KR101496507B1

KR101496507B1 - 라노스타-8,24-디엔-3-올의 제약학적 용도

Info

Publication number: KR101496507B1
Application number: KR1020117002127A
Authority: KR
Inventors: 루이스 프란시스코 피아노우스키; 쟈오 바티스타 칼릭스토; 파울로 케사르 레알; 클라우디오 파울리노 차베스
Original assignee: 아마조니아 피토메디카멘토스 엘티디에이
Priority date: 2008-08-05
Filing date: 2008-08-05
Publication date: 2015-03-03
Also published as: US20110136773A1; WO2010015874A1; AU2008360329A1; IL211062A; US9238036B2; EP2323666B1; RU2011108558A; MX2011001411A; NZ590233A; ES2619505T3; RU2476226C2; CA2732850C; PT2323666T; KR20110044984A; BRPI0822637A2; JP5579181B2; CN102112133B; IL211062A0; ZA201100119B; CN102112133A

Abstract

본 발명은 전반적으로, 세린-트레오닌 단백질 키나아제, 특히 PKC의 무질서한 활성화의 저해를 통해, 소염 (anti-inflammatory), 항암 (anticancerigenous)과 진통 (analgesic) 작용제로서 4환 테르페놀 (tetracyclic terpenol)의 라노스타-8,24-디엔-3-올 집단의 제약학적 용도에 관계한다.

Description

라노스타-8,24-디엔-3-올의 제약학적 용도{PHARMACEUTICAL USES OF LANOSTA-8,24-DIEN-3-OLS}

본 발명의 기술분야

본 발명은 전반적으로, 활성이 일정한 유형의 암의 증식에 연계되는 일정한 효소의 저해를 통해, 소염 (anti-inflammatory), 항암 (anticancerigenous) 및/또는 진통 (analgesic) 작용제로서 4환 테르페놀 (tetracyclic terpenol)의 라노스타-8,24-디엔-3-올 집단의 제약학적 용도에 관계한다.

아래의 단락에서, 라노스타-8,24-디엔-3-올 집단의 구성원인 화합물 유폴이 종종 언급될 것이고, 그리고 이는 단순히 참고를 목적으로 하고, 이런 이유로 어떤 다른 라노스타-8,24-디엔-3-올 화합물도 본 발명으로부터 배제되지 않는 것으로 이해된다.

본 발명의 배경기술

암은 조직과 장기를 침범하는 세포의 무질서한 성장을 공통적으로 나타내고, 전이 (metastasis)로 알려져 있는 신체의 다른 부위로 확산될 수 있는 100가지 이상의 질환의 그룹에 부여된 명칭이다.

상이한 유형의 암은 다양한 유형의 신체 세포에 대응한다. 가령, 피부가 한 가지 이상의 유형의 세포로 형성되기 때문에, 여러 유형의 피부 암이 존재한다. 암이 상피 조직 (epithelial tissue), 예를 들면, 피부 또는 점막에서 시작되면, 이는 암종 (carcinoma)으로 불린다. 암이 결합 조직 (conjunctive tissue), 예를 들면, 골 (bone), 근육 (muscle) 또는 연골 (cartilage)에서 시작되면, 이는 육종 (sarcoma)으로 불린다. 암을 구별하는 다른 특징은 세포 증가 속도 (cell multiplication speed), 그리고 기원에 가까운 또는 멀리 떨어진 다른 조직과 장기를 침범하는 이들의 능력이다.

C형 단백질 키나아제 (PKC)는 기능과 조절이 고도로 보존성인 일군의 단백질 키나아제를 포함한다. 키나아제는 또한, 포스포트랜스퍼라아제 (phosphotransferase)로 불리고, 그리고 이들은 그들의 기질로부터 세린과 트레오닌 잔기를 인산화 (phosporylation)시키고, 유전자 발현 (gene expression), 유사분열 (mitosis), 세포 이동 (cell movement), 물질 대사 (metabolism)와 예정된 세포 사멸 (programmed cell death) (apoptosis)을 비롯한 다양한 세포 활성을 조절한다. PKC는 활성화에 앞서, 인산화에 종속되고, 이런 과정은 시토졸 (cytosol)의 원형질 막 (plasmatic membrane)으로의 전위 (translocation) 동안 발생한다. 이들의 활성화 및 원형질 막으로의 시토졸 전위는 디아실글리세롤 (diacylglycerol, DAG)의 일시적 증가, 또는 전형적으로 식물 내에 존재하는 포르볼 에스테르 (phorbol ester)로 알려져 있는 외생성 작용제 (exogenous agent)에 응하여 발생한다.

PKC 집단은 하기 3가지 하위범주로 구분되는 12가지 동종형 (isoform)을 포함한다: 전통적 (cPKC, 칼슘-의존성, 그리고 DAG와 포스파티딜세린에 의해 활성화됨), 고유적 (nPKC, 칼슘-독립성, 하지만 DAG와 포스파티딜세린에 의해 활성화됨), 그리고 비정형적 (aPKC, 칼슘-독립성, 그리고 포스파티딜세린에 의해 활성화되지만, DAG에 의해 활성화되지 않음). 단일 세포 내에서, 이들 동종형은 세포 막으로의 전위 이전과 이후에 그들의 분포에서 차이를 나타내고, 그리고 기존 문헌에서는 일정한 세포에 연관된 각 동종형의 기능이 막과 핵의 세포질 구획 (cytoplasmic compartment) 내에서 PKC의 세포내 위치 (subcellular location)에서 차이에 의해 제공될 수 있음을 암시한다.

최근에, 여러 연구에서 PKC의 무질서한 활성화와 류머티스성 관절염 (rheumatoid arthritis), 다발성 경화증 (multiple sclerosis), 대장염 (colitis) 및 상이한 유형의 암을 비롯한 병리학적 과정 (pathological process)의 발달 사이에 관계가 밝혀졌다. 암에 PKC 연관에 대한 이러한 가설은 특히, 이들 효소가 종양의 자연적 프로모터, 포르볼 에스테르에 대한 기질이라는 조사 결과에 기초하여, 최근에 많은 주목을 받았다. PKC를 비롯한 세린-트레오닌 단백질 키나아제, 또는 이들에 의해 조절되는 전사 인자의 증가된 또는 감소된 활성화는 암 과정을 비롯한 세포의 무질서한 성장을 유발할 수 있다. 이러한 의미에서, 많은 연구에서 PKC의 활성화 이후에 전사 인자, 특히 핵 인자 카파 B (NF-κB)와 활성인자 단백질 1 (AP-1)의 인산화에서 증가가 발생하고, 이는 차례로, 시클로옥시게나아제 (cyclooxygenase)-2 (COX-2)를 비롯한, 종양의 진행에 중요한 여러 단백질의 발현을 조절하는 것으로 밝혀졌다. 이러한 방식으로, 이런 세포내 경로 (intracellular pathway)의 활성화 또는 차단을 통해, 자연 화합물은 비정상적 세포의 성장과 증식을 간섭할 수 있다.

포르볼 에스테르는 4환 디테르펜 (tetracyclic diterpene)으로부터 유래되고 대극과 (Euphorbiaceae)와 팥꽃나무과 (Thymelaceae) 식물 집단에 국한되는 것으로 보인다. 이들 화합물은 특정한 종양-촉진 유도 및 친염증성 작용으로 인하여, 빈번하게 연구되고 있다. 포르볼 에스테르의 종양-촉진 유도를 조절하는 분자 기전 (molecular mechanism)은 염증성 활성을 촉발하는 기전과 상이하다. 이러한 종양-촉진 유도는 PKC의 활성화에서 DAG를 대체하는 이들의 능력, 그리고 또한, RNA와 DNA 단백질의 합성을 촉진하고 유사분열 작용제 (mitogenic agent)로서 행동하고 세포 성장을 촉진하는 이들의 능력에 연관되는 것으로 보인다. 친염증성 활성에 대하여, 포르볼 에스테르는 인지질 (phospholipid)을 동원하고, 아라키돈산 (arachidonic acid)을 유리시키고, 프로스타글란딘 분비 (prostaglandin secretion)를 유발하여 이들 조직의 염증성 반응을 결과하였다. 포르볼 에스테르, 특히 TPA (테트라데카노일포르볼-13-아세테이트)의 국소 적용은 염증성 과정과 암에 관련된 분자 기전의 이해에 기여하였다.

일부 PKC 저해물질은 상이한 단계의 임상전 검사에서 암의 치료에 대하여 조사되고 있다. 이들 중의 하나는 엔자스타우린 (enzastaurin) (LY317615)인데, 이는 경구 투여될 때 중요한 활성을 보이고, 그리고 시험관내와 생체내에서 상이한 암 모형에서 효능을 나타낸다 (Journal of Investigative Dermatology (2006) 126, 1641―1647; Cancer Res (2005) 65:7462-7469; MoI Cancer Ther. (2006) 5:1783-1789).

NSAID (비-스테로이드성 소염 약물)과 스테로이드성 약물 (코르티코이드 (corticoid))로 소염 질환의 치료에서 주요한 문제점은 이들에 의해 유발된 부작용 및 이들의 비-전체 효능이다. 가장 빈번하게 보고된 부작용은 두통 (headache), 위통 (stomachache), 구토 (vomit), 설사 (diarrhea), 위병증 (gastropathy), 예를 들면, 위와 십이지장 궤양이다. 코르티코이드는 혈압을 증가시키고, 무력증 (astheny)과 근질환 (myopathy), 소화성 궤양 (peptic ulcer), 점상 출혈 (petechia), 홍반 (erythema), 여드름 (acne), 만성 두통 (chronic headache), 다모증 (hirsutism), 아동에서 성장 억제 (긴 치료 동안), 무월경 (amenorrhea), 백내장 (cataract)과 녹내장 (glaucoma), 식욕과 체중 증가, 메스꺼움을 유발할 수 있다. COX-2에 선별적인 NSAID 역시 심각한 혈전성 심혈관 현상 (thrombotic cardiovascular event), 관상동맥 혈전증 (coronary thrombosis), 그리고 뇌졸중 (stroke) 위험을 증가시킬 수 있다.

암의 효과적인 치료에 대하여, 어려움은 악성 세포와 정상적인 신체 세포 간에 구별을 확립하는 것이다. 이들은 동일한 기원을 공유하고 매우 유사하기 때문에, 위협에 직면한 면역계 (immunologic system) 부분에서 인식의 부재가 발생한다. 지금까지, 암은 수술 (surgery), 화학요법 (chemotherapy), 방사선요법 (radiotherapy)과 면역요법 (immunotherapy) (단클론 항체 요법)에 의해 치료되고 있다. 치료의 선택은 종양의 위치와 정도, 질환 단계, 그리고 환자의 전반적인 상태에 좌우된다. 나머지 조직체에 대한 손상 없이 종양의 완전한 제거가 치료의 주요 목적인데, 이는 때때로, 수술에 의해 달성될 수 있지만 인접 조직을 침범하거나 멀리 떨어진 부위로 전파되는 상기 질환의 경향 (전이)이 이의 효능을 종종 제한한다. 화학요법의 효능은 생물체의 다른 세포에 대한 독성에 의해 종종 제한되는 반면, 방사선요법은 정상 조직을 손상시킬 수 있다. 면역요법에서, 암 세포는 치료 내성 (treatment resistance)으로 알려져 있는 현상인 면역 반응 (immunologic response)을 회피하는 기전을 발달시킨다.

본 발명의 상세한 설명

선행 기술에 비추어, 본 발명에서는 활성이 암 세포, 특히 PKC의 증식에 연계되는 효소의 저해를 위한 라노스타-8,24-디엔-3-올의 용도를 제시한다. 이런 이유로, 본 발명은 또한, 현재까지 알려진 부작용 없이, 종양, 염증 및/또는 통증의 효과적인 치료에 이용되는 라노스타-8,24-디엔-3-올에 관계한다.

적절한 라노스타-8,24-디엔-3-올은 유폴, 티루칼롤과 라노스테롤, 이들의 이성질체, 유도체 (특히, 아세테이트), 용매화합물 또는 수화물이지만, 임의의 다른 화합물이 배제되지 않는다. 라노스타-8,24-디엔-3-올은 예로써, 대극과 (Euphorbiaceae) 식물로부터, 또는 화학적 합성에 의해 획득될 수 있는데, 경로는 본 발명과 무관하다.

이런 이유로, 첫 번째 측면에서, 본 발명은 세린-트레오닌 단백질 키나아제, 또는 이들에 의해 조절되는 전사 인자의 증가된 또는 감소된 활성화를 저해하기 위한 제약학적 조성물의 생산에서 라노스타-8,24-디엔-3-올의 용도에 관계한다. 본 발명의 화학적 화합물은 활성이 암 세포에 연계되는 것으로 알려져 있는 키나아제, 특히 PKC (단백질 키나아제 C)의 활성화를 저해한다. 더욱 구체적으로, 상기 키나아제에 의해 조절되는 전사 인자는 핵 인자 카파 B (NF-κB) 및/또는 활성인자 단백질 1 (AP-1)을 포함한다.

본 발명의 라노스타-8,24-디엔-3-올, 그리고 이들을 포함하는 조성물은 병든 개체에 임의의 적절한 방법으로, 경구 (oral), 국소 (topical), 경피 (transdermal), 피하 (subcutaneous), 복막내 (intraperitonial), 정맥내 (intravenous), 침투에 의해, 흡입에 의해, 경피 (transdermal), 경점막 (transmucosal), 근육내 (intramuscular), 폐내 (intrapulmonary), 질 (vaginal), 직장 (rectal), 안구내 (intraocular), 그리고 설하 (sublingual)를 비롯한 장관 (enteral) 또는 비경구 (parenteral) 투여될 수 있다. 본 발명에서 특히 적절한 투여 방법은 국소와 전신 투여 (침투, 경구, 분무에 의한 흡입, 경피)이다. 본 발명의 라노스타-8,24-디엔-3-올은 지연 또는 통제 방출 조성물에 포함될 수 있다. 공지된 어쥬번트와 부형제가 이런 조성물에 이용될 수 있다 - 본 발명에 관련된 조성물에 유용한 제약학적 투여 형태에 대한 참고는 간행물 Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing, 1965-1990에서 확인될 수 있다.

이러한 집단의 임의의 다른 화합물이 배제되진 않지만, 적절한 라노스타-8,24-디엔-3-올은 유폴 (RN 514-47-6), 티루칼롤 (RN 514-46-5)과 라노스테롤 (RN 79-63-0) 중에서 한 가지 이상, 더욱 구체적으로 유폴이다.

다른 측면에서, 본 발명은 종양 및/또는 염증 및/또는 통증 (침해수용 반응)의 치료를 위한 제약학적 조성물의 생산에서 라노스타-8,24-디엔-3-올, 또는 이들의 조성물의 용도에 관계한다.

본 발명의 조성물은 고형, 액상 또는 반-고형, 정제 (tablet), 캡슐 (capsule), 알약 (pill), 분말 (powder), 과립 (granule), 현탁액 (suspension), 에멀젼 (emulsion), 분산액 (dispersion), 그리고 임의의 다른 유용한 공지된 제약학적으로 허용되는 형태로 환자에 투여될 수 있다. 이들 조성물은 원하는 효과에 따라, 추가의 활성제, 예를 들면, 항생제를 포함할 수도 있다. 정제 또는 캡슐 (연성과 경성 캡슐 둘 모두)로서 경구 투여를 위하여, 라노스타-8,24-디엔-3-올은 제약학적으로 허용되는 불활성 운반제, 예를 들면, 락토오스, 전분, 수크로오스, 글루코오스, 메틸 셀룰로오스, 마그네슘 스테아레이트, 인산이칼슘, 인산칼슘, 만니톨, 소르비톨 등과 결합될 수 있다; 액상 형태로 경구 투여를 위하여, 라노스타-8,24-디엔-3-올은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 결합될 수 있다. 원하거나 필요한 경우에, 응집제 (agglomerating agent), 윤활제 (lubricant agent), 붕해제 (disintegrating agent), 착색제 (colorant)와 방향제 (fragrance)가 상기 혼합물에 첨가될 수 있다. 통상적인 응집제는 글루코오스, [베타]-락토오스, 옥수수 감미료 (corn sweetener), 천연 또는 합성 검 (gum), 예를 들면, 아라비아 검 (gum arabica), 트래거캔스 (tragacanth) 또는 알긴산나트륨 (sodium alginate), 카르복시메틸셀룰로오스 (carboxymethylcellulose), 폴리에틸렌 글리콜 (polyethylene glycol), 왁스 (wax) 등이다. 윤활제에는 올레산나트륨 (sodium oleate), 스테아르산나트륨 (sodium stearate), 스테아르산마그네슘 (magnesium stearate), 벤조산나트륨 (sodium benzoate), 아세트산나트륨 (sodium acetate), 염화나트륨 (sodium chloride)이 포함된다. 붕해제에는 전분, 메틸 셀룰로오스, 한천 (agar), 벤토나이트 (bentonite), 잔탄 검 (xanthan gum) 등이 포함된다.

본 발명의 조성물은 또한, 리포좀 (liposome)으로서 투여되거나, 또는 운반제로서 용해성 중합체 (soluble polymer)와 결합될 수 있다.

경구 투여를 위한 액상 제형 (liquid dosage form)은 환자에 의한 수용을 증가시키기 위하여 착색제와 감미료 (edulcorant)를 포함할 수 있다. 물 제형 (water dosage form)에 적합한 운반제는 물, 적절한 오일, 염수 용액, 수용성 덱스트로스, 기타 당 용액과 글리콜, 예를 들면, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜, 인산염 완충액이다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 세린-트레오닌 단백질 키나아제, 더욱 구체적으로 PKC의 무질서한 활성화에 연계된 포유동물의 신체 장애에 대한 의학적 치료 방법에 관계하고, 여기서 이들 신체 장애는 염증 및/또는 암 및/또는 통증의 출현 또는 존재에 영향을 주고, 상기 방법은 약리학적으로 허용되는 담체 또는 부형제에 담긴, 상기 질환의 치료를 위한 약리학적 효과량을 상기 포유동물에 투여하는 단계를 포함한다.

도면의 간단한 설명
도 1에서는 시간의 흐름에서, 검사 화합물의 적용 전후에 귀 두께 간에 차이를 도시한다.
도 2에서는 3가지 검사 조성물에 대한 흡광도 (absorbance)를 도시한다. 백색 상자: 양성 대조 (positive control), 다시 말하면 아세톤:에탄올의 3:1 혼합물을 포함하는 운반제에 담긴 TPA (테트라데카노일포르볼-13-아세테이트), 2.5 ㎍/귀; 흑색 상자: 음성 대조 (negative control), 다시 말하면 아세톤:에탄올의 3:1 혼합물인 운반제; 그리고 회색 상자: 아세톤:에탄올의 3:1 혼합물을 포함하는 운반제에 담긴 100 ㎍ 유폴과 2.5 ㎍ TPA의 혼합물/귀.
도 3A와 3B, 도 3A는 반응의 시간 vs. 빈도의 그래프이고, 그리고 도 3B는 각 검사 화합물에 대한 도 3A의 곡선 아래 면적의 표현이고, 이들 간에 백분율 비교를 가능하게 한다.
도 4A, 4B와 4C, 도 4A는 반응의 시간 vs. 빈도의 그래프이고, 그리고 도 4B와 4C는 각 검사 화합물에 대한 도 4A의 곡선 아래 면적의 표현이고, 이들 간에 백분율 비교를 가능하게 한다.
도 5A, 5B와 5C, 도 5A는 반응의 시간 vs. 빈도의 그래프이고, 그리고 도 5B와 5C는 각 검사 화합물에 대한 도 5A의 곡선 아래 면적의 표현이고, 이들 간에 백분율 비교(percentage comparison)를 가능하게 한다.

실시예

아래의 실시예는 본 발명의 명확한 구체예이긴 하지만 본 발명을 한정하지 않고, 본 발명은 하기에 제공된 특허청구범위에서 표시되는 바에 의해 정의된다.

하기의 모든 실시예에서, 20-3Og 수컷 생쥐는 통제된 온도 (22±2℃)와 습도 (50-60%), 그리고 12h 밝음/12h 어둠 주기를 갖는 여과된-공기 환기된 우리에 유지되고, 물과 사료에 자유롭게 접근하였다. 이들 동물은 8:00시와 17:00시 사이에 실시된 약리학적 검사에 앞서, 최소한 1시간의 적응 기간 (adaptation period) 동안 실험실에 존속하였다

하기의 모든 실시예에서, Graph Pad Prism® 5.0 소프트웨어를 이용한 통계학적 분석이 수행되었다.

실시예 1

일정한 화학적 화합물의 자극 효과 (irritating effect)의 특성화는 하기 화합물로 생쥐 귀의 국소 처리의 결과를 비교함으로써 실행되었다:

- 양성 대조 (positive control), 다시 말하면 아세톤:에탄올의 3:1 혼합물을 포함하는 운반제에 담긴 TPA (테트라데카노일포르볼-13-아세테이트), 2.5 ㎍/귀;

- 음성 대조 (negative control), 다시 말하면 아세톤:에탄올의 3:1 혼합물인 운반제;

- 아세톤:에탄올의 3:1 혼합물을 포함하는 운반제에 담긴 유폴, 100 ㎍/귀, 본 발명의 화합물;

- 아세톤:에탄올의 3:1 혼합물을 포함하는 운반제에 담긴 100 ㎍ 유폴과 2.5 ㎍ TPA의 혼합물/귀.

5-마리 생쥐 군들은 귀의 내부 표면에 상기 조성물이 국소 적용되었다. 검사 조성물에 노출 전후에 귀의 두께는 직경 측정기 (digital micrometer)를 이용하여 측정되고, 그리고 이들 반응은 mμ로서 표시되었다. 도 1에서는 시간의 흐름에서, 검사 화합물의 적용 전후에 귀 두께 간에 차이를 도시한다.

이들 결과는 도 1에 도시된다.

확인되는 바와 같이, 유폴에서 획득된 저해 효과는 치료후 24시간까지 유의하였는데, 이는 염증에 대한 중요한 약동학적 효과 (pharmacokinetic effect)를 지시하였다.

실시예 2

본 실시예는 생쥐의 피부에서 PKC 활성에 대한 본 발명의 화합물의 효과의 평가이었다. 이들 동물은 하기 100 ㎍/귀 조성물이 투여되었다:

5-마리 생쥐 군들은 귀의 내부 표면에 상기 조성물이 국소 적용되었다. 검사 조성물에 노출 전후에 PKC 활성은 ELISA (효소 면역 측정법, enzyme-linked immunosorbent assay)를 이용하여 측정되었다. 도 2에서는 앞서 언급된 3가지 검사 조성물에 대한 흡광도 (absorbance)를 도시한다.

확인되는 바와 같이, TPA는 운반제로 치료된 군에 비하여 PKC 활성에서 유의한 증가를 촉진하는 반면, 유폴로 치료는 TPA에 의해 유도된 PKC 활성에서 증가를 유의하게 감소시킨다.

실시예 3, 4와 5 - 침해수용 (nociception)

동물의 침해수용 기계적 역치 (nociceptive mechanical threshold)는 Von Frey 필라멘트 (VHF, Stoelting, Chicago, USA)의 10회 적용후 발 회피(paw withdrawal)의 반응 빈도 (response frequency)로서 평가되었다. 이들 동물은 상승된 철망 플랫폼 (wire mesh platform)에서 발 발바닥 표면에 대한 접근이 가능하도록 9x7x11 cm 투명 아크릴 구획 (acrylic compartment)에 개별적으로 배치되었다. Von Frey 필라멘트는 오른쪽 뒷발에 적용되고, 하기 기준에서 관찰되었다: (1) 전압 (total pressure)을 담보하기 위하여, 필라멘트를 구부릴 만큼 충분한 압력으로 발바닥 표면에 수직으로 적용; (2) 이들 동물은 4개의 발 모두 철망 안에 있을 때 평가되었다; (3) 동물이 철망으로부터 발을 완전하게 떼어놓았을 때, 발 회피 반응으로 판단되었다; (4) 각 동물은 10회 연속으로 자극되고, 각 자극의 지속 시간은 1초이었다; (5) 각각의 발 회피가 10% 반응으로서 판단되었다(10회 회피는 100% 반응에 해당한다).

실시예 3 - 카라기닌 (carragenan)에 의해 유도된 염증성 침해수용

염증성 통증의 유도를 위하여, 각 동물은 오른쪽 뒷발에 20 ㎕ 카라기닌 (300 ㎍/발)이 발바닥내 (intraplantar) 주사되었다. 0.9% (20 ㎕/발) PBS (인산염 완충된 염수) 용액으로 치료된 동물은 대조로서 이용되었다. 이러한 카라기닌 투약은 주사된 발에서 부종 (edema), 침해수용 및 유의한 크기 변화를 발생시킨다.

이들 동물은 카라기닌 주사 1시간 전에, 유폴 (30 ㎍/kg)로 경구 치료되었다. 카라기닌 주사 4시간 전에, 0.5 ㎎/㎏ 덱사메타손의 피하 주사로 치료된 동물은 양성 대조로서 이용되었다. 과다침해수용 (hypernociception)은 8시간 동안 1시간마다 0.6g Von Frey 필라멘트로, 그리고 카라기닌 주사후 24시간과 48시간 시점에 평가되었다.

획득된 결과는 도 3A와 3B에서 도시되는데, 도 3A는 반응의 시간 vs. 빈도의 그래프이고, 그리고 도 3B는 각 검사 화합물에 대한 도 3A의 곡선 아래 면적의 표현이고, 이들 간에 백분율 비교를 가능하게 한다.

이들 도면에서 확인되는 바와 같이, 유폴로 단기 치료는 카라기닌에 의해 유도된 염증성 기계적 과다침해수용을 유의하게 감소시켰다. 유폴은 덱사메타손으로 치료된 대조 군에서와 유사한 침해수용 반응의 감소를 유도하였다.

실시예 4 - CFA (완전 Freund 어쥬번트, Complete Freund's Adjuvant)에 의해 유도된 지속적인 염증성 침해수용

이들 동물은 과다침해수용을 유발하고 주사된 발의 크기를 증가시키는 용량인 25 ㎕ CFA가 발바닥내 주사되었다 (Neuropharmacology, 41:1006-1012, 2001; AnesthAnalg., 101:1763-1769, 2005).

동물은 CFA 주사후 1시간 시점에, 30 ㎎/㎏ 유폴 또는 70 ㎎/㎏ 가바펜틴 (양성 대조)으로 경구 치료되었다. 기계적 과다침해수용이 CFA 주사후 1, 2, 4, 6, 8, 24와 48시간의 시간 간격 (time interval)에서, 그리고 침해수용 반응의 재-확립 때까지, 0.6 g Von Frey 필라멘트로 자극을 통해 측정되었다. 3일째 이후, 유폴로 연장된 치료를 평가하기 위하여 장기 치료가 시작되었다. 이를 위하여, 동물은 5일 동안 매일, 30 ㎎/㎏ 유폴이 경구 투여되었다, 그리고 과다침해수용이 첫 투여후 4시간 시점에, 일일 1회 평가되었다. 기계적 과다침해수용이 통증 반응의 복원 때까지 평가되었다. 이후, 상기 화합물에 대한 내성의 발달을 평가하기 위하여 5일 동안 일일-1회 치료가 다시 시작되고, 그리고 침해수용 반응의 복원 때까지 과다침해수용이 평가되었다.

획득된 결과는 도 4A, 4B와 4C에 도시되는데, 도 4A는 반응의 시간 vs. 빈도의 그래프이고, 그리고 도 4B와 4C는 각 검사 화합물에 대한 도 4A의 곡선 아래 면적의 표현이고, 이들 간에 백분율 비교를 가능하게 한다.

도 4A와 4B에서 확인되는 바와 같이, 유폴로 단기 치료는 가바펜틴 (gabapentin)으로 획득된 효과와 유사하게, CFA에 의해 유도된 기계적 과다침해수용을 유의하게 감소시켰다.

유폴이 5일 동안 일일 1회 투여될 때, 후속 6일 간의 치료 동안 CFA에 의해 유발된 침해수용 반응의 저해가 관찰된다. 이러한 기계적 과다침해수용은 CFA의 주사후 3일 내지 24일 시점에 곡선의 도움으로 확인되는 바와 같이, 연장된 치료의 시작으로 다시 감소되었다. 가바펜틴으로 연장된 치료에서 유사한 저해가 획득되었다.

실시예 5 - 좌골 신경 (sciatic nerve)의 부분적인 수축에 의해 유도된 신경병적 통증

본 실시예에 이용된 절차는 쥐에 대하여 기술되고 (Pain, 43:205-218, 1990), 생쥐에 대하여 변경되고 ((Pain, 76:215-222, 1998), 그리고 Bortolanza et al {Eur J Pharmacol, 453:203-208, 2002)에 의해 표준화된 절차와 유사하였다. 이들 생쥐는 7% 클로랄 수화물 (0,6% ㎖/㎏ 발바닥내)로 마취되었다. 이후, 좌골 신경은 넓적다리의 정상에서 좌골 삼분지 (sciatic trifurcation) 주변에서 노출되고, 그리고 상기 등쪽 부분의 1/3 - 1/2는 봉합 필라멘트 no. 8로 묶여졌다. 가성 수술 군(false-operated group)에서, 좌골 신경은 묶임 없이 노출되었다. 수술후 4일 시점에, 일군의 동물은 30 ㎎/㎏ 유폴로 경구 치료되고, 그리고 다른 군은 양성 대조로서, 70 ㎎/㎏ 가바펜틴으로 경구 치료되었다. 치료후 미리 결정된 시점 (1, 2, 4, 6, 8, 24와 48시간)에, 0.6 Von Frey 필라멘트로 자극을 통해 기계적 역치가 평가되었다. 연장된 치료의 효과를 평가하기 위하여, 이들 동물은 6일째부터 5일 동안 유폴이 매일 투여되고, 그리고 첫 투여후 4시간 시점에, 대조 군과 유사한 침해수용 반응의 복원 때까지 기계적 과다침해수용이 일일 1회 평가되었다. 이후, 이러한 연장된 치료 프로토콜은 상기 화합물에 대한 내성의 가능한 발달을 평가하기 위하여 반복되었다.

획득된 결과는 도 5A, 5B와 5C에서 확인될 수 있는데, 도 5A는 반응의 시간 vs. 빈도의 그래프이고, 그리고 도 5B와 5C는 각 검사 화합물에 대한 도 5A의 곡선 아래 면적의 표현이고, 이들 간에 백분율 비교(percentage comparison)를 가능하게 한다.

도 5A와 5B에서 확인되는 바와 같이, 유폴 또는 가바펜틴으로 단기 치료는 좌골 신경의 부분적인 수축에 의해 유도된 기계적 침해수용 반응을 유의한 방식으로 저해하였다.

유사하게, 일일 1회 유폴 또는 가바펜틴으로 연장된 치료는 좌골 신경의 부분적인 수축에 의해 유도된 기계적 과다침해수용을 유의한 방식으로 감소시키고, 치료 10일째에 침해수용 반응이 복원되었다.

본 명세서에 제공된 교시와 실례의 도움으로, 당업자는 첨부된 특허청구범위에서 정의된 본 발명의 범위를 벗어나지 않으면서, 동일한 기능을 이용하여 유사한 결과를 획득하는 동등한 방식으로 본 발명을 재현할 수 있다.

Claims

삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
통증의 치료를 위한 제약학적 조성물에 있어서, 유폴(euphol), 이의 이성질체, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 용매화합물 또는 이의 수화물 및 약리학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
청구항 7에 있어서, 약학적으로 허용가능한 염은 아세트산염인 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
삭제
삭제