KR102006363B1

KR102006363B1 - 지질을 이용한 곰팡이의 동정 방법

Info

Publication number: KR102006363B1
Application number: KR1020170022831A
Authority: KR
Inventors: 김광표; 양성익; 조은민
Original assignee: 경희대학교 산학협력단
Priority date: 2017-02-21
Filing date: 2017-02-21
Publication date: 2019-08-01
Also published as: KR20180096296A

Abstract

본 발명의 일 실시예는 (a) 분석 대상 곰팡이의 지질을 추출하는 단계; 및 (b) 상기 추출된 지질의 질량 특성을 분석하는 단계;를 포함하는 곰팡이의 동정 방법을 제공한다.

Description

지질을 이용한 곰팡이의 동정 방법{A METHOD FOR IDENTIFICATION OF FUNGI USING LIPIDS}

본 발명은 곰팡이의 지질 패턴 분석을 통하여 곰팡이의 속, 종을 구분 할 수 있는 곰팡이 종의 정성 분석법에 관한 것이다.

생물학적 시료는 오염이나 변질로 인해 신속하고 정확하게 분석하는 것이 중요하다. 최근 질량분석기의 발달로 인해 생물학적 시료에 대한 신속하고 정확한 분석이 점차 용이해지고 있다.

곰팡이학 연구에 있어 질량분석기를 통한 분석법 개발은 매우 중요하다. 질병을 일으키는 곰팡이를 빠르고 정확하게 분석할 수 있다면 곰팡이 관련 질병을 신속하게 진단 및 치료할 수 있고, 질병의 확산을 방지하여 건강상의 위협을 최소화 할 수 있다.

질량 분석기 중 MALDI-TOF MS(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry)는 이온화원인 matrix를 사용하여 시료를 이온화 시켜 분석하는 질량 분석 장비로써 1980년대부터 지속적으로 발전해 왔다.

오늘날 MALDI-TOF MS는 생물 분자 탐지 및 동정에 널리 사용되고 있다. MALDI-TOF MS를 이용한 미생물의 동정은 신속하고 정확할 뿐만 아니라, 실험자가 다루기 쉽고, 처리 시간이 짧고 처리 비용이 저렴한 장점이 있다.

현재까지는 MALDI-TOF 장비를 이용하여 미생물을 동정할 때 단백질을 분석하였다. 하지만 단백질을 이용한 미생물 동정법은 몇몇 문제들이 존재한다. 단백질은 트립신 효소를 처리 하여 펩타이드화 한 후 분석해야 하므로 처리 시간이 소요될 뿐만 아니라, 복잡한 실험 과정에서 실험적 변이로 인해 실험 간 재현성이 저하될 수 있다. 또한 단백질은 변형이 매우 빠르며 다이나믹한 변화가 야기된다.

따라서, 좀 더 짧은 시간 동안 효율적으로 곰팡이를 동정하는 방법이 요구되며, 본 발명자들은 곰팡이 식별을 위한 수단으로서 곰팡이의 지질을 이용하여 곰팡이를 동정하는 새로운 방법을 도출하였다.

본 발명은 전술한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로, 본 발명의 하나의 목적은, 인지질 분석을 통한 새로운 곰팡이 동정법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 빠르고 간단한 곰팡이 인지질 분석을 위한 표준 분석법(SOP)을 제공하는 것이다.

본 발명의 일 측면에 따르면, (a) 분석 대상 곰팡이의 지질을 추출하는 단계; 및 (b) 상기 추출된 지질의 질량 특성을 분석하는 단계;를 포함하는 곰팡이의 동정 방법이 제공된다.

일 실시예에 있어서, 상기 (a) 단계에서 상기 지질은 인지질일 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 (b) 단계에서 말디 질량 분석을 통해 상기 지질의 질량 특성을 분석할 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 (b) 단계에서 상기 말디 질량 분석에 의해 산출된 지질의 질량 분석 데이터 및 기존의 데이터를 비교할 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 (b) 단계에서 상기 기존의 데이터는 상기 말디 질량 분석에 의해 산출된 질량 분석 데이터를 포함하는 데이터베이스에서 획득할 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 곰팡이는 아스퍼질러스 속(Aspergillus spp .), 페니실리움 속(Penicillium spp .), 알터나리아 속(Alternaria spp .), 및 후자리움 속(Fusarium spp.)으로 이루어진 군에서 하나 이상 선택될 수 있다.

본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 방법에 사용되는 말디 질량 분석에 의해 산출된 곰팡이 지질의 질량 분석 데이터를 포함하는 데이터베이스가 제공된다.

본 발명의 일 측면에 따르면, 곰팡이의 지질 특성을 분석함으로써 신속하고 정확하게 곰팡이를 동정할 수 있다.

본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

도 1은 지질을 이용한 곰팡이의 동정 방법을 도식화한 것이다.
도 2는 상이한 곰팡이 속(Aspergillus, Penicillium)에 대한 MALDI-TOF 분석 스펙트럼을 나타낸 것이다.
도 3은 Aspergillus 속의 6종의 곰팡이(Asp. versicolor , Asp. niger, Asp. sclerotorum, Asp. brasiliensis , Asp. terreus , Asp. clavatus)에 대한 PCA 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 Penicillium 속의 4종(Pen. chrysogenum , Pen. expansum , Pen. camemberti, Pen. ochrochrorem)에 대한 PCA 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 Aspergillus 및 Penicillium 속의 4종(Asp. niger, Asp. ochraceus , Pen. citrinum, Pen. expansum)에 대한 PCA 분석 결과를 나타낸 것이다.

본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.

다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.

수치 범위는 상기 범위에 정의된 수치를 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최대의 수치 제한은 낮은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 낮은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최소의 수치 제한은 더 높은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 높은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 수치 제한은 더 좁은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼, 더 넓은 수치 범위 내의 더 좋은 모든 수치 범위를 포함할 것이다.

이하, 본 발명의 실시예를 상세히 기술하나, 하기 실시예에 의해 본 발명이 한정되지 아니함은 자명하다.

본 발명의 일 측면은 (a) 분석 대상 곰팡이의 지질을 추출하는 단계; 및 (b) 상기 추출된 지질의 질량 특성을 분석하는 단계;를 포함하는 곰팡이의 동정 방법을 제공한다.

상기 동정 방법은 곰팡이의 지질 특성을 분석하고, 다양한 곰팡이 속 또는 종 간의 특이적인 지질 패턴 정보를 비교함으로써 분석 대상 곰팡이를 구분 및 동정할 수 있다.

상기 곰팡이는 현미경적(microscopic) 진균을 의미한다. 이 용어는 임의의 주어진 수의 이들 종을 의미하는 것으로 제한되지 않으며, 아직 발견되지 않았지만 나중에 당업자에 의해 확인되어서 이 속(genus) 내에 포함될 수 있는 종이 배제되는 것은 아니다. 예컨대, 상기 곰팡이는 아스퍼질러스 속(Aspergillus spp .), 페니실리움 속(Penicillium spp .), 알터나리아 속(Alternaria spp .), 및 후자리움 속(Fusarium spp .)으로 이루어진 군에서 하나 이상 선택될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 "지질(lipid)"은 유기용매에 용해 가능한 화합물을 의미하며, 예컨대 지방(fats), 왁스(waxes), 스테로이드(steroids), 스테롤(sterol), 인지질(phospholipid), 당지질(glycolipids), 테르펜(terpenes), 지방-수용성 비타민(fat-soluble vitamins), 프로스타글란딘(prostaglandins), 카로틴(carotene) 등을 포함할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니며, 바람직하게는 상기 지질이 인지질일 수 있다.

상기 곰팡이는 그 종류에 따라 특이적인 생물학적 특성을 보유하며, 본 발명자들은 곰팡이간 차별화되는 지질 특성을 비교 분석함으로써 신속하고 간단하게 곰팡이를 동정할 수 있음을 확인하였다.

상기 동정 방법에 따르면 1시간 안에 분석 대상 곰팡이의 지질 패턴 분석을 완료할 수 있으며, 지질을 통해 곰팡이를 동정할 수 있는 점에서 종래 동정 방법 대비 차별화될 수 있다. 단백질은 구조가 복잡하고 다양한 변이로 인하여 분석이 어려우나, 지질은 단순하고 다양성이 낮아 훨씬 정확하고 신속한 동정 방법을 제공할 수 있다.

상기 지질의 질량 특성은 다양한 방법에 의해 비교 분석할 수 있으나, 바람직하게는 말디 질량 분석을 통해 상기 지질의 질량 특성을 분석할 수 있다.

1900 대에 질량 분석법이 사용된 후 다양한 이온화법이 개발되었으며, 휘발성이 없거나 열 안정성이 없는 물질의 질량 분석을 위한 여러 가지 이온화 방법들이 개발되었다.

상기 지질의 질량 특성을 분석하기 위해 SIMS, FD, FAB, 또는 MALDI가 사용될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니며, 바람직하게는 말디 질량 분석법이 사용될 수 있다.

상기 말디 질량분석법(histology-directed matrix-assisted laser desorption/ionization(MALDI) mass spectrometry imaging)은 말디 이온화법을 이용한 이미징(Imaging) 질량분석방법으로서 분석하고자 하는 조직 표면에 매트릭스를 도포하고 말디 이온화법을 적용하여 조직으로부터 직접 질량 분석 정보를 획득할 수 있다.

상기 말디 질량분석법은 생체 조직에서 이온화된 단백질, 펩타이드. 지질, 소분자(small molecules)의 분포에 대한 질량분석 정보를 표지 물질을 사용하지 않고 (label-free) 조직으로부터 직접 질량 정보를 산출할 수 있다.

말디-토프 질량 분석기(Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometer; MALDI-TOF MS)는 비전문가도 간단하게 조작할 수 있는 고성능 질량 분광학 장치이며, 말디-토프 질량 분석기를 이용한 질량 분석법은 검체를 이온화하여 진공관에서 검출기에 도달하는 시간을 기반으로 특정 구성 물질의 질량을 측정하는 방법으로써, 빠른 시간 내에 물질을 분석할 수 있다.

상기 동정 방법은 상기 말디 질량분석을 통해 상기 분석 대상 곰팡이의 지질 특성을 분석하고 비교함으로써 신속하게 곰팡이를 동정할 수 있다.

다양한 실험 환경에 따라 질량값 측정치에 소정의 오차가 발생할 수 있으므로, 상기 말디-토프 질량 분석기에 의해 측정된 질량값은 "±0.1 m/z"의 오차 범위를 포함할 수 있다. 예컨대, 360.0 m/z로 기재된 질량값은 실제로 359.9 m/z 내지 360.1 m/z의 범위 내의 질량값일 수 있고, 실험 환경에 따라 오차 범위는 "±0.5 m/z"일 수 있다.

상기 (b) 단계에서 상기 말디 질량 분석에 의해 산출된 지질의 질량 분석 데이터 및 기존의 데이터를 비교할 수 있고, 상기 기존의 데이터는 상기 말디 질량 분석에 의해 산출된 질량 분석 데이터를 포함하는 데이터베이스에서 획득할 수 있다.

상기 말디 질량 분석에 의해 각 곰팡이에 대한 독특한 스펙트럼 데이터가 산출되며, 상기 특이적인 스펙트럼 데이터는 상이한 곰팡이 속 또는 종 간의 동정 및 구분을 가능하게 하는 정보를 제공할 수 있다.

한편, 본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 방법에 사용되는 말디 질량 분석에 의해 산출된 곰팡이 지질의 질량 분석 데이터를 포함하는 데이터베이스가 제공된다.

상기 데이터베이스에 컴파일링된 각 스펙트럼은 질량 대 전하 비율에 대한 강도의 플롯으로서 그래프로 기록될 수 있다.

상기 스펙트럼 데이터는 그래프, 수치 또는 디지털이나 아날로그 형태의 전자 포맷으로 기록될 수 있다. 상기 스펙트럼 데이터는 컴퓨터 또는 컴퓨터 네트워크의 저장 매체상에 기록될 수 있다. 상기 저장 매체는 플로피 디스크, 테이프 또는 하드 디스크와 같은 자성을 띈 저장 매체일 수 있고, CD-ROM 또는 레이저 디스크와 같은 광학적인 저장 매체일 수 있으며, ROM 마이크로 칩일 수도 있다.

상기 스펙트럼 데이터는 일련의 질량 대 전하 비율로서 저장될 수 있고, 이는 각각의 스펙트럼 피크의 중심에 해당할 수 있다. 상기 스펙트럼 데이터로서 질량 대 전하 비율만을 저장함으로써 미생물을 특징화하거나 동정하는데 요구되는 최소한의 데이터가 저장될 수 있다.

이하, 첨부된 도면을 참고하여 본 발명의 실시예에 관하여 상세히 서술하나, 하기 실시예에 의해 본 발명이 제한되지 아니함은 자명하다.

실험예 1 : 곰팡이 배양

곰팡이를 동정하고자 하기 곰팡이로 실험을 진행하였다. 공기 중에서 채집을 하여 배양하거나(표 1), 분양 받은 곰팡이로 실험을 수행하였다(표 2).

Genus (속)	Species (종)
Aspergillus	ochraceus
Aspergillus	niger
Penicillium	citrinum
Penicillium	expansum

Genus (속)	Species (종)	KMCC No.	ATCC No
Aspergillus	versicolor	11592
	sclerotiorum	12702	16892
	brasiliensis	60143	16404
	niger	60332	16888
	terreus	60335	1012
	clavactus	60403	18214
Penicillium	chrysogenum	43768	12690
	citrinum	60384	36382
	expansum	60339	7861
	camembertii	60340	4845
	ochrochloron	60372	9112

곰팡이는 한국미생물보존센터에서 분양 받았으며, 분양 받은 후 PDA(potato dextrose agar) 또는 MEA(malt extract agar)배지에서 3일간 25℃에서 배양하였다.

배양한 곰팡이 세포는 인지질 분석을 위하여 형성된 포자를 1회용 멸균루프를 이용하여 증류수가 담긴 튜브에 채집하였다. 분양 받은 곰팡이는 색과 모양이 서로 다른 single colony를 분리하여 배양하였으며, 순수 분리한 샘플 NB(Beefextract3g, Peptone5g, 증류수 1L) 25㎖를 50㎖ 튜브에 넣어 진탕배양기(shaking incubator)에서 48 시간 동안 배양하였다. 배양 후 3500rpm으로 10분 동안 원심 분리하였으며 곰팡이를 분리하였다.

실험예 2 : 곰팡이 인지질의 질량 특성 분석

인지질을 추출하여 미생물을 동정하기 위하여 분석 대상 곰팡이를 배양하였다.

분석 대상 곰팡이를 배양한 후, Bligh & Dyer 방법으로 인지질을 추출하였다. 분석 대상 곰팡이를 DPBS(Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline) 500㎕에 녹인 후, MeOH(메탄올)과 CHCl₃(클로로폼)을 2:1의 비율로 첨가하였다.

온도를 저하시켜 지질의 용해도를 감소시킨 후, 다CHCl₃(클로로폼) 및 물을 1:1.3의 비율로 첨가하였다. 4℃에서 약 10분간 원심 분리한 후 하층에 CHCl₃, 상층 층에는 물이 생성되었으며, 메탄올은 일정 비율씩 물과 클로로폼층에 분배될 수 있다.

미생물의 인지질은 소수성이므로 하층의 CHCl₃에 용해될 수 있다. 하층에 추출된 인지질을 이온화 하기 위하여 자체 제작한DHB 및 CHCA를 섞은 Binary 매트릭스를 이용하였다. Binary 매트릭스는 이온화 효율은 증가시키며 진공상태에서 안정한 결정화 상태를 유지할 수 있다. Binary 매트릭스를 이용하여 MALDI로 질량 분석을 수행함으로써 질량 스펙트럼 데이터를 얻을 수 있다.

질량 분석 결과 및 곰팡이 특이적 Spectrum peak pattern을 이용하여 인지질 데이터 베이스를 만들고 분석 대상 곰팡이의 지질 스펙트럼과 비교하여 곰팡이를 동정하였다.

실험예 3 : 곰팡이 동정 방법의 신뢰도 검증

인지질을 이용한 곰팡이 동정이 MALDI-TOF를 이용하여 실현 가능한지 검증하였다.

(1) 2가지 속(genus)에서 질량 분석 결과가 변별력이 있는지, (2) 질량 분석 결과를 반복 재현했을 때 재현성이 있는지, (3) 동일한 속(genus) 안에 있는 종(species)의 질량 분석 결과가 변별력이 있어 종 수준에서 동정이 가능한지, (4) 종 수준에서 동정이 가능하다면 종 이하의 수준에서까지 동정이 가능한지에 대해 실험하였다.

6가지 속의 지질 패턴이 다른지 확인 된다면 속(genus) 수준에서 개별적 동정이 가능할 것이므로 분리한 곰팡이를 속 수준에서 동정이 가능한지 실험하였다. 6가지 속이 전체적으로 상이한 지질 패턴을 나타내면, 속 별로 고유 지문이 있다는 것을 의미하므로 인지질을 이용한 동정이 가능할 것이다

도 2를 참조하면, 각각의 6가지 속에서 질량 분석 결과는 각 속에 해당하는 곰팡이마다 서로 상이한 지질 패턴을 나타내므로, 속 수준에서 인지질을 이용한 동정이 가능하다.

단백질을 이용하여 동정하는 경우 인지질과 비교하여 다양한 펩타이드가 추출되므로 구분하기가 어려우며 정확도가 낮지만, 인지질은 단순하고 확실한 고유 패턴 정보를 제공할 수 있다.

Positive mode로 분석한 결과로 positive charge를 잘 띠는 성질의 지질들이 분석된 결과를 의미하다. Negative mode의 패턴 정보 상이하므로 곰팡이 동정을 위한 정보를 제공할 수 있다.

실험예 4 : 곰팡이 동정 방법의 신뢰도 검증

한 가지 종의 곰팡이로 같은 실험을 3회 실시하여 질량 분석 결과를 얻은 후, 같은 실험에서 재현성이 있는지 검증하였다. 실험에 영향을 미칠 수 있는 실험 기구, 시료, 곰팡이의 종류 및 배양조건 등은 모두 동일하게 하였다.

Aspergillus 속(Asp. ochraceus , Asp. niger) 및 Penicillium 속(Pen. citrinum, Pen. expansum) 각각의 시료로 동일한 실험을 3회 반복한 결과, 매 실험마다 같은 형태의 인지질 peak 패턴을 얻었으며 종류 및 정량적인 정보 또한 동등한 수준에서 확보되었다.

동일한 실험을 반복하였음에도 불구하고 동일한 실험 결과가 도출되었으며, 상기 결과는 인지질을 이용한 동정의 재현성을 시사한다.

실험예 5 : 종(genus) 수준의 동정 가능성 검증

같은 속 안에 다른 종의 곰팡이 분석이 가능한지 확인하고자 속 안에 있는 다른 종 Aspergillus 속의 Asp. ochraceus, Asp. niger, Penicillium 속의 Pen. citrinum, Pen. expansum 2종을 선별하여 질량 분석 실험을 수행하였다. 신뢰도를 확보하고자 동일한 종에 대해 반복 실험을 수행하고, 도출된 결과를 PCA를 통하여 분석하였다.

도 3 및 4를 참조하면, 3차원으로 나타낸 PCA 결과 및 2차원으로 나타낸 결과에서 Aspergillus 속의 곰팡이 및 Penicillium 속 곰팡이 모두 일정한 패턴이 확인되었다.

Aspergillus 속의 지질 패턴 및 Penicillium 속의 지질 패턴은 현저히 상이하며 PCA 결과에서 명확하게 확인되었다.

또한, 같은 속의 경우 유사도가 높으며 다른 속의 경우 유사도가 낮았다. 상기 결과는 질량 분석을 통해 곰팡이의 종 수준까지 동정 및 구분이 가능함을 시사한다.

실험예 6 : 종(genus) 수준의 동정 가능성 검증

다른 속의 곰팡이 지질의 질량 분석 결과를 PCA를 통하여 분석하였다. 도 5를 참조하면, 상이한 곰팡이의 경우 지질의 스펙트럼이 상이하며 속 및 종에 의해 스펙트럼은 현저히 차별화되었다.

즉, 상기 결과는 곰팡이의 지질 패턴을 분석함으로써 용이하게 곰팡이를 동정할 수 있음을 시사한다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.

본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims

(a) 아스퍼질러스 속(Aspergillus spp.), 페니실리움 속(Penicillium spp.), 알터나리아 속(Alternaria spp.), 및 후자리움 속(Fusarium spp.)으로 이루어진 군에서 하나 이상 선택된 곰팡이에 메탄올 및 클로로폼을 가하여 인지질을 추출하는 단계; 및
(b) DHB(2,5-dihydroxybenzoic acid) 및 CHCA(α-cyano-4-hydroxycinnamic acid)를 포함하는 Binary 매트릭스를 이용하여 상기 인지질을 이온화하고, 말디-토프 질량 분석기(MALDI-TOF MS)를 통해 상기 추출된 인지질의 질량 특성을 분석하는 단계;를 포함하고,
동일 속(genus)에 해당하는 곰팡이의 종(species)을 구분하는 곰팡이의 동정 방법.
삭제
삭제
제1항에 있어서,
상기 (b) 단계에서 상기 말디 질량 분석에 의해 산출된 지질의 질량 분석 데이터 및 기존의 데이터를 비교하는 곰팡이의 동정 방법.
제4항에 있어서,
상기 (b) 단계에서 상기 기존의 데이터는 상기 말디 질량 분석에 의해 산출된 질량 분석 데이터를 포함하는 데이터베이스에서 획득하는 곰팡이의 동정 방법.
삭제
제1항, 제4항, 및 제5항 중 어느 한 항의 방법에 사용되는
말디 질량 분석에 의해 산출된 곰팡이 지질의 질량 분석 데이터를 포함하는 데이터베이스.