KR101621506B1 - Composition for enhancing blood circulation containing the extract of Glycine soja seed as an active ingredient - Google Patents
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Abstract
본 발명은 돌콩 추출물을 포함하는 혈전성 질환 예방 또는 치료용 약학조성물 및 식품 조성물, 및 돌콩 추출물을 이용하여 혈소판 응집을 조절하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 돌콩 추출물은 in vitro 뿐만 아니라 in vivo 조건에서도 혈소판 응집으로 인하여 생성되는 혈전의 발생을 예방하거나 또는 발생된 혈전을 제거할 수 있을 뿐만 아니라, in vitro 조건에서 혈소판 또는 이로부터 유래된 응집성분의 응집을 조절할 수 있으므로, 혈전에 의하여 유발되는 다양한 질환의 예방 또는 치료는 물론, 생체 적합성이 우수한 이식물의 제조에도 널리 활용될 수 있을 것이다.The present invention relates to a pharmaceutical composition and a food composition for preventing or treating a thrombotic disease, which comprises an extract of Dolomoe, and a method for controlling platelet aggregation using a Dolomoe extract. Dolkong extract of the present invention in not only in vitro in vivo conditions as well as can prevent the occurrence of thrombosis generated due to platelet aggregation, or eliminate the generation thrombosis, in it is possible to control the agglutination of platelets or aggregated components derived therefrom in an in vitro condition so that it can be widely used for the preparation of transplant having excellent biocompatibility as well as prevention or treatment of various diseases caused by thrombus.
Description
본 발명은 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전성 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 본 발명은 돌콩 추출물을 포함하는 혈전성 질환 예방 또는 치료용 약학조성물 및 식품 조성물에 관한 것이다.TECHNICAL FIELD The present invention relates to a composition for preventing and treating thrombotic diseases comprising an extract of Dolomoe as an active ingredient, and more particularly, to a pharmaceutical composition and a food composition for preventing or treating thrombotic diseases, .
생체 내에서 혈액은 응고와 용해작용이 항상 평형을 이루고 있어 정상적인 상태에서는 출혈이나 혈전 등에 의해 흐름이 방해받지 않는다. 하지만 다양한 원인에 의해 혈관벽이 손상을 받게 되면 이러한 평형상태가 깨지고 혈액 중의 혈소판이 점착, 활성화, 응집되고 혈액 응고계를 활성화하여 급속하게 혈전을 형성하게 된다. 이러한 혈전은 동맥, 정맥, 모세혈관 또는 심장 등 순환기계 어느 곳에서도 발생할 수 있어 생성이 되면 매우 위험하다. 최근 우리나라에서도 식생활의 선진화, 서구화가 됨에 따라 심혈관계 질환으로 사망하는 인구수가 점차 증가추세에 있다.In vivo, the blood is always in equilibrium with the coagulation and dissolution, so that the flow is not disturbed by bleeding or thrombosis under normal conditions. However, if the vessel walls are damaged by various causes, such equilibrium is broken and the blood platelets in the blood adhere, activate, aggregate, and activate the blood clotting system to rapidly form thrombus. Such thrombosis can occur anywhere in a circulatory machine such as an artery, a vein, a capillary or a heart, and is very dangerous to produce. In Korea, the number of people who die from cardiovascular diseases is gradually increasing due to the advancement of diet and westernization.
약물요법에는 현재 아스피린, 디피리다몰, 티클로피딘 등의 혈소판응집 억제제와 스트렙토키나아제(streptokinase, SK), 유로키나아제(urokinase, UK), 아미노카프로익산(aminocaproic acid) 등의 혈전용해제 및 헤파린, 와파린, 디큐마롤 등의 항응고제가 보편적으로 사용되고 있다. 하지만 생체 내에 혈전용해제를 투여시 과량으로 생성된 플라스민에 대한 면역반응으로 혈전 용해 작용이 감소된다. 그리하여 이러한 약품들은 유로키나아제를 제외하고는 경구투여가 불가능하다는 단점이 있다. 또한, 일반적으로는 피브린만을 용해시키는 선택적인 용해작용이라기보다 다른 단백질도 분해하는 넓은 범위의 단백질 분해효소의 성질을 가지는 것이 대부분이다. 이러한 성질을 가지는 단백질 분해효소를 혈전증 치료의 목적으로 장기간 또는 다량으로 사용할 경우에는 혈관벽이나 혈액성분 등 다른 단백질을 함께 용해하기 때문에 매우 심각한 부작용이 있으므로, 이같은 부작용을 최소화하기 위하여, 천연물에서 유래되어 혈전용해 활성을 갖는 물질을 개발하려는 연구가 활발히 진행되고 있다.Drug therapy currently includes platelet aggregation inhibitors such as aspirin, dipyridamole and ticlopidine, thrombolytic agents such as streptokinase (SK), urokinase (UK), aminocaproic acid, and heparin, warfarin, Marrow and the like have been commonly used. However, administration of a thrombolytic agent in vivo reduces the thrombolytic action by an immune response to an excess of plasmin produced. Thus, these drugs have the disadvantage that they can not be administered orally except europine. In addition, in general, most of them have a wide range of proteolytic enzymes that degrade other proteins rather than selectively dissolving fibrin alone. When the proteinase having such properties is used for a long time or a large amount for the purpose of treating thrombosis, other proteins such as blood vessel walls and blood components are dissolved together. Therefore, in order to minimize such side effects, Studies for developing a substance having a dissolution activity have been actively conducted.
이러한 배경하에서, 본 발명자들은 천연물로부터 유래되어 부작용이 없으면서도 혈전용해 활성을 갖는 물질을 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 종래부터 한약재로 사용되고 있는 돌콩의 알코올추출물이 혈전성 질환을 예방 또는 치료하는 데 매우 유효함을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.Under these circumstances, the present inventors have intensively studied to develop a substance having thrombolytic activity without side effects derived from natural products. As a result, it has been found that alcohol extracts of dolomite conventionally used as medicinal herbs are very effective in preventing or treating thrombotic diseases And the present invention has been completed.
본 발명의 하나의 목적은 돌콩 추출물을 포함하는 혈전성 질환 예방 또는 치료용 약학조성물을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating thrombotic diseases, which comprises the extract of Doloff.
본 발명의 다른 목적은 돌콩 추출물을 포함하는 혈전성 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.It is another object of the present invention to provide a food composition for prevention or amelioration of a thrombotic disease comprising a spinach extract.
본 발명의 또 다른 목적은 돌콩 추출물을 이용하여 혈소판 응집을 조절하는 방법을 제공하는 것이다.It is still another object of the present invention to provide a method for controlling platelet aggregation using a Dolomoe extract.
본 발명자들은 천연물로부터 유래되어 부작용이 없으면서도 혈전용해 활성을 갖는 물질을 개발하고자 다양한 연구를 수행하던 중, 돌콩에 주목하게 되었다. 돌콩 (Glycine soja Siebold & Zucc.)은 콩과 (Zingiberaceae)에 속하는 덩굴성 1년초로 길이는 2m이며 전체에 갈색의 거친 털이 난다. 잎은 호생이고 잎자루는 길며 3출엽이다. 작은잎은 타원상 피침형으로 끝이 둔하고 길 이는 3-8cm이고 가장자리는 밋밋하며, 턱잎은 넓은 피침형이다. 꽃은 7~8월에 홍자색으로 피는데 총상꽃차례[總The inventors of the present invention have been studying various studies to develop a substance having thrombolytic activity without side effects derived from natural products, and attention has been paid to the dolomite. Dolphin (Glycine soja Siebold & Zucc.) Belongs to the zingiberaceae, 1-year-old, which is 2 m long and has brownish rough hairs throughout. Leaves are hyphae, petioles are long and 3 leaflets. The small leaf is oval lanceolate, dull end, 3-8cm long, flat on edge, and stipule broad lanceolate. Flowers bloom in July to August in purplish red color.
狀花序]는 길이 2~5cm이다. 꽃받침은 종형이고 털이 있으며 5개로 갈라진다. 관은 나비모양이다. 수술은 10개로서 각각 2개로 갈라진다. 열매는 2~3cm로 털이 많고 콩꼬투리와 비슷하며, 종자는 타원형이거나 신장형 비슷하며 약간 편평하다 (이영노. 원색한국식물도감, (주)교학사, 403p, 1998). 돌콩은 이명으로 갱미두, 녹곽으로 불리며, 생약명으로는 야대두등(野大豆藤), 야료두(野料豆)로 불리운다 (안덕균, 한국본초도감, 교학사, 728p, 2000). 돌콩은 콩(Glycine max)의 기원종으로 여겨지고 있으며, 현재 식용 가능한 것으로 인정되고 있으나 실제식용으로 이용되는 경우는 거의 없으며, 대부분 자연계에서 자생하고 있고 강한 유전자를 지니고 있어 콩의 유전적 개량 연구 등을 위해 일부 재배되기도 한다. 돌콩은 본 발명자에 의하여 항-당뇨 활성의 효과를 나타냄이 규명되었다[공개번호 10-2012-0115471]. 그러나, 아직까지 돌콩의 혈소판응집억제활성 및 항혈전활성에 대하여 보고되지 않았다. Is 2 ~ 5cm in length. Calyxes are bell-shaped, have hairs and split into 5 pieces. The tube is shaped like a butterfly. Surgery is divided into 10 pieces each. The fruit is 2 ~ 3cm long with many hairs, similar to the bean pods, and the seeds are oval or similar to the kidneys and are slightly flat (Lee Yongno, primary color Korea Botanical Illustrated Co., Ltd., 403p, 1998). It is called as ginkgo biloba and furrow, and it is called "soybean bean" and "wild bean bean" as a generic name (Ahn, Duk-gyun, Korea Basic Book Illustrated, Dean, 728p, 2000). Dolch is considered to be the origin of soybean (Glycine max) and is recognized as possible edible now, but it is rarely used for practical use. Most of it is native in nature and has a strong gene. Some are cultivated for. Dolomach has been identified by the present inventor to exhibit the effect of anti-diabetic activity [Pub. No. 10-2012-0115471]. However, it has not been reported yet on the platelet aggregation inhibitory activity and antithrombotic activity of stigma.
본 발명자들은 돌콩의 다양한 생리활성을 연구하던 중 혈전용해 활성을 나타낼 수도 있다고 가정하고, 이를 확인하였다. The inventors of the present invention have confirmed that it is possible to exhibit thrombolytic activity while studying various physiological activities of the dolch.
먼저, 돌콩의 70% 에탄올추출물을 ADP 유도성 혈소판 응집시에 처리한 결과, 농도 의존적으로 콜라겐 유도성 혈소판 응집을 억제함을 확인하였다. 또한 이런한 돌콩의 혈소판 응집 억제효능을 일반적으로 재배되어 식용으로 사용, 유통되고 있는 대두, 쥐눈이콩 및 서리태 추출물과 비교하여 효능을 평가한 결과, 이들 대두, 쥐눈이콩 및 서리태 추출물에서는 고용량에서도 효능을 거의 나타내지 않음을 확인하였다. 랫트를 이용한 동물효능 모델에서도 마찬가지로 이들 일반 콩들은 고용량에서도 혈전억제 효능을 거의 나타내지 않는 반면 돌콩은 용량 의존적으로 효능을 나타냄을 확인하여 돌콩은 일반콩들과 달리 특유의 강력한 항혈전 효능을 갖고 있음을 확인하였다.First, 70% ethanol extract of dolomite was treated with ADP - induced platelet aggregation, and it was confirmed that concentration - dependent collagen - induced platelet aggregation was inhibited. In addition, the efficacy of the inhibition of the platelet aggregation inhibition of the soybean, the bean curd, and the seaweed extract was evaluated in comparison with the soybean, It was confirmed that it is hardly represented. Similarly, in the animal efficacy model using rats, these common soybeans showed almost no thrombocytopenic activity at a high dose, while the dolomites showed dose-dependent efficacy, indicating that the dolomite has a unique potent antithrombogenic effect Respectively.
따라서, 본 발명의 돌콩 추출물은 혈전성 질환을 예방, 개선 또는 치료하기 위한 약학조성물 또는 식품조성물의 유효성분으로 사용할 수 있을 뿐만 아니라, in vitro 에서 혈소판 또는 이로부터 유래된 응집성분의 응집을 조절하여 피브린 섬유로 구성된 구조물을 제조하는데에도 활용될 수 있음을 알 수 있었다.Therefore, the present invention can be used not only as an active ingredient of a pharmaceutical composition or a food composition for preventing, ameliorating or treating a thrombotic disease, but also in it was found that it could also be used in the production of a structure composed of fibrin fiber by controlling aggregation of platelets or coagulated components derived therefrom in vitro .
상술한 목적을 달성하기 위한 일 실시양태로서, 본 발명은 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
As one embodiment for achieving the above object, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating a thrombotic disease comprising an extract of Dolomoe as an active ingredient.
본 발명의 용어 "돌콩"이란, 돌콩의 종자를 의미한다.The term "dolomite" of the present invention means seeds of dolomite.
본 발명의 용어 "돌콩 추출물"이란, 상기 돌콩을 저급알코올인 메탄올 또는 에탄올을 단독으로 사용하거나 또는 이들 저급알코올을 물과 혼합하여 수득한 혼합용매를 사용하여 추출한 추출물을 의미한다.The term " Dolomoe extract " of the present invention means an extract obtained by using the dolomot as a low alcohol, methanol or ethanol alone, or by using a mixed solvent obtained by mixing these lower alcohol with water.
본 발명에 있어서, 상기 돌콩 추출물은 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있는데, 바람직하게는 물과 에탄올의 혼합용매를 사용하여 돌콩을 추출함으로써 수득할 수 있으며, 가장 바람직하게는 70% 에탄올을 사용하여 돌콩을 추출함으로써 수득할 수 있다.In the present invention, the Dolomoe extract may be used as an active ingredient of a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of a thrombotic disease. Preferably, the extract may be obtained by extracting a dolomite using a mixed solvent of water and ethanol, Can be obtained by extracting the dolchol with 70% ethanol.
상기 용매를 이용하여 추출하는 방법은 당업계에서 공지된 방법에 따라 수행할 수 있고, 바람직하게는 돌콩 또는 돌콩의 건조물을 상기 용매에 침지하고, 10 내지 25℃의 상온에서 추출하는 냉침추출법, 40 내지 100℃로 가열하여 추출하는 가열추출법, 환류냉각기를 이용한 환류추출법 등의 방법을 통하여 수행될 수 있다.
The method of extracting with the solvent may be carried out according to a method known in the art. Preferably, a method of extracting at a room temperature of 10 to 25 DEG C by immersing the dried product of the dolomite or dolomite in the solvent, A heating extraction method of extracting by heating to 100 ° C, a reflux extraction method using a reflux condenser, and the like.
본 발명의 용어 "혈전성 질환"이란, 혈전 생성에 의해 유발되는 질환을 의미하는데, 바람직하게는 심근경색,협심증, 혈전성 정맥염, 동맥색전증, 관상 및 뇌동맥혈전증, 말초혈관 또는 심부정맥혈전증, 임의 혈관의 동맥혈전증, 정맥혈전증,허혈성 뇌경색, 동맥경화, 고혈압, 폐고혈압, 뇌경색, 뇌졸증, 만성동맥폐색증, 폐경색, 뇌색전증, 신장색전증, 혈전색전증 및 지주막하 출혈 후의 병적 증상, 경피적 관상동맥 성형술(PTCA) 및 스텐트(stent) 삽입 시의 혈전 생성, 스텐트 설치 후의 재협착, 카테터 혈전성 폐색 또는 재폐색, 급성 관상동맥증후군, TIA(일과성 뇌허혈 발작 또는 급성 뇌혈관 증후군), 심부전증, 허혈성 병인에 의한 가슴통증, X 증후군 등이 될 수 있다.The term "thrombotic disease" of the present invention means a disease caused by thrombus formation, and is preferably a myocardial infarction, angina pectoris, thrombotic phlebitis, arterial embolism, coronary and cerebral arterial thrombosis, peripheral vascular or deep vein thrombosis, The pathological symptoms after arterial thrombosis, venous thrombosis, ischemic cerebral infarction, arteriosclerosis, hypertension, pulmonary hypertension, cerebral infarction, cerebral apoplexy, chronic arterial occlusion, postmenopausal bleeding, cerebral embolism, renal embolism, thromboembolism and subarachnoid hemorrhage, percutaneous coronary angioplasty PTCA) and stent implantation, restenosis after stent placement, catheter thrombotic occlusion or reocclusion, acute coronary syndrome, TIA (transient ischemic attack or acute cerebrovascular syndrome), heart failure, ischemic etiology Chest pain, X syndrome, and the like.
다양한 혈소판응집억제제 또는 혈전용해제 개발을 위한 연구가 진행되었다. 아스피린 및 디피리다몰과 같은 일부 제제가 예방적 항혈전제로 사용되었다. 현재 국내외에서 혈전생성 예방의 목적으로 임상적으로 널리 사용되고 있는 아스피린은 소량을 지속적으로 복용할 경우 혈소판의 응집을 억제하여 혈전생성을 예방하는 것으로 알려져 있다. 그러나, 아스피린은 복용량, 복용기간에 따라 위염의 발생, 출혈 등의 부작용의 위험이 있다. 또한, 아스피린을 복용하여도 혈소판응집을 적절하게 억제하지 못하는 아스피린 저항성 (aspirin resistance) 증상을 보이는 환자의 비율이 상당히 보고되었다.Studies have been conducted to develop various platelet aggregation inhibitors or thrombolytic agents. Some preparations such as aspirin and dipyridamole have been used as prophylactic antithrombotic agents. Aspirin, which is widely used clinically for the prevention of thrombosis in domestic and foreign countries, is known to inhibit thrombogenesis by inhibiting platelet aggregation when a small amount is continuously administered. However, there is a risk of side effects such as the occurrence of gastritis and bleeding depending on the dose and duration of aspirin. In addition, the proportion of patients with aspirin resistance symptoms that do not adequately inhibit platelet aggregation even after taking aspirin has been reported.
아스피린 다음으로 많이 사용되고 있고 ADP에 의해 유도되는 혈소판 응집물질(칼슘, 세로토닌, 피브리노겐 등)을 억제해 혈소판 응집 및 혈전형성을 감소시키는 작용을 하는 혈소판 응집억제제인 클로피도그렐은 실제적인부작용을 가질 뿐 아니라 저항성의 문제점이 있는 것으로 나타났고, 티에노피리딘의 경우 강력하게 생명을 위협하는 혈전성 혈소판감소성 자반증의 발병률을 증가시키는 것으로 나타났다(Bennett, C.L. 등 N. Engl. J. Med.(2000) 342:1771-1777). ReoPro(7E3) 약물은 임상효능은 인상적이나 과도한 출혈, 때때로 수혈을 필요로 할 만큼의 증가된 위험과 관련이 있다는 것이 밝혀졌다(N. Engl. J. Med., (1994) 330:956-961). 따라서, 기존의 제품이 갖는 문제점 및 부작용이 적고 효능이 우수한 제품의 개발이 필요하다.Clopidogrel, a platelet aggregation inhibitor that acts after ADP-induced platelet aggregation (calcium, serotonin, fibrinogen, etc.) to reduce platelet aggregation and thrombus formation, is the second most commonly used next to aspirin, , And thienopyridine has been shown to increase the incidence of potentially life-threatening thrombotic thrombocytopenic purpura (Bennett, CL et al., N. Engl. J. Med. (2000) 342: 1771-1777). ReoPro (7E3) drugs have been shown to be associated with an increased risk of requiring clinical efficacy to be impressive, excessive bleeding, and sometimes transfusion (N. Engl. J. Med., (1994) 330: 956-961 ). Therefore, there is a need to develop a product with less problems and side effects of existing products and excellent efficacy.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 대두, 쥐눈이콩, 서리태 및 돌콩 각각의 70%에탄올추출물을 수득하였다 (실시예 1). 이어, 상기 수득한 추출물의 효과를 in vitro에서 확인하기 위하여, 토끼의 혈액으로부터 수득한 혈소판에 ADP로 응집을 유도하였을 때, 50, 100, 200, 400 ㎍/㎖ 에서 농도 의존적으로 응집을 억제할 수 있었으나, 일반 콩들 대두, 쥐눈이콩, 서리태는 최고 용량인 400 ㎍/㎖ 에서도 거의 억제할 수 없음을 확인 하였다. According to one embodiment of the present invention, 70% ethanol extracts of each of soybean, snow bean, frosted and dolomite were obtained (Example 1). Then, the effect of the obtained extract was evaluated as in In order to confirm the effect of ADP on the platelets obtained from rabbit blood, it was possible to inhibit aggregation in a dose - dependent manner at 50, 100, 200, and 400 ㎍ / ㎖. However, in general soybean, It was confirmed that the seaweed can hardly be inhibited even at the highest dose of 400 / / ml.
마찬가지로 콜라겐과 트롬빈으로 혈소판 응집을 유도하였을 때, 400 ㎍/㎖에서 70% 이상, 200 ㎍/㎖에서 50% 이상으로 억제함을 확인 하였으나, 일반 콩들 대두, 쥐눈이콩, 서리태 추출물들은 최고 용량인 400 ㎍/㎖ 에서도 최대 15% 이하의 억제율로서 거의 억제하지 못함을 확인하였다.Similarly, when platelet aggregation was induced by collagen and thrombin, it was found to inhibit more than 70% at 400 ㎍ / ㎖ and more than 50% at 200 ㎍ / ㎖. However, normal soybean, Mu] g / ml, the inhibition rate was 15% or less.
한편, 상기 수득한 돌콩 추출물의 효과를 in vivo에서 확인하기 위하여, 랫트에 상기 에탄올 추출물을 100, 200 또는 400mg/kg/day의 용량으로 경구투여하고, 1시간 후에 각 랫트에 동정맥문합술을 수행하였으며, 전단응력(shear-stress)을 가하여 혈전을 형성시키고, 형성된 혈전의 건조중량을 측정하였다. 그 결과, 상기 각 용량으로 에탄올 추출물의 투여에 대하여 각각 79.0%, 71.8% 및 43.2%의 응혈 억제율을 나타내었으나, 이에 반하여 대두, 쥐눈이콩, 서리태 추출물들은 최대 용량으로 처리하여도 최대 14.0%로 거의 응혈을 억제하지 못함을 확인하였다(도 1).
On the other hand, in the effect of the obtained extract dolkong In order to confirm in vivo , the ethanol extract was orally administered to rats at a dose of 100, 200 or 400 mg / kg / day, and after 1 hour, anastomotic anastomosis was performed in each rat. Shear stress was applied, And the dried weight of the formed thrombus was measured. As a result, the inhibition rates of 79.0%, 71.8% and 43.2%, respectively, of the ethanol extracts were found at the respective doses, while that of the soybean, the bean curd and the seaweed extract was 14.0% (Fig. 1).
따라서, 본 발명의 돌콩추출물은 일반 콩들인, 대두, 쥐눈이콩, 서리태 추출물들과 차별적으로 혈전에 의하여 유발되는 질환의 예방 또는 치료를 위하여 사용할 수 있음을 알 수 있었다.
Therefore, it was found that the extract of the present invention can be used for prevention or treatment of diseases caused by thrombosis differently from the common soybean, soybean, dry bean, and safflower extracts.
한편, 본 발명의 혈전성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명에서, 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 돌콩 추출물과 이의 분획물들에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
Meanwhile, the pharmaceutical composition for preventing or treating thrombotic diseases of the present invention may further comprise an appropriate carrier, excipient or diluent commonly used in the production of a pharmaceutical composition. Specifically, the pharmaceutical composition may be formulated in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols and the like, oral preparations, suppositories and sterilized injection solutions according to a conventional method . In the present invention, the carrier, excipient and diluent which may be contained in the pharmaceutical composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, Calcium silicate, cellulose, methylcellulose, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. In the case of formulation, a diluent or excipient such as a filler, an extender, a binder, a wetting agent, a disintegrant, or a surfactant is usually used. Solid formulations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules and the like, which may contain at least one excipient such as starch, calcium carbonate, Sucrose, lactose, gelatin and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used. Liquid preparations for oral use may include various excipients such as wetting agents, sweetening agents, fragrances, preservatives, etc. in addition to water and liquid paraffin, which are simple diluents commonly used in suspension, liquid solutions, emulsions and syrups have. Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Examples of the suspending agent include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like. Examples of the suppository base include witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin, glycerogelatin and the like.
본 발명의 일 실시예에 따른 약학 조성물에 포함된 상기 돌콩 추출물의 함량은 특별히 이에 제한되지 않으나, 최종 조성물 총중량을 기준으로 0.1 내지 90% 중량%, 보다 바람직하게는 10 내지 70 중량%의 함량으로 포함할 수 있다.
The content of the extract of the present invention is not particularly limited, but may be in the range of 0.1 to 90% by weight, more preferably 10 to 70% by weight, based on the total weight of the final composition. .
상기 본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있는데, 본 발명의 용어 "약제학적으로 유효한 양"이란 의학적 치료 또는 예방에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 중증도, 약물의 활성, 환자의 연령, 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 사용된 본 발명 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율 치료기간, 사용된 본 발명의 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하다.
The pharmaceutical composition of the present invention may be administered in a pharmaceutically effective amount. The term "pharmaceutically effective amount " of the present invention means a therapeutic or prophylactic treatment of a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment or prevention And the effective dose level refers to the level of the disease to be treated, the severity of the disease, the activity of the drug, the age, body weight, health, sex, sensitivity of the patient to the drug, Duration, duration of administration, factors involved in combination with or contemporaneously with the composition of the present invention, and other factors well known in the medical arts. The pharmaceutical composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with another therapeutic agent, and may be administered sequentially or simultaneously with a conventional therapeutic agent. And can be administered singly or multiply. It is important to take into account all of the above factors and administer an amount that will achieve the maximum effect in the least amount without side effects.
본 발명의 약학조성물의 투여량은 예를 들어, 상기 돌콩 추출물을 포함하는 본 발명의 약학 조성물을 사람을 포함하는 포유동물에 하루 동안 10 내지 2,000 ㎎/㎏, 보다 바람직하게는 50 내지 600 ㎎/㎏으로 투여할 수 있고, 본 발명의 조성물의 투여빈도는 특별히 이에 제한되지 않으나, 1일 1회 투여하거나 또는 용량을 분할하여 수회 투여할 수 있다.
The dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is, for example, 10 to 2,000 mg / kg, more preferably 50 to 600 mg / kg, for a day, to a mammal including a human, Kg, and the frequency of administration of the composition of the present invention is not particularly limited, but it may be administered once a day or divided into several doses.
상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 실시양태로서, 본 발명은 상기 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 약학 조성물을 약제학적으로 유효한 양으로 혈전성 질환이 발병될 가능성이 있거나 또는 발병된 개체에 투여하는 단계를 포함하는 혈전성 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.
In another aspect of the present invention, the present invention provides a method for treating or preventing a thrombotic disease, comprising administering to a subject having or likely to develop a thrombotic disease in a pharmaceutically effective amount, The present invention provides a method for preventing or treating a thrombotic disease,
상술한 바와 같이, 본 발명에서 제공하는 돌콩 추출물은 혈전성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물의 유효성분으로서 사용할 수 있으므로, 상기 조성물은 혈전성 질환을 예방 또는 치료하는데 사용될 수 있다.
As described above, the present invention can be used as an active ingredient of a pharmaceutical composition for preventing or treating thrombotic diseases, so that the composition can be used for preventing or treating a thrombotic disease.
본 발명에서 용어 "개체"란 혈전성 질환이 발병될 가능성이 있거나 또는 발병된 쥐, 가축, 인간 등을 포함하는 포유동물을 제한 없이 포함한다.The term "individual" as used herein includes, without limitation, mammals, including rats, livestock, humans, and the like, who have or are at risk of developing a thrombotic disease.
본 발명의 혈전성 질환을 치료하는 방법에 있어서, 상기 약학 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여도 투여될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 특별히 이에 제한되지 않으나, 목적하는 바에 따라 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있다. 다만, 경구 투여시에는 위산에 의하여 상기 추출물 또는 분획물이 변성될 수 있기 때문에 경구용 조성물은 활성 약제를 코팅하거나 위에서의 분해로부터 보호되도록 제형화 되어야 한다. 또한, 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
In the method of treating the thrombotic disease of the present invention, the administration route of the pharmaceutical composition may be administered through any general route as long as it can reach the target tissue. The pharmaceutical composition of the present invention may be administered intraperitoneally, intravenously, intramuscularly, subcutaneously, intradermally, orally, intranasally, intracorporally, or rectally, as desired, though not particularly limited thereto. However, since the extract or fraction may be denatured by gastric acid when orally administered, the oral composition should be formulated so as to coat the active agent or protect it from decomposition at the top. In addition, the composition may be administered by any device capable of transferring the active agent to the target cell.
상술한 목적을 달성하기 위한 다른 실시양태로서, 본 발명은 돌콩 추출물을 포함하는 혈전성 질환 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
As another embodiment for achieving the above object, the present invention provides a food composition for prevention or improvement of thrombotic diseases, comprising the extract of Dolomoe.
상기 돌콩 추출물은 식품 조성물의 총 중량에 대하여 0.1 내지 100 중량%, 보다 바람직하게는 1 내지 80 중량%로 포함된다. 식품이 음료인 경우에는 100㎖를 기준으로 1 내지 30g, 바람직하게는 3 내지 20g의 비율로 포함될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 식품 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 예들 들어, 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin), 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐산(panthotenic acid) 등을 포함할 수 있다. 또한, 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca), 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu), 크륨(Cr) 등의 미네랄을 포함할 수 있다. 또한, 라이신, 트립토판, 시스테인, 발린 등의 아미노산을 포함할 수 있다. 또한, 방부제(소르빈산 칼륨, 벤조산나트륨, 살리실산, 데히드로초산나트륨 등), 살균제(표백분과 고도 표백분, 차아염소산나트륨 등), 산화방지제(부틸히드록시아니졸(BHA), 부틸히드록시톨류엔(BHT) 등), 착색제(타르색소 등), 발색제(아질산 나트륨, 아초산 나트륨 등), 표백제(아황산나트륨), 조미료(MSG 글루타민산나트륨 등), 감미료(둘신, 사이클레메이트, 사카린, 나트륨 등), 향료(바닐린, 락톤류 등), 팽창제(명반, D-주석산수소칼륨 등), 강화제, 유화제, 증점제(호료), 피막제, 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의 식품 첨가물(food additives)을 첨가할 수 있다. 상기 첨가물은 식품의 종류에 따라 선별되고 적절한 양으로 사용된다.
The dolch extract is contained in an amount of 0.1 to 100% by weight, more preferably 1 to 80% by weight, based on the total weight of the food composition. When the food is a beverage, it may be contained in a proportion of 1 to 30 g, preferably 3 to 20 g based on 100 ml. In addition, the composition may contain additional ingredients which are commonly used in food compositions and which can improve odor, taste, vision and the like. For example, vitamins A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, niacin, biotin, folate, panthotenic acid and the like. In addition, it may include minerals such as zinc (Zn), iron (Fe), calcium (Ca), chromium (Cr), magnesium (Mg), manganese (Mn), copper (Cu) It may also include amino acids such as lysine, tryptophan, cysteine, valine, and the like. In addition, it is also possible to use antiseptics (such as potassium sorbate, sodium benzoate, salicylic acid, and sodium dehydroacetate), disinfectants (such as bleaching powder and highly bleached white powder, sodium hypochlorite), antioxidants (butylhydroxyanilide (BHA), butylhydroxytoluene BHT), etc.), coloring agents (such as tar pigments), coloring agents (such as sodium nitrite and sodium acetic acid), bleaching agents (sodium sulfite), seasoning (such as MSG sodium glutamate), sweeteners (such as hypoglycemia, , Food additives such as flavorings (vanillin, lactones, etc.), swelling agents (alum, potassium hydrogen D-tartrate), emulsifiers, emulsifiers, thickeners, encapsulating agents, gum bases, foam inhibitors, ) Can be added. The additives are selected according to the type of food and used in an appropriate amount.
한편, 상기 돌콩 추출물을 포함하는 식품 조성물을 이용하여 혈전성 질환 예방 또는 개선용 기능성 식품을 제조할 수 있다.On the other hand, functional food for preventing or ameliorating thrombotic diseases can be produced by using the food composition containing the extract of Doloff.
구체적인 예로, 상기 식품 조성물을 이용하여 혈전성 질환을 예방 또는 개선시킬 수 있는 가공식품을 제조할 수 있다. 이런 가공식품에는 예들 들어, 과자, 음료, 주류, 발효식품, 통조림, 우유가공식품, 육륙가공식품, 국수 등을 포함한다. 과자는 비스킷, 파이, 케익, 빵, 캔디, 젤리, 껌, 시리얼(곡물푸레이크 등의 식사대용품류 포함) 등을 포함한다. 음료는 탄산음료, 기능성이온음료, 쥬스(예들 들어, 사과, 배, 포도, 알로에, 감귤, 복숭아, 당근, 토마토 쥬스 등), 식혜 등을 포함한다. 주류는 청주, 위스키, 소주, 맥주, 양주, 과실주 등을 포함한다. 발효식품은 간장, 된장, 고추장 등을 포함한다. 통조림은 수산물 통조림(예들 들어, 참치, 고등어, 꽁치, 소라 통조림 등), 축산물 통조림(쇠고기, 돼지고기, 닭고기, 칠면조 통조림 등), 농산물 통조림(옥수수, 복숭아, 파일애플 통조림 등)을 포함한다. 우유가공식품은 치즈, 버터, 요구르트 등을 포함한다. 육류가공식품은 돈까스, 비프까스, 치킨까스, 소세지. 탕수육, 너겟류, 너비아니 등을 포함한다. 밀봉포장생면 등의 국수를 포함한다. 이 외에도 상기 조성물은 레토르트식품, 스프류 등에 사용될 수 있다.As a specific example, the food composition can be used to produce processed foods that can prevent or improve thrombotic diseases. Such processed foods include, for example, confectionery, drinks, liquor, fermented foods, canned foods, processed milk products, processed marine foods, noodles and the like. The sweets include biscuits, pies, cakes, breads, candies, jellies, gums, cereals (including dinner utensils such as cereal flakes). Drinks include carbonated beverages, functional ionic beverages, juices (such as apples, pears, grapes, aloes, citrus fruits, peaches, carrots, tomato juices, etc.) and sikhye. The mainstream includes sake, whiskey, shochu, beer, liquor, and fruit wine. Fermented foods include soy sauce, miso, and kochujang. Canned products include canned products (eg, tuna, mackerel, saury, canned fish, etc.), canned products (canned beef, pork, chicken, turkey canned food) and canned products (corn, peach and canned pineapple). Milk processed foods include cheese, butter, yogurt and the like. Meat-processed foods include pork cutlet, beef cutlet, chicken cutlet, sausage. Sweet and sour pork, nuggets, and nubani. And noodles such as sealed packaging raw noodles. In addition, the composition may be used in retort food, soup and the like.
본 발명의 용어 "기능성 식품(functional food)"이란, 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)와 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미하는데, 상기 식품은 혈전성 질환의 예방 또는 개선에 유용한 효과를 얻기 위하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 다양한 형태로 제조될 수 있다.
The term "functional food " of the present invention is the same term as " food for special health use (FoSHU) ", and includes medical and medical effects Refers to high food, which may be prepared in various forms such as tablets, capsules, powders, granules, liquids, circles, etc., in order to obtain a useful effect for prevention or improvement of a thrombotic disease.
상술한 목적을 달성하기 위한 또 다른 실시양태로서, 본 발명은 돌콩 추출물을 이용하여 혈소판 응집을 조절하는 방법을 제공한다.
As another embodiment for achieving the above-mentioned object, the present invention provides a method of controlling platelet aggregation using a dolomoe extract.
구체적으로, 본 발명의 혈소판 응집 조절방법은 (a) 혈소판 또는 혈소판 유래의 응집성분에 상기 돌콩 추출물을 가하고 전처리 반응을 수행하여 반응물을 수득하는 단계; 및 (b) 상기 반응물에 응집촉진제를 가하여 응집반응을 수행하는 단계를 포함한다. 이때, 상기 응집성분은 피브리노겐 또는 그를 포함하는 혈소판 추출물이 될 수 있고, 상기 돌콩 추출물은 상술한 바와 동일하며, 상기 응집촉진제로는 ADP(adenosine 5'-diphosphate), 콜라겐, 트롬빈, 아라키돈산 등을 단독으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
Specifically, the platelet aggregation control method of the present invention comprises the steps of: (a) adding a dolomoe extract to a platelet or platelet-derived coagulation component and performing a pretreatment reaction to obtain a reaction product; And (b) performing an aggregation reaction by adding an aggregation promoter to the reactant. In this case, the aggregation component may be fibrinogen or a platelet extract containing the same, and the extract of dolichon is the same as described above. Examples of the aggregation accelerator include adenosine 5'-diphosphate (ADP), collagen, thrombin, arachidonic acid, May be used alone or in combination.
상술한 바와 같이, 본 발명의 돌콩 추출물은 혈소판의 응집을 억제할 수 있는데, 이때 사용되는 돌콩 추출물의 처리조건에 따라 혈소판의 응집수준을 조절할 수도 있으며, 이처럼 혈소판의 응집수준을 조절하는 방법은 새로운 소재의 개발에 활용될 수 있다. 예를 들어, 혈소판의 응집을 수행하는 주요성분은 혈소판에 존재하는 피브리노겐으로서 트롬빈의 처리에 의하여 자가 응집되어 피브린 섬유를 형성할 수 있다. 상기 피브린 섬유는 생체내에서 조직적합성이 우수하기 때문에, 다양한 생체 조직이식물에 포함될 수 있으나, 자연상태에서는 피브린이 신속하게 응집되고, 이의 응집속도가 조절되지 않기 때문에, 목적하는 조직이식물에 적합한 형태로 가공하기 어렵다는 단점이 있다. 그러나, 상기 본 발명에서 제공하는 혈소판 응집 조절방법을 이용하여, 피브리노겐 또는 이를 포함하는 혈소판 추출물의 응집반응을 수행할 때, 본 발명의 돌콩 추출물을 다양한 농도로 처리하여 상기 응집반응의 속도 또는 응집수준을 조절하면, 목적하는 형태, 크기, 강도 등의 조건에 부합하는 피브린 섬유로 구성된 구조물을 형성할 수 있으므로, 다양한 생체 조직이식물의 제조에 활용될 수 있다.
As described above, the extract of the present invention can inhibit the aggregation of platelets. The platelet aggregation level can be controlled according to the treatment conditions of the extract of the seedlings used. At this time, And can be utilized in the development of materials. For example, the major component of platelet aggregation is the fibrinogen present in platelets, which can undergo self-aggregation by the treatment of thrombin to form fibrin fibers. Since the fibrin fiber is excellent in terms of tissue compatibility in vivo, various biological tissues may be contained in the plant, but since the fibrin is rapidly aggregated in its natural state and its aggregation rate is not controlled, It is difficult to process it into a shape. However, when the fibrinogen or the platelet extract containing the same is subjected to the coagulation reaction using the platelet aggregation control method provided in the present invention, the coagulation reaction rate or the aggregation level A variety of biological tissues can be used for the production of plants because the structure composed of fibrin fibers can be formed in accordance with the desired shape, size, and strength.
본 발명의 돌콩 추출물은 in vitro 뿐만 아니라 in vivo 조건에서도 혈소판 응집으로 인하여 생성되는 혈전의 발생을 예방하거나 또는 발생된 혈전을 제거할 수 있을 뿐만 아니라, in vitro 조건에서 혈소판 또는 이로부터 유래된 응집성분의 응집을 조절할 수 있으므로, 혈전에 의하여 유발되는 다양한 질환의 예방 또는 치료는 물론, 생체 적합성이 우수한 이식물의 제조에도 널리 활용될 수 있을 것이다.Dolkong of the present invention extracts in vitro as well as in vivo conditions as well as be able to remove the thrombus the prevention of thrombosis generated due to platelet aggregation, or occurs, the agglomerated ingredient derived from platelets or which in the in vitro conditions Therefore, it can be widely used not only for the prevention or treatment of various diseases caused by thrombus, but also for the production of transplant having excellent biocompatibility.
도 1은 AV-shunt 혈전동물모델에서 돌콩 추출물 400, 200, 100 mg/kg/day 용량, 비교군들인 대두, 쥐눈이콩, 서리태 추출물 400 mg/kg/day 용량 및 양성대조군인 리바록사반(RVX) 5 mg/kg/day 용량 투여에 의한 응혈억제 효과를 나타낸 그래프이다. FIG. 1 shows the results of a dose-response curves of 400 mg / kg / day dose of 400 mg / kg / day of varnish extracts, comparative groups of 400 mg / kg / day of soybean, ) 5 mg / kg / day dose.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples. However, these examples are for illustrative purposes only, and the scope of the present invention is not limited to these examples.
실시예Example
1: 대두, 1: Soybean,
쥐눈이콩A little bean
, ,
서리태The
및 돌콩 추출물의 제조 ≪ / RTI >
대두, 쥐눈이콩, 서리태 및 돌콩 각 1kg을 10 L의 70% 에탄올로 2시간씩 각각 환류추출한 후 여과한 액을 감압 농축하고, 건조하여 대두, 쥐눈이콩, 서리태 및 돌콩 추출물들을 얻었다. 1kg of soybean, bean curd, bean curd, and seaweed were refluxed with 10L of 70% ethanol for 2 hours, respectively. The filtrate was concentrated under reduced pressure and dried to obtain soybean, bean curd,
실시예Example
2: 돌콩 추출물의 혈소판 응집 억제 효과 2: Anti-platelet aggregation inhibition effect
실험에 사용한 8주령의 수컷 Spague-Dewley(SD) 랫트는 (주)오리엔트바이오에서 구입하여 1주 이상 본 실험 사육장 환경에 적응시킨 후 사용하였다. 물과 사료는 자유롭게 섭취하도록 하였고 사육장 실내의 온도는 22±2℃, 습도는 50±10%, 조명은 12시간 명/암 주기가 되도록 조절하였다.The 8-week-old male Sprague-Dewley (SD) rats used in the experiment were purchased from Orient Biotech Co., Ltd., and were used after being adapted to the experimental farm environment for 1 week or more. Water and feed were allowed to be freely consumed. The temperature inside the kennel was 22 ± 2 ℃, humidity was 50 ± 10%, and illumination was adjusted to 12 hours / cancer cycle.
각각의 돌콩 추출물 및 분획물의 혈소판 응집 억제 효과를 확인하고자 동물 사육실에서 1주일간 순화시킨 8주령의 수컷 SD 랫트를 마취시킨 다음 복강 안쪽에 있는 동맥 혈액을 천천히 채혈하여 3.2% 쇼듐시트레이트 항응고제가 들어 있는 튜브에 혈액을 담았다. 채혈한 혈액을 1,000 rpm에서 10분 동안 원심분리 하였다. 분리된 혈소판 풍부혈장(platelet rich plasma, PRP)은 다시 3,000 rpm에서 10분 동안 원심분리 하여 얻은 무혈소판혈장(platelet poor plasma)으로 희석하여 혈소판 수 4.0×108를 기준으로 사용하였다. To investigate the inhibitory effect of platelet aggregation inhibition on the platelet aggregation inhibition, male SD rats were anesthetized in 8-week-old male SD rats refined for 1 week in an animal breeding room. Then, the arterial blood in the abdominal cavity was slowly collected and the blood was collected with 3.2% I put the blood in the tube. The collected blood was centrifuged at 1,000 rpm for 10 minutes. The isolated platelet rich plasma (PRP) was diluted with platelet poor plasma obtained by centrifugation at 3,000 rpm for 10 minutes, and the platelet count was 4.0 × 10 8 .
토끼(New Zealand rabbit)를 고정시키고 이동맥으로부터 채혈하였다. 항응고제를 혈액과 1:9 (v/v)의 비율이 되도록 하였다. PRP는 1,300 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액의 PRP를 얻었고, 계속하여 3,000 rpm에서 10분간 원심분리하고, 침전된 혈소판을 0.35% BSA와 0.4 mM EGTA를 포함하는 HEPES 완충액(137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1 mM MgCl2, 5.6 mM glucose, 3.8 mM HEPES, pH 6.5)로 2회 세척한 후 HEPES 완충액(pH 7.4)에 현탁시켜서 혈소판 분획을 수득하였다. 혈소판 응집 억제능에 사용한 혈소판 분획을 coulter counter (Coulter Electronics, Hialeah, FL)를 이용하여 혈소판 수를 계측하고 HEPES 완충액(pH 7.4)으로 희석하여 혈소판이 4×108 개/㎖의 농도가 되도록 조정하였다. Rabbits (New Zealand rabbits) were fixed and blood samples were taken from the mobile vein. Anticoagulants were added to the blood at a ratio of 1: 9 (v / v). PRP was centrifuged at 1,300 rpm for 10 minutes to obtain supernatant PRP. Subsequently, centrifugation was carried out at 3,000 rpm for 10 minutes. The precipitated platelets were washed with HEPES buffer (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1 mM MgCl2, 5.6 mM glucose, 3.8 mM HEPES, pH 6.5) and suspended in HEPES buffer (pH 7.4) to obtain a platelet fraction. Platelet counts were measured using a coulter counter (Coulter Electronics, Hialeah, FL) and diluted with HEPES buffer (pH 7.4) to adjust the platelets to a concentration of 4 × 10 8 cells / ml .
혈소판 응집 억제 활성은 PRP를 통해 혈소판 응집을 확인하는 optical 방법으로, 혈소판의 응집에 따른 전기저항 변화와 광원의 변화를 측정하였다. 혈액 245 ㎕를 cuvette에 넣고 혈소판 응집기 700-2 (Chrono-Log. Havertown, PA)를 사용하여 37℃에서 10분 동안 반응시킨 후 정해진 농도의 시료를 2.5 ㎕를 가하여 반응시켰다. 그 후 일정시간 간격으로 baseline을 확인 후, 혈소판 응집 촉진물질인 ADP (adenosine 5'-diphosphate) 10 uM, 콜라겐 5 ㎍/㎖, 트롬빈(thrombin, 0.5 U/㎖)을 넣어 1200 rpm으로 교반하면서 37℃에서 최대 10분 동안 측정하였다(표 1).Platelet aggregation inhibition activity was measured by PRP (Platelet Aggregation) assay. 245 μl of blood was added to the cuvette, reacted at 37 ° C for 10 minutes using a platelet aggregator 700-2 (Chrono-Log Havertown, PA), and 2.5 μl of a predetermined concentration of the sample was reacted. After the baseline was confirmed at predetermined time intervals, 10 μM adenosine 5'-diphosphate (ADP), collagen 5 μg / ml and thrombin (0.5 U / ml) Lt; 0 > C for a maximum of 10 minutes (Table 1).
먼저, 표 1에서 보듯이, 돌콩 추출물은 ADP로 혈소판 응집을 유도하였을 때, 50, 100, 200, 400 ㎍/㎖ 에서 농도 의존적으로 응집을 억제하여, 200 ㎍/㎖에서 90% 이상의 억제율을 나타내었다. 이에 반하여, 일반 콩들 대두, 쥐눈이콩, 서리태는 최고 용량인 400 ㎍/㎖ 에서도 최대 20% 이하의 억제율로서 거의 억제 효과를 나타내지 않았다. First, as shown in Table 1, when the platelet aggregation induced ADP, aggregation was inhibited at 50, 100, 200 and 400 / / ㎖ concentration-dependently, and inhibition rate of 90% or more was observed at 200 ㎍ / ㎖ . On the other hand, the inhibition rate of soybean, bean, and soybean was not more than 20% at 400 ㎍ / ㎖.
마찬가지로 콜라겐과 트롬빈으로 혈소판 응집을 유도하였을 때, 400 ㎍/㎖에서 70% 이상, 200 ㎍/㎖에서 50% 이상의 억제율을 나타내었다. 이에 반하여, 일반 콩들 대두, 쥐눈이콩, 서리태 추출물들은 최고 용량인 400 ㎍/㎖ 에서도 최대 15% 이하의 Similarly, when platelet aggregation was induced by collagen and thrombin, the inhibition rate was over 70% at 400 ㎍ / ㎖ and 50% at 200 ㎍ / ㎖. On the other hand, soybean, bean curd, and safflower extracts of ordinary beans do not exceed 15% at the maximum dose of 400 ㎍ / ㎖
억제율로서 거의 억제 효과를 나타내지 않았다. But showed almost no inhibitory effect as the inhibition rate.
(10 μM)ADP
(10 [mu] M)
(5 ㎍/ml)Collagen
(5 [mu] g / ml)
(0.5 U/ml)Thrombin
(0.5 U / ml)
실시예Example
4: 돌콩 추출물의 4: Extract of dolch
InIn
vivovivo
혈액응고 억제효과 Blood coagulation inhibitory effect
10주령 (250g) 숫컷 SD 흰쥐 동물은 대한바이오링크(주)에서 분양받아 1주 이상 적응시킨 후 시험에 사용하였으며, 시험당일까지 고형사료 (조단백질 22.1%이상, 조지방 8.0%이하, 조섬유 5.0%이라, 조회분 8.0%이하, 칼슘 0.6%이상, 인 0.4%이상, 삼양사 Co. Korea)와 물을 충분히 공급하고 실온 22±2℃를 계속 유지하고 2주일간 실험실 환경에 적응시킨 후 시험에 사용하였다.Male rats of 10 weeks old (250 g) were divided into two groups. One group of rats were randomly assigned to one week or more and then used for the test. The animals were fed with solid feed (crude protein 22.1%, crude fat 8.0%, crude protein 5.0% , Calcium 8.0% or more, calcium 0.4% or more, calcium 0.4% or more, Samyang Co. Co. Korea) and water were fully supplied and kept at room temperature 22 ± 2 ℃ for 2 weeks.
돌콩 추출물과 비교군으로 대두, 쥐눈이콩, 서리태 추출물을 0.15% 카르복시메틸 셀룰로스와 혼합하여 100, 200 또는 400 mg/kg/day로 SD 랫트에 각각 경구 투여하였다. 이때, 양성 대조군으로는 리바록사반(RVX)을 5 mg/kg/day로 경우 투여하였다. 1시간 후 SD 랫트,의 복강에 2 ㎖씩 우레탄 1.25g/kg을 주사하여 마취시키고, 마취가 끝나면 좌측경동맥(Left carotid artery)과 우측경정맥(Right jugular vein)에 각각 폴리에틸렌 카테터(PE50; Becton Dickinson, MD, USA)를 삽입시켰다. 그런 다음, 5cm 실리콘 튜브에 목화솜을 넣고 생리식염수를 채운 후 상기 동맥과 정맥에 연결된 튜브로 혈액을 흐르게 하여 전단응력(shear-stress)을 유도하여 15분간 혈전을 생성시켰다. 생성된 혈전을 건조시켜 무게를 측정하여 항응혈효과를 평가하였다(도 1). 도 1에서 보듯이, 돌콩 추출물은 100, 200, 및 400 mg/kg/day 에서 각각 79.0% (p<0.001), 71.8% (p<0.001), 43.2% (p<0.01)의 응혈 억제율을 나타내었으므로, 상기 돌콩 추출물은 용량 의존적으로 응혈을 억제할 수 있음을 알 수 있었다. 이에 반하여, 대두, 쥐눈이콩, 서리태는 최대 용량인 400 mg/kg/day 에서도 최대 14.0%의 응혈 억제율로 거의 응혈효과를 나타내지 않음을 확인하였다.
As a control group, the soybean, the bean curd, and the seaweed extract were mixed with 0.15% carboxymethyl cellulose and orally administered to SD rats at 100, 200 or 400 mg / kg / day, respectively. At this time, 5 mg / kg / day of Riboxaban (RVX) was administered as a positive control. One hour later, SD rats were anesthetized with 2 ㎖ of urethane injections by intraperitoneal injection of 1.25 g / kg. After the anesthesia was completed, the left carotid artery and right jugular vein were anesthetized with a polyethylene catheter (PE50; Becton Dickinson , MD, USA). Then, cotton balls were inserted into a 5 cm silicone tube and filled with physiological saline, and blood was flowed into the artery and vein-connected tubes to induce shear-stress to generate thrombus for 15 minutes. The resulting thrombus was dried and weighed to evaluate the anticoagulant effect (FIG. 1). As shown in FIG. 1, the extracts of Spodoptera littoralis inhibited clotting inhibition by 79.0% (p <0.001), 71.8% (p <0.001) and 43.2% (p <0.01) at 100, 200 and 400 mg / , It was found that the above extracts of Dolomoe can inhibit clotting in a dose dependent manner. On the other hand, it was confirmed that the soybean, the bean curd, and the seaweed showed almost no clotting effect with a maximum clotting inhibition rate of 14.0% even at the maximum dose of 400 mg / kg / day.
Claims (8)
상기 돌콩 추출물은 돌콩을 물, 메탄올, 에탄올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것임을 특징으로 하는 항혈전성 약학 조성물.
It contains as an active ingredient,
Wherein the extract is selected from the group consisting of water, methanol, ethanol or a mixed solvent thereof.
약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함하는 것인 조성물.
The method according to claim 1,
Lt; RTI ID = 0.0 > pharmaceutically < / RTI > acceptable carrier, excipient or diluent.
(b) 상기 반응물에, ADP(adenosine 5'-diphosphate), 콜라겐, 트롬빈, 아라키돈산 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 응집촉진제를 가하여 응집반응을 수행하는 단계;를 포함하는 혈소판 응집 조절 공정이 포함된 혈소판 이용 소재의 제조방법.
(a) adding a crude extract to a blood component separated out of the blood, which comprises a platelet or platelet-derived aggregation component, and performing a pretreatment reaction to obtain a reaction product, wherein the extract is a mixture of water, methanol, ethanol, ≪ / RTI > And
(b) adding an aggregation promoter selected from the group consisting of adenosine 5'-diphosphate (ADP), collagen, thrombin, arachidonic acid, and a combination thereof to the reactant to perform an aggregation reaction; and Containing platelet-containing material.
상기 돌콩 추출물은 돌콩을 물, 메탄올, 에탄올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것임을 특징으로 하는 혈전 개선용 건강기능식품 조성물.
It contains an extract of dolchol as an active ingredient,
Wherein said extract is obtained by extracting marigolds with water, methanol, ethanol or a mixed solvent thereof.
상기 돌콩 추출물은 돌콩을 물, 메탄올, 에탄올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것임을 특징으로 하는 혈행개선용 건강기능식품 조성물.
It contains an extract of dolchol as an active ingredient,
The composition of claim 1, wherein the extract is selected from the group consisting of water, methanol, ethanol or a mixed solvent thereof.
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|---|---|---|---|---|
| KR20180042921A (en) | 2016-10-19 | 2018-04-27 | 학교법인혜화학원 | Extracts for enhancing blood circulation from red bean shell and Compositions comprising the same as an active ingredient |
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