 생리 활성 물질에 관해 많은 연구가 진행되고 있으며, 그 중, 미생물, 식물, 또는 동물체 등에서 분리된 생리 활성을 갖는 물질에 관한 연구는 생명과학 및 의학 분야에서 매우 중요한 영역이다.Some of the substances that play an important role in the process of maintaining the homeostasis of living organisms are biologically active substances derived from various organisms. There have been many studies on numerous physiologically active substances so far, and among them, studies on substances having physiological activity isolated from microorganisms, plants, or animals are very important areas in the fields of life science and medicine.
한편, 종래 개발된 비타민C, 레티노익산, 형질전환생장인자(transforming growth factor, TGF) 등은 피부 주름 개선, 미백, 항산화 등에 효과가 있는 것으로 알려져 있고, 미백 성분으로는 코지산(Kojic acid), 알부틴(Arbutin) 등과 같은 티로시나제 효소 활성을 억제하는 물질로 잘 알려져 있다. 그러나, 종래 개발된 비타민C, 레티노익산, 형질전환 생장인자(transforming growth factor, TGF), 동물태반 유래의 단백질(JP8-231370), 베툴린산(betulinic acid, JP8-208424), 클로렐라 추출물(JP9-40523, JP10-36283, 섬유아세포 증식 촉진작용) 등의 소재들은 피부에 적용시 자극과 발적 등 안전성 문제로 사용량에 제한이 있거나, 그 효과가 미미하여 실질적으로 피부 탄력 및 주름의 개선에 효과를 기대할 수 없다는 문제점이 있었다.Meanwhile, previously developed vitamin C, retinoic acid, and transforming growth factor (TGF) are known to be effective in improving skin wrinkles, whitening, and antioxidant, and as whitening ingredients, kojic acid, It is well known as a substance that inhibits the activity of tyrosinase enzymes such as arbutin. However, previously developed vitamin C, retinoic acid, transforming growth factor (TGF), animal placenta-derived protein (JP8-231370), betulinic acid (JP8-208424), chlorella extract (JP9- Materials such as 40523, JP10-36283, fibroblast proliferation promotion) are limited in use due to safety issues such as irritation and redness when applied to the skin, or their effects are insignificant, so they can be expected to substantially improve skin elasticity and wrinkles. There was a problem that there was no.
또한, 최근에는 천연물 등으로부터 얻은 생리 활성 물질을 화장료에 도입하여 피부 자체의 고유 방어 기능을 더욱 강화함으로써 피부에 작용하는 기능성을 증가시키는 화장품의 개발이 활발하게 진행되는 추세이며, 생체에 안전하고, 유효성분이 안정하며, 무엇보다도 기존의 피부 미백, 피부 주름 개선, 보습, 및 피부 재생 효과가 있는 물질보다 효과가 더욱 우수한 천연소재의 개발이 절실히 요망되고 있다.In addition, recently, the development of cosmetics that increase the functionality acting on the skin by introducing physiologically active substances obtained from natural products into cosmetics to further strengthen the skin's own defense function is actively progressing. The active ingredient is stable, and above all, there is an urgent need for the development of natural materials that are more effective than substances that have the effect of whitening, improving skin wrinkles, moisturizing, and regenerating skin.
한편, 화장품 소재는 안전성, 효능, 물성 등이 균형을 이루어야 한다. 또한 경제성 확보도 중요한 요인으로서 화장품용 소재는 다양한 개발 방법, 천연물 추출과 미생물 등에 의한 발효를 이용하여 피부 투과, 노화 억제, 생리활성, 안전성 및 물성을 최적화하여 개발하게 된다. 화장품과 의약품의 경계가 무너지면서 화장품의 안정성과 의약품의 효과성을 겸비한 복합 기능성 원료 및 바이오 소재를 통해 다양한 코스메슈티컬 제품들이 높은 성장세를 이어가고 있다.On the other hand, cosmetic materials must have a balance of safety, efficacy, and physical properties. In addition, securing economical efficiency is also an important factor, and cosmetic materials are developed by optimizing skin penetration, aging inhibition, physiological activity, safety and physical properties using various development methods, natural product extraction and fermentation by microorganisms. As the boundaries between cosmetics and pharmaceuticals are collapsing, various cosmeceutical products are continuing high growth through complex functional raw materials and bio-materials that combine the stability of cosmetics and the effectiveness of pharmaceuticals.
이러한 배경 아래에서, 본 발명자들은 피부 탄력 또는 피부 주름 개선에 효과가 우수한 천연물 소재의 발굴을 위해 예의 연구노력한 결과, 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸 SDCM 1002 및 사카로마에세스 세르비지에 SDCM 3017의 혼합 균주가 갖는 피부 미백, 주름개선, 보습, 피부 재생, 및 항여드름 활성에 대한 우수한 시너지 효과를 규명하여, 본 발명을 완성하게 되었다.Under this background, the present inventors have made extensive research efforts to discover natural materials that are effective in improving skin elasticity or skin wrinkles, and as a result, Lactobacillus plantarum subspecies Plantarum SDCM 1002 and Saccharomyces servise SDCM 3017 The present invention was completed by finding out the excellent synergistic effect on skin whitening, wrinkle improvement, moisturizing, skin regeneration, and anti-acne activity of the mixed strain of
따라서, 본 발명의 주된 목적은 피부 미백, 주름개선, 보습, 피부 재생, 및 항여드름 활성이 우수한 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸 SDCM 1002 및 사카로마에세스 세르비지에 SDCM 3017의 혼합 균주, 그 배양액, 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 제공하는 데 있다.Accordingly, the main object of the present invention is a mixed strain of Lactobacillus plantarum subspecies Plantarum SDCM 1002 and Saccharomyces servise SDCM 3017 excellent in skin whitening, wrinkle improvement, moisturizing, skin regeneration, and anti-acne activity, It is to provide a composition comprising the culture medium or an extract thereof as an active ingredient.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.Other objects and advantages of the present invention will become more apparent by the following detailed description, claims and drawings.
본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP)의 혼합 균주, 그 배양액, 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백, 주름개선, 보습, 피부 재생, 및 항여드름용 화장료 조성물을 제공한다.According to an aspect of the present invention, the present invention is Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum ) SDCM 1002 (accession number KCTC 14013BP) and Saccharomyce cerevisiae (Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 ( It provides a cosmetic composition for skin whitening, wrinkle improvement, moisturizing, skin regeneration, and anti-acne comprising a mixed strain of accession number KCTC 14015BP), a culture solution thereof, or an extract thereof as an active ingredient.
본 발명자들은 피부에 유익한 영향을 주는 여러 가지 천연물질들을 대상으로 그 효과를 탐색하였고, 프로바이오틱 균주들의 피부 상태개선 효과에 주목하여 기능성이 우수한 균주 소재를 발굴하고자 연구노력한 결과, 김치 및 막걸리 등의 발효 식품 소재들로부터 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 균주 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주를 동정하였고, 이들 2종 균주들의 혼합 배양액이 피부 미백, 주름개선, 보습, 및 피부 재생에 우수한 활성을 나타내고, 여드름 원인균에 대해 우수한 항균 활성을 나타내는 것을 규명하였으며, 피부에 적용 시에도 안전성에 문제가 없음을 확인하였다.The present inventors investigated the effects of various natural substances that have a beneficial effect on the skin, and as a result of research efforts to discover strain materials with excellent functionality by paying attention to the effects of improving the skin condition of probiotic strains, kimchi and makgeolli, etc. from the fermented food material Lactobacillus Planta room subspecies Planta room (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum)
또한, 상기 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 균주 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주는 우수한 내산성과 내담즙성을 갖는 것을 특징으로 하는데, 2종 균주 모두 pH 2.5와 pH 3에서는 2종 균주 모두 89% 이상의 생존율을 보여 매우 우수한 내산성을 나타내었고, 담즙산염 0.5% 농도일 때 SDCM 1002 균주 및 SDCM 3017 모두 90% 이상의 생존율을 나타내어 우수한 내산성 및 내담즙성 균주임을 확인할 수 있었다(도 1 및 도 2 참조). In addition, the Lactobacillus plantarum subspecies Plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum )
또한, 상기 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 균주 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주는 부다페스트 조약 하의 국제기탁기관인 한국생명공학연구원 생물자원센터(KCTC)에 국제기탁하여 각각 수탁번호 KCTC 14013BP 및 KCTC 14015BP를 부여받았다. 본 발명에서 "락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP)", "SDCM 1002 균주", 및 "1002 균주"는 서로 동일한 의미로 사용되며, 서로 혼용하여 사용할 수 있다. 또한, "사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP)", "SDCM 3017 균주", 및 "3017 균주"도 서로 동일한 의미로 사용되며, 서로 혼용하여 사용할 수 있다. In addition, the Lactobacillus plantarum subspecies Plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum )
또한, 본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나, 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.In addition, in the present specification, the term "active ingredient" refers to an ingredient that exhibits a desired activity by itself, or that itself can exhibit activity together with an inactive carrier.
본 발명에서 사용되는 용어 "추출물"은 상기 균주 또는 그 배양액의 추출 처리에 따라 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 본 발명의 상기 추출물은 바람직하게 추출 후 건조 분말 형태로 제조되어 사용될 수 있다.The term "extract" as used in the present invention is an extract obtained by extraction treatment of the strain or its culture solution, a dilution or concentrate of the extract, a dried product obtained by drying the extract, a prepared product or purified product of the extract, or It includes extracts of all formulations that can be formed using the extract itself and the extract, such as a mixture. The extract of the present invention may be preferably prepared and used in a dry powder form after extraction.
본 발명의 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP)의 혼합 균주, 또는 이들의 배양액의 추출에 있어서, 상기 추출물을 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다. A mixed strain of Lactobacillus plantarum subsp. plantarum of the present invention (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 (accession number KCTC 14013BP) and Saccharomyce cerevisiae (Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 (accession number KCTC 14015BP) , Or in the extraction of a culture solution thereof, a method of extracting the extract is not particularly limited, and may be extracted according to a method commonly used in the art. Non-limiting examples of the extraction method include a hot water extraction method, an ultrasonic extraction method, a filtration method, a reflux extraction method, and the like, which may be performed alone or in combination of two or more methods.
본 발명에서 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP)의 혼합 균주, 또는 이들의 배양액 추출에 사용되는 추출 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 추출 용매의 비제한적인 예로는 물; 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올 등의 C1 내지 C4의 저급 알코올; 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 등의 다가 알코올; 및 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 아세톤, 벤젠, 헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등의 탄화수소계 용매; 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있다. In the present invention, Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum ) SDCM 1002 (accession number KCTC 14013BP) and Saccharomyces cerevisiae (Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 (accession number KCTC 14015BP) mixed strains , Or the kind of the extraction solvent used for extracting the culture solution thereof is not particularly limited, and any solvent known in the art may be used. Non-limiting examples of the extraction solvent include water; C1 to C4 lower alcohols such as methanol, ethanol, propyl alcohol, and butyl alcohol; Polyhydric alcohols such as glycerin, butylene glycol and propylene glycol; And hydrocarbon solvents such as methyl acetate, ethyl acetate, acetone, benzene, hexane, diethyl ether, and dichloromethane; Or it is possible to use a mixture of these.
본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP)의 혼합 균주, 그 배양액, 또는 이의 추출물은 멜라닌(Melanin) 생성을 억제하여 피부 미백 활성을 나타내는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 α-멜라닌세포자극 호르몬 처리로 증가한 멜라닌 함량(Con.)을 기준으로 상기 2종 균주의 혼합 배양액 추출물 처리군(시험예 3)은 1 및 2.5 mg/mL 농도에서 멜라닌 함량이 각각 49.50% 및 82.32% 감소되는 것을 확인한 바 있으며, 2종 균주의 혼합으로 멜라닌 함량이 현저하게 감소되는 피부 미백에 대한 시너지 효과가 있음을 확인할 수 있었다(도 4 참조). In the cosmetic composition of the present invention, the Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum ) SDCM 1002 (accession number KCTC 14013BP) and Saccharomyces cerevisiae (Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 (accession number KCTC 14015BP), the culture medium thereof, or an extract thereof is characterized in that it exhibits skin whitening activity by inhibiting melanin production. In a preferred embodiment of the present invention, based on the melanin content (Con.) increased by α-melanocyte stimulating hormone treatment, the mixed culture solution extract-treated group (Test Example 3) of the two strains was melanin at concentrations of 1 and 2.5 mg/mL. It was confirmed that the content was reduced by 49.50% and 82.32%, respectively, and it was confirmed that there was a synergistic effect on skin whitening in which the melanin content was significantly reduced by mixing of the two strains (see FIG. 4).
또한, 본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP)의 혼합 균주, 그 배양액, 또는 이의 추출물은 MMP-1 단백질 발현을 억제하여 주름 개선 활성을 나타내는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 UVB 조사(144mJ/cm2)로 증가한 MMP-1 단백질 함량(Con.)을 기준으로 상기 2종 균주들의 혼합 배양액 추출물 처리군(시험예 3)은 1 및 2.5 mg/mL 농도에서 MMP-1 단백질 발현이 각각 39.02% 및 46.62% 감소되는 것을 확인한 바 있으며, 2종 균주의 혼합으로 MMP-1 단백질 발현이 현저하게 감소되는 피부 주름 개선에 대한 시너지 효과가 있음을 확인할 수 있었다(도 6 참조). In addition, in the cosmetic composition of the present invention, the Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum ) SDCM 1002 (accession number KCTC 14013BP) and Saccharomyce cerevisiae (Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 (deposit A mixed strain of No. KCTC 14015BP), a culture solution thereof, or an extract thereof is characterized in that it exhibits anti-wrinkle activity by inhibiting MMP-1 protein expression. In a preferred embodiment of the present invention , based on the MMP-1 protein content (Con.) increased by UVB irradiation (144mJ/cm 2 ), the mixed culture medium extract treatment group (Test Example 3) of the two strains was 1 and 2.5 mg/ It was confirmed that MMP-1 protein expression was reduced by 39.02% and 46.62%, respectively, at mL concentration, and it was confirmed that the mixture of the two strains has a synergistic effect on skin wrinkle improvement in which MMP-1 protein expression is significantly reduced. There was (see Fig. 6).
또한, 본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP)의 혼합 균주, 그 배양액, 또는 이의 추출물은 히알루론산 합성을 촉진하여 피부 보습 활성을 나타내는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 상기 2종 균주 혼합 배양액 추출물 처리시 히알루론산의 생성이 현저하게 증가되는 시너지 효과가 있음을 확인할 수 있었으며, 이러한 효과는 양성대조군 대비 유사한 효과임을 확인할 수 있었다.(도 8 참조). In addition, in the cosmetic composition of the present invention, the Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum ) SDCM 1002 (accession number KCTC 14013BP) and Saccharomyce cerevisiae (Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 (deposit A mixed strain of No. KCTC 14015BP), a culture solution thereof, or an extract thereof is characterized in that it exhibits skin moisturizing activity by promoting the synthesis of hyaluronic acid. In a preferred embodiment of the present invention, it was confirmed that there was a synergistic effect of remarkably increasing the production of hyaluronic acid upon treatment of the mixed culture medium extract of the two strains, and this effect was confirmed to be a similar effect compared to the positive control group. Reference).
또한, 본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP)의 혼합 균주, 그 배양액, 또는 이의 추출물은 피부 재생에 우수한 효과가 있는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 상기 2종 균주 혼합 배양액 추출물 처리군(시험예 3)은 1 mg/mL 농도에서 147.70% 개선된 피부 재생 효과가 측정되었고, 2.5 mg/mL 농도에서 169.76% 개선된 피부 재생 효과가 측정되어, 이들 2종 균주의 혼합으로 상처 치유 및 피부 재생에 대한 시너지 효과가 있음을 확인할 수 있었다(도 10 참조). In addition, in the cosmetic composition of the present invention, the Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum ) SDCM 1002 (accession number KCTC 14013BP) and Saccharomyce cerevisiae (Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 (deposit The mixed strain of No. KCTC 14015BP), the culture solution, or an extract thereof is characterized in that it has an excellent effect on skin regeneration. In a preferred embodiment of the present invention, the two strains mixed culture solution extract treatment group (Test Example 3) had an improved skin regeneration effect of 147.70% at a concentration of 1 mg/mL, and 169.76% improved skin at a concentration of 2.5 mg/mL. The regeneration effect was measured, and it was confirmed that the mixture of these two strains had a synergistic effect on wound healing and skin regeneration (see FIG. 10).
또한, 본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP)의 혼합 균주, 그 배양액, 또는 이의 추출물은 여드름 원인균인 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 및 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)를 사멸시켜 세균성 여드름에 대한 항여드름 활성을 나타내는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 상기 2종 균주의 혼합 배양액 추출물이 락토바실러스 플란타룸 단독 균주와 유사한 항균 활성을 갖는 것으로 관찰되었고, 양성대조군에 비해 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 균주(KCTC 1917)에 대해 더욱 우수한 항균 활성을 갖는 것으로 조사되었다.In addition, in the cosmetic composition of the present invention, the Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum ) SDCM 1002 (accession number KCTC 14013BP) and Saccharomyce cerevisiae (Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 (deposit No. KCTC 14015BP), the culture solution, or an extract thereof kills the acne causative bacteria Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus aureus to have anti-acne activity against bacterial acne. It is characterized by showing. In a preferred embodiment of the present invention, it was observed that the mixed culture medium extract of the two strains had antibacterial activity similar to that of the Lactobacillus plantarum single strain, and Staphylococcus epidermidis strain (KCTC) compared to the positive control group. 1917) was investigated to have better antimicrobial activity.
본 발명의 화장료 조성물은 식용 가능한 김치 및 막걸리 소재에서 유래한 유산균 및 효모 균주로, 인체에 해가 없으며, 그 첨가로 인해 화장품의 물질의 품질을 손상하지 않으므로 화장료 조성물에 포함되어 사용되는데 적합하다. 특히, 본 발명의 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 균주 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 혼합 배양액 추출물은 우수한 내산성 및 내담즙성이 있고, 세포독성이 없으며, 멜라닌 생성을 직접적으로 억제하여 피부 미백에 효과가 있으며, MMP-1 단백질의 발현을 억제하여 피부 주름 개선에 효과가 있고, 피부 세포에서 히알루론산 생성을 효과적으로 증가시켜 피부 보습과 관련된 용도로 매우 효과적으로 사용할 수 있으며, 피부 재생을 촉진하고, 여드름 원인균의 생장을 효과적으로 억제하는 기능이 있으므로, 기능성 화장료 조성물에 포함되어 사용되는 것이 바람직하다.The cosmetic composition of the present invention is a lactic acid bacteria and yeast strain derived from edible kimchi and makgeolli materials, and is not harmful to the human body, and the addition thereof does not impair the quality of the cosmetic material, so it is suitable to be included in the cosmetic composition and used. In particular, the Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum )
본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 마스크팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The cosmetic composition of the present invention is a skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisture lotion, nutrition lotion, massage cream, nutrition cream, moisture cream, hand cream, foundation, essence, nutrition essence, mask pack, It may be prepared in any one formulation selected from soap, cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion, and body cleanser, but is not limited thereto.
본 발명의 상기 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면 활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The cosmetic composition of the present invention may additionally include one or more cosmetically acceptable carriers blended in general skin cosmetics, and as common ingredients, for example, oil, water, surfactant, moisturizer, lower alcohol, thickener , A chelating agent, a colorant, a preservative, a fragrance, and the like may be appropriately blended, but are not limited thereto.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 화장료 조성물의 제형에 따라 다양하다.The cosmetically acceptable carrier included in the cosmetic composition of the present invention varies depending on the formulation of the cosmetic composition.
본 발명의 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.When the formulation of the present invention is an ointment, paste, cream or gel, as a carrier component, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc, zinc oxide, etc. May be used, but is not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 등이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로하드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate, polyamide powder, etc. may be used as a carrier component. It may include a propellant such as locarbon, propane/butane or dimethyl ether, but is not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제 등이 이용될 수 있으며, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일 등이 이용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, a solubilizing agent or an emulsifying agent may be used as a carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, Propylene glycol, 1,3-butyl glycol oil, and the like may be used, and in particular, cottonseed oil, peanut oil, corn germ oil, olive oil, castor oil and sesame oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or fatty acid ester of sorbitan. May be used, but is not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a suspension, as a carrier component, a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol, an ethoxylated isostearyl alcohol, a suspending agent such as polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, micro Crystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar, or tracant may be used, but is not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more.
본 발명의 제형이 비누인 경우에는, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a soap, an alkali metal salt of a fatty acid, a fatty acid hemiester salt, a fatty acid protein hydrolyzate, isethionate, a lanolin derivative, an aliphatic alcohol, vegetable oil, glycerol, sugar, etc. are used as a carrier component. It may be, but is not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more.
본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017의 혼합 균주, 그 배양액, 또는 이의 추출물은 구체적으로는 건조 중량으로, 화장료 조성물 총 중량의 0.0001 중량% 내지 50 중량%로 포함될 수 있으며, 보다 구체적으로는 0.0005 중량% 내지 10 중량%로 포함될 수 있다. 상기 범위 내에서 피부 미백, 주름개선, 보습, 피부재생 및 항여드름에 대한 우수한 효능을 나타내는 이점이 있으며, 조성물의 제형이 안정화되는 이점이 있다. In the cosmetic composition of the present invention, the Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum )
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP)의 혼합 균주, 그 배양액, 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백, 주름개선, 보습, 피부 재생, 및 항여드름용 식품 조성물을 제공한다.According to another aspect of the present invention, the present invention is Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum ) SDCM 1002 (accession number KCTC 14013BP) and Saccharomyce cerevisiae (Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 ( It provides a food composition for skin whitening, wrinkle improvement, moisturizing, skin regeneration, and anti-acne, comprising a mixed strain of accession number KCTC 14015BP), a culture solution thereof, or an extract thereof as an active ingredient.
본 발명의 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP)의 혼합 균주, 그 배양액, 또는 이의 추출물은 우수한 내산성 및 내담즙성이 있고, 세포독성이 없으며, 멜라닌 생성을 직접적으로 억제하여 피부 미백에 효과가 있고, MMP-1 단백질의 발현을 억제하여 피부 주름 개선에 효과가 있으며, 피부 세포에서 히알루론산 생성을 효과적으로 증가시켜 피부 보습과 관련된 용도로 매우 효과적으로 사용할 수 있고, 피부 재생을 촉진하며, 여드름 원인균의 생장을 효과적으로 억제하는 기능이 있으므로, 기능성 식품 조성물로 유용하게 사용될 수 있다. 본 발명의 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP) 균주와 이의 피부 미백, 주름개선, 보습, 피부 재생, 및 항여드름 효과는 상기에서 설명한 바와 같다. 상기 식품 조성물은 건강기능식품의 형태로 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. A mixed strain of Lactobacillus plantarum subsp. plantarum of the present invention (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 (accession number KCTC 14013BP) and Saccharomyce cerevisiae (Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 (accession number KCTC 14015BP) , The culture medium, or its extract, has excellent acid resistance and bile resistance, has no cytotoxicity, is effective in skin whitening by directly inhibiting melanin production, and is effective in improving skin wrinkles by inhibiting the expression of MMP-1 protein. In addition, it can be used very effectively for purposes related to skin moisturization by effectively increasing the production of hyaluronic acid in skin cells, promoting skin regeneration, and effectively inhibiting the growth of acne-causing bacteria, so it can be usefully used as a functional food composition. have. Lactobacillus plantarum subspecies plantarum of the present invention (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum ) SDCM 1002 (accession number KCTC 14013BP) and Saccharomyce cerevisiae (Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 (accession number KCTC 14015BP) strain and its objection Skin whitening, wrinkle improvement, moisturizing, skin regeneration, and anti-acne effects are as described above. The food composition may be used in the form of a health functional food, but is not limited thereto.
본 발명의 식품 조성물은 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP)의 혼합 균주, 그 배양액, 또는 이의 추출물과, 이들의 가공물의 형태로 포함될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 유효성분 이외에 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조첨가제를 포함할 수 있다.The food composition of the present invention is Lactobacillus plantarum subsp. plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 (accession number KCTC 14013BP) and Saccharomyce cerevisiae (Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 (accession number KCTC 14015BP) It may be included in the form of a mixed strain of, the culture solution, or an extract thereof, and a processed product thereof. In addition, the composition may include food additives that are acceptable food additives in addition to the active ingredient.
본 발명에 있어서, "식품 보조첨가제"란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품 보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품 보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the term "food supplementary additive" refers to a component that can be added auxiliary to food, and is added to the preparation of health functional foods of each formulation, and can be appropriately selected and used by those skilled in the art. Examples of food supplements include various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavoring agents such as synthetic flavors and natural flavoring agents, coloring agents and fillers, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloid thickeners. , pH regulators, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonates used in carbonated beverages, etc. are included, but the types of the food additives of the present invention are not limited by the above examples.
본 발명의 식품 조성물에는 건강기능식품이 포함될 수 있다. 본 발명에 있어서, "건강기능식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법으로 제조 가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. The food composition of the present invention may contain a health functional food. In the present invention, "health functional food" refers to food manufactured and processed in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids and pills using raw materials or ingredients having useful functions for the human body. Here, the term "functionality" refers to obtaining useful effects for health purposes such as controlling nutrients or physiological effects on the structure and function of the human body. The health functional food of the present invention can be prepared by a method commonly used in the art, and during the production, raw materials and ingredients commonly added in the art may be added to prepare it.
또한, 상기 건강기능식품의 제형 또한 건강기능식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 식용 유산균 및 효모균을 원료로 하여 식품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 우수한 피부 미백, 주름개선, 보습, 피부 재생, 및 항여드름 활성을 나타내므로 피부 상태 개선 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취할 수 있다.In addition, the formulation of the health functional food may be prepared without limitation as long as it is a formulation recognized as a health functional food. The food composition of the present invention can be prepared in various forms, and unlike general drugs, it has the advantage of not having side effects that may occur when taking food for a long time by using edible lactic acid bacteria and yeast bacteria as raw materials, and has excellent skin whitening and wrinkles. Since it shows improvement, moisturizing, skin regeneration, and anti-acne activity, it can be taken as an adjuvant to enhance the effect of improving skin condition.
본 발명의 건강기능식품이 취할 수 있는 형태에는 제한이 없으며, 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있고, 기능성 식품 등 당업계에 알려진 용어와 혼용하여 사용할 수 있다. 아울러 본 발명의 건강기능식품은 당업자의 선택에 따라 식품에 포함될 수 있는 적절한 기타 보조 성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다. 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명에 따른 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP)의 혼합 균주, 그 배양액, 또는 이의 추출물을 주성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 동물을 위한 사료로 이용되는 식품도 포함된다.There is no limitation on the form that the health functional food of the present invention can take, and may include all foods in a conventional sense, and may be used interchangeably with terms known in the art such as functional foods. In addition, the health functional food of the present invention can be prepared by mixing appropriate other auxiliary ingredients and known additives that may be included in the food according to the choice of a person skilled in the art. Examples of foods that can be added include meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gum, dairy products including ice cream, various soups, beverages, tea, drinks, alcoholic beverages, and Vitamin complexes, etc., and Lactobacillus plantarum subsp. plantarum according to the present invention, SDCM 1002 (accession number KCTC 14013BP) and Saccharomyce cerevisiae (Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 (deposit No. KCTC 14015BP) can be prepared by adding to juice, tea, jelly, juice, etc. prepared using a mixed strain, the culture solution, or an extract thereof as a main component. It also includes foods used as feed for animals.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:The features and advantages of the present invention are summarized as follows:
(a) 본 발명은 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP)의 혼합 균주, 그 배양액, 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백, 주름개선, 보습, 피부 재생, 및 항여드름용 조성물을 제공한다.(a) The present invention Lactobacillus Planta room subspecies Planta room (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 ( accession number: KCTC 14013BP) and the access Sergio busy in Saccharomyces Rome (Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 (accession number: KCTC 14015BP) It provides a composition for skin whitening, wrinkle improvement, moisturization, skin regeneration, and anti-acne comprising a mixed strain of, the culture solution, or an extract thereof as an active ingredient.
(b) 본 발명의 상기 혼합 균주, 그 배양액, 또는 이의 추출물은 우수한 내산성 및 내담즙성이 있고, 세포독성이 없으며, 멜라닌 생성을 직접적으로 억제하여 피부 미백에 효과가 있고, MMP-1 단백질의 발현을 억제하여 피부 주름 개선에 효과가 있으며, 피부 세포에서 히알루론산 생성을 효과적으로 증가시켜 피부 보습과 관련된 용도로 매우 효과적으로 사용할 수 있고, 피부 재생을 촉진하며, 여드름 원인균의 생장을 효과적으로 억제하는 우수한 효과가 있으므로 화장품, 식품, 약제학 분야에서 유용하게 이용 가능하다. (b) The mixed strain of the present invention, its culture medium, or its extract has excellent acid resistance and bile resistance, has no cytotoxicity, is effective in skin whitening by directly inhibiting melanin production, and It is effective in improving skin wrinkles by suppressing the expression, and it can be used very effectively for purposes related to skin moisturization by effectively increasing the production of hyaluronic acid in skin cells, promoting skin regeneration, and effectively inhibiting the growth of acne-causing bacteria. Therefore, it can be usefully used in cosmetics, food, and pharmaceutical fields.
(c) 또한, 본 발명의 조성물은 식용 가능한 유산균 및 효모에서 분리된 물질로, 인체에 매우 안전할 뿐만 아니라, 안정성도 매우 탁월하다.(c) In addition, the composition of the present invention is a material separated from edible lactic acid bacteria and yeast, and is not only very safe for the human body, but also has excellent stability.
도 1은 pH 2, pH 2.5, 및 pH 3 조건에서 시간 경과에 따른 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP) 균주의 세포 생존율을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 2는 담즙산염 농도 변화에 따른 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP) 균주의 세포 생존율을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 3은 마우스 흑색종 세포(B16F10)에서 SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP) 균주와 이들의 혼합 균주 처리에 따른 세포 생존율을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 4는 마우스 흑색종 세포(B16F10)에서 SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP) 균주와 이들의 혼합 균주 처리에 따른 멜라닌 함량 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 5는 인간 피부섬유아세포(NHDF, normal human dermal fibroblasts)에서 SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP) 균주와 이들의 혼합 균주 처리에 따른 세포 생존율을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 6은 인간 피부섬유아세포(NHDF, normal human dermal fibroblasts)에서 SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP) 균주와 이들의 혼합 균주 처리에 따른 MMP-1 단백질의 발현 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 7은 인간각질형성세포(HaCaT)에서 SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP) 균주와 이들의 혼합 균주 처리에 따른 세포 생존율을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 8은 인간각질형성세포(HaCaT)에서 SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP) 균주와 이들의 혼합 균주 처리에 따른 히알루론산 생성량 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 9는 인간 피부섬유아세포(NHDF, normal human dermal fibroblasts)에서 SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP) 균주와 이들의 혼합 균주 처리에 따른 세포 생존율을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 10은 인간 피부섬유아세포(NHDF, normal human dermal fibroblasts)에서 SDCM 1002(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 SDCM 3017(기탁번호 KCTC 14015BP) 균주와 이들의 혼합 균주 처리에 따른 상처 재생 활성을 측정하여 나타낸 그래프 및 사진이다. 1 is a Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum ) SDCM 1002 (Accession No. KCTC 14013BP) and Saccharomyces servise over time under conditions of
Figure 2 is a Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum ) SDCM 1002 (accession number KCTC 14013BP) and Saccharomyce cerevisiae (Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 (accession number KCTC 14015BP) is a graph showing by measuring the cell viability of the strain.
3 is a graph showing the cell viability measured by treatment with SDCM 1002 (Accession No. KCTC 14013BP) and SDCM 3017 (Accession No. KCTC 14015BP) strains and a mixed strain thereof in mouse melanoma cells (B16F10).
4 is a graph showing changes in melanin content according to treatment with SDCM 1002 (Accession No. KCTC 14013BP) and SDCM 3017 (Accession No. KCTC 14015BP) strains and a mixed strain thereof in mouse melanoma cells (B16F10).
Figure 5 is a graph showing the cell viability measured according to the treatment of SDCM 1002 (accession number KCTC 14013BP) and SDCM 3017 (accession number KCTC 14015BP) strains and a mixed strain thereof in human dermal fibroblasts (NHDF). .
6 shows the expression change of MMP-1 protein according to the treatment of SDCM 1002 (Accession No. KCTC 14013BP) and SDCM 3017 (Accession No. KCTC 14015BP) strains and a mixed strain thereof in human skin fibroblasts (NHDF). This is a graph that was measured and shown.
7 is a graph showing the cell viability measured by treatment with SDCM 1002 (Accession No. KCTC 14013BP) and SDCM 3017 (Accession No. KCTC 14015BP) strains and a mixed strain thereof in human keratinocytes (HaCaT).
8 is a graph showing changes in hyaluronic acid production according to treatment with SDCM 1002 (Accession No. KCTC 14013BP) and SDCM 3017 (Accession No. KCTC 14015BP) strains and a mixed strain thereof in human keratinocytes (HaCaT).
FIG. 9 is a graph showing cell viability according to treatment of SDCM 1002 (Accession No. KCTC 14013BP) and SDCM 3017 (Accession No. KCTC 14015BP) strains and a mixed strain thereof in human skin fibroblasts (NHDF). .
Figure 10 is a graph showing the measurement of wound regeneration activity according to treatment of SDCM 1002 (accession number KCTC 14013BP) and SDCM 3017 (accession number KCTC 14015BP) strains and mixed strains thereof in human skin fibroblasts (NHDF) And pictures.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. Since these examples are for illustrative purposes only, the scope of the present invention is not to be construed as being limited by these examples.
실시예 1. 유산균 분리 및 동정Example 1. Isolation and identification of lactic acid bacteria
1-1. 분리 및 동정1-1. Separation and sympathy
김치 및 막걸리 1g(1ml)을 각각 정량하여 0.85% NaCl 9mL를 넣어 완전히 섞어주었다. 균질화된 혼합물을 0.85% NaCl에 희석하여 BCP 고체 배지에 도말한 후, 37℃에서 1~3일 배양하였다.1 g (1 ml) of kimchi and makgeolli were quantified, respectively, and 9 ml of 0.85% NaCl was added and thoroughly mixed. The homogenized mixture was diluted in 0.85% NaCl and plated on a BCP solid medium, followed by incubation at 37° C. for 1-3 days.
배양 후 노랗게 변한 단일 콜로니들을 분리하여 MRS(OXOID, UK)에 37℃에서 같은 배양 조건으로 배양하였다. Single colonies that turned yellow after cultivation were isolated and cultured in MRS (OXOID, UK) at 37° C. under the same culture conditions.
배양한 균주의 분자생물학적 동정을 위해 16S rRNA 또는 18S rRNA 시퀀싱을 518F/805R 및 ITS1/ITS4 프라이머를 사용하여 얼라인먼트(alignment) 하였다. NCBI GeneBank 데이터베이스에 등록된 균주들의 16S rRNA 혹은 18S rRNA 염기서열 상동성을 알아본 결과, 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸 ATCC14917(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum ATCC14917)와 100%, 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) VRI와 99.67%의 유사성을 보였다.For molecular biological identification of the cultured strains, 16S rRNA or 18S rRNA sequencing was performed using 518F/805R and ITS1/ITS4 primers. As a result of examining the 16S rRNA or 18S rRNA sequence homology of the strains registered in the NCBI GeneBank database, Lactobacillus plantarum subsp. plantarum ATCC14917 (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum ATCC14917) and 100%, Saccharomyces servi ( Saccharomyce cerevisiae ) showed 99.67% similarity to VRI.
상기 분리 유산균들을 각각 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002, 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주로 명명하고, 한국생명공학연구원 생물자원센터(KCTC)에 KCTC 14013BP, 및 KCTC 14015BP의 기탁번호로 기탁하였다.The isolated lactic acid bacteria were each named as Lactobacillus plantarum subsp.
1-2. 배양액 추출물이 제조1-2. The culture medium extract is prepared
MRS 브로쓰(Difco) 100mL에 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 균주(기탁번호 KCTC 14013BP) 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주(기탁번호 KCTC 14015BP)를 각각 접종하고 호기적 조건 아래서 30-37℃ 항온기에서 OD 600nm에서 1.0이 될 때까지 배양하여 배양물을 획득하였다. 배양액 10㎖를 4℃에서 4,000rpm으로 20분간 원심분리하여 상층액만을 모았다. 이렇게 얻은 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 배양액을 동결건조하고 분말형태로 제조하여 시험예 1의 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 균주 배양액 추출물과 시험예 2의 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주 배양액 추출물을 수득하였다. MRS broth (Difco) 100mL Lactobacillus Planta room subspecies Planta room (Lactobacillus plantarum subsp. Plantarum)
또한, 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 혼합 배양액을 상기와 추출방식과 동일하게 추출하여 시험예 3의 혼합 추출물을 수득하였다. In addition, Lactobacillus plantarum subspecies Plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum )
실시예 2. 내산성 및 내담즙 활성Example 2. Acid resistance and bile resistance
MRS 액체배지에 pH별, 담즙산염(bile salts) 농도별로 플라스크를 준비하였다(음성대조군: pH 7.2, w/o bile salts). 1M NaOH, 5M HCl 용액을 사용하여 각각의 배지에 pH를 측정하여 조절하고, 담즙산염 농도별로 정량하여 추가하였다. 이렇게 pH가 조절되고, 담즘산염이 추가된 배지에 나머지의 용량은 증류수로 정량한 후, 멸균하여 식히고, 실시예 1-1에서 분리 동정한 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 균주, 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 2종 균주를 클린 벤치 안에 넣었다. 15mL 새 튜브에 균주별, pH별, 담즙산염(bile salts) 농도별로 라벨링하여 준비하고, pH별, 담즙산염 농도별로 조제된 액체배지를 8~10 ml씩 각각 분주하였다.Flasks were prepared by pH and bile salts concentration in MRS liquid medium (negative control: pH 7.2, w/o bile salts). Using 1M NaOH and 5M HCl solution, the pH was measured and adjusted in each medium, and the bile salt concentration was quantified and added. In this way, the pH is adjusted, and the remaining capacity in the medium to which the damsmate is added is quantified with distilled water, sterilized and cooled, and the Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum )
균주별로 음성대조군(negative control), pH 2, pH 2.5, pH 3, 0.5% 담즙산염, 3% 담즙산염 조절된 MRS 배지에 각각 1% 농도로 접종하였다. Each strain was inoculated at a concentration of 1% in MRS medium with negative control,
충분히 볼텍스(vortex) 한 뒤, 9 mL 식염수에 pH별, 담즙산염 농도별로 2종 균주를 1 mL 섞어주어 희석 배수별로 준비하였다. 희석 배수별로 MRS 고체배지에 100 μL씩 떨어뜨려 충분히 건조되도록 도말하였다.After sufficiently vortexing, 1 mL of 2 strains were mixed for each pH and bile salt concentration in 9 mL saline, and prepared for each dilution factor. 100 μL of MRS solid medium for each dilution factor was dropped and spread to dry sufficiently.
충분히 볼텍스(vortex) 한 뒤, 37℃에서 pH 조건 변화의 경우에는 3시간 및 5시간 동안 배양하겠고, 담즙산염 농도 조건 변화의 경우에는 24시간 동안 배양하였다. 각각 3시간 및 5시간과, 24시간 배양 시간대에 배양기에서 꺼내 9mL 식염수에 pH별, 담즙산염 농도별로 2종 균주를 1mL 섞어주어 희석 배수별로 준비하고, 희석 배수별로 MRS 고체배지에 100μL씩 떨어뜨려 충분히 건조되도록 도말하는 작업을 반복하였다. 배양 후, 콜로니 카운팅(colony counting) 방법으로 생존율을 계산하였다.After sufficiently vortexing, incubation at 37° C. for 3 hours and 5 hours in case of a change in pH condition, and for 24 hours in case of a change in bile salt concentration condition. Take out of the incubator for 3 hours, 5 hours, and 24 hours incubation time,
[표 1][Table 1]
[표 2][Table 2]
실험 결과, 내산성의 경우, SDCM 1002 균주는 pH 2 조건에서 46.5%의 생존율을 보였고, SDCM 3017 균주는 47.3%의 생존율을 보였고, pH 2.5와 pH 3에서는 2종 균주 모두 89% 이상의 생존율을 보인 것으로 관찰되어 2종 균주 매우 우수한 내산성을 보였다. As a result of the experiment, in the case of acid resistance,
또한, 내담즙성의 경우, 담즙산염 0.5% 농도일 때 SDCM 1002 균주 및 SDCM 3017 모두 90% 이상의 생존율을 나타내었다. 또한, 담즙산염 3% 농도일 때에도 두 균주 모두 12% 내지 22%의 생존율을 나타내어 두 균주 모두 우수한 내담즙성 균주임을 확인할 수 있었다. In addition, in the case of bile resistance, when the concentration of bile salt was 0.5%, both
실시예 3. 생화학적 특성(API 테스트)Example 3. Biochemical properties (API test)
API 50CH 키트 및 API ZYM 키트를 이용하여 SDCM 1002 균주와 SDCM 3017의 생화학적 특성을 조사하였다. The biochemical properties of
먼저, API 50CH 키트는 [API 50CHB/E medium]의 뚜껑을 열고 배양된 SDCM 1002 균주와 SDCM 3017 균주의 균액을 취해 2 McFarland 정도로 탁도를 맞추어 주었다. 탁도를 맞춘 API 50CHB/E medium을 스트립의 튜브에 분주하고, 미네랄 오일(Mineral oil)을 첨가하여 37℃, 24시간 배양한 후, 결과를 판독하였다.First, the API 50CH kit opened the lid of [API 50CHB/E medium], took the
그리고, API ZYM 키트는 증류수나 식염수 2 mL 정도에 배양된 SDCM 1002 균주와 SDCM 3017 균주의 균액을 희석하여 5~6 McFarland 정도로 탁도를 맞추어 주었다. 인큐베이션 박스(Icubation box)를 준비하고 약 5mL의 멸균 증류수를 트레이에 부어서 수분을 유지하였다. 37℃, 24시간 배양한 후, ZYM A와 ZYM B 시약을 각각의 큐브에 한 방울씩 떨구고, 5분 정도 기다린 후 결과를 판독하였다.In addition, the API ZYM kit diluted the bacterial solutions of the
API 키트 분석결과, SDCM 1002 균주와 SDCM 3017 균주의 49종의 당 탄수화물 대사는 [표 3]에 정리하였고, 효소 특성은 [표 4]에 정리하여 나타내었다.As a result of API kit analysis, the metabolism of 49 kinds of sugar carbohydrates of the
[표 3][Table 3]
[표 4][Table 4]
실시예 4. 미백 활성Example 4. Whitening activity
본 발명의 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 배양액 혼합 추출물이 갖는 미백효과를 검증하기 위해, 선행문헌(Hosoi et al., 1985)에 보고된 방법을 수정하여 멜라닌 함량을 측정하였다. 먼저, 마우스 흑색종 세포(B16F10)를 접종하여 24시간 배양한 후, 상기 실시예 1-2에서 제조한 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 배양액액과 이들의 혼합 추출물을 1, 2.5, 및 5 mg/mL 농도로 희석한 시료와 α-멜라닌세포자극 호르몬(α-MSH, Alpha Melanocyte stimulating hormone) 100nM 농도를 처리한 후 72시간 동안 배양하였다. 이후, 배지를 제거하고, PBS(phosphate buffer saline)로 두 번씩 세척하였고, 멜라닌을 용해하기 위해, 1N의 NaOH 200μL를 첨가하고, 마이크로플레이트 리더를 사용하여 405㎚ 흡수 파장에서 멜라닌 함량을 측정하였다. 비교실험을 위해 알부틴(arbutin) 50 μg/mL 처리군을 양성대조군으로 사용하였다. 또한, 모든 실험은 3회 반복하여 측정되었다.In order to verify the whitening effect of the culture medium mixture extract of the Lactobacillus plantarum subsp.
그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 시험예 1의 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 균주 배양액 추출물, 시험예 2의 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주 배양액 추출물, 및 시험예 3의 2종 균주의 혼합 배양액 추출물의 처리는 2.5 mg/mL 농도까지 마우스 흑색종 세포(B16F10)에 독성을 나타내지 않는 것을 확인할 수 있었으며, 상기 범위에서 양성 대조군인 알부틴 처리군과 유사한 세포 생존율을 나타내어 세포독성이 없는 것을 확인할 수 있었다.As a result, as shown in Figure 3, Lactobacillus plantarum subspecies plantarum of Test Example 1 (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum )
한편, 단일 균주 배양액을 처리한 시험군들과는 달리, 본 발명의 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 혼합 배양액 추출물을 처리한 시험군에서는 멜라닌 생성량이 농도 의존적으로 크게 감소하는 양상을 확인할 수 있었다. On the other hand, unlike the test groups treated with a single strain culture, the Lactobacillus plantarum subspecies plantarum of the present invention (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum )
구체적으로, 도 4를 참조하면, α-멜라닌세포자극 호르몬 처리로 증가한 멜라닌 함량(Con.)을 기준으로, 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 균주 배양액 추출물 처리군(시험예 1)은 1 및 2.5 mg/mL 농도에서 멜라닌 함량이 각각 17.39% 및 51.36% 감소되었고, 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주 배양액 추출물 처리군(시험예 2)은 1 및 2.5 mg/mL 농도에서 멜라닌 함량이 각각 15.95% 및 55.15% 감소되었다. 이에 반해 이들 균주의 혼합 배양액 추출물 처리군(시험예 3)은 1 및 2.5 mg/mL 농도에서 멜라닌 함량이 각각 49.50% 및 82.32% 감소되어 2종 균주의 혼합으로 멜라닌 함량이 현저하게 감소되는 피부 미백에 대한 시너지 효과가 있음을 확인할 수 있었다. 이러한 시너지 효과는 양성대조군으로 사용된 알부틴(50 μg/mL)의 멜라닌 함량 감소율 70.66% 대비 유사한 효과임을 확인할 수 있었다.Specifically, referring to FIG. 4, based on the increased melanin content (Con.) by α-melanocyte stimulating hormone treatment, Lactobacillus plantarum subsp. plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum)
상기와 같은 결과를 통해, 본 발명의 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 배양액 혼합 추출물은 피부 세포에서 멜라닌 생성을 효과적으로 억제하여 피부 미백과 관련된 용도로 효과적으로 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다. Through the above results, the Lactobacillus plantarum subspecies plantarum of the present invention (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum )
실시예 5. 주름 개선 활성Example 5. Wrinkle improvement activity
5-1. 세포 독성5-1. Cytotoxicity
상기 실시예 1-2에서 제조한 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 배양액 추출물과 이들 혼합 배양액 추출물이 인간 피부섬유아세포(NHDF, normal human dermal fibroblasts)의 생장에 미치는 효과를 아래와 같은 방법으로 확인하였다. Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum )
우선, 10% FBS(fetal bovine serum, Cambrex)가 포함된 전용 배지인 DMEM(Dulbeccos modified Eagles medium) 배지에 피부섬유아세포를 40mm 크기의 세포 배양 접시에 1.2×105 농도로 접종한 후 24시간 동안, 37℃, 5% CO2 습윤 조건에서 배양하였다. 이후, 배지를 제거하고 300㎕ 용량의 PBS를 가하고, 무혈청 DMEM 배지로 희석한 시험예 1 내지 3의 배양액 추출물을 농도별(1, 2.5, 및 5 ㎎/mL)로 처리하고 72시간 동안 배양하였다. 72시간 후, 1 mg/mL의 MTT를 처리하고 2시간 후, 세포에 MTT 처리로 인해 생성된 포마잔(formazan)을 DMSO로 녹여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. First, skin fibroblasts were inoculated in a 40 mm cell culture dish at a concentration of 1.2×10 5 in DMEM (Dulbeccos modified Eagles medium), a dedicated medium containing 10% FBS (fetal bovine serum, Cambrex), and then for 24 hours. , 37 ℃, 5% CO 2 was cultured in wet conditions. Thereafter, the medium was removed, 300 µl of PBS was added, and the culture solution extracts of Test Examples 1 to 3 diluted with serum-free DMEM medium were treated at different concentrations (1, 2.5, and 5 mg/mL) and cultured for 72 hours. I did. After 72 hours, 1 mg/mL of MTT was treated, and after 2 hours, formazan produced by MTT treatment was dissolved in DMSO and absorbance was measured at 570 nm.
그 결과, 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 배양액 추출물과 이들 혼합 배양액 추출물을 인간 피부섬유아세포에 처리한 경우, 처리 농도 1 및 2.5 mg/mL 농도에서 인간 피부섬유아세포의 세포 생존율에 크게 영향을 미치지 않는 것으로 확인하였다(도 5 참조). As a result, Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum )
3-2. MMP-1 단백질 합성 저해3-2. Inhibition of MMP-1 protein synthesis
40mm 세포 배양 접시에 2 mL의 DMEM 배양액을 넣고, 인간섬유아세포를 약 1.2x105 농도로 접종한 후, 37℃, 5% CO2 환경에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 실시예 1-2에서 제조된 시험예 1 내지 3의 배양액 추출물(각각 1, 및 5 mg/mL)을 포함한 배지로 교체하여 3일간 배양하였다. 이후 배양액을 회수(harvest)하여 4℃, 7,500 rpm 환경에서 5분간 원심분리(centrifuge)하여 ELISA 방법을 이용하여 MMP-1(Human Total MMP-1 kit, R&D Systems, Inc., Minneapolis, MN, USA)의 단백질 발현량 변화를 확인하였다. 비교실험을 위해 TGF-β1 처리군(10 ng/mL)을 양성대조군으로 사용하였다. 또한, 모든 실험은 3회 반복하여 측정되었다.2 mL of DMEM culture solution was added to a 40 mm cell culture dish, and
실험 결과, 단일 균주 배양액을 처리한 시험군들의 MMP-1 단백질 생성 억제 효과는 크지 않은 반면, 본 발명의 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 혼합 배양액 추출물을 처리한 시험군에서는 MMP-1 단백질 생성량이 농도 의존적으로 크게 감소하는 양상을 확인할 수 있었다. As a result of the experiment, the effect of inhibiting MMP-1 protein production of the test groups treated with a single strain culture medium was not significant, whereas the Lactobacillus plantarum subsp. plantarum of the present invention was not large. In the test group treated with the mixed culture extract of the
구체적으로, 도 6을 참조하면, UVB 조사(144 mJ/cm2)로 증가한 MMP-1 단백질 함량(Con.)을 기준으로, 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 균주 배양액 추출물 처리군(시험예 1)은 1 및 2.5mg/㎖ 농도에서 MMP-1 단백질 발현이 각각 3.17% 및 11.57%로 감소되었고, 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주 배양액 추출물 처리군(시험예 2)은 1 및 2.5 mg/mL 농도에서 MMP-1 단백질 발현이 각각 4.13% 및 12.74%로 감소되었다. 이에 반해 이들 균주의 혼합 배양액 추출물 처리군(시험예 3)은 1 및 2.5 mg/mL 농도에서 MMP-1 단백질 발현이 각각 39.02% 및 46.62% 감소되어 2종 균주의 혼합으로 MMP-1 단백질 발현이 현저하게 감소되는 피부 주름 개선에 대한 시너지 효과가 있음을 확인할 수 있었다. 이러한 시너지 효과는 양성대조군으로 사용된 TGF-β1 10 ng/mL 처리군의 MMP-1 단백질 발현 감소율 49.48% 대비 유사한 효과임을 확인할 수 있었다.Specifically, referring to Figure 6, based on the MMP-1 protein content (Con.) increased by UVB irradiation (144 mJ / cm 2 ), Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum ) SDCMCM In the 1002 strain culture solution extract treatment group (Test Example 1), MMP-1 protein expression was reduced to 3.17% and 11.57%, respectively, at concentrations of 1 and 2.5 mg/ml, and
상기와 같은 결과를 통해, 본 발명의 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 배양액 혼합 추출물은 피부 세포에서 MMP-1 단백질 발현을 효과적으로 억제하여 피부 주름 개선과 관련된 용도로 효과적으로 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다. Through the above results, the Lactobacillus plantarum subspecies plantarum of the present invention (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum )
실시예 6. 보습 활성Example 6. Moisturizing activity
본 발명의 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 혼합 배양액 추출물의 피부 보습 효과를 검증하기 위해 히알루론산(Hyaluronan) 합성 촉진에 미치는 영향을 실험하였다.Hyaluronic acid to verify the skin moisturizing effect of the mixed culture extract of the Lactobacillus plantarum subsp.
히알루론산(HA, Hyaluronan, Hyaluronic acid)은 주로 표피 각질형성세포와 진피 섬유아세포에 의해 합성되며, 수분과 결합하여 세포가 정상적으로 활동할 수 있는 환경을 조성하는 중요한 역할을 하는 물질이다. 피부에서 히알루론산의 감소는 피부 탄력 저하 및 수분 함유량 감소의 직접적인 원인 중 하나이다. 따라서 본 실시예에서는 인간각질형성세포 내에서 히알루론산의 생성량을 확인하였다. Hyaluronic acid (HA, Hyaluronan, Hyaluronic acid) is mainly synthesized by epidermal keratinocytes and dermal fibroblasts, and is a substance that plays an important role in creating an environment in which cells can function normally by binding with water. The decrease in hyaluronic acid in the skin is one of the direct causes of the decrease in skin elasticity and moisture content. Therefore, in this example, the amount of hyaluronic acid produced in human keratinocytes was confirmed.
먼저, 인간각질형성세포를 24 well 세포배양 접시에 1 mL의 배양액을 넣고 약 1×105 cells/mL의 농도로 세포를 접종한 후, 37℃, 5% CO2 환경에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 실시예 1-2에서 제조한 시험예 1 내지 3의 추출물을 각각 1, 2.5, 및 5 mg/mL의 농도로 첨가하고, 24시간 배양하였다. 이후 배양액을 회수(harvest)하여 4℃, 7,500rpm 환경에서 5분간 원심분리(centrifuge)한 뒤, ELISA 방법을 이용하여 Hyaluronan(Hyaluronan kit, R&D Systems, Inc., Minneapolis, MN, USA)의 발현량을 확인하였다. 비교실험을 위해, 시료 무처리군을 정상대조군(Nor, 100% DMEM)으로 사용하고, 레티노산(RA, retinoic acid) 처리군을 양성대조군으로 사용하였다. 또한, 모든 실험은 3회 반복하여 측정되었다.First, human keratinocytes were inoculated with 1 mL of culture solution in a 24 well cell culture dish, and the cells were inoculated at a concentration of about 1×10 5 cells/mL, and then cultured for 24 hours in an environment of 37°C and 5% CO 2. . Thereafter, the extracts of Test Examples 1 to 3 prepared in Example 1-2 were added at concentrations of 1, 2.5, and 5 mg/mL, respectively, and cultured for 24 hours. Thereafter, the culture solution was harvested and centrifuged for 5 minutes in an environment at 4°C and 7,500 rpm, and then the expression level of Hyaluronan (Hyaluronan kit, R&D Systems, Inc., Minneapolis, MN, USA) using an ELISA method. Was confirmed. For the comparative experiment, the sample untreated group was used as a normal control (Nor, 100% DMEM), and a retinoic acid (RA, retinoic acid) treated group was used as a positive control. In addition, all experiments were measured by repeating 3 times.
실험 결과, 도 7을 참조하면, 정상대조군을 제외한 모든 처리군에서 세포 생존율이 다소 감소하였으나, SDCM 1002 또는 SDCM 3017 균주의 단일 추출물 처리에 비해 이들의 혼합 추출물 처리에서 세포 생존율이 더 높은 경향이 관찰되었다. As a result of the experiment, referring to FIG. 7, the cell viability was slightly decreased in all treatment groups except for the normal control group, but the cell viability was observed to be higher in the mixed extract treatment compared to the single extract treatment of
한편, 시험예 1 및 2의 단일 균주 배양액을 처리한 시험군들과는 달리, 본 발명의 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 혼합 배양액 추출물을 처리한 시험군에서는 히알루론산(Hyaluronan)의 생성이 농도 의존적으로 증가하는 양상을 확인하였다. On the other hand, unlike the test groups treated with the single strain culture solution of Test Examples 1 and 2, the Lactobacillus plantarum subspecies plantarum of the present invention (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum )
구체적으로, 도 8을 참조하면, 시료 무처리 정상대조군 대비 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 균주 배양액 추출물 처리군(시험예 1)은 1 및 2.5 mg/mL 농도에서 히알루론산 생성이 각각 2.83% 및 36.99% 증가하였고, 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주 배양액 추출물 처리군(시험예 2)은 1 및 2.5 mg/mL 농도에서 히알루론산 생성이 각각 4.12% 및 13.51% 증가하였다. 이에 반해 본 발명의 상기 2종 균주 혼합 배양액 추출물 처리군(시험예 3)은 히알루론산 생성이 1 mg/mL 농도에서 15.59% 증가하였고, 2.5 mg/mL 농도에서 히알루론산 생성이 107.42% 증가되어 2종 균주의 혼합으로 히알루론산의 생성이 현저하게 증가되는 시너지 효과가 있음을 확인할 수 있었다. 이러한 시너지 효과는 양성대조군(RA, retinoic acid 1μM: 히알루론산 생성 증가율 117.36%) 대비 유사한 효과임을 확인할 수 있었다.Specifically, referring to FIG. 8, Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum )
상기와 같은 결과를 통해, 본 발명의 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 균주 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 혼합 배양액 추출물은 피부 세포에서 히알루론산 생성을 효과적으로 증가시켜 피부 보습과 관련된 용도로 매우 효과적으로 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다. Through the results as described above, the Lactobacillus plantarum subspecies plantarum of the present invention (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum )
실시예 7. 피부 재생 활성Example 7. Skin regeneration activity
본 발명의 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 혼합 배양액 추출물의 피부 재생 효과를 검증하기 위해 상처(Wound) 제작용 인서트(insert)를 사용하여 피부섬유아세포(NHDF, normal human dermal fibroblasts)를 24 웰(well) 배양접시에 분주 후 24시간 배양하였다.In order to verify the skin regeneration effect of the mixed culture extract of the Lactobacillus plantarum subsp.
24 웰(well) 배양접시에 검체를 포함한 세럼 프리(serum free) 배지 1 ml을 처리하여 현미경으로 각 웰(well)을 촬영한 후 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 24시간 배양하였다. 24시간 배양한 후 현미경으로 각 웰(well)을 촬영하고 검체 처리 직후와 24시간 배양 후의 상처 면적을 비교하여 세포재생률을 확인하였다. 비교실험을 위해, 정상대조군(Nor, 100% DMEM)과 대조군(Con, 용매 + 시료 무첨가 배지)을 사용하였고, 알란토인(AT, Allantoin, 10 μg/mL) 처리군을 양성대조군으로 사용하였다. 또한, 모든 실험은 3회 반복하여 측정되었다. A 24 well culture dish was treated with 1 ml of a serum free medium containing a sample, and each well was photographed under a microscope, and then cultured in a 37°C, 5% CO 2 incubator for 24 hours. After culturing for 24 hours, each well was photographed under a microscope, and the area of the wound immediately after the sample treatment and after the culture for 24 hours was compared to confirm the cell regeneration rate. For the comparative experiment, a normal control group (Nor, 100% DMEM) and a control group (Con, solvent + sample-free medium) were used, and allantoin (AT, Allantoin, 10 μg/mL) treatment group was used as a positive control group. In addition, all experiments were measured by repeating 3 times.
실험 결과, 도 9를 참조하면, 정상대조군과 알란토인 처리군을 제외한 모든 처리군에서 세포 생존율이 다소 감소하였으나, 1 및 2.5 mg/mL 농도에서 심각한 세포독성은 관찰되지 않았다. As a result of the experiment, referring to FIG. 9, the cell survival rate was slightly decreased in all treatment groups except for the normal control group and the allantoin treatment group, but no serious cytotoxicity was observed at the concentrations of 1 and 2.5 mg/mL.
한편, 용매 및 시료 무첨가 배지를 처리한 대조군(Con) 대비 시험예 1 내지 3의 단일 및 혼합 균주 배양액을 처리한 시험군 모두에서 상처 치유 및 피부 재생 효과가 우수한 것으로 나타났는데, 본 발명의 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 혼합 배양액 추출물의 상처 치유 및 피부 재생 효과가 가장 우수한 것으로 확인되었다. On the other hand, it was found that the wound healing and skin regeneration effects were excellent in both the test groups treated with the single and mixed strain culture solutions of Test Examples 1 to 3 compared to the control group (Con) treated with a solvent and sample-free medium, Lactobacillus of the present invention. Planta Planta subspecies Room Room (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum)
구체적으로, 도 10을 참조하면, 용매 및 시료 무첨가 배지를 처리한 대조군(Con) 대비 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 균주 배양액 추출물 처리군(시험예 1)은 1 및 2.5mg/㎖ 농도에서 각각 44.69% 및 87.43% 개선된 피부 재생 효과가 측정되었고, 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주 배양액 추출물 처리군(시험예 2)은 1 및 2.5 mg/mL 농도에서 각각 58.31% 및 70.25% 개선된 피부 재생 효과가 측정되었다. 이에 반해 본 발명의 상기 2종 균주 혼합 배양액 추출물 처리군(시험예 3)은 1 mg/mL 농도에서 147.70% 개선된 피부 재생 효과가 측정되었고, 2.5 mg/mL 농도에서 169.76% 개선된 피부 재생 효과가 측정되어, 이들 2종 균주를 혼합하여 사용함에 따라 상처 치유 및 피부 재생에 대한 시너지 효과가 있음을 확인할 수 있었다. 이러한 시너지 효과는 양성대조군(Allantoin, 10 μg/mL: 피부 재생 증가율 68.65%) 대비 현저하게 개선된 효과임을 확인할 수 있었다. Specifically, referring to FIG. 10, Lactobacillus plantarum subsp. plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum)
실시예 8. 여드름 원인균에 대한 항균 활성Example 8. Antibacterial activity against acne causative bacteria
여드름 원인균으로 알려진 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 균주(KACC 13234 및 KCTC 1917), 및 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus KCTC 3881) 균주를 대상으로 여드름 유발 원인균의 생장 억제 효능을 검증하였다. Staphylococcus epidermidis strains (KACC 13234 and KCTC 1917), known as acne causative bacteria , and Staphylococcus aureus KCTC 3881 strains were tested for the growth inhibition efficacy of acne-causing bacteria. .
[표 5][Table 5]
상기 균주들은 상기 [표 5]의 영양배지(Nutrient Broth) 용액을 제조하여 121℃에서 15분간 멸균한 후 각각의 배양된 병원성 균주 1 백금이를 영양배지 용액 (10 mL)에 접종하고, 진탕배양기(shaking incubator)에서 24~48 시간 배양하여 항균실험을 위한 균주를 준비하였다.The strains prepared the nutrient broth solution of [Table 5], sterilized at 121°C for 15 minutes, and then inoculated each cultured
병원성 미생물의 성장을 억제하는 항균 활성을 측정하기 위해, 멸균된 배지에 배양된 균주를 1 X 106 cfu/mL 농도로 각각을 접종하였다. 상기 실시예 1-2에서 제조된 시험예 1 내지 3의 균주 배양액 추출물을 0.25 μL syringe filter를 사용하여 여과한 후, 멸균한 페이퍼 디스크(직경 8 mm)에 50 μL 씩 두 번 점적한 후 충분히 건조시켰다. 추출물이 완전히 건조된 다음 평판 배지에 치상하여 25~37℃로 유지하여 24~48 시간 후, 페이퍼 디스크 주변의 투명도(clear zone)를 측정하여 항균 활성을 조사하였다. 상기 추출물들의 항균력을 비교 검증하기 위해, 시중에서 상용되는 페녹시에탄올을 양성대조군으로 사용하였다.In order to measure the antimicrobial activity of inhibiting the growth of pathogenic microorganisms, strains cultured in a sterilized medium were inoculated at a concentration of 1×10 6 cfu/mL. After filtering the strain culture solution extracts of Test Examples 1 to 3 prepared in Example 1-2 using a 0.25 μL syringe filter, 50 μL each was instilled on a sterilized paper disk (diameter 8 mm) twice, and then sufficiently dried. Made it. After the extract was completely dried, it was placed on a plate medium and maintained at 25 to 37°C. After 24 to 48 hours, the clear zone around the paper disk was measured to investigate the antibacterial activity. In order to compare and verify the antibacterial activity of the extracts, commercially available phenoxyethanol was used as a positive control.
[표 6][Table 6]
실험 결과, 상기 [표 6]을 참조하면, 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 균주의 배양액 추출물은 양성대조군과 유사한 항균 활성을 갖는 것으로 나타났으나, 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 배양액 추출물은 항균 활성이 없는 것으로 조사되었다. Experimental results, referring to the [Table 6], Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum )
또한, 본 발명의 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 균주 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 혼합 배양액 추출물은 락토바실러스 플란타룸 단독 균주와 유사한 항균 활성을 갖는 것으로 관찰되었고, 양성대조군에 비해 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 균주(KCTC 1917)에 대해 더욱 우수한 항균 활성을 갖는 것으로 조사되었다.In addition, the Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum )
상기와 같은 결과를 종합하면, 본 발명의 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸(Lactobacillus plantarum subsp. plantarum) SDCM 1002 균주 및 사카로마에세스 세르비지에(Saccharomyce cerevisiae) SDCM 3017 균주의 혼합 배양액 추출물은 우수한 내산성 및 내담즙성이 있고, 세포 독성이 없으며, 멜라닌 생성을 직접적으로 억제하여 피부 미백에 효과가 있으며, MMP-1 단백질의 발현을 억제하여 피부 주름 개선에 효과가 있고, 피부 세포에서 히알루론산 생성을 효과적으로 증가시켜 피부 보습과 관련된 용도로 매우 효과적으로 사용할 수 있으며, 피부 재생을 촉진하고, 여드름 원인균의 생장을 효과적으로 억제할 수 있음을 확인할 수 있었다. Summarizing the above results, the Lactobacillus plantarum subspecies plantarum (Lactobacillus plantarum subsp. plantarum )
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.As described above, a specific part of the present invention has been described in detail, and it is obvious that this specific technology is only a preferred embodiment for those of ordinary skill in the art, and the scope of the present invention is not limited thereto. Accordingly, it will be said that the substantial scope of the present invention is defined by the appended claims and their equivalents.
Claims (6)
상기 조성물은 멜라닌(Melanin) 생성을 억제하여 피부 미백 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 피부 미백, 주름개선, 보습, 피부 재생, 및 항여드름용 화장료 조성물.The method of claim 1,
The composition is a cosmetic composition for skin whitening, wrinkle improvement, moisturizing, skin regeneration, and anti-acne, characterized in that the composition exhibits skin whitening activity by inhibiting the production of melanin.
상기 조성물은 MMP-1 단백질 발현을 억제하여 주름 개선 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 피부 미백, 주름개선, 보습, 피부 재생, 및 항여드름용 화장료 조성물.The method of claim 1,
The composition is a cosmetic composition for skin whitening, wrinkle improvement, moisturizing, skin regeneration, and anti-acne, characterized in that the composition exhibits anti-wrinkle activity by inhibiting the expression of MMP-1 protein.
상기 조성물은 히알루론산 합성을 촉진하여 피부 보습 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 피부 미백, 주름개선, 보습, 피부 재생, 및 항여드름용 화장료 조성물.The method of claim 1,
The composition is a cosmetic composition for skin whitening, wrinkle improvement, moisturizing, skin regeneration, and anti-acne, characterized in that it exhibits skin moisturizing activity by promoting the synthesis of hyaluronic acid.
상기 조성물은 여드름 원인균인 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 및 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)를 사멸시켜 세균성 여드름에 대한 항여드름 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 피부 미백, 주름개선, 보습, 피부 재생, 및 항여드름용 화장료 조성물.The method of claim 1,
The composition is characterized by showing anti-acne activity against bacterial acne by killing Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus aureus, which are acne causative bacteria, skin whitening, wrinkle improvement, and moisturizing. , Skin regeneration, and cosmetic composition for anti-acne.
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2020
- 2020-09-23 KR KR1020200122749A patent/KR102244812B1/en active IP Right Grant
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