KR101686112B1 - 락토바실러스 배양용 배지 조성물, 이를 포함하는 인삼 열매 발효 추출물 및 피부상태 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

락토바실러스 배양용 배지 조성물, 이를 포함하는 인삼 열매 발효 추출물 및 피부상태 개선용 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 락토바실러스 배양용 배지 조성물 및 이를 포함하는 인삼 열매 발효 추출물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 배지 조성물 총 중량에 대하여 인삼(Panax ginseng C.A. Meyer) 배지 조성물 총 중량에 대하여 인삼(Panax ginseng C.A. Meyer) 열매 추출물 5 내지 10중량%, Radish 0.5 내지 1중량%, 소디움클로라이드(Sodium chloride) 0.5 내지 2중량%, 효모 추출물(Yeast extract) 1 내지 5중량%, 글루코오스(Glucose) 1 내지 10중량% 및 나머지는 물을 포함하는 것을 특징으로 하는 락토바실러스 배양용 배지 조성물을 제공함으로써, 배양액 자체를 발효물로 이용할 수 있고, 기존의 락토바실러스 배양용 화학 배지(MRS 배지)와 동등 수준으로 균주의 생장율을 증진시킬 수 있을 뿐만 아니라, 상기 배지 조성물에 락토바실러스 균주를 접종하고 배양하여 수득된 인삼 열매 발효 추출물을 식품 및 화장품 조성물로 적용 시 우수한 피부 항산화, 미백, 항염증 및 주름개선 효과를 부여할 수 있다.

Description

락토바실러스 배양용 배지 조성물, 이를 포함하는 인삼 열매 발효 추출물 및 피부상태 개선용 화장료 조성물 {Composition of culture medium for cultivation of Lactobacillus, ginseng berry-fermented extracts comprising thereof and cosmetic composition for improving skin conditions}
본 발명은 락토바실러스 배양용 배지 조성물, 이를 포함하는 인삼 열매 발효 추출물 및 피부상태 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 기존의 락토바실러스 배양용 화학 배지(MRS 배지)를 대체할 수 있는 수준의 천연 배지 조성물을 개발함으로써, 배양액 자체를 발효물로 이용할 수 있고, 기존의 락토바실러스 배양용 화학 배지(MRS 배지)와 동등 수준으로 균주의 생장율을 증진시킬 수 있을 뿐만 아니라, 상기 배지 조성물에 락토바실러스 균주를 접종하고 배양하여 수득된 인삼 열매 발효 추출물을 화장품 조성물로 적용 시 우수한 피부상태 개선 효과를 부여할 수 있는 락토바실러스 배양용 배지 조성물, 이를 포함하는 인삼 열매 발효 추출물 및 피부상태 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
인삼(Panax ginseng C.A. Meyer)은 오가피과 인삼 속에 속하는 식물로서 한국, 중국 및 일본 등지에서 2,000여년 전부터 사용되어 온 생약으로 질병을 예방하고 수명을 연장시킬 목적으로 사용되어 왔다. 지금까지 알려진 인삼의 효능 및 효과는 중추신경계에 대한 작용, 항발암 작용, 항암활성, 면역기능 조절작용, 항당뇨 작용, 간기능 항진효능, 심혈관 장해개선, 항동맥경화 작용, 혈압조절 작용, 갱년기 장애 개선, 골다공증에 미치는 효과, 항스트레스 및 항피로 작용, 항산화 활성 및 노화억제 효능 등이 있다.
인삼의 주요 약효성분으로 배당체 성분인 40여종 이상의 진세노사이드(Ginsenoside)를 비롯하여 비(非)사포닌계의 생리활성 물질로 폴리아세틸렌(Polyacetylene), 페놀성 화합물(Phenolic compounds), 산성 다당류(Acid polysaccharides), 펩타이드(Peptides), 알칼로이드(Alkaloids) 등 인체에 유용한 다양한 성분들이 함유되어 있다.
인삼의 대표적 생리활성 성분인 진세노사이드(Ginsenoside)는 인삼에 함유된 사포닌(Saponin)을 의미하며, 인삼에는 다양한 종류의 진세노사이드 성분이 함유되어 있다. 진세노사이드는 인삼의 지상 및 지하부에 고르게 분포되어 있으며, 특히 인삼 근(뿌리), 인삼엽 및 인삼 열매 등 부위에 따라 진세노사이드 함량 뿐만 아니라 조성도 다른 것으로 알려져 있다.
인삼의 진세노사이드는 인삼 건조량의 약 5％를 차지하며, 트리터페노이드(Triterpenoid) 계열의 다마란(Dammarane) 골격에 포도당(Glucose), 아라비노즈(Arabinose), 자일로즈(Xylose), 람노즈(Rhamnose) 등이 결합되어 있는 중성 배당체이다. 비당부분에 붙어있는 -OH의 수에 따라 2개인(3, 12번 위치) 경우 프로토파낙사디올 (Protopanaxadiol; PPD) 계열 사포닌, 3개인(3, 6, 12번 위치) 경우 프로토파낙사트리올 (Protopanaxatriol; PPT) 계열 사포닌이라 한다. PPD과 PPT의 R1, R2, R3 위치의 -OH에 글루코오스(Glucose), 아라비노오스(Arabinose), 자일로오스(Xylose), 람노오스(Rhamnose) 등이 결합된다. 30종 이상의 진세노사이드가 인삼으로부터 분리 보고되었으나 실제 인삼을 추출하여 분석할 때 상당한 양이 검출되는 것은 Rb1, Rb2, Rc, Rd, Re, Rg1의 6종이 전체 사포닌의 90％ 이상을 차지하고 있으며 나머지 사포닌 성분들은 그 함량이 낮다.
상기 진세노사이드는 인체 내에서 그대로 흡수되는 것이 아니라 인체 장내에 존재하는 박테리오데스(Bacteriodes), 락토바실러스(Lactobacillus), 푸조박테리움(Fusobacterium), 유박테리움(Eubacterium), 프로베탈라(Provetella) 종 등의 미생물에 의하여 분해되어 그 대사체가 흡수된다. 진세노사이드 Rb1의 경우 장내 미생물에 의해 진세노사이드 Rd, 컴파운드 케이(compound K, 이하 C-K라로 약칭함)와 프로토파낙사디올로 순차적으로 전환된다. PPD계 진세노사이드인 Rb1, Rb2, Rc, Rd는 장내에서 20-O-β-D-glucopyranosyl-20(S)-protopanaxadiol(C-K)로 대사되어 흡수된다. PPT계 진세노사이드 Re, Rf, Rg1은 장내에서 Rh1, F1, Protopanaxatriol로 대사된다. Rb1, Rb2, Rc, Rd 등은 장내 미생물에 의하여 20(R)-/20(S)-ginsenoside Rg3로 전환되며, Rg3는 장내 미생물에 의하여 Rh2로 전환된다.
최근에는 이러한 인삼의 약효성분이 인체 내로 용이하게 흡수되도록 하며, 인삼에 극미량으로 존재하는 성분들을 강화시키는 방법으로서 인삼을 장내 미생물 또는 유산균을 이용하여 발효하거나 및 효소를 처리하는 방법 등이 사용되고 있다. 대한민국 등록특허공보 제10-1017378호는「발효인삼, 발효홍삼의 제조방법 및 이에 적합한 청국장 유래의 바실러스 서브틸리스 신균주」에 관한 것으로서, 청국장에서 분리된 바실러스(Bacillus) 속 미생물을 이용하여 인삼 및 홍삼을 발효시켜 진세노사이드 Rd의 함량을 증진시키는 것을 특징으로 하는 발효인삼 및 발효홍삼의 제조방법 및 이에 적합한 청국장 유래의 바실러스 서브스틸리스 신균주에 관한 기술이 개시되어 있다.
또한, 대한민국 등록특허공보 제10-1240192호는「락토바실러스 아시도필러스 Ｋ-59 균주, Ｋ-59 균주를 이용한 인슐린 분비 개선용 인삼 발효 추출물 및 이의 제조방법」에 관한 것으로서, 새롭게 분리 동정된 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacillus acidophilus) K-59 (KFCC11467P) 균주를 이용하여 인삼의 생체이용률이 낮은 성분인 진세노사이드 Rg1, Rb1 또는 Re을 진세노사이드 Rh1, Rg3, Rh2 또는 C-K로 전환시키는 방법이 개시되어 있다.
한편, 유산균 배양에 이용되는 배지의 조성 성분에 여러 종류의 화학적 인공합성 배지를 필수적으로 사용하고 있어 그 유해성이 우려될 뿐만 아니라 복잡한 화학 배지의 조성은 그 하나하나의 성분이 균사체 배양에 해로운 영향을 끼칠 수 있기 때문에, 보다 안전하게 화장품, 식품 등의 목적으로 이용하기 위하여 화학적 성분을 최소화한 천연 배지를 이용하면서 화학 배지와 동등 수준으로 유산균의 생장율을 증진시킬 수 있는 방법이 요구되고 있다.
이에, 본 발명자들은 새롭게 균주를 배양 할 수 있는 천연 배지, 즉 인삼(Panax ginseng C.A. Meyer) 열매 추출물, 무(Radish), 소디움클로라이드(Sodium chloride), 효모 추출물(Yeast extract), 글루코오스(Glucose) 및 물의 성분이 최적의 조성으로 포함된 천연 배지에 락토바실러스 속 균주를 접종하여 배양할 경우, 기존의 화학 배지와 동등 수준의 균주 생장율을 나타낼 수 있을 뿐만 아니라, 천연 배지 성분에 함유된 인삼 열매 성분 중 생체 이용률이 낮은 진세노사이드(Ginsenoside) Re, Rg1을 생체이용률이 높은 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2로 전환시켜 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2의 함량을 현저하게 증진시킬 수 있으며, 피부 항산화, 미백, 항염증 및 주름개선 효과 등 전반적인 피부상태 개선 효과를 부여할 수 있다는 사실을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.
대한민국 등록특허공보 제10-1017378호 대한민국 등록특허공보 제10-1240192호
본 발명의 목적은 기존의 락토바실러스 배양용 화학 배지(MRS 배지)와 동등 수준으로 균주의 생장율을 증진시킬 수 있는 천연 배지 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 천연 배지 조성물에 락토바실러스 속 균주를 접종하고 배양하여 인삼 열매 발효 추출물을 수득함으로써, 천연 배지 성분에 함유된 인삼 열매 성분 중 생체 이용률이 낮은 진세노사이드(Ginsenoside) Re, Rg1을 생체이용률이 높은 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2로 전환시켜 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2의 함량을 현저하게 증진시킬 수 있을 뿐만 아니라, 피부 항산화, 미백, 항염증 및 주름개선 효과를 부여할 수 있는 인삼 열매 발효 추출물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 인삼 열매 발효 추출물을 포함하는 피부상태 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 락토바실러스 배양용 배지 조성물, 이를 포함하는 인삼 열매 발효 추출물 및 피부상태 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 락토바실러스 배양용 배지 조성물은 배지 조성물 총 중량에 대하여 인삼(Panax ginseng C.A. Meyer) 열매 추출물 5 내지 10중량%, 무(Radish) 0.5 내지 1중량%, 소디움클로라이드(Sodium chloride) 0.5 내지 2중량%, 효모 추출물(Yeast extract) 1 내지 5중량%, 글루코오스(Glucose) 1 내지 10중량% 및 나머지는 물을 포함하는 것일 수 있다.
상기 인삼 열매 추출물은 물, 메탄올, 에탄올, 헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 글리세린 및 이들의 혼합 용매 중에서 선택된 용매로 추출하여 얻어진 추출물인 것일 수 있다.
상기 락토바실러스는 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) 및 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus) 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
상기 락토바실러스 배양용 배지 조성물은 배지 조성물 총 중량에 대하여 인삼 사포닌을 0.1 내지 1중량%를 추가적으로 포함하는 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 제1항 내지 제4항 중 선택되는 어느 한 항의 락토바실러스 배양용 배지 조성물에 락토바실러스 균주를 접종하고 배양하여 수득된 인삼 열매 발효 추출물을 제공한다.
상기 인삼 열매 발효 추출물은 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2의 함량이 증대된 것일 수 있다.
상기 인삼 열매 발효 추출물은 피부 항산화, 미백, 항염증 및 주름개선용인 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 인삼 열매 발효 추출물을 포함하는 피부상태 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 인삼 열매 발효 추출물은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 20중량% 포함하는 것일 수 있다.
본 발명은 기존의 화학 배지(MRS 배지)와 동등 수준으로 락토바실러스 속 균주의 생장율을 증진시킬 수 있는 천연 배지 조성물을 제공한다. 상기한 천연 배지 조성물에 락토바실러스 속 균주를 접종하여 배양할 경우, 천연 배지 성분에 함유된 인삼 열매 성분 중 생체 이용률이 낮은 진세노사이드(Ginsenoside) Re, Rg1을 생체이용률이 높은 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2로 전환시킴으로써 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2의 함량이 현저하게 증진된 인삼 열매 발효 추출물을 얻을 수 있다. 또한, 상기 인삼 열매 발효 추출물은 피부 항산화, 미백, 항염증 및 주름개선 효과가 우수하기 때문에, 상기 인삼 열매 발효 추출물을 유효 성분으로 화장료 베이스에 적용하였을 때 피부상태 개선 효과가 우수한 화장료 조성물을 제공할 수 있다.
도 1은 실시예 1로부터 수득된 인삼 열매 발효 추출물의 시간 변화에 따른 락토바실러스 속 균주의 배양 정도를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 실시예 1로부터 수득된 인삼 열매 발효 추출물의 세포생존율(Cell viability) 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 실시예 1로부터 수득된 인삼 열매 발효 추출물의 DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) 소거 활성 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 실시예 1로부터 수득된 인삼 열매 발효 추출물의 티로시나제(Tyrosinase) 효소 저해 활성 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 비교예 1로부터 수득된 인삼 열매 발효 추출물의 티로시나제(Tyrosinase) 효소 저해 활성 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명의 실시예 1로부터 수득된 인삼 열매 발효 추출물의 엘라스타아제(Elastase) 억제 활성 결과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명의 실시예 1로부터 수득된 인삼 열매 발효 추출물의 NO(Nitric Oxide) 억제 활성 결과를 나타낸 그래프이다.
이에 본 발명자들은 기존의 락토바실러스 배양용 화학 배지(MRS 배지)와 동등 수준으로 균주의 생장율을 증진시킬 수 있는 새로운 천연 배지를 개발하고자, 다양한 성분의 조성을 조절하여 락토바실러스 속 균주의 원활한 생장을 확인하였다. 그 결과, 본 발명의 천연 배지 조성물은 기존의 화학 배지(MRS 배지)와의 비교 실험을 통해 기존의 화학적 배지를 대체 할 수 있는 수준의 배양물을 생산할 수 있는 것을 확인하였다.
또한, 본 발명의 락토바실러스 배양용 배지 조성물에 락토바실러스 균주를 접종하고 배양하는 단계를 통해서 수득할 수 있는 인삼 열매 발효 추출물은 생체 이용률이 낮은 진세노사이드(Ginsenoside)Re, Rg1을 생체이용률이 높은 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2로 전환시켜 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2의 함량을 현저하게 증진시킬 수 있을 뿐만 아니라, 우수한 피부 항산화, 미백, 항염증 및 주름개선 효과를 부여할 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명하기로 한다.
본 발명은 락토바실러스 배양용 배지 조성물 및 이를 포함하는 인삼 열매 발효 추출물을 제공한다.
본 발명에 바람직한 양태에 따르면, 상기 락토바실러스 배양용 배지 조성물은 배지 조성물 총 중량에 대하여 인삼(Panax ginseng C.A. Meyer) 열매 추출물 5 내지 10중량%, 무(Radish) 0.5 내지 1중량%, 소디움클로라이드(Sodium chloride) 0.5 내지 2중량%, 효모 추출물(Yeast extract) 1 내지 5중량%, 글루코오스(Glucose) 1 내지 10중량% 및 나머지는 물을 포함할 수 있다.
본 발명에 바람직한 양태에 따르면, 상기 인삼 열매 추출물 제조에 사용되는 인삼 열매는 그 종류, 원산지가 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 고려인삼의 청경종의 열매 등을 사용할 수 있고, 원산지 또한 고려인삼, 삼칠인삼, 베트남인삼, 미국인삼, 죽절인삼 등을 제한 없이 사용할 수 있다.
나아가, 본 발명의 인삼 열매 추출물을 수득하기 위하여 인삼의 부위 중 특별히 인삼의 열매를 사용하였는데, 그 이유는 다른 부위를 사용하는 것에 비해 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2의 함량을 현저하게 증진시킬 수 있기 때문에 인삼의 열매를 사용하는 것이 더욱 효과적이다.
상기 인삼 열매 추출물은 물, 메탄올, 에탄올, 헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 글리세린 및 이들의 혼합 용매 중에서 선택된 용매로 추출하여 얻어진 추출물인 것일 수 있다. 또한, 인삼의 형태로는 열매 추출물, 열매 추출물의 희석액, 열매 분말, 열매 농축물 등 다양한 형태로 사용될 수 있으며 특별히 한정되지 않는다.
상기 인삼 열매 추출물은 배지 조성물 총 중량에 대하여 5 내지 10중량%를 포함할 수 있고, 더욱 바람직하게는 8 내지 10중량%를 포함할 수 있다. 만일, 상기 인삼 열매 추출물이 배지 조성물 총 중량에 대하여 5중량% 미만일 경우에는 균주의 원활한 생장을 유도할 수 없으며, 인삼 열매에 함유된 생체 이용률이 낮은 진세노사이드(Ginsenoside) Re, Rg1을 생체이용률이 높은 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2로 전환시킬 수 있는 효과를 충분히 얻을 수 없고, 10중량%를 초과하는 경우에는 그 이상을 함유하지 않아도 충분한 균주의 원활한 생장 및 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2로 전환율의 우수하기 때문에 비경제적이다.
본 발명에 바람직한 양태에 따르면, 상기 무(Radish)는 배지 조성물 총 중량에 0.5 내지 1중량%를 포함할 수 있 만일, 상기 무(Radish)가 상기 범위를 벗어난 경우에는 균주 생장에 큰 영향을 주지 못하기 때문에 바람직하지 않다.
본 발명에 바람직한 양태에 따르면, 상기 소디움클로라이드(Sodium chloride)는 배지 조성물 총 중량에 대하여 0.5 내지 2중량%를 포함할 수 있고, 더욱 바람직하게는 0.5 내지 1중량%를 포함할 수 있다. 만일, 상기 소디움클로라이드(Sodium chloride)가 배지 조성물 총 중량에 대하여 0.5중량% 미만일 경우에는 효소의 활성을 효율적으로 유도할 수 없고, 2중량%를 초과하는 경우에는 균주 생장을 원활하게 할 수 없기 때문에 바람직하지 않다.
본 발명에 바람직한 양태에 따르면, 상기 효모 추출물(Yeast extract)은 배지 조성물 총 중량에 대하여 1 내지 5중량%를 포함할 수 있고, 더욱 바람직하게는 3 내지 5중량%를 포함할 수 있다. 만일, 상기 효모 추출물(Yeast extract)이 배지 조성물 총 중량에 대하여 1중량% 미만일 경우에는 균주가 원활하게 생장할 수 없고, 5중량%를 초과하는 경우에는 그 이상을 사용하지 않아도 균주 생장량에 큰 영향이 없기 때문에 비효율적이다.
본 발명에 바람직한 양태에 따르면, 상기 글루코오스(Glucose)는 배지 조성물 총 중량에 대하여 1 내지 10중량%를 포함할 수 있고, 더욱 바람직하게는 5 내지 10중량%를 포함할 수 있다. 만일, 상기 글루코오스(Glucose)가 배지 조성물 총 중량에 대하여 1중량% 미만일 경우에는 효소의 활성을 유도하지 못하고, 10중량%를 초과하는 경우에는 더 이상의 효소 활성의 증가가 일어나지 않아 비효율적이다.
본 발명에 바람직한 양태에 따르면, 상기 락토바실러스 배양용 배지 조성물은 인삼 사포닌을 추가적으로 포함할 수 있다. 인삼 사포닌은 배지 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 1중량%를 첨가하는 것이 락토바실러스 속 균주의 활성을 유도할 수 있기 때문에 생체이용률이 낮은 진세노사이드(Ginsenoside) Re, Rg1을 생체이용률이 높은 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2로의 전환 활성이 더욱 효과적이다. 이때, 배지 조성물 총 중량에 대하여 인삼 사포닌의 함량이 0.1중량% 미만일 경우에는 충분한 락토바실러스 속 균주의 활성을 유도할 수 없기 때문에 바람직하지 않고, 1중량%를 초과할 경우에는 그 이상을 함유하지 않아도 충분한 효능을 나타낼 수 있기 때문에 비경제적이다.
상기 락토바실러스 배양용 배지 조성물은 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) 및 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus) 군으로부터 선택되는 어느 하나의 균주를 기존의 락토바실러스 배양용 화학 배지(MRS 배지)에 접종하여 배양하였을 경우와 동등 수준으로 균주를 생장시킬 수 있는 효과가 있다. 본 발명에서 기재된 '화학 배지(MRS 배지)'라 함은 주로 유산균을 선택적으로 배양하는데 좋은 선택 배지를 의미한다. 상기 화학 배지(MRS 배지)는 다양한 화학적 첨가물을 사용하였기 때문에 화장품 등에 적용 시 피부의 자극이 있을 수 있기 때문에 바람직 하지 않다.
또한, 본 발명은 상기한 락토바실러스 배양용 배지 조성물에 락토바실러스 속 균주를 접종하고 배양하여 수득된 인삼 열매 발효 추출물을 제공한다. 본 발명에서'인삼 열매 발효 추출물'이라 함은 인삼(Panax ginseng C.A. Meyer) 열매 추출물, 무(Radish), 소디움클로라이드(Sodium chloride), 효모 추출물(Yeast extract) 및 글루코오스(Glucose)를 최적의 조성으로 포함한 락토바실러스 배양용 배지 조성물에 락토바실러스 속 균주를 접종하고 배양하여 얻어진 배양물을 의미한다. 즉, 배양물 자체를 발효 추출물로서 이용이 가능한 것이다.
본 발명에 바람직한 양태에 따르면, 상기 락토바실러스 배양용 배지 조성물에 락토바실러스 속 균주를 접종하고 배양하는 단계는 30 내지 37℃에서 3 내지 7일동안 이루어지는 것이 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2의 함량을 더욱 높일 수 있기 때문에 바람직하다. 또한, 배양하여 수득된 배양물, 즉 인삼 발효 추출물은 원심분리 및 살균 과정을 거쳐, 균주를 제균하여 이용하는 것이 향후 미생물에 번식에 의한 유효성분의 파괴 방지 및 제품의 안정성 측면에서 바람직하다.
상기한 바와 같이, 천연 배지 조성에 락토바실러스를 접종하고 배양하여 얻어진 인삼 열매 발효 추출물은 인삼에 함유되어 있는 진세노사이드(Ginsenoside) Re, Rg1이 균주가 배양됨에 따라 당을 가수분해시켜 각각 ginsenoside Rg2 및 F1으로 전환시키고 바람직하게는 진세노사이드(Ginsenoside) Re를 Rg2로 생물전환시켜 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2의 함량을 증진시킬 수 있다. 또한, 상기 발효 과정을 거쳐 얻어지는 인삼 열매 발효 추출물은 우수한 피부 항산화, 미백, 항염증 또는 주름개선의 효과가 있어서 피부상태 개선에 효과적인 화장료 조성물로서 적용이 가능하다.
따라서, 본 발명은 상기 인삼 열매 발효 추출물을 포함하는 피부상태 개선용 화장료 조성물을 제공할 수 있는데, 이때, 상기 인삼 열매 발효 추출물은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 20중량% 포함할 수 있다. 만일, 상기 화장료 조성물 총 중량에 대하여 인삼 열매 발효 추출물을 0.001중량% 미만으로 포함시킬 경우에는 함량이 적기 때문에 충분한 피부상태 개선 효과를 얻지 못할 수 있고, 20중량%를 초과하는 경우에는 그 이상의 함량을 첨가하지 않아도 충분한 효과를 구현할 수 있기 때문에 비경제적이다.
상기와 같이 인삼 열매 발효 추출물을 포함하는 피부상태 개선용 화장료 조성물은 주름 개선 효과 및 피부밝기 개선 효과가 우수하기 때문에 전반적인 피부상태를 개선할 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명 하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
<실시예 1>
1-1. 락토바실러스 배양용 배지 제조
먼저, 락토바실러스 배양용 배지를 제조하기 위하여 인삼(Panax ginseng C.A. Meyer) 열매 분말 1kg에 70% EtOH 5L을 가하고 85℃에서 3시간동안 환류 추출한 후 감압 농축하여 추출물을 제조하여 천연 배지 조성에 이용하였다. 다음으로, 균주의 성장률을 확인하기 위해 락토바실러스를 배지에 접종하여 균주의 배양 정도를 확인하였다. 천연 배지의 조성은 하기 표 1과 같다.
성분 함량(중량%)
Radish 0.7
Sodium chloride 0.5
Yeast extract 5.0
Glucose 10.0
Ginseng fruit extract 10.0
증류수 to 100
Total 100
상기와 같은 천연 배지 조성에 의하여 균주는 원활히 생장되며, 기존의 화학 배지(MRS 배지)의 균주 생장율과 비슷한 활성을 나타내었다. 따라서, 락토바실러스를 배양하는데 적합한 배지 조성으로 판단하였다.
1-2. 인삼 열매 발효 추출물 제조
상기 락토바실러스 배양용 배지에 락토바실러스 속 균주(락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) 및 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus))를 접종하여 발효를 진행하였다. 균주의 발효를 보다 효율적으로 하기 위하여 종균 배양을 통해 균주를 37℃에서 3일동안 교반하면서 배양하였다. 종균 배양시에는 균주 활성의 유도를 위하여 상기 락토바실러스 배양용 배지에 인삼 뿌리로부터 분리한 인삼 사포닌을 추가적으로 1중량% 첨가하여 배지를 제조하였으며, 이 락토바실러스 배양용 배지에 균을 접종하여 종균으로 활용하였다. 생장된 종균은 인삼이 첨가된 락토바실러스 배양용 배지에 직접 접종하여 발효 추출물을 생산하고자 하였다. 상기와 같이 락토바실러스 속 균주를 1% 접종하여 37℃에서 3일간 배양을 통해 만들어진 발효 배양물을 8000rpm, 20분 동안 원심분리하여 균체를 제거한 다음, Filter 및 살균을 거쳐 인삼 발효 추출물을 제조하였다.
<비교예 1>
기존의 화학 배지(MRS 배지, Difco社)를 이용하여 락토바실러스 속 균주를 1% 접종하여 37℃에서 3일간 배양하여 균주 배양액을 제조하였다.
<비교예 2>
인삼(Panax ginseng C.A. Meyer) 열매 분말 1kg에 70% EtOH 5L을 가하고 85℃에서 3시간동안 환류 추출한 후 감압 농축하여 추출물을 제조하였다.
<시험예 1> 균주 생장률 비교
상기 실시예 1 및 비교예 1로부터 제조된 인삼 열매 발효 추출물을 각각 1ml에 멸균수 9ml을 가하여 균주 생장율 비교 실험용 시료로 이용하였다. 균주 생장률 분석에는 분광광도계를 사용하여 UV600nm에서 검출하였다. 상기 실시예 1 및 비교예 1의 균주 성장률의 비교 결과는 다음 표 2와 같다.
배양 균주명 비교예 1(화학 배지)
(O.D 600nm)		 실시예１(천연 배지)
(O.D 600nm)
Lactobacillus pentosus 1.51 1.54
Lactobacillus brevis 1.81 1.92
Lactobacillus plantarum 2.05 1.88
Lactobacillus casei 1.54 1.47
Lactobacillus acidophiilus 1.84 1.81
그 결과, 상기 표 2에 나타난 바와 같이 실시예 1 및 비교예 1의 균주 생장률을 비교하여 본 결과, 천연 배지를 이용하여 제조된 인삼 발효 추출물은 기존의 화학 배지를 첨가하여 배양한 비교예 1과 동등 수준으로 균주 생장율을 갖는 것을 확인하였다. 이는, 신규한 배지 조성물이 기존의 화학물질을 대체하여 균주를 생장시킬 수 있음을 보여주는 것이다.
<시험예 2> 진세노사이드 함량 분석 (HPLC; High Performance Liquid Chromatography)
상기 실시예 1 및 비교예 1~2로부터 제조된 인삼 열매 발효 추출물 1g에 수포화 부탄올을 5g 첨가하여 혼합한 다음, 부탄올 혼합액의 상등액을 취하여 감압농축을 하였다. 수득된 농축물을 Methanol (HPLC grade)에 용해 한 후 0.2 ㎛Membrane filter에 여과하여 HPLC 분석용 시료로 이용하였다. HPLC 분석에는 C18column (3.0x50 m㎜, ID 5㎛)을 사용하여 UV 203㎚에서 검출 하였다. 이동상은 Acetonitrile (solvent A)과 Water (solvent B)를 이용하여 Gradient를 주었으며 1.6 ㎖/min 유속으로 분리하였으며, 이동상의 Gradient 조건은 표 3과 같다.
시간(min) 이동상
acetonitrile(solvent A) water (solvent B)
0.00 17 83
6.00 17 83
9.00 23 77
16.5 23.5 76.5
19.00 31 69
29.00 45 55
31.00 47 53
33.00 90 10
34.00 90 10
35.00 17 83
37.00 17 83
상기 실시예 1 및 비교예 1~2의 진세노사이드(Ginsenoside) 성분 변화에 대한 결과는 표 4와 같다.
Re(mg) Rg1(mg) Rg2(mg)
실시예 1 9.13 2.11 10.76
비교예 1 - - -
비교예 2 22.02 17.98 2.52
그 결과, 상기 표 4에 나타난 바와 같이 실시예 1 및 비교예 1~2의 진세노사이드(Ginsenoside) 성분 변화를 분석한 결과, 실시예 1의 인삼 열매 발효 추출물이 비교예 1~2의 인삼 열매 발효 추출물보다 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2의 함량이 현저하게 높은 것을 확인할 수 있었다. 이는 천연 배지 속에 존재하는 인삼 열매 추출물이 락토바실러스에 의하여 발효 되었을 때, 진세노사이드(Ginsenoside) Re, Rg1의 함량이 줄어들고 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2의 함량이 증가된다는 것을 알 수 있었으며, 이는 천연 배지 성분에 함유되어 있는 인삼 열매 추출물의 진세노사이드가 락토바실러스의 발효로 인하여 진세노사이드(Ginsenoside) Re, Rg1가 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2로 전환되는 것을 보여주는 것이다.
<시험예 3> 진세노사이드 Rg2 생성능 분석
상기 실시예 1 내지 4 및 비교예 1 내지 3의 진세노사이드 분석 결과, Rg2의 함량이 현저하게 개선된 실시예 1의 방법으로 얻어진 인삼 열매 발효 추출물 1g에 수포화 부탄올을 5g 첨가하여 혼합한 혼합액을 Silica gel 60 F254 TLC Plate(Merck, Germany)에 점적한 후 Chloroform/methanol/water (65:35:10 v/v/v, lower phase)의 혼합 용매를 사용하여 전개하였다. 전개한 TLC plate는 10% H2SO4을 분사시킨 후 열을 가해 발색시켜 사포닌 전환 양상을 확인하였다.
그 결과, 도 1에서 확인할 수 있듯이 시간이 경과할수록 진세노사이드(Ginsenoside) Re의 함량이 줄어들고 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2의 함량이 증가된 것을 알 수 있으며, 이는 진세노사이드(Ginsenoside) Re가 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2로 전환되는 것을 보여주는 것이다.
<시험예 4> 세포 독성 시험
상기 실시예 1의 방법으로 얻어진 인삼 열매 발효 추출물의 세포 독성을 측정하였다.
본 발명에 따른 상기 추출물에 대한 세포독성을 알아보기 위하여, 구체적으로, 인간 각질형성 세포 HaCat(ACTT, CLS 300493, USA)을 헤마사이토미터(Hemacytometer)를 이용하여 96well plate에 1.5 x 104 cell/well 씩 동일하게 계수하여 분주한 후, 37℃, 5%의 이산화탄소 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양한 후 얻은 세포 배양액을 제거하고, 상기 실시예 1에서 수득된 인삼 열매 발효 추출물을 0, 0.125, 0.25, 0.5, 1, 2, 4%로 농도로 조제하였다. 농도별로 4㎕를 취하여 DMEM 배지와 혼합한 뒤, 각 well　농도별로 처리하였다. 이를 37℃, 5% 이산화탄소 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후 well당 10% WST(high sensitive Water Soluble Tetrazolium salt)를 100㎕씩 첨가하고 동일한 조건에서 2시간 동안 더 배양하였다. 2시간 뒤, ELISA reader(Thermo, Multiskan EX)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 또한, 대조군으로는 시료 대신 증류수(Distilled water)를 사용하여 흡광도를 측정하였다.
세포 활성 정도는 아래 수학식 1에 의해 나타낼 수 있고, 그 결과를 하기 표 7과 도 2에 나타내었다.
[수학식 1]
세포 활성도(%) = (실험군의 흡광도 / 대조군의 흡광도) X 100
시료 실시예 1(인삼 열매 발효 추출물)
농도(%) 0 0.125 0.25 0.5 1 2 4
Cell viability(%) 100 106.18 105.41 106.99 108.74 108.16 109.42
그 결과, 상기 표 5 및 도 2에 나타난 바와 같이 인삼 열매 발효 추출물의 사용 농도가 최고 농도인 4%에서도 세포독성이 없는 것으로 나타난 것으로 보아, 독성이 없는 안전한 원료로 사용이 가능함을 확인하였다.
< 시험예 5> 항산화 효능 검증 시험 : DPPH radical 소거 활성
상기 실시예 1의 방법으로 얻어진 인삼 열매 발효 추출물의 DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) 소거 활성을 측정하였다.
자유라디칼은 일반적으로 외부자극에 대한 활성산소가 과잉 생산되어 피부 보습층을 파괴하여 피부를 건조하게 하고, 외부 자극에 민감한 면역 반응을 보이는 병리적 인자로 작용하게 된다. 본 발명에 따른 인삼 열매 발효 추출물의 항산화능은 DPPH 실험을 통해 자유라디컬 소거능 확인이 가능하다.
본 발명에 따른 상기 추출물에 대한 항산화 효과를 알아보기 위하여, 구체적으로 상기 실시예 1에서 얻어진 인삼 발효 추출물을 다양한 농도로 희석하여 시료를 준비한 후, 이들 시료와 100μM DPPH (1,1-diphenyl -2-picrylhydrazyl) 용액을 혼합하고 4℃에서 30분 동안 반응시킨 후, 96well plate에 담아 DPPH 양을 520nm에서 측정하였다. 그리고 시료를 넣지 않은 경우를 대조군으로 하여 아래의 수학식 2에 의해 시료의 자유라디칼 소거량(Free radical scavenging activity, %)을 계산하였다. DPPH 자유 라디칼 소거능 측정법에 의한 항산화 정도는 수학식 2로 나타내었으며 항산화 효능 결과는 표 6 및 도 3 에 나타내었다.
[수학식 2]
자유라디칼소거능(%)=100-(시료를 처리한 군의 흡광도/시료를 처리하지 않은 군의 흡광도 X 100)]
시료 실시예 1(인삼 열매 발효 추출물)
농도(%) 0 0.0625 0.125 0.25 0.5 1 2 4
free radical scavenging(%) 0 3.48 16.93 18.34 39.42 42.11 58.14 79.84
그 결과, 상기 표 6 및 도 3에 나타난 바와 같이 인삼 열매 발효 추출물인 실시예 1을 농도별로 처리하였을때 유의성있는 DPPH 소거능을 나타내어 높은 항산화 활성을 나타내었다.
<시험예 6> 미백 효능 검증 시험: 티로시나아제(Tyrosinase) 저해 활성
상기 실시예 1의 방법으로 얻어진 인삼 열매 발효 추출물을 비교예 1의 방법으로 얻어진 인삼 추출물과 비교하여 티로시나아제(Tyrosinase) 억제 효과를 측정하였다.
티로시나아제 저해 활성 측정은 티로시나아제의 작용결과 생성되는 DOPA chrome을 비색법 (Pomerantz et al. 1966)에 의해 측정한다. 0.1M sodium phosphate buffer (pH 7.0) 140 μl를 분주한 후 시료 20 μl를 넣는다. 그 후 1,500 U/ml의 Tyrosinase from Mushroom 20 μl를 넣고 혼합한 후, 37℃에서 6분간 반응을 시켰다. 0.06 mM L-DOPA 20 μl를 넣은 후 5분간 37℃ 서 반응을 시키고, 얼음 위에서 방치하여 반응을 정지시킨 후 475 nm에서 흡광도를 측정 활성을 확인하였다. 또한, 시험결과의 비교를 위해 양성대조군으로 미백 성분인 10uM 농도의 알부민(arbumin)을 사용하였다.
티로시나아제 저해 활성 측정에 대한 결과는 하기 표 7, 8 및 도 4, 5와 같다.
시료 Arbumin control 실시예 1(인삼 열매 발효 추출물)
농도(%) 10uM 100 0.1 0.2 0.5 0.4
Tyrosinase 활성(%) 31 100 92 89 81.1 54.5
시료 Arbumin control 비교예 1(인삼 열매 발효 추출물)
농도(%) 10uM 100 0.1 0.2 0.5 1
Tyrosinase 활성(%) 32 100 91 92 83 80
그 결과, 상기 표 7, 8 및 도 4, 5에 나타난 바와 같이 본 발명의 천연 배지를 이용하여 제조한 인삼 열매 발효 추출물인 실시예 1과 기존의 화학 배지를 이용하여 제조한 인삼 열매 발효 추출물인 비교예 1은 농도 의존적으로 티로시나아제(Tyrosinase) 활성을 억제함으로써 효과를 나타냄을 알 수 있었으며, 그 효능 또한 유의성 있는 결과를 나타냄을 알 수 있었다.
하지만, 실시예 1로부터 제조된 인삼 열매 발효 추출물은 비교예 1로부터 제조된 인삼 열매 발효 추출물과 비교시 티로시나아제(Tyrosinase) 억제율이 더 높아 미백 효과가 현저하게 우수함을 알 수 있었다.
<시험예 7> 주름개선 효능 검증 시험 : 엘라스타아제(Elastase) 억제 활성
상기 실시예 1의 방법으로 얻어진 인삼 열매 발효 추출물의 엘라스타아제(Elastase) 억제 활성을 측정하였다.
엘라스아타제(Elastase)는 진피 내 피부탄력을 유지시키는 데 중요한 기질인 엘라스틴을 분해하는 효소이다. 또한 elastase는 다른 중요한 기질단백질인 collagen을 분해할 수 있는 비특이적 가수분해 효소이다. 따라서 elastase 저해제는 피부 주름을 개선하는 작용을 나타내며, ursolic acid 등이 elastase 저해제로서 이용되고 있다. Elastase는 동물 결합조직의 불용성 탄성 섬유 단백질인 elastin을 분해시켜 피부의 진피조기의 그물망 구조 결합을 끊어줌으로서 주름생성의 주원인인 효소로 알려져 있다. 피부의 진피 조직 속에는 collagen과 피부의 탄력성에 관련된 elastin이 그물망 구조를 형성하고 있는데, 이러한 그물망 구조가 깨어지면서 즉 elastin이 elastase에 의해 분해되어 피부가 처지고 주름이 생기므로 내인성 피부노화가 발생한다. 그러므로 피부노화의 주원인 중의 하나인 elastin 분해효소인 elastase의 활성을 저하시킴으로서 피부노화를 억제할 수 있다(Tsuji N, Moriwaki S, Suzuki Y, Takema Y, Imokawa G. 2001. The role of elastases secred by fibroblasts in wrinkle formation : implication through selective inhibition of elastase activity. Photochem. Photobiol 74(2), 283-290).
상기 실시예 1에서 얻어진 인삼 열매 발효 추출물을 다양한 농도로 희석하여 시료를 40㎕를 E-tube에 취하고, 10mM Tris-HCl buffer(pH8.0)에 녹인 N-succinyl-(Ala)3-p-nitroanilide (S4760, Sigma) 1.6 mM 농도의 기질 200㎕를 가한 후, 10mM Tris-HCl buffer(pH8.0)에 녹인 Elastase from porcine pancreas Type Ⅳ (E0258, Sigma) 0.4U/mL의 효소를 40㎕ 첨가하여 25℃에서 5분 동안 반응한 후 분광분석기 410 nm에서 흡광도를 측정하였다. 엘라스타아제 저해활성은 시료를 넣지 않은 경우를 대조군으로 하여 아래의 수학식 3을 이용하여 계산하였다.
엘라스타아제 저해활성을 통한 주름개선 효능 결과는 표 9 및 도 6에 나타내었다.
[수학식 3]
엘라스타아제 저해활성(%)=100-(시료를 처리한 군의 흡광도/시료를 처리하지 않은 군의 흡광도 X 100)
시료 실시예 1(인삼 열매 발효 추출물)
농도(%) 0 0.0625 0.125 0.25 0.5 1 2 4
Elastase
inhibition(%)		 0 1.00 2.73 6.24 9.87 12.42 45.21 92.32
그 결과, 상기 표 9 및 도 6에 나타난 바와 같이 인삼 열매 발효 추출물인 실시예 1을 농도별로 처리하였을때 유의성있는 엘라스타아제(Elastase) 억제율을 나타내어 피부 주름개선 효과가 있는 것을 확인할 수 있었다.
<시험예 8> 항염증 효능 검증 시험 : Nitric oxide(NO) 억제 활성
상기 실시예 1의 방법으로 얻어진 인삼 열매 발효 추출물의 Nitric oxide(NO) 억제 활성을 측정하였다.
Nitric oxide(NO)체내에서 L-아르기닌이 시트룰린을 생성할 때 생성되는 것으로, 과잉 생성 시 우리 몸의 산화를 촉진시키는 자유 라디칼(free radial)로 알려져 있다. 염증 유발 인자인 LPS(Lipopolysaccharide)를 RAW 264.7 cell에 처리하여 NO의 생성량을 활성화 시킨 후, Griess 분석 방법을 통해 Nitric oxide 발현양을 측정한다. LPS는 그람음성균 표층의 펩타이드글리칸을 둘러싸는 외막의 중요한 구성성분으로,'염증 유발 인자'라고 알려져 있다. 이 LPS가 macrophage의 표면에 있는 receptor를 통해 macrophage에 activating signal을 주고, iNOs의 발현에 영향을 주어 NO를 많이 합성할 수 있게 한다고 알려져 있다. 이 반응을 통해 monocyte 형태인 RAW 264.7 cell이 macrophge 형태로 변하게 된다.
본 발명에 따른 상기 추출물에 대한 항염증 효과를 알아보기 위하여, RAW 264.7 cell을 헤마사이토미터(Hemacytometer)를 이용하여 24well plate에 2.0 x 104 cell/well 씩 동일하게 계수하여 분주한 후, 37℃, 5%의 이산화탄소 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양한 후 얻은 세포 배양액을 제거하고, 상기 실시예 1에서 수득된 인삼 열매 발효 추출물을 0, 0.125, 0.25, 0.5, 1%로 농도로 조제한 시료를 농도별로 40㎕를 취하여 DMEM 배지와 혼합한 뒤, 각 well　농도별로 처리하였다. 이를 37℃, 5% 이산화탄소 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 이때, NO를 발현시키기 위해, LPS를 1㎍/㎖도 같이 처리하였다. 그 후 배양액 중 100㎖ 를 96 well plate에 취하고 Griess reagent A 50㎕와 Griess reagent B 50㎕를 각각 넣어준 뒤 각각 10min간 반응시킨 뒤, ELISA plate reader를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 또한, Sodium nitrite를 standard로 하여 측정하였으며, LPS를 처리하지 않은 군을 대조군으로 하여, LPS와 실시예 1의 인삼 발효 추출물을 각각 농도별로 처리한 실험군의 NO2 -의 생성 농도를 비교하여 그 결과를 표 10 및 도 7에 나타내었다.
시료 실시예 1(인삼 열매 발효 추출물)
농도(%) 0 0.125 0.25 0.5 1
Nitric Oxide
inhibition(%)		 0 40.6 78.3 99.6 99.4
그 결과, 상기 표 10 및 도 7에 나타난 바와 같이 실시예 1의 방법으로부터 수득된 인삼 열매 발효 추출물을 농도별로 처리하였을 때 유의성있는 NO(Nitric Oxide) 억제율을 나타내어 항염 효과가 우수하다는 것을 확인할 수 있었다.
<처방예>
1-1. 페이셜 스킨 제조
하기 표 11의 원료를 이용하여 페이셜 스킨을 제조하였다.
비교예
(중량%)		 실시예 1-1
(중량%)		 실시예 1-2
(중량%)		 실시예 1-3
(중량%)
1. EDTA 0.03 0.03 0.03 0.03
2. 카보머 적량 적량 적량 적량
3. 베타인 2.0 2.0 2.0 2.0
4. 트로메타민 적량 적량 적량 적량
5. PEG-40수소첨가 피마자유 0.4 0.4 0.4 0.4
6. 부틸렌글라이콜 5.0 5.0 5.0 5.0
7. 페녹시에탄올 적량 적량 적량 적량
8. 인삼 열매 발효 추출물 0 0.001 1.0 20.0
9. 향료 적량 적량 적량 적량
10. 정제수 잔량 잔량 잔량 잔량
합 계 100 100 100 100
1-2. 페이셜 에센스 제조
하기 표 12의 원료를 이용하여 페이셜 에센스를 제조하였다.
비교예
(중량%)		 실시예 2-1
(중량%)		 실시예 2-2
(중량%)		 실시예 2-3
(중량%)
1. 글리세린 9.0 9.0 9.0 9.0
2. 카보머 적량 적량 적량 적량
3. 디프로필렌글라이콜 10.0 10.0 10.0 10.0
4. 실리콘오일 5.0 5.0 5.0 5.0
5. 폴리글리세릴-10스테아레이트 2.0 2.0 2.0 2.0
6. 폴리소르베이트 0.5 0.5 0.5 0.5
7. 페녹시에탄올 적량 적량 적량 적량
8. EDTA 0.03 0.03 0.03 0.03
9. 인삼 열매 발효 추출물 0 0.001 1.0 20.0
10. 향료 적량 적량 적량 적량
11. 정제수 잔량 잔량 잔량 잔량
합 계 100 100 100 100
1-3. 페이셜 로션 제조
하기 표 13의 원료를 이용하여 페이셜 로션을 제조하였다.
비교예
(중량%)		 실시예 3-1
(중량%)		 실시예 3-2
(중량%)		 실시예 3-3
(중량%)
1. 글리세린 5.0 5.0 5.0 5.0
2. 카보머 적량 적량 적량 적량
3. 세토스테아릴알코올 2.0 2.0 2. 2.0
4. 트로메타민 적량 적량 적량 적량
5. 하이드로제네이티드폴리 3.0 3.0 3.0 3.0
6. 폴리소르베이트 1.0 1.0 1.0 1.0
7. 디메치콘 0.3 0.3 0.3 0.3
8. 페녹시에탄올 적량 적량 적량 적량
9. EDTA 0.02 0.03 0.03 0.03
10. 인삼 열매 발효 추출물 0 0.001 1.0 20.0
11. 향료 적량 적량 적량 적량
12. 정제수 잔량 잔량 잔량 잔량
합 계 100 100 100 100
1-4. 페이셜 크림 제조
하기 표 14의 원료를 이용하여 페이셜 크림을 제조하였다.
비교예
(중량%)		 실시예 4-1
(중량%)		 실시예 4-2
(중량%)		 실시예 4-3
(중량%)
1. 글리세린 5.0 5.0 5.0 5.0
2. 카보머 적량 적량 적량 적량
3. 디메치콘 5.0 5.0 5.0 5.0
4. 세토스테아릴알코올 2.0 2.0 2.0 2.0
5. 스테아레스 1.5 1.5 1.5 1.5
6. 베타인 1.0 1.0 1.0 1.0
7. 토코페릴아세테이트 0.1 0.1 0.1 0.1
8. 페녹시에탄올 적량 적량 적량 적량
9. EDTA 0.02 0.02 0.02 0.02
10. 인삼 열매 발효 추출물 0 0.001 1.0 20.0
11. 향료 적량 적량 적량 적량
12. 정제수 잔량 잔량 잔량 잔량
합 계 100 100 100 100
1-5. 페이셜 수면팩 제조
하기 표 15의 원료를 이용하여 페이셜 수면팩을 제조하였다.
비교예
(중량%)		 실시예 5-1
(중량%)		 실시예 5-2
(중량%)		 실시예 5-3
(중량%)
1. 글리세린 3.0 3.0 3.0 3.0
2. 소듐 폴리아크릴레이트 적량 적량 적량 적량
3. 소르비톨액 2.0 2.0 2.0 2.0
4. 알란토인 0.05 0.05 0.05 0.05
5. 디카프릴릴카보네이트 2.0 2.0 2.0 2.0
6. 디메치콘 2.0 2.0 2.0 2.0
7. 소듐스테아로일글루타메이트 0.15 0.15 0.15 0.15
8. 페녹시에탄올 적량 적량 적량 적량
9. 부틸렌글라이콜 3.0 3.0 3.0 3.0
10. 인삼 열매 발효 추출물 0 0.001 1.0 20.0
11. 향료 적량 적량 적량 적량
12. 정제수 잔량 잔량 잔량 잔량
합 계 100 100 100 100
< 시험예 9> 주름개선 및 피부밝기 개선 효과 측정
상기 처방예 중에서 페이셜 크림중 실시예 4-2 및 비교예를 이용하여 주름개선 및 피부밝기 개선 효과를 측정하였다.
9-1. 주름개선 효과 측정
30세 이상 60세 이하 여성 20명을 대상으로 상기 처방예 중 실시예 4-2 및 비교예를 각각 4주간 양쪽 눈가주름 부위에 사용하게 한 후 눈가 주름 주형(replica)을 영상분석법으로 피부미세주름측정기(SV600, Courage and Khazaka, Germany)를 이용하여 주름의 깊이를 측정하였다. 주름 변화 값(R1, R2, R3, R4, R5)이 낮을수록 주름개선 효과가 높음을 의미한다. 결과는 표 16에 나타내었다.
<주름 변화 값>
R1(Skin Roughness, Rt)
: 주름의 굴곡 중 최고 높이와 최저 계곡의 거리
R2(Maximum Roughness, Rm)
: 주름 굴곡을 일정한 구간으로 5등분하여 얻어진 각 구간의 가장 큰 R1값
R3(Average Roughness, Rz)
: 주름 굴곡을 일정한 구간으로 5등분한 후 얻어진 구간의 R1값들의 평균값
R4(Smoothness Roughness, Rp)
: 주름 높이의 평균 지점과 주름 표면 사이의 평균 거리
R5(Arithmetic Average Roughness, Ra) : R4의 표준 편차
9-2. 피부밝기 개선 효과 측정
30세 이상 60세 이하 여성 20명을 대상으로 상기 처방예 1-4의 실시예 4-2 및 비교예를 각각 4주간 사용하게 한 후 분광측색계(Spectrophotometer CM600-d, Konicaminolta)하여 피부밝기를 L값으로 측정하였다. 피부밝기 변화 값이 높을수록 피부밝기 개선 효과가 높음을 의미한다. 결과는 표 16에 나타내었다.
시료 주름변화값 사용 전 사용 2주 후 사용 4주 후 피부 변화
사용 2주 후 사용 4주 후
주름 비교예 R1 0.098 0.103 0.037 ▲0.005 ▲0.016
R2 0.055 0.058 0.022 ▲0.003 ▲0.010
R3 0.037 0.037 0.015 ▲0.000 ▲0.006
R4 0.052 0.057 0.018 ▲0.004 ▲0.007
R5 0.019 0.019 0.011 ▲0.000 ▲0.003
실시예 4-2 R1 0.104 0.101 0.021 ▼0.003 ▼0.013
R2 0.063 0.059 0.014 ▼0.005 ▼0.009
R3 0.042 0.040 0.009 ▼0.002 ▼0.005
R4 0.054 0.053 0.013 ▼0.001 ▼0.006
R5 0.019 0.019 0.006 ▼0.000 ▼0.002
피부
밝기		 비교예 L* 47.21 47.25 47.30 ▲0.04 ▲0.09
실시예 4-2 L* 48.79 51.16 52.45 ▲2.37 ▲3.66
그 결과, 표 16에 나타난 바와 같이 처방예 중 실시예 4-2는 사용 4주 후에 주름, 피부밝기 개선 효과가 있음을 알 수 있었다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (10)

  1. 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) 및 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종의 락토바실러스 배양용 배지 조성물에 있어서,
    배지 조성물 총 중량에 대하여 인삼(Panax ginseng C.A. Meyer) 열매 추출물 5 내지 10중량%, 무(Radish) 0.5 내지 1중량%, 소디움클로라이드(Sodium chloride) 0.5 내지 2중량%, 효모 추출물(Yeast extract) 1 내지 5중량%, 글루코오스(Glucose) 1 내지 10중량% 및 나머지는 물을 포함하되,
    상기 인삼 열매 추출물은 70% EtOH로 추출하여 얻어진 추출물인 것을 특징으로 하는 락토바실러스 배양용 배지 조성물.


  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 락토바실러스 배양용 배지 조성물은 배지 조성물 총 중량에 대하여 인삼 사포닌을 0.1 내지 1중량%를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 락토바실러스 배양용 배지 조성물.
  5. 제1항 및 제4항 중 선택되는 어느 한 항의 락토바실러스 배양용 배지 조성물에 락토바실러스 균주를 접종하고 배양하여 수득된 진세노사이드(Ginsenoside) Rg2의 함량이 증대된 것을 특징으로 하는 인삼 열매 발효 추출물.

  6. 삭제
  7. 제 5항에 있어서,
    상기 인삼 열매 발효 추출물은 주름개선용인 것을 특징으로 하는 인삼 열매 발효 추출물.
  8. 제 5항의 인삼 열매 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물.
  9. 제 8항에 있어서,
    상기 인삼 열매 발효 추출물은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 20중량% 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  10. 제 5항에 있어서,
    상기 인삼 열매 발효 추출물은 미백용인 것을 특징으로 하는 인삼 열매 발효 추출물.
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