KR101852443B1

KR101852443B1 - 천연 추출물을 포함하는 조성물

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Publication number: KR101852443B1
Application number: KR1020180002826A
Authority: KR
Inventors: 심진섭; 박준성; 김지연; 조가영; 최향태; 김한별; 염명훈; 조준철
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2018-01-09
Filing date: 2018-01-09
Publication date: 2018-04-27
Also published as: KR20180009367A

Abstract

본 발명은 천연 유래의 식물 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 항염증, 항산화 및/또는 부종 완화능을 가지는 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 인동, 자초, 율피 및 고삼 추출물을 유효성분으로 포함하여 항염증 효과를 가질 뿐 아니라, 항산화능을 가지므로 산화를 억제하거나 지연시키는 효과가 있어서 해독 작용에 효과가 있다. 뿐만 아니라, 본 발명의 조성물은 부종을 억제하거나 완화시키는 효과가 있어서 유용하다. 특히 본 발명의 혼합 추출물은 인동, 자초, 율피 및 고삼의 혼합에 의해 더욱 우수한 항염증, 항산화능을 가지게 되고 부종을 완화시킬 수 있다.

Description

천연 추출물을 포함하는 조성물{COMPOSITION CONTAINING NATURAL EXTRACTS}

본 발명은 천연 유래의 식물 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 항염증, 항산화 및/또는 부종 완화능을 가지는 조성물에 관한 것이다.

인간의 피부는 노화가 진행됨에 따라 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 단백질 및 생체 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 된다. 노화가 진행될수록 피부를 구성하는 물질인 콜라겐, 엘라스틴, 히알루론산, 및 당단백질의 함유량 및 배열의 변화 또는 감소하는 증상들이 나타나게 된다. 이에 따라, 자유 라디칼 및 활성 유해 산소에 의하여 피부는 산화 스트레스를 받게 되어, 피부 기질이 파괴되고 얇아지게 된다.

아울러, 현대사회에서는 불규칙한 생활, 각종 오염의 증가, 신규한 변종 균주의 발현 등으로 인하여 염증에 의한 질병 또는 상태의 위험성이 커지고 있다.

이에 본 발명자들은 인동, 자초, 율피 및 고삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물이 항염증, 항산화능을 가질 뿐 아니라, 피부에 적용시 붓기를 완화시키거나 억제시키는 것을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

대한민국 특허공개 제10-2001-0054290호

본 발명의 목적은 항염증, 항산화 및/또는 부종 완화능을 가지는 조성물을 제공하는 데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 인동, 자초, 율피 및 고삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은 인동, 자초, 율피 및 고삼 추출물을 유효성분으로 포함하여 항염증 효과를 가질 뿐 아니라, 항산화능을 가지므로 산화를 억제하거나 지연시키는 효과가 있어서 해독 작용에 효과가 있다. 뿐만 아니라, 본 발명의 조성물은 부종을 억제하거나 완화시키는 효과가 있어서 유용하다. 특히 본 발명의 혼합 추출물은 인동, 자초, 율피 및 고삼의 혼합에 의해 더욱 우수한 항염증, 항산화능을 가지게 되고 부종을 완화시킬 수 있다.

본 명세서에서 인동(忍冬)은 인동과의 인동덩굴(Lonicera japonica Thunberg) 또는 기타 동속 근연식물의 줄기와 가지를 의미한다. 인동의 꽃은 5~6월에 피고 연한 붉은 색을 띤 흰색이지만 나중에 노란색으로 변하며, 2개씩 잎겨드랑이에 달리고 향기가 난다. 화관은 입술 모양이고 길이 3∼4cm이다. 화관통은 끝에서 5개로 갈라져 뒤로 젖혀지고 겉에 털이 빽빽이 난다. 꽃 밑에는 잎처럼 생긴 포가 마주난다. 열매는 장과로서 둥글며 10∼11월에 검게 익는다. 겨울에도 곳에 따라 잎이 떨어지지 않기 때문에 인동이라고 한다.

본 명세서에서 자초(紫草)는 지치과의 여러해살이 초본식물인 지치(Lithospermum erythrorhizon)의 뿌리를 뜻하는 것이다. 자초는 혈액순환을 도와 원기회복과 입맛을 회복시킨다.

본 명세서에서 율피(栗皮)는 너도밤나무과의 갈잎큰키나무 밤나무(Csatanea crenata)의 열매의 속껍질을 뜻한다. 이다. 율피를 꿀에 개어 바르면 피부가 수축되어 주름을 펴 준다.

본 명세서에서 고삼(苦參)은 콩과의 여러해살이풀인 도둑놈의 지팡이(Sophora flavescens)의 뿌리이다. 고삼은 하초습열로 인한 이질, 대하, 음부소양증, 피부가려움증 등에 사용하며 방광열로 인하여 소변을 잘 못보고 통증이 있을 때 사용한다.

본 발명은 일 관점에서, 인동, 자초, 율피 및 고삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물에 관한 것이다. 본 명세서의 조성물은 항염증능을 가지기 때문에, 각종 균에 대한 면역반응, 각종 균의 침입에 따른 질병의 치료 및/또는 예방에 효과가 있다. 구체적으로 본 명세서의 조성물은 프로스타글란딘의 생성을 지연시키거나 억제하여 항염증능을 가지지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명은 다른 관점에서 , 인동, 자초, 율피 및 고삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 조성물에 관한 것이다. 본 명세서의 조성물은 인체 내의 알려진 산화반응의 기작을 지연시키거나 멈추게 하는 효과가 있다. 구체적으로 본 발명의 조성물은 GSTs, NQO1 및 PRDX1으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자의 발현을 유도 및/또는 촉진하여 산화를 억제하는 효과를 나타내지만 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명은 또 다른 관점에서, 인동, 자초, 율피 및 고삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 부종 완화용 조성물에 관한 것이다. 본 명세서의 조성물은 얼굴 뿐 아니라 인체 전 부위에서 생성된 부종을 완화하거나 및/또는 부종의 생성을 억제, 지연시키는 효과를 가진다. 그러므로 본 발명의 조성물은 수면 후의 부종, 장시간 활동함에 따른 하지류의 부종을 완화하는데 유용하다.

본 명세서에서 각각의 천연물의 추출은 예를 들면, 세척하고 건조된 세말화된 인동, 자초, 율피 및 고삼 추출물을 물 또는 유기용매에 넣고 추출하여 침적시킨 후 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 얻어질 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니며, 당업계에서 일반적으로 사용되는, 유기용매에 의한 추출법, 감압증류 등을 제한 없이 이용하여 얻어질 수 있다. 본 명세서의 추출물을 얻기 위하여 사용가능한 유기용매는 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트, 클로로포름 또는 이들 유기용매와 물의 혼합용매에서 선택될 수 있으며, 원료의 안전성을 고려할 때 물 또는 30~70% 농도의 에탄올을 사용하는 것이 바람직하다. 상기와 같이 용매를 이용하여 추출물을 얻은 후 당업계에 알려진 통상적인 방법으로 상온에서 냉침, 가열 및 여과하여 액상물을 얻을 수 있거나, 또는 추가적으로 상기 용매를 증발, 분무 건조 또는 동결 건조할 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 추출물은 인동 추출물, 자초 추출물, 율피 추출물, 및 고삼 추출물을 혼합하여 얻어질 수 있다. 즉,본 발명의 조성물은 인동, 자초, 율피, 고삼 각각에 대하여 추출물을 얻은 후, 이를 혼합한 혼합 추출물을 포함할 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 추출물은 인동, 자초, 율피 및 고삼의 혼합 추출물로부터 얻어질 수 있다. 즉, 본 발명의 조성물은 인동, 자초, 율피 및 고삼을 한꺼번에 추출 처리하여, 얻어지는 혼합 추출물을 포함할 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 30중량%로 함유될 수 있다. 본 발명의 추출물이 조성물 총 중랑에 대하여 0.001중량% 미만으로 함유되면 피부염증 예방 및 피부 붓기 완화 등의 효능의 향상이 미미하고, 30중량%를 초과하여 함유되면 함량 증가에 비해 효능의 증가가 미미하고 제형 안정성이 악화될 수 있으며 피부에 자극이 생길 수 있다. 상기와 같은 관점에서 본 발명의 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.005 내지 25중량%, 0.01 내지 20중량%, 0.05 내지 15중량% 또는 0.1 내지 10중량%로 함유될 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 추출물은 인동:자초:율피:고삼의 중량비가 1~10:1~10:1~10:1~10일 수 있다. 상기 추출물의 중량비가 상기 범위를 벗어날 경우, 본 발명에 따른 함량 증가에 비해 효능의 증가가 미미하고 제형 안정성이 악화될 수 있다. 상기와 같은 관점에서 본 발명의 추출물은 인동:자초:율피:고삼의 중량비가 1~9:1~9:1~9:1~9, 1~7:1~7:1~7:1~7, 1~5: 1~5: 1~5: 1~5 또는 1~3: 1~3: 1~3: 1~3일 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 피부 외용제 조성물을 포함한다.

본 발명의 조성물은 피부 외용제 조성물일 수 있고, 보다 구체적으로는 항염증용, 항노화용 및/또는 부종 완화용 피부 외용제 조성물로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 피부 외용제 조성물을 화장료의 형태로 제형화할 경우, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이 크림, 영양 크림, 마사지 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 파우더, 에센스 또는 팩 등의 형태로 제형화될 수 있으며, 그 제형이 특별히 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명에 의한 조성물은 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다. 또한, 본 발명의 조성물은 피부 개선 효과를 증가시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 함유할 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.

본 발명에 따른 조성물을 화장료의 형태로 제형화할 경우, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이 크림, 영양 크림, 마사지 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 파우더, 에센스 또는 팩 등의 형태로 제형화될 수 있으며, 그 제형이 특별히 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명에 의한 조성물은 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다. 또한, 본 발명의 조성물은 피부 개선 효과를 증가시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 함유할 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 약학적 조성물을 포함한다.

본 발명에 따른 조성물을 의약품에 적용할 경우에는, 상기 조성물을 유효성분으로 하여 상용되는 무기 또는 유기의 담체를 가하여 고체, 반고체 또는 액상의 형태로 경구 투여제 혹은 비경구 투여제로 제제화 할 수 있다.

상기 경구 투여를 위한 제재로서는 정제, 환제, 과립제, 캡슐제, 산제, 세립제, 분제, 유탁제, 시럽제, 펠렛제 등을 들 수 있다. 또한, 상기 비경구 투여를 위한 제재로는 주사제, 점적제, 연고, 로션, 스프레이, 현탁제, 유제, 좌제 등을 들 수 있다. 본 발명의 유효성분을 제제화하기 위해서는 상법에 따라서 실시하면 용이하게 제제화할 수 있으며 계면활성제, 부형제, 착색료, 향신료, 보존료, 안정제, 완충제, 현탁제, 기타 상용하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 상기 약학 조성물은 경구, 비경구, 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여될 수 있다.

또한, 상기 활성성분의 투여량은 치료 받을 대상의 연령, 성별, 체중과 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있다. 일반적인 투여량은 0.001 mg/kg/일 내지 2000 mg/kg/일, 보다 구체적으로는 0.5 mg/kg/일 내지 1500 mg/kg/일이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

[ 비교예1 ] 인동 추출물의 제조

인동 1 kg에 70% 에탄올 수용액 5ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 인동 추출물 89g을 얻었다.

[ 비교예2 ] 자초 추출물의 제조

자초 1 kg에 70% 에탄올 수용액 5ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 자초 추출물 75g을 얻었다.

[ 비교예3 ] 율피 추출물의 제조

율피 1 kg에 70% 에탄올 수용액 5ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 율피 추출물 92g을 얻었다.

[ 비교예4 ] 고삼 추출물의 제조

고삼 1 kg에 70% 에탄올 수용액 5ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 고삼 추출물 81g을 얻었다.

[ 실시예1 ] 인동 , 자초, 율피 , 고삼 혼합 (1:1:1:1) 추출물의 제조

상기 비교예 1-4에 의하여 얻어진 시판 인동, 자초, 율피, 고삼 추출물의 혼합물 1 kg(혼합비율=1:1:1:1)에 70% 에탄올 수용액 5ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 인동, 자초, 율피, 고삼 혼합 (1:1:1:1) 추출물 81g을 얻었다.

[ 실시예2 ] 인동 , 자초, 율피 , 고삼 혼합 (9:9:1:1) 추출물의 제조

상기 비교예 1-4에 의하여 얻어진 시판 인동, 자초, 율피, 고삼 추출물의 혼합물 1 kg(혼합비율=9:9:1:1)에 70% 에탄올 수용액 5ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 인동, 자초, 율피, 고삼 혼합 (9:9:1:1) 추출물 89g을 얻었다.

[ 시험예 1] 인동 , 자초, 율피 , 고삼 혼합 추출물의 항염증시험

인동, 자초, 율피, 고삼 혼합 추출물의 항염증 효과는 전기 배양된 대식세포를 이용하여 프로스타글란딘의 생성 억제 효과를 측정함으로써 평가하였다. 우선, 마우스의 복강에서 채취한 대식세포에 최종농도가 500mM이 되도록 아스피린을 첨가해 세포에 잔존하는 시클로옥시게나제[cyclooxygenase(COX)] 활성을 비가역적으로 억제하였다. 그런 다음, 세포 현탁액을 96웰 플레이트(96well plate)의 각 웰에 100㎕씩 첨가한 후 5% CO₂와 37℃ 조건의 배양기에서 2시간동안 배양하여 대식 세포를 용기 표면에 부착시켰다. 이어, 부착된 대식 세포를 PBS로 3회 세척한 후 이를 항염증시험에 사용하였다. 전기 배양된 대식세포 5x10⁴cell/㎖에 LPS(lipopolysaccharide)를 1%(w/v)로 함유하는 RPMI배지를 첨가하여 12시간 동안 배양한 후 프로스타글란딘의 생성을 유발하고, 상기 실시예1 및 실시예 2의 인동, 자초, 율피, 고삼 혼합 추출물 및, 비교예 1~4에 따른 각각의 인동, 자초, 율피, 고삼 추출물을 각각 0.5%로 정제수에 희석하고 각각 100㎕씩 처리하여 유리된 프로스타글란딘을 효소면역 분석법(ELISA)을 이용하여 정량하였다. 이때, 전기 배양된 대식세포 5x10⁴cell/㎖에 LPS(lipopolysaccharide)를 1%(w/v)로 함유하는 RPMI배지를 첨가하여 12시간 동안 배양한 후 프로스타글란딘의 생성을 유발하고, 아스피린(바이엘)을 0.1%로 정제수에 희석하고 100㎕ 처리 (비교예 5)하여 유리된 프로스타글란딘을 효소면역 분석법(ELISA)을 이용하여 정량하여 양성 대조군으로 이용하였다. 추출물의 프로스타글란딘의 생성억제 활성은 LPS를 처리한 군과 처리하지 않은 군에서 각각 생성된 프로스타글란딘의 차이를 100%로 설정하였고, LPS와 각각의 시료를 함께 처리하여 감소된 프로스타글란딘의 백분율을 하기 표 1에 나타내었다.

프로스타글란딘의 생성억제효과

Blank	100%
아스피린 처리군 (비교예5 )	25%
인동, 자초, 율피, 고삼혼합 추출물 (실시예1)	46%
인동, 자초, 율피, 고삼혼합 추출물 (실시예2)	47%
인동 추출물 (비교예 1)	19%
자초 추출물 (비교예 2)	22%
율피 추출물 (비교예 3)	15%
고삼 추출물 (비교예 4)	24%

본 발명에 의한 인동, 자초, 율피, 고삼 혼합 추출물을 함유한 실시예 1 또는 실시예 2는 인동, 자초, 율피, 고삼 추출물 각각을 함유한 비교예 1-4보다 200~300% 이상 향상된 항염증 효과를 보이며, 특히 기존에 시판되는 항염증제인 아스피린 (비교예 5)보다 약200%의 증가된 효과를 보이는 것으로 확인되었다. 특히, 비교예 1-4는 아스피린보다 낮은 수준의 항염증 효과를 보이는 것으로 관찰된 반면, 실시예 1 또는 실시예 2의 혼합 추출물은 아스피린보다 우수한 항염증 효과를 보이는 것으로 확인되었으므로, 본 발명은 인동, 자초, 율피 및 고삼의 혼합에 의하여 우수한 효과를 가지는 것을 알 수 있다.

[ 시험예 2] 항산화 유도 효과

인간의 각질형성 세포인 HaCaT 세포는 한국 세포주은행(Korean Cell Line Bank;Seoul, Korea)에서 분양받아 사용하였다. HaCaT 세포를 10% (v/v) FBS, 페니실린 100U/ml 및 스트렙토마이신 100㎍/ml를 포함하는 DMEM 배지에 주입하고 37℃, 5% CO₂ 공급조건을 갖춘 동물세포배양기에서 배양하였다. 웰 당 1.5×10⁶농도로 준비된 HaCaT 세포에 FBS가 포함되지 않은 배지로 3시간 동안 적응시켰다. 이후 실시예 1 및 실시예 2의 추출물을 각각 10 ppm 농도로 2시간 동안 전처리하고 1㎍/ml 농도로 LPS를 첨가하여 8시간 동안 추가 배양하였다. 이때, 각각의 비교예를 10 ppm 농도로 2시간 동안 전처리하고 1㎍/ml 농도로 LPS를 첨가하여 8시간 동안 추가 배양하여 대조군으로 사용하였다. 또한 상처를 낸 세포의 무처리군 역시 대조군으로 사용하였다. 총 RNA는 TRIzolTM(GIBCO BRL, MD, USA)을 사용하여 추출하였고 -80℃에서 보관하였다.

총 RNA 1㎍을 50mM 트리스-HCl(Tris-HCl, pH 8.3), 75mM KCl, 3mM MgCl2, 0.1M DTT, 10mM dNTP 및 40 유닛/㎕ RNase 저해제가 함유된 역전사 반응 완충액 25㎕에 넣고, 0.5㎍/㎕ 올리고(dT)16의 프라이머와 200 유닛 수퍼스크립트 II[SuperScript II, 집코비알엘(GiboBRL)]의 역전사 중합효소를 첨가하여 42℃에서 1시간 반응시킨 다음 역전사 반응 용액 2.5㎕를 엠플리택(AmpliTaq) DNA 중합효소[0.04U, 퍼킨 엘멀, 쉘튼, 씨티(Perkin Elmer, Shelton, CT)], 50mM 트리스(pH 8.3), 0.25mg/ml 우혈청알부민, 3mM MgCl2, 0.25mM dNTPs, SYBR 그린 I의 1/50,000 희석액[몰레큘라 프로브, 유진, 오알(Molecular Probes, Eugene, OR)]이 함유된 PCR 반응 완충액 50ℓ에 섞고, 10μM의 프라이머를 첨가하여 94℃에서 30초간 변성, 53℃에서 30초간 어닐링 및 72℃에서 1분간 확장하는 사이클을 30회 수행하였다.

상대적인 mRNA 레벨은 아이사이클러(ICycler) 소프트웨어를 이용하여 SYBR 그린 I 형광 변화를 측정함으로써 분석하였다. 각각의 프라이머는 해독작용을 가진 물질을 분석하여 발행된 SCI급 논문들을 토대로 제작하였으며 각각의 염기서열은 하기 표 1에 나타내었다. 내부 표준물질로 GAPDH(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)를 사용하여 유전자의 정량적 발현 수준을 보정하였다.

PCR에 사용된 프라이머 서열

유전자/NCBI Gene ID	프라이머 서열 서열	번호	증폭 산물 크기 (bp)	PCR 반응온도(℃)
유전자/NCBI Gene ID	프라이머 서열 서열	번호	증폭 산물 크기 (bp)	변성	어닐링	확장
GAPDH/ 2597	5'-ATC CCA TCA CCA TCT TCC AG-3'	1	579	94	58	72
GAPDH/ 2597	5'-CCT GCT TCA CCA CCT TCT TG -3'	2
NQO1/ 1728	5'-TGA AGG ACC CTG CGA ACT TTC-3'	11	185	95	61	70
NQO1/ 1728	5'-GAA CAC TCG CTC AAA CCA GC-3'	12
GSTP1/ 2950	5'-AGG ACC TCC GCT GCA AAT AC-3'	13	105	95	60	70
GSTP1/ 2950	5'-GGG TCT CAA AAG GCT TCA GTT G-3'	14
PRDX1/ 5052	5'-CGG AGA TCA TTG CTT TCA GTG A-3'	15	113	95	60	70
PRDX1/ 5052	5'-AGG TGT ATT GAC CCA TGC TAG AT-3'	16

GSTs, NQO1 및 PRDX1와 같은 해독 유전자의 발현은 산화적 손상으로부터의 세포 보호 작용을 유도한다고 보고되었다(Xie C, Lovell MA, Xiong S, Kindy MS, Guo J, Xie J, Amaranth V, Montine TJ, Markesbery WR. Expression of glutathione-S-transferase isozyme in the SY5Y neuroblastoma cell line increases resistance to oxidative stress. Free Radic Biol Med. 2001 Jul;31(1):73-81; Liu Y, Kern JT, Walker JR, Johnson JA, Schultz PG, Luesch H. A genomic screen for activators of the antioxidant response element. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007 Mar; 104(12):5205-10; Carcinogenesis. 2000 May;21(5):1013-6. Induction of murine intestinal and hepatic peroxiredoxin MSP23 by dietary butylated hydroxyanisole. Ishii T, Itoh K, Akasaka J, Yanagawa T, Takahashi S, Yoshida H, Bannai S, Yamamoto M). 표 3은 비교예에 따른 인동, 자초, 율피 및 고삼 단독 추출물 및 실시예에 따라 이들을 1:1:1:1의 중량비로 혼합한 복합 추출물에 의한, GSTs, NQO1 및 PRDX1 유전자의 발현 유도 효과를 측정한 결과(상대값Fold)이다.

실험예	NQO1	GSTP1	PRDX1
무처리	1	1	1
상처유도	0.8	0.5	0.6
인동, 자초, 율피, 고삼 혼합 추출물 (실시예1)	2.7	3.5	2.8
인동, 자초, 율피, 고삼 혼합 추출물 (실시예2)	2.9	3.4	2.7
인동 추출물 (비교예 1)	1.5	1.8	1.9
자초 추출물 (비교예 2)	1.3	1.4	1.5
율피 추출물 (비교예 3)	1.1	1.7	1.7
고삼 추출물 (비교예 4)	1.3	2.0	1.3

표 3에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 1 또는 실시예 2의 혼합 추출물은 각각의 추출물만을 포함하는 비교예에 비해, 항산화능을 가지는 유전자를 다발현시키는 것으로 관찰되었다. 특히, 실시예 1 또는 실시예 2의 혼합 추출물은 GSTs, NQO1 및 PRDX1 유전자의 발현을 비교예보다 200~300%로 향상시키는 것으로 확인되는 바, 본 발명은 인동, 자초, 율피, 고삼의 혼합에 의해 우수한 효과를 가짐을 알 수 있다.

[ 시험예 3]

[ 시험예 3-1] 붓기 개선을 위한 화장료 조성물의 제조

하기 표 4에 나타낸 함량대로 크림상의 에멀젼인 비교예 6 및 실시예 3-4를 제조하였다.

먼저, 원료 1~7로 이루어지는 유상파트를 별도 용기에 넣고 70℃로 가열 용해시킨 후 균질화기를 사용하여 분산시켜 친유형 혼합물을 제조하였다. 수상파트(원료 8~9) 중에서 9번을 정제수에 투입하여 고르게 분산하면서 75℃로 가열 용해하면서 수화시키고 여기에 친유형 혼합물을 첨가하고 균질화기를 이용하여 70℃에서 수중유형으로 4~5분간 유화를 일으켰다. 여기에 인동, 자초, 율피, 고삼 혼합 추출물 및 기타 점증제와 적당량의 향을 첨가하여 3분간 균질화기를 이용하여 혼합하였다. 탈기 장치를 이용하여 에멀젼에 있는 기포를 제거하고 에멀젼을 기밀 용기에 채우고 냉각기(Cooling Unit)를 사용하여 실온으로 냉각시켰다.

NO	배합성분	비교예6	실시예3	실시예4
1	세테아릴알코올	0.4	0.4	0.4
2	글리세릴스테아레이트	1	1	1
3	C14-22알코올/C12-20알킬글루코사이드	1.2	1.2	1.2
4	스테아릭애씨드	1	1	1
5	글리세릴스테아레이트/피이지-100스테아레이트	0.5	0.5	0.5
6	스쿠알란	7	7	7
7	디메치콘	1	1	1
8	정제수	to 100	to 100	to 100
9	글리세린(농글리세린)	7	7	7
10	인동,자초,율피,고삼 혼합 추출물 (실시예 1)	0	5	0
11	인동,자초,율피,고삼 혼합 추출물 (실시예 2)	0	0	5
11	기타 점증제, 중화제	적량	적량	적량
12	방부제, 향	적량	적량	적량

[ 시험예 3-2] 얼굴 붓기 개선 효과 측정

상기 비교예 6 및 실시예 3-4를 이용하여 얼굴 붓기 개선 효과를 확인하였다. 30대 여성 40명을 20명씩 2개조로 나누어 한 조는 비교예 6과 실시예 3을, 다른 한 조는 비교예 6과 실시예 4를 사용하도록 하였으며, 2주 동안 매일 아침, 저녁으로 얼굴을 반씩 나누어 각각 비교예와 실시예의 크림을 바르게 하였다. 피부의 부피를 측정할 수 있는 PRIMOS Body 기기를 사용하여 사용 전과 2주 사용 후 피부의 부피를 측정하고, 초기상태 대비 피부 부피차이를 계산하여 피부 붓기의 개선 효과를 확인하였다. 결과는 하기 표 5에 나타내었다.

	얼굴 부피 감소 (붓기 개선) 효과 (ml)
비교예6	1.5
실시예3	8.4
실시예4	8.2

본 발명에 따른 실시예 3 또는 실시예 4의 혼합 추출물은 비교예 6과 대비하여5배 이상의 부종 완화 효과가 있는 것을 확인할 수 있었다. 따라서 본 발명의 혼합 추출물은 신체에 생성된 부종을 완화시키거나 부종의 생성을 억제하는 효과가 있다.

본 발명에 의한 콩 추출물 함유 조성물은 하기와 같이 여러 가지 제형으로 응용 가능하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.

[제제예 1] 정제

인동,자초,율피,고삼 혼합 추출물 150 mg, 포도당 100 mg, 홍삼추출물 50 mg, 전분 96 mg 및 마그네슘 스테아레이트 4 mg을 혼합하고 30% 에탄올을 40 mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하고 타정기를 이용하여 정제로 타정하였다.

[제제예 2] 과립제

인동,자초,율피,고삼 혼합 추출물 150 mg, 포도당 100 mg, 홍삼추출물 50 mg 및 전분 600 mg을 혼합하고 30% 에탄올을 100 mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 다음 포에 충진하였다. 내용물의 최종 중량은 1 g으로 하였다.

[제형예 1] 로션

배합성분	중량%
인동,자초,율피,고삼 혼합 추출물	3.00
L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염	1.00
수용성 콜라겐 (1% 수용액)	1.00
시트르산나트륨	0.10
시트르산	0.05
1,3-부틸렌글리콜	3.00
정제수	to 100

[제형예 2] 팩

배합성분	중량%
인동,자초,율피,고삼 혼합 추출물	5.00
폴리비닐알코올	13.00
L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염	1.00
라우로일히드록시프롤린	1.00
수용성 콜라겐 (1% 수용액)	2.00
1,3-부틸렌글리콜	3.00
에탄올	5.00
정제수	to 100

[제형예 3] 미용액

배합성분	중량%
인동,자초,율피,고삼 혼합 추출물	2.00
히드록시에틸렌셀룰로오스 (2% 수용액)	12.00
크산탄검 (2% 수용액)	2.00
1,3-부틸렌글리콜	6.00
진한 글리세린	4.00
히알루론산나트륨 (1% 수용액)	5.00
정제수	to 100

[제형예 4] 연고

배합 성분	함량(중량%)
인동,자초,율피,고삼 혼합 추출물	0.1
글리세린	8.0
부틸렌글리콜	4.0
유동파라핀	15.0
베타글루칸	7.0
카보머	0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	3.0
스쿠알란	1.0
세테아릴 글루코사이드	1.5
소르비탄 스테아레이트	0.4
세테아릴 알코올	1.0
밀납	4.0
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

인동, 자초, 율피 및 고삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 부종 완화용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 추출물은 인동 추출물, 자초 추출물, 율피 추출물, 및 고삼 추출물을 혼합하여 얻어지는, 조성물.
제1항에 있어서, 상기 추출물은 인동, 자초, 율피 및 고삼의 혼합 추출물로부터 얻어지는, 조성물.
제1항에 있어서, 상기 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 30중량%로 함유되는, 조성물.
제1항에 있어서, 상기 추출물은 인동:자초:율피:고삼의 중량비가 1~10:1~10:1~10:1~10인, 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 외용제 조성물인, 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물인, 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 약학적 조성물인, 조성물.