KR101416140B1 - Topical Composition For Promoting Lipid Biosynthesis Comprising Ginsenosides Rg3 As Active Ingredient - Google Patents
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Abstract
본 발명은 진세노사이드 Rg3를 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 피부 외용제 조성물은 스테롤 조절인자 결합단백질(SREBP-1c), 페록시좀 증식 활성화 수용제(PPARs) 또는 지방산 합성효소(FAS)의 전사인자를 조절하여 트리글리세라이드, 콜레스테롤 또는 세라마이드의 생합성 촉진하여 피부 항상성 유지 및 피부 노화 방지 효과를 갖는다.The present invention relates to a composition for external application for skin containing ginsenoside Rg3 as an active ingredient. The composition for external application for skin of the present invention can be used for promoting biosynthesis of triglyceride, cholesterol or ceramide by controlling the transcription factors of sterol regulatory factor binding protein (SREBP-1c), peroxisome proliferation-activating receptors (PPARs) Thereby maintaining skin homeostasis and preventing skin aging.
Description
본 발명은 진세노사이드 Rg3를 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for external application for skin containing ginsenoside Rg3 as an active ingredient.
피부투과 장벽을 구성하는 지질(lipid)은 피지선 유래 지질(Sebaceous lipid)와 표피 지질(Epidermal lipid)로 구성되어 있는데 각각 피지세포(Sebocyte)와 각질세포(Keratinocyte)에서 생성된다. 피지세포(Sebocyte)에서 생성되는 피지(Sebum)는 모낭을 통해 분비되고, 각질세포(Keratonocyte)에서 생성되는 지질은 S.spinosum 상부와 S.granulosum의 lamellar body에 저장되고 S. corneum에 이동되면 세포 사이로 분비된다. 인체에는 약 백만 개정도의 피지선(Sebaceoul gland)이 존재하며 주로 얼굴, 머리, 앞가슴, 겨드랑이, 배꼽주의, 목등에 많이 있다. 피지선은 모발의 줄기로 피지(Sebum)를 분비하는 전분비선(holocrine gland)으로 하루에 약 2g 정도를 분비하는 것으로 알려져 있다. 피지의 성분으로는 트리글리세라이드(triglyceride), 유리지방산(free fatty acid), 왁스 에스테르(wax ester), 스쿠알렌(squalene), 콜레스테릴에스테르(cholesteryl ester), 콜레스테롤(cholesterol) 등으로 알려져 있다. 피지선은 피부 스테로이드합성(cutaneous steroidogenesis) 조절, 국소적 안드로겐합성(local androgen synthesis) 조절, 뉴로펩타이드(neuropeptides)의 상호작용, 항균활성이 있는 지질생성, 염증유발성질(pro-inflammatory properties) 및 항염증성질(anti-inflammatory properties)를 발현하는 기능을 담당한다. 각질세포간 지질은 콜레스테롤, 지방산, 세라마이드, 스핑고리피드로 이루어져 있으며 라멜라 구조로 존재한다. 또한 세라마이드는 스핑고신, 파이토스핑고신, 6-하이드록시스핑고신 등으로 이루어진 백본에 하이드록시기가 붙어 있는 구조로 각질세포간 지질의 50%를 차지한다고 알려져 있다.The lipids that make up the skin barrier are composed of sebaceous lipid and epidermal lipid, which are produced in Sebocyte and keratinocyte, respectively. Sebum produced in Sebocyte is secreted through hair follicle and lipid produced in keratinocyte is stored in the lamellar body of S. spinosum and S.granulosum, Respectively. There are about one million sebaceous glands in the human body, and they are mainly in the face, head, breast, armpit, navel, and neck. The sebaceous gland is a holocrine gland that secretes sebum by the stem of hair and is known to secrete about 2g per day. The ingredients of sebum are known as triglyceride, free fatty acid, wax ester, squalene, cholesteryl ester, cholesterol and the like. The sebaceous glands are responsible for the regulation of cutaneous steroidogenesis, the regulation of local androgen synthesis, the interaction of neuropeptides, lipid production with antimicrobial activity, pro-inflammatory properties, And is responsible for the expression of anti-inflammatory properties. The keratinocyte lipid is composed of cholesterol, fatty acid, ceramide, and sphingolipid, and exists in a lamellar structure. In addition, ceramide is known to contain 50% of the intercellular lipid in the structure with the hydroxy group attached to the backbone composed of sphingosine, phytosphingosine and 6-hydroxysingin.
이러한 조성물들의 분포 비율과 지질량은 피부 장벽 유지 항상성(homeostasis)에 기여하게 되며, 외부의 물리적, 화학적 손상에 대해 빠른 복원력을 제공하게 된다. 노화과정 중의 표피지질은, 그렇지 않은 표피 조직과 달리, 전반적으로 감소하며 이에 따라 피부 장벽의 기능이 저하된다.The distribution ratios and the mass of these compositions contribute to skin barrier homeostasis and provide a quick resilience to external physical and chemical damage. The epidermal lipid in the aging process, unlike the epidermal tissue, is generally reduced and the function of the skin barrier is deteriorated.
또한 노년층의 총 표피 지질은 청년층의 30%정도로 감소되어 있기는 하나, 각각의 지질 함량 비율은 유지된다. In addition, the total epidermal lipid content of elderly people is reduced to about 30% of the younger age, but the ratio of each lipid content is maintained.
피부 각질의 지질들이 지질 생합성경로와 세라마이드 생합성 경로를 통하여 형성되는 것을 확인해 주는 것이며, 실제로 피부 각질의 지질은 진피의 인지질과 유리 지방산에서 유래한 것임이 문헌에 보고되어 있다[Hamanaka et al., 2002, J. Invsti. Dermatol. 119:416-423]. 또한 유리 지방산의 비율이 변화함에 따라 노화성 피부로 진행될 수 있다는 것이 알려져 있다[Rogers et al., 1996, Arch. Dermatol. Res, 288:765-770].It has been reported in the literature that lipids of the skin keratin are formed through the lipid biosynthetic pathway and the ceramide biosynthesis pathway and actually lipids of the skin horn are derived from phospholipids and free fatty acids of the dermis [Hamanaka et al., 2002 , J. Invsti. Dermatol. 119: 416-423. It is also known that as the ratio of free fatty acids changes, it can progress to aging skin [Rogers et al., 1996, Arch. Dermatol. Res., 288: 765-770).
진세노사이드(Ginsenoside) Rg3는 인삼에 있는 사포닌으로 화학적으로 배당체(配糖體: glycoside)라 부르는 화합물의 일종이다. 사포닌(saponin)은 비누를 뜻하는 희랍어의 sapona에서 유래되었는데, 수용액에서 비누처럼 미세한 거품을 내는데서 붙여진 이름이다. 사포닌은 식물의 뿌리, 줄기, 잎, 껍질, 씨 등에 있는데 예전에는 비영양물질로 알려졌으나 최근 항암, 항산화, 콜레스테롤 저하효과가 밝혀지면서 생리활성물질로 각광받기 시작했다. 한방약에서는 강심제나 이뇨제로 사용되어 왔으며, 특히 인삼의 여러가지 유효성분 중 주된 약리작용을 하는 것이 사포닌이다. Ginsenoside Rg3 is a saponin in ginseng that is chemically called a glycoside. Saponin is derived from the saponin of the Greek word for soap, which is a name given to making fine bubbles like soap in aqueous solution. Saponin is known to be a non-nutrient in the roots, stems, leaves, husks, and seeds of plants. However, recently saponins have become known as physiologically active substances because of their anticancer, antioxidant and cholesterol lowering effects. Saponin is the main pharmacological agent among various active ingredients of ginseng.
인삼 사포닌은 다른 식물에서 발견되는 사포닌과는 다른 특이한 화학구조를 가지고 있으며 약리효능도 특이하여 인삼(Ginseng) 배당체(Glycoside)란 의미로 '진세노사이드(Ginsenoside)'라 불린다. 진세노사이드 Rg3의 화학구조는 도 1에 나타내었다.Ginseng saponin has a unique chemical structure that is different from saponin found in other plants. Its pharmacological efficacy is also unique and is called 'Ginsenoside' in the sense of Ginseng Glycoside. The chemical structure of ginsenoside Rg3 is shown in Fig.
이에, 본 발명자들은 이제까지 알려지지 않은 여러 천연물 중에서 화장품으로의 응용 가능성을 연구한 결과, 진세노사이드의 일종인 Rg3가 스테롤 조절인자 결합단백질(sterol regulatory element-binding proteins, 이하 ‘SREBP-1c’라 한다), 페록시좀 증식 활성화 수용제(peroxisome proliferator-activated receptors, 이하 ‘PPARs’라 한다) 및 지방산 합성효소(Fatty acid synthase, 이하 ‘FAS’라 한다)의 전사인자들을 촉진하여 세포간지질의 생합성을 촉진하여 노화 등에 기인한 피부표피층의 지질 항상성 붕괴를 치료 및 예방하여, 표피의 피부 장벽효과를 유지해서 피부 전체의 항상성 유지기능 및 노화방지기능을 지속시키는 것을 목적으로 한다.The inventors of the present invention have studied the applicability of various natural products to cosmetics. As a result, Rg3, a kind of ginsenoside, is known as sterol regulatory element-binding proteins (SREBP-1c) ), Peroxisome proliferator-activated receptors (hereinafter referred to as PPARs), and fatty acid synthase (hereinafter referred to as 'FAS') to promote the biosynthesis of intercellular proteins The present invention aims to maintain the skin barrier effect of the epidermis and to maintain the homeostasis-maintaining function and anti-aging function of the whole skin by treating and preventing the lipid homeostasis of the skin epidermal layer caused by aging and the like.
따라서, 상기와 같은 본 발명의 목적은 진세노사이드의 일종인 Rg3를 유효성분으로 함유하는 조성물에 의해 달성된다. 상기 조성물은 피부 지질 생합성 증가에 의한 피부 항상성 유지 효과 및 노화방지 효과를 갖는다Therefore, the object of the present invention as described above is achieved by a composition containing Rg3, which is a kind of ginsenoside, as an active ingredient. The composition has a skin homeostasis-maintaining effect and an anti-aging effect by increasing skin lipid biosynthesis
바람직하게는, 상기 조성물은 스테롤 조절인자 결합단백질(SREBP-1c), 페록시좀 증식 활성화 수용제(PPARs) 및 지방산 합성효소(FAS)의 전사인자를 촉진하여 피부 지질 생합성을 증가시키는 것을 특징으로 한다.Preferably, the composition is characterized by promoting transcription factors of sterol regulatory factor binding protein (SREBP-1c), peroxisome proliferation-activating receptors (PPARs) and fatty acid synthetase (FAS) to increase skin lipid biosynthesis do.
또한, 바람직하게는, 상기 조성물은 콜레스테롤, 세라마이드 또는 트리글리세라이드 발현양을 증가시켜서 피부 지질 생합성을 증가시키는 것을 특징으로 한다.Also preferably, the composition is characterized in that it increases the amount of cholesterol, ceramide or triglyceride expression to increase skin lipid biosynthesis.
또한, 바람직하게는, 상기 Rg3는 상기 조성물의 전체 중량에 대하여 0.000001 ~ 40.0 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다.Preferably, Rg3 is contained in an amount of 0.000001 to 40.0% by weight based on the total weight of the composition.
또한, 바람직하게는, 상기 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클렌징, 오일, 분말파운데이션, 유탁액파운데이션, 왁스파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.Also preferably, the composition is in the form of a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, cleansing oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation, pack, massage cream and spray Lt; RTI ID = 0.0 > formulations < / RTI >
본 발명에 따른 진세노사이드 Rg3는 SREBP-1c, PPARs, FAS의 발현증가, Nile red staining & flow cytometry를 통한 지질 증가, 콜레스테롤 발현증가, 트리글리세라이드 발현증가, 세라마이드 발현증가 효과를 갖는다.The ginsenoside Rg3 according to the present invention has an effect of increasing the expression of SREBP-1c, PPARs and FAS, increasing lipid through nile red staining & flow cytometry, increasing cholesterol expression, increasing triglyceride expression, and increasing ceramide expression.
도 1은 진세노사이드 Rg3의 구조식을 도시한 것이다.
도 2는 각질세포에 Rg3 및 리놀렌산을 도포한 경우 지질 생성량을 나타낸 것이다.Figure 1 shows the structural formula of ginsenoside Rg3.
Figure 2 shows lipid production when keratinocytes were coated with Rg3 and linolenic acid.
본 발명은 피부 표피지질의 생합성 촉진용 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 진세노사이드 Rg3를 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물로서 지질 생합성 증가에 의하여 피부 항상성을 유지하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물은, 스테롤 조절인자 결합단백질(SREBP-1c), 페록시좀 증식 활성화 수용제(PPARs) 또는 지방산 합성효소(FAS)의 전사인자를 조절하여 트리글리세라이드, 콜레스테롤 또는 세라마이드의 생합성 증가시켜서 노화 등의 원인에 기인한 세라마이드 등의 지질 감소에 따른 피부표피지질의 항상성의 붕괴를 치료 및 예방한다.The present invention relates to a composition for promoting biosynthesis of a skin epidermal lipid. The present invention relates to a composition for external application for skin containing ginsenoside Rg3 as an active ingredient, which maintains skin homeostasis by increasing lipid biosynthesis. The composition can be used to increase the biosynthesis of triglyceride, cholesterol or ceramide by controlling the transcription factors of sterol regulatory factor binding protein (SREBP-1c), peroxisome proliferation-activating receptors (PPARs) or fatty acid synthetase (FAS) To treat and prevent the disruption of the homeostasis of skin epidermal lipids due to lipid degradation such as ceramide.
본 발명에서 사용되는 진세노사이드 Rg3는 인삼에서 분리되나, 화학적으로 합성된 것도 동일한 효과를 나타낼 수 있다는 것은 당업자에게 명확하며, 상기 진세노사이드 Rg3를 당업계에서 통상적으로 실시되는 치환기의 부가 또는 치환 반응을 하여 얻어지는 유도체도 본 발명의 범위에 포함된다는 것은 당업계의 기술수준을 고려하여 당업자에 명확하다.It is obvious to those skilled in the art that the ginsenoside Rg3 used in the present invention can be isolated from ginseng but chemically synthesized can also exhibit the same effect. The ginsenoside Rg3 can be obtained by adding or substituting a substituent It is apparent to those skilled in the art in view of the state of the art that derivatives obtained by the reaction are also included in the scope of the present invention.
본 발명의 하기 특정 제조예를 참조하여 진세노사이드 Rg3의 제조방법을 설명하면 다음과 같다: 인삼을 정제수로 세척한 후 건조하고 작은 조각으로 파쇄한 뒤, 여기에 그 건조 중량의 1-10배의 저급알코올을 가한다. 일정온도에서 일정기간 추출하고 여과한 후, 회전 감압증발기로 건조한다. 프랩 엘시 (prep LC)를 이용하여 건조된 인삼 추출 파우더에서 진세노사이드 Rg3를 분리한다.Hereinafter, a method for producing ginsenoside Rg3 will be described with reference to the following specific production examples of the present invention. The ginseng is washed with purified water, dried and crushed into small pieces, Of lower alcohol is added. It is extracted at a constant temperature for a certain period, filtered, and then dried with a rotary evaporator. Separate ginsenoside Rg3 from dried ginseng extract powder using prep LC.
본 발명에 따르면, 상기 Rg3은 조성물의 전체 중량에 대해서 0.000001 ~ 40.0 중량% 함유되며, 더욱 바람직하게는, 상기 Rg3은 조성물의 전체 중량에 대해서 0.001 ~ 10 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다. 상기 추출물의 함량이 0.000001 중량% 미만인 경우에는 유효 효과가 나타나지 않으며, 40.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 개선 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다. According to the present invention, Rg3 is contained in an amount of 0.000001 to 40.0 wt% with respect to the total weight of the composition, and more preferably, Rg3 is contained in an amount of 0.001 to 10 wt% with respect to the total weight of the composition. When the content of the extract is less than 0.000001% by weight, no effective effect is exhibited. When the content of the extract is more than 40.0% by weight, the improvement effect on the increase of the content is insignificant and there is a problem in safety and stability of the form and is not economical .
이러한 Rg3를 포함하는 본 발명의 조성물은 SREBP-1c, PPARs, FAS의 발현증가, 지질 증가, 콜레스테롤 발현증가, 세라마이드 발현증가, 트리글리세라이드 발현증가 효과를 갖는 것을 특징으로 한다.The composition of the present invention including Rg3 is characterized by having an effect of increasing the expression of SREBP-1c, PPARs, FAS, increasing lipid, increasing cholesterol, increasing ceramide expression, and increasing triglyceride expression.
본 발명의 조성물에 포함되는 성분은 상기 유효 성분 이외에 피부 외용제 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.The components included in the composition of the present invention may contain, in addition to the above-mentioned effective components, the components conventionally used in the composition for external application for skin, such as conventional adjuvants such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, Carrier.
의약품에 적용할 경우에는 본 발명에 따른 진세노사이드 Rg3를 유효성분으로 하여 사용되는 무기 또는 유기의 담체를 가하여 고체, 반고체 또는 액상의 형태로 경구투여제 혹은 비경구 투여제롤 제제화 할 수 있다. In case of applying to medicines, an oral or parenteral administration can be carried out in the form of a solid, semi-solid or liquid form by adding an inorganic or organic carrier which is used as an active ingredient of ginsenoside Rg3 according to the present invention.
경구투여율을 위한 제제로서는 정제, 환제, 과랍제, 연, 경 캡슐제, 산제, 세립제, 분제, 유탁제, 시럽제, 필렛제 등을 들 수 있다. 비경구 투여를 위한 제재로는 주사제, 점적제, 연고, 로션, 스르페이, 현탁액, 유제, 좌제 등을 들 수가 있다. 본 발명의 유효성분을 제제화하기 위해서는 상법에 따라서 실시하면 용이하게 제제화할 수 있으며 계면활성제, 부형제, 착색료, 향신료, 보존제, 안정제, 완충제, 현탁제, 기타 상용화하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.Examples of the agent for oral administration include tablets, pills, tablets, soft capsules, powders, fine granules, powders, emulsions, syrups, fillets and the like. For parenteral administration, injections, drops, ointments, lotions, sprays, suspensions, emulsions, suppositories, and the like may be mentioned. In order to formulate the active ingredient of the present invention, it can be easily formulated according to a conventional method. Surfactants, excipients, coloring agents, spices, preservatives, stabilizers, buffers, suspending agents and other adjuvants for commercialization can be suitably used.
본 발명의 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.The compositions of the present invention may be prepared in any of the formulations conventionally manufactured in the art and may be in the form of solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, Oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation, pack, massage cream and spray, but are not limited thereto. More specifically, it can be manufactured in the form of a soft lotion, a nutritional lotion, a nutritional cream, a massage cream, an essence, an eye cream, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a spray or a powder.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, an animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be used as the carrier component .
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.When the formulation of the present invention is a solution or an emulsion, a solvent, a dissolving agent or an emulsifying agent is used as a carrier component, and examples thereof include water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, , 3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan fatty acid esters.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.In the case where the formulation of the present invention is a suspension, a carrier such as water, a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, Cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracant, etc. may be used.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component. In the case of a spray, in particular, / Propane or dimethyl ether.
본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a surfactant-containing cleansing, the carrier component may include aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyl taurate, sarcosinate, fatty acid amide ether Alkylamido betaine, aliphatic alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, lanolin derivative, or ethoxylated glycerol fatty acid ester.
본 발명의 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.When the composition of the present invention is a soap, a surfactant-containing cleansing formulation or a surfactant-free cleansing formulation, it may be applied to the skin and then wiped off, washed or rinsed with water. The surfactant-containing cleansing formulation may be a cleansing foam, a cleansing water, a cleansing towel and a cleansing pack. The surfactant-free cleansing formulation may be a cleansing cream, , Cleansing lotion, cleansing water and cleansing gel, but is not limited thereto.
본 발명의 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.The composition of the present invention may be used alone or in combination, or may be used in combination with other compositions than the present invention. In addition, the composition according to the present invention can be used according to a conventional method of use, and the number of times of use may be varied depending on the skin condition or taste of the user.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. It is to be understood by those skilled in the art that these embodiments are only for describing the present invention in more detail and that the scope of the present invention is not limited by these embodiments in accordance with the gist of the present invention .
제조예 1: 진세노사이드 Rg3 제조Production Example 1: Production of ginsenoside Rg3
본 발명에서 사용한 진세노사이드 Rg3의 제조방법은 다음과 같다.The method for producing ginsenoside Rg3 used in the present invention is as follows.
인삼을 정제수로 세척한 후 건조하고 작은 조각으로 파쇄한 뒤, 여기에 그 건조 중량의 1-10배의 70% 저급알코올을 가한다. 15-35℃에서 5일간 추출한 후 300메쉬 여과포로 여과하고, 다시 와트만 5번 여과지로 여과한 후, 회전 감압증발기로 건조하여, 건조 중량 30.4g을 얻었다. 건조된 인삼 추출 파우더에서 프랩 엘시 (Waters Co., Ltd. 미국, Delta prep 4000)를 이용하여 진세노사이드 Rg3을 분리하였다.
The ginseng is washed with purified water, dried and crushed into small pieces, and then 70% lower alcohol of 1-10 times its dry weight is added. The mixture was extracted at 15-35 ° C for 5 days, filtered through a 300-mesh filter cloth, filtered through filter paper No. 5, and dried with a rotary evaporator to obtain a dry weight of 30.4 g. Ginsenoside Rg3 was isolated from dried Ginseng Extract Powder using Purge ELISA (Waters Co., Ltd., Delta prep 4000, USA).
제조예 2: 진세노사이드 Rg3의 제조Production Example 2: Preparation of ginsenoside Rg3
인삼 또는 홍삼으로부터 알코올 추출 용매로 사용하여 추출한 추출물을 분리하는 통상적인 방법을 사용하여 제조한 인삼조사포닌 6g을 50%초산 20ml에 용해시키고 2시간 동안 70℃에서 교반하면서 가열한 후 반응 혼합물을 상온까지 식혔다. 반응액을 증류수 200ml로 희석하고 n-부탄올100ml로 3회 추출하였다. 추출액을 합하여 포화 소디움바이카보네이트 용액으로 2회 세척한 다음 n-부탄올층을 감압 농축시켰다. 반응 혼합물을 실리카겔 칼럼그로마토그라피(클로로포름: 에탄올 : 물 = 100 :30 :10, 하층 )으로 분리하여 진세노사이드 Rg3을 얻었다.
6 g of ginseng crude saponin prepared by a conventional method for isolating an extract extracted from ginseng or red ginseng as an alcohol extraction solvent was dissolved in 20 ml of 50% acetic acid and heated for 2 hours at 70 캜 with stirring, . The reaction solution was diluted with 200 ml of distilled water and extracted three times with 100 ml of n-butanol. The combined extracts were washed twice with saturated sodium bicarbonate solution and the n-butanol layer was concentrated under reduced pressure. The reaction mixture was separated into silica gel column grommetography (chloroform: ethanol: water = 100: 30: 10, lower layer) to obtain ginsenoside Rg3.
실험예 1: 세포 배양Experimental Example 1: Cell culture
실험예에 사용한 세포는 2종류로 다음과 같은 방법으로 배양하였다.The cells used in the experimental examples were cultured in the following manner.
① 각질세포:Keratinocyte① Keratinocyte: Keratinocyte
인간 정상 피부 세포인 각질세포 (한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에 각 웰당 1× 106 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma, 미합중국) 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 상기 제조예 1 의 Rg3을 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 Rg3가 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다. Human normal skin cells, keratinocytes (Korean Cell Line Bank, Korea), were inoculated into 48-well microplates (Nunc, Denmark) at a density of 1 × 10 6 cells per well. DMEM medium (Sigma, USA) For 24 hours. Then, the cells were further cultured in serum-free DMEM medium supplemented with Rg3 of Preparation Example 1 and in a serum-free DMEM medium containing no Rg3 for 48 hours.
② 피지세포:SZ95 ② sebum cells: SZ95
사람의 피지세포주인 SZ95 세포는 독일 베를린자유대학의 대학의학센터 벤자민 프랭크린(The Free University of Berlin University Medical center Benjamin Franklin)의 Dr. Zouboulis 로부터 분양받은 Human immortalized sebocyte(SZ95) 세포를 10% FBS가 첨가된 Dulbecco's modified eagle medium (DMEM)/F12(1:1)을 사용하여 CO2 배양기(37℃,5%CO2)에서 배양하였다. 그리고 48시간 주기로 배양액을 교체하였다.
SZ95 cells, the human sebaceous cell line, were obtained from Dr. Benjamin Franklin at the Free University of Berlin University Medical Center in Berlin, Germany. Human immortalized sebocyte (SZ95) cells from Zouboulis were cultured in a CO 2 incubator (37 ° C, 5% CO 2) using Dulbecco's modified eagle medium (DMEM) / F12 (1: 1) supplemented with 10% FBS. Then, the culture medium was changed at a cycle of 48 hours.
실험예 2: PPARs 발현량 측정 Experimental Example 2: Measurement of PPARs expression level
실험예 1에서 배양된 세포 중 피지세포에 대하여 다음과 같은 방법으로 PPARs( PPAR-α, PPAR-β, PPAR-γ) 단백질 발현량을 측정하였다. 발현량 측정은 웨스턴 블라팅(Western Blotting)을 통한 단백질 발현양 측정방법을 이용하였다.The expression levels of PPARs (PPAR-α, PPAR-β, and PPAR-γ) were measured in sebum cells cultured in Experimental Example 1 as follows. Expression level was measured by Western blotting.
먼저 배양한 피지세포에 Rg3(20 μg/ml 및 50 μg/ml)와 리놀렌산 200 μg/ml를 각각 처리하고 48시간 배양한다. 이후 배지 제거와 세척을 진행하고 여기에 라이시스 완충액 80㎕로 용해시킨 후 4℃, 12,000rpm에서 20분간 원심 분리 후 상층액을 모았다. 세포 용해액(lysate)에 함유된 단백질의 양은 브래드퍼드(Bradford) 법으로 측정하였다. 30㎕의 단백질을 10% 폴리아크릴아마이드를 함유한 SDS-PAGE로 분리하고 PVDF 막으로 일렉트로블라팅(electro blotting) 120V에서 1시간을 실시하였다. 이어 PVDF 막을 5% 탈지유(skim milk)에서 1시간 방치한 뒤 1차 항체(primary antibody)에서 4℃에서 하룻밤 동안 두었다. 다시 TBST로 세 번 세척한뒤 2차 항체(secondary antibody)를 상온에서 1시간 반응 시킨 뒤 TBST로 세 번 세척라고 ECL kit (Amersham-Pharmacia)와 반응시켜 BioRad GelDoc을 이용하여 정량화 하였다.First, Rg3 (20 μg / ml and 50 μg / ml) and linolenic acid (200 μg / ml) were cultured and cultured for 48 hours, respectively. Subsequently, the medium was removed and washed, and then dissolved in 80 μl of lysis buffer. The supernatant was collected by centrifugation at 4 ° C. and 12,000 rpm for 20 minutes. The amount of protein contained in the cell lysate was measured by the Bradford method. 30 [mu] l of protein was separated by SDS-PAGE containing 10% polyacrylamide and electroblotted with PVDF membrane for 1 hour at 120V. The PVDF membrane was then left in 5% skim milk for 1 hour and then placed in a primary antibody overnight at 4 ° C. After washing three times with TBST, the secondary antibody was reacted for 1 hour at room temperature, and then reacted with ECL kit (Amersham-Pharmacia) three times with TBST and quantitated using BioRad GelDoc.
각각의 시험값의 밴드 강도를 읽어서 대조군 대비 함량증가를 백분율로 변환하여 피지세포에서의 RT-PCR을 표 1에 나타내었다.RT-PCR in sebum cells is shown in Table 1, by reading the band intensities of each test value and converting the increase in content relative to the control to a percentage.
Rg3를 농도별(20 및 50 μg/ml)로 처리하고 48시간 배양한 후, PPAR-α, PPAR-β, PPAR-γ 단백질 발현을 조사한 결과, PPAR-β와 PPAR-γ의 발현이 확인되었으며 농도의존적인 단백질 발현 증가를 보여주었다. 양성 대조군인 리놀렌산도 PPAR-β와 PPAR-γ의 발현을 증가시켰다.
The expression of PPAR-α, PPAR-β and PPAR-γ protein was observed after treatment with Rg3 at concentrations of 20 and 50 μg / ml for 48 hours and the expression of PPAR-β and PPAR-γ was confirmed Dependent increase in protein expression. Linolenic acid, a positive control, also increased the expression of PPAR-β and PPAR-γ.
실험예 3: SREBP-1c, FAS의 발현량 측정 Experimental Example 3: Measurement of expression level of SREBP-1c and FAS
실험예 1에서 배양된 세포 중 피지세포에 대하여 다음과 같은 방법으로 SREBP-1c, FAS(fatty acid synthase), 발현량을 측정하였다. 발현량 측정은 웨스턴 블라팅(Western Blotting)을 통한 단백질 발현양 측정방법을 이용하였다.The expression levels of SREBP-1c and FAS (fatty acid synthase) were measured in sebum cells cultured in Experimental Example 1 as follows. Expression level was measured by Western blotting.
먼저 배양한 피지세포에 Rg3 (20 μg/ml 및 50 μg/ml)와 리놀렌산 200 μg/ml를 각각 처리하고 48시간 배양한다. 이후 배지 제거와 세척을 진행하고 여기에 라이시스 완충액 80㎕로 용해시킨 후 4℃, 12,000rpm에서 20분간 원심 분리 후 상층액을 모았다. 세포 용해액(lysate)에 함유된 단백질의 양은 브래드퍼드(Bradford) 법으로 측정하였다. 30 μl의 단백질을 10% 폴리아크릴아마이드를 함유한 SDS-PAGE로 분리하고 PVDF 막으로 일렉트로블라팅(electro blotting) 120V에서 1시간을 실시하였다. 이어 PVDF 막을 5% 탈지유(skim milk)에서 1시간 방치한 뒤 1차 항체(primary antibody)에서 4℃에서 하룻밤 동안 두었다. 다시 TBST로 세 번 세척한 뒤 2차 항체(secondary antibody)를 상온에서 1시간 반응시킨 뒤 TBST로 세 번 세척라고 ECL kit (Amersham-Pharmacia)와 반응시켜 BioRad GelDoc을 이용하여 정량화 하였다.First, Rg3 (20 μg / ml and 50 μg / ml) and linolenic acid (200 μg / ml) were cultured and cultured for 48 hours, respectively. Subsequently, the medium was removed and washed, and then dissolved in 80 μl of lysis buffer. The supernatant was collected by centrifugation at 4 ° C. and 12,000 rpm for 20 minutes. The amount of protein contained in the cell lysate was measured by the Bradford method. 30 μl of protein was separated by SDS-PAGE containing 10% polyacrylamide and electroblotted with PVDF membrane for 1 hour at 120V. The PVDF membrane was then left in 5% skim milk for 1 hour and then placed in a primary antibody overnight at 4 ° C. After washing three times with TBST, the secondary antibody was reacted for 1 hour at room temperature, and then reacted with ECL kit (Amersham-Pharmacia) three times with TBST and quantitated using BioRad GelDoc.
각각의 시험값의 밴드 강도를 읽어서 대조군 대비 함량증가를 백분율로 변환하여 피지세포에서의 RT-PCR을 표 2에 나타내었다.RT-PCR in sebaceous cells is shown in Table 2, by reading the band intensities of each test value and converting the increase in content relative to the control to a percentage.
Rg3를 농도별(20 μg/ml 및 50 μg/ml)로 처리하고 48시간 배양한 후 단백질 발현을 조사한 결과, SREBP-1과 FAS(fatty acid synthase) 단백질 발현이 증가됨을 관찰할 수 있었다. 양성 대조군으로 사용한 리놀렌산 (200 μg/ml) 또한 단백질 발현이 증가되었다.
The expression of SREBP-1 and FAS (fatty acid synthase) protein was increased after treatment with Rg3 at concentrations of 20 μg / ml and 50 μg / ml for 48 h. Linolenic acid (200 μg / ml) used as a positive control also increased protein expression.
실험예 4: 지질 측정Experimental Example 4: Measurement of lipid
Nile red staining & flow cytometry를 통하여 지질 생성량을 측정하였다. Lipid production was measured by nile red staining and flow cytometry.
실험예 1에서 배양된 각질 세포에 Rg3(20 μg/ml 및 50μg/ml)와 리놀렌산 200ug/ml를 각각 처리하고 48시간 배양하였다. 상기 각 월에서 각질세포를 수거한 후, 1 μM Nile red 용액으로 10분간 염색하여 552/636(Ex/Em)nm에서 형광강도(fluorescence intensity)를 측정하였다. 측정결과를 도 2에 도시하였다. 도 2를 보면, Nile red 염색 후 FACS로 형광강도를 측정하여 현미경으로 관찰한 결과, Rg3을 처리한 군에서 지질 생성이 증가하였고, 양성 대조군으로 사용한 리놀렌산 200 μg/ml 처리한 세포(87.30)보다 피크의 넓이가 큰 것(Rg3 50 μg/ml, 95.22)을 확인할 수 있었다.
The keratinocytes cultured in Experimental Example 1 were treated with Rg3 (20 μg / ml and 50 μg / ml) and
실험예 5: 콜레스테롤 측정Experimental Example 5: Measurement of cholesterol
실험예 1에서 배양한 SZ95 세포를 10 cm 배양용기에 1 X 105 개씩 분주하고 Rg3를 각각 25, 50, 100, 200 μg/ml의 농도로 처리한 다음, 5일간 배양하고 콜레스테롤를 정량하였다. 콜레스테롤 정량 방법은 상기 5일간 배양된 세포에 라이시스 완충액(EDTA 10uL, 100mM SPB 용액, PMSF 1uL, Triton X-100 10uL)를 처리하고 초음파로 분해하였다. 세포용해액에 클로로포름:메탄올 (2:1) 용액을 첨가하고 혼합하여 원심분리기(2000 rpm, 15분)하여 하층액을 취하여 질소가스(N2)로 농축시켰다.SZ95 cells cultured in Experimental Example 1 were divided into 1 × 10 5 cells in a 10-cm culture dish and treated with Rg3 at 25, 50, 100 and 200 μg / ml, respectively, for 5 days, and cholesterol was quantified. For cholesterol determination, the cells cultured for 5 days were treated with lysis buffer (10 μL of EDTA, 100 mM SPB solution, 1 μL of PMSF, and 10 μL of Triton X-100) and sonicated. A chloroform: methanol (2: 1) solution was added to the cell lysate, mixed and centrifuged at 2000 rpm for 15 minutes to collect the lower layer liquid and concentrate it with nitrogen gas (N 2 ).
상기 농축된 시료에 에탄올 300 μL를 넣어 녹인 후 total cholesterol kit(AM 202-K)를 이용하여 측정하였다. 1 mL의 효소 시액에 100uL의 시료를 첨가하고 혼합하여 37℃에서 5분 동안 배양 후 500 nm의 파장에서 ELISA reader로 흡광도를 측정하였다. 표준액의 콜레스테롤은 3 mL의 효소시액에 20 μL의 표준액을 넣어 3 mg/mL 값으로 하였다. The concentrated sample was dissolved in 300 μL of ethanol and measured using a total cholesterol kit (AM 202-K). 100 μL of the sample was added to 1 mL of the enzyme solution, and the mixture was incubated at 37 ° C. for 5 minutes, and the absorbance was measured with an ELISA reader at a wavelength of 500 nm. Cholesterol in the standard solution was adjusted to 3 mg / mL by adding 20 μL of the standard solution to 3 mL of the enzyme solution.
측정된 콜레스테롤의 양을 표 3에 나타내었다. 표 3를 보면, 대조군이 0.79 mg/ml 이었으나, Rg3를 처리한 군에서는 최대 약 2배 가까이 콜레스테롤이 증가한 것을 알 수 있었다.
The amount of cholesterol measured is shown in Table 3. Table 3 shows that the control group was 0.79 mg / ml, but in the group treated with Rg3, the cholesterol increased about twice as much as the control group.
실험예 6: 트리글리세라이드 측정Experimental Example 6: Measurement of triglyceride
실험예 1에서 배양한 SZ95 세포를 10 cm 배양용기에 1 X 105 개씩 분주하고 Rg3를 각각 25, 50, 100, 200 μg/ml의 농도로 처리한 다음, 5일간 배양하고 콜레스테롤를 정량하였다. 트리글리세라이드 정량 방법은 상기 5일간 배양된 세포에 라이시스 완충액(EDTA 10 μL, 100mM SPB 용액, PMSF 1uL, Triton X-100 10uL)를 처리하고 초음파로 분해하였다. 세포용해액에 클로로포름:메탄올 (2:1) 용액을 첨가하고 혼합하여 원심분리기(2000 rpm, 15분)하여 하층액을 취하여 질소가스(N2)로 농축시켰다.SZ95 cells cultured in Experimental Example 1 were divided into 1 × 10 5 cells in a 10-cm culture dish and treated with Rg3 at 25, 50, 100 and 200 μg / ml, respectively, for 5 days, and cholesterol was quantified. In the method for quantifying triglyceride, the cells cultured for 5 days were treated with lysis buffer (10 μL of EDTA, 100 mM SPB solution, 1 μL of PMSF, and 10 μL of Triton X-100) and disrupted by ultrasonic waves. A chloroform: methanol (2: 1) solution was added to the cell lysate, mixed and centrifuged at 2000 rpm for 15 minutes to collect the lower layer liquid and concentrate it with nitrogen gas (N 2 ).
상기 농축된 시료에 에탄올 300ul를 넣어 녹인 후 트리글리세라이드 키트(GPO-PAP)를 이용하여 트리글리세라이드를 측정하였다. 1 mL의 효소시액에 100 μL의 시료를 첨가하고 혼합하여 37℃에서 5분 동안 배양 후 546 nm의 파장에서 ElISA Reader로 흡광도를 측정하였다. 표준액의 트리글리세라이드는 3mL의 효소시액에 20 μl의 표준액을 넣어 3 mg/ml 값으로 하였다.To the concentrated sample was added 300 ul of ethanol and dissolved, and triglyceride was measured using a triglyceride kit (GPO-PAP). 100 μL of the sample was added to 1 mL of the enzyme solution, and the mixture was incubated at 37 ° C. for 5 minutes, and the absorbance was measured with an ELISA reader at a wavelength of 546 nm. The standard solution of triglyceride was prepared by adding 20 μl of the standard solution to 3 ml of the enzyme solution to give a value of 3 mg / ml.
제형예 1: Rg3을 함유하는 조성물의 제조Formulation Example 1: Preparation of a composition containing Rg3
Rg3을 포함하는 제형예 1,2,3 (제조예1)을 제조하였으며, 효능의 비교를 위해 Rg3 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3-부틸렌글리콜을 포함하는 조성물(비교제형예 1), 보습제로서 글리세린 및 솔비톨을 포함하는 조성물(비교제형예 2), 추출물이나 보습제를 모두 포함하지 않는 조성물(비교제형예 3)을 하기 표 4에 나타내었다.Formulation Examples 1, 2 and 3 (Preparation Example 1) containing Rg3 were prepared. For comparison of the efficacy, compositions (Comparative Formulation Example 1) containing glycerin and 1,3-butylene glycol as moisturizers instead of Rg3, The composition (Comparative Formulation Example 2) containing glycerin and sorbitol as a moisturizing agent and the composition (Comparative Formulation Example 3) containing neither an extract nor a moisturizer are shown in Table 4 below.
(단위: 중량%)ingredient
(Unit: wt%)
제형예 compare
Formulation Example
제형예2compare
Formulation Example 2
제형예3compare
Formulation Example 3
(제조예 1)Rg3
(Production Example 1)
(제조예 1)Rg3
(Production Example 1)
(제조예 1)Rg3
(Production Example 1)
실험예 7: Rg3의 보습 효과Experimental Example 7: Moisturizing effect of Rg3
세포간 지질이 생성되어 증가되면, 피부의 항상성, 면역력 및 보습력도 증가한다. Rg3의 보습효과를 확인하기 위하여, 상기 제형예 1, 2, 3의 조성물에 대한 임상 보습 효과를 다음과 같이 측정하였다. 설문 조사를 통하여 피부가 건조하다고 느끼는 건강한 성인 남녀 125 명을 무작위로 25 명씩 5개 그룹 (A, B, C, D 및 E)으로 나눈 후, A, B, C 그룹에는 제형예 1, 2, 3의 조성물을, D 그룹에는 각각 Rg3 추출물 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3-부틸렌글리콜을 포함하는 조성물(비교제형예 1), 보습제로서 글리세린 및 솔비톨을 포함하는 조성물(비교제형예 2)의 조성물을 각각 1일 2회씩 8주간 피부상박에 도포하게 하였다. 보습 효과는 시험 시작 후부터 매 2주간, 그리고 종료 후의 개선 효과를 Corneometer CM 820 (Corage +Khazaka, Germany)를 이용하여 평가하였다. 실험 결과는 하기 표 6에 나타내었다.As intercellular lipids are produced and increased, the homeostasis, immunity and moisturizing power of the skin also increases. In order to confirm the moisturizing effect of Rg3, the clinical moisturizing effects of the compositions of Formulation Examples 1, 2 and 3 were measured as follows. A, B, and C groups were divided into five groups (A, B, C, D, and E) by a randomly selected group of 25 healthy adult men and women who felt skin dry through the questionnaire. (Comparative formulation example 1), glycerin and sorbitol as a moisturizing agent (comparative formulation example 2), a composition containing glycerin and 1,3-butylene glycol as a moisturizing agent instead of the Rg3 extract (comparative formulation example 1) Were applied to the supernumerary skin for 8 weeks twice a day, respectively. The moisturizing effect was evaluated by the Corneometer CM 820 (Corage + Khazaka, Germany) after every two weeks and after the test. The experimental results are shown in Table 6 below.
상기 표 6에 나타낸 바와 같이, 일반 다른 보습제를 함유한 비교제형예 1, 2 및 3과 비교하여도 본 발명의 Rg3 함유한 제형예 1, 2 및 3의 보습효과가 우수함을 확인할 수 있었다. As shown in Table 6 above, it was confirmed that the moisturizing effect of Formulation Examples 1, 2 and 3 containing Rg3 of the present invention was superior to Comparative Formulation Examples 1, 2 and 3 containing other moisturizing agents.
실험예 8: 세라마이드 측정Experimental Example 8: Measurement of ceramide
실험예 7에서 실시한 피험자들에게 피부 각질 시료를 테잎 방법(tape method)를 이용하여 시료를 채취하여 다음과 같은 조건으로 세라마이드 함량을 측정하였다. 테잎 방법으로 적출된 시료의 단위 단백질당 세라마이드의 함량을 구하였으며 단백질의 함량은 BSA 단백질 분석 키드로 구하였다. The samples of the skin keratin samples were collected using the tape method and the ceramide contents were measured under the following conditions. The content of ceramides per unit protein of the sample extracted by the tape method was determined, and the content of the protein was determined by a BSA protein assay kit.
세라마이드 분석을 위해 UPLC-MS는 Waters사 Aquity UPLC 시스템과 연결된 Quattro Premier XE MS 모델을 사용하였다. For the ceramide analysis, UPLC-MS used Quattro Premier XE MS model connected with Waters Aquity UPLC system.
<분석조건><Analysis condition>
컬럼 Acquity BEH C*(2.1 mm X 50 mm, 1.7um)Column: Acquity BEH C * (2.1 mm X 50 mm, 1.7 um)
이동상 5mM 암모늄 포메이트/메탄올(4:6, 0.1% 포름산)Mobile phase 5 mM ammonium formate / methanol (4: 6, 0.1% formic acid)
유속: 0.3 ml/minFlow rate: 0.3 ml / min
컬럼 온도: 40℃Column temperature: 40 ° C
<MS 분석조건><MS analysis condition>
이온화조건-ESI 양이온 모드Ionization conditions-ESI cation mode
공급원 온도-130 ℃ Source temperature -130 ℃
탈용매화온도-350℃Desolvation temperature -350 ℃
콘 가스 유소 800 L/hCongas station 800 L / h
모세관 전압-3.2 KvCapillary voltage -3.2 Kv
이온 모니터 MRMIon Monitor MRM
시험결과 단위 단백질당 세라마이드 3종에 대한 제형예 3과 비교제형예 3를 비교하였을때 함량이 증가한 것을 확인하였다.
As a result of the test, it was confirmed that the content of the three ceramides per unit protein was increased when Formulation Example 3 and Comparative Formulation 3 were compared.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
While the present invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments thereof, it is to be understood that the same is by way of illustration and example only and is not to be construed as limiting the scope of the present invention. It is therefore intended that the scope of the invention be defined by the claims appended hereto and their equivalents.
Claims (6)
상기 지질은 콜레스테롤, 세라마이드 및 트리글리세라이드로 구성된 군에서 선택된 1종 이상이고, 상기 생합성은 피부의 각질세포 또는 피지세포에서 이루어지는 것인, 피부 지질 생합성 촉진용 화장료 조성물.A cosmetic composition for promoting skin lipid biosynthesis, which comprises ginsenoside Rg3 as an active ingredient,
Wherein the lipid is at least one selected from the group consisting of cholesterol, ceramide, and triglyceride, and the biosynthesis is carried out in keratinocytes or sebaceous cells of the skin.
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