KR101932668B1

KR101932668B1 - A pharmaceutical composition for wound healing comprising extract of Euodia sutchuenensis Dode

Info

Publication number: KR101932668B1
Application number: KR1020170053695A
Authority: KR
Inventors: 최강열; 한균희; 이철호; 서설화
Original assignee: 주식회사 씨케이바이오텍
Priority date: 2017-04-26
Filing date: 2017-04-26
Publication date: 2018-12-26
Also published as: KR20180119941A

Abstract

본 발명에 따른 창상 치료용 조성물은 상처 치유를 촉진할 수 있는 약학적 조성물 또는 화장료 조성물로 유용하게 이용할 수 있어 상처 치료제를 비롯하여 상처 치료 기능으로부터 발휘되는 피부 재생 또는 노화 방지 기능성 화장품에 활용될 수 있다.
게다가 본 발명의 쉬나무 추출물은 천연물 유래 조성물로 세포에 대한 독성이 거의 없고, 화학식 1 내지 화학식 4 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 인디루빈 유도체는 인체에 대한 독성이 거의 없다고 밝혀진 안정한 화합물이므로, 이들을 단독 혹은 혼합물로 사용함에 있어서, 종래 스테로이드 약물과 달리 인체에 부작용을 나타내지 않는 장점이 있다.The composition for treating wounds according to the present invention can be used as a pharmaceutical composition or a cosmetic composition capable of promoting wound healing, and can be used in skin regeneration or anti-aging functional cosmetics exhibited from wound healing functions including wound healing agents .
In addition, since the extract of the present invention is a natural product-derived composition, there is almost no toxicity to cells, and any one or more indirubin derivatives selected from Chemical Formulas (1) to (4) are stable compounds proved to have little toxicity to human body. , There is an advantage that unlike conventional steroid drugs, it does not show side effects on the human body.

Description

[0001] The present invention relates to a pharmacological composition for wound healing using Eucommia sinensis extract,

본 발명은 쉬나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 창상 치유용 약학 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a pharmaceutical composition for wound healing which comprises an extract of Aspergillus as an active ingredient.

우리 몸에서 피부는 여러 가지 기능을 담당하고 있으며, 그 중에서도 가장 중요한 기능은 외부로부터 우리의 몸을 보호하는 장벽 역할이라고 할 수 있고, 이러한 장벽 역할을 하는 피부의 정상적인 구조가 파괴된 상태를 창상 혹은 상처라고 한다. 이와 같이 피부가 상처를 입게 되면 상처 부위가 노출되어 외부 균의 침입을 받을 수 있다. 따라서, 신속한 상처치료가 되어야 추가 감염(infection)을 막을 수 있고 또한, 그로 인한 과도한 염증반응(inflammation)을 막을 수 있다. 과도한 염증반응은 상처치유 기간을 연장시킬 뿐 아니라 흉터의 원인이 되기도 한다. 상처치유(wound healing)란 임상적으로 피부가 완전하게 봉합되는 것을 의미하며, 만성상처(chronic wound)가 아닌 일반적인 상처는 대략 3-14일 안에 완전히 치유된다. 피부 상처 치유(cutaneous wound healing)는 내피세포, 혈구세포, 각질세포, 섬유아세포(dermal fibroblast)와 같은 세포의 복합적인 조화를 통해 순차적인 과정을 밟으며 이루어진다. 특히 섬유아세포는 세포외기질(extra cellular matrix) 및 콜라겐의 축적에 중요한 역할을 하는 세포이다. 정상적인 피부 상처 치유는 섬유아세포의 이동과 증식, 콜라겐의 축적과 수축을 필요로 한다.Skin in our body is responsible for various functions. Among them, the most important function is to protect our body from the outside, and the normal structure of the skin, which acts as a barrier, It is called a wound. When the skin is wounded like this, the wound area may be exposed and the foreign bacteria may be invaded. Therefore, rapid wound healing can prevent additional infection and also prevent excessive inflammation. Excessive inflammation not only prolongs wound healing but also causes scarring. A wound healing means a complete closure of the skin clinically, and a normal wound, not a chronic wound, heals completely within about 3-14 days. Cutaneous wound healing is a sequential process through a complex combination of endothelial cells, hematopoietic cells, keratinocytes, and cells such as dermal fibroblasts. In particular, fibroblasts are cells that play an important role in the accumulation of extra cellular matrix and collagen. Normal skin wound healing requires fibroblast migration and proliferation, collagen accumulation and contraction.

현재 국내에서 주로 사용되는 상처 치료제는 동국제약사의 '복합 마데카 솔'(1985년 출시)과 동화약품사의 '후시딘'(1980년 출시)이 있다. 두 제제의 효능은 대체로 비슷하지만, 후시딘은 항균력에, 마데카솔은 흉터 완화에 조금 더 강점을 가지고 있다.Currently, the wound treatment drugs used domestically are Dongkuk Pharmaceutical's 'Compound Madecasol' (released in 1985) and Donghwa Pharmaceutical's 'Fushidin' (released in 1980). The efficacy of both agents is similar, but fucidin has a stronger antimicrobial activity and madecasol has a slightly stronger effect on scarring.

기존의 스테로이드 연고는 소염작용, 면역억제기능, 알레르기성 질환 등에 효과적이지만, 부작용으로 곰보자국, 피부주름, 모낭염 등을 유발하며, 무좀 등의 세균성 질환에는 효과가 없다. 또한, 항생제를 포함하는 연고는 내성을 가질 수 있으며 아이들과 같은 연약한 피부 상처에 사용할 경우 여러 가지 부작용을 유발할 수 있다. 따라서, 스테로이드 연고나 항생연고가 가지는 한계점을 극복하기 위해 상처치유 기전을 기반으로 한 상처치료제가 국내시장에서 선보이고 있다. 또한, 일상에서의 피부 상처보다 더 심각한 사고 상해, 멜라노마와 같은 피부질환 수술 후 생기는 큰 상처, 당뇨병과 같은 타 질환과 연계된 상처 등은 치유에 시간이 걸릴 뿐 아니라 종종 흉터를 유발하는 등 큰 문제가 되고 있다. 대웅제약사에서 일반의약품으로는 국내 최초로 상피세포 성장인자(Epidermal Growth Factor, EGF)를 함유하고 있는 상처치료제 '이지에프 새살연고'를 출시했다. 상피세포 성장인자가 상처부위의 살갗을 덮고(재상피화) 새살을 만들어내는 것(육아조직 증식)을 촉진해 흉터 예방에 도움이 된다. 하지만, 상피세포 성장인자는 단백질인 만큼 생산에 드는 비용과 노력이 매우 큰 것이 단점이다. 따라서 종래 사용되던 호르몬제 또는 화합물 제제들의 단점을 극복하기 위하여 최근에는 천연물을 포함하는 상처치유 제제에 대하여 연구가 진행되고 있다. 천연물로 조성된 제제는 부작용이 적고, 그 작용이 일반적으로 온화하고 지속적이며 보조성분으로 난용성 성분이 이용성 성분으로 되는 경우가 있으며 생분해성이 높고 환경 친화적이라고 알려져 있다. 또한, 천연물은 오랜 임상을 바탕으로 하기 때문에 부작용의 부담이 적고, 상대적으로 신약으로 개발 시 비용이 저렴하며 투자기간이 짧기 때문에, 최근 제약회사들로부터 천연물 신약에 대한 관심이 크게 증가하고 있다. 따라서, 천연물을 이용한 비용 대비 우수한 효과를 갖는 치료제의 개발이 절실히 요구되고 있다.Conventional steroid ointment is effective for anti-inflammatory, immunosuppressive, and allergic diseases, but side effects cause porn marks, skin wrinkles and folliculitis, and are not effective for bacterial diseases such as athlete's foot. In addition, ointments containing antibiotics can have resistance and can cause a variety of side effects when used in fragile skin wounds, such as children. Therefore, in order to overcome the limitations of steroid ointment and antibiotic ointment, a wound healing agent based on the wound healing mechanism is being introduced in the domestic market. In addition, injuries that are more serious than daily skin injuries, large wounds caused by skin diseases such as melanoma, and wounds associated with other diseases such as diabetes are not only time-consuming to heal but also often cause scarring It is becoming a problem. Daewoong Pharmaceutical launched 'Ejfep Newspaper Ointment', a wound treatment drug that contains Epidermal Growth Factor (EGF) as the first general drug in Korea. Epithelial growth factor (Epithelium) helps to prevent scarring by promoting the growth of the wound (reepithelialization) and making new skin (proliferation of granular tissue). However, the epithelial cell growth factor is a protein, which is a disadvantage in that the production cost and effort are very large. Therefore, in order to overcome the disadvantages of conventional hormonal agents or compound preparations, researches on wound healing preparations including natural products are under way. Formulations of natural products are known to have low side effects, generally mild and persistent in their action, and as an auxiliary component, poorly soluble components may become active ingredients and are highly biodegradable and environmentally friendly. In addition, since natural products are based on long-term clinical trials, the burden of side effects is small, and relatively low costs are incurred in developing new drugs, and the investment period is short. Therefore, there is an urgent need to develop a therapeutic agent having an excellent effect on the cost of natural products.

특허문헌 1. 대한민국 등록특허 제10-0998920호Patent Document 1. Korean Patent No. 10-0998920

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로, 본 발명의 목적은 쉬나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 우수한 상처 치유 효과를 갖는 창상 치유용 조성물을 제공하고자 하는 것이다.Disclosure of Invention Technical Problem [8] Accordingly, the present invention has been made keeping in mind the above problems occurring in the prior art, and an object of the present invention is to provide a composition for wound healing having an excellent wound healing effect comprising an extract of Asanovirus as an active ingredient.

본 발명은 상기 목적을 이루기 위하여, 쉬나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 창상 치료용 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a composition for treating wounds comprising an extract of Aspergillus as an active ingredient.

상기 창상 치료용 조성물은 인디루빈 유도체를 더 포함하는 것을 특징으로 한다.The composition for wound healing further comprises an indirubin derivative.

상기 쉬나무 추출물은 쉬나무의 어린가지, 잎, 이의 분쇄물 및 이의 혼합물을 물, DMSO, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합용매를 사용하여 추출된 것을 특징으로 한다.The quilla extract is characterized in that it is extracted with water, DMSO, alcohol having 1 to 4 carbon atoms, and a mixed solvent thereof, and the young branches, leaves, crushed products thereof and mixtures thereof.

상기 쉬나무 추출물은 쉬나무의 어린가지, 잎, 이의 분쇄물 및 이의 혼합물을 DMSO, n-헥산, 에탄올, 에틸아세테이트, 부탄올 및 이들의 혼합 용매로 구성된 군으로부터 선택되는 용매로 분획하여 수득한 것을 특징으로 한다.The chewy ginseng extract is characterized in that it is obtained by fractionating young branches, leaves, pulverized products thereof and mixtures thereof in a solvent selected from the group consisting of DMSO, n-hexane, ethanol, ethyl acetate, butanol and a mixed solvent thereof do.

상기 창상 치료용 조성물은 피부 외용제인 것을 특징으로 한다.The composition for wound healing is characterized by being an external preparation for skin.

상기 인디루빈 유도체는 5-메톡실인디루빈-3'-옥심, 인디루빈-3'-옥심, 6-브로모인디루빈-3'-옥심, 5,6-디클로로인디루빈, 5,6-디클로로인디루빈-3'-옥심, 5,6-디클로로인디루빈-3'-메톡심, 5,6-디클로로인디루빈-3'-프로필옥심, 6-클로로-5-니트로인디루빈, 6-클로로-5-니트로인디루빈-3'-옥심, 6-클로로인디루빈-3'-메톡심, 5-클로로인디루빈-3'-메톡심, 5-브로모인디루빈-3'-옥심, 5-브로모인디루빈-3'-메톡심 및 5-브로모인디루빈-3'-에틸옥심, 5,6-디클로로인디루빈-3'-옥심프로필옥심 및 6-클로로인디루빈-3'-벤질옥심으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.The indirubin derivative may be at least one selected from the group consisting of 5-methoxylindirubin-3'-oxime, indirubin-3'-oxime, 6-bromoindirubin-3'- oxime, 5,6-dichloroindirubin, Indolevin-3'-oxime, 5,6-dichloroindirubin-3'-methoxime, 5,6-dichloroindirubin-3'-propyloxime, 6-chloro- 3'-oxime, 5-bromoindirubin-3'-oxime, 5-bromoindirubin-3'-oxime, 3'-methoxime and 5-bromoindirubin-3'-ethyloxime, 5,6-dichloroindirubin-3'-oxime propyl oxime and 6-chloroindirubin-3'-benzyloxime And the like.

상기 인디루빈 유도체는 하기 화학식 1 내지 화학식 4로 표시되는 것 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 것을 특징으로 한다.The indirubin derivative is characterized by any one or more selected from the following Chemical Formulas (1) to (4).

본 발명은 상기 다른 목적을 이루기 위하여, 쉬나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 재생용 또는 노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다.In order to accomplish the above object, the present invention provides a cosmetic composition for skin regeneration or prevention of aging comprising an extract of Asanovirus as an active ingredient.

상기 화장료 조성물은 인디루빈 유도체를 더 포함하는 것을 특징으로 한다.The cosmetic composition is characterized by further comprising an indirubin derivative.

[화학식 1][Chemical Formula 1]

[화학식 2](2)

[화학식 3](3)

[화학식 4][Chemical Formula 4]

본 발명에 따른 창상 치료용 조성물은 상처 치유를 촉진할 수 있는 약학적 조성물 또는 화장료 조성물로 유용하게 이용할 수 있어 상처 치료제를 비롯하여 상처 치료 기능으로부터 발휘되는 피부 재생 또는 노화 방지 기능성 화장품에 활용될 수 있다.The composition for treating wounds according to the present invention can be used as a pharmaceutical composition or a cosmetic composition capable of promoting wound healing, and can be used in skin regeneration or anti-aging functional cosmetics exhibited from wound healing functions including wound healing agents .

게다가 본 발명의 쉬나무 추출물은 천연물 유래 조성물로 세포에 대한 독성이 거의 없고, 인디루빈 유도체는 인체에 대한 독성이 거의 없다고 밝혀진 안정한 화합물이므로, 이들을 단독 혹은 혼합물로 사용함에 있어서, 종래 스테로이드 약물과 달리 인체에 부작용을 나타내지 않는 장점이 있다.In addition, since the extract of the present invention is a natural compound-derived composition, there is almost no toxicity to cells, and the indirubin derivative is a stable compound proved to have little toxicity to the human body. Therefore, unlike conventional steroid drugs, There is an advantage in that no side effects are exhibited.

도 1a는 실시예 1로부터 제조된 쉬나무 추출물, 제조예 1로부터 제조된 인디루빈 유도체(화학식 1) 또는 실시예 2로부터 제조된 복합물의 처리에 따른 세포의 이동능을 확인하기 위하여, 케라티노사이트에서 세포의 이동능을 나타낸 사진이다.
도 1b는 실시예 1로부터 제조된 쉬나무 추출물, 제조예 1로부터 제조된 인디루빈 유도체(화학식 1) 또는 실시예 2로부터 제조된 복합물의 처리에 따른 세포의 이동능을 확인하기 위하여, 케라티노사이트 세포에서 세포의 이동률을 정량적으로 나타낸 그래프이다.
도 1c는 실시예 1로부터 제조된 쉬나무 추출물, 제조예 2로부터 제조된 인디루빈 유도체(화학식 2) 또는 실시예 3으로부터 제조된 복합물의 처리에 따른 세포의 이동능을 확인하기 위하여, 케라티노사이트에서 세포의 이동능을 나타낸 사진이다. 이때 대조군(control)은 쉬나무 추출물 또는 복합물을 처리하지 않은 케라티노사이트 세포를 의미한다.
도 1d는 실시예 1로부터 제조된 쉬나무 추출물, 제조예 3으로부터 제조된 인디루빈 유도체(화학식 3) 또는 실시예 4로부터 제조된 복합물의 처리에 따른 세포의 이동능을 확인하기 위하여, 케라티노사이트에서 세포의 이동능을 나타낸 사진이다. 이때 대조군(control)은 쉬나무 추출물 또는 복합물을 처리하지 않은 케라티노사이트 세포를 의미한다.
도 1e는 실시예 1로부터 제조된 쉬나무 추출물, 제조예 4로부터 제조된 인디루빈 유도체(화학식 4) 또는 실시예 5로부터 제조된 복합물의 처리에 따른 세포의 이동능을 확인하기 위하여, 케라티노사이트에서 세포의 이동능을 나타낸 사진이다. 이때 대조군(control)은 쉬나무 추출물 또는 복합물을 처리하지 않은 케라티노사이트 세포를 의미한다.
도 2는 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 실시예 2의 혼합물을 처리한 마우스 급성 상처 조직에 대하여, 시간의 흐름에 따라 촬영한 사진 및 염색 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 실시예 2의 혼합물을 처리한 마우스 급성 상처 조직에 대하여, 시간의 흐름에 따라 측정된 재상피화 정도를 정량화하여 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 실시예 2의 혼합물을 처리한 마우스 급성 상처 조직에 대한 Masson's trichrome staining, van Gieson staining, picrosirius red staining 염색 결과이다.
도 5는 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 실시예 2의 혼합물이 EGF보다 효과적으로 급성 상처를 치유할 수 있음을 보여주는 결과이다.
도 6은 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 화학식 1의 화합물(A3334), 화학식 2의 화합물(A3051) 및 양성대조군으로 EGF을 각각 단독으로 처리한 마우스 급성 상처 조직을 0일 째와 14일 째에 촬영한 사진과 Masson's trichrome staining, van Gieson staining 염색 결과를 나타낸 사진이다.
도 7은 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 화학식 1의 화합물(A3334), 화학식 2의 화합물(A3051) 및 EGF(양성대조군)을 처리한 마우스 급성 상처 조직에 대하여 시간의 흐름에 따라 측정된 재상피화 정도를 정량화하여 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 화학식 1의 화합물(A3334), EGF(양성대조군) 및 실시예 2의 복합물을 각각 처리한 마우스 급성 상처 조직을 0일 째와 14일 째에 촬영한 사진과 Masson's trichrome staining, van Gieson staining 염색 결과를 나타낸 사진이다.
도 9는 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 화학식 1의 화합물(A3334), EGF(양성대조군) 및 실시예 2의 복합물을 처리한 마우스 급성 상처 조직에 대하여 시간의 흐름에 따라 측정된 재상피화 정도를 정량화하여 나타낸 그래프이다.
도 10은 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 화학식 2의 화합물(A3334), EGF(양성대조군) 및 실시예 3의 복합물을 각각 단독으로 처리한 마우스 급성 상처 조직을 0일 째와 14일 째에 촬영한 사진과 Masson's trichrome staining, van Gieson staining 염색 결과를 나타낸 사진이다.
도 11은 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 화학식 2의 화합물(A3051), EGF(양성대조군) 및 실시예 3의 복합물을 처리한 마우스 급성 상처 조직에 대하여 시간의 흐름에 따라 측정된 재상피화 정도를 정량화하여 나타낸 그래프이다.FIG. 1A is a graph showing the cell migration ability according to the treatment of the extract of the shilla extract prepared in Example 1, the indirubin derivative (Formula 1) prepared in Preparation Example 1 or the composite prepared in Example 2, This is a photograph showing the migration ability of cells.
FIG. 1B is a graph showing the cell migration ability according to the treatment of the extract of the shilla extract prepared in Example 1, the indirubin derivative (Formula 1) prepared in Preparation Example 1 or the composite prepared in Example 2, Of the present invention.
Fig. 1C is a graph showing the cell migration ability of the extract obtained from Example 1, the indirubin derivative (Formula 2) prepared in Preparation Example 2 or the composite prepared in Example 3, in keratinocytes This is a photograph showing the migration ability of cells. Here, the control (control) refers to a keratinocyte cell that has not been treated with an extract of squid or a complex.
FIG. 1D is a graph showing the cell migration ability of the extract prepared from Example 1, the indirubin derivative (Formula 3) prepared in Preparation Example 3 or the composite prepared in Example 4, in keratinocytes This is a photograph showing the migration ability of cells. Here, the control (control) refers to a keratinocyte cell that has not been treated with an extract of squid or a complex.
Fig. 1 (e) is a graph showing the effect of the extracts of quinic acid extract prepared from Example 1, indirubin derivative (4) prepared in Preparation Example 4 or the composite prepared in Example 5 on keratinocytes This is a photograph showing the migration ability of cells. Here, the control (control) refers to a keratinocyte cell that has not been treated with an extract of squid or a complex.
FIG. 2 is a photograph of the acute injured tissue of the mouse treated with the mixture of the extract of the squash extract of Example 1 and the mixture of Example 2 according to the present invention, and the result of photographing and the result of dyeing according to the passage of time.
FIG. 3 is a graph showing the degree of re-epithelialization measured according to time with respect to the acute wound tissue of a mouse treated with the mixture of the squilla extract of Example 1 and the mixture of Example 2 according to the present invention.
FIG. 4 shows Masson's trichrome staining, van Gieson staining, and picrosirius red staining staining of acute wounded tissues of mice treated with the mixture of the chimney extract of Example 1 and Example 2 according to the present invention.
FIG. 5 shows the results of showing that the mixture of the extract of Example 1 and the mixture of Example 2 according to the present invention can more effectively heal acute wounds than EGF.
FIG. 6 is a graph showing the changes in the acute wounded tissues of mice treated with the extract of Asahi extract of Example 1, the compound of formula 1 (A3334), the compound of formula 2 (A3051) and the positive control EGF alone on day 0 and 14 The photographs taken at the first day, Masson's trichrome staining, and van Gieson staining were obtained.
FIG. 7 is a graph showing the results of measurement of acute wounded tissues treated with the extract of squirrel extract of Example 1 according to the present invention, compound (A3334), compound (A3051) and EGF (positive control) And quantifying the degree of re-epithelization.
FIG. 8 is a graph showing the results of evaluation of the acute wounded tissues of mice treated with the extract of the extract of Example 1 and the compound of formula (A3334), EGF (positive control) and Example 2 on days 0 and 14 This photograph shows the results of staining with Masson's trichrome staining and van Gieson staining.
FIG. 9 is a graph showing the relationship between the amount of a substance (A3334), the amount of a substance (A3334), an EGF (positive control) and a compound of Example 2 And the degree of epithelization is quantified.
Fig. 10 is a graph showing the effect of the acute wounded tissues treated with the extract of the extract of Example 1 of the present invention and the compound of formula (A3334), EGF (positive control) and Example 3 on the 0th day and 14th day The photographs taken at the second time, Masson's trichrome staining, and van Gieson staining were obtained.
FIG. 11 is a graph showing the results of evaluation of the acute wounded tissue treated with the combination of the extract of the extract of Example 1 and the compound (A3051), EGF (positive control) and Example 3 according to the present invention over time And the degree of epithelization is quantified.

이하에서, 본 발명의 여러 측면 및 다양한 구현예에 대해 더욱 구체적으로 살펴보도록 한다.
Hereinafter, various aspects and various embodiments of the present invention will be described in more detail.

본 발명의 일 측면은 쉬나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 창상 치료용 조성물에 관한 것이다.One aspect of the present invention relates to a wound-healing composition comprising an extract of Aspergillus as an active ingredient.

상기 창상 치료용 조성물은 인디루빈 유도체를 더 포함할 수 있다. 상기 인디루빈 유도체는 5-메톡실인디루빈-3'-옥심, 인디루빈-3'-옥심, 6-브로모인디루빈-3'-옥심, 5,6-디클로로인디루빈, 5,6-디클로로인디루빈-3'-옥심, 5,6-디클로로인디루빈-3'-메톡심, 5,6-디클로로인디루빈-3'-프로필옥심, 6-클로로-5-니트로인디루빈, 6-클로로-5-니트로인디루빈-3'-옥심, 6-클로로인디루빈-3'-메톡심, 5-클로로인디루빈-3'-메톡심, 5-브로모인디루빈-3'-옥심, 5-브로모인디루빈-3'-메톡심, 5-브로모인디루빈-3'-에틸옥심, 5,6-디클로로인디루빈-3'-옥심프로필옥심 및 6-클로로인디루빈-3'-벤질옥심으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.The composition for wound healing may further comprise an indirubin derivative. The indirubin derivative may be at least one selected from the group consisting of 5-methoxylindirubin-3'-oxime, indirubin-3'-oxime, 6-bromoindirubin-3'- oxime, 5,6-dichloroindirubin, Indolevin-3'-oxime, 5,6-dichloroindirubin-3'-methoxime, 5,6-dichloroindirubin-3'-propyloxime, 6-chloro- 3'-oxime, 5-bromoindirubin-3'-oxime, 5-bromoindirubin-3'-oxime, 3'-methoxime, 5-bromoindirubin-3'-ethyloxime, 5,6-dichloroindirubin-3'-oxime propyl oxime and 6-chloroindirubin-3'-benzyloxime And the like.

바람직하게 상기 인디루빈 유도체는 장기간 세포에 처리하여도 세포에 대한 독성이 거의 나타나지 않으면서, 쉬나무 추출물과 함께 처리하였을 때 유의한 효과의 증가가 있는 하기 화학식 1 내지 화학식 4로 표시되는 것 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 것일 수 있고, 가장 바람직하게는 하기 화학식 1 또는 2로 표시되는 5-메톡실인디루빈-3'-옥심일 수 있다. 왜냐하면 생체 외(in virto) 실험과 동물실험 결과에서 화학식 1 또는 화학식 2의 인디루빈 유도체와 쉬나무 추출물을 함께 처리하는 것이 화학식 3 또는 화학식 4의 인디루빈 유도체와 쉬나무 추출물을 함께 처리하는 경우, 쉬나무 추출물과 화학식 1 내지 4의 인디루빈 유도체를 단독으로 처리하는 경우에 비해, 3 배 이상 wound closure rate(%)가 향상되고, 상처 치유 효과 역시 단순한 상승효과 이상의 치유 효과(1.5 배, 2.0배)를 갖고 있음을 확인할 수 있었기 때문이다. 다시 말해 상기 쉬나무 추출물과 함께 사용되는 인디루빈 유도체로는 하기 화학식 1 내지 화학식 4로 표시되는 것 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 것일 수 있으나 가장 바람직하게는 5-메톡실인디루빈-3'-옥심(화학식 1) 또는 5,6-디클로로인디루빈-3'-메톡심(화학식2)일 수 있다.Preferably, the indirubin derivative is selected from those represented by the following formulas (1) to (4), wherein the indirubin derivative exhibits a significant effect when treated with an extract of Aspergillus oryzae And most preferably 5-methoxylindirubin-3'-oxime represented by the following formula (1) or (2). This is because, when the indirubin derivative of Chemical Formula (1) or Chemical Formula (2) and quillaia extract are treated together in an in vitro test and an animal test result, when the indirubin derivative of Chemical Formula (3) or Chemical Formula (4) The wound closure rate (%) was improved three times or more and the wound healing effect was also improved (1.5 times and 2.0 times) than the merely synergistic effect, compared with the case where the indirubin derivatives of the formulas (1) It was confirmed that there was. In other words, the indirubin derivative used in combination with the above-mentioned squalene extract may be any one or more selected from the following Chemical Formulas 1 to 4, and most preferably 5-methoxylindirubin-3'-oxime (Chemical Formula 1) or 5,6-dichloroindirubin-3'-methoxime (Formula 2).

[화학식 1][Chemical Formula 1]

[화학식 2](2)

[화학식 3](3)

[화학식 4][Chemical Formula 4]

상기 쉬나무 추출물 또는 상기 쉬나무 추출물과 상기 화학식 1 내지 화학식 4로 표시되는 것 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 인디루빈 유도체가 혼합된 복합물은 하기의 실시예 및 도면에 나타난 바와 같이, 쉬나무 추출물 단독 또는 쉬나무 추출물과 화학식 1 내지 화학식 4로 표시되는 것 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 인디루빈 유도체를 혼합한 복합물에 의한 세포의 운동성을 확인한 결과 우수한 세포의 이동능이 현저히 향상된 것을 확인할 수 있었다, 특히 쉬나무 추출물과 인디루빈 유도체(A3334, A3041)를 혼합할 경우에는, 쉬나무 추출물을 단독으로 처리하였을 때 보다 3 배 높은 것을 확인하였다.As shown in the following examples and figures, the combination of the above-mentioned chewy extract or the above-mentioned quilla extract and any one or more indirubin derivatives selected from the above-mentioned formulas (1) to (4) The mobility of the cells was confirmed to be remarkably improved by the complex mixture of any one of indirubin derivatives selected from Chemical Formulas 1 to 4. As a result, it was found that the mushroom extract and the indirubin derivative A3334, and A3041) were mixed, it was confirmed that the extract was three times as high as that of the extract obtained by treating the extract of Aspergillus oryzae.

또한 쉬나무 추출물 단독 또는 쉬나무 추출물과 화학식 1 또는 화학식 2의 인디루빈 유도체를 혼합한 복합물 마우스의 상처에 도포한 결과, 마우스에 생긴 급성 상처가 빠르게 재상피화(re-epithelialization)되고, 다양한 종류의 콜라겐 조직의 상처 치유 마커들이 증가함을 확인할 수 있다.In addition, as a result of applying the extract to a scar of a compound mouse mixed with an extract of a Chinese cabbage extract or an extract of a Chinese cabbage and an indirubin derivative of the formula (1) or (2), acute scarring in the mouse was rapidly re- epithelialized, and various kinds of collagen tissues Of the wound healing markers.

게다가 쉬나무 추출물과 화학식 1 또는 2의 인디루빈 유도체를 혼합한 복합물은 종래 상피세포 성장인자를 직접 처리한 경우보다도 우수한 상처 치유 효과를 나타내고 있음을 확인하였다.Furthermore, it has been confirmed that the combination of the squamaxin extract and the indirubin derivative of the formula (I) or (II) exhibits an excellent wound healing effect compared to the case of directly treating the epithelial cell growth factor.

[화학식 1][Chemical Formula 1]

[화학식 2](2)

[화학식 3](3)

[화학식 4][Chemical Formula 4]

따라서, 본 발명에 따른 쉬나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 창상 치료용 조성물과 쉬나무 추출물과 상기 화학식 1 내지 화학식 4로 표시되는 것 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 인디루빈 유도체가 혼합된 복합물은 상처 치유(wound healing) 효과를 갖는 약학적 조성물 및 화장료 조성물 등으로 이용할 수 있다.Accordingly, a composition for treating wounds comprising an extract of Aspergillus oryzae according to the present invention as an active ingredient, a mixture of an extract of an Aspergillus oryzae and any one or more indirubin derivatives selected from the above Chemical Formulas (1) to (4) healing effect, and cosmetic composition.

본 발명에 따른 조성물은 상처 치유에 있어서 중요한 역할을 하는 케라티노사이트와 섬유아세포에서, 세포의 운동성을 극대화할 뿐만 아니라 콜라겐 촉진 및 축적도 증가시키는 효과를 갖는다.The composition according to the present invention not only maximizes cell motility but also promotes collagen promotion and accumulation in keratinocytes and fibroblasts, which play an important role in wound healing.

특히, 케라티노사이트(keratinocytes)는 외피 세포에서 발견되는 세포의 한 유형으로 외피세포의 기저층을 형성하고, 피부의 표면상에 각질화된 성숙한 세포층을 형성하기까지, 케라티노사이트는 구조의 확대와 변형에 의해 외피층(각질층, corneal stralum)을 형성한다. 상처 치유 속도는 몇몇 인자들 중 케라티노사이트의 증식 및 이동 속도에 의해 영향을 받는데, 본 발명에 따른 조성물이 케라티노사이트의 이동속도를 증가시키는 것으로 보아 상처 치유에 유요한 효과를 나타내고 있음을 알 수 있다.In particular, keratinocytes are a type of cells found in epithelial cells that form the basal layer of the epithelial cells and form keratinocytes on the surface of the skin, (Stratum corneum, sternum layer) is formed by. The rate of wound healing is influenced by the proliferation and migration rate of keratinocytes among several factors. The composition according to the present invention increases the keratinocyte migration rate, indicating that it has a beneficial effect on wound healing .

또한 본 발명에 따른 조성물은 쉬나무 추출물에 상기 화학식 1 내지 화학식 4로 표시되는 것 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 인디루빈 유도체를 더 포함한 것일 수 있는데, 상처 치유 효과에 있어서, 상기 인디루빈 유도체는 5-메톡실인디루빈-3'-옥심, 인디루빈-3'-옥심, 6-브로모인디루빈-3'-옥심, 5,6-디클로로인디루빈, 5,6-디클로로인디루빈-3'-옥심, 5,6-디클로로인디루빈-3'-메톡심, 5,6-디클로로인디루빈-3'-프로필옥심, 6-클로로-5-니트로인디루빈, 6-클로로-5-니트로인디루빈-3'-옥심, 6-클로로인디루빈-3'-메톡심, 5-클로로인디루빈-3'-메톡심, 5-브로모인디루빈-3'-옥심, 5-브로모인디루빈-3'-메톡심, 5-브로모인디루빈-3'-에틸옥심, 5,6-디클로로인디루빈-3'-옥심프로필옥심 및 6-클로로인디루빈-3'-벤질옥심으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있는데, 바람직하게 상기 인디루빈 유도체 중에서 선택되는 어느 하나와 혼합되는 것보다 5-메톡실인디루빈-3'-옥심(화학식 1), 5,6-디클로로인디루빈-3'-메톡심(화학식 2), 5,6-디클로로인디루빈-3'-옥심프로필옥심(화학식 3) 및 6-클로로인디루빈-3'-벤질옥심(화학식 4) 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 인디루빈 유도체들이 쉬나무 추출물과 혼합되는 것이 시너지 효과 이상의 상처 치유 효과를 나타냄을 확인하였다. 구체적으로 급성 상처가 빠르게 재상피화되며, 다양한 종류에 대한 콜라겐 생성을 촉진하고 이의 축적 및 수축을 활성화하는 효과를 갖는 장점이 있으며, 섬유아세포의 이동과 증식을 활성화하는 효과를 나타내는 등 매우 현저한 창상 치유 효과를 나타낸다. 구체적으로 5-메톡실인디루빈-3'-옥심(화학식 1), 5,6-디클로로인디루빈-3'-메톡심(화학식 2), 5,6-디클로로인디루빈-3'-옥심프로필옥심(화학식 3) 및 6-클로로인디루빈-3'-벤질옥심(화학식 4) 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 인디루빈 유도체를 사용하는 경우, 다른 인디루빈 유도체를 사용했을 때보다 약 1.3~1.5배의 유의적 효과차이를 확인할 수 있다. 나아가 5-메톡실인디루빈-3'-옥심(화학식 1) 또는 5,6-디클로로인디루빈-3'-메톡심(화학식 2)을 사용하는 경우 생체 외(in virto) 실험과 동물실험 결과에서 화학식 1 또는 화학식 2의 인디루빈 유도체와 쉬나무 추출물을 함께 처리하는 것이 화학식 3 또는 화학식 4의 인디루빈 유도체와 쉬나무 추출물을 함께 처리하는 경우, 쉬나무 추출물과 화학식 1 내지 4의 인디루빈 유도체를 단독으로 처리하는 경우에 비해, 3 배 이상 wound closure rate(%)가 향상되고, 상처 치유 효과 역시 단순한 상승효과 이상의 치유 효과(1.5 배, 2.0배)를 갖고 있음을 확인할 수 있었기 때문이다.In addition, the composition according to the present invention may further comprise one or more indirubin derivatives selected from the above-mentioned chemical formulas (1) to (4) in the extract of chinensis. In the wound healing effect, Oxime, indirubin-3'-oxime, 6-bromoindirubin-3'-oxime, 5,6-dichloroindirubin, 5,6-dichloroindirubin- Dichloroindirubin-3'-methoxime, 5,6-dichloroindirubin-3'-propyloxime, 6-chloro-5-nitroindirubin, 6-chloro-5-nitroindirubin- -Oxime, 6-chloroindirubin-3'-methoxime, 5-chloroindirubin-3'-methox, 5-bromoindirubin- Is selected from the group consisting of 5-bromoindolin-3'-ethyloxime, 5,6-dichloroindirubin-3'-oximethylpropoxime and 6-chloroindirubin-3'-benzyloxime. Can Oxime (Formula 1), 5,6-dichloroindirubin-3'-methoxime (Formula 2) is preferably used in combination with 5-methoxylindirubin-3'- ), 5,6-dichloroindirubin-3'-oxime propyl oxime (formula 3) and 6-chloroindirubin-3'-benzyl oxime (formula 4) Which is a synergistic effect. Specifically, acute scars rapidly reepithelize, promote the production of collagen in various kinds, activate the accumulation and contraction of the collagen, and exhibit a remarkable effect of wound healing such as activation of fibroblast migration and proliferation Effect. Specifically, 5-methoxylindirubin-3'-oxime (Formula 1), 5,6-dichloroindirubin-3'-methoxime (Formula 2), 5,6-dichloroindirubin- When the indirubin derivative selected from the group consisting of the indole derivative (Formula 3) and 6-chloroindirubin-3'-benzyloxime (Formula 4) is used, the ratio of about 1.3 to 1.5 times The difference in effect can be confirmed. Furthermore, 5-methoxyl indicator Rubin-3'-oxime (I) or 5,6-dichloro-3'-methoxy indicator Rubin toksim When using the (Formula 2) in vitro (in virto) in the experiment and in animals When the indirubin derivative of the formula (1) or (2) and the quilla extract are treated together, the indirubin derivative of the formula (3) or (4) and the quilla extract are treated together, and the quilla extract and the indirubin derivatives of the formulas , Wound closure rate (%) was improved more than 3 times and wound healing effect was more than merely synergistic effect (1.5 times, 2.0 times).

본 발명에 따른 조성물은 상처 치료 능력이 뛰어난 효과를 나타내고, 세포 손상이 일어날 경우 세포 손상을 치유할 수 있는 것으로, 창상 치료 및 피부를 회복시킬 수 있으므로 피부 상처 예를 들면 찰과상, 절상, 타박상, 자상, 열상 및 교상의 치료 및 예방에 유용하게 사용될 수 있다. 가장 바람직하게는 피부 상처에 의한 것일 수 있다.The composition according to the present invention exhibits an excellent wound healing ability and is capable of healing cell damage when cell damage occurs. Since it can heal wounds and restore skin, skin wounds such as abrasions, abrasions, bruises, , Laceration, and acupuncture. Most preferably by skin wound.

상기 쉬나무 추출물과 화학식 1 내지 화학식 4로 표시되는 것 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 인디루빈 유도체의 혼합 중량비는 특별히 이에 제한되지 않으나, 상기 쉬나무 추출물과 화학식 1 내지 화학식 4로 표시되는 것 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 인디루빈 유도체의 혼합 중량비는 0.01 : 1 내지 100 : 1인 것이 바람직하고, 가장 바람직하게는 0.1 : 1 내지 10 : 1일 수 있다. 상기 혼합 중량비가 0.1 : 1 미만이거나 100 : 1을 초과할 경우 창상 치유에 소요되는 치료기간이 길어질 수 있다.The mixed weight ratio of the above extract to at least one indirubin derivative selected from the general formulas (1) to (4) is not particularly limited, but it is preferable that the mixture of the above extract and the one selected from Chemical Formulas 1 to 4 Or more of the indirubin derivative is preferably 0.01: 1 to 100: 1, and most preferably 0.1: 1 to 10: 1. If the mixing weight ratio is less than 0.1: 1 or more than 100: 1, the treatment period for wound healing may be prolonged.

상기 창상 치료용 조성물은 쉬나무 추출물이 포함되는 농도는 당업계에서 일반적인 범위라면 특별히 제한되지 않으나, 바람직하게 0.01 μM 내지 1000 μM 농도로 포함되는 것일 수 있는데, 0.01 μM 미만이면 충분한 상처치유 효과가 나타나지 않을 수 있으며, 1000 μM을 초과할 경우 추출물에 포함된 용매가 과도하게 포함되어 피부 자극이 유발될 수 있다.The composition for treating wounds is not particularly limited as long as the concentration of the extract of squirrels is in the range generally used in the art, but it may be preferably contained at a concentration of 0.01 μM to 1000 μM. If the concentration is less than 0.01 μM, If it exceeds 1000 μM, the solvent contained in the extract may be excessively contained and skin irritation may be induced.

상기 쉬나무 추출물은 쉬나무의 어린가지, 잎, 이의 분쇄물 및 이의 혼합물을 물, DMSO, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합용매를 사용하여 추출된 것이다.The chum extract is extracted with water, DMSO, alcohol having 1 to 4 carbon atoms, and a mixed solvent thereof, and the young branches, leaves, crushed products thereof and mixtures thereof.

상기 쉬나무 추출물은 쉬나무의 어린가지, 잎, 이의 분쇄물 및 이의 혼합물을 DMSO, n-헥산, 에탄올, 에틸아세테이트, 부탄올 및 이들의 혼합 용매로 구성된 군으로부터 선택되는 용매로 분획하여 수득한 것일 수 있다.The quilla extract may be obtained by fractionating the young branches, leaves, crushed products of the quince, and the mixture thereof with a solvent selected from the group consisting of DMSO, n-hexane, ethanol, ethyl acetate, butanol and a mixed solvent thereof .

한편, 본 명세서에서 용어 '유효성분으로 포함하는'이란 본 발명의 피부에서의 창상을 치료하는데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다.The term " comprising as an active ingredient " is meant herein to include an amount sufficient to treat wounds on the skin of the present invention.

본 발명의 창상 치유용 조성물은 당업계에 일반적인 제형 예컨대 경구투여제 혹은 주사제 혹은 비경구 투여 혹은 도포에 의한 국부투여 방식으로 적용될 수 있으며, 본 발명의 약학적 조성물의 적합한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태 투여경로 및 기간에 따라 다를 수 있으며, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 가장 바람직한 것은 비경구 투여 또는 도포에 의한 국부투여 방식일 수 있다.The wound-healing composition of the present invention can be applied by a local administration method such as oral administration form or injectable formulation or parenteral administration or application, which is a common formulation in the art, and a suitable dosage amount of the pharmaceutical composition of the present invention is The severity of the disease, the route of administration, and the duration of the drug form, and may be appropriately selected by those skilled in the art. Most preferred, however, may be a topical administration route by parenteral administration or application.

본 발명의 창상 치유용 조성물이 경구 또는 주사제 투여방식일 경우, 본 발명에 따른 조성물은 약제의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있으며, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화 하여 사용될 수 있다.When the wound-healing composition of the present invention is administered orally or injected, the composition according to the present invention may further comprise suitable carriers, excipients and diluents conventionally used in the manufacture of medicaments, , Granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, oral preparations such as syrups and aerosols, external preparations, suppositories, and sterilized injection solutions.

본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.Examples of carriers, excipients and diluents that can be included in the composition of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, Cellulose, methylcellulose, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘(calcium carbonate), 슈크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤젤라틴 등이 사용될 수 있다.In the case of formulation, a diluent or excipient such as a filler, an extender, a binder, a wetting agent, a disintegrant, or a surfactant is usually used. Solid formulations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules and the like, which may be formulated into the compositions of the present invention with at least one excipient such as starch, calcium carbonate, (sucrose), lactose, gelatin and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used. Examples of the liquid preparation for oral use include suspensions, solutions, emulsions, and syrups. In addition to water and liquid paraffin, simple diluents commonly used, various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, preservatives and the like may be included . Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Examples of the suspending agent include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like. As a suppository base, witepsol, macrogol, tween 61, cacao paper, laurin, glycerol gelatin and the like can be used.

본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 조성물은 1일 0.0001 내지 10 g/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 8 mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 바람직하게는, 1일 0.1mg 내지 10mg, 0.25mg 내지 5mg, 0.5 mg 내지 2 mg의 범위 내에서 투여할 수 있다. 예를 들어, 1일 0.125mg, 0.25mg, 0.5mg, 0.75mg, 1 mg, 1.5mg, 2mg으로 투여할 수 있다.The preferred dosage of the composition of the present invention varies depending on the condition and the weight of the patient, the degree of disease, the type of drug, the route of administration and the period of time, but can be appropriately selected by those skilled in the art. However, for the desired effect, the composition of the present invention is preferably administered at a daily dose of 0.0001 to 10 g / kg, preferably 0.001 to 8 mg / kg. The administration may be carried out once a day or divided into several times. The dose is not intended to limit the scope of the invention in any way. Preferably 0.1 mg to 10 mg, 0.25 mg to 5 mg, and 0.5 mg to 2 mg per day. For example, 0.125 mg, 0.25 mg, 0.5 mg, 0.75 mg, 1 mg, 1.5 mg, 2 mg per day.

나아가, 본 발명의 조성물이 비경구 투여 또는 국소 투여일 수 있고, 국소 투여일 경우 피부에 직접적으로 도포하는 방식으로 투여하는 것이 가장 바람직하다.Further, the composition of the present invention may be administered parenterally or topically, and in the case of topical administration, it is most preferable to administer the composition by directly applying it to the skin.

창상 치유용 조성물이 액제, 크림제, 로션제, 겔제 또는 에어로졸제의 형태로 국부적으로 응용되도록 제제화되는 경우에는 적합한 통상적인 첨가제, 예를 들어 보존제, 의약 침투를 보조하는 용매, 연고 및 크림의 경우 연화제 등을 포함할 수 있다. 상기 국부 제제는 또한 상용가능한 통상적 담체, 예를 들어, 크림 또는 연고베이스 및 로션용으로는 에탄올 또는 올레일 알코올을 함유할 수 있다. 상기 담체는 제제의 약 1 내지 약 98%를 구성할 수 있고, 더욱 일반적으로는 제제의 약 80% 까지를 구성할 수 있다. In the case where the composition for wound healing is formulated so as to be applied locally in the form of a liquid preparation, a cream preparation, a lotion preparation, a gel or an aerosol preparation, suitable conventional additives such as preservatives, solvents, ointments and creams Softening agents, and the like. The topical formulations may also contain conventional commensal carriers, for example, cream or ointment bases and, for lotions, ethanol or oleyl alcohol. The carrier may comprise from about 1% to about 98% of the formulation, and more typically up to about 80% of the formulation.

본 발명에 따른 창상 치유용 조성물은 피부, 상처에 직접 도포 또는 산포하는 등의 방법에 의해 투여할 수 있는 제형, 예를 들어, 크림, 로션, 연고, 에어로졸, 겔, 또는 팩의 제형을 갖는 것일 수 있다. 각각의 제형에 적합한 배합성분이나 제제를 위한 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 당업자들은 이들 제제를 제조할 때, 통상의 외용제를 제조하는 데에 사용되는 각종 배합 성분을 적절히 선택하여 사용할 수 있다The composition for wound healing according to the present invention may be in the form of a formulation which can be administered by a method such as direct application or spreading on the skin or wound, for example, a cream, a lotion, an ointment, an aerosol, a gel, . Methods for formulation ingredients and formulations suitable for each formulation are well known in the art. Those skilled in the art can appropriately select and use various compounding ingredients used in the preparation of these external preparations when manufacturing these preparations

그러한 성분으로는 연고제, 크림제, 겔제, 로션제 등의 경우에 있어서는, 백색 바셀린, 황색 바셀린, 라놀린, 표백밀랍, 세탄올, 스테아릴알코올, 스테아르산, 경화유, 겔화 탄화수소, 폴리에틸렌글리콜, 유동 파라핀, 스쿠알란 등의 기제가 있고, 올레산, 미리스트산이소프로필, 트리이소옥탄산글리세린, 크로타미톤, 세바크산디에틸, 아디프산디이소프로필, 라우르산헥실, 지방산, 지방산 에스테르, 지방족 알코올, 식물유 등의 용제 및 용해 보조제가 있으며, 토코페롤 유도체, L-아스코르브산, 디부틸하이드록시톨루엔, 부틸하이드록시아니솔 등의 산화 방지제, 파라하이드록시벤조산에스테르 등의 방부제, 글리세린, 프로필렌글리콜, 히알루론산나트륨 등의 보습제, 폴리옥시에틸렌유도체, 글리세린 지방산 에스테르, 자당 지방산 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르, 프로필렌글리콜 지방산 에스테르, 레시틴 등의 계면 활성제, 카르복시비닐 폴리머, 잔탄검, 카르복시메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨염류, 하이드록시프로필셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 증점제 등이 있다.Such components include, for example, white petrolatum, yellow petrolatum, lanolin, bleached beeswax, cetanol, stearyl alcohol, stearic acid, hydrogenated hydrocarbons, polyethylene glycol, liquid paraffin And squalane. Examples of the base oils include oleic acid, myristic acid isopropyl, triisooctanoic acid glycerin, crotamiton, diethyl sebacate, diisopropyl adipate, hexyl laurate, fatty acid esters, aliphatic alcohols, And antioxidants such as tocopherol derivatives, L-ascorbic acid, dibutylhydroxytoluene and butylhydroxyanisole, preservatives such as parahydroxybenzoic acid ester, glycerin, propylene glycol, sodium hyaluronate , Polyoxyethylene derivatives, glycerin fatty acid esters, sucrose fatty acid esters, sorbitan There is a thickener, such as defense ester, propylene glycol fatty acid ester, lecithin, etc. of the surface active agent, carboxyvinyl polymer, xanthan gum, carboxymethyl cellulose, carboxymethyl cellulose sodium salt, hydroxypropyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose.

에어로졸제의 경우에 있어서는, 연고제, 크림제, 겔제, 현탁제, 유제, 액제, 로션제 등의 조제에 사용되는 상기 성분 외에 추가로 각종 안정제, 완충제, 교미제, 현탁화제, 유화제, 방향제, 보존제, 용해 보조제, 그 밖의 적당한 첨가제를 배합할 수 있다.
In the case of an aerosol preparation, various stabilizers, buffering agents, wetting agents, suspending agents, emulsifiers, fragrances, preservatives, preservatives and the like may be used in addition to the above components used for preparing ointments, creams, gels, suspensions, emulsions, , Dissolution aids, and other suitable additives.

또한 본 발명은 쉬나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 재생용 또는 노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다.The present invention also provides a cosmetic composition for skin regeneration or prevention of aging comprising an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient.

상기 화장료 조성물은 하기 화학식 1 내지 화학식 4로 표시되는 것 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 인디루빈 유도체를 더 포함할 수 있다.The cosmetic composition may further comprise at least one indivarbine derivative selected from the following formulas (1) to (4).

상기 쉬나무 추출물과 화학식 1 내지 화학식 4로 표시되는 것 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 인디루빈 유도체의 혼합 중량비는 특별히 이에 제한되지 않으나, 상기 쉬나무 추출물과 화학식 1 내지 화학식 4로 표시되는 것 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 인디루빈 유도체의 혼합 중량비는 0.01 : 1 내지 100 : 1인 것이 바람직하고, 가장 바람직하게는 0.1 : 1 내지 10 : 1일 수 있다. 상기 혼합 중량비가 0.1 : 1 미만이거나 100 : 1을 초과할 경우 피부를 재생하거나 노화 방지를 위한 주름 개선에 소요되는 기간이 길어질 수 있다.The mixed weight ratio of the above extract to at least one indirubin derivative selected from the general formulas (1) to (4) is not particularly limited, but it is preferable that the mixture of the above extract and the one selected from Chemical Formulas 1 to 4 Or more of the indirubin derivative is preferably 0.01: 1 to 100: 1, and most preferably 0.1: 1 to 10: 1. If the mixing weight ratio is less than 0.1: 1 or more than 100: 1, it may take a long time to regenerate skin or to improve wrinkles for preventing aging.

상기 화장료 조성물은 쉬나무 추출물이 포함되는 농도는 당업계에서 일반적인 범위라면 특별히 제한되지 않으나, 바람직하게 0.01 μM 내지 1000 μM 농도로 포함되는 것일 수 있는데, 0.01 μM 미만이면 충분한 피부 재생 또는 노화 방지 효과가 나타나지 않을 수 있으며, 1000 μM을 초과할 경우 추출물에 포함된 용매가 과도하게 포함되어 피부 자극이 유발될 수 있다.The cosmetic composition of the present invention is not particularly limited as long as the concentration of the extract of the present invention is in the range of ordinary skill in the art, but it may preferably be contained at a concentration of 0.01 μM to 1000 μM. When the concentration is less than 0.01 μM, sufficient skin regeneration or anti- If it exceeds 1000 μM, the solvent contained in the extract may be excessively contained and skin irritation may be caused.

상기 쉬나무 추출물은 쉬나무의 어린가지, 잎, 이의 분쇄물 및 이의 혼합물을 물, DMSO, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합용매를 사용하여 추출된 것일 수 있다.The quince extract can be obtained by extracting the young branches, leaves, crushed products of the quince, and the mixture thereof with water, DMSO, an alcohol having 1 to 4 carbon atoms, and a mixed solvent thereof.

상기 화장료 조성물은 창상 치료뿐만 아니라, 피부 상처회복 또는 피부 재생에 활성을 가지고 있을 뿐만 아니라, 다양한 종류의 콜라겐을 촉진, 축적 및 수축하는 활성을 가지고 있다.The above-mentioned cosmetic composition not only has a wound healing treatment, but also has an activity of restoring the skin wound or regenerating the skin, and has an activity of promoting, accumulating and shrinking various types of collagen.

본 발명에 따른 상기 화장료 조성물에 있어서, 이를 포함하는 화장품으로서의 제형으로는 상기 조성물에 추가로 지방 물질, 유기용매, 용해제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제 (forming agent), 방향제, 계면활성제, 무, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다. 그리고 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다. 본 발명 조성물의 화장품으로서의 구체적인 제형으로는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이새도 등의 제형을 포함한다.
In the cosmetic composition according to the present invention, a cosmetic composition containing the same may further contain, in addition to the composition, a lipid, an organic solvent, a solubilizer and a gelling agent, a softener, an antioxidant, a suspending agent, a stabilizer, a foaming agent, Preservatives, vitamins, blocking agents, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic active agents, lipid fungicides, anti-oxidants, Or any other ingredient conventionally used in cosmetics, or adjuvants commonly used in the cosmetics or dermatology fields. And the above ingredients may be introduced in amounts commonly used in the dermatology field. And the above ingredients may be introduced in amounts commonly used in the dermatology field. Specific formulations of the composition of the present invention as a cosmetic product include a skin lotion, a skin softener, a skin toner, an astringent, a lotion, a milk lotion, a moisturizing lotion, a nutrition lotion, a massage cream, a nutritional cream, a moisturizing cream, , Formulations such as soap, shampoo, cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion, body cleanser, emulsion, press powder, loose powder, eye shadow.

이하에서 실시예 등을 통해 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 하며, 다만 이하에 실시예 등에 의해 본 발명의 범위와 내용이 축소되거나 제한되어 해석될 수 없다. 또한, 이하의 실시예를 포함한 본 발명의 개시 내용에 기초한다면, 구체적으로 실험 결과가 제시되지 않은 본 발명을 통상의 기술자가 용이하게 실시할 수 있음은 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속하는 것도 당연하다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples and the like, but the scope and content of the present invention can not be construed to be limited or limited by the following Examples. It will be apparent to those skilled in the art that various modifications and variations can be made in the present invention without departing from the spirit and scope of the present invention as set forth in the following claims. It is natural that it belongs to the claims.

또한 이하에서 제시되는 실험 결과는 상기 실시예 및 비교예의 대표적인 실험 결과만을 기재한 것이며, 아래에서 명시적으로 제시하지 않은 본 발명의 여러 구현예의 각각의 효과는 해당 부분에서 구체적으로 기재하도록 한다.
In addition, the experimental results presented below only show representative experimental results of the embodiments and the comparative examples, and the respective effects of various embodiments of the present invention which are not explicitly described below will be specifically described in the corresponding part.

제조예Manufacturing example 1. 5- 1. 5- 메톡실인디루빈Methoxylindirubin -3'--3'- 옥심(A3334)의Of oxime (A3334) 합성 synthesis

① 중간체 5'-1) Intermediate 5'- 메톡시Methoxy -[2,3'-- [2,3 ' 바이인돌리닐리딘Biindolinylidene ]-2',3-] -2 ', 3- 다이온Dion (5'- (5'- methoxy메틸oxy -[2,3'-biindolinylidene]-2',3-dione) 의 합성- [2,3'-biindolinylidene] -2 ', 3-dione)

250 ㎖ 둥근바닥 플라스크에 5-메톡시이사틴(5-methoxyisatin) (1000 ㎎, 5.65 m㏖)을 넣고 메탄올(MeOH)(225 ㎖)에 녹인 뒤, 인독실아세테이트(indoxyl acetate) (989 ㎎, 5.65 mmol) 과 탄산나트륨(Na₂CO₃) (1496 ㎎, 14.11 mmol)을 첨가하여 65 ℃에서 12시간 동안 교반 한다. TLC(Rf=0.4,에틸아세테이트/헥산 = 1/2 (v/v))를 이용하여 반응의 종결을 확인하고, 생성물을 얼음에서 결정 덩어리가 생길 때까지 식혀준다. 결정체가 생기면 여과시켜 용매를 제거한 후, 여과액은 버리고 생성물을 용매(에탄올/물 = 1/1(v/v))로 여러 번 씻어 준다. 생성물을 여과하여 진공 펌프에서 건조시킨 다음 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
5-methoxyisatin (1000 mg, 5.65 mmol) was added to a 250-mL round bottom flask and dissolved in methanol (225 mL), followed by the addition of indoxyl acetate (989 mg, 5.65 mmol) mmol) and sodium carbonate (Na ₂ CO ₃ ) (1496 mg, 14.11 mmol), and the mixture was stirred at 65 ° C for 12 hours. The reaction is terminated using TLC (Rf = 0.4, ethyl acetate / hexane = 1/2 (v / v)) and the product is allowed to cool down on ice until a lump of crystals is formed. After the crystals are formed, the solvent is removed by filtration, the filtrate is discarded, and the product is washed several times with a solvent (ethanol / water = 1/1 (v / v)). The product was filtered and dried in a vacuum pump and used in the next step without further purification.

② A3334의 합성② Synthesis of A3334

100 ㎖ 둥근바닥 플라스크에 5'-메톡시-[2,3'-바이인돌리닐리딘]-2',3-다이온 (5'-methoxy-[2,3'-biindolinylidene]-2',3-dione)(670 ㎎, 2.29 m㏖)을 넣고 피리딘 (pyridine)(27 ㎖)에 녹인 다음 H₂NOHㅇHCl(3186 ㎎, 45.85 m㏖)을 첨가한 후, 120 ℃에서 12시간 동안 교반 한다. TLC(R_f=0.5, 에틸아세테이트/헥산= 1/1 (v/v))를 이용하여 반응의 종결을 확인하고 반응 용액의 온도를 실온으로 낮춘다. 생성물의 피리딘 용매를 모두 증발한 뒤 물과 에틸아세테이트를 넣어 30분 동안 초음파를 이용하여 생성물을 용해 한 뒤, 에틸아세테이트로 두 번에 걸쳐 추출하고 중조(NaHCO₃) 포화용액으로 씻어준다. 추출한 용액을 무수황산마그네슘으로 탈수 한 뒤, 용매를 증발시키고 메탄올과 핵산을 이용해 재결정 해 준다. 생성물을 진공펌프에서 건조시키면 붉은색 고체 A3334를(420 ㎎) 59% 의 수율로 얻을 수 있다. ¹H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 13.52 (s, 1H), 11.79 (s, 1H), 10.54 (s, 1H), 8.35 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 2.8 Hz, 2H), 7.08 - 7.00 (m, 1H), 6.82 - 6.71 (m, 2H), 3.78 (s, 3H).
To a 100 ml round bottom flask was added 5'-methoxy- [2,3'-biindolinylidene] -2 ', 3'-dione (5'-methoxy- [ 3-dione) (670 mg, 2.29 mmol) was dissolved in pyridine (27 ml), followed by addition of H ₂ NOH ㅇ HCl (3186 mg, 45.85 mmol) followed by stirring at 120 ° C for 12 hours do. The reaction is terminated using TLC (R _f = 0.5, ethyl acetate / hexane = 1/1 (v / v)) and the temperature of the reaction solution is lowered to room temperature. After evaporation of all the pyridine solvents of the product, water and ethyl acetate were added and the product was dissolved by ultrasonic wave for 30 minutes. Then, the product was extracted twice with ethyl acetate and washed with a saturated solution of NaHCO ₃ . The extracted solution is dehydrated with anhydrous magnesium sulfate, the solvent is evaporated and recrystallized using methanol and nucleic acid. The product was dried in a vacuum pump to give red solid A3334 (420 mg) in 59% yield. ^{1 H NMR (400 MHz, DMSO-} d6) δ 13.52 (s, 1H), 11.79 (s, 1H), 10.54 (s, 1H), 8.35 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 2.8 Hz, 2H), 7.08-7.00 (m, 1H), 6.82-6.71 (m, 2H), 3.78 (s, 3H).

제조예Manufacturing example 2. 5,6- 2. 5,6- 디클로로인디루빈Dichloroindirubin -3'--3'- 메톡심(A3051)의Of methoxym (A3051) 합성. synthesis.

① 중간체 5',6`-다이클로로-[2,3`-바이인돌리닐리딘]-2`3-다이온 ( 5',6'-dichloro-[2,3'-biindolinylidene]-2',3-dione )의 합성1 ', 6'-dichloro [2,3'-biindolinylidene] -2'3-dione (5', 6'- dichloro- [2,3'-biindolinylidene] -2 ' , 3-dione)

250 ㎖ 둥근바닥 플라스크에 5,6-다이클로로이사틴 (5,6-dichloroisatin) (500 ㎎, 2.32 m㏖)을 넣고 메탄올(MeOH)(92.80 ㎖)에 녹인 뒤, 인독실아세테이트(indoxyl acetate) (405.48 ㎎, 2.315 mmol) 과 탄산나트륨(Na₂CO₃) (637.83 ㎎, 6.02 mmol)을 첨가하여 65 ℃에서 12시간 동안 교반 한다. TLC(Rf=0.4,에틸아세테이트/헥산 = 1/2 (v/v))를 이용하여 반응의 종결을 확인하고, 생성물을 얼음에서 결정 덩어리가 생길 때까지 식혀준다. 결정체가 생기면 여과시켜 용매를 제거한 후, 여과액은 버리고 생성물을 용매(에탄올/물 = 1/1(v/v))로 여러 번 씻어 준다. 생성물을 여과하여 진공 펌프에서 건조시킨 다음 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
5,6-dichloroisatin (500 mg, 2.32 mmol) was added to a 250-mL round bottom flask and dissolved in methanol (MeOH) (92.80 mL) followed by the addition of indoxyl acetate 405.48 mg, 2.315 mmol) and sodium carbonate (Na ₂ CO ₃ ) (637.83 mg, 6.02 mmol), and the mixture was stirred at 65 ° C for 12 hours. The reaction is terminated using TLC (Rf = 0.4, ethyl acetate / hexane = 1/2 (v / v)) and the product is allowed to cool down on ice until a lump of crystals is formed. After the crystals are formed, the solvent is removed by filtration, the filtrate is discarded, and the product is washed several times with a solvent (ethanol / water = 1/1 (v / v)). The product was filtered and dried in a vacuum pump and used in the next step without further purification.

② A3051의 합성② Synthesis of A3051

100 ㎖ 둥근바닥 플라스크에 5',6`-다이클로로-[2,3`-바이인돌리닐리딘]-2`3-다이온 ( 5',6'-dichloro-[2,3'-biindolinylidene]-2',3-dione) (600 ㎎, 1.81 m㏖)을 넣고 피리딘 (pyridine)(151 ㎖)에 녹인 다음 H₂NOCH₃·HCl(3026.4 ㎎, 36.24 m㏖)을 첨가한 후, 120 ℃에서 12시간 동안 교반 한다. TLC(R_f=0.4, 에틸아세테이트/헥산= 1/1 (v/v))를 이용하여 반응의 종결을 확인하고 반응 용액의 온도를 실온으로 낮춘다. 생성물의 피리딘 용매를 모두 증발한 뒤 물과 에틸아세테이트를 넣어 30분 동안 초음파를 이용하여 생성물을 용해 한 뒤, 에틸아세테이트로 두 번에 걸쳐 추출하고 중조(NaHCO₃) 포화용액으로 씻어준다. 추출한 용액을 무수황산마그네슘으로 탈수 한 뒤, 용매를 증발시키고 메탄올과 핵산을 이용해 재결정 해 준다. 생성물을 진공펌프에서 건조시키면 붉은색 고체 A3051을(326 ㎎) 47.94% 의 수율로 얻을 수 있다. ¹H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 11.36 (s, 2H), 8.80 (s, 1H), 8.08 (d, 1H, J = 7.7 Hz), 7.46 - 7.41 (m, 2H), 7.07 - 6.99 (m, 2H), 4.38 (s, 3H).
A 100 ml round-bottomed flask was charged with 5 ', 6'-dichloro- [2,3'-biindolinylidene] -2'3-dion (5', 6'- dichloro- [2,3'-biindolinylidene ] -2 ', 3-dione) (600 mg, 1.81 mmol) was dissolved in pyridine (151 ml). H ₂ NOCH ₃ .HCl (3026.4 mg, 36.24 mmol) was added thereto and stirred at 120 ° C for 12 hours. The reaction is terminated using TLC (R _f = 0.4, ethyl acetate / hexane = 1/1 (v / v)) and the temperature of the reaction solution is lowered to room temperature. After evaporation of all the pyridine solvents of the product, water and ethyl acetate were added and the product was dissolved by ultrasonic wave for 30 minutes. Then, the product was extracted twice with ethyl acetate and washed with a saturated solution of NaHCO ₃ . The extracted solution is dehydrated with anhydrous magnesium sulfate, the solvent is evaporated and recrystallized using methanol and nucleic acid. The product was dried in a vacuum pump to give red solid A3051 (326 mg) in 47.94% yield. ^{1 H NMR (400 MHz, DMSO-} d6) δ 11.36 (s, 2H), 8.80 (s, 1H), 8.08 (d, 1H, J = 7.7 Hz), 7.46 - 7.41 (m, 2H), 7.07 - 6.99 (m, 2 H), 4.38 (s, 3 H).

제조예 3 및 4. 화학식 3 및 화학식 4의 인디루빈 유도체의 제조Production Examples 3 and 4. Preparation of Indirubin Derivatives of Formulas (3) and (4)

화학식 3의 5,6-디클로로인디루빈-3'-옥심프로필옥심과 화학식 4의 6-클로로인디루빈-3'-벤질옥심은 상기 5,6-디클로로인디루빈-3'-메톡심 또는 5-메톡실인디루빈-3'-옥심과 동일한 방식으로 합성되었고, 이는 황화디메틸(DMSO)에 녹여 실험에 적용하였다.
Dichloroindirubin-3'-oximethylpropoxime of Formula 3 and 6-chloroindirvine-3'-benzyloxime of Formula 4 are reacted with the 5,6-dichloroindirubin-3'-methoxym or 5- 3'-oxime, which was dissolved in dimethyl sulfide (DMSO) and applied in the experiment.

실시예 1. 쉬나무 추출물의 제조EXAMPLES Example 1 Preparation of Schistosome Extract

쉬나무는 어린 가지와 잎의 복합물을 사용하였으며, 황화디메틸(DMSO)에 5 μg/㎖ 농도로 녹인 것을 사용하였다.
A mixture of young branches and leaves was used for the shrubs and dissolved in dimethyl sulfide (DMSO) at a concentration of 5 μg / ml.

실시예 2. 쉬나무 추출물과 인디루빈 유도체(A3334;화학식 1)의 복함물Example 2 A mixture of an extract of Schistosus japonica and an indirubin derivative (A3334: Formula 1)

창상 치유 효과 여부를 알아보고자, 쉬나무 추출물 및 하기 화학식 1로 표시되는 인디루빈 유도체(A3334)를 각각 5 μg/㎖씩 혼합하여 복합물을 제조하였다.In order to examine whether or not the wound healing effect was caused, a squamous cell extract and an indirubin derivative (A3334) represented by the following formula (1) were mixed at a concentration of 5 μg / ml, respectively.

[화학식 1][Chemical Formula 1]

실시에 3. 쉬나무 추출물과 인디루빈 유도체(A3051;화학식 2)의 복함물Example 3: A mixture of an extract of chrysanthemum extract and an indirubin derivative (A3051: Formula 2)

창상 치유 효과 여부를 알아보고자, 쉬나무 추출물 및 하기 화학식 2로 표시되는 인디루빈 유도체(A3051)를 각각 5 μg/㎖씩 혼합하여 복합물을 제조하였다.In order to examine whether or not the wound healing effect was effected, a mixture of an extract of Schizandra chinensis and an indolubin derivative (A3051) represented by the following formula (2) was mixed at 5 μg / ml each.

[화학식 2](2)

실시예 4. 쉬나무 추출물과 인디루빈 유도체(A3486;화학식 3)의 복함물Example 4 A mixture of an extract of shiitake and indirubin derivative (A3486; formula 3)

창상 치유 효과 여부를 알아보고자, 쉬나무 추출물 및 하기 화학식 3으로 표시되는 인디루빈 유도체(A3486)를 각각 5 μg/㎖씩 혼합하여 복합물을 제조하였다.
In order to examine whether or not the wound healing effect was effected, a mixture of an extract of shiwu and an indirubin derivative (A3486) represented by the following formula (3) was mixed at 5 μg / ml each.

실시예 5. 쉬나무 추출물과 인디루빈 유도체(A3538;화학식 4)의 복함물Example 5: A mixture of an extract of chinensis and indirubin derivative (A3538: Formula 4)

창상 치유 효과 여부를 알아보고자, 쉬나무 추출물 및 하기 화학식 4로 표시되는 인디루빈 유도체(A3538)를 각각 5 μg/㎖씩 혼합하여 복합물을 제조하였다.
In order to examine whether or not the wound healing effect was caused by the wrinkles, an extract of the squid and an indirubin derivative (A3538) represented by the following formula (4) were mixed at a concentration of 5 μg / ml, respectively.

실험예 1. 세포의 운동성 확인.Experimental Example 1. Identification of cell motility.

실시예 1의 쉬나무 추출물 단독 또는 실시예 2 내지 5의 복합물에 의한, 세포의 이동능을 확인하고자 하였다.To examine the cell migration ability by the combination of the exudate extract of Example 1 or the compounds of Examples 2 to 5.

상처 치유에 있어, 중요한 역할을 하는 케라티노사이트(human keratinocyte cell)를 12-well plate에서 24 시간 배양하였다. 이 때, 10% FBS가 포함된 DMEM을 사용하였다. 24 시간의 배양 후에 5% FBS가 포함된 DMEM 배지로 배지를 교환한 다음, 1000p(blue) tip끝을 이용해 세포 가운데에 스크래치를 냈다. 그 후, 스크래치를 낸 부분에 실시예 1의 쉬나무 추출물과 제조예 1 내지 4의 인디루빈 유도체 및 실시예 2 내지 5의 복합물 각각 5 μg/ml, 1 μM 농도로 처리하고 24시간 후 세포의 운동성을 관찰하였다.In wound healing, keratinocytes, which play an important role, were cultured on a 12-well plate for 24 hours. At this time, DMEM containing 10% FBS was used. After culturing for 24 hours, medium was changed with DMEM medium containing 5% FBS, and 1000 p (blue) tip was used to scratch the cells. Thereafter, the scratch-treated portion was treated with the extracts of Example 1, the indirubin derivatives of Production Examples 1 to 4, and the compounds of Examples 2 to 5 at concentrations of 5 μg / ml and 1 μM, respectively. After 24 hours, Were observed.

도 1a는 실시예 1로부터 제조된 쉬나무 추출물, 제조예 1로부터 제조된 인디루빈 유도체(화학식 1) 또는 실시예 2로부터 제조된 복합물의 처리에 따른 세포의 이동능을 확인하기 위하여, 케라티노사이트에서 세포의 이동능을 나타낸 사진이고, 도 1b는 실시예 1로부터 제조된 쉬나무 추출물, 제조예 1로부터 제조된 인디루빈 유도체(화학식 1) 또는 실시예 2로부터 제조된 복합물의 처리에 따른 세포의 이동능을 확인하기 위하여, 케라티노사이트 세포에서 세포의 이동능을 정량적으로 나타낸 그래프이다.FIG. 1A is a graph showing the cell migration ability according to the treatment of the extract of the shilla extract prepared in Example 1, the indirubin derivative (Formula 1) prepared in Preparation Example 1 or the composite prepared in Example 2, FIG. 1B is a photograph showing the migration ability of the cells according to the treatment of the extract from the chewy extract prepared in Example 1, the indirubin derivative (Formula 1) prepared in Preparation Example 1 or the composite prepared in Example 2 , Which is a graph showing quantitatively the migration ability of cells in keratinocyte cells.

도 1b에서 wound closure rate(%)는 상처 치유에 중요한 역할을 하는 케라티노사이트에 실시예 1로부터 제조된 쉬나무 추출물, 제조예 1로부터 제조된 인디루빈 유도체(화학식 1) 또는 실시예 2로부터 제조된 복합물을 처리하였을 때의 결과(도 1a)를, 세포의 이동률로 정량화하여 나타낸 것이다.The wound closure rate (%) in Fig. 1 (b) is the ratio of the percentage of wound closure rate (%) to the percentage of wound dressing The results obtained when the complexes were treated (Fig. 1A) are quantified by the cell migration rate.

이때 대조군(control)은 쉬나무 추출물 또는 복합물을 처리하지 않은 케라티노사이트 세포를 의미한다.Here, the control (control) refers to a keratinocyte cell that has not been treated with an extract of squid or a complex.

도 1에 나타난 바와 같이, 실시예 1의 쉬나무 추출물 또는 제조예 1로부터 제조된 인디루빈 유도체(화학식 1) 단독으로 처리한 세포에서의 운동성이 대조군 세포에서의 운동성보다 최대 1.5~2배 향상된 것을 확인할 수 있다. 게다가 실시예 2의 쉬나무 추출물과 인디루빈 유도체 A3334를 혼합한 복합물을 처리할 경우, 상처 치유에 중요한 역할을 하는 케라티노사이트의 세포의 운동성이 대조군에 비해 6 배 이상, 쉬나무 추출물 단독으로 처리하였을 때보다 3 배 높은 것을 확인하였다.As shown in Fig. 1, it was confirmed that the mobility in the cells treated with the extract of the chewy gum of Example 1 alone or the indirubin derivative (Formula 1) prepared from Preparation Example 1 was 1.5 to 2 times higher than that of the control cells . In addition, when the complex mixture of the squilla extract of Example 2 and indirubin derivative A3334 was treated, the cell mobility of keratinocytes, which play an important role in wound healing, was 6 times higher than that of the control, 3 times higher than that of the control group.

즉, 쉬나무 추출물을 단독으로 사용하여도 우수한 상처 치유 효과를 얻을 수 있으나, 쉬나무 추출물과 인디루빈 유도체(A3334)를 혼합할 경우에는, 예상되는 시너지 효과보다 더 높은 효과를 유의적 효과의 상승이 확인되었다.
In other words, even when the extract is used alone, an excellent wound healing effect can be obtained. However, when the extract is mixed with the indirubin derivative (A3334), a higher effect than the expected synergistic effect is obtained .

도 1c 내지 도 1e는 실시예 1로부터 제조된 쉬나무 추출물, 제조예 2 내지 4로부터 제조된 인디루빈 유도체(화학식 2 내지 4) 또는 실시예 3 내지 5로부터 제조된 복합물의 처리에 따른 세포의 이동능을 확인하기 위하여, 케라티노사이트에서 세포의 이동능을 나타낸 사진이다. 이때 대조군(control)은 쉬나무 추출물 또는 복합물을 처리하지 않은 케라티노사이트 세포를 의미한다.Figs. 1C to 1 E are graphs showing the migration ability of cells according to the treatment of the extract prepared from Example 1, the indirubin derivatives (Formulas 2 to 4) prepared in Production Examples 2 to 4 or the compounds prepared in Examples 3 to 5 In order to confirm the movement of cells in keratinocytes. Here, the control (control) refers to a keratinocyte cell that has not been treated with an extract of squid or a complex.

도 1c 내지 도 1e에 나타난 바와 같이, 실시예 1의 쉬나무 추출물 또는 제조예 2 내지 4로부터 제조된 인디루빈 유도체(화학식 2 내지 4) 단독으로 처리한 세포에서의 운동성이 대조군 세포에서의 운동성보다 최대 1.3~1.5배 향상된 것을 확인할 수 있다. 게다가 실시예 3 내지 5의 쉬나무 추출물과 인디루빈 유도체를 혼합한 복합물을 처리할 경우, 상처 치유에 중요한 역할을 하는 케라티노사이트의 세포의 운동성이 대조군에 비해 2 배 이상, 쉬나무 추출물 단독으로 처리하였을 때보다 1.3~1.5 배 높은 것을 확인하였다.
As shown in Fig. 1C to Fig. 1E, the mobility in the cells treated with the extracts of Example 1 or the indirubin derivatives (Formulas 2 to 4) prepared in Production Examples 2 to 4 alone was higher than the mobility in the control cells Which is 1.3 ~ 1.5 times higher. In addition, when the complex mixture of the extracts of quillae extracts and indirubin derivatives of Examples 3 to 5 was treated, the cell mobility of keratinocytes, which play an important role in wound healing, was twice or more than that of the control, Which is 1.3 ~ 1.5 times higher than that of

실험예 3. 동물실험을 통한 상처 치유 효능 확인-1Experimental Example 3. Confirmation of wound healing efficacy through animal experiment -1

실시예 1의 쉬나무 추출물 단독 또는 실시예 2의 복합물에 의한, 상처 치유 촉진 효과를 확인하고자 하였다.The effect of accelerating the wound healing by the extract of the ash extract of Example 1 or the complex of Example 2 was examined.

휴지기에 들어간 7 주령 된 C3H 마우스의 등 부위의 모발을 제거하고 모발이 제거된 부위에 1.5 × 1.5 cm의 상처를 만들었다. 대조군에는 vehicle(10% DMSO, 45% 에탄올, 18% 프로필렌글라이콜, 27% 물)을, 실험군에는 vehicle에 각각 5 ㎎/㎖, 10 mM 농도로 녹인 실시예 1의 쉬나무 추출물과 실시예 2의 쉬나무 추출물 및 인디루빈 유도체(A3334)가 혼합된 복합물을 20 ㎕씩 12 일간 매일 1회 도포하였다.Seven-week-old C3H mice in the dormant period removed hair from the dorsal area, and a wound of 1.5 × 1.5 cm was made in the hair-removed area. In the control group, the vehicle (10% DMSO, 45% ethanol, 18% propylene glycol, 27% water) was dissolved in the vehicle at the concentration of 5 mg / (A3334) was applied once every day for 12 days by 20 占 퐇.

각각의 실험한 마우스의 조직을 4% 파라포름알데하이드에 담가 고정한 후 파라핀에 포매하고 4 ㎛ 두께로 박편하였다. 박편된 조직을 탈파라핀화 및 재수화한 후 조직학적 구조를 관찰하기 위해 헤마톡실린(보라색)과 에오신(분홍색)을 이용하여 염색하였다.The tissues of each experimental mouse were immersed in 4% paraformaldehyde, embedded in paraffin, and sliced to a thickness of 4 쨉 m. The flaked tissues were deparaffinized and rehydrated and stained with hematoxylin (purple) and eosin (pink) to observe the histological structure.

도 2는 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 실시예 2의 혼합물을 처리한 마우스 급성 상처 조직에 대하여, 시간의 흐름에 따라 촬영한 사진 및 염색 결과를 나타낸 것이다. 도 3은 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 실시예 2의 혼합물을 처리한 마우스 급성 상처 조직에 대하여, 시간의 흐름에 따라 측정된 재상피화 정도를 정량화하여 나타낸 그래프이다.FIG. 2 is a photograph of the acute injured tissue of the mouse treated with the mixture of the extract of the squash extract of Example 1 and the mixture of Example 2 according to the present invention, and the result of photographing and the result of dyeing according to the passage of time. FIG. 3 is a graph showing the degree of re-epithelialization measured according to time with respect to the acute wound tissue of a mouse treated with the mixture of the squilla extract of Example 1 and the mixture of Example 2 according to the present invention.

실시예 1로부터 제조된 쉬나무 추출물과 실시예 2로부터 제조된 복합물을 처리하였을 때, 대조군에 비해 마우스 모델에서 급성 상처가 빠르게 치유되는 것을 확인하였다. 특히 실시예 2로부터 제조된 복합물이 쉬나무 추출물을 단독으로 사용하였을 때보다 짧은 기간(5일) 내에 매우 우수한 상처 치유 효과(상대적으로 20~30 wound closure rate% 우수함)를 가지고 있음을 확인하였다.Upon treatment of the extract from the chewy extract prepared in Example 1 and the compound prepared in Example 2, it was confirmed that the acute injury was rapidly healed in the mouse model as compared with the control group. In particular, it was confirmed that the composite prepared from Example 2 had a very good wound healing effect (relative to 20 to 30 wound closure rate%) within a shorter period of time (5 days) than when the extract was used singly.

또한, 헤마톡실린과 에오신을 이용한 H&E 이미지(도 2의 하단)를 보면, 본 발명에 따른 실시예 2의 복합물로 처리한 것이 실시예 1의 쉬나무 추출물 단독으로 사용한 것보다 마우스에 생긴 급성 상처가 빠르게 재상피화(reepithelialization)됨을 확인하였다.
In addition, the H & E image (bottom of FIG. 2) using hematoxylin and eosin showed that the mice treated with the combination of Example 2 according to the present invention had acute scars And reepithelialization rapidly.

실험예 4. 동물실험을 통한 상처 치유 효능 확인-2Experimental Example 4. Confirmation of wound healing efficacy through animal experiment -2

휴지기에 들어간 7 주령 된 C3H 마우스의 등 부위의 모발을 제거하고 모발이 제거된 부위에 1.5 ㅧ 1.5 cm의 상처를 만들었다. 대조군에는 vehicle(10% DMSO, 45% 에탄올, 18% 프로필렌글라이콜, 27% 물)을, 실험군에는 vehicle에 각각 5 ㎎/㎖, 10 mM 농도로 녹인 실시예 1의 쉬나무 추출물과 실시예 2의 쉬나무 추출물 및 인디루빈 유도체(A3334)가 혼합된 복합물을 20 ㎕씩 12 일간 매일 1회 도포하였다.Seven-week-old C3H mice that entered the dormant period removed hair from the dorsal area, and wound 1.5 ㅧ 1.5 cm on the area where the hair was removed. In the control group, the vehicle (10% DMSO, 45% ethanol, 18% propylene glycol, 27% water) was dissolved in the vehicle at the concentration of 5 mg / (A3334) was applied once every day for 12 days by 20 占 퐇.

각각의 실험한 마우스의 조직을 4% 파라포름알데하이드에 담가 고정한 후 파라핀에 포매하고 4 ㎛ 두께로 박편하였다. 박편된 조직을 탈파라핀화 및 재수화한 후 콜라겐의 합성 정도를 평가하기 위해 van Gieson 염색, Masson's trichrome 염색, picrosirius red 염색을 실시하였다. van Gieson 염색의 경우, 슬라이드를 Weigert's solution에 10분, picro fuchsin solution에 2분 두었다. Masson's trichrome 염색의 경우, 슬라이드를 Weigert's Iron Hematoxylin Solution에 10분, Biebrich Scarlet-Acid Fuchsin과 Aniline Blue에 각각 5분 두었다. picrosirius red 염색의 경우, Weigert's solution에 8분, picrosirius red에 1시간 두었다.The tissues of each experimental mouse were immersed in 4% paraformaldehyde, embedded in paraffin, and sliced to a thickness of 4 쨉 m. Van Gieson staining, Masson 's trichrome staining, and picrosirius red staining were performed to evaluate the degree of collagen synthesis after deparaffinization and rehydration of flaky tissue. For van Gieson staining, slides were placed in Weigert's solution for 10 min and picro fuchsin solution for 2 min. For Masson's trichrome staining, the slides were placed in Weigert's Iron Hematoxylin Solution for 10 min, Biebrich Scarlet-Acid Fuchsin and Aniline Blue for 5 min, respectively. For picrosirius red staining, 8 minutes for Weigert's solution and 1 hour for picrosirius red.

도 4는 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 실시예 2의 혼합물을 처리한 마우스 급성 상처 조직에 대한 Masson's trichrome staining, van Gieson staining, picrosirius red staining 염색 결과이고, 도 5는 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 실시예 2의 혼합물이 EGF보다 효과적으로 급성 상처를 치유할 수 있음을 보여주는 결과이다.FIG. 4 shows the result of Masson's trichrome staining, van Gieson staining and picrosirius red staining staining of acute wounded tissues of mice treated with the mixture of the squirrel extract of Example 1 and Example 2 according to the present invention. The results show that the mixture of the extract of Example 1 and the mixture of Example 2 can heal acute scars more effectively than EGF.

도 4 내지 도 5에 나타난 바와 같이, Masson's trichrome staining, picrosirius red staining, van Gieson staining은 각각 콜라겐의 종류와 양을 확인하기 위한 염색 방법으로서, 실시예 1의 쉬나무 추출물을 단독으로 처리한 마우스의 급성 상처 조직을 상기 세가지 염색 방법으로 확인한 결과, 세포의 창상 회복도 빠를 뿐만 아니라 콜라겐의 양이 대조군에 비해 현저히 증가하였음을 확인할 수 있다.As shown in FIGS. 4 to 5, Masson's trichrome staining, picrosirius red staining, and van Gieson staining were used to determine the type and amount of collagen, respectively. As a result, As a result of confirming the wound tissue by the above three dyeing methods, it was confirmed that not only the cell wound recovery was rapid but the amount of collagen was significantly increased as compared with the control group.

또한 실시예 2의 복합물을 처리한 마우스의 급성 상처 조직을 상기 세 가지 염색 방법으로 확인하였을 때는, 콜라겐의 양이 대조군을 넘어서 쉬나무 추출물을 단독으로 처리하였을 때보다도 현저히 증가하였을 확인하였다. 구체적으로 비교하면 쉬나무 추출물을 단독으로 사용한 것에 비해, 쉬나무 추출물과 인디루빈 유도체 A3334를 함께 처리하였을 때 콜라겐 형성에 있어 기대하는 시너지 효과(synergistic effect) 이상의 유의적인 효과 상승을 확인할 수 있었다.In addition, when the acute wound tissue of the mouse treated with the compound of Example 2 was confirmed by the above three dyeing methods, it was confirmed that the amount of collagen was significantly increased beyond that of the control group and compared with that of the treatment of the extract alone. Compared to the use of the extract of Asanum chinensis extract alone, it was confirmed that a significant increase in synergistic effect than the expected synergistic effect in the collagen formation was observed when the extract of Asanovirus extract and indirubin derivative A3334 were treated together.

도 5에 나타난 바와 같이, 실시예 2로 처리한 마우스 모델과 동일하게 상피세포 성장인자(EGF)로 처리하여 제조된 마우스 모델을 2 가지 염색(Masson's Trichrome, Picrosirius Red)을 통해 비교한 결과, 쉬나무 추출물과 인디루빈 유도체를 혼합한 복합물(실시예 2)를 사용한 것이, 종래 상피세포 성장인자(EGF)를 직접적으로 처리한 경우보다 우수한 상처 치유 효과를 나타낸다는 것을 확인하였다.
As shown in FIG. 5, the mouse model prepared by treating with the epithelial growth factor (EGF) as in the mouse model treated with Example 2 was compared with the two mice (Masson's Trichrome, Picrosirius Red) It was confirmed that the use of the complex (Example 2) in which the extract and the indirubin derivative were mixed exhibited an excellent wound healing effect compared to the case where the epitaxial growth factor (EGF) was directly treated.

실험예 5. 실시예 1의 쉬나무 추출물, 화학식 1 및 화학식 2의 화합물 단독 물질들의 상처 치유 효능 확인.Experimental Example 5: Examination of wound healing efficacy of the extracts of the extracts of the present invention, the compounds of the formula (1) and the compound of the formula (2) alone.

실시예 1의 쉬나무 추출물 단독, 화학식 1의 화합물 및 화학식 2 화합물 단독에 의한, 상처 치유 촉진 효과를 확인하고자 하였다.The effect of accelerating wound healing by the extract of the extract of Aspergillus oryzae in Example 1 alone, the compound of formula (1) and the compound of formula (2) alone was examined.

휴지기에 들어간 7 주령 된 C3H 마우스의 등 부위의 모발을 제거하고 모발이 제거된 부위에 1.5 × 1.5 cm의 상처를 만들었다. 대조군에는 vehicle(10% DMSO, 45% 에탄올, 18% 프로필렌글라이콜, 27% 물)을, 실험군에는 vehicle에 각각 5 ㎎/㎖, 10 mM 농도로 녹인 실시예 1의 쉬나무 추출물, 화학식 1의 화합물(A3334), 화학식 2의 화합물(A3051) 및 EGF(양성대조군)을 각각 20 ㎕씩 12 일간 매일 1회 도포하였다.Seven-week-old C3H mice in the dormant period removed hair from the dorsal area, and a wound of 1.5 × 1.5 cm was made in the hair-removed area. In the control group, the vehicle (10% DMSO, 45% ethanol, 18% propylene glycol, 27% water) was dissolved in the vehicle at a concentration of 5 mg / The compound (A3334), the compound of formula (A3051) and EGF (positive control) were applied once every 20 days for 20 days each for 12 days.

각각의 실험한 마우스의 조직을 4% 파라포름알데하이드에 담가 고정한 후 파라핀에 포매하고 4 ㎛ 두께로 박편하였다. 박편된 조직을 탈파라핀화 및 재수화한 후 콜라겐의 합성 정도를 평가하기 위해 van Gieson 염색, Masson's trichrome 염색을 실시하였다. van Gieson 염색의 경우, 슬라이드를 Weigert's solution에 10분, picro fuchsin solution에 2분 두었다. Masson's trichrome 염색의 경우, 슬라이드를 Weigert's Iron Hematoxylin Solution에 10분, Biebrich Scarlet-Acid Fuchsin과 Aniline Blue에 각각 5분 두었다.The tissues of each experimental mouse were immersed in 4% paraformaldehyde, embedded in paraffin, and sliced to a thickness of 4 쨉 m. Van Gieson staining and Masson 's trichrome staining were performed to evaluate the degree of collagen synthesis after deparaffinization and rehydration of flaky tissue. For van Gieson staining, slides were placed in Weigert's solution for 10 min and picro fuchsin solution for 2 min. For Masson's trichrome staining, the slides were placed in Weigert's Iron Hematoxylin Solution for 10 min, Biebrich Scarlet-Acid Fuchsin and Aniline Blue for 5 min, respectively.

도 6은 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 화학식 1의 화합물(A3334), 화학식 2의 화합물(A3051) 및 양성대조군으로 EGF을 각각 단독으로 처리한 마우스 급성 상처 조직을 0일 째와 14일 째에 촬영한 사진과 Masson's trichrome staining, van Gieson staining 염색 결과를 나타낸 사진이다.FIG. 6 is a graph showing the changes in the acute wounded tissues of mice treated with the extract of Asahi extract of Example 1, the compound of formula 1 (A3334), the compound of formula 2 (A3051) and the positive control EGF alone on day 0 and 14 The photographs taken at the first day, Masson's trichrome staining, and van Gieson staining were obtained.

도 7은 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 화학식 1의 화합물(A3334), 화학식 2의 화합물(A3051) 및 EGF(양성대조군)을 처리한 마우스 급성 상처 조직에 대하여 시간의 흐름에 따라 측정된 재상피화 정도를 정량화하여 나타낸 그래프이다.FIG. 7 is a graph showing the results of measurement of acute wounded tissues treated with the extract of squirrel extract of Example 1 according to the present invention, compound (A3334), compound (A3051) and EGF (positive control) And quantifying the degree of re-epithelization.

도 6 및 도 7에 나타난 바와 같이, Masson's trichrome staining, van Gieson staining은 각각 콜라겐의 종류와 양을 확인하기 위한 염색 방법으로서, 실시예 1의 쉬나무 추출물, 화학식 1의 화합물(A3334), 화학식 2의 화합물(A3051) 및 양성대조군으로 EGF를 단독으로 처리한 마우스의 급성 상처 조직의 결과를 비교한 바, 실시예 1의 쉬나무 추출물과 화학식 1의 화합물(A3334) 및 화학식 2의 화합물(A3051)을 단독으로 처리하였을 때에는 종래 상피세포 성장인자(EGF)를 직접적으로 처리한 경우와 유사한 정도의 상처 치유 효과를 나타내고 있음을 확인하였다.
As shown in FIGS. 6 and 7, Masson's trichrome staining and van Gieson staining were used to determine the type and amount of collagen, Comparing the results of the acute injury tissue of the compound (A3051) and the mouse treated with EGF alone as a positive control, the extract of the extract of Example 1 and the compound (A3334) and the compound (A3051) , It was confirmed that the wound healing effect was similar to that of the case of directly treating the epithelial cell growth factor (EGF).

실험예 6. 실시예 1의 쉬나무 추출물, 화학식 1의 화합물 단독 물질 및 실시예 2의 복합물의 상처 치유 효능 확인EXPERIMENTAL EXAMPLE 6. Confirmation of wound healing efficacy of the extract of chinchillas extract of Example 1, the compound of Formula 1 alone, and the complex of Example 2

실시예 1의 쉬나무 추출물 단독, 화학식 1의 화합물 단독과 실시예 2의 복합물 및 EGF에 의한, 상처 치유 촉진 효과를 비교하고자 하였다.To compare wound healing promoting effects of the extract of Aspergillus species alone, the compound of formula (I) alone, the complex of Example 2 and EGF.

휴지기에 들어간 7 주령 된 C3H 마우스의 등 부위의 모발을 제거하고 모발이 제거된 부위에 1.5 × 1.5 cm의 상처를 만들었다. 대조군에는 vehicle(10% DMSO, 45% 에탄올, 18% 프로필렌글라이콜, 27% 물)을, 실험군에는 vehicle에 각각 5 ㎎/㎖, 10 mM 농도로 녹인 실시예 1의 쉬나무 추출물, 화학식 1의 화합물(A3334), 및 실시예 2의 쉬나무 추출물, 인디루빈 유도체(A3334)가 혼합된 복합물 및 EGF(양성대조군)를 각각 20 ㎕씩 12 일간 매일 1회 도포하였다.Seven-week-old C3H mice in the dormant period removed hair from the dorsal area, and a wound of 1.5 × 1.5 cm was made in the hair-removed area. In the control group, the vehicle (10% DMSO, 45% ethanol, 18% propylene glycol, 27% water) was dissolved in the vehicle at a concentration of 5 mg / The compound (A3334) and the complex mixture of the quilla extract, indirubin derivative (A3334) of Example 2 and EGF (positive control) were applied once every day for 20 days each for 12 days.

도 8은 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 화학식 1의 화합물(A3334), EGF(양성대조군) 및 실시예 2의 복합물을 각각 처리한 마우스 급성 상처 조직을 0일 째와 14일 째에 촬영한 사진과 Masson's trichrome staining, van Gieson staining 염색 결과를 나타낸 사진이다.FIG. 8 is a graph showing the results of evaluation of the acute wounded tissues of mice treated with the extract of the extract of Example 1 and the compound of formula (A3334), EGF (positive control) and Example 2 on days 0 and 14 This photograph shows the results of staining with Masson's trichrome staining and van Gieson staining.

도 9는 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 화학식 1의 화합물(A3334), EGF(양성대조군) 및 실시예 2의 복합물을 처리한 마우스 급성 상처 조직에 대하여 시간의 흐름에 따라 측정된 재상피화 정도를 정량화하여 나타낸 그래프이다.FIG. 9 is a graph showing the relationship between the amount of a substance (A3334), the amount of a substance (A3334), an EGF (positive control) and a compound of Example 2 And the degree of epithelization is quantified.

도 8 및 도 9에 나타난 바와 같이, Masson's trichrome staining, van Gieson staining은 각각 콜라겐의 종류와 양을 확인하기 위한 염색 방법으로서, 실시예 1의 쉬나무 추출물, 화학식 1의 화합물(A3334)를 단독으로 처리한 마우스의 급성 상처 조직의 결과, 실시예 1의 쉬나무 추출물과 화학식 1의 화합물(A3334)을 단독으로 처리하였을 때에는 14일 후에도 여전히 상처가 남아있는 것을 확인하였으나, 본 발명에 따른 실시예 2의 복합물을 처리한 경우에는 흔적조차 남아있지 않는 매우 우수한 상처 치유 효과를 나타내고 있음을 확인하였다. 게다가 종래 상피세포 성장인자(EGF)를 직접적으로 처리한 경우보다도 상처 치유 효과가 유의하게 증가한 것을 확인하였다.As shown in FIGS. 8 and 9, Masson's trichrome staining and van Gieson staining were used to identify the type and amount of collagen, respectively. As a result of the acute injured tissue of one mouse, it was confirmed that even when the extract of squash extract of Example 1 and the compound of formula (1) (A3334) were treated alone, the wound still remained after 14 days. However, , It was confirmed that there is no remarkable wound healing effect. Furthermore, it was confirmed that the wound healing effect was significantly increased compared to the case where the conventional epithelial cell growth factor (EGF) was directly treated.

도 9에 나타난 바와 같이, 실시예 1로부터 제조된 쉬나무 추출물과 화학식 1의 화합물을 단독으로 처리하였을 때에 비해 실시예 2의 복합물을 처리하였을 때가 짧은 기간(5일) 내에 매우 우수한 상처 치유 효과(상대적으로 20~30 wound closure rate% 우수함)를 가지고 있음을 확인하였다. 이는 쉬나무 추출물과 화학식 1의 화합물을 각각 처리하였을 때는 확인할 수 없었던 시너지 효과(synergistic effect) 이상의 유의적인 효과 상승이라 할 수 있다.
As shown in FIG. 9, when the compound of Example 2 was treated in a short period of time (5 days) compared to when the extract of Schinck extract prepared in Example 1 and the compound of Chemical Formula 1 were treated alone, 20 ~ 30 wound closure rate% excellent). This can be said to be a significant increase over the synergistic effect, which was not confirmed when each of the extract and the compound of Chemical Formula 1 was treated.

실험예 7. 실시예 1의 쉬나무 추출물, 화학식 2의 화합물 단독 물질 및 실시예 3의 복합물의 상처 치유 효능 확인Experimental Example 7. Confirmation of wound healing efficacy of the extract of chinchillas extract of Example 1, the compound of Formula 2 alone, and the complex of Example 3

실시예 1의 쉬나무 추출물 단독, 화학식 2의 화합물 단독, EGF(양성대조군) 및 실시예 3의 복합물에 의한, 상처 치유 촉진 효과를 비교하고자 하였다.To compare wound healing promoting effects of the extract of chinchillas extract of Example 1 alone, the compound of Formula 2 alone, the combination of EGF (positive control) and Example 3.

휴지기에 들어간 7 주령 된 C3H 마우스의 등 부위의 모발을 제거하고 모발이 제거된 부위에 1.5 × 1.5 cm의 상처를 만들었다. 대조군에는 vehicle(10% DMSO, 45% 에탄올, 18% 프로필렌글라이콜, 27% 물)을, 실험군에는 vehicle에 각각 5 ㎎/㎖, 10 mM 농도로 녹인 실시예 1의 쉬나무 추출물, 화학식 2의 화합물(A3051), EGF(양성대조군) 및 실시예 3의 쉬나무 추출물과 인디루빈 유도체(A3051)가 혼합된 복합물을 각각 20 ㎕씩 12 일간 매일 1회 도포하였다.Seven-week-old C3H mice in the dormant period removed hair from the dorsal area, and a wound of 1.5 × 1.5 cm was made in the hair-removed area. In the control group, the vehicle (10% DMSO, 45% ethanol, 18% propylene glycol, 27% water) was dissolved in the vehicle at a concentration of 5 mg / A mixture of compound (A3051), EGF (positive control), and a mixture of the quilla extract of Example 3 and indirubin derivative (A3051) was applied once every 20 days for 20 days each for 12 days.

도 10은 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 화학식 2의 화합물(A3334), EGF(양성대조군) 및 실시예 3의 복합물을 각각 단독으로 처리한 마우스 급성 상처 조직을 0일 째와 14일 째에 촬영한 사진과 Masson's trichrome staining, van Gieson staining 염색 결과를 나타낸 사진이다.Fig. 10 is a graph showing the effect of the acute wounded tissues treated with the extract of the extract of Example 1 of the present invention and the compound of formula (A3334), EGF (positive control) and Example 3 on the 0th day and 14th day The photographs taken at the second time, Masson's trichrome staining, and van Gieson staining were obtained.

도 11은 본 발명에 따른 실시예 1의 쉬나무 추출물과 화학식 2의 화합물(A3051), EGF(양성대조군) 및 실시예 3의 복합물을 처리한 마우스 급성 상처 조직에 대하여 시간의 흐름에 따라 측정된 재상피화 정도를 정량화하여 나타낸 그래프이다.FIG. 11 is a graph showing the results of evaluation of the acute wounded tissue treated with the combination of the extract of the extract of Example 1 and the compound (A3051), EGF (positive control) and Example 3 according to the present invention over time And the degree of epithelization is quantified.

도 10 및 도 11에 나타난 바와 같이, Masson's trichrome staining, van Gieson staining은 각각 콜라겐의 종류와 양을 확인하기 위한 염색 방법으로서, 실시예 1의 쉬나무 추출물, 화학식 2의 화합물(A3051)을 단독으로 처리한 마우스의 급성 상처 조직의 결과, 실시예 1의 쉬나무 추출물과 화학식 2의 화합물(A3051)을 단독으로 처리하였을 때에는 14일 후에도 여전히 상처가 남아있는 것을 확인하였으나, 본 발명에 따른 실시예 3의 복합물을 처리한 경우에는 흔적조차 남아있지 않는 매우 우수한 상처 치유 효과를 나타내고 있음을 확인하였다. 게다가 종래 상피세포 성장인자(EGF)를 직접적으로 처리한 경우에는 완전히 치유되지 못하였는데, 이에 반해 본 발명에 따른 실시예 3의 복합물을 처리한 경우에는 거의 상처가 완전히 치유된 것을 확인하였으므로, 본 발명의 혼합물은 상처 치유 효과가 종래 상처 치료제보다 유의하게 증가한 것을 확인하였다.As shown in FIG. 10 and FIG. 11, masson's trichrome staining and van Gieson staining were used to identify the type and amount of collagen, respectively. As a result, the extracts of Example 1 and the compound of formula (A3051) As a result of the acute injured tissue of one mouse, it was confirmed that even after 14 days, only the scars remained after treatment with the extract of the squash extract of Example 1 and the compound of formula (A3051) alone, the compound of Example 3 according to the present invention , It was confirmed that there is no remarkable wound healing effect. In addition, when the conventional epithelial cell growth factor (EGF) was directly treated, it was not completely healed. On the other hand, it was confirmed that when the composite of Example 3 according to the present invention was treated, the wound was completely healed, Showed that the wound healing effect was significantly increased compared with the conventional wound healing agent.

도 11에 나타난 바와 같이, 실시예 1로부터 제조된 쉬나무 추출물과 화학식 2의 화합물을 단독으로 처리하였을 때에 비해 실시예 3의 복합물을 처리하였을 때가 짧은 기간(5일) 내에 매우 우수한 상처 치유 효과(상대적으로 20~30 wound closure rate% 우수함)를 가지고 있음을 확인하였다. 이는 쉬나무 추출물과 화학식 2의 화합물을 각각 처리하였을 때는 확인할 수 없었던 시너지 효과(synergistic effect) 이상의 유의적인 효과 상승이라 할 수 있다.
As shown in Fig. 11, when the compound of Example 3 was treated with the compound of the formula (2) alone and the compound of the formula (2) prepared in Example 1, a very excellent wound healing effect 20 ~ 30 wound closure rate% excellent). This can be said to be a significant increase over the synergistic effect, which was not confirmed when each of the extracts of squash and the compound of formula 2 was treated.

제제예 1, 2: 피부 재생용 또는 노화 방지용 크림형 화장료 조성물Formulation Examples 1 and 2: Cream-type cosmetic composition for skin regeneration or anti-aging

본 제제예에서는 쉬나무 추출물 또는 쉬나무 추출물과 화학식 1의 인디루빈 유도체를 혼합한 복합물을 유효성분으로 함유하는 피부재생용 크림형 화장료 조성물을 제조하고자 하였다. 실시예 1의 쉬나무 추출물 또는 화학식 1의 복합물을 포함하는 성분들을 하기 함량에 따라, 혼합하여 피부재생용 또는 노화 방지용 크림형 화장료 조성물을 제조하였다.In this Example, a cream-type cosmetic composition for regenerating skin containing as an active ingredient a complex of a mixture of an ash extract or an ash extract and an indirubin derivative of the formula (1) was prepared. Ingredients including the extract of the chewing gum of Example 1 or the compound of Formula 1 were mixed according to the following contents to prepare a cream-type cosmetic composition for skin regeneration or prevention of aging.

실시예 1의 쉬나무 추출물 또는 실시예 2의 복합물 4.0 중량%4.0% by weight of the extract of Example 1 or the complex of Example 2,

글리세린 2.0 중량%Glycerin 2.0 wt%

파라벤 0.2 중량%Paraben 0.2 wt%

알란토인 2.0 중량%Allantoin 2.0 wt%

베타인 3.0 중량%Betaine 3.0 wt%

히아루론산나트륨 1.0 중량%Sodium hyaluronate 1.0 wt%

초산토코페롤 5.0 중량%5.0% by weight of tocopheryl acetate

쉐어버터 2.0 중량%SHARE BUTTER 2.0 wt%

트레할로스 1.0 중량%1.0% by weight trehalose

방부제 및 향 적량의 중량%% &Lt; / RTI > by weight of preservative and incense <

정제수 to 100 중량%Purified water to 100%

합계 100 중량%
100 weight%

제제예 3, 4: 창상 치료용 약학 조성물(연고)Formulation examples 3 and 4: Pharmaceutical composition for wound healing (ointment)

본 제제예에서는 쉬나무 추출물 또는 쉬나무 추출물과 화학식 1의 인디루빈 유도체를 혼합한 복합물을 유효성분으로 함유하는 창상 치료용 약학 조성물(연고)을 제조하고자 하였다.In this Example, a pharmaceutical composition (ointment) for wound healing was prepared, which contains, as an active ingredient, a complex mixture of an ash extract or a quilla extract and an indirubin derivative of the formula (1).

실시예 1의 쉬나무 추출물 또는 화학식 1의 복합물을 포함하는 성분들을 하기 함량에 따라, 혼합하여 창상 치료용 약학 조성물(연고)을 제조하였다.Ingredients including the extract of the chewing gum of Example 1 or the compound of Chemical Formula 1 were mixed according to the following contents to prepare a pharmaceutical composition (ointment) for wound healing.

2%(w/v) 백미 추출물 10 중량%2% (w / v) white rice extract 10%

디에틸 세바케이트 8 중량%8% by weight diethyl sebacate

경납 5 중량%5%

폴리옥시에틸렌올레일에테르 포스페이트 6 중량%Polyoxyethylene oleyl ether phosphate 6 wt%

벤조산 나트륨 적량의 중량% By weight of sodium benzoate in an appropriate amount,

바셀린 to 100 중량%Vaseline to 100%

합계 100 중량%100 weight%

Claims

A composition for the treatment of wounds containing an extract of Aspergillus as an active ingredient.

The method according to claim 1,
The composition for wound healing further comprises an indirubin derivative wherein the indirubin derivative is selected from the group consisting of 5-methoxylindirubin-3'-oxime, indirubin-3'-oxime, 6-bromoindirubin- Dichloroindirubin-3'-oxime, 5,6-dichloroindirubin-3'-methoxime, 5,6-dichloroindirubin-3'-propyloxime, 5-nitroindirubin, 6-chloro-5-nitroindirubin-3'-oxime, 6-chloroindirubin-3'-methoxym, 5-chloroindirubin- -Bromoindirubin-3'-oxime, 5-bromoindirubin-3'-methoxime, 5-bromoindirvine-3'-ethyloxime, 5,6-dichloroindirubin- Oxime, and 6-chloroindirubin-3'-benzyloxime.

The method according to claim 1,
Wherein the extract is extracted from water, DMSO, an alcohol having 1 to 4 carbon atoms, and a mixed solvent thereof.

The method according to claim 1,
The chewy ginseng extract is characterized in that it is obtained by fractionating young branches, leaves, pulverized products thereof and mixtures thereof in a solvent selected from the group consisting of DMSO, n-hexane, ethanol, ethyl acetate, butanol and a mixed solvent thereof Composition for wound healing

The method according to claim 1,
Wherein the composition for wound healing is an external preparation for skin.

delete

3. The method of claim 2,
Wherein the indirubin derivative is at least one selected from the group consisting of the following chemical formulas (1) to (4).
[Chemical Formula 1]

(2)

(3)

[Chemical Formula 4]

delete