KR101827816B1 - 항균 및 항진균 활성을 갖는 마스토파란 mp-v1 펩타이드 및 이의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항균, 및 항진균 활성을 갖는 마스토파란 MP-V1 펩타이드 및 이의 용도에 관한 것이다.
본 발명에 따른 펩타이드는 우수한 항균 및 항진균 활성을 보유하여 이를 이용한 약학적 조성물, 화장료 조성물, 농약, 사료 보존용 방부제 등의 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

항균 및 항진균 활성을 갖는 마스토파란 MP-V1 펩타이드 및 이의 용도{Peptide having antimicrobial and antifungal activity and uses thereof}

본 발명은 항균 및 항진균 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 신규한 펩타이드 마스토파란 MP-V1 및 이를 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 조성물에 관한 것이다.

생물체의 항상성(homeostasis)을 유지하기 위한 과정에서 중요한 역할을 담당하고 있는 물질들 중 일부가 각종 생물체 유래의 생리 활성 물질이다. 지금까지 수많은 생리 활성 물질에 대해 많은 연구가 진행되고 있으며, 그 중, 항균 및 항암 펩타이드의 연구는 생명과학 및 의학 분야에서 매우 중요한 영역이다.

모든 생명체는 생존을 위하여 항균 물질을 생산하는 것으로 알려져 있는데, 각종 생물체에서 분리된 항균 펩타이드는 박테리아, 곰팡이 및 바이러스에 이르기까지 다양하게 작용하는 것으로 알려져 있고, 숙주 방어 및 선천적 면역계에 있어서 중요한 역할을 담당하는 것으로 알려져 있다. 생물은 항균 펩타이드를 자체적으로 생산하는데(Bevins et al., Ann. Rev. Biochem., 59, 395-414, 1990), 대략 10 내지 40 개의 아미노산으로 이루어진 작은 펩티드를 형성하며, 구조에 따라 크게 세 개의 그룹으로 나눌 수 있다. 첫 번째는 시스테인이 풍부한(cysteine-rich) β-시트(sheet) 펩타이드 분자이고, 두 번째는 α-헬릭스 구조의 양친화성 펩타이드 분자이며, 세 번째는 프롤린이 풍부한(proline-rich) 펩타이드 분자이다. 이러한 항균 펩타이드들은 아미노산 서열에 따라 다양한 구조를 갖는데, 이들 구조 중 가장 흔한 것은 곤충에서 발견된 항균 펩타이드인 세크로핀(cecropin)과 같이 시스테인(cysteine) 잔기가 없고 양친화성 알파 나선형을 형성하는 구조이다. 이와 같이 생물체에서 분리된 펩타이드의 항균활성에 대해서 많은 연구가 이루어졌으며, 생물체에서 분리된 펩타이드를 이용해 항균제를 개발하려는 연구들이 많이 시도되고 있다.

한편, 곤충 유래 유용 유전자들이 산업적으로 실용화되고 국내외 관련분야에서 많은 주목을 받으면서, 곤충을 이용한 산업의 현황 및 가능성에 대해서도 기대가 고조되고 있다. 또한, 유전자원의 확보 및 생물소재 개발이라는 산업적, 경제적 측면에서 종 다양성이 매우 풍부한 곤충을 유용생물자원으로 인식하고 활용하고자 선진 각국을 중심으로 곤충자원 확보경쟁이 국가 전략적 차원에서 날로 치열해지고 있다.

최근의 연구는 전염성 질병에 대한 치료 도구로 사용하기 위해 새로운 항균 펩타이드(antimicrobial peptides, AMPs)의 발견과 개선이 강조되고 있으며, 절지동물(Arthropod)을 포함한 곤충의 독액(venom)은 생리활성물질, 특히 신경독성 물질의 풍부한 보고로서 최근 많은 주목을 받고 있다. 벌의 독액으로부터 분리된 수많은 독소들은 이온 채널(ion channel)의 작용기작과 수용체(receptor) 기능 규명 등의 신경기능연구의 수단이 되었고, 신경병리학적 장애의 치료를 위한 연구에 이용되어 왔다.

특히, 절지동물의 독액으로부터 분리 동정된 생리활성 펩타이드는 항생제 내성균을 제어할 수 있는 신규 항생 활성인자로 이용할 수 있을 것으로 주목받고 있다.

이러한 배경 하에서, 본 발명자들은 항균 및 항진균 활성을 갖는 신규 펩타이드를 찾기 위해 예의 노력한 결과, 땅벌의 독액에서 분리된 신규 펩타이드 마스토파란 MP-V1이 매우 우수한 항균 및 항진균 활성이 있어 항균제 및 항진균제로 유용하게 활용할 수 있음을 확인하고, 본　발명을 완성하게 되었다.

특허공개 제10-1999-0039050호, 특허등록 제10-1006321호, 및 특허공개 제10-2012-0062328호

따라서, 본 발명의 주된 목적은 항균 및 항진균 활성을 갖는 마스토파란 MP-V1 펩타이드를 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 상기 마스토파란 MP-V1 펩타이드를 이용한 항균 및 항진균 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명 및 청구범위에 의해 보다 명확하게 된다.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 제공한다.

본 발명자들은 신규 항균제나 항암제의 개발을 위해 곤충류의 독액에 존재하는 항균 펩타이드(antimicrobial peptides , AMPs)의 발현 유전체와 단백질체를 수년간 조사 분석하였고, 그 결과 한국 자생 땅벌의 독선 발현 전체 발현 유전체와 단백체를 분석하여 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드의 기능성을 검증하였다.

본 발명에서 용어, “펩타이드(peptide)”란 아미드 결합(또는 펩타이드 결합)으로 연결된 아미노산으로 이루어진 폴리머를 의미한다. 본 발명의 목적상, 유해 균주에 대해 높은 항균력 및 항진균력을 나타내는 펩타이드를 의미한다. 본 발명의 펩타이드 구조는 α 헬릭스 구조를 갖는 것이 특징이다. 본 발명의 펩타이드는 아미노산 서열이 "INWKKIKSIIKAAMN"의 15개 아미노산으로 구성된 서열번호 1로 나타내는 마스토파란 MP-V1 펩타이드이다.

일반적으로 마스토파란은 항균활성에 대한 공통적인 생체물리학적인 특징을 공유한다. 그들은 전체적으로 네트 양전하(a net positive charge)를 갖고, 이러한 양전하는 미생물의 표면에 존재하는 음전하를 정전기적으로 잡아당기는 역할을 매개한다. 또한, 마스토파란은 양친성(amphipathic)의 α-헬릭스 구조를 형성하며, 그 결과 미생물 막 표면의 소수성 부위에 위치한 소수성 잔기에 접촉하게 된다.

막 과의 상호 작용 중에 마스토파란은 카펫 모델, 도넛(toroidal) 모델, 또는 통-막대(barrel-stave) 모델로 알려진 메카니즘을 통하여 막의 붕괴를 일으키는 것으로 추정되고 있으며, 최근에, 질량 분석 연구는 카펫 모델을 통해 마스토파란이 멤브레인을 교란한다는 가설을 강력하게 지지하고 있다.

특히, 막과의 상호 작용 중에, 마스토파란은 양친성(amphipathicity)을 최적화하기 위해 α-헬릭스 구조를 형성하며, 에너지 상태가 더 선호되는 구조로 변화하기 위해 펩타이드의 중간 부위의 구조가 변화하게 되고, 이를 통해 미생물의 지질층 이중막 구조를 불안정하게 한다. 반면, 통상적으로 마스토파란은 수용액 조건하에서는 랜덤 코일드 체일을 형성한다.

기존에 알려진 다른 마스토파란에 대한 연구들과 비교해 보면, 본 발명의 마스토파란 MP -V1 펩타이드는 다른 마스토파란에 비해 현저히 개선된 우수한 항균 활동을 나타낸다.

특히, ProtParam(http://web.expasy.org/protparam/) 프로그램을 통한 본 발명의 마스토파란 MP -V1의 극성(hydropathicity)(GRAVY) 계산의 평균은 본 발명의 마스토파란 MP-V1이 종래 알려진 다른 마스토파란과 비교하여 좀 더 낮은 소수성(hydrophobicity)을 갖는다는 것이 밝혀졌고, 이러한 낮은 소수성으로 인하여 미생물의 지질 막에 친화력이 더욱 증가할 것으로 예상된다.

또한, 본 발명의 마스토파란 MP-V1 펩타이드는 14개의 아미노산으로 구성된 전형적인 마스토파란들과 명백하게 구별되게, 부가적으로 15번째 아미노산으로 아스파라긴(asparagine)을 포함하고 있다. 본 발명의 마스토파란 MP-V1의 15번째 아미노산인 아스파라긴은 그 사이드 체인의 아미드 그룹이 펩타이드 골격과 상호작용하는 수소결합을 형성할 수 있기 때문에, 헬릭스 구조를 안정화하는 C-말단의 캡핑 역할을 수행하며, 이를 통해 유해 병원균의 억제 활성을 증가시킨다. 즉, 본 발명의 마스토파란에 존재하는 C-말단의 아미드 캡핑은 α-헬릭스 구조의 안정화를 촉진시키며, 마스토파란이 동물 및 박테리아 세포막에 강력하게 매립(embodiment) 되는 현상을 이끌어낸다.

본 연구진들은 C-말단의 아미드 그룹 없이 산성의 C-말단을 포함하는 합성 마스토파란의 CD 스펙트럼과 본 발명의 마스토파란을 비교한 결과, 본 발명의 마스토파란 MP-V1에서는 C-말단의 아미드 캡핑 구조로 인하여 α-헬릭스 구조를 안정화가 이루어지고, 8mM의 SDS 및 40% TFE(도 1c 및 표 1)와 같은 미생물의 막 유사 환경에서 보다 안정적인 헬릭스 구조를 형성함으로써, 다른 통상의 마스토파란보다 높은 항균 활성을 갖는 것을 증명하였다(도 1C, 도 3 및 표 1 참조).

또한, 본 발명의 마스토파란 MP-V1 펩타이드의 높은 항균활성은 7번째 아미노산인 라이신에 일정부분 기인한다. 일반적으로, 전형적인 마스토파란은 펩타이드의 중간에 소수성 아미노산을 갖고, 미생물 막 표면의 소수성 부위에 매립(embodiment)되어 막의 붕괴를 일으킨다. 이러한 통상적인 마스토파란과는 달리 본 발명의 마스토파란 MP-V1은 전하를 갖는 라이신의 사이드 체인 잔기가 미생물 막의 소수성 부분에 삽입되고, 이를 통해 마스토파란 MP-V1 펩타이드의 중간 부분에서 구조적 변화가 빈번하게 발생되며, 이를 통해 병원성 유해 미생물 막의 붕괴가 촉진된다.

본 발명에서, 상기 펩타이드는 항균, 및 항진균 활성을 나타내는 것을 특징으로 한다.

상기 펩타이드는 구체적으로 그람 양성균, 그람 음성균 및 항생제 내성 균주에 대하여 우수한 항균 활성을 갖고, 보다 구체적으로 스태필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 칸디다 알비칸스(Candida albicans) 및 보트리티스 시네레아(Botrytis Cinerea) 균에 대하여 항균 활성을 갖는 것이나 이에 한정되는 것은 아니다.

한편, 본 발명의 펩타이드는 효과적으로 세포 내로 들어가기 위해 내재화 서열 혹은 단백질 변환 도메인에 연결될 수 있다.

최근의 연구 보고에 의하면 다양한 세포 내재화 서열, 예를 들어, HIV 바이러스의 TAT 전이활성 도메인, 안테나페디아(antennapedia) 등을 원형질막을 가로질러 수송할 수 있는 트랜스포탄(transportan)이 알려져 있다. 또한, 폴리아르기닌은 원형질막을 가로질러 펩타이드와 단백질을 훨씬 더 효율적으로 수송함으로써 펩타이드를 세포 내로 수송하는 매력적인 도구로 알려져 있다.

따라서, 본 발명의 펩타이드는 세포 내재화 수송물질 또는 서열을 포함할 수 있다. 세포 내재화 서열은 공지되어 있거나 새롭게 당해 기술 분야에서 발견된 임의의 내재화 서열, 또는 그것의 보존성 변이체일 수 있다. 세포내재화 수송물질 및 서열의 비-제한적인 예로는 폴리아르기닌(예컨대 R9), 안테나페디아 서열, TAT, HIVTat, 페네트라틴(Penetratin), Antp-3A(Antp 돌연변이체), Buforin II, 트랜스포탄, MAP(모델 양친매성 펩티드), KFGF, Ku70, 프리온, pVEC, Pep-1, SynB1, Pep-7, HN-1, BGSC(비스-구아니디니움-스퍼미딘-콜레스테롤) 및 BGTC(비스-구아니디니움-트렌-콜레스테롤)가 포함된다.

추가적으로, 본 발명의 펩타이드는 표적화 서열, 캡핑 모티브(capping motif), 태그(tag), 표지된 잔기, 반감기 또는 펩타이드의 안정성을 증가시키기 위한 특정 목적으로 고안된 추가의 아미노산 서열도 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 펩타이드는 이펙터(effectors), 약물, 프로드럭, 독소, 펩타이드, 전달 분자 등의 커플링 파트너와 연결될 수 있다.

또한, 본 발명의 펩타이드는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 제조될 수 있다. 구체적으로 산을 첨가함으로써 염을 형성할 수 있고, 예를 들어 무기산(예: 염산, 히드로브롬산, 인산, 질산, 황산 등), 유기 카르복실산(예: 아세트산, 트리플루오로아세트산과 같은 할로 아세트산, 프로피온산, 말레산, 숙신산, 말산, 시트르산, 타르타르산, 살리실산), 및 산성 당(글루쿠론산, 갈락투론산, 글루콘산, 아스코르브산), 산성 폴리사카리드(예: 히알우론산, 콘드로이틴 술페이트, 아르기닌산), 콘드로이틴 설페이트와 같은 술폰산 당 에스테르를 포함하는 유기 술폰산(예: 메탄, 술폰산, p-톨루엔 술폰산) 등을 첨가하여 염을 형성할 수 있다.

본 발명의 펩타이드는 당 분야에 널리 공지된 다양한 방법으로 획득할 수 있다. 상세하게는 시험관 내에서 합성하는 방법, 및 무세포 단백질 합성법 등과 같은 화학적 합성 또는 단백질 발현 시스템을 이용한 유전공학적 방법 등으로 제조될 수 있으나, 하기 펩타이드의 제조방법을 통해 기술하는 바와 같이 화학적 합성 방법을 이용하여 제조하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 펩타이드는 게놈 정보를 통해 얻어진 마스토파란 단백질에서 유래된 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열 또는 이를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 이용하여 유전공학적 방법을 통해 생산되어질 수 있다.

본 발명에서 "발현벡터"란 적당한 숙주세포에서 목적 펩타이드를 발현할 수 있는 재조합 벡터로서, 유전자 삽입물이 발현되도록 작동하게 연결된 필수적인 조절 요소를 포함하는 유전자 제작물을 말한다. 본 발명의 발현벡터는 적합한 발현벡터가 일반적으로 가지고 있는 요소로서 프로모터, 오퍼레이터, 개시코돈 같은 발현조절 요소들을 포함한다. 개시 코돈 및 종결 코돈은 일반적으로 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열의 일부로 간주되며, 유전자 제작물이 투여되었을 때 개체에서 반드시 작용을 나타내야 하며 코딩 서열과 인프레임(in frame)에 있어야 한다. 벡터의 프로모터는 구성적 또는 유도성일 수 있다.

또한, 세포 배양액으로부터 단백질의 분리를 촉진하기 위하여 융합 폴리펩타이드의 배출을 위한 시그널 서열을 포함할 수 있다. 특이적인 개시 시그널은 또한 삽입된 핵산 서열의 효율적인 번역에 필요할 수도 있다. 이들 시그널은 ATG 개시코돈 및 인접한 서열들을 포함한다. 어떤 경우에는, ATG 개시 코돈을 포함할 수 있는 외인성 번역 조절 시그널이 제공되어야 한다. 이들 외인성 번역 조절 시그널들 및 개시 코돈들은 다양한 천연 및 합성 공급원일 수 있다. 발현 효율은 적당한 전사 또는 번역 강화 인자의 도입에 의하여 증가될 수 있다.

발현벡터는 통상의 모든 발현벡터를 다 사용할 수 있다. 예를 들어, 플라스미드 DNA, 파아지 DNA 등이 사용될 수 있다. 플라스미드 DNA의 구체적인 예로는 pUC18, pIDTSAMRT-AMP 같은 상업적인 플라스미드를 포함한다. 본 발명에 사용될 수 있는 플라스미드의 다른 예로는 대장균 유래 플라스미드(pYG601BR322, pBR325, pUC118 및 pUC119), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)-유래 플라스미드(pUB110 및 pTP5) 및 효모-유래 플라스미드(YEp13, YEp24 및 YCp50)가 있다. 파아지 DNA의 구체적인 예로는 λ-파아지(Charon4A, Charon21A, EMBL3, EMBL4, λgt10, λgt11 및 λZAP)가 있다. 또한, 리트로바이러스(retrovirus), 아데노바이러스(adenovirus) 또는 백시니아 바이러스(vaccinia virus)와 같은 동물 바이러스, 배큘로바이러스(baculovirus)와 같은 곤충 바이러스가 또한 사용될 수 있다. 이러한 발현벡터는 숙주 세포에 따라서 단백질의 발현량과 수식 등이 다르게 나타나므로, 목적에 가장 적합한 숙주세포를 선택하여 사용하면 된다.

또한, 본 발명에서 용어, "형질전환"은 상기 뉴클레오타이드 절편이 숙주유기체의 게놈 안으로 이동하여 목적하는 펩타이드를 발현할 수 있도록, 유전적으로 안정한 유전을 일으키는 것을 말한다.

본 발명의 형질전환 방법은 임의의 형질전환 방법이 사용될 수 있으며, 당업계의 통상적인 방법에 따라 용이하게 수행할 수 있다. 일반적으로 형질전환 방법에는 CaCl₂ 침전법, CaCl₂ 방법에 DMSO(dimethyl sulfoxide)라는 환원물질을 사용함으로써 효율을 높인 Hanahan 방법, 전기천공법(electroporation), 인산칼슘 침전법, 원형질 융합법, 실리콘 카바이드 섬유를 이용한 교반법, 아그로박테리아 매개된 형질전환법, PEG를 이용한 형질전환법, 덱스트란 설페이트, 리포펙타민 및 건조/억제 매개된 형질전환 방법 등이 있다.

숙주는 본 발명의 펩타이드를 발현하도록 하는 한 특별히 제한되지는 않는다. 본 발명에 사용될 수 있는 숙주의 특정한 예로는 대장균(E. coli)과 같은 에스케리키아(Escherichia)속 세균 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)같은 바실러스(Bacillus)속 세균 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida)같은 슈도모나스(Pseudomonas)속 세균 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae), 스키조사카로마이세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe)같은 효모 동물세포 및 곤충 세포가 있다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 펩타이드는 유해 미생물에 직접 영향을 미치는 것을 통해 탁월한 항균 및 항진균 활성을 나타내므로 항균 및 항진균용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

상기 약학적 조성물은 구체적으로 그람 양성균, 그람 음성균 및 항생제 내성 균주에 대하여 항균 활성을 갖고, 보다 구체적으로 병원성 세균인 S. 엔테리카(Salmonella enterica), S. 아우레우스(Staphylococcus aureus), 및 S. 뮤탄스(Streptococcus mutans)에 대한 항균 활성, 또는 병원성 진균인 C. 알비칸스(Candida albicans), C. 글라브라타(Candida glabrata), 및 C. 네오포르만스(Cryptococcus neoformans)에 대한 항진균 활성을 갖는다. 다만, 미생물의 음전하 막에 부착되어 7번째 아미노산의 잔기가 미생물 막에 매립되고, 미생물 막에 수평으로 정렬된 α-헬릭스 구조의 구조적 변화를 통해 미생물 막의 붕괴를 일으키는 작용이 거의 모든 병원성 세균의 성장 억제에 작용할 수 있음을 고려하면, 상기 나열된 병원성 세균 또는 진균들에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 신규한 펩타이드는 임상투여시 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다.

즉, 본 발명의 신규한 펩타이드는 실제로 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 리우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 신규한 펩타이드는 생리식염수 또는 유기용매와 같이 약제로 허용된 여러 전달체(carrier)와 혼합하여 사용될 수 있고, 안정성이나 흡수성을 증가시키기 위하여 글루코스, 수크로스 또는 덱스트란과 같은 카보하이드레이트, 아스코르브 산(ascorbic acid) 또는 글루타치온과 같은 항산화제(antioxidants), 킬레이트화제(chelating agents), 저분자 단백질 또는 다른 안정화제(stabilizers)들이 약제로 사용될 수 있다.

본 발명의 신규한 펩타이드의 유효용량은 0.01 내지 10㎎/㎏이고, 바람직하게는 0.1 내지 1㎎/㎏ 이며, 하루 1회 내지 3회 투여될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물에서 본 발명의 신규 펩타이드의 총 유효량은 볼루스(bolus) 형태 혹은 상대적으로 짧은 기간 동안 주입(infusion) 등에 의해 단일 투여량(single does)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple does)이 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 상기 농도는 약의 투여 경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환자의 나이 및 건강상태 등 다양한 요인들을 고려하여 환자의 유효 투여량이 결정되는 것이므로 이러한 점을 고려할 때, 이 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 본 발명의 신규한 펩타이드의 약학적 조성물로서의 특정한 용도에 따른 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 펩타이드는 유해 미생물에 직접 영향을 미치는 것을 통해 탁월한 항균 및 항진균 활성을 나타내므로 항균 및 항진균용 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 유효성분으로 상기 신규한 펩타이드 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들이 포함되며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수(스킨), 영양 화장수(밀크로션), 영양 크림, 맛사지 크림, 에센스, 아이크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸타, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라가칸타 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 농약을 제공한다.

본 발명의 펩타이드는 유해 미생물에 직접 영향을 미치는 것을 통해 탁월한 항균 및 항진균 활성을 나타므로 식물성 병원균의 생장 억제를 통하여 친환경 농약 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 사료 보존용 조성물을 제공한다.

식품이나 사료의 보존제, 화장품 보존제 및 의약품 보존제는 식품이나 의약품의 변질, 부패, 변색 및 화학변화를 방지하기 위해 사용되는 첨가물로서 살균제, 산화방지제가 이에 포함되며 세균, 곰팡이, 효모 등 미생물의 증식을 억제하여 식품, 사료, 화장품, 의약품 등에서 부패미생물의 발육저지 또는 살균작용을 하는 등의 기능성 항균제도 포함된다. 이러한 식품이나 사료의 방부제 및 화장품, 의약품 보존제의 이상적인 조건으로는 독성이 없어야 하며, 미량으로도 효과가 있어야 한다. 농작물의 병충해를 박멸하기 위한 농약 역시 해로운 미생물의 증식을 억제하고 인체에 무해하여야 사람이 농약을 살포한 농작물을 안전하게 섭취할 수 있다. 본 발명의 펩타이드는 유해 미생물에 직접 영향을 미치는 것을 통해 탁월한 항균 및 항진균 활성을 나타내므로 상기의 식품이나 사료의 보존제, 화장품 보존제 및 의약품 보존제 등에 폭넓게 사용될 수 있다.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 펩타이드 또는 조성물을 치료를 필요로 하는 개체에 투여하여 병원성 세균을 사멸시키는 단계를 포함하는, 인간을 제외한 동물의 세균감염 질환을 치료하는 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 펩타이드 또는 조성물을 치료를 필요로 하는 개체에 투여하여 병원성 진균을 사멸시키는 단계를 포함하는, 인간을 제외한 동물의 진균감염 질환을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명에 따른 상기 치료방법은 비록 인간을 제외한 동물을 치료하는 방법이나, 인간에 있어 이러한 치료방법이 효과가 없음을 의미하는 것은 아니다. 또한, 인간의 경우 있어서 본 발명에 따른 치료용 조성물의 투여에 의해 증상이 호전될 수 있는 세균 또는 진균 감염에 의한 질환을 갖는 것을 고려할 때, 인간의 치료에 있어서도 충분히 사용될 수 있다.

본 발명에서 용어 "인간을 제외한 동물"은 본 발명에 따른 치료용 조성물의 투여에 의해 증상이 호전될 수 있는 세균 또는 진균의 감염에 의해 유발되는 질환을 갖는 인간만을 제외한 말, 양, 돼지, 염소, 낙타, 영양, 개 등의 동물을 의미한다. 본 발명에 따른 치료용 조성물을 인간을 제외한 동물에게 투여함으로써, 세균 및 진균 감염에 의한 질환을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있다.

본 발명에서 용어 "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 동물에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명에 따른 치료용 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 치료용 조성물은 유효성분이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.

본 발명에 따른 치료용 조성물의 바람직한 투여량은 치료 대상 동물의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 약학적 조성물은 1일 1 내지 10 mg/kg으로, 바람직하게는 1 내지 5 mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다.

이상 설명한 바와 같이, 본 발명의 마스토파란 MP-V1 펩타이드는 병원성 세균에 대하여 우수한 항균 및 항진균 활성을 보유하여 이를 이용한 약학적 조성물, 화장료 조성물, 농약, 사료 보존용 방부제 등의 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 마스토파란 단백질들의 일차구조 및 이차구조를 비교한 그림으로, 일차구조를 비교한 그림(도 1A), 펩타이드 계통도(도 1B), 및 원평광 이색 스펙트럼 분석(도 1C) 결과이다.
도 2는 마스토파란의 용혈 활성을 측정한 그래프이다.
도 3은 병원성 미생물에 100μm 용량으로 마스토파란을 접종한 후 미생물의 억제 효과를 측정한 그래프이다.
도 4는 병원성 미생물에 0.5, 5, 및 50μm 용량으로 마스토파란을 접종한 후 미생물의 억제 효과를 측정한 그래프이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예

본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 ““는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (중량/중량) %, 고체/액체는 (중량/부피) %, 그리고 액체/액체는 (부피/부피) %이다.

실험재료 및 방법

1. 실험 재료

1-1. 생물학적 재료

본 발명에서 사용된 3종의 병원성 진균인 C. 알비칸스(Candida albicans), C. 글라브라타(Candida glabrata), 및 C. 네오포르만스(Cryptococcus neoformans)는 연대대학교 반영선 교수 실험실에서 얻었다. 그리고, 본 발명에서 사용된 3종의 병원성 세균인 S. 엔테리카(Salmonella enterica, ATCC 39183), S. 아우레우스(Staphylococcus aureus, KCTC 1621), 및 S. 뮤탄스(Streptococcus mutans, KCTC 3065)는 KCTC(Korean Collection for Type Cultures, Daejeon, Korea) 및 ATCC(ATCC, Manassas, VA, USA)에서 구입하여 사용하였다. 그리고, 인간 적혈구는 한림대학교 고영호 교수의 실험실에서 제공받아 사용하였다.

1-2 펩타이드 합성 및 정제

모든 펩타이드는 달리 언급 하지 않는 한 0.61mmol/g의 초기 로딩된 링크 아미드 수지(100mg)로 9-플루오레닐메톡시카르보닐(Fmoc, 9-fluorenylmethoxy carbonyl)을 아미노산의 보호기로 사용하여 통상의 고체상 펩타이드 합성법(solid phase peptide synthesis: SPPS)에 의해 합성하였다.

수지는 적절한 팽창을 위해 합성 전에 45분 동안 DMF(N,N-디메틸포름아미드) 용액으로 세척 하였다. 서열 연장을 위해, 9-플루오레닐메톡시카르보닐기로 보호된 아미노산(5 당량)은 DMF 용액(2 mL, 0.15 mM) 내의 HBTU[2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸유로늄 헥사플루오로포스페이트, 5.0 eq.], HOBt(1-히드록시벤조트리아졸, 5.0 eq.) 및 DIEA(디이소프로필에틸아민, 10 eq.)로 2분 동안 처리하여 활성화시켰다.

이 용액을 레진 상의 유리된 아민에 첨가하고, 커플링 반응은 볼텍스 교반과 동시에 1시간 동안 진행시켰다. DMF 용액으로 세정 후, DMF 용액 중 20% 피페리딘(2회: 1분, 2분)에 의해 9-플루오레닐메톡시카르보닐기를 제거하였다. 수지를 DMF(3분) 용액으로 세척하고, 다음의 아미노산에 대해 같은 반응을 반복하여 수행하였다. 선형 펩타이드는 TFA(trifluoroacetic acid, 레진 100mg 당 TFA 2mL)에 존재하는 5% TIS(triisopropylsilane) 및 5% H₂O로 2 시간 동안 반응시켜 수지에서 절단하였다.

펩타이드가 침전되도록 절단된 칵테일을 차가운 에테르(ether)와 혼합하였고, 이후 원심분리 하였다.

예비 RP- HPLC(reverse-phase HPLC) 분석은 0.05% TPA 존재 하에서 0% 내지 90%의 물/아세토니트릴 농도구배를 사용하여 비닥(Vydac) C₁₈ 컬럼 상에서 수행되었다. 펩타이드의 마지막 순도(>95%)는 분석용 비닥 C₁₈ 컬럼(4.6mm, 300A5mm 입자 사이즈) 상에서의 RP- HPLC 분석에 의해 평가하였다(도 1 참조).

정제된 펩타이드의 분자량은 MALDI-TOF MS(matrix-assisted laser-desorption ionization-time-of-flight mass spectrometry; KBSI, 오창, 대한민국)를 사용하여 펩타이드의 분자량을 측정하였다(도 2).

1-3. 원편광 이색성 분광법(Circular dichroism spectroscopy)

원편광 이색성 스펙트럼은 0.1cm 패스 길이의 석영 큐벳을 이용하여 298 K에서 JASCO J-715 스펙트로폴라리미터(JASCO 인터내셔널, 도쿄, 일본)를 이용하여 측정하였다. 0.1㎎/㎖의 펩타이드 농도에서 원편광 이색성 스펙트럼은 물, 40% 2,2,2-트리플루오로에탄올(TFE ) 용액, 및 8mM SDS의 세 개의 다른 조건에서 측정되었다.

스펙트럼은 260nm부터 180nm까지 3회 측정되었고, 데이터는 200nm/min 스피드, 0.1 nm 대역폭, 1초 반응, 및 0.1nm 분해능의 스캔 속도로 측정되었다.

α 헬릭스의 비율은 다음 방정식을 사용하여 계산 하였다:

[α 헬릭스 % = -100 ×(θ_222nm + 3000)/33000].

1.4. 병원체의 성장과 항균 테스트

C. 알비칸스, C. 글라브라타, 및 C. 네오포르만스의 진균은 48시간 동안 30℃에서 SDA(Sabouraud dextrose agar) 한천 플레이트에 배양 하였다.

또한, S. 엔테리카, S. 아우레우스, 및 S. 뮤탄스의 세균은 각각 TSA(trypticase soy agar) 플레이트, 영양 아가 플레이트(nutrient agar plate), 및 BHI(brain heart infusion) 한천 배지에서 24 시간동안, 37℃에서 배양하였다.

항균 활성은 전통적인 살균 폴리스티렌 마이크로플레이트 방식을 사용하여 표준 마이크로 분석(standard micro-assays)에 의해 테스트 하였다.

마이크로 플레이트의 각 웰(well)을 멸균된 배양액 100μL로 채우고, 대략 50μL의 병원균을 접종한 후, 펩타이드 용액 50μL를 0.5 내지 100㎛ 범위의 최종 농도로 각각의 웰에 첨가하였다 .

최종 접종 농도는 C. 알비칸스, C. 글라브라타, 및 C. 네오포르만스의 진균에 대해서 대략 1.0 ×10⁶ conidia/ml의 농도, S. 엔테리카, S. 아우레우스, 및 S. 뮤탄스의 세균에 대해서는 2.5 ×10⁶ CFU/ml 농도였다.

펩타이드 용액 없이 1% DMS(dimethyl sulfoxide) 50μL와 유해균 접종 50μL의 용액은 대조군으로 사용되었고, 미생물 접종 없이 1% DMS 50μL를 함유하는 용액은 솔벤트 대조군으로 사용되었다.

암포테리신 B 및 카나마이신은 유해균 성장 억제에 대한 양성 대조군으로 사용되었다.

C. 알비칸스, C. 글라브라타, 및 C. 네오포르만스의 진균에 대해서 마이크로플레이트를 30℃에서 48시간 동안 배양하였고, S. 엔테리카, S. 아우레우스, 및 S. 뮤탄스의 세균에 대해서는 37℃에서 24시간 동안 배양하였다 .

미생물 성장은 멀티플레이트 리더를 사용하여 600nm에서의 OD 값을 측정하여 결정하였다. 모든 실험은 3회 반복하여 수행하였다.

각각의 펩타이드 용액에 대응하는 미생물 성장률을 다음 식을 사용하여 산출하였다:

[상대적인 성장률(%) = [( ControlAbs - TreatmentAbs ) / ControlAbs] ×100 %(ControlAbs=컨트롤 흡광도, TreatmentAbs=특정 펩타이드 용액 흡광도)].

1.5. 용혈 활성(Hemolytic activity)

용혈 활성 분석은 아래 방법에 의해 수행되었다. 4종의 말벌 종으로부터 유래한 합성된 독 펩타이드의 용혈 활성을 평가하기 위해 인간 적혈구(RBCs, B)가 사용되었다. 적혈구들을 PBS 완충용액에서 960rpm, 5분 조건으로 3회 세척하였고, 10% PBS 완충용액에 재현탁하였다. 다양한 농도(10 내지 200mM)의 합성 펩타이드 1/100㎕를 37℃에서 30분동안 적혈구 100ul와 함께 배양하였다. 960rpm에서 5분간 원심분리 한 후, 상층액의 OD 값(540nm)을 마이크로 플레이트 리더(Synergy HT, Bio-Tek Instruments, Inc., Winooski, VT)를 사용하여 측정하였다 .

상대적인 용혈 활성은 PBS의 활성을 0%로, 0.1%의 트리톤 X-100에서의 활성을 100%로 설정하여 측정하였다.

용혈(%)은 다음의 방정식을 사용하여 계산하였다:

용혈(%)=[(AMPAPBS)/(A0.1% Triton X-100APBS)] ×100%.

결과는 3회 반복 측정된 값의 평균 ±SE로 표현하였다.

1.6. 통계 분석

InfoStat ver. 2012 소프트웨어를 사용하여 터키-크라머 HSD 검정(Tukey-kramer HSD t-test)에 의해 분산 분석(ANOVA: Analysis of variance)을 수행하였다. 모든 수치는 적어도 3회 이상의 독립적인 실험값에 대한 평균±로 표시하였다. 상당한 차이를 보이는 결과 값(P < 0.05)들은 별도 문자를 사용하여 표시하였다.

실험 결과

1. 새로운 타입의 마스토파란 MP-V1의 동정

땅벌(Vespula vulgaris)의 독에서 분리한 MP-V1은 부가적인 15번째 서열에 극성 아미노산인 아스파라진을 포함하는 비정형적인 마스토파란으로, 이는 14개의 잔기로 이루어진 전형적인 마스토파란과는 확연하게 구별된다(도 1 및 도 3a 참조).

또한, 전형적인 마스토파란이 소수성 아미노산을 포함하는 것과 달리, MP -V1은 펩타이드의 중간에 극성을 갖는 사이드 체인인 7번째 라이신을 갖는 것이 밝혀졌다(도 1 및 도 3a 참조).

서열 정렬(도 1A) 및 계통 분석(phylogenetic analyse, 도 1B 참조)을 통해 MP-V1의 아미노산 서열이 각각 베스퓰라 레위시이(Vespula lewissii), 베스파 시밀리마 산토프테라(Vespa simillima xanthoptera) 및 베스파 베루티나 플라비타르수스(Vespa velutina flavitarsus), 그리고, 베스파 바살리스(Vespa basalis)로부터 유래한 MP-L, MP-X(V) 및 MP-B들과 같은 전형적인 마스토파란 류로 분류되는 것으로 밝혀졌다.

따라서, 상기 계통 분석을 토대로, 상기와 같이 합성된 MP-V1, MP-L, MP-X(V) 및 MP-B의 마스토파란을 사용하여 수행한 이하 실험에서 지지되는 바와 같이, 본 발명의 새로운 항균 및 항진균 펩타이드 MP-V1은 전형적인 마스토파란에서 유래하는 생화학적 및 항균 특성을 보유하고 있음을 알 수 있다.

2. MP-V1의 이차 구조 및 다른 마스토파란과의 구조 비교

마스토파란의 2차 구조를 조사하기 위해, 원편광 이색성(CD) 스펙트럼 분석을 서로 다른 조건에서 수행하였다.

합성된 모든 마스토파란의 CD 스펙트럼은 수용액 상태에서 랜덤 코일(random-coil) 형태의 특성을 보였다(도 1C). 그러나, 8mM의 SDS 및 40%의 TFE 존재 하에서, 모든 마스토파란의 CD 스펙트럼은 α-헬릭스(α-helical) 특성을 보였다(도 1C).

다른 환경에서 마스토파란에 대해 측정된 퍼센트 α-헬릭스(Percent α-helix)는 마스토파란이 8mM의 SDS 또는 40%의 TFE 존재 하에서, α-헬릭스 구조를 형성하는 경향이 있는 반면, 수용액 상태에서는 랜덤 코일 형태를 형성하는 경향이 있는 것으로 밝혀졌다(표 1).

[표 1]. 다른 환경에서의 마스토파란의 퍼센터 α-헬릭스 특성 분석

특히, 모든 마스토파란 중, MP-X(V)는 8mM SDS 또는 40% TFE 조건에서 가장 높은 α-헬릭스 퍼센트를 보인 반면 MP-V1은 MP-L과 MP-B에 비해 다소 높은 α-헬릭스 퍼센트를 나타내는 것으로 나타났다.

3. 마스토 파란 MP-V1의 용혈 활성

도 2에 도시된 바와 같이 합성된 마스토파란의 용혈 활성은 5 내지 100 μM 투여량으로 조사되었다.

일반적으로, MP-L, MP-X(V)와 MP-B가 처리된 인간 적혈구에서 경미한 용혈 현상이 발생하였다. 그러나, MP-V1으로 처리된 인간 적혈구에서는, 용량 의존적으로 용혈현상이 관찰되었다. MP- V1은 50μM에서 6.6%의 약한 용혈 현상이 발생하였다. 펩타이드 약물 처지의 경우 10% 미만의 용혈현상이 발생하는 경우에 안전하게 약물을 투여할 수 있으므로, 상기 실험결과를 토대로 100μm 미만의 용량으로 MP -V1을 투여하는 경우, 마스토파란 MP-V1이 잠재적인 세포독성을 갖지 않음을 알 수 있었다.

4. MP-V1의 항균활성 및 다른 마스토파란과의 활성 비교

마스토파란의 항균 활성은 도 3에 도시한 바와 같이, 병원성 진균인 C. 알비칸스, C. 글라브라타, 및 C. 네오포르만스와 병원성 세균인 S. 엔테리카, S. 아우레우스, 및 S. 뮤탄스에 대해 100μM 용량으로 접종하여 조사하였다.

모든 마스토파란은 완전하게 100μM의 용량에서 대부분의 병원균의 성장을 억제 하였다.

그러나, MP-X(V) 및 MP-V1은 양성대조군인 카나마이신의 항균 억제 수준과 거의 동일하게 S. 뮤탄스 균의 성장에 억제 효과를 보인 반면에, MP-L 및 MP-B는 S. 뮤탄스 균에 대해 아무런 항균 활성을 나타내지 않았다(도 3A 참조).

이러한 결과를 토대로 본 발명의 마스토파란 MP-V1은 다른 마스토파란에 비해 우수한 병원성세균 억제 효능을 보임을 알 수 있었다.

더 나아가, 0.5μM, 5μM, 및 50μM와 같이 다양한 용량으로 각각의 마스토파란들을 투여하여 마스토파란들의 항균 활성을 비교하였다(도 4A).

그 결과, 단지 50μM 농도로 본 발명의 MP-V1를 투여할 때, S. 뮤탄스 균의 성장을 완전하게 억제한 반면, 50μM 농도의 MP-X(V) 투여는 S. 뮤탄스 균 성장에 부분적인 억제 효과만을 보였고, MP-L 및 MP-B의 투여는 세균의 성장 억제에 아무런 효과를 보이지 못했다(도 4A 참조).

또한, S. 엔테리카 균에 대해, 본 발명의 MP-V1은 50μM의 농도에서 세균의 성장을 완벽하게 억제하고, 농도의존적인 항균활성을 보였으며, 다른 마스토파란들은 부분적인 억제효과만을 보였다(도 4A 참조).

또한, S. 아우레우스 균에 대해, 모든 마스토파란들은 농도 의존적인 항균 활성을 보였고, 50μM의 농도에서 거의 완전한 성장 억제 효과를 나타냈다.

마지막으로, 도 4B에 도시한 바와 같이, 다양한 농도에서 모든 마스토파란의 항진균 할성을 비교하였다.

C. 알비칸스 균에 대해, 50μm의 농도에서 모든 마스토파란은 완전하게 병원성 진균의 성장 억제효과를 보였다(도 4B 참조).

또한, C. 글라브라타 균에서, 본 발명의 마스토파란 MP-V1는 50μM의 농도에서 완전한 성장 억제효과를 보인 반면에, MP-L 및 MP-B는 50μM의 농도에서 부분적인 성장 억제효과만을 보였다.

그리고, C. 네오포르만스 균에서, 0.5μM 농도의 MP-L을 제외하고, 모든 마스토파란이 모든 용량에서 완전한 성장억제 효과를 보였다.

종합하면, 상기와 같은 결과는 본 발명의 마스토파란 MP-V1이 모든 병원균의 성장을 완벽하게 억제할 수 있음을 나타내며, 이러한 높은 성장억제 효과를 통해 새로운 항균제 또는 항균용 약제로 유용하게 사용할 수 있음을 확인할 수 있었다.

SEQUENCE LISTING <110> National Institute of Biological Resources <120> Peptide has antimicrobial and antifungal activity and uses thereof <130> acase20151126 <160> 1 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 15 <212> PRT <213> Vespula vulgaris <400> 1 Ile Asn Trp Lys Lys Ile Lys Ser Ile Ile Lys Ala Ala Met Asn 1 5 10 15

Claims (10)

1. 삭제
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제
5. 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 약학적 조성물.
6. 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 항균 및 항진균용 화장료 조성물.
7. 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 농약 조성물.
8. 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 사료 보존용 방부제 조성물.
9. 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 치료를 필요로 하는 개체에 투여하여 병원성 세균을 사멸시키는 단계를 포함하는, 인간을 제외한 동물의 세균감염 질환을 치료하는 방법.
10. 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 치료를 필요로 하는 개체에 투여하여 병원성 진균을 사멸시키는 단계를 포함하는, 인간을 제외한 동물의 진균성 질환을 치료하는 방법.

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