KR101510418B1 - Freezed fermentation agent containing aromatic yeast and the preparation thereof - Google Patents

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Abstract

본 발명은 향기효모가 첨가된 냉동 발효제 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 향기효모의 배양액, 효소제, 밀가루, 음용수 및 당류를 포함하며, 20 ~ -80℃의 냉동상태로 존재하는 냉동발효제를 제공한다. 상기 냉동발효제의 제조방법은 (a) 향기효모를 이용하여 배양액을 제조하는 단계; (b) 상기 (a)단계의 향기효모 배양액에 효소제, 밀가루, 당류 및 멸균수를 첨가하여 혼합하는 단계; 및 (c) 상기 (b)단계의 혼합물을 -20 ~ -80℃로 냉동시키는 단계;를 포함한다.
상기 향기효모인 피키아 아노말라(Phichi anomala) AY1(기탁번호 KACC93175P), 피키아 아노말라(Phichi anomala) AY56(기탁번호 KACC93178P), 피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY42(기탁번호 KACC93176P) 및 피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY47(기탁번호 KACC93177P)가 첨가된 냉동발효제를 제조하여 전통 발효주를 제조 시, 당화와 알코올 발효가 동시에 일어나 균일한 술의 품질을 유지할 수 있고, 효모와 발효제의 무게를 일일이 저울로 달지 않아도 되는 편리함이 있다. 또한, 종래의 술과는 차별화된 향미와 맛을 부여할 수 있기 때문에 새로운 술의 맛을 추구하는 소비자의 기호도를 향상시킬 수 있는 향기효모가 첨가된 냉동 발효제 및 이의 제조방법을 제공한다.
The present invention relates to a freeze fermentation agent to which a flavor yeast is added and a preparation method thereof, and more particularly to a freeze fermentation agent containing flavor yeast culture, enzyme, wheat flour, drinking water and saccharides, Thereby providing an fermentation agent. The method for producing a freeze-thawing fermentation agent comprises the steps of: (a) preparing a culture solution using a flavor yeast; (b) adding an enzyme, wheat flour, saccharide, and sterilized water to the flavor yeast culture solution of step (a); And (c) freezing the mixture of step (b) to -20 to -80 < 0 > C.
The flavor yeast Pichia anomalas ( Phichi anomala ) AY1 (Accession No. KACC93175P), Phycia anomalas ( Phichi anomala ) AY56 (Accession No. KACC93178P), Phichia fabianii ) AY42 (Accession No. KACC93176P) and Phichia fabianii ) AY47 (Accession No. KACC93177P) is added to produce a fermented fermented soybean milk, the saccharification and alcohol fermentation can occur at the same time, so that the uniform quality of the fermented milk can be maintained. In addition, There is convenience. The present invention also provides a freeze fermentation agent to which a flavor yeast is added and a method for producing the same, which can improve the taste of a consumer who tastes a new sake, because flavor and taste different from conventional sake can be imparted.

Description

향기효모가 첨가된 냉동 발효제 및 이의 제조방법 {Freezed fermentation agent containing aromatic yeast and the preparation thereof} [0001] The present invention relates to a freeze fermentation agent containing flavor yeast and a method for preparing the same,

본 발명은 향기효모가 첨가된 냉동 발효제 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 전통누룩으로부터 항기효모인 피키아 아노말라(Pichia anomala) AY1, 피키아 아노말라(Pichia anomala) AY56, 피키아 파비아니(Pichia fabianii) AY42 및 피키아 파비아니(Pichia fabianii) AY47을 분리한 후, 상기 향기효모를 첨가한 냉동 발효제를 제조함으로써 전통 발효주의 다양한 맛과 향미를 개선 및 증진시킬 수 있을 뿐만 아니라 당화와 알코올 발효가 동시에 일어나 균일한 술의 품질을 유지할 수 있고, 제조하고자 하는 술의 양만큼 미리 발효제를 제조하여 냉동시켜 놓음으로써, 제조 시 간편하게 적용할 수 있는 향기효모가 첨가된 냉동 발효제 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
The present invention relates to a freeze fermentation agent to which a flavor yeast is added and a method for producing the same, and more particularly, to a fermented yeast- anomala ) AY1, Pichia anomala ) AY56, Pichia fabianii ) AY42 and Pichia fabianii ) AY47, and then the fermented yeast-added freeze fermentation broth can be prepared to improve and enhance various flavors and flavors of traditional fermented beverages, as well as saccharification and alcohol fermentation, The present invention relates to a freeze fermentation agent to which a flavor yeast can be easily added during manufacture by freezing the fermentation agent by preparing an amount of the fermentation agent in advance, and a method for producing the same.

술은 알코올 성분이 들어 있는 음료를 통틀어 이르는 말로, 세계 각국에서는 Alcohol is an alcoholic beverage.

자연 환경에 적합한 그 지역의 특정 기후 및 풍토에 맞는 독특한 양조 방법이 전해져 오고 있다. 우리나라의 전통주는 크게 탁주 및 약주, 소주 등으로 구분되며 서양의 술처럼 화려하진 않지만 건강에도 좋을 뿐만 아니라 우리 조상들의 식생활 풍속이 담겨있기 때문에 삶의 지혜와 멋, 기품이 담겨져 있다.Unique brewing methods have been introduced to suit the specific climate and climate of the area suitable for the natural environment. Korean traditional liquor is divided into Takju, Yakju and Soju. It is not as gorgeous as western liquor but it is not only good for health but also contains the wisdom, style and elegance of life because it contains the food customs of our ancestors.

우리나라 전통주의 원료는 쌀, 찹쌀, 보리쌀, 현미, 옥수수, 고구마 등이며, 곡류의 주성분인 전분질을 당분으로 전환시켜 술을 제조하기 때문에 미생물이 생성하는 효소가 필요하며 그 발효원이 누룩이다. 누룩은 삼국시대부터 당화제로 사용하였으며, 제조 방법에 따라 자연 상태에서 곰팡이, 효모, 세균류 등 많은 종류의 미생물이 번식되어 만들어지는 재래누룩과 살균한 전분질 원료에 Aspergillus kawachii, Aspergillus oryzae Rhizopus sp . 등 순수 배양한 균을 접종하여 만든 개량누룩으로 분류된다. 이러한 미생물에 의한 다양한 효소 작용으로 인해 원료 성분이 분해되어 생성되는 당, 아미노산, 유기산 등의 맛 성분과 효모에 의한 알코올 발효로 생성되는 휘발성 풍미 성분이 색과 함께 품질의 조화를 이루게 된다. 따라서, 누룩의 종류에 따라 효소 활성, 유기산 생산력 및 알코올 발효력 등이 달라지기 때문에 발효주의 휘발성 풍미 성분, 맛, 색상의 품질 특성에 큰 영향을 미친다. The raw materials of traditional Korean rice are rice, glutinous rice, barley rice, brown rice, corn, sweet potato, etc. Since the main ingredient of cereal is converted into sugar to produce alcohol, an enzyme produced by microorganism is needed and its fermentation source is leaven. Nuruk has been used as a saccharifying agent since the Three Kingdoms period, and it has been used as a raw material for various kinds of microorganisms such as fungi, yeast, and fungi in the natural state, and Aspergillus kawachii, Aspergillus oryzae and Rhizopus sp . Which is made by inoculation of pure cultured bacteria. Amino acids, organic acids, and volatile flavor components produced by fermentation of alcohol by yeast are harmonized with color due to various enzymatic actions by these microorganisms. Therefore, enzyme activity, organic acid productivity, and alcohol fermentation ability vary depending on the type of yeast, and therefore, the volatile flavor component, taste and color quality characteristics of the fermented beverage greatly influence the characteristics.

한편, 종래의 전통주를 양조하는 과정에서 통상적으로 누룩을 발효제로 사용하여 왔는데, 이렇게 제조된 누룩 발효제를 이용한 술은 맛과 향 등의 변화가 없고, 발효 조건에 따라 품질이 상이해질 수 있어 품질을 균질화 하는데 어려움이 있었다. 특히, 상기 문제점을 극복하고자 새로운 누룩을 만들기 위한 다양한 시도는 꾸준히 있었으나, 현재 약주 및 탁주의 생산은 중소 양조업자들에 의해 이루어지고 있기 때문에 신종 균주의 개량 및 품질 관리가 허술하며, 아직까지 우수한 향을 가진 발효주를 생산하지 못하고 있어 다양한 맛과 향을 기대하기 어려운 실정이다. On the other hand, in the process of brewing conventional traditional liquor, yeast has been conventionally used as an fermentation agent. However, the liquor using the yeast fermentation agent thus produced has no change in taste and aroma and the quality may be different depending on the fermentation conditions. There was difficulty in homogenization. Especially, in order to overcome the above problems, various attempts have been made to make new yeast. However, since the production of Yakju and Takju is made by small and medium brewers, improvement and quality control of new strains are poor, It is difficult to expect a variety of flavors and aromas.

따라서 우리나라 전통주의 지속적인 소비를 촉진시키기 위해서는 우선적으로 우수 균주 탐색, 균주 개량 등의 종균에 관한 연구가 선행되어야 하고, 원료의 최적 발효조건 설정 및 당화 조건, 관능 개선 등의 연구와 술의 맛 개선으로 소비자 기호에 적합한 발효제의 제공이 강하게 요구되고 있는 실정이다.Therefore, in order to promote the continuous consumption of Korean traditional stock, it is necessary to precede research on the seed culture such as search for excellent strains and strain improvement, and research on the optimum fermentation condition of raw materials, glycation condition and sensory improvement, There is a strong demand for providing an appropriate fermentation agent suitable for consumers' preference.

최근 들어 전통주에 새로운 향미를 더하기 위한 추세가 형성되면서, 전통주에 맛과 향미를 향상시키는 방법들이 꾸준히 개발되고 있다. In recent years, a trend to add new flavor to traditional liquor has been developed, and methods for improving taste and flavor in traditional liquor have been steadily developed.

구체적인 선행기술을 보면, 선행기술 1(KR 특 0185020 B1)은 새로운 고향기 약주효모균주 사카로마이세스 세레비제(Saccharomyces cerevisiae)TD03과 이를 이용한 약주의 제조방법에 관한 것으로서, 사카로마이세스 세레비제(Saccharomyces cerevisiae) DR 효모를 에틸메탄설포네이트(E.M.S., Ethyl Methanesulfonate)로 돌연변이 처리한 후 선별 배지에서 분리 개량시켜 약주 발효 시, 다량의 이소초산아밀과 이소아밀알코올을 생산하여 풍미가 좋은 약주를 쉽게 제조하는 방법이 공개되어 있다.In view of the specific prior art, Prior Art 1 (KR Patent 0185020 B1) discloses a novel high aroma Yakju yeast Saccharomyces cerevisiae cerevisiae) TD03 and it relates to a method of producing Yakju using, by improving saccharide as MY process serenity non-zero (Saccharomyces cerevisiae) DR yeast ethyl methane sulfonate (EMS, Ethyl Methanesulfonate) after the mutation treatment separate from the selection medium to Yakju fermentation A method of easily producing a flavorful yakju by producing a large amount of amyl alcohol and isoamyl alcohol is disclosed.

선행기술 2(KR 10-2008-0053629 A)는 주류의 향기성분을 증가시키는 사카로마이세스 세레비제T084 및 식물약재를 이용한 약주의 제조방법에 관한 것으로서, 사카로마이세스 세레비제 T084 이용하여 발효시킨 후, 상기 발효액에 동충하초와 적하수오 등의 식물약재를 첨가하여 제조함으로써 기존에 비하여 향기가 풍부한 약주를 제조할 수 있을 뿐만 아니라 동충하초 및 적하수오와 같은 식물약재를 함유하여 자양강장, 미용, 피로회복과 같은 기능성이 있는 약주를 제조하는 방법이 공개되어 있다.Background Art [0002] Prior Art 2 (KR 10-2008-0053629 A) relates to a method for preparing a safflower using Saccharomyces cerevisiae T084 and a phytopathogenic ingredient which increases the aroma component of a mainstream, And then adding phytopharmaceuticals such as Cordyceps and Red Sulfuric Acid to the fermentation broth to produce a fragrant-rich fermented beverage, as well as containing phytopharmaceuticals such as Cordyceps and Red Seaweed, A method for producing a functional sugar such as a recovery has been disclosed.

그러나 상기와 같이 전통주의 향기 성분을 증가시키기 위해 다양한 향기 효모 및 성분을 첨가하여 전통 발효주의 향미를 향상시킬 수 있는 장점이 있으나 주로 일반적으로 사용되는 향기 효모로 사카로마이세스 세레비제 속에 대한 보고는 많이 되고 있지만, 그 외의 신종 균주로서 향기 효모를 개발한 사례가 드물었다. 또한, 효모 발효액에 포함된 식물약재 등으로 품질의 균질화 문제가 발생할 수 있으며, 제조 공정이 추가됨에 따라 원료 가격 및 생산성의 효율이 떨어져 경제적으로 문제점이 있었다. However, as described above, in order to increase the aroma component of the traditional wine, it is advantageous to improve the flavor of the traditional fermented wine by adding various fragrance yeast and ingredients. However, the report on the genus Saccharomyces cerevisiae, There are many cases of developing fragrance yeast as a new strain. In addition, homogenization of quality may occur due to the use of plant medicines contained in the fermentation broth of yeast, and as the manufacturing process is added, the efficiency of the raw material cost and the productivity are lowered, resulting in economical problems.

이러한 단점을 고려하여, 본 연구자들은 향기효모로서 피키아 아노말라(Pichia anomala) AY1, 피키아 아노말라(Pichia anomala) AY56, 피키아 파비아니(Pichia fabianii) AY42 및 피키아 파비아니(Pichia fabianii) AY47을 전통누룩으로부터 분리하여 향기효모가 첨가된 냉동 발효제를 전통 발효주에 첨가함으로써 종래의 술과는 차별화된 맛과 향미를 부여할 수 있을 뿐만 아니라, 전통 발효주의 고질적인 문제점이었던 품질 균일화를 상당히 개선시킬 수 있는 향기효모가 첨가된 냉동 발효제 및 이의 제조방법을 본 발명에서 제공한다.In view of these disadvantages, the present inventors have found that, as an aroma yeast,Pichia anomala) AY1, Pichia anomala (Pichia anomala) AY56, Pichiafabiani (Pichia fabianii) AY42 and Pichia Fabiani (Pichia fabianii) By separating AY47 from traditional yeast and adding a fermented yeast-freezing fermentation broth to a conventional fermentation broth, it is possible to impart differentiated taste and flavor to the conventional broth, A frozen fermentation agent to which an aroma yeast can be improved is added and a method for producing the same are provided in the present invention.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
Numerous papers and patent documents are referenced and cited throughout this specification. The disclosures of the cited papers and patent documents are incorporated herein by reference in their entirety to better understand the state of the art to which the present invention pertains and the content of the present invention.

KR 특 0185020 B1KR Special 0185020 B1 KR 10-2008-0053629 AKR 10-2008-0053629 A

본 발명자들은 기존에 시판되는 발효주의 경우, 발효주를 양조하는 과정에서 통상적으로 누룩을 발효제로서 사용하여 왔는데, 이렇게 제조된 누룩 발효제를 이용하여 제조된 술은 맛과 향미 등의 변화가 거의 없기 때문에 향기, 풍미 및 독특한 맛의 이점을 최대한 살리지 못했다는 단점이 있다는 점을 발견하였다. 또한, 발효에 불필요한 미생물이 다량 함유되어 있어 온도 관리를 잘못하면 술덧이 실패하기 쉽고, 미생물이 균일하지 못해 전통 누룩의 품질에 대한 특별한 균일화 기술이 없는 일반 중소 양조업체들이 발효주를 생산하면서 직접 균일화하기에는 많은 어려움이 있다. 양조에 사용되는 전통누룩은 품질 편차가 심하고, 이를 고정화시키기에는 많은 시간과 정성이 필요하기 때문이다. 상기와 같은 이유로 인하여 본 발명자들은 개인적으로 양조장을 경영하거나 소규모 업체에서 비교적 쉽게 실천할 수 있는 기술로서, 대중의 입맛에 맞으면서도 규격화된 제품 생산을 하는데 어려움이 있다는 점을 발견하여 이를 해결하기 위해 예의 연구 노력하였다.The present inventors have conventionally used nuruk as an fermentation agent in the process of brewing fermented beverages in the case of commercially available fermented beverages. Since the fermented beverages produced using the nuruk fermentation agent thus produced have little change in taste and flavor, , Flavor, and unique flavor of the product. In addition, since a large amount of unnecessary microorganisms are contained in the fermentation, it is easy for the fermentation to fail, and the microorganisms are not uniform, so that the small and medium breweries which do not have the special uniformization technique for the quality of the traditional yeast, There is a difficulty. The traditional yeast used for brewing has a high quality deviation, and it requires a lot of time and attention to fix it. For the above reasons, the inventors of the present invention have discovered that it is difficult to produce a standardized product in accordance with the taste of the public, as a technology that can be operated by a brewery personally or can be relatively easily implemented by a small company, I tried.

이에 본 발명은 전통누룩으로부터 알코올 함량과 향미 생성능이 우수한 향기효모를 분리하여 향기효모가 첨가된 냉동 발효제를 제조한 결과, 이를 이용하여 발효주를 제조하면 종래의 술과는 차별화된 향미와 맛을 부여하여 새로운 술의 맛을 추구하는 소비자의 기호도를 향상 시킬 수 뿐만 아니라, 당화와 알코올 발효가 동시에 일어나 균일한 술의 품질을 유지할 수 있고, 제조하고자 하는 술의 양만큼 미리 발효제를 제조하여 냉동시켜 놓음으로써, 제조 시 간편하게 적용하여 균일화된 술을 제조할 수 있다는 사실을 발견하여 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present invention provides a fermented yeast-freezing fermentation broth obtained by separating fragrant yeast having excellent alcohol content and flavor-producing ability from a conventional yeast, and as a result, it is possible to produce a fermented broth using the fermented yeast, Not only can the preference of the consumer seeking the taste of the new liquor be improved but also the saccharification and the alcohol fermentation can occur at the same time and the uniform quality of the liquor can be maintained and the fermentation agent is prepared and frozen by the amount of the liquor to be produced Thus, the present invention has been accomplished by discovering that it is possible to produce homogeneous sake by simple application in the production.

따라서, 본 발명의 목적은 알코올 함량과 향미 생성능이 우수하고 균일화된 술을 제조할 수 있는 냉동 발효제 및 이의 제조방법을 제공하는데 있다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a freeze-fermentation agent and a method for producing the same, which can produce an alcohol having an excellent alcohol content and flavor-producing ability and in a homogenized state.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 방법으로 제조된 향기효모 냉동발효제를 첨가하여 제조된 발효식품 및 발효음료를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a fermented food and a fermented beverage prepared by adding the flavor yeast freezing fermentation agent prepared by the above method.

본 발명의 또 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
Other objects and advantages of the present invention will become more apparent from the following detailed description of the invention, claims and drawings.

본 발명은 향기효모의 배양액, 효소제, 밀가루, 음용수 및 당류를 포함하며, -20 ~ -80℃의 냉동상태로 존재하는 냉동발효제를 제공한다.The present invention provides a frozen fermentation broth comprising a culture medium of flavor yeast, an enzymatic agent, wheat flour, drinking water and a saccharide, and being in a frozen state at -20 to -80 ° C.

상기 냉동발효제는 전분질 원료 중량 대비 향기효모의 배양액 0.01~0.1중량%, 효소제 0.1~0.5중량%, 밀가루 2.0~4.0중량%, 음용수 1.0~2.0중량% 및 당류 0.1~0.5중량%를 포함할 수 있다.The freeze fermentation agent may contain 0.01 to 0.1% by weight of the culture medium of the perfume yeast, 0.1 to 0.5% by weight of the enzyme agent, 2.0 to 4.0% by weight of wheat flour, 1.0 to 2.0% by weight of drinking water and 0.1 to 0.5% .

상기 향기효모는 전통누룩으로부터 분리한 효모 중 알코올 함량과 향미 생성능이 우수한 피키아 아노말라(Phichi anomala) AY1(기탁번호 KACC93175P), 피키아 아노말라(Phichi anomala) AY56(기탁번호 KACC93178P), 피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY42(기탁번호 KACC93176P) 및 피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY47(기탁번호 KACC93177P)로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나인 것일 수 있다.The fragrance yeast has excellent alcohol content and flavor-producing ability in the yeast isolated from the traditional yeast Phichi anomala ) AY1 (Accession No. KACC93175P), Phycia anomalas ( Phichi anomala AY56 (Accession No. KACC93178P), Phichia fabianii AY42 (Accession No. KACC93176P) and Phichia fabianii fabianii ) AY47 (Accession No. KACC93177P).

상기 향기효모의 배양액은 효모 cell 수 기준으로 1x106~2x107 cell/mL 인 것일 수 있다. The culture medium of the flavor yeast may be 1 × 10 6 to 2 × 10 7 cells / mL based on the number of yeast cells.

상기 향기효모의 배양액은 향기효모를 YPD 배지에서 15 ~ 30℃로 30 ~ 80시간 무균 배양하여 얻어진 것일 수 있다.The culture medium of the flavor yeast may be obtained by culturing the flavor yeast in a YPD medium at 15 to 30 DEG C for 30 to 80 hours.

상기 효소제는 당화력 10,000~15,000 SP의 효소제 및 당화력 1,000~1,800 SP의 개량누룩에서 선택된 적어도 하나인 것일 수 있다.The enzymatic agent may be at least one selected from the group consisting of an enzymatic agent having a saccharifying power of 10,000 to 15,000 SP and a modified yeast having a saccharifying power of 1,000 to 1,800 SP.

상기 밀가루는 강력분, 중력분 및 박력분에서 선택된 적어도 하나인 것일 수 있다.The wheat flour may be at least one selected from the group consisting of a strong, a gravity and a flour.

상기 당류는 글루코스, 수크로스 및 이소말토올리고당에서 선택된 적어도 하나인 것일 수 있다.The saccharide may be at least one selected from glucose, sucrose and isomaltooligosaccharide.

본 발명의 향기효모가 첨가된 냉동 발효제의 제조방법은 (a) 향기효모를 이용하여 배양액을 제조하는 단계; (b) 상기 (a)단계의 향기효모 배양액에 효소제, 밀가루, 당류 및 멸균수를 첨가하여 혼합하는 단계; 및 (c) 상기 (b)단계의 혼합물을 -20 ~ -80℃로 냉동시키는 단계;를 포함한다.The method for preparing a fermented yeast-freezing fermentation agent according to the present invention comprises the steps of: (a) preparing a culture solution using a flavor yeast; (b) adding an enzyme, wheat flour, saccharide, and sterilized water to the flavor yeast culture solution of step (a); And (c) freezing the mixture of step (b) to -20 to -80 < 0 > C.

본 발명은 향기효모가 첨가된 냉동 발효제를 첨가하여 제조된 발효식품 및 발효음료를 제공한다.
The present invention provides a fermented food and a fermented beverage prepared by adding a fermented yeast-added freezing fermentation agent.

본 발명에 의한 향기효모가 첨가된 냉동 발효제 및 이의 제조방법은 향기효모로서 피키아 아노말라(Pichia anomala) AY1, 피키아 아노말라(Pichia anomala) AY56, 피키아 파비아니(Pichia fabianii) AY42 및 피키아 파비아니(Pichia fabianii) AY47을 첨가하여 냉동 발효제를 제조한 후, 상기 향기효모 발효제를 첨가하여 약주 및 탁주를 제조함으로써, 종래의 시판되고 있는 전통주와 비교하였을 때 알코올 생성력이 탁월한 향기효모의 첨가로 인해 청량감 높은 술을 제공함과 동시에 다양한 맛과 향미로 인한 기호성을 증진시킬 수 있기 때문에 경쟁력을 향상시킬 수 있다. The fermentation yeast-added freeze fermentation agent according to the present invention and the preparation method thereof can be used as flavor yeasts such as Pichia anomala ) AY1, Pichia anomala ) AY56, Pichia fabianii ) AY42 and Pichia fabianii AY47 were added to a fermented yeast fermentation broth to prepare a fermented yeast fermentation broth , and then the fermented yeast fermentation broth was added to the fermented yeast fermentation broth, The addition of the yeast can improve the competitiveness of the beverage because it provides a high calorific feeling and promotes palatability due to various flavors and flavors.

또한, 전통 발효주 제조 시 당화력이 균일하지 못한 효소제에 의해 규격화된 제품 생산에 어려움이 있다는 점을 발견하여 본 발명은 향기 효모 냉동발효제를 사용함으로써 발효주 제조 시, 당화와 알코올 발효가 동시에 일어나 술을 제조하여 균일한 전통 발효주의 품질을 유지할 수 있다. 또한, 제조하고자 하는 술의 양만큼 미리 발효제를 제조하여 냉동시켜 놓음으로써 간편하게 혼합하기만 하면 되기 때문에 효모와 발효제의 무게를 일일이 저울로 달지 않아도 되는 편리함이 있다. In addition, it has been found that it is difficult to produce a standardized product by an enzyme having an unglyh saccharogenic power in the production of traditional fermented milk. Therefore, the present invention uses fermented yeast freezing fermentation agent to produce saccharide and alcohol fermentation simultaneously, So that the uniform quality of the conventional fermented beverage can be maintained. In addition, since the fermentation agent is prepared in advance by freezing the amount of the alcohol to be produced, and the fermentation agent is simply mixed, it is convenient that the weight of the yeast and the fermentation agent is not required to be individually scaled.

또한. 본 발명은 비교적 제조 공정이 간단하기 때문에 기존 양조장에서도 균일한 품질의 발효주 제조를 가능하도록 할 수 있는 기술이므로 누구나 쉽게 생산할 수 있을 뿐만 아니라 술에 대한 소비자 신뢰도를 한층 더 높일 수 있다.
Also. Since the present invention is a relatively simple process, it is possible to produce a uniform quality fermented beverage even in existing breweries, so that not only can it be easily produced by anyone, but also the consumer confidence in the beverage can be further improved.

본 발명은 향기효모가 첨가된 냉동 발효제를 제공한다.The present invention provides a freeze fermentation agent to which flavor yeast is added.

본 발명자들은 종래의 누룩 발효제를 이용하여 제조된 술은 맛과 향미 등의 변화가 거의 없기 때문에 차별화된 맛과 향미가 거의 없었고, 당화력이 균일하지 못한 효소제에 의해 규격화된 제품 생산에 어려움이 있다는 점을 발견하여 이를 해결하기 위해 예의 연구 노력하였다. 그 결과 상술한 장점을 가지는 향기효모가 첨가된 냉동 발효제를 완성하였다.The inventors of the present invention found that the sake produced by using the conventional yeast fermentation agent had little different taste and flavor because there was almost no change in taste and flavor and that there was difficulty in producing a product standardized by an enzyme agent having an unharmonizing power And tried to find a way to solve it. As a result, a frozen fermentation broth with added flavor yeast having the above-mentioned advantages was completed.

본 발명은 향기효모의 배양액, 효소제, 밀가루, 음용수 및 당류를 포함하며, -20 ~ -80℃의 냉동상태로 존재하는 것이다.The present invention includes a culture of flavor yeast, an enzyme, a flour, a drinking water and a saccharide, and is present in a frozen state at -20 to -80 ° C.

상기 냉동발효제는 전분질 원료 중량 대비 향기효모의 배양액 0.01~0.1중량%, 효소제 0.1~0.5중량%, 밀가루 2.0~4.0중량%, 음용수 1.0~2.0중량% 및 당류 0.1~0.5중량%를 포함한다.The frozen fermentation agent comprises 0.01 to 0.1% by weight of the culture medium of the perfume yeast, 0.1 to 0.5% by weight of the enzyme agent, 2.0 to 4.0% by weight of wheat flour, 1.0 to 2.0% by weight of drinking water and 0.1 to 0.5% by weight of saccharide.

상기 향기효모는 전통 발효주 제조에 있어서 다량의 향기 성분을 생성할 수 있는 효모를 발굴하여 얻어진 것으로, 구체적으로는 전통적으로 사용해오던 누룩으로부터 다양한 미생물을 분리하고, 효모의 지방산 합성을 저해하는 25~50uM 의 cerulenin을 포함하는 YPD (yeast extract 1.0%, peptone 2%, dextrose 2%, agar 2.0%) 평판배지에 30℃, 3일간 분리균주들을 각각 배양해 보아서 생존한 균주들을 1차로 스크리닝하였다. 1차 스크리닝을 거친 균주들을 동일한 환경에서 새로운 평판배지에 다시 배양하여 후각적인 관능 테스트를 실시하였으며, 9균주가 2차로 스크리닝 되었다. 이들 9균주를 이용하여 약주를 제조하여 Gas chromatography 분석을 한 결과 최종적으로 향미와 알코올 생성력이 우수한 균주 4종이 확인되었다. 이들 균주들은 각각 계통학적으로 피키아 아노말라(Pichia anomala) 또는 피키아 파비아니(Pichia fabianii)에 속하는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 균주는 기존에 존재하지 않은 신규한 균주임을 확인할 수 있었으며, 이에 본 발명에서 분리 및 동정한 신규한 균주를 Pichia anomala AY1, Phichi anomala AY56, Phichia fabianii AY42, Phichia fabianii AY47 로 국립농업유전자원센터(KACC)에 기탁하여 기탁번호 KACC93175P, KACC93178P, KACC93176P, KACC93177P를 부여받았고, 이를 각각 "피키아 아노말라(Phichi anomala) AY1(기탁번호 KACC93175P)", "피키아 아노말라(Phichi anomala) AY56(기탁번호 KACC93178P)", "피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY42(기탁번호 KACC93176P)" 및 "피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY47(기탁번호 KACC93177P)"로 명명하였다. The fragrance yeast is obtained by extracting yeast capable of producing a large amount of fragrance ingredient in the preparation of traditional fermentation liquor. Specifically, the fragrance yeast is prepared by isolating various microorganisms from the yeast that has been traditionally used, The strains were cultured for 3 days at 30 ℃ in a plate medium containing YPD (yeast extract 1.0%, peptone 2%, dextrose 2%, agar 2.0%) containing cerulenin and the surviving strains were firstly screened. The primary screened strains were cultivated again on a new plate medium in the same environment, and olfactory sensory tests were performed. Nine strains were screened secondarily. Gas chromatography analysis of these strains was carried out using these 9 strains. As a result, 4 strains with excellent flavor and alcohol production were identified. Each of these strains was phylogenetically different from Pichia anomala , or Pichia fabianii ). These strains were confirmed to be novel strains which did not exist in the past, and thus the novel strains isolated and identified in the present invention were identified as Pichia anomala AY1, Phichi anomala AY56, Phichia fabianii AY42, Phichia fabianii AY47 to the National Center for Agricultural Genetic Resources (KACC) and assigned accession numbers KACC93175P, KACC93178P, KACC93176P, and KACC93177P, respectively, and these are referred to as " Phichi anomala AY1 (Accession No. KACC93175P) "," Phichi anomala AY56 (Accession No. KACC93178P), Phichia fabianii AY42 (Accession No. KACC93176P) and Phichia fabianii fabianii ) AY47 (Accession No. KACC93177P) ".

Strain nameStrain name Microbial speciesMicrobial species Accession no.Accession no. Similarity (%)Similarity (%) AY1AY1 PichiaPichia anomalaanomala 100100 AY42AY42 PichiaPichia fabianiifabianii JQ342083JQ342083 100100 AY47AY47 PichiaPichia fabianiifabianii HQ651909 HQ651909 9999 AY56AY56 PichiaPichia anomalaanomala JX316753JX316753 100100

본 발명의 냉동발효제는 향기효모 배양액 속의 효모 수가 cell (colony forming unit)를 기준으로 1x106~2x107 cell/mL로 조절하여 사용하는 것이 바람직하다. 이는 상기 범위보다 적은 수이면 발효속도가 현저히 느려지며, 상기 범위보다 너무 많으면 효모의 번식이 너무 빨리 진행되어 알코올을 충분히 생성하지 못한 채 발효가 정지될 가능성이 높아지기 때문이다. The frozen fermentation agent of the present invention is preferably used by adjusting the number of yeasts in the flavor yeast culture to 1 × 10 6 to 2 × 10 7 cells / mL based on the cell (colony forming unit). If the number is smaller than the above range, the fermentation speed is significantly slowed. If the above range is exceeded, the propagation of the yeast proceeds too fast, and the possibility of stopping the fermentation is increased without generating enough alcohol.

전통 발효주의 제조에 있어서 발효원으로 이용되어 오던 전통누룩은 다종의 다양한 미생물들이 포함되어 있어 이를 이용한 술은 맛과 향미 등의 변화가 심하기 때문에 균일한 향미를 낼 수 없는 단점을 갖는다. 또한 향기 성분이 적은 양으로 존재하는데, 알코올 음료에 있어서 향기 성분의 유무 및 그 함량은 품질을 결정하는 중요한 요소이다. 전통 발효주를 제조하는 데 있어서 전통누룩을 대체하여 본 발명의 신규한 "피키아 아노말라(Phichi anomala) AY1(기탁번호 KACC93175P)", 피키아 아노말라(Phichi anomala) AY56(기탁번호 KACC93178P)", "피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY42(기탁번호 KACC93176P)" 및 "피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY47(기탁번호 KACC93177P)"효모를 사용하는 경우 발효주의 향미를 증진시켜 종래의 술과는 차별화된 맛과 향미를 부여할 수 있는 주류를 제조할 수 있다. 또한, 상기 향기효모를 첨가하여 냉동발효제를 제조하여 전통 발효주를 제조 시, 당화와 알코올 발효가 동시에 일어나 균일한 술의 품질을 유지할 수 있고, 효모와 발효제의 무게를 일일이 저울로 달지 않아도 되는 편리함이 있다.Traditional nuruk, which has been used as a fermentation source in the production of traditional fermented beverages, contains various microorganisms and has a disadvantage in that it can not produce a uniform flavor due to a large change in taste and flavor. Also, the fragrance component is present in a small amount, and the presence or absence of the fragrance component in the alcoholic beverage is an important factor for determining the quality. In the production of traditional fermentation liquor , the novel " Phichi " anomala AY1 (Accession No. KACC93175P) ", Phichi anomala ) AY56 (Accession No. KACC93178P) "," Phichia Fabiania AY42 (Accession No. KACC93176P) "and" Phichia fabianii AY47 (Accession No. KACC93177P) "When the yeast is used, the flavor of the fermented soybean is enhanced to give a distinctive taste and flavor In addition, when the fermented yeast is added to prepare a fermented fermented product, the saccharification and the fermentation of the alcohol occur at the same time, so that the uniform quality of the fermented product can be maintained, and the weight of the yeast and the fermented product There is convenience that you do not have to pay scales one by one.

상기 향기효모 배양액은 피키아 아노말라(Pichia anomala) AY1, 피키아 아노말라(Pichia anomala) AY56, 피키아 파비아니(Pichia fabianii) AY42 및 피키아 파비아니(Pichia fabianii) AY47을 YPD 배지(yeast extract 1.0%, peptone 2.0%, dextrose 2.0%, agar 2.0%)에서 15 ~ 30℃에서 30 ~ 80시간 무균적으로 배양하여 향기효모 배양액을 제조하는 것이 바람직하다. The flavor yeast culture broth was obtained from Pichia anomala ) AY1, Pichia anomala ) AY56, Pichia fabianii ) AY42 and Pichia fabianii ) AY47 is cultured aseptically in a YPD medium (yeast extract 1.0%, peptone 2.0%, dextrose 2.0%, agar 2.0%) at 15-30 ° C for 30-80 hours to prepare a flavor yeast culture.

한편, 본 발명의 냉동발효제는 당화력 10,000~15,000 SP의 효소제 및 당화력 1,000~1,800 SP의 개량누룩을 사용하는 것이 당화효소의 역가조절 측면에서 바람직하다. On the other hand, it is preferable that the enzyme of the freezing fermentation agent of the present invention has a saccharifying power of 10,000 to 15,000 SP and a modified yeast having a saccharifying power of 1,000 to 1,800 SP in view of controlling the activity of the saccharifying enzyme.

상기 밀가루는 강력분, 중력분 및 박력분 중에서 적어도 하나를 사용하는 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 중력분을 사용하는 것이 술의 품질을 향상시키고, 냉동발효제를 더욱 우수하게 제조할 수 있다는 측면에서 바람직하다. The wheat flour is preferably at least one selected from the group consisting of high-strength, middle-gravity and pulverulent components, more preferably, from the viewpoint of enhancing the quality of the drink and further improving the quality of the frozen fermentation agent.

상기 당류는 글루코스 (Glucose), 수크로스 (Sucrose) 및 이소말토올리고당 (Isomaltooligosaccharide) 중에서 적어도 하나를 사용하는 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 수크로스 (Sucrose)를 사용하는 것이 경제적이고, 분해가 잘 된다는 측면에서 바람직하다. The saccharide is preferably at least one selected from the group consisting of glucose, sucrose and isomaltooligosaccharide, more preferably sucrose is economical, .

상기 멸균수는 증류수 및 음용수 중에서 선택된 적어도 하나를 사용할 수 있으며, 가수 비율은 밀가루 총 무게 대비 50~100중량% 사이로 사용할 수 있다.The sterilized water may be at least one selected from the group consisting of distilled water and drinking water. The hydrolyzate may be used in an amount of 50 to 100% by weight based on the total weight of the flour.

본 발명의 냉동 발효제는 향기효모 배양액 0.01~0.1중량%를 포함하는 것이 발효의 안정성 측면에서 바람직하다. The freeze fermentation agent of the present invention preferably contains 0.01 to 0.1% by weight of a flavor yeast culture solution in terms of stability of fermentation.

또한, 효소제는 0.1~0.5중량% 포함하는 것이 당화효소 역가의 안정성 측면에서 바람직하다. The content of the enzyme is preferably 0.1 to 0.5% by weight in view of stability of the saccharifying enzyme activity.

또한 밀가루 2.0~4.0중량%를 포함하는 것이 술의 품질 안정성 및 발효제의 성형 안정성 측면에서 바람직하다. In addition, it is preferable that the flour contains 2.0 to 4.0 wt% of flour from the standpoint of quality stability of the alcohol and molding stability of the fermentation agent.

또한 당류 0.1~0.5중량%를 포함하는 것이 경제성 및 발효의 안정성 측면에서 바람직하다. Also, it is preferable to include 0.1 to 0.5% by weight of saccharides in terms of economy and stability of fermentation.

본 발명의 향기효모가 첨가된 냉동발효제는 냉동을 하지 않으면 피키아속 효모가 발효제 내에서 번식을 하기 때문에 제형 후 -20 ∼ -80℃ 로 냉동시키는 것이 바람직하다.
It is preferable that the frozen fermentation agent to which the flavor yeast of the present invention is added is frozen at -20 to -80 ° C. after the formulation because the fermented yeast grows in the fermentation broth without freezing.

본 발명의 일 실시예에 따른 향기효모가 첨가된 냉동발효제의 제조방법은 (a) 향기효모를 이용하여 배양액을 제조하는 단계; (b) 상기 (a)단계의 향기효모 배양액에 효소제, 밀가루, 당류 및 멸균수를 첨가하여 혼합하는 단계; 및 (c) 상기 (b)단계의 혼합물을 -20 ~ -80℃로 냉동시키는 단계;를 포함하는 것이다.A method for preparing a fermented yeast-added freezing fermentation agent according to an embodiment of the present invention comprises the steps of: (a) preparing a culture solution using a flavor yeast; (b) adding an enzyme, wheat flour, saccharide, and sterilized water to the flavor yeast culture solution of step (a); And (c) freezing the mixture of step (b) to -20 to -80 < 0 > C.

상기 멸균수는 증류수 및 음용수 중에서 선택된 어느 하나를 사용할 수 있으며, 가수 비율은 밀가루 총 무게 대비 50~100중량% 사이로 사용할 수 있다.The sterilized water may be any one selected from distilled water and drinking water, and the water content may be between 50 and 100% by weight based on the total weight of the flour.

본 발명의 향기효모가 첨가된 냉동발효제는 냉동을 하지 않으면 피키아속 효모가 발효제 내에서 번식을 하기 때문에 제형 후 -20 ∼ -80℃ 로 냉동시키는 것이 바람직하다.It is preferable that the frozen fermentation agent to which the flavor yeast of the present invention is added is frozen at -20 to -80 ° C. after the formulation because the fermented yeast grows in the fermentation broth without freezing.

상기 향기효모 배양액, 효소제, 밀가루 및 당류에 대한 구체적인 내용 및 혼합비는 상술한 것과 같다.The contents and the mixing ratio of the flavor yeast culture solution, the enzyme agent, the flour and the sugar are as described above.

본 발명은 향기효모가 첨가된 냉동 발효제를 첨가하여 제조된 발효식품 및 발효음료를 제공할 수 있다.The present invention can provide a fermented food and a fermented beverage prepared by adding a fermented yeast-added freezing fermentation agent.

이때, 상기 향기효모가 첨가된 냉동 발효제의 혼합 비율은 매우 중요하다. 발효제의 조성에 따라 전통 발효주의 색상, 향기, 맛 및 종합적 기호도가 달라지기 때문에 최종적으로 전통주에 대한 종합적 관능적 선호도가 좌우될 수 있기 때문이다. 일예로, 전통주를 제조하는데 있어서 냉동발효제의 첨가량을 전통주 제조에서 사용되는 전분류, 일예로 쌀가루 100중량부에 대하여 냉동발효제를 3~5% 중량부로 배합하는 것이 전통 발효주의 색상, 향기, 맛 및 종합적 기호도 측면에서 바람직하다. At this time, the mixing ratio of the fermented yeast-added freezing fermentation agent is very important. Because the color, aroma, flavor and overall preference of traditional fermented liquor varies depending on the composition of the fermenting agent, the overall sensual preference for traditional liquor may ultimately be determined. For example, when adding the amount of the freeze-thawing fermentation agent to the whole of the conventional fermented soybean, for example, about 3 to 5% by weight of the fermented fermentation broth per 100 parts by weight of the rice flour, It is preferable in terms of comprehensive preference.

상기에서는 약주에 대한 일예로서 설명하였으나, 상기 및 이하의 기재에서 "전통주" 또는 "전통 발효주"라는 용어는 약주를 비롯하여, 탁주, 과실주, 증류주, 리큐르, 기타주 등과 같은 알코올성 음료를 모두 포함하는 것으로 이해되어져야 할 것이다. In the above and the following description, the term "traditional wine" or "traditional fermented wine" includes all the alcoholic beverages such as Takju, fruit wine, distilled wine, liqueur, It should be understood.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명 하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. It is to be understood that the scope of the present invention is not limited by these examples in accordance with the gist of the present invention, and it is to be understood by those skilled in the art that the present invention is not limited thereto It will be obvious.

실시예Example

본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 "%"는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (중량/중량) %, 고체/액체는 (중량/부피) %, 그리고 액체/액체는 (부피/부피) %이다.
Throughout this specification, "%" used to denote the concentration of a particular substance is intended to include solids / solids (wt / wt), solid / liquid (wt / The liquid / liquid is (vol / vol)%.

실시예Example 1.  One. 피키아속Picky 균주의 분리 및 동정 Isolation and Identification of Strain

(1-1) 균주의 분리(1-1) Isolation of strain

본 발명자들은 전통누룩으로부터 알코올 함량과 향미 생성능이 우수한 균주로 선별, 동정하였다. The present inventors selected and identified strains having excellent alcohol content and flavor-producing ability from conventional yeast.

구체적으로는 전통누룩 1g을 멸균수 1,000mL에 혼탁한 뒤 YPD (yeast extract 1.0%, peptone 2.0%, dextrose 2.0%, agar 2.0%) 배지에 도말하고 각각의 독립된 집락을 YPD 배지에 옮겨 분리배양하였다. 이들을 각각 효모의 지방산 합성을 저해하는 25~50uM 의 cerulenin을 포함하는 YPD 평판배지에 30℃, 3일간 분리균주들을 각각 배양해 보아서 생존한 균주들을 1차로 스크리닝하였다. 1차 스크리닝을 거친 균주들을 동일한 환경에서 새로운 평판배지에 다시 배양하여 후각적인 관능 테스트를 실시하였으며, 9균주가 2차로 스크리닝 되었다. 이들 9균주를 이용하여 약주를 제조하여 Gas chromatography 분석을 한 결과 최종적으로 알코올 함량과 향미 생성능이 우수한 균주 4종이 확인되었다. Specifically, 1 g of the conventional yeast was suspended in 1,000 mL of sterilized water, and then spread on YPD (yeast extract 1.0%, peptone 2.0%, dextrose 2.0%, agar 2.0%) medium and the individual colonies were transferred to YPD medium for separate culture . These strains were cultured in YPD plate medium containing 25 ~ 50uM of cerulenin, which inhibited the fatty acid synthesis of yeast, respectively, and cultured at 30 ℃ for 3 days. The surviving strains were firstly screened. The primary screened strains were cultivated again on a new plate medium in the same environment, and olfactory sensory tests were performed. Nine strains were screened secondarily. Gas chromatography analysis of these strains of nine varieties showed four strains with excellent alcohol content and flavor.

(1-2) 선별된 균주의 동정(1-2) Identification of selected strains

알코올 함량과 향미 생성능이 우수한 균주 4종의 효모는 18S ribosomal DNA 영역을 ITS 1,4 primer [ITS 1 (5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3') and ITS 4 (5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3')] 를 이용하여 PCR을 실시한다. 생성된 PCR산물은 솔젠트 회사에 의뢰하여 동정 결과를 취하였다. 4종의 효모의 상동성과 분류군은 National Center for Biotechnology Information (NCBI; BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) 검색을 통하여 밝힌 결과, 이 4종의 균종은 피키아 아노말라(Pichia anomala ), 피키아 파비아니(Pichia fabianii)의 분류군에 속하는 것으로 분석되었다. 또한, 4종의 균주 즉, AY1은 Pichia anomala AY1 (기탁번호 KACC93175P), AY56은 Pichia anomala AY56 (기탁번호 KACC93178P), AY42는 Phichia fabianii AY42(기탁번호 KACC93176P), AY47은 Phichia fabianii AY47(기탁번호 KACC93177P)는 기존에 존재하지 않는 신규한 균주임을 확인하였으며, 2013년 3월 14일자로 국립농업유전자원센터(KACC)에 균주기탁을 하여 기탁번호 KACC93175P, KACC93178P, KACC93176P, KACC93177P 을 부여받았다. Four yeast strains with excellent alcohol content and flavor-producing ability were prepared by using ITS 1,4 primer [ITS 1 (5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3 ') and ITS 4 (5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3')] in 18S ribosomal DNA region PCR is performed. The resulting PCR product was assigned to Solgent Corporation and the result of identification was taken. The homology and taxa of the four yeasts were identified by searching the National Center for Biotechnology Information (NCBI; Basic Local Alignment Search Tool). As a result, these four species were identified as Pichia anomala , and Pichia fabianii, respectively. In addition, four strains, AY1 and Pichia anomala AY1 (Accession No. KACC93175P), AY56 is Pichia anomala AY56 (Accession No. KACC93178P), AY42 is Phichia fabianii AY42 (Accession No. KACC93176P), AY47 is Phichia Fabianii AY47 (Accession No. KACC93177P) was confirmed to be a novel strain that does not exist in the past, and deposited with the National Institute of Agricultural Genetic Resources (KACC) on March 14, 2013 and deposited with accession numbers KACC93175P, KACC93178P, KACC93176P, KACC93177P .

이하 본 발명에서는 상기 동정한 신균주를 피키아 아노말라(Phichi anomala) AY1(기탁번호 KACC93175P), 피키아 아노말라(Phichi anomala) AY56(기탁번호 KACC93178P), 피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY42(기탁번호 KACC93176P) 및 피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY47(기탁번호 KACC93177P)로 명명하였다.
In the present invention, the new strain identified above is called Phichi anomala ) AY1 (Accession No. KACC93175P), Phycia anomalas ( Phichi anomala ) AY56 (Accession No. KACC93178P), Phichia fabianii ) AY42 (Accession No. KACC93176P) and Phichia fabianii ) AY47 (Accession No. KACC93177P).

실시예Example 2.  2. 향기효모Aroma yeast 냉동 발효제의 제조 Manufacture of Frozen Fermentation Agent

본 발명에 따른 신균주인 피키아 아노말라(Phichi anomala) AY1(기탁번호 KACC93175P), 피키아 아노말라(Phichi anomala) AY56(기탁번호 KACC93178P), 피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY42(기탁번호 KACC93176P) 및 피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY47(기탁번호 KACC93177P)를 이용하여 각각의 냉동 발효제를 제조하였다. The novel strain of the present invention, Phichi anomala ) AY1 (Accession No. KACC93175P), Phycia anomalas ( Phichi anomala ) AY56 (Accession No. KACC93178P), Phichia fabianii ) AY42 (Accession No. KACC93176P) and Phichia fabianii ) AY47 (Accession No. KACC93177P).

항기효모 냉동 발효제의 원료 조성은 하기 표 2와 같다. 표 2의 향기효모 냉동 발효제의 조성물은 발효주 제조 시 사용되는 전분질 원료 1kg 대비 첨가량을 제조하였다. The raw material composition of the frozen yeast freezing fermentation agent is shown in Table 2 below. The composition of the fragrant yeast freezing fermentation agent of Table 2 was prepared in an addition amount relative to 1 kg of the starch raw material used for producing the fermented milk.

구분division 향기효모
배양액
Aroma yeast
Culture solution
효소제Enzyme 밀가루
(중력분)
flour
(Gravity fraction)
당류
(Sucrose)
sugars
(Sucrose)
음용수Drinking water
1mL(106/mL)1 mL (10 < 6 > / mL) 2g (15,000SP)2 g (15,000 SP) 40g40g 2g2g 20ml20ml

(1) 효모 배양액의 제조: 선별된 균주를 각각 YPD 배지(yeast extract 1.0%, peptone 2.0%, dextrose 2.0%, agar 2.0%)에서 25℃ 내외의 실온에서 48시간 무균적으로 배양하여 효모 배양액을 얻었다. (1) Preparation of yeast culture: The selected strains were aseptically cultured in YPD medium (yeast extract 1.0%, peptone 2.0%, dextrose 2.0%, agar 2.0%) at room temperature for about 48 hours at 25 ° C, .

(2) 배양액 속의 효모 수는 1x106 cell/mL로 조절하여 1mL을 상기 표 2의 배합량에 의거하여 효소제, 밀가루, 당류 및 멸균수의 혼합물에 접종하였다. (2) The number of yeasts in the culture was adjusted to 1x10 6 cells / mL, and 1 mL was inoculated into the mixture of enzyme, wheat flour, saccharide and sterilized water based on the blending amount in Table 2 above.

(3) 상기 (2)의 혼합물을 -20℃에 저장하여 향기효모 냉동 발효제를 제조하였다.(3) The mixture of the above (2) was stored at -20 캜 to prepare a flavor yeast freezing fermentation product.

본 실시예에서는 효소제로서 당화력 15,000 SP인 시판 효소제를 사용하였는데, 만일 당화력이 10,000 SP인 개량누룩을 사용한 경우는 75g 정도로 대체하면 된다.In this example, a commercially available enzymatic agent having a saccharifying power of 15,000 SP was used as an enzyme agent. If the modified saccharide having a saccharifying power of 10,000 SP is used, it may be replaced with about 75 g.

실시예Example 3.  3. 향기효모Aroma yeast 냉동 발효제를 이용한 발효주 제조 Manufacture of Fermented Juice Using Frozen Fermentation Agent

상기 실시예 2로부터 제조된 냉동발효제를 이용하여 다음의 방법으로 발효주를 제조하였다. 쌀가루 1kg를 깨끗이 씻은 다음 찬물에 12시간 침지 시킨 후, 건져 내 1시간 가량 물빼기를 한다. 물을 제거한 쌀을 곱게 분쇄하여 가루를 낸 후, 끊는 물 1.2L를 쌀가루에 부어 쌀가루 반죽이 식을 때까지 골고루 잘 섞어준다. 반죽이 약 35℃까지 식으면 표 1에서 제조된 4종의 향기효모 냉동 발효제를 첨가하여 골고루 섞일 때까지 다시 잘 저어준 후, 술덧을 제조하였다. 이 술덧을 20℃에서 7일간 발효시켜서 발효주를 제조하였다.
A fermentation broth was prepared by the following method using the freeze fermentation agent prepared in Example 2 above. Wash 1kg of rice flour thoroughly, then immerse in cold water for 12 hours, and drain it for about 1 hour. Thoroughly crush the rice from which the water has been removed and pour the flour into the rice flour (1.2 L), and mix well until the rice flour is cooled. When the dough was cooled to about 35 ° C, the four kinds of flavor yeast freezing fermentation agents prepared in Table 1 were added and stirred well until the mixture was evenly mixed. The fermentation broth was fermented at 20 ° C for 7 days to prepare a fermentation broth.

시험예Test Example 1:  One: 향기효모Aroma yeast 냉동 발효제로 제조한  Made from frozen fermentation agent 술덧의Sulphurous 이화학적 성분 분석 Physicochemical composition analysis

상기 실시예 3에 따라 제조된 술덧의 이화학적 성분 특성 결과는 하기 표 3과 같다.The results of the physico-chemical composition characteristics of the syrup prepared according to Example 3 are shown in Table 3 below.

SampleSample pHpH 총산
(%, w/v)
Total
(%, w / v)
아미노산도
(mL)
Amino acid degree
(mL)
알코올
(%, v/v)
Alcohol
(%, v / v)
가용성고형분
(°Brix)
Soluble solids
(° Brix)
환원당
(%, w/v)
Reducing sugar
(%, w / v)
AY1AY1 3.1±0.2b3.1 ± 0.2b 1.45±0.08a1.45 + 0.08a 5.27±0.8b5.27 ± 0.8b 4.17±2.29ab4.17 ± 2.29ab 22.3±2.3bc22.3 ± 2.3 bc 1.19±0.24f1.19 + 0.24f AY42AY42 3.24±0.13cde3.24 ± 0.13 cm 1.06±0.08cde1.06 ± 0.08 cde 6.10±0.13ab6.10 + 0.13ab 0.47±0.42c0.47 + - 0.42c 25.53±0.97a25.53 + - 0.97a 8.11±0.66b8.11 + 0.66b AY47AY47 3.30±0.08abc3.30 ± 0.08abc 1.00±0.11ef1.00 ± 0.11ef 6.41±0.09a6.41 ± 0.09a 0.43±0.06c0.43 + 0.06c 26.43±0.31a26.43 + - 0.31a 7.85±1.31b7.85 ± 1.31b AY56AY56 3.3±0.1ab3.3 ± 0.1ab 1.25±0.03cd1.25 ± 0.03 cd 6.40±0.30ab6.40 ± 0.30ab 1.10±0.70c1.10 0.70 c 25.3±1.2a25.3 ± 1.2a 1.76±0.08cd1.76 + 0.08 cd

그 결과, 상기 표 3에 나타난 바와 같이 신균주인 Pichia anomala AY1을 사용한 처리구는 알코올 생성력이 다른 처리구보다 탁월한 것을 알 수 있다. 또한, 아미노산의 함량이 높으면 술의 맛이 느끼해지게 되는데, 신균주인 Pichia anomala AY1을 사용한 처리구의 경우 아미노산의 함량이 상대적으로 낮아 청량감이 높게 향상된 것을 알 수 있다.
As a result, as shown in Table 3, the new strain Pichia anomala AY1 treated group had higher alcohol production than the other treatments. In addition, if the content of amino acid is high, the taste of alcohol will be felt, and the new strain Pichia anomala In the case of treatment with AY1, the amino acid content was relatively low, indicating that the sensation of coolness was improved.

시험예Test Example 2:  2: 향기효모Aroma yeast 냉동 발효제로 제조한 발효주의 향기 분석 Flavor Analysis of Fermented Juice Made from Frozen Fermentation Agent

상기 제조예 3에 따라 제조된 발효주를 제조하는 데 있어서 이용된 효모 및 제조된 발효주의 향기분석 결과는 다음 표 4와 같다. The results of the analysis of the fragrance of the yeast and the fermented fermented product used in the preparation of the fermented product according to Preparation Example 3 are shown in Table 4 below.

향기 분석은 Gas Chromatography (GC 2010, Shimadzu Co., Kyoto, Japan)를 사용하여 분석하였다. 각 약주 1 uL를 GC의 injector에 injection 하였다. GC에 사용된 컬럼은 HP-INNOWAX capillary column (60 m × 0.25 mm id × 0.25 μM film thickness, J & W Scientific, Folsom, CA, USA)을 사용하였다. 이동상 기체는 질소를 사용하였으며 유속은 22.0 cm/sec (linear velocity)이었다. 컬럼의 오븐 온도는 초기 45℃ 로 5분간 유지시켰다가 분당 5℃의 속도로 100℃까지 올리고 5분간 유지하였다. 그 후 분당 10℃의 속도로 200℃까지 올리고 10분간 유지하였다. 분리율(split ratio)은 50:1로 조정하였다. 인젝터와 디텍터(FID) 온도는 250℃를 유지하였다. Fragrance analysis was performed using Gas Chromatography (GC 2010, Shimadzu Co., Kyoto, Japan). 1 μL of each calf was injected into the GC injector. The column used in GC was a HP-INNOWAX capillary column (60 m × 0.25 mm id × 0.25 μM film thickness, J & W Scientific, Folsom, CA, USA). Nitrogen gas was used as the mobile phase gas and the flow rate was 22.0 cm / sec (linear velocity). The oven temperature of the column was maintained at an initial 45 ° C for 5 minutes, then raised to 100 ° C at a rate of 5 ° C per minute and held for 5 minutes. Thereafter, the temperature was raised to 200 DEG C at a rate of 10 DEG C per minute and held for 10 minutes. The split ratio was adjusted to 50: 1. The injector and detector (FID) temperatures were maintained at 250 ° C.

균주/
향기성분
The strain /
Fragrance component
AcetaldehydeAcetaldehyde EtoAcEtoAc IsobutanolIsobutanol Isoamyl
alcohol
Isoamyl
alcohol
Ethyl
caprylate
Ethyl
caprylate
Acetic
acid
Acetic
acid
FufralFufral LinaloolLinalool ButyrateButyrate Ethyl
caproate
Ethyl
caproate
2-Phenyl
alcohol
2-Phenyl
alcohol
AY1AY1 1519.0 1519.0 256.4 256.4 -- 10.3 10.3 115.4 115.4 5082.5 5082.5 398.0 398.0 155.1 155.1 -- 59.5 59.5 5.9 5.9 AY42AY42 1504.8 1504.8 49.949.9 -- 7.7 7.7 65.365.3 3026.63026.6 149.3 149.3 67.5 67.5 17.0 17.0 99.499.4 5.6 5.6 AY47AY47 1386.61386.6 82.5 82.5 -- 6.76.7 55.455.4 3452.13452.1 62.062.0 152.6152.6 7.6 7.6 176.6176.6 6.9 6.9 AY56AY56 1366.7 1366.7 -- -- 91.6 91.6 -- 1651.5 1651.5 824.5 824.5 145.4 145.4 59.3 59.3 181.6 181.6 --

그 결과, 상기 표 4에 나타난 바와 같이 신균주인 Pichia anomala AY1을 사용한 처리구는 에틸초산(ethyl acetate)의 함량이 256.4 ppm으로 높아 향이 다른 처리구보다 강한 것을 알 수 있다. 또한, 향기 성분이 고르게 생성되어 기호도가 우수한 결과를 보였다. 한편, Pichia anomala AY56의 경우에는 에틸초산이 검출되지 않았으며, 에틸카프론산(Ethyl caproate) 함량이 181.6 ppm으로서 다른 처리구와 비교하였을 때 가장 많은 함량이 있지만 실제로 에틸카프론산에 국한되었기 때문에 타 처리구보다 좋은 기호도를 획득하지는 못했다.
As a result, as shown in Table 4, the new strain Pichia anomala AY1 treated group had higher ethyl acetate content (256.4 ppm), indicating that fragrance was stronger than other treatments. In addition, the fragrance component was uniformly produced, and the favorable taste was obtained. Meanwhile, Pichia In the case of anomala AY56, no ethyl acetate was detected. Ethyl caproate content was 181.6 ppm, which is the highest content compared to other treatments. However, since it is limited to ethyl caproic acid, I could not get it.

시험예Test Example 3:  3: 향기효모Aroma yeast 냉동 발효제로 제조한 발효주의 관능 및 기호도 평가 Sensory Evaluation of Fermented Juice Made from Frozen Fermentation Agent

상기 실시예 3에 따라 제조된 발효주에 대한 관능 및 기호도를 평가하였다. 먼저 훈련된 검사 요원 20명을 선발하고, 9점 척도법(1-좋지 않다, 3-좋지 않은 편이다, 5-보통이다, 7-좋은 편이다, 9-좋다)을 통해 부드러운 맛, 깨끗한 맛, 향 및 전체적인 선호도를 조사하였으며, 검사 결과 통계 분석은 분산 분석법(ANOVA Analysis)을 이용하였다. 평균간의 유의성(P〈0.05)은 Duncan's multiple range test로 하였다. The sensory evaluation and acceptability of the fermented product prepared in Example 3 were evaluated. First, 20 trained inspectors are selected, and a 9-point scale (1-not good, 3-bad, 5-average, 7-good, And ANOVA analysis were used for the statistical analysis. Mean significance (P <0.05) was determined by Duncan's multiple range test.

그 결과를 하기의 표 5에 나타내었다. The results are shown in Table 5 below.

관 능Function 기호도Likelihood SampleSample 과일향
(약함↔강함)
Fruit flavor
(Weak ↔ strong)
이취
(약함↔강함)
Odor
(Weak ↔ strong)
color incense flavor 전반적
기호도*
Overall
Symbol *
AY1AY1 6.9±1.3a6.9 ± 1.3a 3.3±1.9a3.3 ± 1.9a 5.7±1.6a5.7 ± 1.6a 7.0±1.5a7.0 ± 1.5a 7.0±1.6a7.0 ± 1.6a 7.3±1.6a7.3 ± 1.6a AY42AY42 5.9±1.1ab5.9 ± 1.1ab 6.5±0.8a6.5 ± 0.8a 5.5±2.0bcd5.5 ± 2.0 bcd 6.4±1.4a6.4 ± 1.4a 5.9±1.5a5.9 ± 1.5a 6.1±1.5a6.1 ± 1.5a AY47AY47 5.2±1.0bcd5.2 ± 1.0 bcd 5.7±1.6ab5.7 ± 1.6ab 4.2±1.3e4.2 ± 1.3e 4.4±2.1bc4.4 ± 2.1 bc 5.1±1.8abcd5.1 ± 1.8abcd 4.7±1.9bcde4.7 ± 1.9 bcd AY56AY56 5.3±1.9abc5.3 ± 1.9abc 4.3±2.1a4.3 ± 2.1a 5.9±1.5a5.9 ± 1.5a 4.6±1.4b4.6 ± 1.4 b 5.4±1.5bc5.4 ± 1.5 bc 5.1±1.3b5.1 ± 1.3b

그 결과, 상기 표 5에 나타난 바와 같이 최고점을 9점으로 했을 때 본 발명의 향기효모인 피키아 아노말라(Phichi anomala) AY1(기탁번호 KACC93175P), 피키아 아노말라(Phichi anomala) AY56(기탁번호 KACC93178P), 피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY42(기탁번호 KACC93176P), 피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY47(기탁번호 KACC93177P)의 기호도는 대체로 높았으며, 특히 피키아 아노말라(Phichi anomala) AY1(기탁번호 KACC93175P), 피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY42(기탁번호 KACC93176P)는 향 및 전반적인 기호도에 있어 양호한 점수를 받았다. As a result, as shown in Table 5, when the peak was set at 9 points, the flavor yeast of the present invention, Phichi anomala ) AY1 (Accession No. KACC93175P), Phycia anomalas ( Phichi anomala ) AY56 (Accession No. KACC93178P), Phichia The preference of fabianii AY42 (accession number KACC93176P) and Phichia fabianii AY47 (accession number KACC93177P) was generally high, and in particular Phichi anomala AY1 (Accession No. KACC93175P) and Phichia fabianii AY42 (Accession No. KACC93176P) received good scores for flavor and overall acceptability.

이로부터 본 발명의 향기효모가 첨가된 냉동 발효제는 약주 및 탁주 등의 제조에 있어서 맛과 향을 개선 및 증진시킬 수 있으며 청량감을 높여 품질이 우수한 전통주를 제공할 수 있음을 알 수 있다.
From this, it can be seen that the fermented yeast-added freeze fermentation agent of the present invention can improve and enhance the taste and aroma in the manufacture of Chinese cabbage and takju, and can provide a traditional liquor with high quality and high quality.

국립농업과학원 농업유전자원센터National Institute of Agricultural Science KACC93175PKACC93175P 2013041520130415 국립농업과학원 농업유전자원센터National Institute of Agricultural Science KACC93176PKACC93176P 2013041520130415 국립농업과학원 농업유전자원센터National Institute of Agricultural Science KACC93177PKACC93177P 2013041520130415 국립농업과학원 농업유전자원센터National Institute of Agricultural Science KACC93178PKACC93178P 2013041520130415

Claims (14)

향기효모의 배양액, 효소제, 밀가루, 음용수 및 당류를 포함하며, -20 ~ -80℃의 냉동상태로 존재하고,
상기 향기효모는 전통누룩으로부터 분리한 효모 중 알코올 함량과 향미 생성능이 우수한 피키아 아노말라(Phichi anomala) AY1(기탁번호 KACC93175P), 피키아 아노말라(Phichi anomala) AY56(기탁번호 KACC93178P), 피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY42(기탁번호 KACC93176P) 및 피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY47(기탁번호 KACC93177P)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 포함하는, 냉동발효제.
A fermented yeast culture, an enzymatic agent, a flour, a drinking water and a saccharide, and is in a frozen state at -20 to -80 ° C,
The fragrance yeast has excellent alcohol content and flavor-producing ability in the yeast isolated from the traditional yeast Phichi anomala AY1 (Accession No. KACC93175P), Phichi anomala AY56 (Accession No. KACC93178P), Phichia fabianii AY42 (Accession No. KACC93176P), and Pichia filiana Phichia fabianii ) AY47 (Accession No. KACC93177P).
제 1 항에 있어서,
상기 냉동발효제는 전분질 원료 중량 대비 향기효모의 배양액 0.01~0.1중량%, 효소제 0.1~0.5중량%, 밀가루 2.0~4.0중량%, 음용수 1.0~2.0중량% 및 당류 0.1~0.5중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는 냉동발효제.
The method according to claim 1,
Wherein the freeze fermentation agent comprises 0.01 to 0.1% by weight of a culture medium of flavor yeast, 0.1 to 0.5% by weight of an enzymatic agent, 2.0 to 4.0% by weight of wheat flour, 1.0 to 2.0% by weight of drinking water and 0.1 to 0.5% .
삭제delete 제 1 항에 있어서,
상기 향기효모의 배양액은 효모 수가 cell (colony forming unit)기준으로 1x106~2x107 cell/mL 인 것을 특징으로 하는 냉동발효제.
The method according to claim 1,
Wherein the culture medium of the fragrance yeast has a yeast count of 1x10 &lt; 6 &gt; to 2x10 &lt; 7 &gt; cells / mL based on a cell (colony forming unit).
제 1 항에 있어서,
상기 향기효모의 배양액은 향기효모를 YPD 배지에서 15 ~ 30℃로 30 ~ 80시간 무균 배양하여 얻어진 것을 특징으로 하는 냉동발효제.
The method according to claim 1,
The culture medium of the flavor yeast was prepared by mixing flavor yeast in YPD medium 30 ~ 80 hours at 15 ~ 30 ℃ Freezing fermentation agent obtained by aseptic culturing.
제 1 항에 있어서,
상기 효소제는 당화력 10,000~15,000 SP의 효소제 및 당화력 1,000~1,800 SP의 개량누룩에서 선택된 어느 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 냉동발효제.
The method according to claim 1,
Wherein the enzyme agent comprises any one selected from the group consisting of an enzymatic agent having a saccharifying power of 10,000 to 15,000 SP and a modified yeast having a saccharifying power of 1,000 to 1,800 SP.
제 1 항에 있어서,
상기 밀가루는 강력분, 중력분 및 박력분에서 선택된 적어도 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 냉동발효제.
The method according to claim 1,
Wherein the flour contains at least one selected from the group consisting of high-strength, medium-strength and high-strength flour.
제 1 항에 있어서,
상기 당류는 글루코스, 수크로스 및 이소말토올리고당에서 선택된 적어도 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 냉동발효제.
The method according to claim 1,
Wherein the saccharide comprises at least one selected from glucose, sucrose and isomaltooligosaccharide.
(a) 향기효모를 이용하여 배양액을 제조하는 단계;
(b) 상기 (a)단계의 향기효모 배양액에 효소제, 밀가루, 당류 및 멸균수를 첨가하여 혼합하는 단계; 및
(c) 상기 (b)단계의 혼합물을 -20 ~ -80℃로 냉동시키는 단계;를 포함하는 향기효모가 첨가된 냉동 발효제의 제조방법으로서,
상기 향기효모는 전통누룩으로부터 분리한 효모 중 알코올 함량과 향미 생성능이 우수한 피키아 아노말라(Phichi anomala) AY1(기탁번호 KACC93175P), 피키아 아노말라(Phichi anomala) AY56(기탁번호 KACC93178P), 피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY42(기탁번호 KACC93176P) 및 피키아 파비아니(Phichia fabianii) AY47(기탁번호 KACC93177P)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 포함하는, 냉동발효제의 제조방법.
(a) preparing a culture solution using an aroma yeast;
(b) adding an enzyme, wheat flour, saccharide, and sterilized water to the flavor yeast culture solution of step (a); And
(c) a step of freezing the mixture of step (b) at -20 to -80 DEG C, wherein the fermented yeast-
The fragrance yeast has excellent alcohol content and flavor-producing ability in the yeast isolated from the traditional yeast Phichi anomala AY1 (Accession No. KACC93175P), Phichi anomala AY56 (Accession No. KACC93178P), Phichia fabianii AY42 (Accession No. KACC93176P), and Pichia filiana Phichia fabianii ) AY47 (Accession No. KACC93177P).
삭제delete 제 9 항에 있어서,
상기 (a) 향기효모의 배양액을 제조하는 단계는 향기효모를 YPD 배지에서 15 ~ 30℃로 30 ~ 80시간 무균 배양하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 냉동발효제의 제조방법.
10. The method of claim 9,
The step of (a) preparing the culture medium of the flavor yeast comprises mixing the flavor yeast in YPD medium 30 ~ 80 hours at 15 ~ 30 ℃ And a step of aseptic culturing.
제 11 항에 있어서,
상기 (a) 향기효모의 배양액을 제조하는 단계는 무균 배양하는 단계 이후로, 효모 수가 cell (colony forming unit)기준으로 1x106~2x107 cell/mL 되도록 조절하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 냉동발효제의 제조방법.
12. The method of claim 11,
Wherein the step (a) of culturing the culture medium of the flavor yeast comprises adjusting the number of yeasts to 1 × 10 6 to 2 × 10 7 cells / mL based on the cell (colony forming unit) after the aseptic culturing step. A method for producing an fermentation agent.
제1항의 냉동 발효제를 첨가하여 제조된 발효식품.
A fermented food prepared by adding the freezing fermentation agent of claim 1.
제1항의 냉동 발효제를 첨가하여 제조된 발효음료.A fermented beverage produced by adding the freezing fermentation agent of claim 1.
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