KR101946114B1 - 벨루가 렌틸 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름 또는 탄력 개선용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 벨루가 렌틸(beluga lentil) 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름 또는 탄력 개선용 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 벨루가 렌틸 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물이 아디포넥틴(adiponectin), SPEBP1 및 PPAR-γ의 발현을 증가시켜 지방세포 분화를 촉진시킴으로써 주름 또는 탄력 개선 효능이 우수한 것을 확인하였다. 또한, 본 발명의 벨루가 렌틸 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 주름 예방 또는 치료용 약학 조성물, 주름 또는 탄력 개선용 건강식품 조성물, 상처 치유 및 성형용 조성물 및 탈모 개선 또는 발모 촉진용 조성물 등으로 활용될 수 있다.
Description
본 발명은 벨루가 렌틸 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름 또는 탄력 개선용 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 벨루가 렌틸(beluga lentil) 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방세포 분화 촉진을 통한 주름 또는 탄력 개선용 조성물에 관한 것이다.
인체의 가장 큰 기관으로 전체 인체 부피의 약 16%를 차지하고 있는 피부는 표피층, 진피층 및 피하지방층으로 구성되어 있으며, 외부환경과 직접 접하고 있어 온도 및 습도 변화, 자외선, 유해 미생물 및 공해물질 등 다양한 외부 환경의 자극으로부터 체내 기관을 보호하는 1차 방어막 역할을 하는 동시에 전신의 대사에 필요한 생화학적 기능을 담당하는 기관이다. 특히, 진피 아래에 존재하는 피하지방층은 지방세포 소엽으로 구성되어 있으며, 열 손상을 방지하고 외부 환경의 자극으로부터 충격을 흡수하여 피부 내부 기관을 보호하는 쿠션 역할을 하며, 또한 영양성분을 트리아실글리세롤(triacylglycerol)의 형태로 저장하여 필요 시 에너지원으로 사용하는 영양 저장소로서의 기능을 한다. 그러나, 나이가 들어감에 따라 점차 노화가 진행되고, 자연적인 요인과 각종 외부 자극에 의해 피부가 손상을 입게 되며, 그 결과 피부 세포들의 본래 기능이 제대로 이루어지지 않아 주름 생성, 탄력 손실 및 피부 위축 등의 현상이 발생하게 된다.
피부의 기본적인 구조는 피하지방조직에 의해 유지되며, 이러한 피하지방 조직은 피부의 볼륨과 강도를 좌우하는 역할을 한다. 따라서 피부의 볼륨 및 탄력을 유지할 수 있는 방법은 피부 외곽층에 있는 진피나 표피에 탄력을 부여하는 방법보다 지방조직의 부피를 증가시키는 것이 좋다. 지방세포는 다양한 싸이토카인(cytokine)을 분비하는데 이들 중 특히 아디포넥틴(adiponectin)과 렙틴(leptin)은 피부 진피 섬유모세포를 이용한 실험에서 섬유모세포로부터 하일루론산(hyaluronic acid) 및 콜라겐 합성을 증가시키고 피부 상처 치유를 촉진하는 것으로 보고되었다. 이와 같이 지방세포를 이용한 연구는 다양한 분야에서 활발하게 진행되고 있으며, 일반적으로 지방전구세포는(preadipocyte)는 인슐린과 같은 분화 유도 물질에 의해 지방세포로 분화되는 특징을 가지고 있기 때문에 항비만 활성 연구에 많이 이용되어 왔으나, 최근에는 얼굴 피부의 볼륨 및 탄력 증진과 피부 재생 및 상처 치유의 목적으로 지방세포 분화를 촉진시키는 물질을 개발하기 위한 연구에도 많이 활용되고 있다.
또한, 두피 피하조직 내 지방세포는 모발 생성에 핵심적인 기능을 수행한다는 사실이 최근 밝혀져 탈모 치료의 새로운 방안으로 떠오르고 있다. 모발주기 중 새로운 모발이 생성되는 시기에는 피하조직 내에 새로운 지방세포가 만들어져 모낭세포에 모발 생성 신호를 보내는 것으로 알려져 있으며, 동물 실험에서 새로운 지방세포를 만드는 지방생성(adipogenesis) 기능에 결함이 있는 쥐의 경우 모낭이 재생되지 않는다는 연구 결과가 보고되었다. 탈모 인구 전체의 약 75% 이상이 원형탈모증으로 이는 흉터가 형성되지 않아 모낭이 유지되고 있으므로 증상개선 후 피하조직 내 지방세포 분화 촉진을 통해 모발 재생이 가능할 것으로 판단된다. 따라서 피하조직 내 지방세포 분화의 촉진은 모낭재생 및 모낭세포 성장을 촉진함으로써 모발재생을 유도하고, 추가적으로 지방세포가 분비하는 싸이토카인에 의한 섬유모세포의 활성화 및 콜라겐 합성 증가를 통해 두피를 개선함으로써 탈모 예방 또는 발모 촉진 효과를 유도할 수 있다.
최근 슈퍼 푸드로 알려진 렌틸(Lens culinaris)은 콩과(fabaceae)의 한해살이풀(Lens culinaris 또는 L. esculenta)로 낮은 강수량과 건조한 기후에서도 잘 자라며, 주로 아프리카, 중동, 남아시아에서 섭취하는 식품 중 하나이다. 씨앗의 색깔과 꽃의 색깔은 렌틸콩(렌즈콩)의 품종에 따라 다르며, 엽산(folate), 티아민(thiamine), 인(phosphorus), 철(iron), 탄수화물(carbohydrate), 식이섬유(dietary fiber) 및 비타민(vitamin)을 골고루 함유하고 있다. 또한, 단백질과 섬유질의 함량이 높고 지방이 거의 없으며 전분함량이 약 50% 함유되어 있는 것으로 알려져 있다.
렌틸은 높은 식이섬유 함량으로 인해 혈당 유지에 도움을 줄 뿐만 아니라 혈압조절로 인한 심장 혈관 기능을 조절하는 것으로 보고되었으며, 이외에도 플라바놀(flavanol), 플라보놀(flavonol), 콩 사포닌(soybean saponins), 피틴산(phytic acid) 및 농축 타닌(condensed tannin) 등의 유용성분들을 다량 함유하고 있다. 렌틸의 암 예방 가능성의 연구결과에서 삶은 렌틸의 섭취는 아조옥시메탄(azoxymethane)에 의해 유도된 마우스의 초기 대장암에 효과를 나타냈고, 또한 폴리페놀의 구성과 항산화 활성이 우수하다는 것이 확인되어 여러 만성질환에 도움을 주는 기능성 식품으로 간주될 수 있다고 보고되었다.
더불어 렌틸콩은 색을 기반으로 그린 렌틸콩(green lentil), 마수르 렌틸콩(masoor lentil), 프렌치 렌틸콩(french lentil) 및 벨루가 렌틸콩(beluga lentil) 등으로 나뉘는데, 그린 렌틸콩은 껍질과 속이 모두 녹색인 콩이며, 마수르 렌틸콩은 껍질은 갈색이고 속은 오렌지색, 프렌치 렌틸콩은 껍질은 갈색이고 속은 노란색이며, 벨루가 렌틸콩은 껍질은 검은색이고 속은 노란색이다. 그 중 벨루가 렌틸콩이 지방세포의 분화 촉진 활성을 보여 이를 피부 주름 및 탄력 개선용 화장료 조성물, 주름 예방 또는 치료용 약학 조성물, 상처 치유 및 성형 조성물, 주름 또는 탄력 개선용 건강식품 조성물, 탈모 개선 또는 발모 촉진용 조성물 및 암 치료 조성물 등으로 활용하고자 한다.
본 발명은 벨루가 렌틸(beluga lentil) 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방세포 분화 촉진을 통한 주름 또는 탄력 개선용 조성물에 관한 것으로, 상기 벨루가 렌틸 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 아디포넥틴(adiponectin), SPEBP1(SRE-binding protein 1) 및 PPAR-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ)의 발현을 증가시켜 지방세포 분화를 촉진시킴으로써 주름 또는 탄력 개선 효능이 우수한 것을 확인하였다.
또한, 본 발명의 벨루가 렌틸 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 주름 예방 또는 치료용 약학 조성물, 주름 또는 탄력 개선용 건강식품 조성물, 상처 치유 및 성형용 조성물 및 탈모 개선 또는 발모 촉진용 조성물 등으로 활용될 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 벨루가 렌틸(beluga lentil) 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름 또는 탄력 개선용 화장료 조성물, 주름 예방 또는 치료용 약학 조성물, 주름 또는 탄력 개선용 건강식품 조성물, 상처 치유 및 성형용 조성물 및 탈모 개선 또는 발모 촉진용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 i) 벨루가 렌틸을 세척, 건조 및 분쇄하는 단계; ii) 상기 세척, 건조 및 분쇄한 벨루가 렌틸에 메탄올(methanol) 수용액을 가하여 진탕 배양하는 단계; iii) 상기 ii) 단계를 2회 내지 5회 반복하여 추출물을 추출하는 단계; iv) 상기 추출물을 여과지에 여과하는 단계; V) 상기 여과된 추출물을 감압 농축하는 단계; 및 vi) 상기 감압 농축된 추출물을 동결건조 하는 단계를 포함하는 벨루가 렌틸 추출물 제조방법을 제공한다.
본 발명은 벨루가 렌틸(beluga lentil) 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름 또는 탄력 개선용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 벨루가 렌틸 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물이 아디포넥틴, SPEBP1 및 PPAR-γ의 발현을 증가시켜 지방세포 분화를 촉진시킴으로써 주름 또는 탄력 개선 효능이 우수한 것을 확인하였다.
또한, 본 발명의 벨루가 렌틸 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 주름 예방 또는 치료용 약학 조성물, 주름 또는 탄력 개선용 건강식품 조성물, 상처 치유 및 성형용 조성물 및 탈모 개선 또는 발모 촉진용 조성물 등으로 활용될 수 있다.
도 1은 전구지방세포에 분화유도인자를 처리하고 렌틸콩 추출물을 종류별 및 농도 별로 처리한 후, 지방세포 분화 촉진을 확인한 결과이다.
도 2는 전구지방세포에 분화유도인자를 처리하고 벨루가 렌틸콩 추출물을 농도 별로 처리한 후, 지방세포 분화 촉진을 oil-red-O 염색으로 확인한 결과이다.
도 3은 렌틸콩 추출물을 처리한 지방세포에서 분비되는 아디포넥틴 방출량 및 분화관련 단백질의 발현을 측정하기 위해 웨스턴 블롯을 실시한 결과이다.
도 2는 전구지방세포에 분화유도인자를 처리하고 벨루가 렌틸콩 추출물을 농도 별로 처리한 후, 지방세포 분화 촉진을 oil-red-O 염색으로 확인한 결과이다.
도 3은 렌틸콩 추출물을 처리한 지방세포에서 분비되는 아디포넥틴 방출량 및 분화관련 단백질의 발현을 측정하기 위해 웨스턴 블롯을 실시한 결과이다.
본 발명자들은 벨루가 렌틸을 세척, 건조 및 분쇄한 후, 80%(w/v) 메탄올(methanol) 수용액을 10배 가하여 24시간 동안 진탕 배양을 3회 반복하여 벨루가 렌틸 추출물을 생산하였고, 이 추출물의 기능성분을 분석하고, 인간의 전구지방세포(preadipocyte)에서 지방세포 분화 촉진 효과를 확인함으로써 주름 또는 탄력 개선 기능을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명에서 사용하는 용어 “지방세포 분화”는 동물, 바람직하게는 포유동물의 지방전구세포 또는 중간엽줄기세포가, 가장 바람직하게는 인간의 골수로부터 유래한 중간엽줄기세포가 지방세포로 분화하는 것이다.
본 발명에서 사용되는 용어, "추출물"은 식물의 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 본 발명의 상기 추출물은 바람직하게 추출 후 건조 분말 형태로 제조되어 사용될 수 있다.
본 발명은 벨루가 렌틸(beluga lentil) 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름 또는 탄력 개선용 화장료 조성물을 제공한다. 상세하게는, 벨루가 렌틸 추출물은 물, C1 내지 C4의 알코올 또는 이의 수용액으로 추출될 수 있으며, 지방세포 분화를 촉진하여 주름 또는 탄력을 개선시킬 수 있다.
본 발명의 조성물이 화장료 조성물인 경우, 상기 화장료 조성물은 상기 유효성분 외에 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다. 또한 상기 화장료 조성물은 그 효과를 증진시키기 위해 피부 흡수 촉진제를 추가로 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 화장수, 유액, 스킨, 토너, 에멀전, 로션, 에센스, 선 스크린, 크림, 메이크업 베이스, 파운데이션, 파우더, 팩, 젤, 샴푸, 린스, 스프레이, 메이크업 제거제, 세정제, 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어영양로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어크림, 헤어영양크림, 헤어모이스처크림, 헤어맛사지크림, 헤어왁스, 헤어 에어로졸, 헤어팩, 헤어영양팩, 헤어비누, 헤어클렌징폼, 머릿기름, 모발건조제, 모발보존처리제, 모발염색제, 모발용 웨이브제, 모발탈색제, 헤어겔, 헤어글레이즈, 헤어드레싱어, 헤어래커, 헤어모이스처라이저, 헤어무스 및 헤어스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아님을 명시한다.
상기 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
상기 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
상기 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
상기 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
또한, 본 발명은 벨루가 렌틸(beluga lentil) 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 조성물이 약학 조성물인 경우, 상기 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있는데, 이러한 약제학적으로 허용되는 담체는 약품 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘, 미네랄 오일 등을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기 약학 조성물은 첨가제 및 보조제로서 충진제, 중량제, 결합제, 윤활제, 습윤제, 붕해제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 방향제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
상기 약학 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 및 멸균 주사용액으로 제형화할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 정맥내 투여, 동맥내 투여, 복강내 투여, 근육내 투여, 흉골내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장 내 투여, 국소 투여, 경구 투여 및 흡입을 통해 통상적인 방식으로 투여할 수 있다
상기 약학 조성물은 증상 정도에 따라 투여 방법이 결정되는데, 통상적으로는 국소 투여 방식이 바람직하다. 또한, 상기 약학 조성물의 상기 유효성분의 유효량은 질환의 예방 또는 치료 요구되는 양을 의미한다. 따라서, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 종류 및 함량, 제형의 종류 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다.
또한, 본 발명은 벨루가 렌틸(beluga lentil) 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름 또는 탄력 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.
상기 건강식품 조성물은 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽 또는 음료의 형태로 제공될 수 있으며, 상기 건강식품 조성물은 상기 유효성분 이외에 다른 식품 또는 식품 첨가물과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 그의 사용 목적 예를 들어 예방, 건강 또는 치료적 처치에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
상기 건강식품 조성물에 함유된 상기 유효성분의 유효용량은 상기 약학 조성물의 유효용량에 준해서 사용할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있음은 확실하다.
상기 건강식품의 종류에는 특별한 제한이 없고, 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등을 들 수 있다.
또한, 본 발명은 벨루가 렌틸(beluga lentil) 추출물을 유효성분으로 함유하는 상처 치유 및 성형용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 벨루가 렌틸(beluga lentil) 추출물을 유효성분으로 함유하는 탈모 개선 또는 발모 촉진용 조성물을 제공한다.
상기 상처 치유 및 성형용 조성물, 및 탈모 개선 또는 발모 촉진용 조성물은 화장료 조성물, 약학 조성물, 건강식품 조성물로 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 i) 벨루가 렌틸을 세척, 건조 및 분쇄하는 단계; ii) 상기 세척, 건조 및 분쇄한 벨루가 렌틸에 메탄올(methanol) 수용액을 가하여 진탕 배양하는 단계; iii) 상기 ii) 단계를 2 내지 5회 반복하여 추출물을 추출하는 단계; iv) 상기 추출물을 여과지에 여과하는 단계; V) 상기 여과된 추출물을 감압 농축하는 단계; 및 vi) 상기 감압 농축된 추출물을 동결건조 하는 단계를 포함하는 벨루가 렌틸 추출물 제조방법을 제공한다.
바람직하게는, 상기 ii) 단계의 메탄올 수용액은 70 내지 90%(w/v) 메탄올 수용액일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다. 메탄올 수용액이 상기 범위를 벗어나는 경우, 벨루가 렌틸 추출물의 제조 수율이 저하되는 문제점이 있을 수 있어 바람직하지 않을 수 있다.
바람직하게는, 상기 ii) 단계는 벨루가 렌틸 추출물과 메탄올 수용액의 중량비가 1:5 내지 1:15일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다. 벨루가 렌틸 추출물과 메탄올 수용액의 질량비가 1:5 미만일 경우에는 유도되는 반응 효율 증진 효과가 미비하여 바람직하지 않고, 벨루가 렌틸 추출물과 메탄올 수용액의 질량비가 1:15를 초과하는 경우에는 필요 이상의 메탄올 수용액을 사용함으로써 비용적인 측면에서 바람직하지 않을 수 있다.
바람직하게는, 상기 ii) 단계는 15 내지 60℃에서 20 내지 30시간 동안 처리하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다. 반응 온도 및 시간이 상기 범위를 벗어나는 경우, 반응 속도가 현저하게 저하되어 벨루가 렌틸 추출물의 제조 수율이 저하되는 문제점이 있을 수 있어 바람직하지 않을 수 있다.
바람직하게는, 상기 iii) 단계는 2 내지 5회 반복할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다.
바람직하게는, 상기 v) 단계는 45 내지 65℃에서 40 내지 60시간 동안 처리하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다. 반응 온도 및 시간이 상기 범위를 벗어나는 경우, 벨루가 렌틸 추출물의 감압 농축 수율이 저하되는 문제점이 있을 수 있어 바람직하지 않을 수 있다.
이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예
1 :
렌틸콩
추출물의 제조
본 연구팀은 벨루가 렌틸의 지방세포 분화 촉진 활성을 평가하기 위하여 바른 약초에서 벨루가 렌틸을 구입하여 실험에 사용하였다. 벨루가 렌틸을 세척, 건조 및 분쇄한 후, 80%(w/v) 메탄올(methanol) 수용액을 10배 가하여 24시간 동안 진탕 배양을 3회 반복하여 렌틸콩 추출물을 추출하였다. 추출액은 여과지(Whatman No. 3, England)를 사용하여 여과하였으며, 회전증발농축기(rotary vacuum evaporator, UNI TRAP UT-1000, Eyela, Tokyo, Japan)를 이용하여 55℃에서 감압 농축한 후, 48시간 동안 동결건조 하였다. 추출물은 분말상태로 -20℃에서 보관하면서 사용하였다.
실시예
2 : 3T3
-L1
지방전구세포의
분화 유도 및 시료 처리
실험에 사용된 3T3-L1 세포는 ATCC(Manassas, VA, USA)에서 분양받아 사용하였다. 3T3-L1 세포는 지방전구세포로 분화 유도제(differentiation inducer)를 처리하면 지방세포로 분화되는 세포로, 배양 및 분화 배지는 DMEM 배지(dulbecco’s modified eagle’s medium high glucose, DMEM; Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)에 10% 우아 혈청(bovine calf serum, BSA) 및 항생제(antibiotics)를 첨가하여 5% CO2, 37℃ 인큐베이터에서 배양하였다. 세포가 포화(confluent) 상태가 되면 트립신(trypsin)/에틸렌다이아민테트라아세트산(ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA)를 처리한 후, 세포를 모아 원심분리(L-70, Bekman Coulter, Fullerton, CA, USA)한다. 그 후, 3 ⅹ 105 세포/well의 밀도로 6 well에 분주한 다음 100% 포화 상태가 되면 48시간 방치한 후 DMEM에 10% 우아 혈청과 분화유도제인 23 mg/ml 3-아이소부틸-1-메틸잔틴(3-isobutyl-1-methylxanthine, IBMX; Sigma-Aldrich, Chem. Co., St. Louis, MO, USA), 5 mg/ml 인슐린(insulin; Sigma-Aldrich, Chem. Co.) 및 1 mM 덱사메타손(dexamethasone; Sigma-Aldrich, Chem. Co.)이 첨가된 배지(MDI)를 처리하여 48시간 동안 분화를 유도한다. 그 후, 2일 마다 10% 소태아혈청(fetal bovine serum, FBS) DMEM 배지에 5 mg/ml의 인슐린이 첨가된 배지를 교체해주었다. 시료의 처리는 분화 유도 배지 첨가 시점부터 같이 처리하였다.
실시예
3 : Oil-red-O 염색
3T3-L1 전구지방세포를 7일 동안 분화시킨 후, 배지를 제거하고 인산완충식염수(phosphate buffered saline, PBS)로 세척하고 10% 포름알데하이드(formaldehyde) 용액으로 세포를 고정시켰다. 다시 인산완충식염수로 세척 후, oil-red-o 용액을 첨가하여 30분간 실온에서 염색하고, oil-red-o 용액을 제거한 후, 증류수로 세척하여 건조시켰다. 그 후, 위상차 현미경을 이용하여 관찰하고 100% 아이소프로필 알코올(isopropyl alcohol)로 염색된 지방구를 용해하여 510 nm에서 흡광도를 측정하였다.
실시예
4 :
아디포넥틴(adiponectin) 단백질
발현 측정
벨루가 렌틸 처리에 의한 지방세포의 아디포넥틴 방출량 및 분화 관련 단백질의 발현을 측정하기 위해 웨스턴 블롯(western bolt)을 실시하였다. 샘플 처리가 완료된 세포(분화 7일째)의 상등액 및 세포를 각각 취하여 단백질을 정량한 후, 10% running gel과 4.5% stacking gel을 이용하여 125V에서 SDS-폴리아크릴아마이드 겔(polyacrylamide gel) 전기영동(SE260, Amersham Biosciences, Uppsala, Sweden)을 실시하였다. 전기영동으로 분리한 단백질은 트렌스퍼 버퍼(transfer buffer; 20% methanol, 25 mM Tris-HCl, 192 mM glycine)를 이용하여 350 mA에서 120분간 이모빌론-피-트렌스퍼 멤브레인(immobilon-P transfer membrane; PVDF transfer membrane, Port Washington, NY, USA)으로 이동시켰다. 단백질이 이동된 멤브레인은 5% 탈지유(non-fat dry milk; skim milk solution)로 블로킹(blocking)하였다. 4℃에서 일차 항체의 발현 정도를 검토하기 위하여 TBST(tris-buffered saline and tween 20) 용액에 1:1000으로 희석하여 24시간 반응시킨 후 TBST로 3 회 세척하였다. 그 후, 이차 항체를 2시간 TBST 용액에 1:2000으로 희석하여 반응시키고 다시 TBST로 3회 세척하였다. 증류수로 한 번 더 세척한 후, 멤브레인에 ECL detection kit(WSE-7120s, ATTO Co., Tokyo, Japan)의 발색시약 Ⅰ과 Ⅱ를 1:1로 섞은 후 혼합액을 도포하고, X-선 필름(X-ray film; CP-G plus, Agfa Healthcare Ltd, New Orleans, LA, USA)에 노출하여 현상한 다음 필름 상에서 단백질의 발현 정도를 관찰하였다.
실험예
1 :
벨루가
렌틸의
지방세포 분화 유도 활성
전구지방세포에 분화유도 인자인 인슐린, 덱사메타손, 아이소부틸메틸젠틴(isobutylmethylxanthine) 및 4종의 렌틸 추출물(beluga, french, green, masoor lentil)을 각각 10, 20 μg/ml의 농도로 처리하여 지방세포로 분화시킨 결과, 도 1을 참조하여 보면, 분화 대조구에 비해 각각의 렌틸을 처리했을 때 10 μg/ml의 농도에서 136, 127, 116, 및 119%의 분화 촉진 효과를 보였다. 그러나 20 μg/ml의 농도로 처리하였을 때, 벨루가 렌틸을 제외한 나머지 렌틸 추출물은 오히려 분화가 감소되었으며, 벨루가 렌틸 추출물은 164%의 높은 분화 촉진 효과를 보였다. 이에 벨루가 렌틸 추출물을 각각 5, 10, 20 μg/ml의 농도로 전구지방세포에 처리하였을 때 분화 대조구에 비해 농도 별로 각각 128, 136, 160%의 분화촉진 효과를 보여 4가지 종류의 렌틸 중 벨루가 렌틸의 지방세포 분화 활성이 가장 높은 것을 확인하였다.
실험예
2 :
벨루가
렌틸의
아디포넥틴
및 지방세포 전사인자의 발현에 미치는 영향
아디포넥틴은 지방세포에서 분비되는 대표적인 단백질 호르몬으로, 지방세포가 분화함에 따라 그 발현량이 증가되는 것으로 보고되었다. 따라서 지방세포 분화 촉진의 지표인 아디포넥틴이 세포 배양 배지로 분비되는 양을 측정하였다. 도 2를 참조하여 보면, 전구지방세포에 분화유도인자와 벨루가 렌틸을 농도 별로 처리했을 때 세포 배양액으로 분비되는 아디포넥틴의 발현을 확인한 결과, 분화 대조구에 비해 벨루가 렌틸을 처리했을 때 처리농도가 증가할수록 아디포넥틴의 발현도 증가하는 것으로 나타났다.
또한, 지방세포의 분화는 지방 조직세포에 특징적으로 발현되는 유전자들의 조절부위에 작용하는 전사인자(transcription factor)들이 지방세포로 분화되는 과정에서 발현된다. 따라서, 7일 동안 지방세포를 분화시킨 결과, 도 3을 참조하여 보면, 전사인자인 SREBP1, PPAR-γ 및 C/EBP α의 단백질 발현이 증가하였고, 벨루가 렌틸을 처리하였을 때 SREBP1 및 PPAR-γ의 발현이 더욱 증가하는 것으로 나타나 벨루가 렌틸의 지방 분화 촉진 효과를 관찰할 수 있었다.
따라서 벨루가 렌틸 추출물은 지방세포 분화 촉진을 통해 피부 주름 또는 탄력 개선용 화장료 조성물, 주름 예방 또는 치료용 약학 조성물, 상처 치유 및 성형 조성물, 주름 또는 탄력 개선용 건강식품 조성물, 탈모 개선 또는 발모 촉진용 조성물 및 암 치료 조성물 등의 효과를 나타낼 수 있을 것으로 보이며, 앞서 언급한 다양한 용도의 조성물 개발을 위한 주요 유효 물질로서의 가능성을 확인하였다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술한 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
본 발명의 범위는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
Claims (12)
- 벨루가 렌틸(beluga lentil) 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름 또는 탄력 개선용 화장료 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 벨루가 렌틸 추출물은 물, C1 내지 C4의 알코올 또는 이의 수용액으로 추출되는 것을 특징으로 하는 주름 또는 탄력 개선용 화장료 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 벨루가 렌틸 추출물은 지방세포 분화를 촉진하여 피부 탄력을 증진시키는 것을 특징으로 하는 주름 또는 탄력 개선용 화장료 조성물.
- 벨루가 렌틸(beluga lentil) 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 벨루가 렌틸(beluga lentil) 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름 또는 탄력 개선용 건강식품 조성물.
- 삭제
- 벨루가 렌틸(beluga lentil) 추출물을 유효성분으로 함유하는 탈모 개선 또는 발모 촉진용 조성물.
- i) 벨루가 렌틸을 세척, 건조 및 분쇄하는 단계;
ii) 상기 세척, 건조 및 분쇄한 벨루가 렌틸에 메탄올(methanol) 수용액을 가하여 진탕 배양하는 단계;
iii) 상기 ii) 단계를 2 내지 5회 반복하여 추출물을 추출하는 단계;
iv) 상기 추출물을 여과지에 여과하는 단계;
V) 상기 여과된 추출물을 감압 농축하는 단계; 및
vi) 상기 감압 농축된 추출물을 동결건조 하는 단계를 포함하는 벨루가 렌틸 추출물 제조방법. - 제 8항에 있어서, 상기 ii) 단계의 메탄올 수용액은 70 내지 90%(w/v) 메탄올 수용액인 것을 특징으로 하는 벨루가 렌틸 추출물 제조방법.
- 제 8항에 있어서, 상기 ii) 단계는 벨루가 렌틸과 메탄올 수용액의 중량비가 1:5 내지 1:15인 것을 특징으로 하는 벨루가 렌틸 추출물 제조방법.
- 제 8항에 있어서, 상기 ii) 단계는 15 내지 60℃에서 20 내지 30시간 동안 처리하는 것을 특징으로 하는 벨루가 렌틸 추출물 제조방법.
- 제 8항에 있어서, 상기 v) 단계는 45 내지 65℃에서 40 내지 60시간 동안 처리하는 것을 특징으로 하는 벨루가 렌틸 추출물 제조방법.
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