KR101574199B1

KR101574199B1 - 로즈바나나 열매 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101574199B1
Application number: KR1020150070866A
Authority: KR
Inventors: 김종윤
Original assignee: 주식회사 코씨드바이오팜; 주식회사 푸룻스킨앤코
Priority date: 2015-05-21
Filing date: 2015-05-21
Publication date: 2015-12-03

Abstract

본 발명은 로즈바나나 열매 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 화장료 조성물은 우수한 항산화 효과, 피부 주름 개선효과, 피부 미백 효과, 피부 보습 효과, 피부 장벽기능 개선효과 및 염증 완화효과를 발휘한다.

Description

로즈바나나 열매 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 {Cosmetic composition with the rose banana fruit extract}

본 발명은 로즈바나나 열매 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로는 로즈바나나의 항산화 효과, 피부 주름 개선효과, 피부 미백 효과, 피부 보습 효과, 피부 장벽기능 강화효과 및 염증 완화효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부노화는 내인성 노화(intrinsic, chronological aging)와 광노화(phtoaging) 두 가지로 나눌 수 있다 [Gilchrest BA: J. Am. Acad. Dermatol.,21, 610-613(1989)]. 내인성 노화는 연령이 증가함에 따라 생체의 생리적인 기능이 저하되어 자연적으로 유발되는 노화현상이고 [Braverman IM 등: J. Invest. Dermatol., 78, 434-443(1982)], 광노화는 피부가 광에 반복적으로 노출되어 피부의 외양 또는 기능이 변화되는 것을 의미한다 [Ridder GM등: J. Am. Acad. Dermatol., 25, 751-760(1991)]. 특히 피부가 자외선에 지속적으로 노출되면 많은 양의 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)이 발생되고 이로 인해 광산화적 손상을 받게 된다. 산화적 스트레스는 노화의 중요한 원인으로 알려져 있다. 이외에도 과량의 활성산소는 염증반응, 면역억제, 홍반 및 DNA 손상을 유발한다. 활성산소종은 H₂O₂, 슈퍼옥사이드 아니온(superoxide anion), 하이드록시 라디칼(hydroxyl radical) 등을 포함한다. 또한, 활성산소종은 복사선, 광증감반응 및 몇 가지 효소반응을 포함하는 다양한 과정을 거쳐서 세포 및 조직 중에서 생성될 수도 있다. 이외에도 산화질소, 페록시나이트 라이트 등을 포함하는 RNS(reactive nitrogen species)와 지질과산화물도 산화 스트레스 유발인자로 알려져 있다. 이러한 산화물들은 과잉 생성되면 면역억제, 염증, 암 및 피부노화를 유발한다고 알려져 있다.

한편, 피부에는 산화적 스트레스에 방어하기 위해 카탈라아제(catalase), 슈퍼옥사이드 디스뮤타아제(superoxide dismutase), 글루타티온 퍼옥시다아제(glutathione peroxidase) 등의 효소적 항산화제와 비타민 E 및 C, 카로티노이드, 글루타치온과 같은 비효소적 항산화제들이 존재하여 세포 및 조직을 보호한다. 일반적으로 BHA(butylated hydroxyanisole)와 BHT(butylated hydroxytoluene) 등이 높은 항산화력으로 인해 합성 항산화제로 주로 이용되어 왔으나 안정성으로 인하여 사용 규제를 받고 있다. 현재 안정성 측면과 함께 환경 친화적인 소비 추세에 따라 다양한 천연 소재를 이용한 항산화제의 개발이 활발히 이루어지고 있다.

한편, 사람의 피부는 유해미생물, 물리적 손상 및 자외선 등으로부터 우리 몸을 보호하는 장벽으로의 역할을 수행하고 체온과 수분 보유량 등을 조절하는 역할을 한다. 과량의 자외선에 노출되면 피부 각질층의 지질을 산화시켜 피부장벽의 손상을 초래하여 피부의 유분과 수분유지 기능을 떨어지게 하여 피부노화를 유발한다. 이러한 피부는 외부에서부터 순서대로 표피층, 진피층 및 피하지방층으로 구분된다. 표피층은 각질세포와 멜라닌 세포로 구성되는데, 피부 최외곽의 각질세포층은 외부환경과 직접 접촉하기 때문에 물리적, 화학적 혹은 물질의 투과에 대한 강한 저항성이 요구되며, 인체로부터 외부로 수분이 손실되는 것을 막아줌과 동시에 자체로도 적당한 수분을 보유함으로써 유연성을 유지하여야 한다. 건강한 피부의 상태를 유지하기 위해 각질층은 약 30% 정도의 수분을 함유하여야 하고, 크게 피지, 천연보습인자(Natural Moisturizing Factor : NMF) 및 각질세포간 지질이 관여한다. 낮은 기온, 찬 바람 및 자외선 등에 노출되어 이런 요소들의 균형이 깨지게 되면 수분부족이 되어 건조한 피부가 유발될 수 있으며 심하게는 아토피 피부염, 건피증 및 만성 습진이 생기게 된다. 따라서, 피부의 수분함량을 적절히 유지하는 것이 매우 중요하다. 이를 위하여 수분, 유분 및 보습에 초점을 맞춘 화장품이 개발되고 있다.

한편, 콜라겐은 피부 진피층의 매트릭스를 이루는 성분 중 가장 많은 성분이기 때문에 콜라겐의 생합성과 분해의 조절은 피부노화 과정에서 중요하게 작용한다. 콜라겐은 진피에 존재하는 섬유아세포에서 세포자극을 통해 합성된다. 나이가 증가하면 주로 섬유아세포의 작용과 세포수가 감소하여 섬유성분의 합성량이 줄어들어 피부 세포내 수분이 손실되며, 각질층의 구조가 변화된다. 또한 콜라게나아제(collagenase)의 작용이 증가하여 콜라겐의 가교된 형태가 감소하여 보습, 매끄러움 및 탄력이 감소함으로써 주름이 형성된다. 이외에도 자외선에 의해 MAP 인산화효소(mitogen activated protein kinase, MAP kinase)가 활성화되어 AP-1(activator protein 1)의 발현을 유도하고 기질 단백질 분해효소(matrix metalloproteinase, MMP)의 발현을 증가시켜 주름생성을 촉진한다는 연구가 보고되어 있다 [So SH 등: J. Ginseng Res. ,32, 39-47(2008)]. 생체 내에서의 콜라겐 합성과 분해는 MMP 및 MMPs의 작용을 저해하는 TIMPs(tissue inhibitor of metalloproteinase)에 의해 조절된다 [Wlaschek M 등: J. Photochem. Photobio., 63, 41-51(2001)]. 이에 따라 피부노화를 억제하기 위해 MMP의 활성을 조절하는 물질을 개발하는 연구가 진행되고 있다.

한편, 멜라닌은 자외선 자극과 같은 외부인자로부터 피부를 보호하는 중요한 역할을 한다. 멜라닌은 표피 기저층의 멜라닌형성세포 내에서 생합성된다. 피부가 자외선 자극을 받게 되면, 각질형성세포에서 α-MSH(α-Melanocyte stimulating hormone), SCF(stem cell factor), 엔도텔린(endothelin)과 같은 멜라닌형성세포 성장인자가 분비되고 근접해 있는 멜라닌형성세포의 수용체에 결합을 하게 되고, 멜라닌형성세포 내에서 신호전달 과정을 거쳐 멜라닌이 생성된다. 생성된 멜라닌은 각질형성세포로 이동을 하고 점점 각질층으로 이동을 하여 흔히 말하는 각질로 벗겨져 나가게 된다. 멜라닌형성세포에서 멜라닌 생성은 티로시나아제(tyrosinase)의 효소 활성에 의해 일어난다. 티로시나아제(Tyrosinase)의 작용에 의해 타이로신으로부터 도파(dopa), 도파퀴논(dopaquinone)으로 변환되어 도파크롬(dopachrome) 등을 거처 생성된다. 그러나, 멜라닌 생성이 과잉 생산되면 기미, 반점 등과 같은 색소 질환, 심하게는 피부암을 유발하게 된다. 이에 따라 과도한 멜라닌 생성을 억제하는 티로시나아제(tyrosinase)의 발현을 조절하는 연구가 이루어져 왔다.

한편, 최근 화학물질보다 부작용이 적은 천연물질에 대한 높은 관심과 함께 천연성분 화장품에 대한 선호도가 높아지면서, 화장품 산업에 있어서 천연물질을 이용한 연구가 활발하게 이루어지고 있다.

한편, 로즈바나나(rosebanana)는 Musa 속의 몇몇 여러해살이 현화식물에 의해 생산되는 식용과일로 카벤디시 종에 속한다. 바나나의 종류는 크게 카벤디시, 그로스미셀, 플랜틴으로 구분된다. 로즈바나나는 얇고 길쭉한 모양, 얇은 껍질, 기존 바나나에서 맛볼 수 없는 24~26브릭스의 최고의 당도와 특유의 진한 바닐라 향을 가지고 있으며, 크기는 기존 바나나의 1/2 수준으로 아담한 것이 특징으로 필리핀 민다나오 섬 남부 청정지역인 티볼리와 부끼드논이라는 청정 지역의 해발 600~800 m 고산지에서 높은 고도에 따른 큰 일교차, 배수가 잘되는 경사지 등 최적의 기후와 일조량 조건 속에 재배된 전체 생산량의 0.1% 이하의 희소성을 가진 바나나이다. 특히 '로즈(Rose)' 품종은 강한 바람과 병충해에 강해 기존 농법에 비해 농약을 50% 이하 사용하는 친환경 농법으로 재배됐으며, 베타카로틴, 비타민 A와 B, 식이섬유를 많이 함유하고 있다. 특히 일반 바나나보다 항산화 기능성분인 비타민 E(토코페롤)의 함량이 2배 가량 높다. 이외에도 칼슘, 칼륨, 마그네슘 등이 풍부해 빈혈개선이나 뇌기능 향상에 효과가 있다고 알려져 있다. 그러나 아직 로즈바나나의 열매 추출물에 대한 화장료 조성물에 대한 연구는 미미한 실정이다.

대한민국 등록특허 제10-0878080호 (등록일자: 2009.01.05)에는, 곡물류인 콩 19중량부, 녹두 19중량부, 율무 19중량부, 현미 19중량부와, 해조류인 다시마 20중량부와, 한방재료인 쑥 7중량부와, 과일류인 바나나 2중량부, 모과 1중량부, 귤 1중량부, 살구씨 2중량부와, 꽃류인 국화 3중량부, 장미 2중량부, 나팔꽃 1중량부, 민들레 1중량부를 포함하는 14종의 가루 성분과; 떠먹는 요구르트 91중량부와, 꿀 9중량부를 포함하는 에센스 성분; 으로 구성됨을 특징으로 하는 피부 미용을 위한 영양 팩의 조성물에 대한 기술이 기재되어 있다. 대한민국 등록특허 제10-1424180호 (등록일자: 2014.07.22)에는, 사과, 당근, 무, 양배추, 셀러리, 오이, 바나나, 양파, 우엉, 시금치, 오렌지, 토마토, 콩싹 및 단호박을 혼합한 후 발효시켜 제조한 식물발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증 및 피부 보습용 화장료 조성물에 대한 기술이 기재되어 있다.

본 발명은 로즈바나나의 열매 추출물을 유효성분으로 함유하여 항산화 효과, 피부 보습 효과, 피부 탄력 개선효과, 피부 장벽기능 강화효과, 피부 미백 효과, 피부 주름 개선효과 및 염증 완화효과를 발휘하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 로즈바나나 열매 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다. 로즈바나나 열매 추출물은 일반 바나나 열매 추출물에 비하여 우수한 항산화 효과, 티로시나아제 발현 억제 효과, MMP-1 발현 억제 효과, NO 생성 억제 효과를 발휘한다. 이에 따라, 로즈바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 일반 바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물 보다 우수한 피부 보습 효과, 피부 탄력 개선효과, 피부 장벽기능 강화효과, 피부 미백 효과, 피부 주름 개선효과 및 염증 완화효과를 발휘한다.

본 발명에 있어서 상기 로즈바나나 열매는 바람직하게 로즈바나나의 껍질 또는 과육 중 하나 이상일 수 있다.

한편, 본 발명에 있어서, 상기 로즈바나나 열매 추출물은 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 것을 추출 용매로 하여 추출될 수 있으나, 바람직하게는 초임계 추출, 초고압 추출, 환류 냉각 추출, 초음파 추출 및 아임계 추출 중 선택되는 어느 하나 이상의 추출법을 이용하여 추출된 것이 좋다.

한편, 본 발명에 있어서, 상기 로즈바나나 열매 추출물은, 바람직하게 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.00001~30.0중량%가 함유되는 것이 좋다. 0.0001중량% 미만으로 함유되면 피부 개선 효과가 미미하고, 30.0중량%를 초과하여 함유되면 경제적이지 못하다.

한편, 본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은, 바람직하게 피부 주름 개선용, 피부 미백용, 피부 보습용, 피부 장벽기능 강화용, 염증 완화용일 수 있다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

한편, 본 발명에서 "유효성분으로 함유한다"는 의미는 본 발명의 화장료 조성물로부터 항산화 효과, 피부 주름 개선효과, 피부 미백 효과, 피부 보습 효과, 피부 장벽기능 개선효과, 염증 완화효과를 나타낼 수 있는 정도로 조성물에 로즈바나나 열매 추출물이 첨가되는 것을 의미한다.

본 발명은 로즈바나나 열매 추출물을 유효성분으로 함유하여 항산화 효과, 피부 보습 효과, 피부 장벽기능 강화 효과, 피부 미백 효과, 피부 주름 개선효과 및 염증 완화효과가 우수한 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

이하, 본 발명의 구성을 하기 실시예를 통해 구체적으로 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.

[실시예 1 : 로즈바나나 열매 초임계 추출물 제조]

로즈바나나 껍질과 과육을 음건한 후 파쇄하여 제조한 로즈바나나 열매 분쇄물 50.0 g을 추출용기에 넣고 CO₂ : 조용매(co-solvent)의 유량(flow rate)을 47.5 g/㎖ : 2.5 g/min으로 하고, 전체 유량(total flow rate)을 50 g/min의 속도로 흘려주었으며, 조용매는 에틸 아세테이트를 사용하였다. 추출온도는 60℃, 추출 시간은 60분, 압력은 300 bar로 하였다. 초임계 추출후 수득한 추출물은 와트만(whatman) #10 여과지로 여과한 후, 여과액을 다시 0.25 μM 필터로 여과하여 로즈바나나 열매 초임계 추출물을 제조하였다.

이와 같이, 로즈바나나 열매를 초임계 추출조건으로 추출한 추출물을 'RB-1'이라고 지칭한 후, 하기 실험예에서 사용하였다.

[실시예 2 : 로즈바나나 열매 초고압 추출물 제조]

로즈바나나 껍질과 과육을 음건한 후 파쇄하여 제조한 로즈바나나 열매 분쇄물 50.0 g을 초고압처리기를 이용하여 압력 1000 MPa 하에서 온도를 50℃로 승온시킨 후 24시간 동안 처리한 다음 실온으로 냉각시켰다. 초고압 처리한 로즈바나나 열매 분쇄물을 최종 70%(v/v) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman) #10 여과지로 여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 0.25 μM의 여과기를 이용하여 농축조로 이송하여 60℃ 정도에서 감압농축 및 동결건조하여 로즈바나나 열매 초고압 추출물을 제조하였다.

이와 같이, 로즈바나나 열매를 초고압 추출조건으로 추출한 추출물을 'RB-2'라고 지칭한 후, 하기 실험예에서 사용하였다.

[실시예 3 : 로즈바나나 열매 환류 냉각 추출물 제조]

로즈바나나 껍질과 과육을 음건한 후 파쇄하여 제조한 로즈바나나 열매 분쇄물 50.0 g을 5배량의 70% (v/v) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 60℃ 이하에서 감압농축 및 동결건조하여 로즈바나나 열매 환류 냉각 추출물을 제조하였다.

이와 같이, 로즈바나나 열매를 환류 냉각 추출조건으로 추출한 추출물을 'RB-3'라고 지칭한 후, 하기 실험예에서 사용하였다.

[실시예 4 : 로즈바나나 열매 초음파 추출물 제조]

로즈바나나 껍질과 과육을 음건한 후 파쇄하여 제조한 로즈바나나 열매 분쇄물 50.0 g을 슈퍼노닉 초음파기기를 이용하여 25 KHz의 강도로 30℃에서 약2시간 동안 추출하여 초음파 추출물을 수득하였다. 상기 초음파 추출물은 와트만(whatman) #10 여과지로 여과한 후, 여과액을 다시 0.25 μM의 여과기로 여과한 다음 농축조로 이송하여 60℃에서 감압농축 및 동결건조하여 로즈바나나 열매 초음파 추출물을 제조하였다.

이와 같이, 로즈바나나 열매를 초음파 추출조건으로 추출한 추출물을 'RB-4'라고 지칭한 후, 하기 실험예에서 사용하였다.

[실시예 5 : 로즈바나나 열매 추출물 제조]

로즈바나나 껍질과 과육을 음건한 후 파쇄하여 제조한 로즈바나나 열매 분쇄물 50.0 g을 10배 가량의 40% (v/v) 1,3-부틸렌글라이콜 수용액에 상온에서 3일간 추출하였다. 상기 수득한 추출물은 와트만(whatman) #10 여과지로 여과한 후, 여과액을 다시 0.25 μM 필터로 여과하여 로즈바나나 열매 추출물을 제조하였다.

이와 같이, 로즈바나나 열매를 40% (v/v) 1,3-부틸렌글라이콜 수용액에 상온 추출조건으로 추출한 추출물을 'RB-5'라고 지칭한 후, 하기 실험예에서 사용하였다.

[실시예 6 : 로즈바나나 열매 아임계 추출물 제조]

로즈바나나 껍질과 과육을 음건한 후 파쇄하여 제조한 로즈바나나 열매 분쇄물 50.0 g을 50℃, 2기압인 아임계상에서 2시간 동안 추출한 후, 실온으로 냉각시켰다. 아임계로 처리한 로즈바나나 열매 분쇄물을 최종 70%(v/v) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman) #10 여과지로 여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 0.25 μM의 여과기를 이용하여 농축조로 이송하여 60℃에서 감압농축 및 동결건조하여 로즈바나나 열매 아임계 추출물을 제조하였다.

이와 같이, 로즈바나나 열매를 아임계 추출조건으로 추출한 추출물을 'FRUWATER-01'이라고 지칭한 후, 하기 실험예에서 사용하였다.

[비교실시예 1: 일반 바나나 열매 아임계 추출물 제조]

일반 바나나 껍질과 과육을 음건하여 파쇄 후 50.0 g을 50℃, 2기압인 아임계상에서 2시간 동안 추출하였다. 처리한 후 실온으로 냉각시켰다. 아임계로 처리한 일반 바나나 껍질과 과육을 최종 70%(v/v) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman) #10 여과지로 여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 0.25 μM의 여과기를 이용하여 농축조로 이송하여 60℃ 정도에서 감압농축 및 동결건조하여 일반 바나나 열매 아임계 추출물을 준비하였다.

이와 같이, 일반 바나나 열매를 아임계 추출조건으로 추출한 추출물을 'FRUWATER-00'라고 지칭한 후, 하기 실험예에서 사용하였다.

[실험예 1 : 로즈바나나 열매 추출물의 항산화 효과 확인 실험]

본 실험예에서는 로즈바나나 열매 추출물의 항산화 효과를 측정하기 위해 부틸히드록시 톨루엔(butyl hydroxytoluene, BHT)과 같은 항산화제를 비교샘플로 하고, β-카로틴 미백 어세이(β-carotene bleaching assay)를 이용하여 항산화 활성을 측정하였다.

측정방법으로서, 클로로포름 1 ㎖에 β-카로틴(β-carotene) 0.5 mg을 용해하여 제조한 β-카로틴(β-carotene) 용액 1 ㎖를 1.5 ㎖ 튜브(tube)에 넣고, 리놀레산(linoleic acid) 25 ㎕ 및 Tween 20 200 ㎕를 첨가하여 40℃ 진공회전농축기에서 진공상태로 클로로포름을 제거한 후, 증류수 100 ㎖를 가하고 교반하여 에멀젼(emulsion) 용액을 제조하였다. 상기 에멀젼(emulsion) 용액 5 ㎖에 시료, 에탄올 및 BHT 용액 0.2 ㎖를 첨가하고 50℃ 배양기에서 배양하였다. 배양 기간 중 0분에서 120분 동안 30분 간격으로 490 nm에서 흡광도를 측정한 후, 하기 수학식 1을 이용하여 항산화 효과를 확인하였다. 시료명, 처리농도 및 실험결과는 하기 표 1에 나타내었다.

[수학식 1]

항산화 효과(%)=[1-(B₀-B₁₂₀₎/(A₀-A₁₂₀)]×100

A₀: 시료를 처리하지 않은 대조군의 0분의 흡광도

A₁₂₀: 시료를 처리하지 않은 대조군의 120분의 흡광도

B₀: 시료를 처리한 실험군의 0분의 흡광도

B₁₂₀: 시료를 처리한 실험군의 120분의 흡광도

시료명	처리농도 (%)	항산화 효과 (%)
실시예 1 (RB-1)	0.1	82
실시예 2 (RB-2)	0.1	68
실시예 3 (RB-3)	0.1	70
실시예 4 (RB-4)	0.1	65
실시예 5 (RB-5)	0.1	38
실시예 6 (FRUWATER-01)	0.1	91
비교실시예 1 (FRUWATER-00)	0.1	15
BHT	0.1	84

실험결과, 실시예 1 내지 6 (RB-1 내지 RB-5, FRUWATER-01)의 항산화 효과는 각각 82%, 68%, 70%, 65%, 38%, 91%로 나타났으며, 비교실시예 1 (FRUWATER-00)의 항산화 효과는 15%, BHT의 항산화 효과는 84%로, 로즈바나나 열매 추출물이 일반 바나나 추출물에 비하여 탁월한 항산화 효과 발휘하며, 특히, 실시예 6 (FRUWATER-01)의 경우 양성대조군인 BHT보다 우수한 항산화 효과를 발휘함을 확인할 수 있었다.

[실험예 2 : 로즈바나나 열매 추출물의 티로시나아제(tyrosinase) 발현 억제 효과 확인 실험]

본 실험예에서는 로즈바나나 열매 추출물의 피부 미백 효과를 확인하고자 티로시나아제(tyrosinase) 발현 억제 정도를 확인하였다.

B16F10 세포를 6 웰 플레이트(well plate) (5×10⁵/well)에 DMEM 배지로 분주하고 2시간 동안 플레이팅(plating)하였다. 여기에 실시예 1, 6 및 비교실시예1의 추출물을 0.1%로 처리하고 2시간 후에 α-MSH (100nM)를 48시간 동안 처리하였다. 그 후, 차가운 PBS로 세포를 모은 후, RIPA 완충액을 이용하여 얼음 상에서 30분 동안 10분 간격으로 강하게 교반하여 세포를 용해하였다. 그 후, 12,000rpm, 4℃에서 20분간 원심분리하여 상층액을 수득하고, 브래드포드(bradford)법으로 정량하였다. 동량의 단백질을 샘플 로딩 버퍼(sample loading buffer)와 혼합하여 100℃에서 10분간 가열하고 SDS-PAGE를 수행하였다. 전기영동 후 겔(gel)을 PVDF 멤브레인(polyvinylidene fluoride membrane)에 이동시킨 후, 5% 스킴 밀크(skim milk)에서 블락킹(blocking)하였다. 그 후, 1xTBST 완충액으로 3회 세척 후 티로시나아제(tyrosinase) 1차 항체를 넣고 오버나이트(overnight)하였다. 1차 항체 반응 후, 1xTBST 완충액으로 3회 세척한 후 HRP(horseradish peroxidase)-conjugated 2차 항체를 2시간 반응시켰다. 그 후, 1xTBST 완충액으로 3회 세척한 후 ECL(enhanced chemiluminescence) 용액으로 반응시키고, Chemi DocTM XRS+ machine을 이용하여 각각의 밴드를 동정하였다. 티로시나아제의 밴드를 Image J를 이용해 수치화하였으며 하기 수학식 2를 이용하여 티로시나아제 발현 억제율을 확인하였다. 양성대조군으로 알부틴을 이용하였으며, 그 결과는 하기 표 2에 나타내었다.

[수학식 2]

티로시나아제 발현 억제율(%)=[1-B/(A₁-A₂)]×100

A₁: α-MSH를 처리한 밴드의 넓이 값

A₂: 시료를 처리하지 않은 밴드의 넓이 값

B: 시료를 처리한 밴드의 넓이 값

시료명	처리농도 (%)	티로시나아제 발현 억제율 (%)
실시예 1 (RB-1)	0.1	75
실시예 2 (RB-2)	0.1	66
실시예 3 (RB-3)	0.1	60
실시예 4 (RB-4)	0.1	70
실시예 5 (RB-5)	0.1	45
실시예 6 (FRUWATER-01)	0.1	85
비교실시예 1 (FRUWATER-00)	0.1	20
알부틴(arbutin)	0.1	76

실험결과, 실시예 1 내지 6 (RB-1 내지 RB-5, FRUWATER-01)의 티로시나아제 발현 억제율은 각각 75%, 66%, 60%, 70%, 45%, 85%로 나타났으며, 비교실시예 1 (FRUWATER-00)의 티로시나아제 발현억제율은 20%, 알부틴의 티로시나아제 발현 억제율은 76%로, 로즈바나나 열매 추출물이 일반 바나나 추출물에 비하여 탁월한 티로시나아제 발현 억제 효과를 발휘하며, 특히, 실시예 6 (FRUWATER-01)의 경우 양성대조군인 알부틴보다 우수한 티로시나아제 발현 억제 효과를 발휘함을 확인할 수 있었다.

[실험예 3 : 로즈바나나 열매 추출물의 MMP-1 발현 억제 확인 실험]

본 실험예에서는 로즈바나나 열매 추출물의 기질 금속단백질분해효소(MMP-1) 발현에 대한 억제 효과를 확인하고자 하였다.

인간 진피 섬유아세포를 PBS로 세척한 후, 트립신을 이용해 배양접시에서 떼어낸 후, 6 웰 플레이트(well plate)에 3×10⁵ cells로 분주하고 24시간 동안 안정화 시켰다. 그 후, 10 ㎍/㎖의 포로볼(phorbol) PMA(12-myristate 13-acetate)와 로즈바나나 열매 추출물 (농도 0.1%)을 동시에 처리하였다. 24시간 후에 트리졸(trizol)을 이용하여 total RNA를 분리하였다. RNA는 UV 스펙트로미터(UV spectrometer)로 정량한 후, 2 ㎍의 RNA를 역전사 효소(reverse transcriptase)를 이용해 cDNA로 합성하고, Taq 중합효소를 이용하여 증폭시켰다. 이렇게 증폭된 PCR 산물은 아가로스 겔(agarose gel)에 전기영동을 실시한 후 밴드를 확인하였으며, 하기 수학식 3을 이용하여 MMP-1 발현 억제율을 확인하였다. 양성대조군으로 형질전환인자(TGF-β)를 이용하였으며, 그 결과는 하기 표 3과 같았다.

[수학식 3]

MMP-1 발현 억제율(%)=[1-B/(A₁-A₂)]×100

A₁: 포로볼 PMA를 처리한 밴드의 넓이 값

A₂: 시료를 처리하지 않은 밴드의 넓이 값

B: 시료를 처리한 밴드의 넓이 값

시료명	처리농도(%)	MMP-1 발현 억제율(%)
실시예 1 (RB-1)	0.1	75
실시예 2 (RB-2)	0.1	65
실시예 3 (RB-3)	0.1	68
실시예 4 (RB-4)	0.1	61
실시예 5 (RB-5)	0.1	50
실시예 6 (FRUWATER-01)	0.1	81
비교실시예 1 (FRUWATER-00)	0.1	11
TGF-β	0.1	79

실험결과, 실시예 1 내지 6 (RB-1 내지 RB-5, FRUWATER-01)의 MMP-1 발현 억제율은 각각 75%, 65%, 68%, 61%, 50%, 81%로 나타났으며, 비교실시예 1 (FRUWATER-00)의 MMP-1 발현 억제율은 11%, TGF-β의 MMP-1 발현 억제율은 79%로, 로즈바나나 열매 추출물이 일반 바나나 추출물에 비하여 탁월한 MMP-1 발현 억제 효과를 발휘하며, 특히, 실시예 6 (FRUWATER-01)의 경우 양성대조군인 TGF-β보다 우수한 MMP-1 발현 억제 효과를 발휘함을 확인할 수 있었다.

[ 실험예 4 : 로즈바나나 열매 추출물의 NO 생성 억제 활성 확인 실험]

본 실험예에서는 로즈바나나 열매 추출물의 NO(Nitric Oxide) 생성 억제 활성을 확인하고자 하였다.

RAW 264.7 세포를 96 웰 플레이트(well plate)(5×10⁵/well)에 DMEM 배지로 분주하고 2시간 동안 플레이팅(plating)하였다. 여기에 실시예 1, 6 및 비교실시예 1의 추출물을 0.1%의 농도로 처리하고 2시간 후에 LPS (1 ㎍/㎖)를 24시간 동안 처리하였다. 24시간 처리한 세포의 상등액 100 ㎕를 다른 96 웰 플레이트(well plate)에 옮기고 그리스 리간트 (Griess reagent) A와 B 시약을 혼합해 (1% sulfanilamide + 2% phosphoric acid, 0.1% N-(1-Naphthyl)ethylene diamine dihydrochloride 100 ㎕씩 혼합하여 반응시킨 후 마이크로플레이트 리더(microplate reader)를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였고, 하기 수학식 4를 이용하여 NO 생성 억제율을 계산하였다. 또한, 양성대조군으로 EGCG(Epigallocatechin gallate)를 이용하였으며, 그 결과는 하기 표 4에 나타내었다.

[수학식 4]

NO 생성 억제율(%)=[1-B/(A₁-A₂)]×100

A₁: LPS를 처리한 웰의 흡광도

A₂: 시료를 처리하지 않은 웰의 흡광도

B: 시료를 처리한 웰의 흡광도

시료명	처리농도(%)	NO 생성 억제율 (%)
실시예 1 (RB-1)	0.1	77
실시예 2 (RB-2)	0.1	65
실시예 3 (RB-3)	0.1	62
실시예 4 (RB-4)	0.1	63
실시예 5 (RB-5)	0.1	51
실시예 6 (FRUWATER-01)	0.1	79
비교실시예 1 (FRUWATER-00)	0.1	13
EGCG	0.1	71

실험결과, 실시예 1 내지 6 (RB-1 내지 RB-5, FRUWATER-01)의 NO 생성 억제율은 각각 77%, 65%, 62%, 63%, 51%, 79%로 나타났으며, 비교실시예 1 (FRUWATER-00)의 NO 생성 억제율은 13%, EGCG의 NO 생성 억제율은 71%로, 로즈바나나 열매 추출물이 일반 바나나 추출물에 비하여 탁월한 NO 생성 억제 효과를 발휘하며, 특히, 실시예 6 (FRUWATER-01)의 경우 양성대조군인 EGCG보다 NO 생성 억제효과가 우수함을 확인할 수 있었다.

[실시예 7: 로즈바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물 제조]

본 실시예에서는 실시예 1, 6 및 비교실시예 1을 함유하는 화장료 조성물을 각각 제조하기 위해, 하기 표 5에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존하였다. 이것에 가)상을 가하여 예비 유화 후, 호모믹서로 균일하게 유화한 다음에 서서히 냉각하여 크림형태의 화장료 조성물을 각각 제조하였다. 제조된 화장료 조성물을 각각 제형예 1, 2 및 비교제형예 1이라고 지칭하였다.

	원료	제형예 1	제형예 2	비교제형예 1
가	스테아릴 알콜	8	8	8
	스테아린산	2	2	2
	스테아린산 콜레스테롤	2	2	2
	스쿠알란	4	4	4
	2-옥틸도데실알콜	6	6	6
	폴리옥시에틸렌(25몰부가)알콜에스테르	3	3	3
	글리세릴모노스테아린산 아스테르	2	2	2
	유동파라핀	5	5	5
나	실시예 1 (RB-1)	5	-	-
	실시예 6 (FRUWATER-01)	-	5	-
	비교실시예1 (FRUWATER-00)	-	-	5
	프로필렌글리콜	5	5	5
	글리세린	4	4	4
	정제수	to 100	to 100	to 100

[실험예 5 : 로즈바나나 열매 추출물 함유 화장료 조성물의 수분 손실 억제 효과 측정]

본 실험예에서는 로즈바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 수분손실 억제 효과를 확인하고자 하였다.

20~40대 여성 40명을 대상으로 오른쪽 얼굴, 왼쪽 얼굴, 이마에 각 화장료 (제형예 1, 2 및 비교제형예 1)를 바르고, 바르기 전과 바른 후 1시간, 2시간, 4시간, 6시간의 경피수분손실량을 테와미터 (Tewameter, TM300, Courage and Khazaka Electronic Co., Germany)를 이용하여 3회 측정하고 평균값을 사용하여 경피수분손실량 (g/h/cm²)을 평가하였다. 그 결과는 하기 표 6에 나타내었다.

구분	0시간	1시간	2시간	4시간	6시간
제형예 1	17	14.9	12.4	9.9	7.6
제형예 2	17.2	14.4	11.8	8.7	6.8
비교제형예 1	17	15.5	13.8	11.4	10.2

실험결과, 로즈바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물 (제형예 1 및 2)은 6시간이 지난 후 수분 손실량이 각각 7.6, 6.8 g/h/cm²로 수분 손실량 적음에 반해, 일반 바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물 (비교제형예 1)은 6시간이 지난 후 수분 손실량이 10.2 g/h/cm²로 수분 손실량이 큼을 확인할 수 있었다. 상기와 같은 결과로부터 로즈바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 우수한 피부 장벽 기능 개선효과를 확인할 수 있었다.

[실험예 6: 로즈바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 피부 미백 효과 확인 실험]

본 실험예는 로즈바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 피부 미백 효과를 확인하고자 하였다.

실험자 (20세~35세의 여성) 10명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 상기 제형예 1의 크림을, 얼굴 왼쪽 부위에는 상기 비교제형예 1 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. 시험 완료 후, 얼굴 좌우 양편의 도포 부위 피부를 화상분석기 및 크로마메타(Minolta CR300)를 이용하여 피부색의 밝기 변화(L= 시험 후 피부 밝기-시험 전 피부 밝기)를 측정하고, 복수의 숙련자에 의한 객관적 육안 관찰과 피검자에 의한 주관적 육안관찰을 하여 하기 등급 분류에 따라 효과를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다. 이때 미백 효능 정도를 다음의 7등급으로 분류하여 평가하였다.

[미백효능 평가 기준]

-3: 매우 악화, -2: 악화, -1: 약간 악화, 0: 변화 없음, 1: 약간 개선, 2: 개선, 3: 매우 개선

	피부색의 밝기 변화 (△L)		숙련자의 객관적 평가		피검자의 주관적 평가
	제형예 1	비교제형예 1	제형예 1	비교제형예 1	제형예 1	비교제형예 1
평균값	3.1	2.2	2.7	1.7	2.7	1.9

실험결과, 로즈바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물 (제형예 1)이 일반 바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물 (비교제형예 1)보다 우수한 피부 미백 효과를 발휘함을 확인할 수 있었다.

[실험예 7: 로즈바나나 열매 추출물 함유 화장료 조성물의 피부 잔주름 개선 효과 확인 실험]

본 실험예는 로즈바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 피부 잔주름 개선 효과를 확인하고자 하였다.

상기 제형예 1 및 비교제형예 1의 크림을 실험자(20세~35세의 여성) 10명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 제형예 1의 크림을 얼굴 왼쪽 부위에는 비교제형예 1의 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. 실험완료 후, 화장료 도포 전과 2개월간 사용 후에 안면 눈꼬리 주위의 주름을 실리콘 수지 복사물 (레플리카)로 채취하고, 이것을 피부 미세 주름 장치와 피부 영상 분석기로 눈가 잔주름의 상태를 비교하였다. 결과는 하기 표 8에 나타내었다 (n=10, p0.05).

	제형예 1		비교제형예 1
	사용 전	2개월 사용 후	사용 전	2개월 사용 후
평균 잔주름 깊이 (mm)	0.23	0.16	0.22	0.20
유의차		0.014		1.50

실험결과, 로즈바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물 (제형예 1)은 사용 2개월 후, 평균 잔주름 깊이가 0.014 mm 정도 회복되고, 일반 바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물 (비교제형예 1)은 사용 2개월 후, 평균 잔주름 깊이가 1.50 mm 정도 회복됨을 확인할 수 있었다. 상기와 같은 결과로부터 로즈바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 우수한 피부 주름 개선효과를 발휘함을 확인할 수 있었다.

[실험예 8 : 로즈바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 피부 보습 효과 측정 실험]

본 실험예에서는 로즈바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 피부 보습 효과를 확인하고자 하였다.

실험자 20명을 대상으로 하박부에 상기 제형예 1 및 비교제형예 1을 각각 바르고, 약 90분 후에 바르기 전과 바른 후의 보습 능력을 수분측정기(Corneometer, CM 820)로 보습효과(△Hydration, g/h/cm²)를 평가하였다. 그 결과는 하기 표 9에 나타내었다.

구분	제형예 1	비교제형예 1
보습효과 (△Hydration)	20	9

실험결과, 로즈바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물 (제형예 1)의 보습효과는 20 g/h/cm², 일반 바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물 (비교제형예 1)의 보습효과는 9 g/h/cm²를 나타냄을 확인할 수 있었다. 상기와 같은 결과로부터, 로즈바나나 열매 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 우수한 피부 보습 효과를 발휘함을 확인할 수 있었다.

Claims

로즈바나나 열매를 아임계상에서 추출하여 로즈바나나 열매 아임계 추출물을 제조한 후, 상기 로즈바나나 열매 아임계 추출물을 화장료 조성물에 첨가하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물의 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 로즈바나나 열매는,
로즈바나나의 껍질 또는 과육 중 하나 이상인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물의 제조방법.
삭제
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 주름 개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물의 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 미백용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물의 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 보습용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물의 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 장벽기능 강화용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물의 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
염증 완화용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물의 제조방법.