KR101816159B1 - 이소알란토락톤을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물 - Google Patents

이소알란토락톤을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR101816159B1
KR101816159B1 KR1020160055392A KR20160055392A KR101816159B1 KR 101816159 B1 KR101816159 B1 KR 101816159B1 KR 1020160055392 A KR1020160055392 A KR 1020160055392A KR 20160055392 A KR20160055392 A KR 20160055392A KR 101816159 B1 KR101816159 B1 KR 101816159B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
hair
growth
isoalantolactone
composition
active ingredient
Prior art date
Application number
KR1020160055392A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20170125236A (ko
Inventor
최부영
최형철
이인철
심홍보
김홍숙
Original Assignee
주식회사 에이치피앤씨
서원대학교산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 에이치피앤씨, 서원대학교산학협력단 filed Critical 주식회사 에이치피앤씨
Priority to KR1020160055392A priority Critical patent/KR101816159B1/ko
Publication of KR20170125236A publication Critical patent/KR20170125236A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101816159B1 publication Critical patent/KR101816159B1/ko

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A61K8/4973Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with oxygen as the only hetero atom
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33Heterocyclic compounds
    • A61K31/335Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365Lactones
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61QSPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q7/00Preparations for affecting hair growth
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00Function of food ingredients
    • A23V2200/30Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/318Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on skin health and hair or coat

Abstract

본 발명은 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물에 관한 것으로서, 상세하게는 탈모 방지 또는 발모 촉진 효과를 나타내는 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물, 약학 조성물 또는 건강식품 조성물을 제공한다. 본 발명은 이소알란토락톤(Isoalantolactone)이 WNT 신호 전달(signaling)을 통해 b-카테닌(catenin)을 활성화시켜 모낭의 모두유세포 성장을 촉진한다는 것을 확인하였으므로, 이를 이용한 발모 및 탈모 치료제로서 활용가능성이 클 것으로 예상된다.

Description

이소알란토락톤을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물{Composition for preventing hair loss or promoting hair growth comprising Isoalantolactone}
본 발명은 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물에 관한 것이다.
최근 급속한 경제성장과 생활수준의 향상으로 사람들의 삶의 질은 향상되었으나 이에 따른 공해와 환경오염의 발생으로 인해 현대인들은 외부의 자극과 각종 질병에 노출되어 있다. 특히 모발과 관련해 국소감염, 유전적 소인, 내분비 장애 등에 의해 탈모증이 발병된다고 밝혀졌으나, 최근의 연구에서는 스트레스, 환경오염에 의한 부작용, 화학적 제품에 의한 부작용 등 탈모에 관련한 다양한 요인들이 작용하는 것으로 나타났다. 탈모의 유발 기전 중에서도 스트레스 등 환경에 의해 면역세포와 호중구가 활성화되어 염증반응을 일으키게 되고 모낭 조직을 파괴하여 모발세포의 세포사를 유발하여 탈모가 진행되게 된다.
현재 모발성장 촉진제제로서 FDA에서 승인한 미녹시딜(minoxidil, 경피도포제)과 피나스테리드(finasteride, 경구복용제) 두 종류가 있다. 미녹시딜은 항고혈압용 경구약제로 사용되었으나 이 약제를 복용한 환자에서 다모증이 나타나는 것이 관찰되어 현재 두피 도포용으로 남성형 탈모증에 사용되고 있다. 미녹시딜은 피리미딘(pyrimidine) 유도체로 두피의 혈관을 확장시켜 국소적으로 혈류를 증가시키고 모모세포를 활성화시켜 탈모진행을 더디게 하여, 솜털을 자라나게 하는 효과가 있어 현재 탈모치료제로 널리 사용되고 있다. 하지만 여러 임상연구에 따르면 미녹시딜은 50% 이하의 환자에서만 효과가 있는 것으로 보고되었으며, 탈모에 효과는 있으나 사용을 중단할 경우 다시 탈모가 일어나게 된다. 피나스테리드는 타입 Ⅱ 5α-환원효소(reductase)를 억제함으로써 탈모를 예방하고 모발의 성장을 증진시키는 남성형 안드로겐성 탈모증 치료의 최초의 경구치료제로서 1997년 FDA 승인 후 현재 전 세계 약 260만 명이 사용하고 있다.
하지만 이 같은 발모촉진제의 부작용으로 미녹시딜의 경우 체중증가, 부종, 심장박동 증가, 협심증, 피부염, 가려움증 등이 나타났고, 피나스테리드는 남성 성기능 장애, 기형아 출산 등의 심각한 부작용이 임상사례로 보고되고 있어 사용이 제한적이거나 환자들 스스로가 약물에 대한 거부감을 나타내는 문제점이 있다. 이에 따라 천연소재에서 유래한 탈모예방 물질에 대한 소비자들의 관심이 높아지는 추세이다.
한국공개특허 제10-2015-0123477호(2015.11.04 공개)
본 발명의 목적은 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 화장료 조성물, 약학 조성물 또는 건강식품 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명은 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 건강식품 조성물을 제공한다.
본 발명은 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물에 관한 것으로서, 이소알란토락톤(Isoalantolactone)은 WNT 신호 전달(signaling)을 통해 b-카테닌(catenin)을 활성화시켜 모낭의 모두유세포 성장을 촉진하여, 탈모 또는 발모에 탁월한 효과가 있음을 밝혔다. 따라서 이를 통해 이소알란토락톤(Isoalantolactone)은 발모 및 탈모 치료제로서 활용가능성이 클 것으로 판단된다.
도 1은 이소알란토락톤(Isoalantolactone)의 인간 모낭의 모두유 세포(Human hair dermal follicle papilloma cells; HHDFP) 성장에 대한 효과를 나타낸다.
도 2는 이소알란토락톤(Isoalantolactone)의 HHDFP 세포 WNT-b-카테닌(catenin) 신호전달에 대한 효과를 나타낸다.
도 3은 이소알란토락톤(Isoalantolactone)의 모발 성장 조절자 mRNA 발현에 대한 효과를 나타낸다.
도 4는 이소알란토락톤(Isoalantolactone)의 모발 성장 조절자 단백질 발현에 대한 효과를 나타낸다.
도 5는 7주령 C57BL/6 마우스에서 이소알란토락톤(Isoalantolactone)의 모발 성장(anagen) 유도 향상 효과를 나타낸다.
본 발명은 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 화장료 조성물을 제공한다.
상세하게는, 상기 조성물은 WNT 신호 전달(signaling)을 통해 b-카테닌(catenin)을 활성화시켜 모낭의 모두유세포 성장을 촉진시킬 수 있다.
상세하게는, 상기 조성물은 조성물 100 중량부에 대하여 상기 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 0.1 내지 50 중량부를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 이소알란토락톤(Isoalantolactone)은 화학식 1로 표시되며, 분자식은 C15H20O2이고 분자량은 232.32이다.
< 화학식 1 >
Figure 112016043277767-pat00001
본 발명의 조성물이 화장료 조성물인 경우, 상기 화장료 조성물은 유효성분인 이소알란토락톤(Isoalantolactone) 외에 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어영양로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어크림, 헤어영양크림, 헤어모이스처크림, 헤어맛사지크림, 헤어왁스, 헤어 에어로졸, 헤어팩, 헤어영양팩, 헤어비누, 헤어클렌징폼, 머릿기름, 모발건조제, 모발보존처리제, 모발염색제, 모발용 웨이브제, 모발탈색제, 헤어겔, 헤어글레이즈, 헤어드레싱어, 헤어래커, 헤어모이스처라이저, 헤어무스 및 헤어스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
상기 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
상기 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
상기 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
또한, 본 발명은 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 조성물이 약학 조성물인 경우, 약학 조성물은 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 및 카타플라스마제 등으로 제형화 될 수 있다. 한편, 상기 약학적 조성물은 상기 이소알란토락톤(Isoalantolactone) 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있는데, 이러한 약제학적으로 허용되는 담체는 약품 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘, 미네랄 오일 등을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기 약학적 조성물은 첨가제로서 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
상기 약제학적 조성물은 탈모의 증상 정도에 따라 투여 방법이 결정되는데, 통상적으로는 국소 투여 방식이 바람직하다. 또한, 상기 약학적 조성물 중 유효성분의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 환자의 나이, 성별, 체중 등에 따라 달라질 수 있으며, 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다.
또한, 본 발명은 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 건강식품 조성물을 제공한다.
상기 건강식품 조성물은 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽 또는 음료의 형태로 제공될 수 있으며, 상기 건강식품조성물은 유효성분인 본 발명에 따른 이소알란토락톤(Isoalantolactone) 이외에 다른 식품 또는 식품 첨가물과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 그의 사용 목적 예를 들어 예방, 건강 또는 치료적 처치에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
상기 건강식품조성물에 함유된 이소알란토락톤(Isoalantolactone)의 유효용량은 상기 약학조성물의 유효용량에 준해서 사용할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있음은 확실하다.
상기 건강식품의 종류에는 특별한 제한이 없고, 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등을 들 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
< 실험예 >
하기의 실험예들은 본 발명에 따른 각각의 실시예에 공통적으로 적용되는 실험예를 제공하기 위한 것이다.
1. 화합물 및 항체
이소알란토락톤(Isoalantolactone)(순도 >98%)은 AK Scientific, Inc (Union City, CA 94587, USA)로부터 구입하였다. CellTiter-Glo®Luminescent Cell Viability Assay은 Promega Corporation (Madison, WI, USA)으로부터 구입하였다. DMEM 및 우태아혈청(fetal bovine serum; FBS)은 Invitrogen (Carlsbad, CA, USA)으로부터 구입하였다. β-actin 항체는 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)로부터 구입하였다. total b-카테닌(catenin), phospho-specific b-카테닌(catenin) (Thr41/Ser45), total ERK, phospho-specific ERK에 대한 다클론항체는 Cell Signaling Technology (Beverly, MA, USA)에서 구입하였다. 본 발명에 사용된 다른 모든 화합물은 분자생물학적 등급이다.
2. 세포 배양
본 발명에 사용된 인간 모낭의 모두유 세포(Human hair dermal follicle papilloma cells; HHDFP)는 abm(Richmond, BC, Canada)으로부터 구입하였다. 3T3-WNT 세포주는 Enzo life science (Lausen, switzerland)로부터 구입하였다. 상기 세포들은 질소 탱크에 보관 전에 세포유전학적으로 시험하였고, 입증하였다. HHDFP 세포는 페니실린과 스트렙토마이신(100 units/ml) 및 10% FBS가 함유된 DMEM 배지로 37℃, 5% CO2 배양기에서 유지되었다. 3T3-WNT 세포주는 퓨로마이신(puromycin; 3ug/ml), 스트렙토마이신(100 units/ml) 및 10% FBS가 함유된 DMEM 배지로 37℃, 5% CO2 배양기에서 유지되었다.
3. CellTiter - Glo ® luminescent Cell growth assay
HHDFP 세포는 96-well plates (1×104cells/well)에 접종하였다. 72시간 후, 세포들은 적절한 농도의 이소알란토락톤(Isoalantolactone)으로 표시된 시간 동안 처리하였고(DMSO를 대조군으로 사용), 세포 성장은 CellTiterGlo®luminescent cell viability kit을 이용하여 제조사의 지시에 따라 측정하였다. 상기 방법은 세포 내 루시퍼라제 반응을 통한 ATP 측정을 기반으로 하고 있는데, 상기 산물은 생존 세포의 수와 비례한다. 세포 증식 억제율은 다음의 식에 의해 계산되었다. 세포 증식 억제율 = (실험군의 상대 발광 정도/대조군의 상대 발광 정도)×100. 세포 생존능을 간접적으로 반영하는 발광 정도는 LuBi luminometer (Berthold TEC GmbH & Co., Oak Ridge, TN, USA)로 측정하였다. 모든 실험은 적어도 3번 이상 반복하였고, 평균값은 표준편차와 함께 표시하였다.
4. 루시퍼라제 ( luciferase ) 활성 측정
TCF-루시퍼라제 구조체로 형질감염된 3T3-WNT 세포는 96-well plate에 2×104 세포수로 접종하였고, 퓨로마이신(puromycin; 3ug/ml) 및 5% FBS가 함유된 DMEM 배지에서 24시간 동안 유지되었다. 그 후, 3T3-WNT 세포는 WNT3a 단독 또는 이소알란토락톤(Isoalantolactone)과 혼합하여 24시간 동안 노출시켰다. 세포 용해 후, 최종 루시퍼라제 활성은 루미노미터(luminometer)를 통해 측정하였다. 모든 실험은 적어도 3번 이상 반복하였고, 평균값은 표준편차와 함께 표시하였다.
5. RNA 분리 및 실시간 정량 PCR
HHDFP 세포(5×105 cells/well)를 6-well plates에 접종하였고, WNT3a 단독 또는 이소알란토락톤(Isoalantolactone; 10μM)과 혼합하여 72시간 동안 노출시켰다. 그 후, Aurum total RNA mini kit (Bio-Rad, Hercules, CA, USA)을 이용하여 총 RNA를 분리하였다. 1μg의 총 RNA를 이용하여 Moloney murine leukemia virus reverse transcriptase (MMLV-RTase) (Bio-Rad, Hercules, CA, USA)로 첫번째 가닥 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA는 GeneAmp PCR 9700 thermocycler (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)를 사용하여 b-카테닌(catenin), GSK-3b, Lef/TCF, BCL-2, BAX, SOP-9 및 GAPDH PCR 프라이머로 증폭시켰다. PCR 산물은 1X TAE buffer을 이용하여 1% 아가로스 젤을 통해 분석하였다. 상대적 mRNA 수준은 myECL imager analysis software (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)를 이용하여 정량하였다. 사이토카인들의 정량적 유전자 발현 수준은 CFX96 Touch PCR system (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) 상에서 SYBR Green reagents (Bio-Rad, Hercules, CA, USA)로 측정하였다. 상대적 표적 유전자 발현은 GAPDH 수준으로 표준화한 후에 측정하였다. 각각의 실험에 있어서, 2번의 독립적인 실험을 3번 반복하여 결과를 계산하였다. RT-PCR을 위한 프라이머쌍은 다음과 같다. GAPDH forward 5'-TGGCAAATTCCATGGCAC-3', reverse 5'-CCATGGTGGTGAAGACGC-3'; b-catenin forward 5'-CCCACTAATGTCCAGCGTTT-3', reverse 5'-AACCAAGCATTTTCACCAGG-3'; GSK-3b forward 5'-AACTGCCCGACTAACAACAC-3', reverse 5'-ATTGGTCTGTCCACGGTCTC-3'; Lef/TCF forward 5'-AATCATCCCGGCCAGCA-3', reverse 5'-TGTCGTGGTAGGGCTCCTC-3'; BCL-2 forward 5'-AGATGTCCAGCCAGCTGCACCTGAC-3', reverse 5'-AGATAGGCACCCAGGGTGATGCAAGCT-3'; BAX forward 5'-AAGCTGAGCGAGTGTCTCAAGCGC-3', reverse 5'-TCCCGCCACAAAGATGGTCACG-3'; SOX9 forward 5'- AGACCTTTGGGCTGCCTTAT-3', reverse 5'-TAGCCTCCCTCACTCCAAGA -3'.
6. 웨스턴 블랏 분석
적절한 처리 후, 세포들은 세포 용해 완충액(20 mM Tris pH 7.5, 150 mM NaCl, 1 mM Na2EDTA, 1 mM EGTA, 1% Triton X-100, 2.5 mM sodium pyrophosphate, 1 mM b-glycerophosphate, 1 mM sodium vanadate, 1 mg/ml leupeptin 및 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF))으로 얼음에서 30분 동안 파괴하였다. 20,817 g로 15분 동안 원심분리한 후, 상등액을 얻었고, 단백질 농도를 측정하였다. 전체 세포 단백질 추출물은 SDS-PAGE에 의해 분리되었고, 150 mM 글리신(glycine) 및 20% (v/v) 메탄올이 함유된 20 mM Tris-HCl (pH 8.0)에서 폴리비닐리덴 플루오라이드(polyvinylidene fluoride; PVDF) 멤브레인으로 옮겼다. 멤브레인은 0.05% Tween 20이 함유된 1x TBS (TBS-T buffer)에 녹인 5% 비지방 건조 밀크로 차단하였고, 적절한 항체들로 반응시켰다. 블랏들은 1x TBS-T buffer로 3번 씻어낸 후, 적절한 HRP-linked IgG로 반응시켰다. 혼성화된 단백질들은 enhanced chemiluminescence (ECL) 검출 시스템을 이용하여 가시화하였다.
7. 동물 실험
피펫을 이용하여 300 μL 부피의 이소알란토락톤(Isoalantolactone) 또는 대조군을 7주령 수컷 마우스의 면도된 등 표면에 적용하였다. 성장 유도에 대한 대조군으로서, 7주령 C57BL/6 수컷 마우스를 300 μL 국소량의 이소알란토락톤(Isoalantolactone)(5%) 또는 대조군으로 처리하였다. 국소 투여 후, 피부를 여러 시간 포인트에서 수집하였다. 피부에 침투되지 않은 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 제거하기 위해서, 처리된 피부는 분리 전에 알코올 패드 (Kendall, Mansfield, Massachusetts)로 3번 닦아냈다.
8. 조직학적 분석
마우스 피부는 PBS에 녹인 4% 파라포름알데히드(paraformaldehyde) (Electron Microscopy Sciences, Hatfield, Pennsylvania) 또는 Bouin's fixative (Sigma)로 4℃에서 밤새도록 고정시켰고, 파라핀 포매하여 절단하였다. 일반적인 조직학적 분석을 위해, 5 μm 단면 파라핀 절편을 헤마톡실린 및 에오신(hematoxylin and eosin; H&E)으로 염색하였다.
< 실시예 >
1. 인간 모낭의 모두유 세포(Human hair dermal follicle papilloma cells; HHDFP) 성장
모발(Hair) 세포에서 이소알란토락톤(Isoalantolactone)의 모발 성장에 미치는 영향을 보기 위해 세포의 ATP를 측정하는 CellTiterGlo®luminescent cell viability kit를 사용하였다. 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 농도별로 72시간 처리했을 때 대조군과 비교하여 HHDFP 세포의 성장이 유의성 있게 농도의존적으로 성장함을 알 수가 있었다(도 1).
2. WNT 신호전달에 전사인자인 Top flash의 루시퍼라제 ( luciferase ) 활성
모발 발생과정에는 여러가지 물질이 관여한다. 모낭 발생의 첫번째 신호는 진피쪽에서 온다고 알려져 있으며 b-카테닌(catenin)이 가장 중요한 물질로 추정된다. 또한 LEF/TCF, WNT 신호도 첫번째 신호에 관여함을 알 수가 있다. 이소알란토락톤(Isoalantolactone)은 WNT 신호 전달(signaling) 활성을 통해 b-카테닌(catenin)을 증가시켜 전사인자인 TCF의 활성을 유도하는지를 평가하기 위해, TCF-루시퍼라제 유전자가 안정적으로 발현되게 만들어진 3T3-WNT 세포를 이용하였다. 이소알란토락톤(Isoalantolactone)은 농도의존적으로 TCF-루시퍼라제 활성이 증가됨을 알 수 있다. 특히 이소알란토락톤(Isoalantolactone) 10uM에서 대조군에 비해 약 2.5배 증가됨을 알 수가 있다(도 2).
본 결과는 이소알란토락톤(Isoalantolactone)은 인산화에 의한 b-카테닌(catenin)의 분해를 억제하며 또한 b-카테닌(catenin) 활성화하여 모두유 세포 성장을 촉진하는데 관여함을 알 수가 있다.
3. 이소알란토락톤(Isoalantolactone)에 의한 HHDFP 세포의 mRNA 발현
모두유 세포 성장을 억제하는 TGF-b 그리고 성장 촉진하는 WNT3a를 대조군으로 이소알란토락톤(Isoalantolactone)에 의한 주요 성장 및 억제 조절 mRNA 발현을 관찰하였다.
TGF-b에 의해 b-카테닌(catenin)의 분해를 유도하며, 특히 BAX 발현이 높고 BCL-2 발현이 낮아지는 결과를 보이고 있다. 그러나 TGF-b에 WNT3a을 처리시 b-카테닌(catenin)의 발현과 동시에 TCF와 BCL-2 발현이 증가됨을 알 수가 있다. 즉, 이소알란토락톤(Isoalantolactone)은 모두유 세포 성장조절 mRNA의 발현이 증가됨으로써 성장을 촉진함을 알 수가 있다(도 3).
4. 이소알란토락톤(Isoalantolactone)이 HHDFP 세포의 주요 단백질 발현
mRNA 발현과 같이 단백질 발현 양상을 관찰한 결과, 이소알란토락톤(Isoalantolactone)에 의해 b-카테닌(catenin) 단백질 발현이 증가하면서 인산화 b-카테닌(catenin)의 발현은 감소함을 알 수가 있었고, 세포 성장에 주요 단백질인 ERk 활성이 높아짐을 알 수가 있었다(도 4).
5. C57BL/6 마우스의 양모 촉진 및 모두유 세포 조직 병리학적 분석
이소알란토락톤(Isoalantolactone)이 동물모델에서 모발의 성장을 증가하는지를 알아보기 위해 7주된 C57BL/6 마우스를 이용하여 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 국소 처리하였다. 모발 성장(anagen) 유도를 시험하기 위해, 털을 깍은 마우스에 14일간 매일 한 번씩 마우스에 발라주었다. 그 결과, 음성대조군에 비해 모발 성장이 촉진됨을 알 수가 있다. 또한, 모낭 세포의 조직학적 분석에서도 모두유 세포의 성장이 촉진됨을 알 수가 있다(도 5).
본 결과를 통해 이소알란토락톤(Isoalantolactone)은 b-카테닌(catenin) 활성 기전을 통해 모두유세포의 성장을 촉진함을 알 수 있다.

Claims (6)

  1. 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 유효성분으로 함유하며, 상기 이소알란토락톤은 WNT 신호 전달(signaling)을 통해 b-카테닌(catenin)을 활성화시켜 모낭의 모두유세포 성장을 촉진하는 것을 특징으로 하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 화장료 조성물.
  2. 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 유효성분으로 함유하는, 시험관(in vitro) 내 WNT 신호 전달(signaling)을 통한 b-카테닌(catenin) 활성 촉진용 시약 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 조성물 100 중량부에 대하여 상기 이소알란토락톤(Isoalantolactone) 0.1 내지 50 중량부를 포함하는 것을 특징으로 하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어영양로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어크림, 헤어영양크림, 헤어모이스처크림, 헤어맛사지크림, 헤어왁스, 헤어에어로졸, 헤어팩, 헤어영양팩, 헤어비누, 헤어클렌징폼, 머릿기름, 모발건조제, 모발보존처리제, 모발염색제, 모발용 웨이브제, 모발탈색제, 헤어겔, 헤어글레이즈, 헤어드레싱어, 헤어래커, 헤어모이스처라이저, 헤어무스 및 헤어스프레이로 구성된 군으로부터 선택된 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 화장료 조성물.
  5. 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 유효성분으로 함유하며, 상기 이소알란토락톤은 WNT 신호 전달(signaling)을 통해 b-카테닌(catenin)을 활성화시켜 모낭의 모두유세포 성장을 촉진하는 것을 특징으로 하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 약학 조성물.
  6. 이소알란토락톤(Isoalantolactone)을 유효성분으로 함유하며, 상기 이소알란토락톤은 WNT 신호 전달(signaling)을 통해 b-카테닌(catenin)을 활성화시켜 모낭의 모두유세포 성장을 촉진하는 것을 특징으로 하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 건강식품 조성물.
KR1020160055392A 2016-05-04 2016-05-04 이소알란토락톤을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물 KR101816159B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020160055392A KR101816159B1 (ko) 2016-05-04 2016-05-04 이소알란토락톤을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020160055392A KR101816159B1 (ko) 2016-05-04 2016-05-04 이소알란토락톤을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20170125236A KR20170125236A (ko) 2017-11-14
KR101816159B1 true KR101816159B1 (ko) 2018-01-08

Family

ID=60387629

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020160055392A KR101816159B1 (ko) 2016-05-04 2016-05-04 이소알란토락톤을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101816159B1 (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101935492B1 (ko) * 2018-08-06 2019-01-04 주식회사 보타닉센스 야라야라를 유효성분으로 포함하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040115289A1 (en) * 2000-02-18 2004-06-17 Daniel Jean Cosmetic or medicinal composition containing sesquiterpene lactone or the like for treating hair -growth related disorders, and preparation method

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040115289A1 (en) * 2000-02-18 2004-06-17 Daniel Jean Cosmetic or medicinal composition containing sesquiterpene lactone or the like for treating hair -growth related disorders, and preparation method

Also Published As

Publication number Publication date
KR20170125236A (ko) 2017-11-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102217440B1 (ko) 콩제비꽃 추출물을 이용한 발모 촉진 또는 탈모 억제용 조성물
WO2022045635A1 (ko) 배롱나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물
KR101816159B1 (ko) 이소알란토락톤을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물
KR102165210B1 (ko) 동규자 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 방지용 화장료 조성물
KR101902425B1 (ko) 치자 추출물을 포함하는 재생 촉진제
KR101530415B1 (ko) 굴피나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물
KR20170067479A (ko) 3-데옥시사판칼콘을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물
KR101924054B1 (ko) 피뿌리풀 추출물로부터 분리한 신규화합물 스테차몬을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 개선 또는 치료용 조성물
KR101725461B1 (ko) 디오스민을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 조성물
KR101620088B1 (ko) 제라닉산을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 조성물
KR102073337B1 (ko) 후피향 추출물을 유효성분으로 함유하는 탈모방지 또는 발모 촉진용 조성물
KR101587612B1 (ko) 피노카베올을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 조성물
US10265299B2 (en) Composition for promoting hair growth and/or hair restoration containing psoralidin
KR102292961B1 (ko) microRNA-2478을 포함하는 멜라닌 생성 억제용 조성물
KR102572769B1 (ko) 초고압 전처리된 메밀새싹 및 캐모마일의 복합 추출물을 함유하는 외부 자극으로 손상된 두피 케어용 또는 스트레스성 탈모 완화용 화장료 조성물
KR20150068865A (ko) 진세노사이드 Rg3를 유효성분으로 포함하는 노화세포 회춘용 조성물
KR102451067B1 (ko) Dkk2를 유효성분으로 함유하는 탈모 예방 또는 발모 촉진용 조성물
KR102276483B1 (ko) 식물 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 조성물
KR102207989B1 (ko) 꾸지나무 추출물의 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물
KR102452586B1 (ko) 노화세포 회춘용 조성물
KR101467731B1 (ko) 억새꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물
KR101818364B1 (ko) 특이적 PI3K p110δ 억제제를 유효성분으로 함유하는 산화 관련 질환 예방 또는 치료용 조성물
WO2022158809A1 (ko) 아트라릭산을 포함하는 발모 촉진 및 탈모 방지용 조성물
KR102213459B1 (ko) 고추씨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 항아토피 조성물
KR102655961B1 (ko) 4-헥실레조르시놀을 유효성분으로 포함하는 항노화용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant