KR101454076B1 - 결석 제거에 도움이 되는 참가시나무 잎 액기스 제조 방법 - Google Patents
결석 제거에 도움이 되는 참가시나무 잎 액기스 제조 방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명의 결석 제거에 도움이 되는 참가시나무 잎 액기스 제조 방법은 참가시나무중 잎만을 추출하여 음건한 후 분쇄하는 단계; 분쇄된 참가시나무 잎을 메탄올로 수욕상에서 열수 추출 후 여과한 후, 회전증발기(rotary evaporator)로 감압 농축하여 메탄올 조추출물을 얻는 단계; 상기 메탄올 조추출물을 용매분획법에 따라 n-hexane 분획, CHCl3 분획, EtOAc 분획, n-BuOH 분획, H2O로 분획하는 단계; 그 후에 에틸아세테이트(Ethyl Acetate)와 CHCl3의 분획으로부터 생리활성물질 분리단계;를 포함하여 이루어져, 참가시나무 잎으로부터 결석, 항염 및 항암, 활성산소 생성 억제 등의 도움이 되는 생리활성물질을 이용하여 결석 제거에 도움이 되는 참가시나무 잎 액기스를 제조하고, 이를 이용하여 음료 등으로 개발하여 결석예방과 국민건강증진에 기여하고, 지역 농가소득증대 및 경쟁력 활성화할 수 있는 효과가 있다.
Description
본 발명은 결석 제거에 도움이 되는 참가시나무 잎 액기스 제조 방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 참가시나무 잎으로부터 결석, 항염 및 항암, 활성산소 생성 억제 등의 도움이 되는 생리활성물질을 추출하여 결석 제거에 도움이 되는 참가시나무 잎 액기스를 제조하고, 이를 이용하여 음료 등으로 개발하여 결석예방과 국민건강증진에 기여하고, 지역 농가소득증대 및 경쟁력 활성화할 수 있는 결석 제거에 도움이 되는 참가시나무 잎 액기스 제조 방법에 관한 것이다.
최근, 우리 식단이 전통적 채식 위주의 식생활에서 패스트푸드와 다양한 음식문화의 변화로 고혈압, 당뇨 등의 생활습관성 발병과 이에 동반한 호르몬의 변화 등으로 인하여 결석 환자가 증가하고 있다.
결석환자의 증가 추세는 한국식품영양학회지에 실린 연구 논문에 의하면 서울대학교병원, 카톨릭중앙의료원, 경희의료원, 경북대학교 의과대학 부속병원 등 4개 대학병원의 연보에 발표된 10년간의 결석환자의 수를 분석한 결과 1982년부터 1991년의 10년간에 환자는 2.5배가 되었다.
결석 치료법으로는 수술로 꺼내거나 체외충격파시술로 깨뜨려 없애기도 하지만, 대부분 재발병하고 있으며, 이에 따른 정신적, 경제적 고통을 많은 환자가 받고 있으며, 상기의 치료법 외에는 특별한 방법이 없는 실정이었다.
본 발명의 배경이 되는 기술로는 특허등록 제1106184호 "참가시나뭇잎 액기스 제조 방법"(특허문헌 1)이 있다. 상기 배경기술에서는 참가시나뭇잎을 가열하여 효소를 불활성화 처리하는 효소 불활성화 처리 단계, 효소 불활성화 처리된 참가시나뭇잎에 대해 먼저 알코올에 침지하여 알코올에 녹는 유효 성분을 추출하는 알코올 추출 단계, 상기 알코올 추출 단계를 거친 효소 불활성화 처리된 참가시나무잎을 물에 침지하여 물에 녹는 유효 성분을 추출하는 물 추출 단계를 포함하며, 상기 효소 불활성화 처리 단계는 찜기에 수증기 발생을 위한 물 속에 회향, 물금, 계피 가운데 적어도 하나를 넣는 것을 특징으로 하는 참가시나뭇잎 액기스 제조 방법을 제안한다. 그러나 상기 배경기술은 참가시나무잎을 이용하여 단순히 액기스만을 추출하는 방법으로 결석제거에 도움이 되는 성분을 추출하지 못하여 효율이 떨어지는 문제점이 있었다.
본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위한 것으로, 참가시나무 잎으로부터 결석, 항염 및 항암, 활성산소 생성 억제 등의 도움이 되는 생리활성물질을 추출하여 결석 제거에 도움이 되는 참가시나무 잎 액기스를 제조하고, 이를 이용하여 음료 등으로 개발하여 결석예방과 국민건강증진에 기여하고, 지역 농가소득증대 및 경쟁력 활성화할 수 있는 결석 제거에 도움이 되는 참가시나무 잎 액기스 제조 방법을 제공하는데 그 목적이 있다.
본 발명은 참가시나무중 잎만을 추출하여 음건한 후 분쇄하는 단계; 분쇄된 참가시나무 잎을 메탄올로 수욕상에서 열수 추출 후 여과한 후, 회전증발기(rotary evaporator)로 감압 농축하여 메탄올 조추출물을 얻는 단계; 상기 메탄올 조추출물을 용매분획법에 따라 n-hexane 분획, CHCl3 분획, EtOAc 분획, n-BuOH 분획, H2O로 분획하여 순차적으로 연속 분리하는 단계
상기 n-hexane 분획, CHCl3 분획, EtOAc 분획, n-BuOH 분획, H2O 분획하는 단계 그 후에, 에틸아세테이트(Ethyl Acetate CH3COOC2H5)와 CHCl3(chloroform) 분획만을 선택하여, 생리활성물질 분리단계;를 포함하여 형성된 것을 특징으로 하는 결석 제거에 도움이 되는 참가시나무 잎 액기스 제조 방법을 제공하고자 한다.
상기 n-hexane 분획, CHCl3 분획, EtOAc 분획, n-BuOH 분획, H2O 분획하는 단계 그 후에, 에틸아세테이트(Ethyl Acetate CH3COOC2H5)와 CHCl3(chloroform) 분획만을 선택하여, 생리활성물질 분리단계;를 포함하여 형성된 것을 특징으로 하는 결석 제거에 도움이 되는 참가시나무 잎 액기스 제조 방법을 제공하고자 한다.
본 발명의 결석 제거에 도움이 되는 참가시나무 잎 액기스 제조 방법은 참가시나무 잎으로부터 결석, 항염 및 항암, 활성산소 생성 억제에 도움이 되는 생리활성물질을 이용하여 결석 제거에 도움이 되는 참가시나무 잎 액기스를 제조하는 매우 유용한 효과가 있는 것이다.
아래에서 본 발명은 첨부된 도면에 제시된 실시 예를 참조하여 상세하게 설명이 되지만 제시된 실시 예는 본 발명의 명확한 이해를 위한 예시적인 것으로 본 발명은 이에 제한되지 않는다.
이하 바람직한 실시예에 따라 본 발명의 기술적 구성을 상세히 설명하면 다음과 같다.
참가시나무(Quercus salicina Blum = Q. stenophylla Makino)는 너도밤나무과(Fagaceae)에 속하는 상록 교목으로 일본과 우리나라 남부 섬 지방에 분포한다. 잎은 피침형이며, 위쪽에 예리한 톱니가 있고 뒤쪽은 흰색이다. 참가시나무의 잎과 잔가지는 설사, 이질, 피부염, 출혈증 등의 치료에 사용하며, 항염, 항부종, 이뇨작용에 효과가 있다고 알려져 있으며 우리나라와 일본 등에서 민간요법적 방법으로 결석 치료에 사용되고 있다.
따라서 본 발명에서는 우리나라에서 자생하는 참가시나무에 대한 결석, 항염 및 항암, 활성산소 생성 억제 등의 생리활성자료에 착안하여 참가시나무 잎으로부터 생리활성물질을 이용하여 결석 제거에 도움이 되는 참가시나무 잎 액기스를 제조하고, 이를 이용하여 음료 등으로 개발하여 결석예방과 국민건강증진에 기여하고, 지역 농가소득증대 및 경쟁력 활성화를 도모하고자 한다.
본 발명의 결석 제거에 도움이 되는 참가시나무 잎 액기스 제조 방법을 상세히 설명하면 다음과 같다.
먼저 참가시나무 잎을 음건한 후 분쇄한다.
참가시나무 중 잎만을 선택하여 음건하여 분쇄한다.
참가시나무의 잎만을 선택하여 재료로 사용하는 이유는 다음과 같다.
참가시나무 부위별 영양성분을 분석한 결과, 표 1에 나타난 바와 같이, 참가시나무 잎의 수분, 조단백, 조지방, 조회분 함량이 각각 31.6%, 7.6%, 2.3%. 3.8%로 열매와 가지에 비해 높게 나타났다.
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총페놀 및 총플라보노이드 함량 역시 잎 부위에서 높게 나타났다. 총구성아미노산의 함량은 잎 > 가지 > 열매 순서로 함량이 높았으며, 잎이 열매에 비해 5.7배 이상 많이 함유하고 있었다.
참가시나무 부위별 총페놀과 총폴라보노이드 함량은 다음과 같다. 총페놀 함량은 잎 1.56%, 열매 0.89%, 가지 0.52%로 잎이 많이 함유되어 있었다. 페놀성 물질은 다양한 구조와 분자량을 가지며, 이것들의 phenolic hydroxyl이 단백질처럼 거대분자와 결합하여 항산화, 향균, 항암 등의 생리기능을 가지는 것으로 알려진 만큼 함량이 많을수록 기능성 물질로 유용하게 활용할 수가 있다. 총플라보노이드 함량의 경우도 잎 0.46%, 열매 0.39%, 가지 0.14%로 잎이 많이 함유되어 있었다. 플라보노이드류는 담황색 또는 노란색을 띠는 색소화합물로서 식물 중에는 대부분 당과 결합된 배당체 형태로 존재하며, 하루 한 사람 섭취량이 23~1,000mg 정도이고 특이한 부작용이 없는 것으로 알려져 있다. 현재까지 플라보노이드는 약 4,000종 이상이 알려져 있는데, 항산화 작용, 순환기계 질환의 예방, 항염증, 항알레르기, 항균, 항바이러스, 지질저하 작용, 면역증강 작용, 모세혈관 강화작용 등에 도움이 되는 것으로 알려져 있다. 이상의 결과로 볼 때 참가시나무 잎, 열매, 가지 중 잎 부위에서 많은 양의 페놀성 화합물을 함유하고 있다.
참가시나무 잎, 열매, 가지를 MeOH(CH3OH) 용액으로 추출하고, 그 추출물을 n-hexane(CH3(CH2)4CH3), CHCl3(chloroform), EtOAc(ethylacetate), n-BuOH(butanol CH3(CH2)3OH), H2O로 용매 분획법에 의해 분획하였다. 이중 CHCl3(chloroform), EtOAc(Ethyl Acetate CH3COOC2H5)의 분핵만을 선택한 것을 대상으로 Silica gel 및 Sephadex LH-20 column chromatography를 실시하여 얻은 분획물을 LC-Q-TOF 및 GC-MS를 이용하여 분석하였고, 분석결과 참가시나무잎과 잔가지에서 결석제거에 도움을 주는 것을 확인하였다.
따라서 부위별 영양성분 및 Quercetin 및 Quercetin유도체 3종과 b-Sitosterol, Lupenone, Lupeol 함량이 뛰어난 잎만을 선택하여 재료로 사용하는 것이다.
음건하여 분쇄한 참가시나무 잎의 추출과 분회과정은 다음과 같다.
이후, 음건하여 분쇄한 참가시나무 잎을 메탄올로 수욕상에서 3회 열수 추출 후 여과하고, 회전증발기(rotary evaporator)로 감압 농축하여 메탄올 조추출물을 얻었다.
상기의 메탄올 조추출물을 용매의 극성을 증가시키는 용매분획법에 따라 n-hexane 분획, CHCl3 분획, EtOAc 분획, n-BuOH(Butyl Alcohol CH3(CH2)3OH) 분획, H2O 분획을 얻었으며, 상기의 5개의 분획물을 TLC(박층크로마토그라피 Thin film chromatography)를 전개하여 확인하였다.
참가시나무 잎, 열매, 가지를 메탄올로 추출하여 추출물을 증류수에 현탁 시킨 후, hexane(CH3(CH2)4CH3), chloroform, ethyl acetate(CH3COOC2H5), n-butanol(Butyl Alcohol CH3(CH2)3OH) 순으로 순차적으로 연속 분리한다. 참가시나무 methanol(CH3OH) 추출물을 용매의 극성 차이에 따라 hexane, chloroform(클로로포름 CHCl3), ethyl acetate(CH3COOC2H5), n-butanol 및 H2O로 순차 분획하고 감압농축하여 5개의 용매 분획물을 얻었다.
참가시나무 잎의 용매 분획물 중 Chloroform 가용성 분획물을 CHCl3-MeOH-DW 혼합용매 20:1:0.1/ 20:5:0.1/ 20:10:0.1/ 20:20:0.1/ 20:30:0.1 순으로 극성을 증가시켜 TLC 패턴을 확인하면서 분리 조건을 선택하였다. Ethyl acetate 가용성 분획물의 경우도 EtOAC-MeOH-DW 혼합용매 20:1:0.1/ 20:5:0.1/ 20:10:0.1/ 20:20:0.1/ 20:30:0.1 순으로 극성을 증가시켜 TLC 패턴을 확인하면서 분리 조건을 선택하였다. TLC 패턴 확인을 이해 10% 황산을 사용하여 발색하였다.
분리조건을 확인 한 후 Silica gel column (1.5 x 50 cm), LH-20 column chromatography하여 fraction을 분리한다.
성분의 확인은 전 세계적으로 Metabolites flow의 대표적 webbank인 “Medlin”의 정보를 이용하였다.
Silica gel, Sephadex LH-20 column chromatography를 반복 실시하여 잎 분획물로부터 아래 표2와 같이 Quercetin표준물과 분획물속 quercetin의 target ion idntification을 실시하여 이상 없이 검출됨을 확인하였다.
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분석결과 참가시나무잎과 잔가지에서 이뇨작용 및 근육이완에 도움을 주는 Quercetin 및 Quercetin유도체 3종과 b-Sitosterol, Lupenone, Lupeol도 확인하였다.
(실험예 1) 참가시나무 결석 유효성 평가
1. 시험물질 및 부형제
1) 시험물질
(1) 명 칭: 참가시나무 잎 열수추출물
(2) 입수일: 2011년 4월
(3) 보관조건: 냉동보관
(4) 공급처: 전라남도 산림자원연구소
(5) 투여 시 상태: 파우더
(6) 보관조건: 실온보관
2) 부형제
(1) 명 칭: 주사용 멸균 증류수
(2) 공급처: 중외제약㈜
2. 재료 및 방법
1) 시험계
(1) 종 및 계통: 특정병원체부재(SPF) rat, SD
(2) 공급원: (주)효창사이언스
(3) 주령 및 체중범위
① 입수시 주령: 6주령, 수컷
② 입수시 동물수: 30마리
③ 입수시 체중: 150~170g
④ 투여개시시 주령: 약 7주령
4) 검역 및 순화
동물을 입수할 때에 외관을 육안적으로 검사한 후 7일간 동물실에서 순화시키면서 일반증상을 관찰하여 건강한 동물만을 시험에 사용하였다.
2) 사육환경
(1) 환경조건
본 시험은 온도 23±3℃, 상대습도 50±10%, 조명시간12시간 (08:00 점등~ 20:00소등) 로 설정된 경성대학교 동물실험실에서 실시하였다.
(2) 사육환경 모니터링
시험기간 중 동물실의 온. 습도는 자동온습도 측정기에 의하여 매시간 마다 측정되었으며, 환기횟수 및 조도 등의 환경조건은 정기적으로 측정되었다. 동물실의 환경측정결과, 시험에 영향을 미칠 것으로 사료되는 변동사항은 없었다.
(3) 사육상자, 사육밀도 및 사육상자의 식별
사육상자는 스테인레스제 망 사육상자(280W x 500L x200H mm)로 순화 검역기간과 투여 관찰기간 동안에도 3마리씩 수용하였으며, 시험기간 중 사육상자는 시험번호 및 동물번호를 기입한 케이지 카드를 붙여 식별하였다.
(4) 사료 및 물
사료는 실험동물용 고형사료(효창사이언스)를 멸균하여 자유 섭취시켰으며, 물은 소독한 상수도수를 자유 섭취시켰다. 사료 및 물은 시험에 영향을 미칠만한 요인이 발견하지 않은 것을 사용하였다.
3) 투여량 및 실험동물 군 구성
(1) 투여기간: 14 일
(2) 투여량 설정: 참가시나무 잎 열수 추출물 100Dose, Positive control(Furosemide) 0.5Dose
(3) 실험동물 군 구성, 투여액량 및 투여량은 표 3에 나타난 것과 같다.
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4) 시험물질의 조제 및 투여
(1) 투여액의 조제
시험물질을 시험물질 투여군의 투여량에 맞게 칭량하여 주사용 멸균 증류수에 용해하여 조제하였다.
(2) 투여부위 및 투여방법
위내, 경구투여
(3) 투여경로 선택이유
사람에 대한 예상적용경로로 경구투여를 선택하였다.
(4) 투여횟수 및 투여기간: 14일(14회)
5) 관찰 및 검사항목
(1) 일반증상 및 사망동물의 관찰
투여당일에는 투여 후 1시간부터 6시간까지 매 시간마다, 투여 익일부터 15일까지 매일 1회씩 일반증상의 변화, 독성증상 및 사망동물의 유무를 관찰하였다.
(2) 체중측정
시험에 사용된 모든 동물에 대하여 투여개시 직전(1일)과 투여 후 2~3일 간격으로 측정하였다.
(3) 해부 및 장기적출
투여 후 15일째 모든 동물을 CO2 가스 마취 하에서 개복한 후에 복대동맥과 복대정맥을 절단하여 방혈 치사 시킨 후, 장기를 적출하여 무게 및 이상여부를 관찰하였다.
(4) Urine volume 및 pH 확인
(5) 뇨, 혈액의 생화학 분석
① Urine: Uric acid, urinary creatinine
② Serum: BUN(blood urea nitrogen, 혈액요소질소)측정, Creatinine, Uric acid
(6) 효소원의 조제
신장은 0.9% 생리식염수로 관류시켜 조직 내 혈액을 제거하고 적출하였으며 0.1M
sodium phosphate byffer(pH 7.4)를 가하여 homogenate분획을 만들어 효소원으로 사용하였다.
(7) 신장효소활성의 측정
① Xanthine oxidase 활성의 측정
Stripe와 Della의 방법에 준하여 0.1M potassium phosphate buffer(pH 7.5) 3.0㎕를 가하여 37℃에서 반응시킨 후 20% trichloroacetic acid를 가하여 제단백시키고 상징액을 취한 후 생성된 uric acid를 파장 292nm에서 흡광도를 측정하고 표준검량선에 근거하여 1분당 1mg protein이 생성하는 uric acid의 양을 nmole로 나타내었다.
② Aldehyde oxidase 활성의 측정
Rajagopalan등의 방법에 준하여 0.1M potassium phosphate buffer(pH7.5)에 기질인 NMN(n-1-methyl nicotinamide chloride)와 효소액을 가해 반응시킨 후 생성물인 2-pyridone을 파장 300nm에서 흡광도의 변화를 읽고 검량선에 준해 활성도를 산정하였다. 효소의 활성도는 분당 mg protein이 생성하는 2-pyridone을 nmole로 표시하였다.
③ Glutathione S-transferase 활성의 측정
Habig 등의 방법에 준하여 0.1M potassium phosphate buffer(pH 6.5)에 40mM reduced glutathione 75㎕ 를 가한 후 효소액 10㎕를 넣고 25℃에서 5분간 preincubtion한 뒤 기질로서 2,4-dinitrochlorobenzene 25㎕를 가하여 2분간 반응시킨 후 20% trichloroacetic acid를 가하여 반응을 완료시키고 원심분리하여 얻은 상징액을 파장 340nm에서 흡광도를 측정한 후 2,4-dinitrochlorobenzene의 mole 흡광계수 9.6mM-1㎝- 1를 이용하여 활성도를 산정하였다.
④ 신장조직 중 glutathione함량의 측정
신장 조직 중 glutathione 함량 측정은 Ellman의 방법에 준하여 신장조직 homogenate 0.5㎖에 4% sulfosalicylic acid 0.5㎖ 를 가하고 2500rpm에서 10분간 원심분리 후 사징액 0.3㎖ 을 취하여 disulfide reagent 2.7㎖를 넣고 20분간 방치 후 412nm에서 흡광도를 측정하고 표준검량선에 준하여 산정하였다.
⑤ 신장 조직 중 lipid peroxide 함량의 측정
Ohkawa등의 방법을 변경하여 신장 조직 1g당 10배량의 0.1M sodium phosphate buffer(pH7.4)를 마쇄하고 이 10% 마쇄액에 동일한 buffer를 동량 가하여 3시간 preincubation 시킨 후 8.1% sodium dodecyl sulfate와 20% acetate buffer(pH3.5)및 발색의 목적으로 0.8% thiobarbituric acid 를 가한 후 95℃에서 1시간 동안 반응시켜 실온에서 냉각 후에 n-BuOH:Pyridine(15:1)을 첨가하여 15분간 원심분리하여 생성된 홍색의 n-BuOH:Pyridine층을 취하여 파장 532nm에서 그 흡광도를 측정하여 표준곡선에서 그 함량을 신장조직 1g 당 malondialdehyde nmole로 표시하였다.
(8) 혈청 중 superoxide dismutase(SOD)활성의 측정
혈중 superoxide dismutase(SOD)활성의 측정은 Oyanagui의 방법에 따라 정량하였다. 혈청을 potassium phosphate buffer로써 100배 희석하여 그 중의 100배 희석하여 그 중의 100㎕를 시험관에 넣고 여기에 증류수 500
, 시약 A(3mM hydroxylamine/3mM hypoxanthine) 200㎕를 넣고 잘 혼합한 다음, 37℃ water bath 에서 40분간 정치한다. 반응액에 시약 C(300mg of sulfanilic acid/5.0mg N-1-naphthyl-ethylenediamine in 500ml of 16.7% acetic acid) 2.0㎖를 넣어 잘 혼합하여 실온에서 20분간 정치한 다음 550nm에서 흡광도를 측정하여 표준검량선에 준하여 혈청 중의 superoxide dismutase활성을 측정하였다.
(9) Total protein측정
단백질의 함량은 Lowry등의 방법에 준하여 bovine serum albumin(Sigma, Fr. V)를 표준품으로 하여 측정하였다.
6) 통계학적 방법
통계적 검정은 SPSS통계 프로그램을 이용하여 수행하였으며, p<0.05 이하일 경우 통계적으로 유의한 것으로 검정하였다. 각 항목에 대한 유의한 차이를 나타내는지의 비교분석은 student's t-test one-way AVOVA(Turkey's multiple comparison test)를 이용하여 통계적 유의성을 검증하였다.
3. 결과
1) 체중변화
시험기간 동안 모든 시험군의 체중 변화는 정상적인 성장 곡선을 보여주었다. 군간의 통계적인 체중 차이는 나타나지 않았다.
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2) 장기무게
투여 후 15일째에 모든 동물을 CO2 가스 마취 하에서 개복한 후에 복대동맥을 절단하여 방혈 치사시킨 후, 육안적으로 모든 내부 장기의 이상유무를 관찰하였다. 모든 동물에서 시험물질 투여와 관련된 육안적인 소견은 관찰되지 않았으며, 각 장기무게는 표 5와 같다.
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3) 혈액 및 뇨 분석
Alfacalcidol과 Ethylene glycol에 의해 결석을 유도한 흰쥐에 참가시나무 잎 열수추출물을 투여하고 혈중 BUN, creatinine 및 uric acid에 미치는 영향을 관찰한 결과를 표 6에 나타내었다. 정상군에 비하여 대조군의 경우 전체적으로 수치가 상승한 것을 볼 수 있었고, 이에 반하여 positive control과 참가시나무 잎 열수추출물의 경우 14일간 투여했을 때, 정상군과 비슷한 수준으로 감소되었다. 앞의 결과를 바탕으로 뇨 검사에서는 어떠한 영향을 주는가를 관찰하였다. Volume이나 pH에서는 군간의 차이를 보였으나, Uric acid 및 creatinine 농도는 군간의 유의차가 관찰되지 않았다. 이는 분변으로 인한 영향 등으로 사료된다.
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4) 신장의 활성산소
생성계에
미치는 영향
표 7에서 신조직 중의 지질 과산화의 함량의 변동을 관찰하고 이러한 신조직 중의 효소활성 변동을 관찰할 목적으로 신장의 cytosolic enzyme system에 미치는 영향을 관찰하였다. 정상군에 비하여 alfacalcidol과 ethylene glycol을 투여하여 신장결석을 유도한 control군의 xanthine oxidase의 활성은 증가하였고, Aldehyde oxidase에서도 이와 비슷한 경향을 나타내었다. 이에 비해 positive control군과 참가시나무 잎 열수 추출물을 투여한 군의 경우 농도가 감소하는 경향을 보였으나, 크게 유의성 있는 결과치는 아니었다.
이에 반하여 glutathione-s transferase의 경우 참가시나무 잎 열수추출물군과 positive control군이 정상군과 비슷하거나 더 높은 활성을 보여, 유의성을 나타내었다.
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5) 혈중 활성산소
생성계에
미치는 영향
표 8 에서 신조직 중의 지질 과산화의 함량의 변동을 관찰하고 이러한 신조직 중의 효소활성 변동을 관찰할 목적으로 신장의 cytosolic enzyme system에 미치는 영향을 관찰하였다.
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4. 고찰 및 결론
본 발명에서는 Alfacalcidol과 Ethylene glycol로 결석이 유도되는 여부와 참가시나무 잎 추출물이 결석 치료제인 Furosemide와 유효성이 있는지의 여부에 대하여 실험해 보았다.
참가시나무 잎 추출물을 결석유도 SD-rat에 투여한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다.
1) 시험결과, 모든 시험 군에서 시험물질 투여와 관련된 사망률, 일반증상, 체중변화에서 크게 이상한 사항은 관찰되지 않았다.
2) 혈액 생화학적 분석 시 Uric acid, Creatinine, BUN(Blood urea nitrogen) 참가시나무 잎 열수추출물100Dose군이 정상군과 비슷한 수치를 나타내어 결석에 효과가 있을 것으로 사료된다.
3) 뇨에서 Uric acid, Creatinine 분석 시 참가시나무 잎 열수 추출물 100Dose군에서 유효성 있는 결과를 나타내었다.
4) 신장의 Cytosolic enzyme system인 Xanthion oxidase, Aldehyde oxidase 분석 시, 참가시나무 열수 추출물 100Dose군에서 감소하는 경향을 보였으나, 큰 유의성은 없었다. 그러나 Glutathione-s transferase 경우, 정상군과 비슷한 활성을 보여 유의성있는 결과를 나타내었다.
이상의 결과를 종합하여 볼 때, 참가시나무 잎 열수 추출물의 투여가 결석 유도된 rat에 혈액학적 분석 및 뇨 분석, 신장 효소 활성의 측정 결과에 상당한 영향을 주는 것으로 확인되었다.
지금까지 본 발명은 제시된 실시 예를 참조하여 상세하게 설명이 되었지만 이 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 제시된 실시 예를 참조하여 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위에서 다양한 변형 및 수정 발명을 만들 수 있을 것이다. 본 발명은 이와 같은 변형 및 수정 발명에 의하여 제한되지 않으며 다만 아래에 첨부된 청구범위에 의하여 제한된다.
Claims (1)
- 참가시나무중 잎만을 추출하여 음건한 후 분쇄하는 단계;
분쇄된 참가시나무 잎을 메탄올(CH3OH)로 수욕상에서 열수 추출 후 여과한 후, 회전증발기(rotary evaporator)로 감압 농축하여 메탄올 조추출물을 얻는 단계; 를 포함하는 결석 제거에 도움이 되는 참가시나무 잎 액기스 제조 방법에 있어서,
상기 메탄올(CH3OH) 조추출물을 용매분획법에 따라 n-hexane(CH3(CH2)4CH3) 분획, CHCl3(chloroform) 분획, EtOAc(Ethyl Acetate CH3COOC2H5) 분획, n-BuOH(n-Butyl Alcohol CH3(CH2)3OH) 분획, H2O로 분획하여 순차적으로 연속분리하는 단계;
상기 n-hexane 분획, CHCl3 분획, EtOAc 분획, n-BuOH 분획, H2O 분획 중에서, 에틸아세테이트(Ethyl Acetate CH3COOC2H5)와 CHCl3(chloroform) 분획만을 선택하여, 생리활성물질 분리단계;를 포함하여 형성된 것을 특징으로 하는 결석 제거에 도움이 되는 참가시나무 잎 액기스 제조 방법.
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|---|---|---|---|
| KR1020120121086A KR101454076B1 (ko) | 2012-10-30 | 2012-10-30 | 결석 제거에 도움이 되는 참가시나무 잎 액기스 제조 방법 |
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| KR20140054955A KR20140054955A (ko) | 2014-05-09 |
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Citations (2)
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| KR20020067081A (ko) * | 2001-02-15 | 2002-08-22 | 제주시 | 아왜나무에서 추출한 생리 활성 조성물 |
| KR100835710B1 (ko) * | 2006-04-27 | 2008-06-09 | 강원대학교산학협력단 | 케나프 추출물과 이로부터 분리된 신규 캠프페롤 화합물 및이의 식품으로의 용도 |
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 서명진 기자, 전남산림자원연구소, 참가시나무의 결석 배출 효과 입증, 중앙통신뉴스, http://ikbc.net/news/news_print.html?section=1&category=89&no=31506 * |
| 서명진 기자, 전남산림자원연구소, 참가시나무의 결석 배출 효과 입증, 중앙통신뉴스, http://ikbc.net/news/news_print.html?section=1&category=89&no=31506* |
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