KR101491817B1 - 제 8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제의 재조합 항원 단백질 및 이용한 진단용 조성물 - Google Patents

제 8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제의 재조합 항원 단백질 및 이용한 진단용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 제8형 조류파라믹소바이러스 (avian paramyxovirus-8, APMV-8)의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 (hemagglutinin-neuraminidase, HN) 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 재조합 바이러스 발현 벡터, 상기 벡터에 의해 형질전환된 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 단백질을 발현하는 재조합 곤충 세포, 상기 재조합 곤충세포가 발현하는 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 재조합 항원 단백질을 포함하는 제8형 조류파라믹소바이러스 진단용 조성물, 진단 키트 및 이를 이용한 진단 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 진단용 조성물은 살아있는 바이러스 취급에 따른 오염 가능성 없이 안전하고, 신속하게 대량의 샘플로부터 제8형 조류파라믹소바이러스의 감염 여부를 정확하게 진단할 수 있는 우수한 효과를 가지고 있다.

Description

제 8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제의 재조합 항원 단백질 및 이용한 진단용 조성물{Recombinant antigenic protein of hemagglutinin-neuraminidase of avian paramyxovirus-8 and composition for diagnosis using the same protein}
본 발명은 제8형 조류파라믹소바이러스 (avian paramyxovirus-8, APMV-8)의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 (hemagglutinin-neuraminidase, HN) 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 재조합 바이러스 발현 벡터, 상기 벡터에 의해 형질전환된 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 단백질을 발현하는 재조합 곤충 세포, 상기 재조합 곤충세포가 발현하는 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 재조합 항원 단백질을 포함하는 제8형 조류파라믹소바이러스 진단용 조성물, 진단 키트 및 이를 이용한 진단 방법에 관한 것이다.
조류파라믹소바이러스 (Avian paramyxovirus; APMV)는 파라믹소비리데(Paramyxoviridae)과, 아뷸라바이러스(Avulavirus)속으로 분류되는 RNA바이러스이다. APMV는 APMV-1에서 APMV-11까지 현재까지 총 11개의 혈청형(serotype)이 존재하고 있는 것으로 밝혀져 있다. 이 중 APMV-1에 속하는 뉴캣슬병바이러스 (Newcastle disease virus; NDV)가 가금류에서 가장 중요한 병원체로 알려져 있으나 APMV-8, APMV-6, APMV-7 및 APMV-9 또한 각종 가금류에 감염하여 경제적 손실을 유발하는 것으로 알려져 있다. APMV 게놈은 음성 극성 단일 가닥 (negative-sense single-stranded) RNA형태로 되어 있으며, 뉴클레오캡시드 단백질 (nucleocapsid protein, N), 인단백질 (phosphoprotien, P), 매트릭스 단백질 (matrix protein, M), 융합 단백질 (fusion protein, F), 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 (hemagglutinin-neuraminidase, HN) 및 폴리머라아제 단백질 (polymerase protein, L)을 발현하는 최소 6개 이상의 전사 해독틀 (open reading frames, ORF)을 가지고 있다.
APMV 구조단백질 중 N, P, L 단백질은 전사복합체 (transcription complex)를 형성하여 RNA 복제과정에 관여한다. 바이러스 외피막을 구성하는 주요 당단백질로는 F와 HN 당단백질 (glycoprotein)이 있다. 이들 당 단백질은 방어면역에 관여하는 중요한 바이러스 구조단백질이다. F 당단백질은 감염세포간의 융합을 유발하고 병원성과도 관련이 있는 것으로 알려져 있다. HN 당단백질은 감염성 바이러스가 세포 표면에 달라붙거나 세포 내에서 증식된 후대바이러스(progeny virus)가 세포막 외부로 유리하는 과정에 관여한다. 특히 HN 당단백질은 닭 적혈구를 응집시키거나 적혈구 응집 후 해리시키는 생물학적 기능을 가지고 있다.
APMV-8의 진단하는 방법은 바이러스 검사와 항체검사 등 실험실 검사에 의해 이루어지고 있다. 바이러스 검사는 의심검사시료를 종란 접종법으로 바이러스를 분리한 다음 혈청형별 면역혈청을 사용하여 분리 바이러스의 혈청형을 최종 동정(identification)한다. 항체 검사는 검사 혈청 시료를 바이러스 혈청형별 항원을 사용하여 혈청형 특이 항체의 존재 여부를 평가함으로서 이루어진다.
APMV-8의 진단에서 바이러스 혈청형 동정이나 혈청형별 특이 항체를 확인하는 표준검사방법은 혈구응집억제시험(hemaglutination inhibition test; HI)법이다. 현재 HI법에 사용하는 APMV-8 진단 항원은 감염력이 있는 APMV-8을 닭 종란에 접종하여 대량 증식시킨 다음, 포르말린이나 베타프로피오락톤 등으로 바이러스의 감염성을 제거한 사독 바이러스(killed virus)를 사용하여 제조하는 것이 통상적인 방법이다. 이러한 방법으로 항원진단액을 제조할 경우 바이러스 증식, 바이러스액 불활화 및 불활화 확인검사 등 최소 2주간의 항원제조 시간이 소요된다. 또한, 종래의 진단 항원은 질병발생이나 공급부족 등으로 닭 종란 공급이 원활하지 않는 경우 진단 항원 제조에 차질을 빚을 뿐만 아니라 감염성이 있는 생바이러스를 취급하기 때문에 오염우려가 상존하고 있는 실정이다. 그러므로 종래의 진단 항원 제조방법인 종란 접종법을 대체하고 안전하게 항원 진단액을 생산할 수 있는 새로운 제조공정이 필요한 실정이다.
이에, 본 발명자들은 신규한 제8형 조류파라믹소바이러스를 진단할 수 있는 조성물을 개발하고자 노력한 결과, 제8형 조류파라믹소바이러스 (avian paramyxovirus-8, APMV-8)의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 (hemagglutinin-neuraminidase, HN) 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 재조합 바이러스 발현 벡터를 제조하고, 상기 발현 벡터를 곤충 세포에 형질감염 시킨 후 생산된 재조합 항원 단백질이 닭 적혈구 응집능을 가지고 있어 제8형 조류파라믹소바이러스를 빠르고 정확하게 진단할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 제8형 조류파라믹소바이러스 (avian paramyxovirus-8, APMV-8)의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 (hemagglutinin-neuraminidase, HN) 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 재조합 바이러스 발현 벡터를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 상기 재조합 바이러스 발현 벡터에 의해 형질전환된 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 단백질을 발현하는 재조합 곤충 세포를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 상기 재조합 곤충세포가 발현하는 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 항원 단백질을 포함하는 제8형 조류파라믹소바이러스 진단용 조성물, 진단 키트 및 이를 이용한 진단 방법을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 제8형 조류파라믹소바이러스 (avian paramyxovirus-8, APMV-8)의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 (hemagglutinin-neuraminidase, HN) 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 재조합 바이러스 발현 벡터를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 재조합 바이러스 발현 벡터에 의해 형질전환된 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 단백질을 발현하는 재조합 곤충 세포를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 재조합 곤충세포가 발현하는 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 항원 단백질을 포함하는 제8형 조류파라믹소바이러스 진단용 조성물, 진단 키트 및 이를 이용한 진단 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 진단용 조성물은 살아있는 바이러스 취급에 따른 오염 가능성 없이 안전하고, 신속하게 대량의 샘플로부터 제8형 조류파라믹소바이러스의 감염 여부를 정확하게 진단할 수 있는 우수한 효과를 가지고 있다.
도 1은 제 8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 유전자를 포함하는 재조합 베큘로바이러스 발현벡터를 나타낸 도이다.
도 2는 제 8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 단백질을 제조하는 과정을 나타낸 도이다.
도 3은 곤충세포에서 발현한 제 8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 단백질을 제 8형 조류파라믹소바이러스 닭 면역혈청을 이용하여 웨스턴 블롯으로 확인한 결과를 나타낸 도이다.
이하 본 발명에 대하여 보다 상세히 설명한다.
본 발명은 제8형 조류파라믹소바이러스 (avian paramyxovirus-8, APMV-8)의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 (hemagglutinin-neuraminidase, HN) 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 재조합 바이러스 발현 벡터를 제공한다.
상기 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 단백질을 코딩하는 유전자는 서열번호 1의 염기서열로 표시되는 것 또는 이와 기능적으로 동등한 염기서열을 가지는 것을 특징으로 한다.
상기 “기능적으로 동등한”이란 염기의 부가, 치환 또는 결실의 결과, 상기 서열번호 1로 표시되는 염기서열과 적어도 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것으로, 서열번호 1로 표시되는 염기서열에 의해 코딩된 단백질과 실질적으로 동질의 생리활성을 나타내는 단백질을 코딩할 수 있는 염기서열을 의미한다. 예를 들어, 일부 염기서열이 결실(deletion), 치환(substitution) 또는 삽입(insertion)에 의해 변형되었지만, 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 단백질을 코딩하는 핵산 분자와 기능적으로 동일한 작용을 할 수 있는 변이체(variants)를 포함하는 개념이다.
본 발명에 따른 재조합 바이러스 발현 벡터의 수득 과정은 하기와 같다.
먼저, 제8형 조류파라믹소바이러스로부터 게놈 DNA를 분리하거나, 당업계에 공지된 방법을 이용하여 게놈 DNA를 합성한다. 상기 게놈 DNA로부터 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 단백질을 코딩하는 유전자 부분을 당업계에 공지된 방법을 이용하여 분리하고, 유전자를 대량으로 생산할 수 있도록 클로닝 벡터 (예를 들어, pGEM-T 벡터, pCR-2.1-TOPO 벡터 등)에 삽입한다. 상기 재조합 벡터 내의 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 단백질을 코딩하는 유전자 부분을 다시 분리하여, 베큘로바이러스 폴리헤드린프로모터 (PPH)를 가진 발현 벡터 (예를 들어, pFastBacTM1 벡터 등)에 삽입하여 최종적으로 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 재조합 바이러스 발현 벡터를 제조한다.
또한, 본 발명은 상기 재조합 바이러스 발현 벡터에 의해 형질전환된 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 단백질을 발현하는 재조합 곤충 세포를 제공한다.
상기 곤충 세포는 담배거세미나방종의 도둑나방 (Spodoptera frugiperda)에서 유래한 Sf9 세포일 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 제8형 조류파라믹소바이러스 (avian paramyxovirus-8, APMV-8)의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 (hemagglutinin-neuraminidase, HN) 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 재조합 바이러스 발현 벡터에 의해 형질전환된 재조합 곤충세포는, 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 단백질을 발현할 수 있다. 상기 시스템을 이용할 경우, 세포 배양이 가능한 일반 실험실에서 손쉽게 대량의 단백질을 제조할 수 있으며, 수득된 제8형 조류파라믹소바이러스 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 단백질은 닭 적혈구에 대한 혈구 응집능과 같은 HN 단백질 고유의 생물학적 기능을 가지고 있으며, 감염성을 지니고 있는 살아있는 바이러스 취급에 따른 오염 가능성 없이 안전하고, 종래 고가의 무균닭 부화란을 사용하는 항원 제조 과정에 비하여 매우 신속하고 정확하게 대량생산이 가능하다. 따라서, 본 발명에 따른 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 항원 단백질은 제8형 조류파라믹소바이러스를 진단하는데 유용하게 이용될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 재조합 곤충세포가 발현하는 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 항원 단백질을 포함하는 제8형 조류파라믹소바이러스 진단용 조성물 및 진단 키트를 제공한다.
본 발명에서 "진단"은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적상, 진단은 제8형 조류파라믹소바이러스의 발병 여부 또는 발병 가능성 여부를 확인하는 것이다.
상기 진단 키트는 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법을 이용하여 제조될 수 있다. 이러한 진단 키트는 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 항원 단백질뿐만 아니라 면역학적 분석에 사용되는 당 분야에서 일반적으로 사용되는 도구, 시약 등이 포함된다. 이러한 도구/시약으로는 적합한 담체, 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지 물질, 용해제, 세정제, 완충제, 안정화제 등이 포함되나, 이로 제한되지 않는다. 표지 물질이 효소인 경우에는 효소 활성을 측정할 수 있는 기질 및 반응 정지제를 포함할 수 있다. 적합한 담체로는, 이에 한정되지는 않으나, 가용성 담체, 예를 들어 당 분야에 공지된 생리학적으로 허용되는 완충액, 예를 들어 PBS, 불용성 담체, 예를 들어 폴리스티렌, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리에스테르, 폴리아크릴로니트릴, 불소 수지, 가교 덱스트란, 폴리사카라이드, 라텍스에 금속을 도금한 자성 미립자와 같은 고분자, 기타 종이, 유리, 금속, 아가로오스 및 이들의 조합일 수 있다.
또한 본 발명은 상기 재조합 동물 세포가 발현하는 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 단백질을 항원으로 이용하여, 시료 내에서 항원-항체 반응을 통해 제8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 단백질을 검출하는 것을 특징으로 하는, 제8형 조류파라믹소바이러스의 진단 방법을 제공한다.
상기 항원-항체 반응은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법을 모두 이용할 수 있으며, 예를 들어 조직면역염색, 방사능면역분석법(RIA), 효소면역분석법 (ELISA), 웨스턴블럿(Western Blotting), 면역침전분석법(Immunoprecipitation Assay), 면역확산분석법(Immunodiffusion Assay), 보체고정분석법(Complement Fixation Assay), FACS(Fluorescence-activated cell sorter) 및 단백질칩(protein chip) 분석법으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 방법을 이용할 수 있다.
상기 시료는 제8형 조류파라믹소바이러스로 감염된 것으로 예상되거나 감염된 세포, 혈액, 소변, 타액, 조직 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
이하, 본 발명을 실시예에 의거하여 보다 구체적으로 설명한다. 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예 1. APMV -8 HN 유전자를 함유하는 발현벡터 제작
야생철새(오리)의 항문스왑시료(시료명: WB12-163FS)에서 분리된 APMV-8 균주로부터 RNeasy RNA extraction kit(Qiagen)를 이용하여 제조사의 매뉴얼에 따라 바이러스 게놈 RNA를 추출하였다. 상기 RNA를 기초로, 하기 표 1의 프라이머 및 SuperScript® III First-Strand Synthesis System (Invitrogen)을 이용하여 제조사의 매뉴얼에 따라 첫 번째 가닥 cDNA를 합성하였다. 상기 첫 번째 가닥 cDNA 및 하기 표 1의 프라이머 및 Emeral PCR 키트(TaKaRa)를 이용하여, 중합효소연쇄반응(Polymerase Chain Reaction; PCR)을 수행하였다. PCR은 98℃ 10초, 55℃ 1분, 72℃에서 1분 30초를 1 사이클로 하여 PCR 증폭기 (PE 9600;Perkin Elmer)에서 35사이클 반복한 후, 마지막으로 72℃에서 5분간 DNA합성을 실시하였다.
정방향 프라이머 5'-GAATTCATTACCTCGTATCCACCTTG-3'
역방향 프라이머 5'-AAGCTTTCTGCAATTAAATGAGTCCC-3'
상기 프라이머는 국제유전자은행(NCBI, Genbank) 등록번호 제FJ619036호로 등록된 APMV-8 HN 유전자의 ORF(open reading frame) 전체를 구성하는 1,841개의 핵산전체가 포함되도록 디자인되었으며, 이 후 클로닝을 위해, 정방향 프라이머의 5’말단의 ATG상류에 EcoR1제한효소 작용부위 및 역방향 프라이머의 5` 종료코돈 상류에 HindIII 제한효소 작용부위를 삽입하였다.
PCR을 통해 증폭된 HN 유전자 cDNA단편은 제한효소 처리하여, 바로 pCR®-2.1-TOPO®벡터 (Invitrogen, USA)에 삽입하여 "pCR/APMV8HN"을 클로닝하였다. 상기 pCR/AMPV8HN 벡터를 EcoR1 및 HindIII로 처리하여 1,800bp의 DNA 단편을 추출한 후, 추출한 APMV-8 HN DNA단편을 베큘로바이러스 폴리헤드린프로모터(PPH)를 가진 pFastBacTM1 발현벡터의 멀티클로닝 부위(multicloning site)내 삽입하여 재조합 베큘로바이러스 발현벡터 (이하 “pFB/APMV8HN”이라 함)를 제작하였다.
이상의 과정을 도 1에 모식도로 나타내었다.
실시예 2. APMV -8 HN 단백질을 발현하는 재조합 베큘로바이러스의 제작
APMV-8 HN 단백질을 발현하는 재조합 베큘로바이러스를 제조하기 위하여, Baculovirus espression system 키트(Life Science사)를 사용하였다. 보다 구체적으로, 상기 실시예 1의 재조합 베큘로바이러스 발현벡터 pFB/APMV8HN를 Bacmid를 함유하고 있는 DH10BAC E. coli 세포에 형질전환시켜 Bacmid와의 재조합 과정을 거쳤다. 그 후 재조합 Bacimid를 추출하여 곤충세포(Spodoptera frugiperda 9 cells, Sf9 세포)에 형질감염(transfection) 시켜 재조합 베큘로바이러스를 만들었다. 그런 다음, 형질감염시킨 세포의 배양 상층액을 수확하여 플라크 시험법(Plaque Assay)을 실시하여 APMV-8 HN단백질을 발현하는 재조합 베큘로바이러스(rBac/APMV8HN)를 순수 분리하였다.
이상의 과정을 도 2에 모식도로 나타내었다.
또한, 재조합 베큘로바이러스 내의 APMV-8단백질을 SDS-PAGE 후 APMV-8 닭 면역혈청을 이용하여 웨스턴 블랏(Western blot)을 통해 확인하였으며, 그 결과를 도 3에 나타내었다.
실시예 3. APMV -8 HN 단백질 항원을 이용한 APMV -8 특이항체 검출
상기 실시예 2에서 제조한 APMV-8 HN 단백질 항원으로 APMV-8 특이 항체를 검출할 수 있는지 여부를 조사하였다. 이를 위하여 APMV 혈청형별 면역혈청(미국 국립수의검사소 제공)을 사용하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
면역혈청 HI 항체역가 (log2)
신규항원 종래 항원
APMV-8 12 10
음성대조 0 0
표 2에 나타난 바와 같이 APMV-8 면역혈청에 대해서 양성반응을 나타내었으나, 대조 혈청에 대해서는 음성반응이 관찰되었다. 그러므로 본 발명에 의하여 생산한 APMV-8 HN 단백질 항원은 APMV-8 특이항체를 검출하는 진단항원으로 사용할 수 있음을 나타낸다.
<110> REPUBLIC OF KOREA (Management : Ministry for Food, Agriculture, Forestry and Fisheries.Animal, Plant and Fisheries Quarantine and Inspection Agency (QIA) ) <120> Recombinant antigenic protein of hemagglutinin-neuraminidase of avian paramyxovirus-8 and composition for diagnosis using the same protein <130> P-143 <160> 1 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1812 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> it is DNA sequence coding antigenic protein of hemagglutinin-neuraminidase of avian paramyxovirus-8 <400> 1 gaattcatta cctcgtatcc accttgtcta aagacatcat gagtaacatt gcatccagtt 60 tagaaaatat tgtagagcag gatagtcgga aaacaacttg gagggccatc tttagatggt 120 ccgttcttct tattacaaca ggatgcttag ccttatccat tgttagcata gttcaaattg 180 gaaatttgaa aattccttct gtaggggatc tggcggatga ggtggtaaca cctttgaaaa 240 ccactctgtc tgatacactc aggaatccaa ttaaccagat aaatgacata ttcaggattg 300 ttgcccttga cattccattg caagtaacta gtatccaaaa agaccccgca agtcaattta 360 gcatgttgat agacagttta aatgctatta aattaggcaa cgggaccaac cttatcatac 420 ctacatcaga taaggagtat gcaggaggaa ttggaaaccc tgtatttact gtcgatgctg 480 gaggttctat aggattcaaa caatttagct taatagaaca tccgagcttt attgctggac 540 ctacaacgac tcgaggctgt acaagaatac ccacttttca catgtcagaa agtcattggt 600 gctactcaca caacatcatt gctgctggct gtcaagatgc cagtgcatct agtatgtata 660 tctcaatggg ggttctccat gtgtcttcat ctggcgcgcc tattttcctt actactgcaa 720 gtgaactgat agacgatgga gttaatcgta agtcatgcag tattgtagca acccaattcg 780 gctgtgacat tttgtgcagt attgtcacag agaaggaggg agatgattat cggtctgata 840 ctccgactcc aatgcgccac ggccgttttt catccaatgg gagttttgta gaatccgaac 900 tacccgtgtc cagtatgttc tcgtcattct ctgccaacta ccctgctgtg ggatcaggcg 960 aaatcgtaaa agatagaata ttattcccaa tttacggagg tataaagcag acttcaccag 1020 agtttaccga attagtgaaa tatggactct ttgtgtcaac acctacaact gtatgtcaga 1080 gtagctggac ttatgaccag gtaaaagcag cgtataggcc agattacata tcaggccggt 1140 tctgggcaca agtgatactc agctgcgccc ttgatgcagt cgacttatca agttgtattg 1200 taaagattat gaatagcagc acagtgatga tggcagcaga aggaaggata ataaagatag 1260 ggattgatta cttttattat cagcggtcat cttcttggtg gccattggca tttgttgcaa 1320 aactagaccc acaagagttg gcagacacta actcgatatg gctgaccaat tccataccaa 1380 tcccacaatc aaagttccct cggccttcat attcagaaaa ttattgcaca aagccagcag 1440 tttgccctgc tacttgtgtc actggtgtat attctgatat ttggcccttg acctcatctt 1500 catcacttcc gagcataatt tggatcggcc agtaccttga tgcccctgtt ggaaggactt 1560 atcccagatt tggaattgca aatcagtcac actggtacct tcaagaagat attctaccca 1620 cctccactgc aagtgcgtat tcaaccacta catgttttaa gaatactgcc aggaatagag 1680 tgttctgcgt caccattgct gaatttgcag atggattgtt tggagagtac aggataacac 1740 ctcagttgta tgaattagtg agaaacaatt gaatcacgac aatcttggga ctcatttaat 1800 tgcagaaagc tt 1812

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  6. 서열번호 1로 표시되는 염기서열로 이루어진 제8형 조류파라믹소바이러스 (avian paramyxovirus-8, APMV-8)의 HN(hemagglutinin-neuraminidase) 유전자를 포함하는, 베큘러바이러스 발현벡터가 형질도입된 곤충 세포가 발현하는 재조합 HN 단백질;을 포함하는, 제8형조류파라믹소바이러스 진단용 조성물.
  7. 서열번호 1로 표시되는 염기서열로 이루어진 제8형 조류파라믹소바이러스의 HN 유전자를 포함하는, 베큘러바이러스 발현벡터가 형질도입된 곤충 세포가 발현하는 재조합 HN 단백질;을 포함하는, 제8형 조류파라믹소바이러스 진단 키트.
  8. 서열번호 1로 표시되는 염기서열로 이루어진 제8형 조류파라믹소바이러스의 HN 유전자를 포함하고, 베큘러바이러스 발현벡터가 형질도입된 곤충 세포가 발현하는 재조합 HN 단백질;을 이용하여 항원-항체반응을 통해 시료 내에서 제8형 조류파라믹소바이러스의 재조합 HN 단백질을 검출하는 것을 특징으로 하는, 제8형 조류파라믹소바이러스의 진단 방법.
  9. 제 8항에 있어서, 상기 항원-항체 반응은 조직면역염색, 방사능면역분석법(RIA), 효소면역분석법 (ELISA), 웨스턴 블럿(Western Blotting), 면역침전 분석법(Immunoprecipitation Assay), 면역확산 분석법(Immunodiffusion Assay), 보체고정 분석법(Complement Fixation Assay), FACS(Fluorescence-activated cell sorter) 및 단백질 칩(protein chip) 분석법으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 방법을 이용하여 수행하는 것을 특징으로 하는, 제8형 조류파라믹소바이러스의 진단 방법.
  10. 제 8항에 있어서, 상기 시료는 제8형 조류파라믹소바이러스로 감염된 것으로 예상되거나 감염된 세포, 혈액, 소변, 타액 및 조직으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 제8형 조류파라믹소바이러스의 진단 방법.
KR20120150890A 2012-12-21 2012-12-21 제 8형 조류파라믹소바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다아제의 재조합 항원 단백질 및 이용한 진단용 조성물 KR101491817B1 (ko)

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Silvina Chimeno Zoth 등. CLINICAL AND VACCINE IMMUNOLOGY. Vol. 16, No. 5, 페이지 775-778 (2009) *

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