KR101577028B1 - 엘라그산을 유효성분으로 함유하는 수지상세포 성숙화 억제용 약학 조성물 - Google Patents

엘라그산을 유효성분으로 함유하는 수지상세포 성숙화 억제용 약학 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR101577028B1
KR101577028B1 KR1020130057033A KR20130057033A KR101577028B1 KR 101577028 B1 KR101577028 B1 KR 101577028B1 KR 1020130057033 A KR1020130057033 A KR 1020130057033A KR 20130057033 A KR20130057033 A KR 20130057033A KR 101577028 B1 KR101577028 B1 KR 101577028B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
acid
pharmaceutical composition
dendritic cells
dendritic cell
cell maturation
Prior art date
Application number
KR1020130057033A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20140136685A (ko
Inventor
노경태
Original Assignee
대한민국
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 대한민국 filed Critical 대한민국
Priority to KR1020130057033A priority Critical patent/KR101577028B1/ko
Publication of KR20140136685A publication Critical patent/KR20140136685A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101577028B1 publication Critical patent/KR101577028B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom

Abstract

본 발명은 엘라그산을 유효성분으로 함유하는 수지상세포 성숙화 억제용 약학 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 엘라그산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 수지상세포 성숙화 억제용 약학 조성물, 자가면역질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 자가면역질환 예방 또는 개선용 건강식품에 관한 것이다. 본 발명의 엘라그산(ellagic acid)의 경우 리포폴리사카라이드에 의해 유도되는 수지상세포의 성숙을 억제하므로, 루프스 증후군, 쇼그렌 증후군, 류마티스 관절염 및 제1형 당뇨병과 같은 자가면역질환 예방 및 치료용으로 소비자들의 건강에 유익하게 제공될 수 있다.

Description

엘라그산을 유효성분으로 함유하는 수지상세포 성숙화 억제용 약학 조성물{Pharmaceutical composition for suppression of dendritic cell maturation comprising ellagic acid as effective component}
본 발명은 엘라그산(ellagic acid)을 유효성분으로 함유하는 수지상세포 성숙화 억제용 약학 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 엘라그산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 수지상세포 성숙화 억제용 약학 조성물, 자가면역질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 자가면역질환 예방 또는 개선용 건강식품에 관한 것이다.
수지상세포(Dendritic Cells; DCs)는 림프기관, 피부, 소화기 및 호흡기 등의 상피조직과 대부분의 실질기관의 간질에 존재한다. 수지상세포는 항원(antigens)을 섭취하여 말초조직에서 림프기관으로 이동하는데 특화된 전문적인 항원제시세포(professional antigen presenting cells; APC)로, 후천적 면역반응(adaptive immune response)을 유발하고 조절한다. 수지상세포는 체내의 여러 조직과 림프기관에 상주하고 있으며 염증이나 항원이 없을 때에는 미성숙한(immature) 상태로 존재한다. 이러한 미성숙한 수지상세포는 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide; LPS) 또는 CpG와 같은 세균 감염에 대한 염증반응의 산물과 IL-12, IL-6 및 TNF-α와 같은 염증성 사이토카인에 의해서 성숙해진다.
수지상세포는 면역반응을 유발하는 기능 외에도 다양한 기전을 통해 면역관용(immune tolerance)을 유발하는 것으로 알려져 있다. 수지상세포의 이러한 상반된 기능은 수지상세포가 자가면역질환(autoimmune disease)의 발명에 관여할 수도 있다는 생각을 가지게 하였으며, 실제로 자가면역질환을 앓고 있는 동물의 수지상세포 또는 인위적으로 성숙시킨 수지상세포를 정상 동물에 투여하였을 때 강력한 T림프구의 활성화가 유도되고 결과적으로 자가면역질환이 발병하였다. 최근의 연구결과에 따르면 수지상세포의 지속적인 성숙화 및 활성화가 류마티스 관절염, 제1형 당뇨병, 루프스(lupus) 및 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome)에 관여하는 것으로 보고되었다. 따라서 수지상세포의 성숙을 억제하는 것이 이러한 자가면역질환의 치료에 유용할 것으로 생각되고 있다.
엘라그산(ellagic acid)은 폴리페놀 4개의 링으로 구성되어 있으며, 식물체 내에서는 전구물질인 엘라기탄닌(ellagitannin) 형태로 존재한다. 포도, 딸기, 석류, 나무딸기, 땅콩류 및 녹차 등에 존재하는 식물성 페놀물질로 항산화, 항바이러스, 항돌연변이 및 항암기능을 가지고 있으며, 많은 연구에서 유방, 식도, 피부, 결장, 전립선 및 췌장에서의 암세포 활동을 억제하는 것으로 알려지고 있으나, 면역반응에 대한 연구는 미비한 실정이다.
한국등록특허 제555907호에서는 엘라그산 유도체를 유효성분으로 함유하는 간염 예방 또는 치료용 약학적 조성물이 개시되어 있고, 한국등록특허 제1143255호에서는 고함량의 엘라그산을 포함하는 석류 추출물, 및 석류 추출물의 불안장애, 우울증 또는 집중력 장애 관련 효과를 향상시키는 방법이 개시되어 있으나, 본 발명에서와 같이 엘라그산을 유효성분으로 함유하는 수지상세포 성숙화 억제용 약학 조성물에 대해서는 밝혀진 바가 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명의 엘라그산(ellagic acid)이 리포폴리사카라이드에 의해 유도되는 수지상세포의 성숙을 억제하는 것을 확인하였다. 따라서 본 발명은 상기 엘라그산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 수지상세포 성숙화 억제용 약학 조성물, 자가면역질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 자가면역질환 예방 또는 개선용 건강식품을 제공하는데 그 목적이 있다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 엘라그산(ellagic acid) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 수지상세포 성숙화 억제용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 엘라그산(ellagic acid) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 엘라그산(ellagic acid) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 패혈증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 엘라그산(ellagic acid)을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 예방 또는 개선용 건강식품을 제공한다.
본 발명의 엘라그산(ellagic acid)의 경우 리포폴리사카라이드에 의해 유도되는 수지상세포의 성숙을 억제하므로, 루프스 증후군, 쇼그렌 증후군, 류마티스 관절염 및 제1형 당뇨병과 같은 자가면역질환 예방 및 치료용으로 소비자들의 건강에 유익하게 제공될 수 있다.
도 1은 본 발명의 엘라그산이 골수유래 수지상세포(BMDC)에 미치는 세포독성을 분석한 그래프이다. Control : 골수유래 수지상세포, LPS(100ng/㎖) : 수지상세포의 성숙을 유도하는 리포폴리사카라이드 100ng/㎖를 처리한 실험구, EG(10μM)+LPS(100ng/㎖) : 엘라그산 10μM을 전처리하고 리포폴리사카라이드 100ng/㎖를 처리한 실험구, EG(20μM)+LPS(100ng/㎖) : 엘라그산 20μM을 전처리하고 리포폴리사카라이드 100ng/㎖를 처리한 실험구.
도 2는 본 발명의 엘라그산이 보조자극 분자의 발현에 미치는 영향을 분석한 그래프이다. Isotype : 단일클론항체(mAbs), Control : 골수유래 수지상세포, LPS : 리포폴리사카라이드 100ng/㎖를 처리한 실험구, LPS+EG : 엘라그산 20μM을 전처리하고 리포폴리사카라이드 100ng/㎖를 처리한 실험구.
도 3은 본 발명의 엘라그산이 MAPKs의 활성에 미치는 영향을 분석하기 위하여 웨스턴 블랏 분석을 수행한 결과이다. (A) MAPKs(JNK, ERK 및 p38), (B) NF-κB.
도 4는 본 발명의 엘라그산이 식세포 작용에 미치는 영향을 분석한 그래프이다. (A) 엘라그산의 항원 섭취 능력 분석, (B) JNK(c-jun N-terminal kinase) 억제제 처리에 따른 엘라그산의 항원 섭취 능력 분석, LPS : 리포폴리사카라이드 100ng/㎖를 처리한 실험구, LPS+EG : 엘라그산 20μM을 전처리하고 리포폴리사카라이드 100ng/㎖를 처리한 실험구.
도 5는 본 발명의 엘라그산의 염증유발 사이토카인 생성 억제능을 분석한 결과이다. LPS(200ng/㎖) : 리포폴리사카라이드 200ng/㎖를 처리한 실험구, EG(20μM) : 엘라그산 20μM을 전처리한 실험구, DMSO : 엘라그산의 사이토카인 생성 억제능 분석, JNK Inhibitor : JNK(c-jun N-terminal kinase) 억제제 처리에 따른 엘라그산의 사이토카인 생성 억제능 분석.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 엘라그산(ellagic acid) 또는 이를 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 수지상세포 성숙화 억제용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 조성물에서, 상기 수지상세포 성숙화 억제용 약학 조성물 중에 유효성분의 농도는 1~50μM인 것이 바람직하나, 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 엘라그산은 그대로 또는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있다. 본 발명에서 사용한 염으로는 약제학적으로 허용 가능한 무독성 염이면 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 염산, 황산, 질산, 인산, 불화수소산, 브롬화수소산, 포름산, 아세트산, 타르타르산, 젖산, 시트르산, 푸마르산, 말레산, 숙신산, 메탈술폰산, 벤젠술폰산, 톨루엔술폰산 또는 나프탈렌술폰산 등의 염 형태로 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 엘라그산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 자가면역질환으로는 루프스 증후군, 쇼그렌 증후군, 류마티스 관절염 또는 제1형 당뇨병인 것이 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 최근의 연구결과에 따르면 수지상세포의 지속적인 성숙화 및 활성화가 류마티스 관절염, 제1형 당뇨병, 루프스(lupus) 및 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome)에 관여하는 것으로 보고되었다. 따라서 수지상세포의 성숙을 억제하는 것이 이러한 자가면역질환의 치료에 유용할 것으로 생각되고 있다.
또한, 본 발명은 엘라그산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 패혈증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide; LPS)는 패혈증의 주요 원인이 되는 물질이며, 리포폴리사카라이드에 의해 염증유발 사이토카인인 IL-12 및 IFN-γ의 생성이 증가하나, 본 발명의 엘라그산을 처리한 경우, IL-12 및 IFN-γ의 생성이 감소하였으므로(도 5), 본 발명의 엘라그산은 패혈증의 예방 또는 치료제로 사용가능한 것이다.
본 발명에 따른 유효성분을 함유하는 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제 또는 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
상기 조성물은 당 업계에 알려져 있는 어떠한 투여경로, 예를 들어 경구 또는 비경구를 통해 투여될 수 있다. 경구 투여의 목적으로 본 발명의 유효성분을 정제, 캡슐제, 과립제, 츄잉정, 환제, 분말, 엘릭시르, 현탁제, 에멀젼, 용액 또는 시럽 등의 제제로 제형화하는 경우에는, 아라비아 고무, 옥수수 전분, 미세결정질 셀룰로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제, 인산이칼슘 또는 락토오즈와 같은 부형제, 알긴산, 옥수수 전분 또는 감자 전분과 같은 붕해제, 스테아르산 마그네슘과 같은 윤활제, 슈크로오즈 또는 사카린과 같은 감미제 및 페퍼민트, 메틸 살리실산염 또는 과일향과 같은 향미제가 포함될 수 있다. 단위 제형이 캡슐제인 경우에는 상기 성분 외에도 폴리에틸렌 글리콜 또는 지방유와 같은 액상 담체가 포함될 수도 있다. 또한, 비경구 투여를 위한 용액 또는 현탁액 형태의 주사제는 비경구적으로, 예를 들면 피하, 정맥 내, 근육 내 또는 복강 내로 투여될 수 있다. 일반적으로, 주사 가능한 용액 또는 현탁액은 물, 염수, 수성 덱스트로스 및 관련된 설탕 용액제, 비휘발성 오일, 에탄올, 글리세린, 폴리에틸렌 글리콜 또는 프로필렌 글리콜과 같은 글리콜류 등의 약제학적으로 허용되는 액상 담체 중에 유효량의 유효성분을 균질하게 혼합시켜 제조할 수 있다. 이외에도 필요에 따라 항세균제, 킬레이트제, 완충제, 보존제와 같은 보조제를 포함시킬 수도 있다. 상기 약제학적으로 허용되는 담체로는 약제학적으로 순수하고, 실질적으로 무독성이며, 유효성분의 작용을 저해하지 않는 임의의 모든 보조제를 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 엘라그산을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 예방 또는 개선용 건강식품을 제공한다.
상기 건강식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 엘라그산을 유효성분으로 첨가할 수 있는 건강식품의 예로는 비타민 복합제, 선식, 차, 드링크제, 음료수, 알콜 음료, 유산균 음료, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 껌류 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
실험 방법
1. 세포배양
골수유래 수지상세포(bone marrow-derived dendritic cells; BMDCs)는 10% FBS(fetal bovine serum), 페니실린 100U/㎖, 스트렙토마이신 100㎍/㎖ 및 L-글루타민(L-glutamine, INvitrogen) 10mM이 첨가된 RPMI 1640 배양액을 사용하여 5% CO2하의 37℃ 인큐베이터에서 배양하였다.
2. 시약 및 항체
재조합 마우스(recombinant mouse; rm) 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자(granulocyte macrophage colony-stimulating factor; GM-CSF) 및 재조합 마우스 인터루킨 4(rm IL-4)는 R&D Systems(Minneapolis, MN)으로부터 구입하였으며, 대장균 O127:B8의 리포폴리사카라이드(LPS) 및 엘라그산(St. Louis, MO)은 Sigma-Aldrich사로부터 구입한 것을 사용하였다. 유세포분석에 쓰인 CD11c(HL3), CD80(16-10A1), CD86(GL1), I-Ab β-체인(AF-120.1) 및 H-2Kb(AF6-88.5) 및 isotype-matched 대조구인 단일클론항체(mAbs) 및 비오틴이 결합된 CD11c(N418) 단일클론항체는 R&D System으로부터 구입하였다. 웨스턴 블랏팅에 쓰인 항-포스포-ERK, 항-포스포-p38, 항-포스포-JNK, 항-I-κB 및 항-튜불린 항체는 Santa Cruz Biotechnology(Santa Cruz, CA)로부터 구입한 것을 사용하였다.
3. 골수유래 수지상세포의 분화유도
골수유래 수지상세포는 C57BL/6 마우스(6~8주령, 수컷)를 경추 탈골법으로 희생시킨 후, 대퇴골과 경골 사이의 골수에서 추출하였다. 적혈구 용해 버퍼를 이용하여 적혈구를 제거하였고, 세포는 6-웰 배양 플레이트(1×106 세포/㎖; 웰 당 2㎖)에 10% FBS와 페니실린 100U/㎖ 및 스트렙토마이신 100㎍/㎖, 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자(rmGM-CSF) 20ng/㎖과 재조합 마우스 인터루킨-4(rmIL-4) 10ng/㎖이 첨가된 RPMI 1640 배양액을 사용하여 5% CO2하의 37℃ 인큐베이터에서 배양하였다. 3일 및 5일차에 부유세포를 제거하고, 신선한 배지를 첨가하여 주었다. 배양 6일차에, 비부착세포 및 느슨하게 부착된 확산 수지상세포 응집체를 수확하여 60mm 디쉬(1×106 세포/㎖; 5㎖/디쉬)에 옮겨 자극시키고 이를 분석에 사용하였다. 7일차에 비부착세포의 80% 이상이 CD11c를 발현하였고, 항-CD11c 항체에 결합된 비즈로 라벨된 수지상세포를 상자기성 컬럼(paramagnetic columns)을 통해 선발한 결과, 순도 90%이상의 세포를 분리할 수 있었다.
4. 세포 표현형 분석
7일 동안 배양한 수지상세포를 수확하여 인산완충식염수(phosphate buffered saline; PBS)로 세척하고, FACS 세척 버퍼(PBS 중의 2% FBS 및 0.1% 소듐 아자이드)에 현탁시켰다. 비특이적인 면역반응을 방지하기 위해 10%(v/v) 염소 혈청(normal goat serum)을 가하여 4℃에서 15분간 반응시킨 후, PE가 결합된 항-CD80, 항-CD86, 항-MHC 클래스 I 및 항-MHC 클래스 Ⅱ 또는 FITC가 결합된 항-CD11c를 4℃에서 30분간 염색하였다. 염색된 세포는 유세포 분석기(FACSCalibur, San Jose, CA)를 이용하여 분석하였다.
5. 수지상세포 성숙과 관련된 단백질 발현 분석
웨스턴 블랏 분석을 위하여, 단백질을 SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)에 전기영동한 후, PVDF(polyvinylidene fluoride) 막으로 이동시켰다. PVDF 막은 5% 탈지유가 포함된 세척버퍼(50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 150 mM NaCl, 0.1% 트윈 20)를 처리하여 비특이적 항체결합을 예방하고, 1차 항체와 함께 1시간 동안 상온에서 배양시켰다. 막을 세척한 후, 호스래디쉬퍼옥시다제(Amersham Pharmacia Biothech, Uppsala)가 결합된 2차 항체와 상온에서 1시간 동안 반응시킨 후, 증진된 화학발광 시스템(Amersham Pharmacia Biothech, Uppsala)을 이용하여 단백질 밴드를 가시화하였다.
6. 싸이토카인 분석
뮤린 IL-12p70, TNF-α 및 IFN-γ 사이토카인은 ELISA 키트를 사용하여 측정하였다.
7. 통계분석
모든 실험은 3번 반복하고 평균±표준오차(SEM)로 표기하였다. 통계처리는 Prism 3.0 GraphPad software를 사용하였으며, 대조구와 실험구의 비교는 터키의 다중 비교 검정을 사용하여 P<0.05일 때 통계적으로 유의성이 있다고 판단하였다.
실시예 1. 골수유래 수지상세포에 대한 엘라그산의 세포독성 평가
엘라그산의 골수유래 수지상세포(BMDC)에 대한 세포독성을 조사하기 위해서, 골수유래 수지상세포를 엘라그산 0, 10 및 20μM에 30분 동안 전처리하고, 리포폴리사카라이드(100ng/㎖)를 첨가하여 24시간 동안 배양하고, 아넥신 V 및 프로피디움 요오디드(propidium iodide; PI)로 염색하여 확인하였다. 엘라그산을 처리한 경우, 엘라그산 무처리구와 비교한 결과, 세포사멸율에 있어 별다른 차이가 없는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과로 엘라그산은 골수유래 수지상세포에 독성이 없는 것을 확인할 수 있었다(도 1).
실시예 2. 리포폴리사카라이드에 의해 유도되는 수지상세포 성숙화에 대한 엘라그산의 영향 평가
성숙된 수지상세포는 보조자극 분자 CD80 및 CD86이 높게 발현되고, 주조직 적합성 복합체(major histocompatibility complex; MHC) 클래스 분자(MHC class I 및 MHC class Ⅱ)가 T-세포와 상호작용하여 T-세포에 항원 정보를 전달하는데, 리포폴리사카라이드가 이들 분자를 자극하는 것으로 알려져 있다. 리포폴리사카라이드에 의해 유도된 성숙 수지상세포 성숙 과정에 작용하는 엘라그산의 기능을 확인하기 위하여, 골수유래 수지상세포를 엘라그산 0 및 20μM에 30분 동안 전처리하고, 리포폴리사카라이드 100ng/㎖를 첨가하여 24시간 동안 배양하였다. 유세포분석기를 사용하여 수지상세포의 표현형을 분석한 결과는 도 2와 같다. 리포폴리사카라이드의 자극에 의한 CD80 및 CD86의 발현증가 정도는 엘라그산 전처리에 의해서 감소된 반면, MHC 클래스 I 및 MHC 클래스 Ⅱ의 발현증가 정도는 엘라그산 전처리에 영향을 받지 않은 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과로 엘라그산은 보조자극 분자(CD80 및 CD86)를 조절함으로써, 리포폴리사카라이드에 의해 유도된 수지상세포의 성숙을 억제한다는 것을 확인할 수 있었다.
톨 유사 수용체(toll-like receptors)에 의해, ERK(extracellular signal-regulated kinase), JNK(c-jun N-terminal kinase) 및 p38을 포함하는 MAPKs(mitogen-activated protein kinases) 또는 NF-κB(nuclear factor kappa B)가 활성화되고, 이는 수지상세포의 성숙과 분화에 관여하는 것으로 알려져 있다. 이에 엘라그산이 이들의 활성에 미치는 영향을 조사하기 위하여, 엘라그산(20μM)을 30분 동안 전처리하고, 리포폴리사카라이드(100ng/㎖)를 첨가하여 24시간 동안 배양하였다. 리포폴리사카라이드에 의해 유도된 성숙 수지상세포는 MAPKs(JNK, ERK 및 p38)의 인산화가 유도된 것을 확인할 수 있었다(도 3A). 엘라그산을 처리한 경우, 리포폴리사카라이드에 의해 유도된 JNK 활성은 감소한 반면, ERK 및 p38 활성은 변화하지 않았고(도 3A), NF-κB 활성 또한 엘라그산에 영향을 받지 않는 것을 확인할 수 있었다(도 3B). 이러한 결과로 엘라그산이 JNK 활성을 조절함으로써 리포폴리사카라이드에 의해 유도된 수지상세포의 성숙을 조절한다는 것을 확인할 수 있었다.
실시예 3. 수지상세포 성숙화에 JNK 의존적으로 조절되는 엘라그산의 영향 평가
미성숙 수지상세포는 항원에 대한 식세포 작용이 뛰어나지만 성숙한 수지상세포는 식세포 작용이 떨어진다. 이에 엘라그산이 식세포 작용에 미치는 영향을 알아보고자, 골수유래 수지상세포를 FITC로 염색한 덱스트란에 처리하여 유세포 분석기로 확인하였다. 리포폴리사카라이드에 의해 유도된 성숙 수지상세포의 경우, 식세포 작용이 감소하지만(도 4A), 엘라그산 전처리에 의해 회복되는 것을 확인할 수 있었다. 그러나 이러한 엘라그산 매개의 회복은 JNK 억제제 처리구에서는 관찰되지 않아(도 4B), 엘라그산의 식세포 작용 회복능은 JNK에 의존적으로 조절되는 것을 알 수 있었다.
염증유발 사이토카인의 합성과 분해는 수지상세포에 의한 면역 및 염증반응이 일어나는 동안 수지상세포의 성숙에 관여하는 것으로 알려져 있다. 이에 엘라그산이 면역유발 사이토카인에 미치는 영향을 알아보고자, ELISA 분석을 실시하였다. 엘라그산을 처리한 경우, 면역유발 사이토카인인 IL-12 및 IFN-γ의 생성이 감소하였다. 그러나 JNK 억제제 처리구에서는 면역유발 사이토카인 생성 감소가 관찰되지 않아(도 5), 엘라그산의 염증유발 사이토카인의 생성 억제능은 JNK에 의존적으로 조절되는 것을 알 수 있었다.

Claims (8)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 엘라그산(ellagic acid) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 CD80 또는 CD86 발현의 감소, JNK(c-jun N-terminal kinase) 활성의 감소, 또는 IL-12 및 IFN-γ의 생성을 감소시킴으로써 골수 유래의 수지상세포 성숙을 억제하는 것을 특징으로 하는 수지상세포 성숙화 억제용 조성물.
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 엘라그산(ellagic acid) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 CD80 또는 CD86 발현의 감소, JNK(c-jun N-terminal kinase) 활성의 감소, 또는 IL-12 및 IFN-γ의 생성을 감소시킴으로써 골수 유래의 수지상세포 성숙을 억제하는 것을 특징으로 하는 면역 억제용 조성물.
  7. 삭제
  8. 삭제
KR1020130057033A 2013-05-21 2013-05-21 엘라그산을 유효성분으로 함유하는 수지상세포 성숙화 억제용 약학 조성물 KR101577028B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020130057033A KR101577028B1 (ko) 2013-05-21 2013-05-21 엘라그산을 유효성분으로 함유하는 수지상세포 성숙화 억제용 약학 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020130057033A KR101577028B1 (ko) 2013-05-21 2013-05-21 엘라그산을 유효성분으로 함유하는 수지상세포 성숙화 억제용 약학 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20140136685A KR20140136685A (ko) 2014-12-01
KR101577028B1 true KR101577028B1 (ko) 2015-12-11

Family

ID=52456852

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020130057033A KR101577028B1 (ko) 2013-05-21 2013-05-21 엘라그산을 유효성분으로 함유하는 수지상세포 성숙화 억제용 약학 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101577028B1 (ko)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101068763B1 (ko) 2009-02-05 2011-09-28 한림대학교 산학협력단 엘라직산을 함유하는 자외선에 의한 피부노화 억제용 조성물

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101068763B1 (ko) 2009-02-05 2011-09-28 한림대학교 산학협력단 엘라직산을 함유하는 자외선에 의한 피부노화 억제용 조성물

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
M.A. Rosillo외 3명, ‘Protective effect of ellagic acid, a natural polyphenolic compound, in a murine model of Crohn’s diseae’, Biochemical pharmacology no 82, 737~745쪽, 2011년.*

Also Published As

Publication number Publication date
KR20140136685A (ko) 2014-12-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1587480B1 (en) Polyhydroxylated pyrrolizidine
Hwang et al. An acidic polysaccharide of Panax ginseng ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis and induces regulatory T cells
JP6462002B2 (ja) 免疫疾患治療効果を有する新規化合物およびその使用
US10233215B2 (en) Peptide and use thereof
Ramos-Romero et al. Effect of a cocoa flavonoid-enriched diet on experimental autoimmune arthritis
JP2007518785A (ja) 免疫調節アルカロイド
Mihajlovic et al. Dose-dependent immunomodulatory effects of 10-hydroxy-2-decenoic acid on human monocyte-derived dendritic cells
KR101568323B1 (ko) 겔솔린을 유효성분으로 포함하는 수지상세포 분화 유도용 조성물 및 이의 분화 유도방법
KR101950008B1 (ko) 당뇨병 및 비만 치료용 면역관용 세포 백신 및 인슐린 분비 세포의 제조 방법
Rieser et al. Human monocyte‐derived dendritic cells produce macrophage colony‐stimulating factor: enhancement of c‐fms expression by interleukin‐10
KR101577028B1 (ko) 엘라그산을 유효성분으로 함유하는 수지상세포 성숙화 억제용 약학 조성물
Hossain et al. Tumor gangliosides and T cells: a deadly encounter
WO2014042392A1 (ko) 메트포민을 이용한 루프스를 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물
US20080260784A1 (en) Compositions and Methods for Modulating an Immune Response
Kim et al. Inhibition of phenotypic and functional maturation of dendritic cells by manassantin a
KR101436728B1 (ko) 골수유래억제세포 및 레바미피드를 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101893886B1 (ko) 자가 면역 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 그 제조방법
JP2009528297A (ja) 抗原提示細胞の機能の調節による免疫応答の制御
KR102617426B1 (ko) 수지상 세포의 TGF-β 수용체 활성화용 조성물 및 이를 이용한 자가면역질환의 예방 또는 치료 방법
KR102283258B1 (ko) 진세노사이드의 사이클로스포린에 의한 면역 반응 개선 용도
US9566304B2 (en) Pharmaceutical composition for preventing or treating cancers comprising dendritic cells with Dab2 gene silenced
KR20230015715A (ko) Clec5a 발현 면역관용 수지상세포 또는 그의 배양물을 포함하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101395984B1 (ko) 레바미피드를 유효성분으로 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 조성물
KR102003958B1 (ko) 과민성 면역 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 그 제조방법
KR20180038156A (ko) Stat３ 억제제를 유효성분으로 포함하는 면역질환 또는 염증성질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
X701 Decision to grant (after re-examination)
GRNT Written decision to grant