KR101972420B1 - 소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 검출 수단을 소변에 담궜다 꺼낸 후의 색상 변화를 확인하는 방법으로 소변 내의 말론디알데하이드를 고가의 장비나 전문 인력 없이 활성 산소의 양을 정량할 수 있고, 기존의 방법과 달리 반응 시간이 짧고, 일반적인 요검사 시험지와 함께 사용할 수 있으며, 검출 한도도 우수한 소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단에 관한 것이다.

Description

소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단{MEANS FOR DETECTING MALONDIALDEHYDE IN URINE}
본 발명은 소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단에 관한 것으로, 보다 구체적으로, 인체 내에서 생성된 활성 산소의 양에 비례해 소변 중으로 배출되는 말론디알데하이드를 검사하는 검출 수단에 관한 것이다.
인간은 산소를 이용해 호흡한다. 이러한 호흡의 핵심은 세포의 미토콘드리아라는 세포내 소기관에 있다. 미토콘드리아는 섭취한 유기물로부터 유래된 전자를 산소로 전달하며 에너지를 생성하고, 전자를 받은 산소는 안정한 상태인 물이 된다. 하지만 이중 일부는 물이 되지 않고 전자만 받아 라디칼 상태가 되는데 이것이 활성산소의 일종인 슈퍼옥사이드이다.
이 활성산소 라디칼들은 불안정하고 높은 에너지를 갖고 있어, 생체내의 다른 분자들과 쉽게 산화 반응을 일으킬 수 있으며, 이로 인해 세포와 조직이 손상을 입게 된다. 세포의 지속적인 손상은 노화를 불러 일으키며, 높은 에너지를 갖고 있는 활성산소종은 세포의 디엔에이(DNA)를 공격하여 변형 시킬 수 있으므로 암을 유발 할 수도 있다.
그래서 비타민-씨 등과 같은 항산화제의 건강보조식품을 섭취하면서 활성산소의 양을 정량적으로 체크하는 것은 건강 예방을 위해 중요한 의미를 가진다.
슈퍼옥사이드로 대표되는 활성산소는 높은 반응성을 갖고 있는 불안정한 물질로 직접적인 검출은 매우 어렵다. 이 때문에 활성산소의 양에 의해 비례적으로 생성되는 간접 지표를 이용해 활성산소의 양을 측정하는 방법이 일반적 이다.
이 중 가장 널리 일반적으로 쓰이는 방법이 혈액 또는 소변중의 말론디알데하이드를 측정하는 방법이다. 말론디알데하이드를 정량하는 방법 중 이화학분석기인 고성능 액체크로마토그래피 또는 기체 크로마토그래피를 이용하는 방법은 전문가에 의해 고가의 장비를 사용해야 하는 문제점 있다. 또 한국등록특허 제10-1370613호와 같이, 말론디알데하이드와 반응할 수 있는 티오바비튜릭산 유도체(Thiobarbituric acid substrate)를 이용해 분광 광도계(spectrophotometer)를 이용해 측정하는 방법이 있으나 이 역시 검체의 전처리 및 분석에 있어서 전문가가 요구되어 일반적인 사용에 문제점이 있다.
또한 기존의 요검사 시험지 형태의 유사 제품은 시험지의 반응 시간이 3분 이상으로 기존의 요검사 시험지와 혼용하여 사용하지 못하고 또 농도에 따른 색 변화가 둔감하여 낮은 농도의 말론디알데하이드를 검출하지 못하는 문제점이 있다.
본 발명은 소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단에 관한 것이다.
본 발명은 검출 수단을 소변에 담궜다 꺼낸 후의 색상 변화를 확인하는 방법으로 소변 내의 말론디알데하이드를 반정량하여 고가의 장비나 전문 인력 없이 활성 산소의 양을 반정량할 수 있는 소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 기존의 방법과 달리 반응 시간이 60초 이내로 일반적인 요검사 시험지와 함께 사용할 수 있는 검출 수단을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.
본 발명은 검출 한도가 0.6 μ㏖/L 수준으로 감도가 증가하는 검출 수단을 제공하는 것을 또 다른 목적으로 한다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명 및 청구 범위에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 실시예들은 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 본 발명을 더욱 완전하게 설명하기 위하여 제공되는 것이며, 하기 실시예는 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 오히려, 이들 실시예는 본 개시를 더욱 충실하고 완전하게 하고, 당업자에게 본 발명의 사상을 완전하게 전달하기 위하여 제공되는 것이다.
또한, 도면에서 각 층의 두께나 크기는 설명의 편의 및 명확성을 위하여 가정된 것이며, 도면상에서 동일 부호는 동일한 요소를 지칭한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "및/또는"은 해당 열거된 항목 중 어느 하나 및 하나 이상의 모든 조합을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 용어는 특정 실시예를 설명하기 위하여 사용되며, 본 발명을 제한하기 위한 것이 아니다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 단수 형태는 문맥상 다른 경우를 분명히 지적하는 것이 아니라면, 복수의 형태를 포함할 수 있다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 경우 "포함한다(comprise)" 및/또는 "포함하는(comprising)"은 언급한 형상들, 숫자, 단계, 동작, 부재, 요소 및/또는 이들 그룹의 존재를 특정하는 것이며, 하나 이상의 다른 형상, 숫자, 동작, 부재, 요소 및/또는 그룹들의 존재 또는 부가를 배제하는 것이 아니다.
본 발명의 일 구체예로, 본 발명은 소변 내에 포함된 말론디알데하이드를 검출하기 위한 검출 수단에 있어서, 상기 검출 수단은 지지대; 및 말론디알데하이드와 반응하여 발색되는 시험지를 포함하며, 상기 시험지는 완충액; 고형제; 및 발색 촉진제를 포함하는 제1 발색 용액에 침지시켜 1차 건조하고, C1-4의 알코올, 발색 기질 및 안정제를 포함하는 제2 발색 용액에 침지시켜 2차 건조하여 제조한 소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단에 관한 것이다.
본 발명의 일 구체예로, 본 발명의 완충액은 pH가 3.0 내지 3.4이며, 글리신(glycine) 완충액, 포타슘클로라이드 완충액, 프탈레이트 완충액, 시트릭산 완충액 및 아세트산 완충액으로 이루어진 군으로부터 선택된 것이지만, 예시에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구체예로, 본 발명의 발색 기질은 하기 화학식 1로 표시된 화합물이다:
[화학식 1]
Figure 112016107190009-pat00001
여기서, 상기 R은 수소, 메틸, 에틸 및 부틸로 이루어진 군으로부터 선택된 것이다.
본 발명의 일 구체예로, 본 발명의 고형제는 폴리비닐알콜, 폴리비닐피놀리딘 및 젤라틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상이지만, 예시에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구체예로, 본 발명의 발색 촉진제는 염화제2철(ferric chloride)이며, 안정제는 인산 용액(Phosphoric acid)이다.
본 발명의 일 구체 예로, 본 발명의 상기 제1 발색 용액은 99 내지 99.5 중량%의 완충액; 0.3 내지 2 중량%의 고형제; 및 0.02 내지 0.5 중량%의 발색 촉진제를 포함할 수 있지만, 예시에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구체예로, 본 발명의 상기 제2 발색 용액은 97 내지 98.5 중량%의 휘발성 용매, 1 내지 2 중량%의 발색 기질 및 0.05 내지 2 중량%의 안정제를 포함할 수 있지만, 예시에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구체예로, 본 발명은 1) 완충액; 고형제; 및 발색 촉진제를 혼합하여 제1 발색 용액을 제조하는 단계; 2) 시험지를 상기 1) 단계의 제1 발색 용액에 침지하는 단계; 3) 상기 2) 단계에서 제1 발색 용액에 침지한 시험지를 60 내지 80℃의 오븐에서 10 내지 20분간 1차 건조하는 단계; 4) 휘발성 용매, 발색 기질 및 안정제를 혼합하여 제2 발색 용액을 제조하는 단계; 5) 상기 3) 단계의 건조한 시험지를 상기 4) 단계의 제2 발색 용액에 침지하는 단계; 6) 상기 5) 단계의 제2 발색 용액에 침지한 시험지를 60 내지 80℃의 오븐에서 10 내지 20분간 건조하는 단계; 및 7) 상기 6) 단계에서 건조한 시험지를 지지대에 고정하는 단계를 포함하는 소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단의 제조 방법에 관한 것이다.
본 발명의 일 구체예로, 본 발명의 상기 제1 발색 용액은 99 내지 99.5 중량%의 완충액; 0.3 내지 2 중량%의 고형제; 및 0.02 내지 0.5 중량%의 발색 촉진제를 포함할 수 있으며, 상기 제2 발색 용액은 97 내지 98.5 중량%의 휘발성 용매, 1 내지 2 중량%의 발색 기질 및 0.05 내지 2 중량%의 안정제를 포함할 수 있지만, 예시에 국한되는 것은 아니다.
본 발명은 소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단에 관한 것으로, 검출 수단을 소변과 반응시킨 이후, 색상 변화를 확인하는 방법으로 소변 내의 말론디알데하이드를 반정량하여 고가의 장비나 전문 인력 없이 활성 산소의 양을 반정량할 수 있고, 기존의 방법과 달리 반응 시간이 60초 이내로 일반적인 요검사 시험지와 함께 사용할 수 있으며, 검출 한도가 0.6 μ㏖/L 수준으로 감도가 증가한다.
도 1은 본 발명의 말론디알데하이드 검출 수단의 제조 방법에 대한 순서도이다.
도 2는 발색 시험지에 염화제2철을 첨가했을 때의 발색 변화 그래프에 관한 것이다.
도 3은 본 발명의 실시예 및 비교예 시험지의 발색 실험 결과 사진이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 실시적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
도 1을 참조하여 본 발명의 일 실시예에 따른 소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단 및 이의 제조 방법에 대해 설명하도록 한다.
인체 내 활성산소에 의해 생성되는 활성산소 지표물질로 알려진 말론디알데히드는 티오바비튜릭산 유도체와 반응하여 색 착물을 형성하는 반응이 알려져 있다. 이때 사용 가능한 대표적인 티오바비튜릭산 유도체는 하기 화학식 1과 같다.
[화학식 1]
Figure 112016107190009-pat00002
여기서,
상기 R은 수소, 메틸, 에틸 및 부틸로 이루어진 군으로부터 선택된 것이다.
혈액이나 소변의 검체를 전처리하고 적당한 완충액을 선택하여 티오바비튜릭산 유도체와 혼합하여 온 수조에서 인큐베이션 한 후 분광광도계를 이용하여 색을 측정하는 방법으로도 측정이 가능하다. 이런 방법이 TBARS법으로 알려져 있다. 하지만 TBARS법은 측정 방법이 용이하지 않은 문제가 있어, 이러한 문제를 해결하기 위해, 누구나 쉽고 간편하게 검사하는 시험지 방법을 이용할 수 있다. 시험지 검사 방식의 경우, 발색 반응 및 시험지 제조에 요구되는 시약을 용액으로 제조 후 시험지를 침지 시킨 이후 건조 시켜 지지대에 고정하고, 적당한 형태로 가공하여야 하기 때문에 보다 많은 기술이 요구된다.
본 발명의 일 실시예에 따른, 말론디알데하이드 검출 수단은 말론디알데히드와 반응하여 색상이 변하는 시험지가 지지대에 부착된 형태로 이를 소변 내에 침지 시켰을 때 활성산소의 양에 비례해 변하는 시험지의 색상 변화를 통해 활성산소 검출 수단을 제공하는 것이다.
상기 검출 수단은 지지대 및 말론디알데하이드와 반응하여 발색되는 시험지를 포함하며, 상기 시험지는 완충액; 고형제; 및 발색 촉진제를 포함하는 제1 발색 용액에 침지시켜 1차 건조하고, C1-4의 알코올, 발색 기질 및 안정제를 포함하는 제2 발색 용액에 침지시켜 2차 건조하여 제조한다. 다만, 본 발명은 기존의 검출 수단과 달리, 말로디알데히드와 티오바비튜릭산 유도체의 발색 반응을 촉진하고 안정 시키기 위해 발색 촉진제 및 안정제를 추가로 포함하는 것을 기술적 특징으로 한다.
상기 제1 발색 용액은 99 내지 99.5 중량%의 완충액; 0.3 내지 2 중량%의 고형제; 및 0.02 내지 0.5 중량%의 발색 촉진제를 포함할 수 있고, 상기 제2 발색 용액은 97 내지 98.5 중량%의 휘발성 용매, 1 내지 2 중량%의 발색 기질 및 0.05 내지 2 중량%의 안정제를 포함할 수 있지만, 예시에 국한되는 것은 아니다.
상기 완충액은 지시약이 반응할 수 있는 pH, 완충제의 종류 및 농도를 확정하여 지시약이 작용할 수 있는 최적의 조건을 조성할 뿐만 아니라 조성된 시약의 pH와 현저하게 다른 pH값을 가지는 샘플에 침지할 경우 지시약이 샘플의 pH에 영향을 받지 않게 한다. 이는 지시약이 pH에 의한 색상 변화가 아닌 지시약의 pKa값이 이동한 결과만이 시험지의 색상변화에 영향을 주게 하기 위함이다. 선택된 지시제의 발색은 pH3-3.4 사이에서 음성과 양성을 구분하는데 적합함을 알 수 있었으며, pH3 미만 3.4 초과이었을 때 발색 저하가 나타남을 알 수 있었다.
따라서, 본 발명의 완충제는 pH가 3.0 내지 3.4이며, 글리신(glycine) 완충액, 포타슘클로라이드 완충액, 프탈레이트 완충액, 시트릭산 완충액 및 아세트산 완충액으로 이루어진 군으로부터 선택된 것이지만, 예시에 국한되는 것은 아니다.
상기 고형제는 시약을 시험지에 고정시키는 역할을 하며, 전해용매의 밀도를 포화시키기 위해서는 물에 녹는 폴리머로 구성된 것이 좋다. 또한안정제 시약을 포함하는 시험지는 제조 후 병에 보관을 할 때 유효기간동안 발색과 음성(negative) 색을 유지 할 수 있도록 도와준다.
따라서, 본 발명의 고형제는 폴리비닐알콜, 폴리비닐피놀리딘 및 젤라틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상이지만, 예시에 국한되는 것은 아니다.
상기 발색 촉진제는 염화제2철이며, 염화제2철은 0.02 내지 0.5 중량% 포함될 수 있으며, 염화제2철을 0.02 중량% 미만으로 포함할 경우, 발색 촉진의 효과가 미비하며, 0.5 중량%를 초과하여 포함할 경우에는 시험지가 갈변하는 문제가 발생한다.
상기 안정제는 발색 용액에 발색 촉진제를 넣어줌으로 인해 발생하는 갈변 현상을 억제하기 위해 포함되는 것으로, 바람직하게는 0.05 내지 2 중량% 포함될 수 있지만, 예시에 국한되는 것은 아니다. 안정제를 0.05 중량% 미만으로 포함할 경우, 갈변 현상 억제 효과가 미비한 문제가 있으며, 2 중량%를 초과하여 포함할 경우에는 발색 용액의 구성 성분이 석출하는 문제가 발생한다. 즉, 본 발명의 발색 촉진제는 발색 용액에 많이 넣어줄수록 발색 촉진 효과가 우수하여, 소변과 반응시킬 때, 빠르게 색깔이 변경되지만, 많이 넣어줄수록, 시험지를 건조했을 때, 진한 갈색을 나타내어, 소변과 반응시켰을 때, 색상의 구분이 용이하지 않은 문제가 있다. 이러한 문제를 해결하기 위해, 안정제를 포함시킴으로 인해, 시험지의 색깔은 분홍색을 유지하며, 우수한 발색 촉진 효과를 나타낼 수 있다.
도 1은 본 발명의 말론디알데하이드 검출 수단의 제조 방법에 대한 순서도로, 검출 수단의 제조 방법은 1) 제1 발색 용액을 제조하는 단계(S100); 2) 시험지를 상기 1) 단계의 제1 발색 용엑에 침지하는 단계(S200); 3) 상기 2) 단계의 제1 발색 용액에 침지한 시험지를 제1 건조하는 단계(S300); 4) 제2 발색 용액을 제조하는 단계; 5) 상기 4) 단계의 제2 발색 용액에 상기 3) 단계의 시험지를 침지하는 단계; 6) 상기 5) 단계의 시험지를 2차 건조하는 단계 및 7) 상기 6) 단계의 2차 건조된 시험지를 지지대에 고정하는 단계를 포함한다.
상기 1) 단계의 제1 발색 용액은 완충액; 고형제; 및 발색 촉진제를 포함하며, 구체적으로 발색 용액은 99 내지 99.5 중량%의 완충액; 0.3 내지 2 중량%의 고형제; 및 0.02 내지 0.5 중량%의 발색 촉진제를 혼합하여 제조할 수 있다.
상기 2) 단계는 시험지를 상기 1) 단계의 제1 발색 용액에 침지하는 단계(S200)로, 시험지를 제1 발색 용액에 침지시켜, 발색 용액 내의 구성 성분이 시험지로 충분히 흡수될 수 있도록 한다.
상기 3) 단계는 제1 발색 용액에 침지한 시험지를 건조하는 단계(S300)로, 60 내지 80℃의 오븐에서 10 내지 20분간 건조할 수 있으며, 바람직하게는 70℃의 오븐에서 15분간 건조할 수 있다.
상기 4) 단계는 제2 발색 용액을 제조하는 단계(S400)로, 상기 제2 발색 용액은 휘발성 용매, 발색 기질 및 안정제를 포함하며, 보다 구체적으로, 97 내지 98.5 중량%의 휘발성 용매, 1 내지 2 중량%의 발색 기질 및 0.05 내지 2 중량%의 안정제를 혼합하여 제조할 수 있다.
상기 휘발성 용매는 건조 단계에서 건조되며, 구체적으로, 휘발성 용매는 C1-4의 알코올이며, 보다 구체적으로 에탄올이지만, 예시에 국한되는 것은 아니다.
상기 5) 단계는 4) 단계의 제2 발색 용액에 상기 3) 단계의 시험지를 침지하는 단계(S500)로, 상기 3) 단계에서 건조한 시험지를 제2 발색 용액에 침지시켜, 제2 발색 용액 내의 구성 성분이 시험지로 충분히 흡수될 수 있도록 한다.
상기 6) 단계는 상기 5) 단계의 시험지를 2차 건조하는 단계(S600)로, 60 내지 80℃의 오븐에서 10 내지 20분간 건조할 수 있으며, 바람직하게는 70℃의 오븐에서 15분간 건조할 수 있다.
상기 7) 단계는 건조된 시험지를 지지대에 고정하는 단계(S700)로, 플라스틱 지지대에 양면 테이프와 같은 고정 수단을 이용하여 고정시킨다.
실시예 1
말론디알데하이드 검출 수단의 제조
1.5 몰농도(M)이고 pH 3.0~pH 3.4의 글리신 완충액 99.38 중량%에 폴리비닐알코올(Poly(vinyl alcohol))을 0.6중량%, 염화제2철(ferric chloride) 0.02 중량% 용액을 제조하여 시험지를 침지 시킨 후 70℃의 오븐에서 15분간 건조하였다.
50% 농도의 에탄올 수용액 98.00 중량%에 1.55 중량%의 1,3-디에틸-2-티오바비류신산(1,3-Diethyl-2-Thiobarbituric acid) 및 인산 용액(Phosphoric acid) 0.45 중량%를 혼합하여 발색 용액을 제조하여 다시 앞서 1차로 제조한 시험지를 다시 침지 시킨 후 70℃의 오븐에서 15분간 건조하였다.
건조한 시험지를 플라스틱 지지대에 양면 테이프로 고정시켜, 검출 수단을 제조하였다.
실험예 1
발색 촉진제의 농도 변화에 따른 검출 수단의 발색 세기 측정
발색 촉진제인 염화제2철의 농도의 변화에 따른 발색 세기를 측정하기 위해, 540nm에서의 흡광도를 측정하였다.
540nm에서의 흡광도를 측정하고, 기존 검출 수단의 흡광도를 기준으로 하여, 흡광도의 백분율 차이를 계산하였다. 즉, 기존 검출 수단의 흡광도를 100%로 놓고, 발색 촉진제의 농도를 변화시켜 제조한 검출 수단의 흡광도를 측정하여, 100을 빼서, 백분율 차이를 계산하였다. 그 결과는 하기 표 1 및 도 2와 같다.
염화제2철 중량% 흡광도의 백분율 차이값
0.01 10
0.02 28
0.03 36
0.05 52
0.06 64
0.08 67
0.10 60
상기 표 1을 참조하면, 염화제2철을 0.01 중량% 포함한 검출 수단의 경우, 흡광도의 백분율 차이가 10으로, 기존의 검출수단과 비교하여, 10% 정도 증가하였으나, 염화제2철을 0.02 중량% 넣을 경우, 백분율 차이가 28로, 기존 검출 수단에 비해 28% 정도 증가하였다.
또한, 도 2를 참조하면, 굵은 점은 염화제2철의 중량%에 대한 흡광도를 나타내는 것이며, 점선은 추세선으로 나타내는 것으로, 염화제2철을 0.1 중량% 넣은 것에 대해서만 흡광도를 측정하였으나, 염화제2철의 중량%가 늘어날수록 추세선이 증가하는 곡선을 나타내고 있다.
결과적으로, 염화제2철을 0.02 중량% 미만으로 포함할 경우에는 기존 검출 수단과 비교하여, 발색 촉진 효과가 우수하다고 보기 어렵다고 할 것이며, 표 1 및 도 2를 참조하면, 염화제2철의 중량%가 증가할수록 흡광도가 증가한다고 할 것이다.
실험예 2
발색 촉진제 및 안정제의 함량 변화에 따른 검출 수단에서의 발색 안정 평가
발색 촉진제의 함량 범위에 따른 발색 촉진 평가는 실험예 1을 통해, 검토하였다. 이에, 발색 촉진제 및 안정제의 함량 변화에 따른 검출 수단의 발색 안정을 평가 하기 위해, 하기 표2와 같이, 염화제2철 및 인산 용액의 함량%를 변화하여 검출 수단을 제조하였다.
염화제2철 함량 인산 용액 함량
실시예 2 0.2 0.5
실시예 3 0.4 0.5
비교예 1 0.8 첨가 안함
비교예 2 0.4 0.3
비교예 3 0.2 2.5
540nm에서의 흡광도를 측정하고, 기존 검출 수단의 흡광도를 기준으로 하여, 흡광도의 백분율 차이를 계산하였다. 즉, 기존 검출 수단의 흡광도를 100%로 놓고, 발색 촉진제의 농도를 변화시켜 제조한 검출 수단의 흡광도를 측정하여, 100을 빼서, 백분율 차이를 계산하였다. 또한, 건조된 시험지의 색상 평가를 위해, 시험지를 증류수에 침지 시킨 이후의 색 변화 및 말론디알데하이드와 반응시킨 이후의 색 변화를 관찰하였다.
흡광도의 백분율 차이값 증류수(Neg.) 말론디알데하이드
(Pos.)
실시예 2 80 흰색 분홍색 계열
실시예 3 68 흰색 분홍색 계열
비교예 1 67 갈색 갈색
비교예 2 67 분홍색 계열 갈변 현상 발생
비교예 3 - -
상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 염화제2철을 포함하여 발색 용액을 제조한 경우, 흡광도의 백분율 차이값이 높게 나타났다. 즉, 실시예 2 내지 3 및 비교예 1 내지 2의 경우, 백분율 차이 값이 67 이상으로 매우 높은 수치를 나타내, 발색 촉진 효과가 우수함을 확인할 수 있다.
하지만, 도 3에 나타낸 바와 같이, 말론디알데하이드를 포함하지 않는 증류수에 시험지를 침지시킨 경우, 실시예 2 및 3은 흰색을 나타내었으나, 비교예 1은 갈색을 나타내었고, 비교예 2는 분홍색 계열을 나타내었다. 즉, 비교예 1의 경우, 염화제2철을 과다 포함하여, 발색 촉진 효과는 우수하지만, 시험지의 색상이 갈색을 나타내는 문제가 있으며, 비교예 2의 경우, 염화제2철이 0.4 중량%로 본 발명의 범위 내에는 포함되지만, 안정제를 포함하고 있지 않음에 따라, 실시예 2 및 3과 색의 차이가 나타나며, 말론디알데하이드와 반응 시, 갈변 현상이 나타난다고 할 것이다.
반면, 비교예 3의 경우, 안정제를 과다 포함할 경우, 발색 용액 제조시 석출 현상이 발생하여 발색 용액의 제조가 불가능하였다.
결론적으로, 실시예 2 및 3의 경우, 말론디알데하이드와 반응시 색의 변화가 명확한 반면, 비교예 1 및 2의 경우, 색의 변화를 쉽게 인지하지 못해, 사용자에게 혼동을 초래할 수 있다고 할 것이다.

Claims (11)

  1. 소변 내에 포함된 말론디알데하이드를 검출하기 위한 검출 수단에 있어서,
    상기 검출 수단은 지지대; 및
    말론디알데하이드와 반응하여 발색되는 시험지를 포함하며,
    상기 시험지는 완충액; 고형제; 및 염화제2철(ferric chloride)을 포함하는 제1 발색 용액에 침지시켜 1차 건조하고, C1-4의 알코올, 발색 기질 및 인산 용액(Phosphoric acid)을 포함하는 제2 발색 용액에 침지시켜 2차 건조하여 제조한 소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 완충액은 pH가 3.0 내지 3.4이며,
    글리신(glycine) 완충액, 포타슘클로라이드 완충액, 프탈레이트 완충액, 시트릭산 완충액 및 아세트산 완충액으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 발색 기질은 하기 화학식 1로 표시된 화합물인 소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단:
    [화학식 1]
    Figure 112016107190009-pat00003

    여기서,
    상기 R은 수소, 메틸, 에틸 및 부틸로 이루어진 군으로부터 선택된 것이다.
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 고형제는 폴리비닐알콜, 폴리비닐피놀리딘 및 젤라틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단.
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 제 1항에 있어서,
    상기 제1 발색 용액은 99 내지 99.5 중량%의 완충액; 0.3 내지 0.98 중량%의 고형제; 및 0.02 내지 0.5 중량%의 염화제2철을 포함하는 소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단.
  8. 제 1항에 있어서,
    상기 제2 발색 용액은 97 내지 98.5 중량%의 C1-4의 알코올, 1 내지 2 중량%의 발색 기질 및 0.05 내지 2 중량%의 인산 용액을 포함하는 소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단.
  9. 1) 완충액; 고형제; 및 염화제2철(ferric chloride)을 혼합하여 제1 발색 용액을 제조하는 단계;
    2) 시험지를 상기 1) 단계의 제1 발색 용액에 침지하는 단계;
    3) 상기 2) 단계에서 제1 발색 용액에 침지한 시험지를 60 내지 80℃의 오븐에서 10 내지 20분간 1차 건조하는 단계;
    4) 휘발성 용매, 발색 기질 및 인산 용액(Phosphoric acid)을 혼합하여 제2 발색 용액을 제조하는 단계;
    5) 상기 3) 단계의 건조한 시험지를 상기 4) 단계의 제2 발색 용액에 침지하는 단계;
    6) 상기 5) 단계의 제2 발색 용액에 침지한 시험지를 60 내지 80℃의 오븐에서 10 내지 20분간 건조하는 단계; 및
    7) 상기 6) 단계에서 건조한 시험지를 지지대에 고정하는 단계를 포함하는 소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단의 제조 방법.
  10. 제 9항에 있어서,
    상기 제1 발색 용액은 99 내지 99.5 중량%의 완충액; 0.3 내지 0.98 중량%의 고형제; 및 0.02 내지 0.5 중량%의 염화제2철을 포함하는 소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단의 제조 방법.
  11. 제 9항에 있어서,
    상기 제2 발색 용액은 97 내지 98.5 중량%의 휘발성 용매, 1 내지 2 중량%의 발색 기질 및 0.05 내지 2 중량%의 인산 용액을 포함하는 소변 내에 포함된 말론디알데하이드 검출 수단의 제조 방법.
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