KR101875547B1 - 겨우살이 추출물의 용매 분획물 및 이로부터 분리된 활성 물질을 포함하는 항산화 또는 미백용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 겨우살이 추출물로부터 분획된 에틸아세테이트 분획물 또는 부탄올 분획물; 및 이로부터 분리된 활성 물질을 포함하는 항산화 또는 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 특정 용매 분획물 또는 이로부터 분리된 활성 물질을 포함하는 조성물은 우수한 항산화 활성 및 미백 활성을 나타내어, 항산화 또는 미백용 화장료 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

겨우살이 추출물의 용매 분획물 및 이로부터 분리된 활성 물질을 포함하는 항산화 또는 미백용 화장료 조성물{Cosmetic composition for anti-oxidation or whitening comprising solvent fraction of mistletoe extract and active material isolated therefrom}

본 발명은 항산화 또는 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 겨우살이 추출물의 용매 분획물 및 이로부터 분리된 활성 물질을 포함하는 항산화 또는 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

겨우살이(Mistletoe, Viscum album)는 스스로 광합성을 하며, 다양한 나무를 숙주로 하여 영양분을 공급받기도 하는 반기생 식물이며, 우리나라를 비롯한 동아시아 및 유럽에서 약용식물로 사용되어 왔다. 특히, 유럽지역에 서식하는 겨우살이는 포함되어 있는 렉틴(lectin) 성분으로 인해 항암 활성이 우수한 것으로 알려져 있어 항암치료제/보조제로서 상업적 시판되고 있으며, 우리나라에서는 한방에서 치통, 고혈압, 유산방지 및 요통 등에 대한 약재로 사용되고 있다. 또한, 뼈나 힘줄, 피부, 혈맥을 튼튼하게 하고, 머리카락을 성장케 하는 효과가 있다고 알려져 있다.

겨우살이의 생리활성과 관련하여서는, 대한민국 공개특허 제2002-0053430호는 겨우살이 추출물의 항염증 및 항산화 활성을 보고한 바 있으며, 대한민국 공개특허 제2002-0080658호는 상기생 추출물의 미백 효과를 개시한 바 있으며, 한국산 겨우살이 추출물의 식중독 세균 증식 억제 및 항산화 활성[한국식품저장유통학회지 19(6), 919-924(2012)], 겨우살이 렉틴의 항당뇨 효과[대한의생명과학회지 6(2), 151-157(2000)], 한국산 겨우살이 추출물의 in vivo 독성 및 항종양효과[한국생약학회지 40(3), 205-212(2009)] 등이 보고된 바 있다.

한편, 티로시나제는 포유동물, 식물, 균류 등 천연에 존재하고 페놀(phenol) 및 카테콜(catechol) 등의 기질을 수용하는 구리를 포함하는 효소이다. 이 효소는 멜라닌 생합성의 첫 두 단계에 관여하여 L-티로신(L-tyrosine)을 L-DOPA(L-3,4-dihydroxyphenylalanine)로 히드록실화(hydroxylation)시키고, o-퀴논(o-quinone, dopaquinone)으로 산화시키는 역할을 한다. 도파퀴논(Dopaquinone)은 몇 단계의 반응을 통해 멜라닌으로 전환되어 피부 색소침착의 원인 물질로 작용한다. 또한 식품 산업에서 티로시나제는 과일과 채소의 안정성을 제어하는 표적 효소 역할을 한다. 이에 따라 보다 안전하고 효과적인 티로시나제 저해제를 개발하는 것은 식품 및 화장품 산업에서 상당히 중요한 해결과제로 인식되어지고 있다.

대한민국 특허공개 제2003-0005719호 (2003.01.23.) 대한민국 특허등록 제10-0923217호 (2009.10.16.)

J Food Sci Nutr Vol 10, p.244-250 (2005.08.29.)

본 발명자들은 피부 미백 활성이 우수한 천연소재를 찾기 위한 연구를 수행하던 중, 겨우살이 추출물의 특정 용매 분획물 및 이로부터 분리한 비스큠네오시드 Ⅲ(Viscumneoside Ⅲ)와 호모플라보야도리닌 B(Homoflavoyadorinin B)가 항산화 효과 및 미백 효과가 있다는 것을 발견하였다.

따라서, 본 발명은 겨우살이 추출물로부터 분획된 에틸아세테이트 분획물 또는 부탄올 분획물; 및 이로부터 구조 규명된 활성 물질을 포함하는 항산화 또는 미백용 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명에서는 겨우살이 추출물로부터 분획된 에틸아세테이트 분획물 또는 부탄올 분획물을 포함하는 항산화 또는 미백용 화장료 조성물이 제공된다.

본 발명의 일 태양에 따라, 상기 화장료 조성물을 포함하는 화장품이 제공된다.

본 발명의 일 태양에 따라, (a) 겨우살이를 C₁ 내지 C₃ 알코올로 추출하여 겨우살이 추출물을 얻는 단계; (b) 단계(a)에서 얻은 상기 겨우살이 추출물을 C₁ 내지 C₃ 알코올:물(9:1 비율, v/v) 혼합용액에 현탁하여 겨우살이 추출물 현탁액을 얻는 단계; (c) 단계(b)에서 얻은 상기 겨우살이 추출물 현탁액을 헥산으로 용매 분획한 후 C₁ 내지 C₃ 알코올:물 혼합용액을 감압 농축하여 C₁ 내지 C₃ 알코올을 제거하여 고형물을 얻는 단계; 및 (d) 단계(c)에서 얻은 상기 고형물을 물에 현탁한 후 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트 및 부탄올로 순차적으로 용매 분획하여 메틸렌클로라이드 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 및 부탄올 분획물을 얻는 단계를 포함하는 겨우살이 추출물 분획물의 제조방법이 제공된다.

본 발명의 일 태양에 따라, (a) 참나무에 기생하는 한국산 겨우살이(Viscum album L. var. coloratum)를 메탄올로 추출하여 겨우살이 추출물을 얻는 단계; (b) 상기 단계(a)에서 얻어진 겨우살이 추출물을 메탄올:물(9:1 비율, v/v) 혼합용액에 현탁하여 겨우살이 추출물 현탁액을 얻는 단계; (c) 상기 단계(b)에서 얻어진 겨우살이 추출물 현탁액을 헥산으로 용매 분획한 후 메탄올:물 혼합용액을 감압 농축하여 메탄올을 제거하여 고형물을 얻는 단계; 및 (d) 상기 단계(c)에서 얻어진 고형물을 물에 현탁한 후 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트 및 부탄올로 순차적으로 용매 분획하여 메틸렌클로라이드 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 및 부탄올 분획물을 얻는 단계를 포함하는 겨우살이 추출물 분획물의 제조방법이 제공된다.

본 발명에 의해, 겨우살이 추출물의 용매별 분획물, 특히, 에틸아세테이트 분획물 및 부탄올 분획물이 우수한 항산화 활성(DPPH 라디칼 소거능) 및 미백 활성(티로시나제 억제능)을 나타내는 것이 밝혀졌다. 또한, 상기 특정 용매 분획물로부터 구조 규명된 물질인 비스큠네오시드 Ⅲ 및 호모플라보야도리닌 B도 우수한 항산화 활성 및 미백 활성을 나타내는 것이 밝혀졌다.

따라서, 본 발명의 겨우살이 추출물의 특정 용매 분획물; 및 이로부터 구조 규명된 물질인 비스큠네오시드 Ⅲ 및 호모플라보야도리닌 B를 포함하는 조성물은 항산화 또는 미백용 화장료 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 겨우살이의 추출 및 용매별 분획 공정을 나타낸 개략도이다.
도 2는 겨우살이 용매별 분획물의 DPPH 라디칼 소거능(DPPH radical scavenging activity, %)을 측정한 결과이다(Ascorbic acid: 아스코르브산; Hex fr.: 헥산 분획물; CH₂Cl₂ fr.: 메틸렌클로라이드 분획물; EtOAc fr.: 에틸아세테이트 분획물; BuOH fr.: n-부탄올 분획물).
도 3은 겨우살이 용매별 분획물의 티로시나제 억제 활성(tyrosinase inhibition activity, %)을 측정한 결과이다.
도 4는 겨우살이 에틸아세테이트 분획물을 HPLC로 분석한 결과이다.
도 5는 비스큠네오시드 Ⅲ(Viscumneoside Ⅲ) 및 호모플라보야도리닌 B(Homoflavoyadorinin B)의 DPPH 라디칼 소거능을 측정한 결과이다.
도 6은 비스큠네오시드 Ⅲ 및 호모플라보야도리닌 B의 티로시나제 억제 활성을 측정한 결과이다.

본 발명은 겨우살이 추출물로부터 분획된 에틸아세테이트 분획물 또는 부탄올 분획물을 포함하는 항산화 또는 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

일 구현예에서, 상기 겨우살이는 한국산 겨우살이(Viscum album L. var. coloratum)일 수 있으며, 상기 겨우살이가 기생하는 나무는 참나무일 수 있다. 또한, 일 구현예에서, 상기 겨우살이 추출물은 C₁ 내지 C₃ 알코올 추출물일 수 있으며, 특히, 메탄올 추출물일 수 있다.

상기 겨우살이 추출물의 용매별 분획물, 특히, 에틸아세테이트 분획물 및 n-부탄올 분획물은 우수한 DPPH 라디칼 소거능을 나타내었다(도 2 참조). 또한, 겨우살이 용매별 분획물의 티로시나제 억제 효과는 에틸아세테이트 분획물에서 가장 우수한 것으로 나타났으며, n-부탄올 분획물도 양성대조군인 아스코르브산보다 우수한 활성을 나타내었다(도 3 참조).

상기 분획물은 (a) 겨우살이를 C₁ 내지 C₃ 알코올로 추출하여 겨우살이 추출물을 얻는 단계; (b) 단계(a)에서 얻은 상기 겨우살이 추출물을 C₁ 내지 C₃ 알코올:물(9:1 비율, v/v) 혼합용액에 현탁하여 겨우살이 추출물 현탁액을 얻는 단계; (c) 단계(b)에서 얻은 상기 겨우살이 추출물 현탁액을 헥산으로 용매 분획한 후 C₁ 내지 C₃ 알코올:물 혼합용액을 감압 농축하여 C₁ 내지 C₃ 알코올을 제거하여 고형물을 얻는 단계; 및 (d) 단계(c)에서 얻은 상기 고형물을 물에 현탁한 후 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트 및 부탄올로 순차적으로 용매 분획하여 메틸렌클로라이드 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 및 부탄올 분획물을 얻는 단계를 포함하는 겨우살이 추출물 분획물의 제조방법에 의하여 제조될 수 있다.

일 구현예에서, 단계(a)의 상기 겨우살이는 한국산 겨우살이(Viscum album L. var. coloratum)일 수 있으며, 상기 겨우살이가 기생하는 나무가 참나무일 수 있다. 일 구현예에서, 단계(a)의 상기 C₁ 내지 C₃ 알코올은 메탄올일 수 있다.

또한, 상기 분획물은 가장 바람직하게, (a) 참나무에 기생하는 한국산 겨우살이(Viscum album L. var. coloratum)를 메탄올로 추출하여 겨우살이 추출물을 얻는 단계; (b) 상기 단계(a)에서 얻어진 겨우살이 추출물을 메탄올:물(9:1 비율, v/v) 혼합용액에 현탁하여 겨우살이 추출물 현탁액을 얻는 단계; (c) 상기 단계(b)에서 얻어진 겨우살이 추출물 현탁액을 헥산으로 용매 분획한 후 메탄올:물 혼합용액을 감압 농축하여 메탄올을 제거하여 고형물을 얻는 단계; 및 (d) 상기 단계(c)에서 얻어진 고형물을 물에 현탁한 후 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트 및 부탄올로 순차적으로 용매 분획하여 메틸렌클로라이드 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 및 부탄올 분획물을 얻는 단계를 포함하는 겨우살이 추출물 분획물의 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

상기 분획물로부터 통상적으로 사용되는 물질 분리 방법에 의하여 구조 규명된 물질은 하기 화학식 1의 비스큠네오시드 Ⅲ 및 하기 화학식 2의 호모플라보야도리닌 B인 것으로 확인되었다.

<화학식 1>

<화학식 2>

구조 규명된 비스큠네오시드 Ⅲ 및 호모플라보야도리닌 B는 5.0 mg/mL의 농도에서 양성 대조군인 아스코르브산에 비하여 각각 75.70, 81.53 %의 DPPH 라디칼 소거 활성을 나타내어 항산화 효과가 우수한 것으로 나타났고(도 5 참조), 2.5 mg/mL 농도까지 양성 대조군인 아스코르브산보다 우수한 티로시나제 억제 활성을 갖는 것으로 나타났으며, 5.0 mg/mL의 농도에서 아스코르브산에 비하여 각각 89.37, 96.18 %의 티로시나제 억제능을 나타내어 우수한 미백 효과를 갖는 것으로 나타났다(도 6 참조).

본 발명의 일 태양에 따라, 상기 화장료 조성물을 포함하는 화장품이 제공된다. 일 구현예에서, 상기 화장품은 스킨, 미스트, 마스크팩 또는 영양크림일 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 항산화 또는 미백용 화장료 조성물을 포함하는 화장품을 제공한다. 본 발명의 항산화 또는 미백용 화장료 조성물은 기초 화장품, 메이크업 화장품 및 바디케어 화장품에 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

기초 화장품이란, 세안료·메이크업 리무버·화장수·유액·미용액·페이스 크림·팩·아이케어 및 그 외 얼굴 스킨 케어용 화장품을 가리킨다. 예를 들면, 고형 비누, 세안 폼, 및 세안 파우더 등의 세안료; 클렌징 폼, 클렌징 크림, 클렌징 밀크, 클렌징 로션, 클렌징 젤, 클렌징 오일 및 클렌징 마스크 등의 메이크업 리무버; 리포솜 화장수, 유연 화장수, 수렴 화장수, 세정용 화장수 및 다층식 화장수 등의 화장수; 에몰리언트 로션, 모이스처 로션, 밀키 로션, 너리싱 로션, 너리싱 밀크, 스킨 모이스처, 모이스처 에멀젼, 마사지 로션 및 얼굴용 각질 스무저 등의 유액; 리포솜 화장수, 보습 미용액, 미백 미용액, 및 자외선 방지 미용액 등의 미용액; 에몰리언트 크림, 영양 크림, 모이스처 크림, 나이트 크림, 마사지 크림, 클렌징 크림, 메이크업 크림, 베이스 크림, 셰이빙 크림, 및 얼굴용 각질연화 크림 등의 크림; 필오프팩, 분말팩, 워싱팩, 오일팩, 및 클렌징 마스크 등의 팩; 아이세럼, 아이젤, 아이크림 등의 아이케어; 얼굴용 UV 프로텍트 에멀전, 선프로텍트, 선프로텍터, UV케어밀크, 선스크린, 선스크린 크림 및 선탠 크림 등의 UV 케어, 모이스처 젤 등의 젤, 페이스 필링, 페이스 슬리밍제 등의 그 외의 기초 화장품을 들 수 있다.

메이크업 화장품으로서는, 메이크업 베이스, 베이스 크림, 컬러 컨트롤 베이스, UV 차단 베이스 등의 화장 기초; 파우더 컨실러 및 크림·리퀴드 컨실러 등의 컨실러; 파우더 파운데이션, UV 차단 파운데이션, 크림 파운데이션, UV 차단 크림 파운데이션 등의 파운데이션; 루스파우더, 프레스토파우더, 페이스컬러, 백분 등의 페이스파우더 등을 들 수 있다.

바디케어 화장품으로서는, 예를 들면, 바디로션, 바디오일 및 바디미스트 등의 바디로션; 바디크림, 바디밀크, 바디젤 및 바디무스 등의 바디크림; 보습용 립 크림, UV케어용 립 크림 및 컬러 립크림 등의 립크림; 핸드크림 및 핸드젤 등의 핸드크림; 바디용의 UV프로텍트에멀전, 선프로텍트, 선프로텍터, UV케어밀크, 선스크린, 선스크린 크림 및 선탠크림 등의 UV케어; 제모크림, 제모무스, 탈모왁스, 잔털 탈색제 및 체모용 셰이빙크림 등의 잔털처리; 풋마사지제, 풋슬리밍제, 풋필링제, 발뒤꿈치 등의 얼굴 이외의 각질제거제, 및 에몰리언트제 등의 풋케어; 데오도란트 로션, 데오도란트 파우더, 데오도란트 스프레이, 데오도란트 스틱 등의 제한방취제; 제충 스프레이 등의 인섹트 리펠러를 들 수 있다.

일 구현예에서, 상기 화장품은 바람직하게는 스킨, 미스트, 마스크팩 또는 영양크림일 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예 및 시험예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나, 하기 실시예 및 시험예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이에 제한되는 것은 아니다.

실시예 1. 겨우살이 추출물 및 용매별 분획물의 제조

자연 건조된 겨우살이(Viscum album L. var. coloratum)(100 g, 2013년 12월 1일, 강원도 정선 채취, 기주목; 참나무)의 전초에 메탄올 500 mL를 가하고, 80 ℃에서 12시간 동안 3회 환류 추출하였다. 얻어진 메탄올 추출액을 모아 여과한 후, 감압 농축하여 메탄올 추출물 22.01 g을 얻었다.

얻어진 메탄올 추출물(22.01 g)을 메탄올:물(9:1 비율, v/v) 혼합용액(200 mL)에 현탁한 후, 헥산(200 mL)을 가하여 3회 용매 분획을 수행하였다. 얻어진 헥산 분획 용액을 감압 농축하여 짙은 녹색의 고체(2.01 g)를 얻었다. 이후 메탄올:물 혼합용액을 감압 농축하여 메탄올을 제거한 후, 물(200 mL)에 현탁시켰다. 현탁된 용액에 메틸렌클로라이드(CH₂Cl₂, 200 mL x 3), 에틸아세테이트(EtOAc, 200 mL x 3), n-부탄올(n-BuOH, 200 mL x 3)의 순으로 용매 분획을 수행하였다(도 1 참조). 얻어진 용매 분획액들을 감압 농축하여 메틸렌클로라이드 분획물(2.39 g, 고체, 짙은 녹색), 에틸아세테이트 분획물(1.24 g, 고체, 짙은 갈색), n-부탄올 분획물(5.78 g, 고체, 짙은 갈색)을 얻었다.

실시예 2. 겨우살이 용매별 분획물의 항산화 효과 평가

얻어진 겨우살이 추출물의 용매별 분획물에 대하여 항산화능 측정의 대표적 방법인 DPPH 라디칼 소거능 측정을 하기와 같이 수행하였다.

DPPH(2,2-Diphenyl-1-picryl-hydrazyl) 시약을 에탄올에 용해시킨 후, 2시간동안 교반하여 0.15 mM DPPH 용액을 제조하였다. 96-웰 플레이트에 0.15 mM DPPH 용액 150 μL와 0.1 ~ 5 mg/mL 농도로 제조한 겨우살이 분획물 시료 50 μL를 첨가한 후 암실에서 30분 동안 교반시켰다. UV분광광도계를 이용하여 532 nm에서 흡광도를 측정하였으며, DPPH 라디칼 소거능은 하기 수학식 1에 의해 계산하였고, 그 결과를 도 2에 나타내었다.

[수학식 1]

DPPH 라디칼 소거능(%) = {1-(시료 흡광도/대조물질 흡광도)}×100

도 2에 나타난 바와 같이, 겨우살이 용매별 분획물 중 에틸아세테이트 분획물이 0.1 mg/mL 농도부터 가장 우수한 DPPH 라디칼 소거능을 나타내었으며, n-부탄올 분획물도 2.5 mg/mL 농도부터는 에틸아세테이트 분획물과 유사하게 우수한 활성을 나타내었다.

실시예 3. 겨우살이 용매별 분획물의 미백 효과 평가

얻어진 겨우살이 추출물의 용매별 분획물에 대하여 미백효능 평가 시험의 대표적 방법인 티로시나제(티로시나제) 효소 활성 억제능 측정을 하기와 같이 수행하였다.

96-웰 플레이트에 0.1 M 인산염 완충액(pH 6.8) 40 μL와 5 mM L-DOPA(L-3,4-dihydroxy-L-phenylalanine) 용액 40 μL를 첨가한 후, 0.1 ~ 5.0 mg/mL의 농도로 제조한 겨우살이 분획물 시료 100 μL를 각각 첨가하였다. 그 후 티로시나제(250 U/mL) 20 μL를 첨가하여 35 ℃에서 10분간 반응시킨 다음, 475 nm에서 ELISA 리더(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA reader)로 흡광도를 측정하였다. 티로시나제 억제능은 하기 수학식 2에 의해 계산하였으며, 그 결과를 도 3에 나타내었다.

[수학식 2]

티로시나제 억제능(%) = {1-(시료 흡광도/대조물질 흡광도)} × 100

도 3에 나타난 바와 같이, 겨우살이 용매별 분획물의 티로시나제 억제 효과는 에틸아세테이트 분획물에서 가장 우수한 것으로 나타났으며, n-부탄올 분획물도 양성대조군인 아스코르브산 보다 우수한 활성을 나타내었다.

실시예 4. 겨우살이 용매별 분획물의 유효성분의 피크 분리

DPPH 라디칼 소거능과 티로시나제 억제 효과가 가장 우수한 에틸아세테이트 분획물에서 유효성분을 분리하기 위하여 하기 조건으로 TLC 및 HPLC 분석하였다.

겨우살이 에틸아세테이트 분획물을 전개용매(MeOH : MC = 1 : 5)를 이용하여 TLC(Thin layer chromatography) 분석한 후, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(open silica column chromatography)(전개용매 MeOH : MC = 1 : 20 ∼ 1 : 10 ∼ 1 : 5) 이용하여 7개의 프랙션(fraction)을 얻었다. 각 프랙션을 하기 조건(표 1)으로 HPLC로 분석하였다.

기기	YL-9100 (Younglin instrument, Korea)
컬럼	TC-C18 컬럼(250 mm X 4.6 mm, 입자 크기 5 μm, Agilent, USA)
용매	0.1 % formic acid (A), MeOH (B)
이동상 농도구배	0-20 min, 40-52% B; 20-40 min, 52-80% B; 5min, 40% B
이동상 속도	0.8 mL/min
컬럼 온도	30 ℃
검출기	UV 270 nm

HPLC 분석 결과, Rf = 0.12에 해당하는 프랙션에서 겨우살이 에틸아세테이트 분획물의 주요 성분으로 추정되는 2개 피크(peak)가 나타나는 것을 확인하였고, 그 결과를 도 4에 나타내었다.

상기에서 얻어진 겨우살이 에틸아세테이트 분획물의 주요 성분으로 추정되는 2개 피크를 하기 조건(표 2)으로 프렙-HPLC(prep-HPLC)를 이용하여 분리하였다.

기기	YL-9100 (Younglin instrument, Korea)
컬럼	Prep-C18 컬럼(21.2 cm X 4.6 mm, 입자 크기 10 μm, Agilent, USA)
용매	0.1 % formic acid (A), MeOH (B)
이동상 농도구배	0-20 min, 40-52% B; 20-40 min, 52-80% B; 5min, 40% B
이동상 속도	8.5 mL/min
검출기	UV 270 nm

실시예 5. 겨우살이 용매별 분획물의 유효성분의 구조 규명

상기 분리된 피크에 해당하는 2개 물질을 핵자기공명분광기(400 MHz FT-NMR spectrometer, Bruker Advance 400 MHz spectrometer, Germany)를 이용하여 구조규명한 결과, 하기 비스큠네오시드 Ⅲ(Viscumneoside Ⅲ) 및 호모플라보야도리닌 B(Homoflavoyadorinin B)인 것으로 확인되었다.

[비스큠네오시드 Ⅲ(Viscumneoside Ⅲ)]

¹H-NMR(400 MHz, CD₃OD) : δ 7.08 (1H, s), 6.92 (1H, d, J = 7.57 Hz), 6.80 (1H, d, J = 7.56 Hz), 6.19 (1H, d, J = 1.76 Hz), 6.16 (1H, d, J = 2.08 Hz), 5.42 (1H, d, J = 1.4 Hz), 5.37 (1H, s), 5.03 (1H, m), 3.98 (2H, dd, J = 13.41, 3.76 Hz), 3.93 (1H, s), 3.88 (3H, s, -OCH₃), 3.85 (1H, s), 3.76 (1H, d, J = 9.57 Hz), 3.64 (1H, m), 3.62 (1H, d, J = 4.96 Hz), 3.56 (2H, s), 3.46 (1H, m), 3.31 (1H, m), 3.20 (1H, m), 2.73 (1H, d, J = 4.96 Hz)

¹³C-NMR(100 MHz, CD₃OD) : δ 198.5, 166.8, 164.6, 149.1, 148.2, 130.5, 120.6, 116.1, 111.3, 110.8, 104.9, 99.8, 97.8, 96.7, 80.9, 80.7, 78.5, 75.4, 71.1, 65.9, 62.2, 56.4, 44.3

[호모플라보야도리닌 B(Homoflavoyadorinin B)]

¹H-NMR(400 MHz, DMSO-d₆) : δ 7.68 (1H, dd, J = 8.6, 2.12 Hz), 7.65 (1H, s), 7.21 (1H, d, J = 8.81 Hz), 7.09 (1H, s), 6.87 (1H, d, J = 2.2 Hz), 6.40 (1H, d, J = 2.2 Hz), 5.43 (1H, s), 5.14 (1H, d, J = 7.73 Hz), 4.06 (1H, d, J = 9.49 Hz), 3.90 (3H, s, -OCH₃), 3.88 (3H, s, -OCH₃), 3.76 (1H, s), 3.68 (1H, m), 3.59 (2H, m), 3.50 (1H, m), 3.45 (1H, m), 3.43 (1H, m), 3.28 (2H, s), 3.17 (1H, m)

¹³C-NMR(100 MHz, DMSO-d₆) : δ 182.0, 165.1, 163.4, 161.0, 157.2, 149.5, 149.0, 123.8, 119.7, 114.7, 109.9, 108.2, 104.7, 104.2, 98.0, 97.8, 92.8, 79.3, 77.1, 76.9, 75.9, 75.9, 74.6, 73.9, 69.8, 64.4, 55.9

실시예 6. 겨우살이에서 분리한 성분들의 DPPH 라디칼 소거능 측정

DPPH(2,2-Diphenyl-1-picryl-hydrazyl) 시약을 에탄올에 용해시킨 후, 2시간동안 교반하여 0.15 mM DPPH 용액을 제조하였다. 96-웰 플레이트에 0.15 mM DPPH 용액 150 μL와 0.1~5 mg/mL의 농도로 제조한 비스큠네오시드 Ⅲ 또는 호모플라보야도리닌 B 시료 50 μL를 첨가한 후 암실에서 30분 동안 교반시켰다. UV분광광도계를 이용하여 532 nm에서 흡광도를 측정하였으며, DPPH 라디칼 소거능은 하기 수학식 1에 의해 계산하였고, 그 결과를 도 5에 나타내었다.

[수학식 1]

DPPH 라디칼 소거능(%) = {1-(시료 흡광도/대조물질 흡광도)}×100

도 5에 나타난 바와 같이, 비스큠네오시드 Ⅲ 및 호모플라보야도리닌 B는 5.0 mg/mL의 농도에서 양성 대조군인 아스코르브산에 비하여 각각 75.70, 81.53 %의 DPPH 라디칼 소거 활성을 나타내어 항산화 효과가 우수한 것으로 나타났다.

실시예 7. 겨우살이에서 분리한 성분들의 티로시나제 억제 효과 측정

96-웰 플레이트에 0.1 M 인산염 완충액(pH 6.8) 40 μL와 5 mM L-DOPA 용액 40 μL를 첨가한 후 0.1 ~ 5.0 mg/mL의 농도로 제조한 비스큠네오시드 Ⅲ 또는 호모플라보야도리닌 B 시료 100 μL를 각각 첨가하였다. 그 후 티로시나제(250 U/mL) 20 μL를 첨가하여 35 ℃에서 10분간 반응시킨 다음, 475 nm에서 흡광도를 측정하였다. 티로시나제 억제능은 하기 수학식 2에 의해 계산하였으며, 그 결과를 도 6에 나타내었다.

[수학식 2]

티로시나제 억제능(%) = {1-(시료 흡광도/대조물질 흡광도)} × 100

도 6에 나타난 바와 같이, 비스큠네오시드 Ⅲ 및 호모플라보야도리닌 B는 2.5 mg/mL 농도까지 양성 대조군인 아스코르브산보다 우수한 티로시나제 억제 활성을 갖는 것으로 나타났고, 5.0 mg/mL의 농도에서 아스코르브산에 비하여 각각 89.37, 96.18 %의 티로시나제 억제능을 나타내어 우수한 미백 효과를 갖는 것으로 나타났다.

Claims (13)

1. 호모플라보야도리닌 B를 포함하는 미백용 화장료 조성물.
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7. 제1항의 화장료 조성물을 포함하는 화장품.
8. 제7항에 있어서, 스킨, 미스트, 마스크팩 및 영양크림으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화장품.
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