KR101874460B1 - 번행초 추출물을 유효성분으로 함유하는 에스트로겐 분비 저하에 의한 우울증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 번행초 추출물을 유효성분으로 함유하는 우울증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 본 발명의 번행초 추출물은 천연 유래의 물질이므로 안전하고 부작용이 거의 없으며, 갱년기 랫트 모델의 혈중 세로토닌 생성을 증가시키고, 강제수영검사에서 랫트 모델의 부동시간을 감소시켜 항우울증 효과가 우수하므로, 에스트로겐 분비 저하에 의한 우울증을 예방, 개선 또는 치료하기 위한 건강기능식품 또는 의약품에 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 번행초 추출물을 유효성분으로 함유하는 에스트로겐 분비 저하에 의한 우울증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
여성임을 상징하는 대표적인 호르몬인 에스트로겐(estrogen)은 생리, 임신 및 폐경에 이르는 여성의 일생을 조절하는 중요한 여성 호르몬이다. 에스트로겐은 여성의 난소 안에 있는 여포와 황체 그리고 태반에서 주로 분비되는 여성호르몬으로 잘 알려져 있으며, 에스트론(E1), 에스트라디올(E2), 에스트리올(E3) 등의 호르몬을 총칭한다. 이 중, 에스트라디올(E2)은 에스트로겐 중에서 가장 강력한 활성을 나타낸다. 몸속에서 사용된 에스트로겐은 간에서 배출하기 알맞은 구조로 변화된 후 소변을 통해 배출된다. 에스트로겐과 더불어 프로게스테론(progesterone)도 황체형성호르몬에 의해 조절되며, 에스트로겐과 밀접하게 연관되어 있기 때문에 에스트로겐과 프로게스테론의 적절한 균형이 중요하다.
에스트로겐은 실험 및 임상연구를 통해 기분에 영향을 줄 수 있는 것으로 인식되어 왔다(Morgan ML et al., 2005, J Clin Psychiatry, 66, 774-780). 동물연구에서 생식 호르몬들이 기분장애에 관련된 일부 신경전달물질들을 조정하는 결과가 보고되었으며(McEwen B., 2002, Recent Prog Horm Res, 57, 357-384), 폐경 여성에 난소 추출물(ovarian extract)을 투여하여 기분이 고양된다는 보고 이래 기분장애 여성에서도 에스트로겐의 잠재적 항우울효과가 관심을 끌게 되었다. 에스트로겐은 다양한 신경조절효과를 갖고 있으며, 치료불응성 우울증, 산후 우울증, 폐경기 우울증 여성들에 대한 하나의 치료적 사용으로 연구되어 왔다. 에스트로겐은 중추신경계에 광범위한 영향을 미치며, 특히 세로토닌(serotonin) 체계의 활성을 촉진한다는 증거들이 제시되고 있는 바, 세로토닌 재흡수억제제(selective serotonin reuptake inhibitor, 이하 SSRI)와 같은 항우울제에 대한 에스트로겐의 증강치료(augmentation therapy)는 임상적인 유용성을 갖는다.
또한, 에스트로겐은 뇌에서 간장 및 뼈에 이르기까지 광범위한 조직과 기관에 영향을 미치며 특히 자궁, 비뇨기, 유방, 피부, 그리고 혈관들이 유연성과 정상상태를 유지하는데 에스트로겐이 필요하다. 여성의 갱년기(climacterium)는 폐경기(menopause)라고도 하는데, 난소의 기능으로 보아 여성으로서의 성숙기에서 노년기로 이행하는 시기를 말한다. 갱년기의 연령은, 체질, 영양상태, 분만의 횟수 등에 따라 개인차가 있으나, 통계적으로 50세 전후로 본다. 평균수명의 연장으로 폐경기가 약간 늦어지는 경향이 있다. 갱년기의 시작은 에스트로겐의 양이 감소되기 시작하는 폐경주변기(perimenopause) 시기에서부터 시작되며, 폐경기(menopause) 시기에는 에스트로겐과 프로게스테론의 생성이 매우 낮고 월경이 완전히 중단되며, 월경이 완전히 중단된 약 12개월 이후부터 폐경후기(postmenopause)의 시기가 된다.
갱년기가 시작되면 난소의 기능이 저하 및 실조로 난소에서 분비되는 여성호르몬이 감소하게 되며, 이로 인한 여러 가지 증상들이 나타나게 된다. 생리주기, 생리기간, 생리량 등이 불규칙해 지고, 주로 얼굴 및 상체에서 화끈 달아오르는 안면홍조 증상이 나타나고, 땀이 많이 나고 가슴이 두근거리기도 하며, 외음부가 건조해지고 질점액 분비가 감소되는 등 생식기의 위축이 오게 되어, 소변 횟수가 늘어나거나 배뇨시 통증을 느끼기도 한다. 그 외, 현기, 이명, 고혈압, 소화기장애, 두통, 수면장애, 기억력감퇴, 인지기능장애, 기분변화, 우울증 등의 증상이 나타 날 수 있다. 또한, 폐경이 되면, 뼈에서 칼슘이 빠져나가 뼈가 약해지므로 요통이나 기타 골관계의 통증이 있을 수도 있고 쉽게 골절이 될 수 있다. 에스트로겐이 자궁 내의 근육들을 자극하여 발달시키는데 관여하기 때문에 에스트로겐 감소에 의한 자궁조직 세포의 에스트로겐 수용체(estrogen receptor)의 현저한 감소가 나타난다.
에스트로겐 수용체는 에스트라디올(17β-estradiol, E2)에 의해 활성화되며, 두 가지 종류의 에스트로겐 수용체 알파와 베타(estrogen receptor alpha, estrogen receptor beta)가 있다. 자궁에서는 에스트론 수용체 알파가 베타보다 더 중요한 역할을 한다고 밝혀져 있으며, 갱년기 때는 에스트로겐 수용체 알파의 현저한 감소가 자궁의 수축과 퇴화의 원인이 된다. 또한, 에스트로겐 부족을 상쇄하기 위해 지방조직의 지방세포로부터 새로운 에스트로겐을 생성하게 된다. 이 과정에서 더 많은 지방세포가 만들어지게 되어 복부 비만의 원인이 될 수 있다.
갱년기 증상의 종류와 증세의 정도에는 개인차가 심하여, 일상생활에 지장이 없을 정도의 가벼운 경우에서 아주 자리에 눕게 될 정도의 중증까지 다양하게 나타난다. 갱년기 여성의 약 30%가 심한 증상으로 치료를 받고 있는 것으로 알려져 있다. 치료제로는 여성호르몬 투여가 있으나 부작용에 대한 보고가 있으며, 지속적인 골밀도 감소로 인한 골다공증에 대한 치료가 필요한 경우도 있다. 한편, 갱년기 증상 완화를 위한 백수오 복합추출물, 석류농축액 등의 건강기능식품과 뼈 건강에 좋은 칼슘, 비타민 D, 이소플라본 등의 건강기능식품도 사용되고 있으나 효과는 제한적이다. 따라서, 보다 효과적인 여성 갱년기 증상 예방, 개선, 치료를 위한 약학적 제제 또는 건강기능식품의 개발이 필요하다.
한편, 번행초(Tetragonia tetragonoides)는 우리나라 제주도 및 남해 일부 해안지대에 분포하여 생육하고 있으며 세계적으로는 뉴질랜드, 중국, 일본, 남아시아, 호주, 남아메리카 해안지대 등에 자생하는 다육질의 여러해살이 풀이다. 갯(바다)상추라고도 하며 영어로는 뉴질랜드 시금치라고 부른다. 식물학적으로는 줄기와 잎이 다육질이어서 잘 부러지고, 꺾으면 희고 끈적끈적한 즙이 나오며 특히 잎은 달걀 꼴로 두꺼우면서도 무르다. 식품 영양학적으로는 비타민 A와 B2 등 비타민과 갖가지 영양이 매우 풍부하다. 또한 기능적 효능으로는 고혈압, 빈혈, 허약 체질개선, 위염, 위궤양, 위산과다, 소화불량 등 갖가지 위장병 치료 및 예방, 장염, 패혈병, 정창, 풍열목적, 암치료 효과, 당뇨 치료 효과 등이 있다고 알려져있다.
한편, 한국공개특허 제2016-0050747호는 번행초 추출물을 함유한 화장료 조성물을 개시하고 있으며, 한국등록특허 제1108885호는 항당뇨 및 혈중 콜레스테롤 저해활성을 갖는 번행초 추출물을 개시하고 있다. 하지만, 본 발명의 번행초 추출물을 유효성분으로 함유하는 에스트로겐 분비 저하에 의한 우울증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 대해 아직까지 개시된 바가 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명에서는 번행초 추출물을 유효성분으로 함유하는 에스트로겐 분비 저하에 의한 우울증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하고, 상기 유효성분인 번행초 추출물이 갱년기 랫트 모델의 혈중 세로토닌의 생성을 증가시키며, 강제수영시험에서 랫트 모델의 부동시간을 감소시키는 효과가 우수한 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 번행초(Tetragonia tetragonoides) 추출물을 유효성분으로 함유하는 에스트로겐 분비 저하에 의한 우울증의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 번행초(Tetragonia tetragonoides) 추출물을 유효성분으로 함유하는 에스트로겐 분비 저하에 의한 우울증의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 번행초 추출물은 천연 유래의 물질이므로 안전하고 부작용이 거의 없으며, 갱년기 랫트 모델의 혈중 세로토닌 생성을 증가시키고, 강제수영검사에서 랫트 모델의 부동시간을 감소시켜 항우울증 효과가 우수하므로, 에스트로겐 분비 저하에 의한 우울증을 예방, 개선 또는 치료하기 위한 건강기능식품 또는 의약품에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 번행초 추출물을 식이한 갱년기 랫트 모델(난소 적출 SD 랫트)의 혈중 세로토닌 생성량을 측정한 결과이다. CON은 정상군이며, OVX는 난소 적출술을 수행한 대조군이며, OVX + 1% TTG는 난소 적출술을 수행하고, 1% 번행초 추출물을 식이한 실험군이며, OVX + 2% TTG는 난소 적출술을 수행하고, 2% 번행초 추출물을 식이한 실험군을 나타낸 것이다. *은 정상군(CON)에 대비하여 난소 적출술을 수행한 대조군(OVX)에서 혈중 세로토닌의 생성 감소효과가 통계적으로 유의하다는 것을 의미하며, p값이 0.05 미만인 것을 의미하며, #은 난소 적출술을 수행한 대조군(OVX)에 대비하여 난소 적출술을 수행하고 1% 및 2% 번행초 추출물을 각각 식이한 실험군(OVX + 1% TTG 및 OVX + 2% TTG)에서 혈중 세로토닌의 생성 증가효과가 통계적으로 유의하다는 것을 의미하며, p값이 0.05 미만인 것을 의미한다.
도 2는 본 발명의 번행초 추출물을 식이한 갱년기 랫트 모델(난소 적출 SD 랫트)에 대한 강제수영검사(Forced swimming test)에서 부동시간을 측정한 결과이다. CON은 정상군이며, OVX는 난소 적출술을 수행한 대조군이며, OVX + 1% TTG는 난소 적출술을 수행하고, 1% 번행초 추출물을 식이한 실험군이며, OVX + 2% TTG는 난소 적출술을 수행하고, 2% 번행초 추출물을 식이한 실험군을 나타낸 것이다. *은 정상군(CON)에 대비하여 난소 적출술을 수행한 대조군(OVX)에서 부동시간 증가효과가 통계적으로 유의하다는 것을 의미하며, p값이 0.05 미만인 것을 의미하며, #은 난소 적출술을 수행한 대조군(OVX)에 대비하여 난소 적출술을 수행하고 1% 및 2% 번행초 추출물을 각각 식이한 실험군(OVX + 1% TTG 및 OVX + 2% TTG)에서 부동시간 감소효과가 통계적으로 유의하다는 것을 의미하며, p값이 0.05 미만인 것을 의미한다.
도 2는 본 발명의 번행초 추출물을 식이한 갱년기 랫트 모델(난소 적출 SD 랫트)에 대한 강제수영검사(Forced swimming test)에서 부동시간을 측정한 결과이다. CON은 정상군이며, OVX는 난소 적출술을 수행한 대조군이며, OVX + 1% TTG는 난소 적출술을 수행하고, 1% 번행초 추출물을 식이한 실험군이며, OVX + 2% TTG는 난소 적출술을 수행하고, 2% 번행초 추출물을 식이한 실험군을 나타낸 것이다. *은 정상군(CON)에 대비하여 난소 적출술을 수행한 대조군(OVX)에서 부동시간 증가효과가 통계적으로 유의하다는 것을 의미하며, p값이 0.05 미만인 것을 의미하며, #은 난소 적출술을 수행한 대조군(OVX)에 대비하여 난소 적출술을 수행하고 1% 및 2% 번행초 추출물을 각각 식이한 실험군(OVX + 1% TTG 및 OVX + 2% TTG)에서 부동시간 감소효과가 통계적으로 유의하다는 것을 의미하며, p값이 0.05 미만인 것을 의미한다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 번행초(Tetragonia tetragonoides) 추출물을 유효성분으로 함유하는 에스트로겐 분비 저하에 의한 우울증의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 번행초 추출물은 하기의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조할 수 있으나, 이에 한정하지 않는다:
(1) 번행초에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;
(2) 단계 (1)의 추출물을 여과하는 단계; 및
(3) 단계 (2)의 여과한 추출물을 감압 농축하고 건조하여 추출물을 제조하는 단계.
상기 단계 (1)에서 추출용매는 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물 중에서 선택하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 에탄올이고, 더욱더 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올이지만 이에 한정하지 않는다.
상기 제조방법에 있어서, 추출방법은 여과법, 열수 추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등의 당 업계에 공지된 모든 통상적인 방법을 이용할 수 있다. 상기 추출용매는 건조된 번행초 중량의 1~20배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 5~15배 첨가하는 것이다. 추출온도는 4 내지 50℃인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 10~100시간인 것이 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 상기 방법에 있어서, 단계 (3)의 감압농축은 진공 감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무 건조 또는 동결 건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
또한, 상기 에스트로겐과 신경전달물질인 세로토닌은 기분 또는 인지 능력의 변화에 관여하는 체내물질로 널리 알려져 있다. 또한, 에스트로겐은 중추신경계에 광범위한 영향을 미치며, 특히 Bethea CL 등(Bethea CL, et al., 2002, Front Neuroendocrinol, 23, 41-100)의 보고에 의해 세로토닌 분비와 관련된 체계에 있어 활성을 촉진하는 것으로 알려져 있다. 또한, 세로토닌 재흡수 억제제(selective serotonin reuptake inhibitor; SSRI)와 같은 항우울제에 대한 Schneider LS 등 (Schneider LS, et al., 2001, Am J Geriatr Psychiatry, 9, 393-399)의 임상 치료 사례에 있어 에스트로겐의 증강치료가 임상적으로 유용성을 가지는 것으로 보고 있다.
본 발명의 약학 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 조성물의 약학적 투여 형태는 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 번행초 추출물을 포함하는 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한 다양한 화합물 혹은 혼합물을 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 번행초 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 번행초(Tetragonia tetragonoides) 추출물을 유효성분으로 함유하는 에스트로겐 분비 저하에 의한 우울증의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.
상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함시킬 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능식품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
재료 및 방법
1.
번행초
추출물의 제조
본 발명에 사용된 번행초는 대한민국 제주도에서 채취 또는 유통품을 구입하여 사용하였으며, 번행초에 10배의 70%(v/v) 에탄올을 첨가한 후, 상온에서 48시간 동안 침출법을 이용하여 추출한 다음, 번행초 추출물을 0.4μm의 필터로 여과한 후, 진공회전농축기(rotary evaporator)를 이용하여 농축 및 동결건조하여 하기 실험에 사용하였다.
2. 실험동물
실험동물로 사용된 6주령 암컷 Sprague-Dawley(SD) 랫트는 ㈜ 오리엔트바이오에서 공급받아 사용하였다. 실험동물은 충남대학교 수의과대학의 공동동물실험실실험동물 사육시설에서 5일간 적응시킨 후, 정상군으로 고지방 식이군(CON, n=8), 대조군으로 난소가 절제되고 고지방 식이군(OVX, n=8) 및 실험군으로 난소가 절제되고 고지방 및 번행초 추출물 식이군(OVX + 1% TTG, n=8; 1%의 번행초 추출물, OVX + 2% TTG; 2%의 번행초 추출물, n=8)으로 구분하였다. 실험방법은 충남대학교 동물실험 윤리위원회의 심의(승인번호:CNU-00772)를 거쳤으며, 실험동물 사육 및 유지는 충남대학교 동물실험윤리위원회의 동물 관리 및 사용 규정에 입각하여 온도 23±1℃, 습도 50±10% 내외, 12시간 명암주기로 일정하게 유지된 사육실에서 폴리카보네이트 사육 상자에 2마리씩 넣어 사육하였다.
3. 세로토닌 측정
실험동물을 마취시키고 하대정맥(inferior vena cava) 에서 혈액을 채취한 뒤 원심 분리하여(5,000rpm, 10분) 혈청을 얻었다. 세로토닌은 효소 면역측정법을 이용하여(Abnova, Walnut, CA, USA) 제조사의 프로토콜에 따라 측정하였다.
준비된 랫트 혈청 또는 표준액을 아실화(Acylation) 시키기 위해 아실화 용액을 첨가하여 23±1℃에서 15분간 반응시킨 후 해당 실험에 사용하였다. 세로토닌 마이크로 타이터 스트립(Serotonin microtiter strip)에 아실화된 표준액 또는 혈청을 25㎕씩 분주하였고, 전체 웰에 세로토닌-항세럼(Seotonin-antiserum)을 100㎕씩 분주하였다. 이후 실온(23±1℃)의 진탕기(Shaker)에 600rpm의 조건으로 30분간 교반 시킨 후 세척을 실시하였다. 이후, Goat anti-rabbit IgG conjugated peroxiadase를 각각의 웰에 100㎕씩 분주하여 진탕기에 600rpm의 조건으로 15분간 교반 시킨 후 상층액을 버리고 세척을 실시하였다. 이후, 100㎕의 기질(substrate)을 넣고 상온에서 15분 간 반응시킨 다음, 100㎕의 반응정지 용액(stop solution)을 넣은 후, 마이크로 스펙트로 포토미터(Molecular Device, Sunnyvale, CA, USA)로 650nm에서 흡광도를 측정하였다.
4.
강제수영검사(Forced Swimming Test, FST)
강제수영검사는 번행초 추출물의 갱년기 장애에 의한 항우울 효과를 측정하기 위하여, Porsolt 등(R.D. Porsolt, et al., 1977, Arch Int Pharmacodyn Ther, 229, 327-336)의 방법을 이용하여 구속 스트레스 실험기간 종료 후 시작하였다. 실험에 사용한 수조로는 60cm×60cm×60cm 규격의 아크릴 상자에 온도 23±1℃의 물을 2/3 가량 채운 후, 실험용 랫트를 한 마리씩 수조에 넣고 총 7분 중 최초 3분은 적응시간으로 측정하지 않고, 마지막 4분 동안의 실험동물 부동상태(immobility) 시간을 측정하였다. 부동상태는 머리만을 물 위로 드러내기 위한 최소한의 움직임만 하면서 똑바로 서서 움직이지 않고 떠 있는 경우로 정의하였고, 상기 부동상태의 시간 변화를 우울 행동 개선의 척도로 삼았다.
실시예
1. 랫트 모델에서 본 발명의
번행초
추출물 처리에 따른 혈중 세로토닌의 생성 증가 효과
본 실시예 1에서는 갱년기 랫트 모델(난소 적출 랫트)의 혈중 세로토닌의 생성량을 측정하여 본 발명의 번행초 추출물의 항우울 효과를 확인하였다. 그 결과, 도 1에서 개시한 바와 같이, 난소 적출 대조군(OVX)의 경우 정상군(CON)에 비해 세로토닌의 생성이 감소하였으나, 본 발명의 번행초 추출물을 처리한 실험군(OVX + 1% TTG 및 OVX + 2% TTG)에서는 난소 적출 대조군(OVX)에 비해 세로토닌의 생성이 유의적으로 증가한 것을 확인할 수 있었다(도 1).
실시예
2. 강제수영검사(Fored swimming test)에 의한 본 발명의
번행초
추출물의 항우울 활성 확인
본 실시예 2에서는 강제수영검사에 의한 본 발명의 번행초 추출물의 항우울 활성을 확인하기 위해, Porsolt 등의 방법을 이용하여 강제수영을 하는 랫트 모델의 부동자세를 보이는 시간(부동시간)을 측정함으로써 항우울 활성을 확인하였다. 그 결과, 도 2에 개시한 바와 같이 난소 적출 대조군(OVX)은 정상군(CON)에 비해 부동시간이 현저히 증가하였으나, 본 발명의 번행초 추출물을 처리한 실험군(OVX + 1% TTG 및 OVX + 2% TTG)에서는 난소 적출 대조군(OVX)에 비해 부동시간이 통계적으로 유의하게 감소한 것을 확인할 수 있었다(도 2).
Claims (6)
- 번행초(Tetragonia tetragonoides) 추출물을 유효성분으로 함유하는 에스트로겐 분비 저하에 의한 우울증의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 번행초 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매를 이용하여 추출한 것을 특징으로 하는 에스트로겐 분비 저하에 의한 우울증의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 번행초 추출물 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 에스트로겐 분비 저하에 의한 우울증의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 캡슐제, 산제, 과립제, 정제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 및 에어로졸 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 에스트로겐 분비 저하에 의한 우울증의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 번행초(Tetragonia tetragonoides) 추출물을 유효성분으로 함유하는 에스트로겐 분비 저하에 의한 우울증의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
- 제5항에 있어서, 상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 우울증의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
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Applications Claiming Priority (1)
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| Experimental Biology and Medicine, vol. 242, pp.593-605 (2016.12.13.). |
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