KR101733243B1

KR101733243B1 - 한약재 발효물의 제조방법 및 상기 한약재 발효물을 포함하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101733243B1
Application number: KR1020100055070A
Authority: KR
Inventors: 최재환; 황승진; 박선규; 이윤경; 정수나
Original assignee: 주식회사 엘지생활건강
Priority date: 2009-11-19
Filing date: 2010-06-10
Publication date: 2017-05-08
Also published as: KR20110055351A

Abstract

본 발명은 한약재 발효물의 제조방법 및 상기 한약재 발효물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 한약재를 가열멸균하여 가수분해시키고, 이를 효모나 유산균과 같은 발효균으로 발효시켜 얻은 한약재 발효물을 화장료 조성물에 함유함으로써, 피부에 자극이 적어 안전하고, 피부노화가 효과적으로 방지됨은 물론, 그 효과의 지속성이 우수한 한약재 발효물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

한약재 발효물의 제조방법 및 상기 한약재 발효물을 포함하는 화장료 조성물{Method for preparing herb fermented materials and cocmetic composition comprising the herb fermented materials}

화장품은 인류의 역사가 시작되면서부터 인간의 실생활에 매우 밀접한 도구로 사용되어 왔으며, 문명이 발달하는 과정에서 사회생활의 원만한 활동을 위한 도구로 이용되어 왔다. 특히, 여성들에게는 아름다워지고자 하는 기본적 욕구를 충족하는 도구로 사용되고 있는 실정이다.

여성들이 사용하는 화장품은 피부에 영양을 공급하기 위한 기초 화장품 및 윤곽을 개성있게 표현하기 위해 인체에 해롭지 않은 안료가 혼합된 색조 화장품으로 크게 구분할 수 있다. 특히, 기초 화장품으로는 유액, 화장수, 스킨, 로션 등이 있으며, 대부분의 여성 및 남성들이 기초 화장품을 사용하고 있다. 이러한 기초 화장품은 피부의 각질 및 노폐물을 제거하여 피부를 청결하게 함은 물론, 유분 및 수분을 균형있게 조절하여 세안 등에 의해 손상된 피부를 진정시키면서 얇은 보호막을 형성시켜 피부 트러블을 방지하는 기능을 한다.

또한, 근래에는 소득이 증가함에 따라 생활수준이 향상되어 자신의 이미지를 제고시키기 위한 화장품에 좀 더 많은 투자를 하게 되었다. 그리고 노령인구가 증가함에 따라 노화방지, 주름개선, 미백, 자외선차단 등에 관련된 기능성 화장품에 대한 관심과 수요가 증가하고 있다. 그러나 이러한 기초 화장품이나 기능성 화장품의 조성물은 화학물질로 제조되는 것이 대부분이기 때문에, 민감한 피부에 바를 경우에는 피부 트러블이 발생하는 경우가 많다.

따라서 최근에는 보습, 노화방지, 항산화 효과가 우수하여 피부노화를 개선하거나 방지하는 면에서 우수한 효과를 지닌 한약재의 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 대한 연구가 많이 진행되고 있다. 그러나 통상의 방법으로 추출한 한약재 추출물들을 이용한 화장료 조성물은 미백, 주름개선 및 항산화 등에 대한 효과가 미미할 뿐만 아니라, 이러한 한약재 추출물을 얻기 위해서는 장시간이 소요되는 등의 문제점이 있어 실용성이 높지 않다.

상기와 같은 문제점을 해결하기 위해, 본 발명은 가열멸균에 의해 가수분해된 한약재를 효모 또는 유산균으로 발효시킴으로써, 한약재에 포함된 미네랄, 유기산, 플라보노이드, 비타민, 아미노산, 카테친 등 유효성분의 수득 함량을 현저히 높일 수 있는 한약재 발효물의 제조방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 한약재 발효물을 유효성분으로 포함함으로써, 피부노화를 효과적으로 개선하거나 방지함은 물론, 그 효과의 지속성이 우수한 화장료 조성물을 제공한다.

하나의 양태로서, 본 발명은 한약재를 가열멸균에 의해 가수분해시키는 제1 단계; 및 상기 가수분해된 한약재를 효모 또는 유산균 중 어느 하나의 제1 발효균으로 발효시키는 제2 단계를 포함하는 한약재 발효물의 제조방법을 제공한다.

도 1은 본 발명에 따른 한약재 발효물의 제조방법을 개략적으로 나타낸 것이다.

우선, 가열멸균에 의해 한약재를 가수분해시킨다(S110). "가수분해"는 효소, 고온, 고압, 산·염기 반응을 통해서 이루어지는 반응을 지칭하는 것으로, 본 발명은 고온을 통한 증법을 이용한 구증구포 포제법(중약포제학, 1997)을 응용함으로써 한약재를 발효시키는 것이다. 이러한 가수분해 단계는 한약재의 고분자 성분을 저분자화시킨다. 따라서, 이후 진행될 발효 공정에서 한약재의 발효 효율이 높아지게 되어 더욱 우수한 효능을 가진 발효 산물을 수득할 수 있게 된다.

가열멸균은 오토클레이브(autoclave)를 이용하여 한약재에 상재하는 균주를 모두 멸균하는 것으로 수행되는데, 이는 업계의 통상적인 조건에 의해 수행된다.

한약재로는 인삼, 생지황, 하수오 및 황정 중 어느 하나 이상을 사용함이 바람직하다. 이하, 각 한약재의 효능에 대해 간략히 설명한다.

인삼(panax ginseng)은 오가피과 인삼속 식물인 인삼 뿌리를 건조한 것으로, 한의학적으로는 기를 크게 보강하고 비장과 폐장의 기운을 북돋우며, 갈증을 멎게 하고 정신을 평안하게 하는 효능이 있고, 현대 약리학적으로는 중추신경계 조절, 면역증강, 강심, 혈당강하 등의 효능이 있다.

생지황(rehmannia glutinosa var. purpurea)은 현삼과에 속한 다년생 초본인 지황 또는 그 밖의 동속식물의 신선한 뿌리이다. 한의학적으로는 열을 내려주고 음을 생성하며, 갈증을 멎게 하는 효능이 있으며, 현대 약리학적으로는 진정, 소염, 면역증강, 지혈 등의 작용이 있다.

하수오(polygonum multiflorum)는 마디풀과에 속한 다년생 초목인 하수오의 덩이뿌리를 건조한 것이다. 한의학적으로는 정과 혈을 보하며 학질을 해독하며, 변비를 치료하는 효능이 있으며, 현대 약리학적으로는 조혈, 면역증강, 항노화 등의 작용이 있다.

황정(polygonatum sibiricum)은 백합과에 속한 다년생 초목인 죽대둥글레 및 동속 근연식물의 근경이다. 한의학적으로는 기를 보하며 폐음을 보충하여 진액을 도와 갈증을 멈추는 효능이 있으며, 현대 약리학적으로는 혈관확장, 혈청지질강하 및 혈압강하 등의 작용이 있다.

다음으로, 가수분해된 한약재를 효모 또는 유산균 중 어느 하나의 발효균으로 발효시킨다(S120). 발효 단계는 다른 어떠한 용매도 사용하지 않는 것으로, 이러한 발효 단계를 거침으로써 한약재에 포함되어 있는 당 성분이 알코올로 변화하여 한약재에 포함되어 있는 플라보노이드, 비타민 C, 비타민 P, 아미노산, 카테친 등과 같은 유효성분의 수득 함량을 현저히 높일 수 있다.

가수분해된 한약재는 분쇄하여 분말화하여 사용되거나, 생약 자체로 사용되거나, 생약을 물, 알코올, 에틸에테르 또는 이들의 혼합용매에서 5 내지 40중량%로 냉침 또는 온침 추출한 후 여과 분리하여 제조되는 추출물 형태로 사용될 수 있다. 이러한 다양한 형태의 가수분해된 한약재를 효모 또는 유산균 배양시 기본 배지에 첨가하고 배양하여 발효시킨다.

발효균으로 효모를 사용할 경우, 효모 발효는 당업계에 공지된 통상의 방법에 의해 수행할 수 있다. 예를 들면, 가수분해된 한약재 배지에 10⁵내지 10⁷ cells/㎖의 일정한 농도로 효모를 접종하고, pH 5.5 내지 8.5, 온도 32 내지 41 ℃, 습도 70 내지 80RH%로 유지하면서 조건에 따라 24 내지 96시간 동안 배양하여 발효시킨다. 생성된 발효 산물 내에 남아있는 효모균체를 오토클레이브를 이용하여 전부 멸균시킨다.

효모로는 사카로마이세스 속(Saccharomyces sp .), 시조사카로마이세스 속(Shizosaccharomyces sp .), 클루레로마이세스 속(Klureromyces sp .) 등을 사용할 수 있으며, 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae), 시조사카로마이세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe), 클루레로마이세스 락티스(Klureromyces lactis), 사카로마이세스 보울라디(Saccharomyces boulardii)를 사용하는 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.

발효균으로 유산균을 사용할 경우, 유산균 발효는 당업계에 공지된 통상의 방법에 의해 수행할 수 있다 예를 들면, 오토클레이브 처리된 한약재 배지에 10⁵내지 10⁷ cells/㎖의 일정한 농도로 유산균을 접종하고 pH 5.5 내지 8.5, 온도 32 내지 41 ℃, 습도 70 내지 80RH%로 유지하면서 조건에 따라 24 내지 96시간 동안 배양하여 발효시킨다. 생성된 발효 산물 내에 남아있는 유산균체를 오토클레이브를 이용하여 전부 멸균시킨다.

유산균으로는 락토바실러스 속(Lactobacillus sp .), 바실러스 속(Bacillus sp .) 등을 사용할 수 있으며, 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 헬베티커스(Lactobacillus helveticus), 락토바실러스 델브루에키 아종 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp bulgaricus)를 사용하는 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.

마지막으로, 상기 발효된 한약재를 가열멸균에 의해 가수분해시키는 제3 단계(S130); 및 상기 가수분해된 한약재를 효모 또는 유산균 중 어느 하나의 제2 발효균으로 발효시키는 제4 단계(S140)를 추가로 선택하여 수행할 수 있다.

1차 발효 공정에 사용되는 제1 발효균과 2차 발효 공정에 사용되는 제2 발효균은 각각 독립적으로 효모 또는 유산균일 수 있으며, 제1 발효균과 제2 발효균이 서로 상이한 것이 바람직하다. 예를 들어, 제1 발효균이 유산균인 경우에는 제2 발효균이 효모이고, 제1 발효균이 효모인 경우에는 제2 발효균이 유산균임이 바람직하나, 이에 제한이 있는 것은 아니다.

본 발명에서는 제1 단계 내지 제4 단계의 공정을 수차례 반복 수행하게 되는데, 1회 내지 5회 수행함이 바람직하다. 이러한 단계를 너무 많이 반복 수행할 경우, 벤조피렌 등의 발암성분들이 발생할 수 있으며, 5회 이상 반복 수행할 경우에는 인삼의 성분 증가에 대한 유의성이 없음을 확인하였다(동의생리병리학회지, 2008, 22(6), 1557-1561; 대한본초학회지, 2007, 22(4), 261-270).

전술한 바와 같이, 가열멸균에 의해 한약재를 가수분해시키는 단계를 수행함에 따라 우수한 효능을 가진 발효 산물을 수득할 수 있기 때문에, 가열멸균에 의해 한약재를 가수분해 단계 및 상기 가수분해된 한약재를 발효시키는 단계를 반복 수행함에 따라 더욱 우수한 효능을 갖는 한약재 발효물을 수득할 수 있다.

다른 하나의 양태로서, 본 발명은 전술한 제조방법에 의해 제조된 한약재 발효물을 유효성분으로 하는 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명에 따른 화장료 조성물은 항산화, 세포증식을 통한 세포활성 및 콜라겐 합성 증진 효과가 우수하기 때문에, 피부노화를 효과적으로 개선하거나 방지할 수 있다.

본 발명에 따른 한약재 발효물은 화장료 전체 조성물의 중량 대비 0.0001 내지 50중량%로 포함되는 것이 바람직하다. 한약재 발효물의 함량이 화장료 전체 조성물의 중량 대비 0.0001중량% 미만일 경우에는 실질적인 노화 개선 및 방지 효과를 기대하기 어렵고, 50중량% 이상일 경우에는 염으로 인해 제형이 불안정해지는 등의 문제가 발생한다.

본 발명에 따른 화장료 조성물의 제형은 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들면, 피부외용연고, 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 팩, 에멀젼 또는 오일젤일 수 있다.

피부외용연고는 한약재 발효물 이외에 바셀린 50 내지 97중량% 및 폴리옥시에틸렌올레일-에테르 포스페이트 0.1 내지 5중량%를 함유하도록 제조된다.

유연화장수는 프로필렌글리콜 또는 글리세린과 같은 다가알콜류 1 내지 10중량% 및 폴리에틸렌올레일에테르 또는 폴리옥시에틸렌 경화피마자유와 같은 계면활성제 0.05 내지 2중량%를 함유하도록 제조된다.

영양화장수 및 영양크림은 한약재 발효물 이외에 스쿠알란, 바셀린 또는 옥틸도데칸올과 같은 오일류 5 내지 20중량% 및 세탄올, 스테아릴알콜 또는 밀납과 같은 왁스성분 3 내지 15중량%을 함유하도록 제조된다.

에센스는 글리세린 또는 프로필렌글리콜과 같은 다가알콜류 5 내지 30중량%를 함유하도록 제조된다.

마사지크림은 한약재 발효물 이외에 유동파라핀, 바셀린 또는 이소노닐이소노나노에이트와 같은 오일류를 30 내지 70중량% 함유하도록 제조된다.

팩은 폴리비닐알콜을 5 내지 20중량% 함유하는 필오프(peel off) 팩으로 제조될 수 있으며, 일반유화형 화장료에 카올린, 탈크, 산화아연 또는 이산화티탄과 같은 안료가 5 내지 30중량% 함유된 워시오프(wash off) 팩으로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 첨가제의 종류는 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들면, 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제 및 향료 중 어느 하나 이상일 수 있다. 이러한 첨가제들은 필요에 따라 적절하게 배합하여 사용할 수 있다.

본 발명은 가열멸균에 의해 가수분해된 한약재를 효모 또는 유산균으로 발효시킴으로써, 한약재에 포함된 미네랄, 유기산, 플라보노이드, 비타민, 아미노산, 카테친 등 유효성분의 수득 함량을 현저히 높일 수 있는 한약재 발효물을 제공할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 한약재 발효물은 피부에 대한 자극이 없기 때문에, 이를 화장료 조성물의 유효성분으로 사용할 경우에는 피부 질환을 유발하지 않는다.

또한, 본 발명에 따른 한약재 발효물은 항산화, 세포증식을 통한 세포활성 및 콜라겐 합성 증진 효과가 우수하기 때문에, 이를 화장료 조성물의 유효성분으로 사용할 경우에는 피부노화를 효과적으로 개선하거나 방지할 수 있을 뿐만 아니라, 그 효과가 단시간에 나타나고, 지속성도 우수하다.

이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시 예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

[ 실시예 ] 한약재 발효물의 제조방법

인삼, 지황, 하수오 및 황정을 각각 생약재로 입수하여 세절한 후, 상기 생약재들에 상재하는 균을 멸균시키기 위해 오토클레이브(autoclave) 처리하여 가수분해를 유도하였다.

그리고 가수분해된 각각의 생약재들을 기본 배지로 조성하고, 여기에 발효균으로 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae)를 약 10⁶ cells/㎖의 일정한 농도로 접종하고, 이를 pH 7, 30℃ 및 습도 75RH%으로 48시간 동안 배양하여 발효시켰다.

상기와 같은 공정을 9회 반복 수행하였다. 상기 공정을 반복 수행할 때, 발효균으로는 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 및 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis)를 교대로 번갈아 가면서 사용하였다.

이렇게 얻은 생약재 발효액을 0.2㎛ 필터로 걸러 고분자 침전물, 유산균체 및 효모균체를 제거하고, 이로써 최종 한약재 발효물을 수득하였다.

[ 비교예 ] 한약재 추출물의 제조방법

생약재인 인삼, 지황, 하수오 및 황정을 각각 세절한 후 추출용매(증류수:1,3-부틸렌글리콜 = 7:3)를 넣어 한약재를 추출하였다. 추출한 결과, 한약재 성분이 전체 추출물 중량 대비 30중량% 포함되었다. 이를 3일 동안 냉침시킨 후 침전물이 생기지 않도록 0.2㎛ 필터로 여과시키고, 살균하기 위해 3일 동안 UV 자외선을 쪼여 최종적으로 한약재 추출물을 수득하였다.

[ 실험예 1] 자유 라디칼 소거능을 통한 항산화능 실험

상기 실시예의 각기 다른 횟수의 발효 공정 수행에 따른 한약재 발효물 및 상기 비교예에 따른 한약재 추출물을 각각 0.5% 농도로 제조하여 96 웰 플레이트(well plate)의 각 웰에 100㎕씩 첨가하였다. 여기에 DPPH(1,1-diphenyl-2-pycryl-hydrazyl) 용액을 100㎕씩 첨가한 후에, 상온에서 30분 동안 방치하였다(Blois, M.S., Nature, 1958, 181, 1190). DPPH는 비교적 안정한 자유 라디칼로서, 라디칼 상태로 존재시 517㎚에서 최대 흡광성을 보이며, 소거되면 흡광성을 잃는다. 본 실험에서는 시그마社의 DPPH를 사용하였으며, 이를 0.15mM의 농도로 메틸 알코올에 녹여 사용하였다.

그리고 마이크로 플레이트 리더(BioTek EL-340)를 이용하여 517㎚에서 각 시료에 대한 흡광도를 측정함으로써, 각 시료에 대한 라디칼 소거능을 측정하였으며, 이를 통해 항산화능을 확인하였다. 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

발효 횟수 (단위 : 차)		항산화능(%)
발효 횟수 (단위 : 차)		인삼	지황	하수오	황정
한약재 추출물		12.64	9.72	10.64	8.72
실시예	1차	17.86	11.45	14.20	12.46
	2차	27.55	18.91	21.45	17.80
	3차	32.29	21.50	27.70	21.76
	4차	45.69	33.78	36.55	33.50
	5차	50.41	49.58	51.77	41.11
	6차	55.97	54.80	56.51	48.66
	7차	64.82	65.15	67.84	59.29
	8차	71.52	67.96	72.17	66.32
	9차	75.68	70.36	76.50	72.67

표 1에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 한약재 발효물의 항산화능이 비교예에 따른 한약재 추출물에 비해 월등히 높은 것을 확인할 수 있었다. 또한, 본 발명에 따른 한약재 발효물 중에서도 발효 횟수가 높은 것이 그렇지 않은 것에 비해 항산화능이 좋은 것으로 확인되었다.

[ 실험예 2] 세포증식 효과 실험

사람의 섬유아세포(human fibroblast cell)를 96 웰 플레이트에 접종하여 배양하고, 여기에 상기 실시예의 각기 다른 횟수의 발효 공정 수행에 따른 한약재 발효물 및 상기 비교예에 따른 한약재 추출물 각각을 1% 농도로 첨가하고, 2일 동안 배양하였다. 그리고 MTT 시험을 통해 각 시료에 대한 세포증식을 평가였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

이때, 비교군으로는 혈청(serum) 1 %를 부가하여 사용하였다.

발효 횟수 (단위 : 차)		세포 증식능(%)
발효 횟수 (단위 : 차)		인삼	지황	하수오	황정
한약재 추출물		20.55	22.98	17.52	20.48
실 시 예	1차	22.09	23.15	18.77	22.72
	2차	36.68	33.91	29.12	43.54
	3차	34.65	31.17	32.42	20.86
	4차	34.72	25.64	34.92	24.79
	5차	31.79	30.23	29.94	33.56
	6차	32.86	31.01	30.62	28.59
	7차	35.04	31.54	30.60	18.77
	8차	35.32	28.91	31.15	22.62
	9차	32.33	29.91	28.98	25.06
비교군 (1% FBS)		28.93

표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 한약재 발효물은 2차 발효 이후부터는 대체적으로 우수한 세포증식 효과를 나타내고 있음을 확인할 수 있었다. 특히, 비교군인 1% FBS(Fetal bovin serum)에 비해 전반적으로 높은 세포증식 효과가 높아지는 것을 알 수 있었다.

[ 실험예 3] 콜라겐 합성 효과 실험

상기 실시예에 따라 제조된 한약재 발효물 및 상기 비교예에 따라 제조된 한약재 추출물의 최종 농도가 각각 0.1% 및 0.01%가 되도록 하였다. 그리고 이들 각각을 사람의 섬유아세포의 배양 배지에 첨가하였다. 상기 배지를 1일 동안 배양한 후에, 배양액을 취하여 PICP EIA kit(procollagen type I c-peptide enzyme immuno assay kit)로 콜라겐 생합성 정도를 분광광도계를 이용하여 450㎚에서 측정하였다. 콜라겐의 생합성 정도는 대조군(무혈청 배지)에 대한 상대적인 합성 정도로 계산하였으며, 그 결과를 표 3에 나타내었다.

시료의 종류		콜라겐 합성 증진 효과 (%)
대조군(무혈청 배지)		100
실시예에 따른 한약재 발효물	0.1 %	116.3
실시예에 따른 한약재 발효물	0.01 %	114.3
비교예에 따른 한약재 추출물	0.1 %	111.3
비교예에 따른 한약재 추출물	0.01 %	106.9

표 3에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 한약재 발효물은 대조군 및 비교예에 따른 한약재 추출물에 비해 콜라겐 합성 증진 효과가 뛰어남을 확인할 수 있었다.

[ 실험예 4] 세포독성 실험

화장품에 사용되는 원료로서의 1차 안전성을 검증하고자, V79-4 세포(차이니스 햄스터, 폐 조직 섬유아세포의 연속 세포주)를 이용한 MTT 시험을 통해 상기 실시예 따른 한약재 발효물에 대한 세포독성 실험을 진행하였다(Mossman T., Journal of Immunological Methods, 1983, 65, 55-63). 이때, 대조군으로 소듐라우릴설페이트(sodium lauryl sulfate, SLS)와 안정성이 우수한 유용성 원료인 스쿠알란(squalane)을 사용하였다. 상기 실험에 대한 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

시료	^aIC₅₀ (%, w/v)
소디움라우릴설페이트(SLS)	0.005
스쿠알란	0.05
실시예에 따른 한약재 발효물	10.0

(^aIC₅₀: 억제농도(Inhibitory Concentration) 50, 50%의 세포를 사멸시키는 농도)

표 4에 나타난 바와 같이, 한약재 발효물의 IC₅₀ 값은 10으로 소디움라우릴설페이트에 비하여 2,000배 이상 세포독성이 낮게 나타났으며, 안전성이 우수한 유용성 원료인 스쿠알란(squalane)에 비해서도 200배 이상 세포독성이 낮게 나타난 것을 확인할 수 있었다. 따라서, 본 발명에 따른 한약재 발효물은 그 안전성이 매우 우수하다는 것을 알 수 있었다.

[ 실험예 5] 알러지 테스트( local lymph node assay , LLNA )

상기 실시예에 따른 한약재 발효물의 알러지 유발 여부를 확인하기 위하여 운반 매개물로서 아세톤:올리브오일(4:1) 용액을 사용하는 실험법을 수행하였다(Kimber Ⅰ., J. Appl. Toxicol., 1990, 10(3), 173-180).

상기 실시예에 따라 제조한 한약재 발효물을 각각 20%, 40%, 60% 농도의 용액으로 제조하였다. 그리고 생쥐(Balb/c)의 양쪽 귀에 50㎕씩 3일 동안 발라준 후에, 쥐로부터 이개임파절(auricular lymph node)을 분리하였다. 임파절을 분쇄하여 단일세포 상태로 만들고, 방사성 동위원소인 [3H]-메틸티미딘([3H]-methyl thymidine)을 첨가하여 24시간 동안 배양하였다. 그리고 β-신틸레이션 계수기(Beckman LS 6000 TA, USA)를 이용하여 시료에 대한 평균 세포수(cpm, counts per minute) 및 세포의 증폭도(dpm, disintegrations per minute)를 측정함으로써, 알러지 유발 여부를 확인하였다. 그 결과를 표 5에 나타내었다.

시료	림프절세포 (10⁷세포/㎖)	평균 세포수 (cpm)	세포의 증폭도 (dpm)
아세톤:올리브오일 (4:1)	1.70	2870	운반매개물
한약재 발효물 20 %	1.71	2296	0.8
한약재 발효물 40 %	2.04	3157	1.1
한약재 발효물 60 %	3.23	4592	1.6

표 5에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 한약재 발효물은 증폭도가 2 이하인 것으로 미루어 보아, 알러지 유발 가능성이 거의 없는 것으로 나타났다.

Claims

인삼, 생지황, 하수오 및 황정으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 한약재를 가열멸균에 의해 가수분해시키는 제1 단계;
상기 제1 단계에서 가수분해된 한약재를 효모 또는 유산균 중 어느 하나의 제1 발효균으로 발효시키는 제2 단계;
상기 제2 단계에서 발효된 한약재를 가열멸균에 의해 가수분해시키는 제3 단계; 및
상기 제3 단계에서 가수분해된 한약재를 효모 또는 유산균 중 어느 하나의 제2 발효균으로 발효시키는 제4 단계;
를 포함하는, 피부 노화 개선 또는 방지 효과가 증진된 한약재 발효물의 제조방법.
삭제
제 1항에 있어서, 상기 제1 발효균과 제2 발효균이 서로 다른 것을 특징으로 하는 한약재 발효물의 제조방법.
제 1항에 있어서, 상기 제1 단계 내지 제4 단계를 1회 내지 5회 반복 수행하는 것을 특징으로 하는 한약재 발효물의 제조방법.
삭제
제 1항에 있어서, 상기 효모는 사카로마이세스 세레비지애, 시조사카로마이세스 폼베, 클루레로마이세스 락티스 및 사카로마이세스 보울라디로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 한약재 발효물의 제조방법.
제 1항에 있어서, 상기 유산균은 락토바실러스 브레비스, 락토바실러스 카제이, 락토바실러스 플란타룸, 락토바실러스 애시도필러스, 락토바실러스 헬베티커스 및 락토바실러스 델브루에키 아종 불가리쿠스로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 한약재 발효물의 제조방법.
제1항, 제3항, 제4항, 제6항 및 제7항 중 어느 한 항의 제조방법에 따라 제조된 한약재 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 개선 또는 방지용 화장료 조성물.
삭제
제 8항에 있어서, 상기 한약재 발효물은 화장료 전체 조성물의 중량 대비 0.0001 내지 50중량%인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 8항에 있어서, 상기 화장료 조성물의 제형은 피부외용연고, 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 팩, 에멀젼 및 오일젤로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 8항에 있어서, 상기 화장료 조성물이 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제 및 향료로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 첨가제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.