KR101888917B1

KR101888917B1 - 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 bm2 및 이의 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물

Info

Publication number: KR101888917B1
Application number: KR1020160176594A
Authority: KR
Inventors: 김명겸; 손은화; 강명석; 정희영; 장선아
Original assignee: 서울여자대학교 산학협력단; 강원대학교산학협력단; 대한민국(환경부 국립생물자원관장); 경북대학교 산학협력단
Priority date: 2016-12-22
Filing date: 2016-12-22
Publication date: 2018-08-17
Also published as: KR20180073752A

Abstract

본 발명은 종래의 염증억제제를 대체할 수 있는 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T 균주 및 이의 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 치료 및 예방용 조성물을 제공한다.
본 발명의 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T 및 이의 추출물은 항염증 관련 마커 단백질인 COX-2 및 iNOS 유전자의 발현을 억제시키고, 항산화 관련 마커 단백질인 HO-1 유전자의 발현을 증가시키며, JNK, ERK, 및 p38 단백질의 인산화를 감소시켜 염증관련 질환을 예방 또는 치료하는데 유용하게 활용될 수 있다.

Description

신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2 및 이의 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 {Novel strain Deinococcus Actinosclerus BM2, and Composition for Treating Inflammatory Disease Comprising Extracts Thereof}

본 발명은 다이노코커스 속 신균주 및 이의 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 치료 및 예방용 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T 및 이의 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 치료 및 예방용 조성물에 관한 것이다.

염증 반응은 세포 또는 조직의 손상이나 박테리아, 곰팡이, 바이러스, 다양한 종류의 알레르기 유발물질 등의 외부감염원에 감염되었을 때 국소 혈관과 체액 중 각종 염증 매개인자 및 면역세포가 관련되어 효소 활성화, 염증매개물질 분비, 체액 침윤, 세포 이동, 조직 파괴 등 일련의 복합적인 생리적 반응과 홍반, 부종, 발열, 통증 등 외적 증상을 나타낸다. 정상적인 경우 염증반응은 외부감염원을 제거하고 손상된 조직을 재생하여 생명체 기능회복작용을 하지만, 항원이 제거되지 않거나 내부물질이 원인이 되어 염증반응이 과도하거나 지속적으로 일어나면 오히려 점막손상을 촉진하고, 그 결과 일부에서는 암 발생 등의 질환을 이끈다.

생체에 있어서 염증의 발생 원인으로서는 다양한 생화학적인 현상이 관여하고 있으며, 특히 일산화질소(Nitric Oxide; NO)를 발생시키는 효소인 니트릭옥사이드 합성효소(Nitric Oxide Synthase; NOS)와 프로스타글란딘의 생합성과 관련된 효소들이 염증 반응을 매개하는데 있어서 중요한 역할을 하고 있는 것으로 알려져 있다. 따라서 L-아르기닌으로부터 NO를 생성시키는 효소인 니트릭옥사이드 합성효소(NOS)나, 아라키돈산으로부터 프로스타글란딘 등을 합성하는데 관련된 효소인 시클로옥시게나제(COX)의 활성 저해를 통해 염증을 차단하는 것이 염증 치료제 개발에 목표가 되고 있다.

최근의 연구 결과에 따르면, NOS는 몇 가지 종류가 존재하는데 뇌에 존재하는 bNOS(brain NOS), 신경계에 존재하는 nNOS(neuronal NOS), 혈관내피계에 존재하는 eNOS(endothelial NOS) 등은 체내에 항상 일정수준으로 발현되고 있으며, 이들에 의해 소량 생성되는 일산화질소(NO)는 신경전달이나 혈관확장을 유도하는 등 정상적인 신체의 항상성 유지에 중요한 역할을 하는데 반하여, 각종 사이토카인(cytokines)이나 외부 자극물질에 의해 유도되는 iNOS(induced NOS)에 의해 급격히 과량 발생되는 NO는 세포독성이나 각종 염증반응을 일으키는 것으로 알려져 있으며, 만성 염증은 iNOS 활성의 증가와 관련 있다는 연구가 있다(Miller M. J. et al., Mediators of inflammation, 4, pp387-396, 1995 : Appleton L. et al., Adv. Pharmacol., 35, pp27-28, 1996).

또한, 시클로옥시게나제도 2종류의 이소-형태가 존재하는데, 시클로옥시게나제-1(cyclooxygenase-1, COX-1)은 세포 내에 항상 존재하여 세포보호 작용에 필요한 프로스타글란딘(PGs)을 합성하는 작용을 나타내는 것에 반하여, 시클로옥시게나제-2(COX-2)는 염증 반응이 일어나는 경우, 세포 내에서 급격히 증가되어 염증 반응을 일으키는 데 있어서 중요한 역할을 수행하는 것으로 알려져 있다(Weisz A., Biochem. J., 316, pp209-215, 1996).

NO와 PGs의 분비를 증가시키는 iNOS 및 COX-2 효소의 발현에 관련되는 전사 인자는 다양한 경화(sclerosis) 및 만성 질환의 병인에 관련한다. 핵에 존재하는 전사인자인 NF-κB는 Rel 유전자계(Rel gene family)의 핵단백질로서, 세포질에서는 I-κB와 결합되어 불활성인 형태로 존재하나, 활성산소(reactive oxygen), 종양괴사인자-α(TNF-α)와 인터루킨-1(IL-1)과 같은 케모카인(chemokines) 또는 지질다당체(lipopolysaccharide, LPS)와 같은 다양한 자극에 의해 I-κB 키나제(kinase)가 활성화된 후 인산화 과정을 통해 I-κB가 떨어져 나가게 된다. p50과 p65의 헤테로이량체(heterodimer)로 구성된 NF-κB는 활성화된 후, 핵으로 이동하여 염증 반응을 유도하는 유전자 발현을 촉진시키는 것으로 알려져 있다(Oh, G. T. et al., Atherosclerosis, 159(1), pp17-26, 2001). 또한, 리포폴리사카라이드(LPS) 같이 외부로 분비되는 박테리아 독소는 세포의 염증반응들을 자극하고, 일산화질소(NO), 사이토카인, 종양괴사인자(TNF-α), 프로스타글란딘 E2(prostaglandin E2), 그리고 염증반응을 촉진하는 에이코사노이드(eicosanoid) 조절물질을 포함하는 여러 가지의 염증조절물질을 분비하게 한다(Chen YC, et al, Biochem. Pharmacol., 61, pp1417-1427, 2001).

한편, TNF-α(tumor necrosis factor-α)는 세균 감염 및 종양 질환에 대한 숙주 면역 반응 중에 활성화된 대식세포 및 여러 다양한 세포에 의해 생성된다. TNF-α는 염증 반응의 중요한 매개체로도 알려져 있는데, 류마티스성관절염(RA), 건선성 관절염, 크론병, 건선, 강직성척수염(AS)과 같은 염증성 질환에 중요한 역할을 담당하고 있다. 예를 들면, 류마티스성 관절염에서 TNF-α는 활액 염증을 지속시키고 뼈와 연골을 지속적으로 파괴시킨다. 따라서, TNF-α 특이적 생리 활성을 억제하는 것이 요구되므로, TNF-α가 매개되는 세포 반응을 막고 염증 전 사이토카인의 활성과 TNF-α에 의해 조절되는 과정을 조정하고자 하는 목적으로 TNF-α를 억제하는 다양한 생물학적 제제가 개발되고 있다.

한편, 다이노코커스(Deinococcus) 속 균주는 건조한(desiccation) 조건, 또한 자외선 및 이온화 광선(ionizing radiation)의 조건에서도 생존할 수 있는 거의 유일한 미생물로서 포자를 형성하지 않는 균주이다. 다이노코커스 속 균주는 1981년 Brooks와 Murray에 의해 처음 발견되었고, 현재까지 55 종의 균주가 동정된 바 있다(www.bacterio.net/deinococcus.html). 다이노코커스속에 속하는 대표적인 균주로 다이노코커스 라디오두란스(Deinococcus radiodurans) 균주가 있으며, Tim Lottman 등은 다이노코커스 라디오두란스 균주가 극한의 조건에서 생육이 가능한 것은 세포막의 카로테노이드(carotenoid) 및 특이 소수성 물질들의 원인과 함께 균주 자체의 유전자 재생 시스템(DNA repair system)이 타 생물의 세포보다 뛰어난 것에 기인한다고 보고한 바 있다. 또한, 다이노코커스 속 균주와 관련하여 특허등록 제10-0570520호는 디이노코커스 라디오두란스 균주의 세포막 추출물이 자외선에 대한 피부방어 및 자외선에 의한 손상회복, 지질과산화방지, 미백효과, 항알러지 등에 효과가 있음을 개시한 바 있다.

그러나, 다이노코커스(Deinococcus) 속 미생물 균주 자체가 극히 드물게 동정되어 기동정된 균주를 대상으로 한 대부분의 연구는 유전자의 재생 시스템과 관련하여 이루어져 왔고, 이외의 질병 치료와 관련된 연구는 진행된 바는 없으며, 특히 염증과 관련된 질환의 치료에 관해 연구 수행된 바 없다.

이러한 상황에서, 본 발명자들은 극한 조건 하에서 생존력이 우수한 다이노코커스(Deinococcus) 속 균주가 보유한 특성을 주목하여 새로운 다이노코커스 속 내 신종 균주를 찾고, 이를 다양한 분야의 질병치료에 적용하고자 예의 연구노력한 결과, 국내에서 동정한 다이노코커스 속 신종 균주 BM2^T가 염증관련 마커 단백질인 COX-2 및 iNOS 유전자의 발현을 억제하고, JNK, ERK, 및 p38 단백질의 인산화를 감소시켜 염증관련 질환을 예방 또는 치료하는데 유용하게 활용할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 주된 목적은 종래의 염증억제제를 대체할 수 있는 신종 균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T 및 이의 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 조성물을 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 염증질환의 예방 또는 치료 방법을 제공하는 것이다.

본 발명자들은 염증관련 질환을 예방 또는 치료하는데 유용한 소재를 찾고자 다양한 연구를 수행하던 중, 외부 환경에 의해 받는 스트레스를 효과적으로 극복할 수 있는 미생물이 염증관련 매개 인자의 제어를 효과적으로 수행할 수 있을 것으로 가정하고 극한 조건 하에서 생존력이 우수한 미생물의 염증관련 질환에 활용 가능성에 주목하였고, 이에 적합한 미생물을 발굴하고자 하였다.

이를 위하여, 본 발명자들은 국내 자생하는 토착 균주들을 수집하고, 9 kGy 선량의 감마선을 조사하여 극한의 조건에서도 생존하는지를 확인하여 여러 종의 후보 균주를 스크리닝 하였다. 또한, 상기 스크리닝 된 균주들의 추출물을 RAW264.7 세포에 처리하여 염증관련 마커 단백질의 발현 수준을 측정하였고, 염증관련 마커 단백질의 발현을 효과적으로 억제하는 균주를 분리 동정하였다. 이러한 염증 억제 활성을 나타내는 균주가 종래에 알려진 균주인지를 확인하기 위하여, 상기 균주로부터 수득한 16S RNA의 서열을 분석한 결과, 종래에 보고되지 않은 신규한 균주임을 확인하고 신종 (new species)으로 발표한 바 있다. 상기 균주의 특성을 분석한 결과, 염증관련 마커 단백질인 COX-2 및 iNOS 유전자의 발현을 억제하고, 항산화 관련 마커 단백질인 HO-1 유전자의 발현을 증가시키며, JNK, ERK, 및 p38 단백질의 인산화를 감소시켜 염증관련 질환을 예방 또는 치료하는데 유용하게 활용할 수 있음을 확인하였다.

이에, 본 발명자들은 상기 균주를 Deinococcus actinosclerus 신종 균주로 명명하고, 이를 2016년 12월 15일자로 국립농업과학원 농업유전자원정보센터에 기탁하고, 수탁번호 KACC 92161P를 부여받았다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 염증성 질환의 치료 및 예방에 유용한 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T(수탁번호: KACC 92161P)를 제공한다.

하기 본 발명의 일 실시예에서 입증되는 바와 같이, 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T(수탁번호: KACC 92161P)의 추출물은 우수한 염증관련 질환의 대표적인 마커 단백질인 COX-2 및 iNOS 유전자의 발현을 억제하고, 항산화 관련 마커 단백질인 HO-1 유전자의 발현을 증가시킨다.

본 발명에 있어서, 상기 균주는 서열번호 1의 16S rRNA 서열을 갖는 것을 특징으로 한다. 또한, 본 발명의 균주는 호기성, 그람양성, 및 비운동성(non-motile)이고, 25-37℃의 온도조건에서 안정적으로 성장하며, 9 kGy 선량의 감마선에도 저항성을 갖는 특징이 있다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T(수탁번호: KACC 92161P) 균주 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 치료 및 예방용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에서 사용되는 용어, "추출물"은 균주의 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 본 발명의 상기 추출물은 바람직하게 추출 후 건조 분말 형태로 제조되어 사용될 수 있다.

본 발명의 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T(수탁번호: KACC 92161P) 균주 추출물은 염증발생에 관여하는 효소 iNOS(inducible nitric oxide synthase) 및 COX(cyclooxygenase)-2 유전자의 발현을 억제하여 염증반응을 억제하는 역할을 수행한다. 또한, 본 발명의 균주 추출물은 염증 유발 물질인 LPS에 의해 매개되는 신호전달체계의 인산화 효소인 JNK, ERK, 및 p38 단백질 인산화 효소의 인산화를 저해하여 염증관련 세포내 신호전달체계를 효과적으로 차단한다.

또한, 본 발명의 균주 추출물은 p65 단백질의 인산화를 감소시키고, Ik-Bα 단백질의 발현을 증가시켜 핵 전사인자 NF-kB 활성화를 억제함으로써 염증성 질환의 예방, 치료 또는 개선에 매우 효과적이다.

또한, 본 발명의 균주 추출물은 염증매개 사이토카인인 IL-1β, IL-6, 및 TNF-α 유전자의 발현을 직접적으로 감소시키는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명의 균주 추출물은 항산화 관련 마커 단백질인 HO-1 유전자의 발현을 증가시켜 항산화 활성을 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명은 조성물은 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물의 형태로 제공될 수 있다.

본 발명에서 "염증질환"은 염증을 주병변으로 하는 질병을 총칭하는 의미로서, 이에 제한되지는 않으나 바람직하게는 아토피 피부염, 건선, 부비동염, 비염, 결막염, 천식, 피부염, 염증성 콜라겐 혈관 질환, 사구체신염, 뇌염, 염증성 장염, 만성 폐쇄성 폐질환, 패혈증, 패혈성 쇼크증, 폐섬유증, 미분화 척추관절증, 미분화 관절병증, 관절염, 염증성 골용해, 바이러스 또는 박테리아 감염에 의한 만성 염증질환, 대장염, 궤양성 대장염, 염증성 장질환, 타입 1 당뇨병, 타입 2 당뇨병, 관절염, 류마티스 관절염, 반응성 관절염, 골관절염, 공피증, 골다공증, 아테롬성 동맥경화증, 심근염, 심내막염, 심낭염, 낭성 섬유증, 하시모토 갑상선염, 그레이브스병, 나병, 매독, 라임병(Lyme disease), 보렐리아증(Borreliosis), 신경성-보렐리아증, 결핵, 사르코이드증(Sarcoidosis), 루프스, 동창성 루프스, 결핵성 루프스, 루프스 신염, 전신성 홍반성 루프스, 황반변성, 포도막염, 과민대장 증후군, 크론씨병, 쇼그랜 증후군, 섬유근통, 만성피로 증후군, 만성피로 면역부전 증후군, 근육통성 뇌척수염, 근위축성 측삭경화증, 파키슨병, 알츠하이머병, 다발성경화증, 자폐스펙트럼 장애, 주의력결핍 장애, 주의력 결핍 과잉행동장애 등을 포함한다.

본 발명에서 "예방"은 상기 조성물의 투여로 면역질환 또는 염증질환의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미하며, "치료"는 상기 조성물의 투여로 면역질환 또는 염증질환의 증세가 호전되거나 이롭게 되는 모든 행위를 의미한다.

본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.

적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 1일 투여량은 예컨대 0.001-100 ㎎/㎏이다.

본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T(수탁번호: KACC 92161P) 균주 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 면역질환 또는 염증질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.

본 발명의 용어 "투여"란 적절한 방법으로 개체에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미한다.

본 발명의 용어 "개체"란 면역질환 또는 염증질환이 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 쥐, 생쥐, 가축 등의 모든 동물을 의미한다. 구체적인 예로, 인간을 포함한 포유동물일 수 있다.

또 하나의 양태로서, 본 발명에 따른 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T(수탁번호: KACC 92161P) 균주 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 투여함으로써 면역반응을 억제하거나 염증을 조절할 수 있는 바, 본 발명은 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T(수탁번호: KACC 92161P) 균주 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 피험체에 투여하는 단계를 포함하는 피험체의 염증반응의 억제방법을 제공한다.

본 발명에서 "피험체"란 소, 개, 돼지, 닭, 양, 말, 인간을 포함한 포유동물을 의미하나 이에 제한되는 것은 아니다. 아울러, 바람직하게는 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T(수탁번호: KACC 92161P) 균주 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물의 투여는 복강 또는 혈관 내 투여, 병변으로의 직접 투여 또는 관절의 활강(Synovial cavity) 내 투여 등일 수 있다.

상기 염증 반응의 억제는 염증질환의 예방 또는 치료하는 것을 특징으로 할 수 있다.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T(수탁번호: KACC 92161P) 균주를 배양하는 단계 및 배양된 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T(수탁번호: KACC 92161P) 균주를 추출하는 단계를 포함하는, 항염증제의 제조 방법을 제공한다.

본 발명에서 "항염증제"란 상기에서 설명한 바와 같이, 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T(수탁번호: KACC 92161P) 균주 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 포함하는 제제로 염증을 억제하여 염증질환을 치료할 수 있는 제제를 의미한다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 염증성 질환의 치료 및 예방용 기능성 식품 조성물 형태로 제공될 수 있으며, 이러한 염증성 질환에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.

본 발명의 식품 조성물은 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T(수탁번호: KACC 92161P) 균주 추출물 이외에 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함한다. 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 감미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서 천연 감미제[타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시리진 등)] 및 합성 감미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 본 발명의 유효성분 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 두충 추출액, 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.

본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:

(i) 본 발명은 종래의 염증억제제를 대체할 수 있는 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T 및 이의 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물을 제공한다.

(ⅱ) 본 발명의 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T 및 이의 추출물은 염증관련 마커 단백질인 COX-2 및 iNOS 유전자의 발현을 억제시키고, 항산화 관련 마커 단백질인 HO-1 유전자의 발현을 증가시키며, JNK, ERK, 및 p38 단백질의 인산화를 감소시켜 염증관련 질환을 예방 또는 치료하는데 유용하게 활용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T의 계통수를 도시한 그림이다.
도 2는 본 발명의 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T의 추출물을 RAW264.7 세포에 처리하여 세포 독성을 측정한 그래프이다.
도 3은 본 발명의 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T의 추출물을 LPS 처리된 RAW264.7 세포에 처리한 후, COX-2, 및 iNOS 단백질의 발현을 측정한 사진이다.
도 4는 본 발명의 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T의 추출물을 LPS 처리된 RAW264.7 세포에 처리한 후, JNK, ERK, 및 p38 단백질의 인산화를 측정한 사진과, 블랏 이미지를 농도 분석(densitometric anaylsis)한 그래프이다.
도 5는 본 발명의 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T의 추출물을 LPS 처리된 RAW264.7 세포에 처리한 후, IkBa 및 p65 단백질의 인산화를 측정한 사진과, 블랏 이미지를 농도 분석(densitometric anaylsis)한 그래프이다.
도 6은 염증성 사이토카인의 m-RNA 발현을 Real-time PCR 반응으로 측정한 그래프이다.
도 7은 신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T의 추출물을 LPS 처리된 RAW264.7 세포에 처리한 후, HO-1 단백질의 발현을 측정한 사진과, 블랏 이미지를 농도 분석(densitometric anaylsis)한 그래프이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예 1. 토양 시료 채취, 균주 분리 및 동정

1-1 토양 시료 채취

항염증 활성을 갖는 미생물 후보군을 분리하기 위해 대한민국 서울에 소재한 서울여자대학교 인근의 야산에서 토양시료를 채취하였다. 채취한 토양시료는 균주 분리 전에 ⁶⁰Co 감마 방사선 조사장치(gamma irradiator, point source AECL, IR-79)를 사용하여 9 kGy 선량의 감마선을 조사하는 전처리 과정을 수행하였다. 감마선 처리된 토양에 50 mL 식염수(0.85% NaCl) 용액을 가해 충분하게 가라앉힌 후, 충분하게 교반하고, 10배 부피의 식염수로 희석하였다.

희석된 100μL 용량의 분액(aliquot)을 R2A 아가 배지(Difco)에 스프레딩 하고, 25℃에서 일주일 동안 정치 배양하여 콜로니를 형성시키는 과정을 2회 반복 수행하였다. 이렇게 형성된 콜로니를 뉴트리언트 아가 배지(Difco)로 옮겨 30℃에서 다시 배양한 후, 3 개 콜로니에서 균주를 분리하여 20 %(w/v) 글리세롤에 보관하여 70℃에서 동결 보존하였다.

1-2 균주 분리 및 동정

분리된 3 개 균주의 유전체 DNA(Genomic DNA)를 상용화된 DNA 추출 키트(Solgent)의 제조사 프로토콜에 따라 분리하였고, 유전체 DNA를 주형으로 9F/1492R 프라이머를 사용하여 16S rRNA 유전자를 PCR 증폭하였다(Weisburg et al., 1991). 증폭된 PCR 산물을 정제하고, 유니버셜 박테리아 프라이머 세트 9F, 518F, 785F 및 800R을 사용하여 서열분석 하였고, SeqMan software(DNASTAR) 프로그램을 이용하여 16S rRNA 유전자 염기서열을 결정하였다.

동 균주의 계통학적 위치(phylogenetic position)를 결정하기 위하여, GeneBank의 유전자 데이터베이스에서 유사균주의 16S rRNA 유전자 염기서열을 수집하였고, 수집된 서열들을 BioEdit program (Hall, 1999)과 CLUSTAL X program(Thompson et al., 1997)을 이용하여 분석하였다. 분석된 서열을 바탕으로 진화적 거리(Evolutionary distances)를 Kimura two-parameter model (Kimura, 1983)을 사용하여 측정하였고, 근연분석(neighbour-joining, Saitou & Nei, 1987)을 토대로 분리된 3 개 균주들의 계통학적 위치(phylogenetic position)를 결정하였다.

분석된 서열은 이지택손(EzTaxon) 프로그램을 이용하여 글로벌 얼라인먼트(global alignment) 분석법을 통하여 현재까지 분리된 가장 가까운 균주를 확인하고, 근접한 서열들을 모아 계통수를 작성하였다. 계통수를 구할 때, MEGA6 프로그램에서 제공되는 근연분석(neighbor-joining)을 기본으로 하여 필요할 경우 최소 진화(minimum-evolution), 최대 절약(maximum-parsimony, Fitch, 1971) 및 최대 유사 알고리즘(maximum-likelihood algorithms, Tamura et al., 2011)을 이용하여, 16S rRNA 유전자 염기서열을 통한 계통학적 위치(phylogenetic position)를 결정하였다.

그 결과, 분리된 3 개 균주는 Deinococcus grandis DSM 3963^T 균주와 98.1%, Deinococcus radiotolerans C1^T 균주와 97.9 %, 그리고, Deinococcus daejeonensis MJ27^T 균주와 97.6%의 서열 상동성을 갖는 것으로 조사되었다(도 1).

분리된 3 개 균주는 다이노코커스(Deinococcus) 속에 속하는 신종 (new species) 균주로 분석되었으며, 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T, BM4, 및 BM5 균주로 각각 명명하였다.

이들 3 개 균주 중에서 하기 실시예를 통해 항염증 활성이 우수한 것으로 나타난 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주를 2016년 12월 15일자로 국립농업과학원 농업유전자원정보센터에 기탁하여 수탁번호 KACC 92161P를 부여받았다.

실시예 2. 분리된 균주의 이화학적 분석

분리된 3 개 균주 및 근연관계가 가까운 3종 균주(D. grandis KCTC 12551^T, D. daejeonensis KCTC 13751^T, 및 D. radiotolerans KCTC 33150^T)에 대해 균학적 특성 및 이화학적 특성을 분석하였다.

우선, 그람 염색 반응은 Doetsch(1981)의 방법에 따라 전통적인 그람 염색 반응을 수행하였다. 또한 균주의 형태학적 특징은 광학현미경(Olympus BX51)으로 조사하였고, 균주의 운동성은 30℃, R2A 아가 배지 상에서 3일 동안 균주를 배양한 후, 행잉 드롭 테크닉(hanging drop technique, Bernardet et al., 2002)을 이용하여 조사하였다. 혐기성 조건에서의 생장 여부는 가스팩 용기(GasPak jars)에 놓인 R2A 아가(Difco), 뉴트리언트 아가(Difco) 및 트립티케이스 소이 아가(Difco) 플레이트 상에서 테스트 하였다.

또한, 옥시다아제 및 카탈라아제 활성, 균주의 최적 생장 온도 및 pH 특성과, DNA G+C 함량(mol%)을 공지의 방법에 의해 측정하였고, 이를 하기 [표 1]에 나타내었다(Eun Sun Joo et al., 2016, International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology (2016), 66, 10031008)

[표 1]

분석된 균주 중 본 발명의 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주는 구형의 균주 형태를 나타내고, 핑크색의 콜로니를 형성하며, 에스터라아제(C4 및 C8), 및 베타 갈락토시다아제 효소 활성을 갖고, 유전체 DNA의 G+C 염기 함량은 69.7(mol%)인 것으로 나타났다.

상기와 같이 동정되어 이화학적 특성을 분석한 본 발명의 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주의 항염증 활성을 하기 실험예에 따라 검증하였다.

실험예 1. 실험 재료 및 방법

1-1 Reagents

DMEM 배지(Dulbecco’s modified Eagle media), FBS(fetal bovine serum) 배지와, 트립토판-EDTA(trypsin-EDTA) 및 페니실린/스트렙토마이신(penicillin/streptomycin)은 웰젠(WelGene, Daegu, Korea)에서 구입하였다.

대장균(E. coli 055：B5) 기원의 LPS는 Sigma-Aldrich(St.Louis, MO, USA) 에서 구입하였다. 실험에 사용된 항체 phospo-ERK1/2(#4399), ERK1/2(#9102), phospo-JNK (#9251), JNK(#9252), phospo-p38(#9211), p38(#9212), phospho-p65(#3031), HO-1(ADI-SPA-896), 및 β-actin(#3700) 항체와 이들의 2차 항체는 셀 시그날링 사(Cell signaling)에서 구입하였다. 그리고, iNOS(sc-8310), COX-2(sc-1745), 및 Ik-Bα(sc-847) 항체는 산타크루즈 바이오테크날러지 사(Santa Cruz Biotechnology, SantaCruz, CA, USA)에서 구입하였다.

프리 스테인드(Pre-stained) SDS PAGE(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis) 표지자들은 Bio-Rad 사(Hercules, CA, USA)에서 구입하였다. 트리졸 리에이전트(TRIzol reagent)는 인비트로젠 사(Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA, USA)에서 구입하였고, Real-time PCR에 사용된 SYBR Green은 Takara 사(Shiga, Japan)에서 구입하여 사용하였다.

1-2 Cell culture

세포주 RAW264.7(murine macrophage cells) 세포는 아메리칸 타입 컬처 콜렉션(American Type Culture Collection, ATCC, Manassas, VA)에서 구입하여, 10% FBS, 1% P/S(penicillin/streptomycin, 10,000U pen/mL, 10,000μg strep/㎖)를 첨가한 DMEM 배지에 부착 배양하였으며, 37℃, 5% CO₂ 조건을 유지하였다.

1-3 균주 추출

상기 실시예 1-1에서 분리 동정된 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주를 30℃, R2A 배지에서 대수 증식기 후반까지 약 3일 동안 진탕 배양하였다. 배양된 균주를 원심분리기를 이용하여 침전시키고 증류수를 첨가하여 분산시킨 후, 동일 과정을 2회 반복하여 세균 균체 이외의 물질을 제거하고, 세균 균체를 회수하였다.

회수한 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주에 증류수를 균체 부피의 2배 부피로 첨가한 후, 100℃에서 15분 동안 진탕하여 열수추출하고, 이를 다시 원심분리한 후, 상등액과 침전물을 각각 분리고, 동결 건조하였다. 이렇게 수득한 상등액을 PBS버퍼나 배양액에 희석하여 이하 실험을 진행하였다.

실험예 2. 균주 추출물 첨가에 따른 세포 생존율 측정

다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주 추출물의 첨가에 따른 세포 생존율의 변화를 MTT assay를 수행하여 측정하였다.

먼저, RAW264.7 세포(5x10⁵ cell/mL)를 96-well 마이크로 플레이트에 100uL씩 부착시킨 후, BM2^T 균주 추출물을 농도별로 단독처리 또는 LPS 1 ug/ml을 동시처리한 후, 24시간 후에 MTT solution 5 mg/mL을 10 μL씩 처리하였다. 4시간 더 배양 후에 상등액을 제거하여 살아있는 세포에서 생성된 포르마잔(formazan)의 양을 DMSO로 녹여서 발색시킨 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다(도 2 참조).

그 결과, 본 발명의 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주 추출물은 50 μL 농도까지 RAW264.7 세포 성장에 크게 영향을 미치지 않은 것으로 확인되었다.

실험예 3. 세포내 COX-2, iNOS , JNK , ERK , 및 p38 단백질 발현 측정

RAW264.7 세포(3x10⁶ cell/mL)를 60mm 컬쳐 디쉬(culture dish)에 부착시킨 후, 본 발명의 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주 추출물을 각각 0.2, 2, 및 20 ug/ml 농도로 처리하고, 2시간 경과 후에 LPS 1ug/ml을 처리하여 염증 반응을 유도하였다. 염증반응이 유도된 세포를 차가운 PBS 버퍼로 세척하고 원심분리한 후, 그 상층액을 제거하고, 펠릿층에서 세포를 수거하였다. 수거된 세포에 용혈 버퍼(Lysis buffer)를 넣어 단백질을 용해시키고, 원심분리(15,000rpm, 20 min)한 후, 상층액만을 취하여 단백질을 정량하였다.

동일한 양의 단백질과 샘플링 버퍼를 같이 넣어 섞은 다음, 그 샘플을 10% SDS-PAGE에 전기영동한 후 멤브레인(membrane)에 옮기고 나서, 5% 스킴 밀크(skim milk)로 1시간 동안 블록킹(blocking) 하였다. COX-2, 및 iNOS 단백질 발현과, ERK, p38, 및 JNK 단백질의 인산화(phosphorylation)를 ECL 디텍션(ECL detection) 용액(Amersham)으로 확인하였다.

그 결과, 본 발명의 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주 추출물이 COX-2 단백질의 발현을 농도 의존적으로 억제하는 것을 관찰할 수 있었고, iNOS 단백질의 발현도 효과적으로 억제하는 것을 관찰 할 수 있었다(도 3 참조). 이러한 결과를 통해, 본 발명의 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주 추출물이 염증 반응에 중요한 역할을 하는 COX-2, 및 iNOS 단백질의 발현을 직접적으로 저해하여 염증관련 질환의 치료 및 예방에 효과적으로 작용할 수 있음을 확인할 수 있었다.

또한, 본 발명의 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주 추출물의 처리를 통해, LPS 염증 유발인자에 의해 증가된 ERK, p38, 및 JNK 단백질의 인산화(phosphorylation)가 효과적으로 억제되는 현상을 관찰할 수 있었고, 이와 같이 염증 매개 사이토카인의 신호전달체계에서 중요한 역할을 수행하는 ERK, p38, 및 JNK 단백질의 인산화 억제를 통해, 염증 관련 MAPKs 신호전달체계를 블록킹하여 NF-kB, Fra-1, c-Fos, 및 c-Jun 등의 전사인자의 작용을 제한하는 역할을 수행하며, 이를 통해 염증관련 질환의 치료 및 예방에 효과적으로 작용할 수 있음을 확인할 수 있었다.

실험예 4. 세포내 NF - kB 활성 측정

NF-kB는 염증인자들을 생성하는 주요 전사 인자로, NF-kB의 억제는 강력한 항염증제로 개발될 수 있다. 본 발명의 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주 추출물이 NF-kB에 미치는 영향을 살펴보기 위하여, 실험예 3과 동일한 방법으로 RAW264.7 세포(3x10⁶ cell/mL)를 이용하여 본 발명의 BM2^T 균주 추출물을 각각 0.2, 2, 및 20 ug/ml 농도로 처리하고, 2시간 경과 후에 LPS 1ug/ml을 처리하여 염증 반응을 유도하였다. 염증반응이 유도된 RAW264.7 세포를 실험예 3과 동일한 방법으로 상층액만을 취하여 IkBa 단백질 발현과 p65 단백질의 인산화를 정량하였다.

그 결과, 본 발명의 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주 추출물이 농도 의존적으로 IkBa 단백질의 합성을 촉진하고, p65 단백질을 효과적으로 인산화 하는 현상이 관찰되었다(도 5참조). 상기와 같은 결과를 통해, 본 발명의 추출물이 염증관련 중요 전사인자인 NF-kB의 핵 내 이동을 효과적으로 블로킹하고, 이를 통해 염증관련 질환의 치료 및 예방에 효과적으로 작용할 수 있음을 확인할 수 있었다.

실험예 5. Real-time PCR 실험을 통한 염증관련 사이토카인 유전자 발현 분석

RAW264.7 세포(3x10⁶ cell/mL)를 60mm 컬쳐 디쉬(culture dish)에 부착시킨 후, 본 발명의 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주 추출물을 각각 0.2, 2, 및 20ug/ml 농도로 2 시간 동안 전처리하고, LPS 1 ug/ml을 22시간 처리하였다. 차가운 PBS 용액으로 RAW264.7 세포를 세척하고, RNA Mini Kit(Invitrogen, MD, USA)를 이용하여 total RNA를 추출하였다. 추출된 RNA 1 ㎍을 사용하여 cDNA를 합성하고, SYBR Green과 하기 [표 2]의 IL-1β, IL-6, 및 TNF-α 프라이머를 이용하여 real-time PCR을 진행하였다. 대조군 유전자로는 β-actin을 사용하였다.

PCR 조성은 cDNA를 증류수로 1/100으로 희석하여 8㎕를 사용하였고, 10 pmol 프라이머를 각각 0.5 ㎕, ROX plus 12.5 ㎕, 및 증류수 4 ㎕로 사용하여 전체 부피를 25 ㎕로 맞추었다. Real-time PCR 사이클은 초기변성은 95℃ 10분, 변성은 95℃ 30초, 어니얼링은 59℃ 1분, 신장반응은 95℃ 1분으로 하여 40 사이클을 진행하였고, 융해곡선은 55℃로부터 95℃를 끝으로 하여 0.5℃씩 상승시키며 80번을 반응하여 원하는 형광 값을 검출하였다. 형광신호 정량은 MAX Pro 프로그램을 사용하였다.

[표 2]

그 결과, 본 발명의 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주 추출물이 LPS에 의해 증가된 IL-1β, IL-6, 및 TNF-α 유전자의 전사를 효과적으로 억제하는 현상이 관찰되었다(도 6 참조). 상기와 같은 결과를 통해, 본 발명의 추출물이 주요 염증성 사이토카인의 유전자 발현을 효과적으로 억제하고, 이를 통해 염증관련 질환의 치료 및 예방에 효과적으로 작용할 수 있음을 확인할 수 있었다.

실험예 6. 항산화 활성 측정

항산화 활성은 ORAC(oxygen radical absorbance capacity) 실험 및 HO-1 단백질의 발현량 조사를 통해 분석하였다.

먼저, ORAC 실험(ORAC assay)는 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주 추출물을 각각 6.25, 12.5, 25, 50 및 100ug/ml 농도로 희석하여 96-well 마이크로플레이트에 넣은 후 양성 대조군으로 비타민E 유사체인 trolox(Fluka)를 시료의 농도와 동일하게 넣어주었다. 이후 75 mM PE 버퍼와 β-Phycoerythrin(Sigma)을 섞어서 넣어준 후, AAPH(Sigma)를 첨가하여 형광 강도 측정기(fluorometer, Victor3, Perkin Elmer)를 이용하여 형광의 변화 과정을 여기(excitation) 535 nm, 발광(emission) 590 nm에서 60분 동안 2분 간격으로 측정하였다.

도 7을 참고하여 ORAC 값을 비교해보면, 본 발명의 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주 추출물을 첨가한 시험군에서 농도 의존적으로 ORAC 값이 증가하는 것을 관찰할 수 있었고, 100ug/ml 농도로 균주 추출물을 첨가한 시험군에서는 양성대조군인 Trolox와 동등의 항산화 효과를 갖는 것으로 나타나, 본 발명의 균주 추출물의 항산화 활성이 높은 것을 확인하였다.

한편, HO-1 단백질의 발현량은 실험예 3과 동일한 방법으로 셀 시그날링 사(Cell signaling)에서 구입한 HO-1(ADI-SPA-896), 및 β-actin(#3700) 항체와 이들의 2차 항체를 사용하여 분석하였다. 도 7을 참고하여 HO-1 단백질의 발현량을 비교해보면, 본 발명의 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주 추출물을 첨가한 시험군에서 농도 의존적으로 HO-1 단백질의 발현이 증가하는 것을 관찰할 수 있었고, 이러한 결과를 통해 본 발명의 균주 추출물의 항산화 단백질의 발현을 촉진시키는 것을 확인할 수 있었다.

상기와 같은 결과를 통해, 본 발명의 다이노코커스 액티노스클레루스(Deinococcus actinosclerus) BM2^T 균주 및 그 추출물이 우수한 항염증 및 항산화 활성이 있음을 알 수 있었고, 이를 통해 항염증 관련 질환의 치료 및 예방에 효과적으로 적용할 수 있음을 확인할 수 있었다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다.

따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

국립농업과학원 농업유전자원정보센터

KACC92161P

20161215

<110> SEOUL WOMEN'S UNIVERSITY NATIONAL INSTITUTE OF BIOLOGICAL RESOURCES Kangwon National University kyungpook national university <120> Novel strain Deinococcus Actinosclerus BM2, and Composition for Treating Inflammatory Disease Comprising Extracts Thereof <130> PN20160075AN <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1402 <212> DNA <213> Deinococcus sp. <400> 1 ctggctcagg gtgaacgctg gcggcgtgct taagacatgc aagtcgaacg gtcccttcgg 60 ggatagtggc gcacgggtga gtaacgcgta actgacctac cccaaagtcg cggataacga 120 ttcgaaagaa tcgctaatac gtgatgtgct gtcagattgt gttctgccag taaagattta 180 ttgctttggg atggggttgc gttccatcag ctagttggtg gggtaaaggc ctaccaaggc 240 gacgacggat agccggcctg agagggtggc cggccacagg ggcactgaga cacgggtccc 300 actcctacgg gaggcagcag ttaggaatct tccacaatgg gcgaaagcct gatggagcga 360 cgccgcgtga gggatgaagg tcttcggatt gtaaacctct gaatcaggga cgaaagacgc 420 gtaagcggga tgacggtacc tgagtaatag caccggctaa ctccgtgcca gcagccgcgg 480 taatacggag ggtgcaagcg ttacccggaa tcactgggcg taaagggcgt gtaggcggac 540 acttaagtct ggttttaaag actgcggctc aaccgcaggg atggactgga tactgggtgt 600 cttgacctct ggagagagaa ctggaattcc tggtgtagcg gtggaatgcg tagataccag 660 gaggaacacc aatggcgaag gcaggttctt ggacagaagg tgacgctgag gcgcgaaagt 720 gtggggagcg aaccggatta gatacccggg tagtccacac cctaaacgat gtacgttggc 780 taaccgcagg atgctgtggt tggcgaagct aacgcgataa acgtaccgcc tgggaagtac 840 ggccgcaagg ttgaaactca aaggaattga cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg 900 gtttaattcg aagcaacgcg aagaacctta ccaggtcttg acatgctagg aactcctgag 960 agatcaggag gtgcccttcg gggaacctag acacaggtgc tgcatggctg tcgtcagctc 1020 gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttacctt tagttgccag 1080 cattgagttg ggcactctag agggactgcc tatgaaagta ggaggaaggc ggggatgacg 1140 tctagtcagc atggtcctta cgacctgggc tacacacgtg ctacaatgga tgggacaacg 1200 cgcagccaac ttgcgaaagt gagcgaatcg ctgaaaccca tccccagttc agatcggagt 1260 ctgcaactcg actccgtgaa gttggaatcg ctagtaatcg caggtcagca tactgcggtg 1320 aatacgttcc cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca tgggagtaaa ttgcagctga 1380 aaccgccggg agcctcacgg ca 1402

Claims

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신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T(수탁번호: KACC 92161P) 균주 추출물을 유효성분으로 함유하는 시클로옥시게나제-2(COX-2) 또는 유도성 NO 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS) 매개 염증성 질환의 치료 및 예방용 약학적 조성물.
제3항에 있어서,
상기 조성물은 힘 옥시게나아제-1(Heme oxygenase-1, HO-1) 유전자의 발현을 증가시키고, C-Jun N 말단 키나제(JNK), 세포외 신호조절 키나제(extracellular signal-regulated kinases, ERK), 및 p38 단백질의 인산화를 감소시키는 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 치료 및 예방용 약학적 조성물.
제3항에 있어서,
상기 조성물은 p65 단백질의 인산화를 감소시키고, IkBα(nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor alpha) 단백질의 발현을 증가시키는 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 치료 및 예방용 약학적 조성물.
제3항에 있어서,
상기 조성물은 인터루킨-1β(IL-1β), 인터루킨-6(IL-6), 및 종양괴사인자-α(TNF-α) 유전자의 발현을 감소시키는 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 치료 및 예방용 약학적 조성물.
삭제
제3항 내지 제6항 중 어느 한 항의 염증성 질환의 치료 및 예방용 약학적 조성물을 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 시클로옥시게나제-2(COX-2) 또는 유도성 NO 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS) 매개 염증성 질환의 예방 또는 치료 방법.
신균주 다이노코커스 액티노스클레루스 BM2^T(수탁번호: KACC 92161P) 추출물을 유효성분으로 함유하는 시클로옥시게나제-2(COX-2) 또는 유도성 NO 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS) 매개 염증성 질환의 예방용 기능성 식품 조성물.
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