KR101406064B1

KR101406064B1 - 신규한 미세조류 클라미도모나스 레인하르티 ｋｎｕａ０２１ 균주 및 이로부터의 지방 알코올 및 지방산 생산 방법

Info

Publication number: KR101406064B1
Application number: KR1020120017019A
Authority: KR
Inventors: 윤호성; 홍지원
Original assignee: 칠곡군; 경북대학교 산학협력단
Priority date: 2012-02-20
Filing date: 2012-02-20
Publication date: 2014-06-11
Also published as: KR20130095517A

Abstract

본 발명은 신규한 미세조류 클라미도모나스 레인하르티 KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)및 이로부터 헥사데세놀 및 Ｃ₁₆내지 Ｃ₁₈의 지방산의 생산 방법에 관한 것이다. 본 발명의 클라미도모나스 레인하르티 KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)는 고부가가치의 지방 알코올인 헥사데세놀(C₂₀H₄₀O) 및 C₁₆ 내지 C₁₈의 지방산을 생산할 수 있다. 또한 상기 KNUA021 균주를 이용하여 바이오디젤을 생산할 수 있는 효과를 가진다.

Description

신규한 미세조류 클라미도모나스 레인하르티 ＫＮＵＡ０２１ 균주 및 이로부터의 지방 알코올 및 지방산 생산 방법{Novel Microalgae Chlamydomonas reinhardtii KNUA021 and method for producing fatty alcohol and fatty acid from the same}

본 발명은 신규한 미세조류 클라미도모나스 레인하르티 KNUA021 균주 및 이로부터의 헥사데세놀 및 Ｃ₁₆내지 Ｃ₁₈의 지방산을 생산하는 방법에 관한 것이다.

인류는 무분별한 화석연료 사용으로 지구온난화와 에너지원 고갈이라는 이중고에 직면하고 있어 재생가능한 지속적 에너지 자원에 대한 전 세계적인 요구는 매년 지수적으로 증가되고 있다. 국내에서도 최근 신·재생에너지 개발에 적극적으로 나서고 있지만 아직까지는 시작 단계이다. 바이오에너지는 화석에너지와는 달리 이산화탄소를 발생시키지 않는 친환경적 에너지로서, 이산화탄소와 태양에너지를 포획하는 광합성 과정을 통하여 에너지가 축적된 유기 탄소 화합물이 생성되고 이렇게 해서 저장된 바이오매스로부터 에너지를 추출하는 것이다.

바이오에너지는 재생가능하며 유해성분이 거의 없는 비독성 에너지이고, 미생물에 의해 완전히 분해되며 이산화탄소를 고정해서 생산되므로 온실효과를 감소시킨다. 현재 육상자원을 이용한 바이오에너지 연구가 진행되고 있으나, 식량자원 및 식량 재배면적과 경쟁 등 육상자원 이용의 한계점이 드러나면서 미세조류를 이용하고자 하는 정책과 연구들이 전 세계적으로 시작되고 있다.

바이오에너지는 대표적으로 바이오에탄올/부탄올과 바이오디젤이 있는데, 거대조류(macroalgae)를 중심으로 바이오에탄올/부탄올의 생산 연구가 진행되고 있으며, 미세조류(microalgae)를 중심으로 바이오디젤 연구가 진행되고 있다.

바이오디젤은 바이오매스에 포함된 지방산(fatty acid)의 트랜스에스테르화 (transesterification) 과정에 의해 메틸 에스터 또는 에틸 에스터 형태로 생산되며 부산물로 글리세롤이 생성된다. 바이오디젤(biodiesel)은 페트로디젤(petrodiesel)과는 달리 연소될 때 배출되는 독성물질이 현저하게 낮은 친환경적 에너지이다.

미세조류의 태양에너지 이용 효율은 5%로, 육상식물의 0.2%에 비해 약 25배 정도 높으며, 이산화탄소 고정화 속도는 소나무의 15배로 매우 효율적이다. 현재 미세조류는 사료나 생물학적 비료로 이용될 뿐 아니라, 다양한 건강식품으로 이용되고 있다. 미세조류는 현미경적 크기로 육상식물과 비슷한 광합성 메커니즘을 가지지만, 물과 이산화탄소와 다른 여러 영양분의 접근이 효율적인 수중환경에서 서식하므로 태양에너지를 바이오매스로 전환함에 있어서 더욱 효과적이다.

최근 해외에서도 미세조류를 이용한 바이오디젤 생산 연구가 활발하게 진행되고 있다. 2007년 12월에는 세계적 정유회사인 Shell사와 HR Biopetroleum이 공동으로 바이오디젤 생산을 목적으로 미세조류 배양 시설을 하와이에 설치하였으며, 2008년 1월에는 미국의 Solazyme사가 Soladiesel이라고 하는 시제품을 Mercedes-Benz의 디젤자동차에 제공하여 성능을 시험하기로 하였다고 발표하였고, Chevron사는 Solazyme사와 협약을 맺고 공동 기술 개발을 하기로 하였다. 최근 프랑스에서는 3년간 280만 유로의 예산을 Shamash 프로그램에 배정하여 해조류 활용에 대한 활발한 연구를 추진 중이며, Shamash 프로그램은 국립연구청이 실현 가능한 생산모델의 개발을 위해서 프랑스 대학의 7개 연구팀을 구성하여 미세조류에서 나온 지방산의 생산과 함께 이를 바이오에너지로 변형하는 연구를 수행 중에 있다.

국내에서도 중소업체를 중심으로 바이오디젤 생산 공정 기술 개발, 바이오디젤 에너지의 발굴 등의 연구를 하고 있으며, 현재 해조류를 이용한 바이오디젤 생산에 대한 연구를 진행 중에 있다.

남조류(cyanobacteria)를 포함하는 미세조류는 각종 지질, 탄화수소, 지방 알코올 및 기타 복합 오일들을 생산하는 것으로 보고되어 왔다 (Metzger and Largeau 2005; Guschina and Harwood 2006; Schirmer 등 2010; Tan 등 2011). 모든 미세조류가 바이오디젤 생산에 적합하지는 않다 하더라도, 일부 미세조류 균주들이 바이오디젤 연료로서의 이용 가능성을 보여주고 있다(Chisti 2007). 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii)는, 가장 널리 보급되어 있는 미세조류 모델 시스템들 중 하나로, 이는 바이오연료 공급원으로서 바람직한 특징들을 갖는다. 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii)가 질소 결핍에 반응하여 바이오디젤 생산에 사용될 수 있는 지질들을 과축적한다는 것이 증명되었으며(Riekhof 등 2005; Wang 등 2009; Siaut 등 2011), 황 결핍이 클라미도모나스 레인하르티(Sato 등 2000)에서 총 지질 함량을 증진시킨다는 것도 알려져 있는 바이다(Sato 등 2000). 또한, 지질 생산 경로들의 대사 엔지니어링도 클라미도모나스 레인하르티의 모델 시스템 균주들을 이용하여 널리 연구되어 왔다(Li, Y. 등 2010; Work 등 2010; Siaut 등 2011). 그러나, 클라미도모나스 레인하르티 천연 균주들의 바이오연료 후보로서의 잠재성에 초점을 맞춘 연구들은 모델 시스템 클라미도모나스 레인하르티 연구들에 비해 상대적으로 적은 상황이다.

이에, 본 발명자들은 클라미도모나스 레인하르티 KNUA021 균주를 칠곡군 농업기술센터 내 지하수에서 채취하여 무균적으로 분리하였으며, 이 KNUA021 균주는 헥사데세놀(C₂₀H₄₀O) 뿐 아니라 최적 성장 조건들 하에서 미세조류 바이오디젤 구성성분들을 독립영양적으로 생산할 수 있음을 보여주어 바이오디젤 원료로서의 가능성을 보여 주었다.

본 발명의 목적은 헥사데세놀 및 Ｃ₁₆내지 Ｃ₁₈의 지방산을 생산하는 신규한 미세조류 클라미도모나스 레인하르티 KNUA021 균주를 제공함에 목적이 있다. 상기 KNUA021 균주는 지방 알코올(헥사데세놀(C₂₀H₄₀O)) 및 기타 일반적인 미세조류 바이오디젤 구성성분들(팔미트산(C₁₆ _:0), 헥사데카테트라에논산(C₁₆ _:4), 리놀레산 (C₁₈ _:2) 및 리놀렌산 (C₁₈ _:3))을 주요 지방산으로서 생산한다.

또한 본 발명은 상기 신규한 클라미도모나스 레인하르티 KNUA021 균주로부터 헥사데세놀 및 Ｃ₁₆내지 Ｃ₁₈의 지방산의 생산방법을 제공함에 목적이 있다.

나아가, 본 발명은 상기 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii) KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)에서 생산된 C₁₆ 내지 C₁₈의 지방산을 트랜스 에스테르화시켜 지방산 에스테르를 생성하는 것을 특징으로 하는 바이오디젤의 제조 방법을 제공함을 목적으로 한다.

본 발명은 헥사데세놀 및 Ｃ₁₆내지 Ｃ₁₈의 지방산을 생산하는 미세조류인 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii) KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii) KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)를 배양하고, 그 배양액으로부터 헥사데세놀 및 Ｃ₁₆내지Ｃ₁₈의 지방산을 분리하는 것을 특징으로 하는 헥사데세놀 및 Ｃ₁₆내지 Ｃ₁₈의 지방산의 생산방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii) KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)에서 생산된 C₁₆ 내지 C₁₈의 지방산을 트랜스 에스테르화시켜 지방산 에스테르 및 글리세롤을 생성하는 것을 특징으로 하는, 바이오디젤의 제조 방법을 제공한다.

본 발명은 신규 미세조류 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii) KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)를 이용하여 고부가가치의 지방 알코올인 헥사데세놀(C₂₀H₄₀O) 및 C₁₆ 내지 C₁₈의 지방산을 생산할 수 있다. 또한 상기 KNUA021 균주를 이용하여 바이오디젤을 생산할 수 있는 효과를 가진다.

도 1은 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii) KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)의 현미경 관찰 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii) KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)의 온도 조건에 따른 성장의 차이를 나타낸 도이다.
도 3은 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii) KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)의 pH 조건에 따른 성장의 차이를 나타낸 도이다.
도 4는 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii) KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)의 염도 조건에 따른 성장의 차이를 나타낸 도이다.
도 5는 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii) KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)의 GC/MS 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii) KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)에 의해 생산된 헥사데세놀의 electron impact (EI) mass spectrum을 나타낸 도이다.

본 발명은 헥사데세놀 및 Ｃ₁₆내지Ｃ₁₈의 지방산을 생산하는 미세조류인 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii) KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)를 제공한다.

상기 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii) KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)는 2011년 8월 칠곡군 농업기술센터 지하수(36°02'N, 128°22'E)에서 채집한 후, 한천 상에 획선분획(streaking)하여 형성된 단일 콜로니를 선발하여 18S rRNA 및 28s rRNA 유전자 서열 분석을 통하여 동정하였다. 상기 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii) KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)는 한국생명공학연구원(KCTC)에 2011년 11월 9일자로 기탁하였다(기탁번호: KCTC 12066BP).

상기 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii) KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)는 고부가가치의 지방 알코올, 바람직하게는 헥사데세놀(C₂₀H₄₀O)을 생산한다. 또한, 상기 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii) KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)는 주요 지방산으로서 탄소수가 16이며 이중결합수가 0 또는 4인 지방산 (16:0, 16:4 지방산) 및 탄소수가 18이며 이중 결합수가 2 또는 3인 지방산 (18:2, 18:3 지방산)을 생산하는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명은

1) 클라미도모나스 레인하르티 KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)를 배양하는 단계;

2) 상기 1) 단계에서 얻은 배양액으로부터 헥사데세놀 및 Ｃ₁₆과Ｃ₁₈의 지방산을 추출하는 단계;를 포함하는 헥사데세놀 및 Ｃ₁₆과Ｃ₁₈의 지방산의 생산 방법을 제공한다.

상기 균주의 성장 조건으로, 배양 온도는 15℃에서 30℃ 및 배양 pH는 4.0에서 12 하에서 배양된다. 균주 배양 배지는 당업계에서 일반적으로 통용되는 배지를 이용할 수 있다.

균주 배양액으로부터 헥사데세놀 및 Ｃ₁₆과 Ｃ₁₈의 지방산을 추출하는 방법은 당업계에 공지된 임의의 방법을 이용할 수 있다. 상기 추출용매는 펜탄, 핵산, 사이클로헥산, 톨루엔, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 아세톤, 크로로포름, 메탄올 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

또한, 본 발명은 클라미도모나스 레인하르티 KNUA021(KCTC 12066BP)로부터 생산된 트라이글리세리드를 트랜스에스테르화시켜 지방산 에스테르와 글리세롤을 분리하여 바이오디젤을 제조할 수 있다. 상기 지방산 에스테르는 바람직하게는, 지방산 메틸 에스테르 또는 지방산 에틸 에스테르일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 상기 바이오디젤은 바이오매스에 포함된 지방산의 트랜스에스테르화 과정에 의해 메틸 에스테르 또는 에틸 에스테르 형태로 생산될 수 있다. 상기 트랜스에스테르화 과정은 바이오매스에 포함된 지방의 크고 가지를 낸 분자 구조를 정규 디젤 엔진이 요구하는 작고 직선 사슬의 분자로 변형시키는 방법을 말한다. 상기 트랜스에스테르화 과정의 유화제로서 Triton X-100 또는 Tween 60 등을 첨가할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 상기 유화제는 바이오오일의 계면 안정을 도모하고 잘 혼합되도록 하여 반응 수율을 높여서 바이오디젤의 회수 비용을 절약할 수 있게 한다. 또한, 상기 트랜스에스테르화 과정의 반응 촉매제로서 수산화나트륨 또는 수산화칼륨을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

<실시예>

1. 시료 채집 및 클라미도모나스 분리

클라미도모나스 시료를 2011년 8월, 칠곡군 농업기술센터에서 내 지하수(36°02'N, 128°22'E)에서 채집하였다. 그 후, 채집한 시료를 실험실로 가져와서 시료 중 1ml를 100ug/ml의 농도의 메로페넴(meropenem, Yuhan Pharmaceuticals, Ochang-eup, Chungcheongbuk-do, South Korea)을 함유하는 100 ml BG-11(+) 배지(질소 함유) (Rippka 등 1979)에 접종하였다. 플라스크들을 25°C에서 160rpm으로 진탕배양하면서, 확연한 바이오매스가 관찰될 때까지 배양하였다.

잘 배양된 배양액(1.5 ml)을 3,000g에서 15분(Centrifuge 5424, Eppendorf, Hamburg, Germany) 동안 원심분리하였다. 원심분리된 펠렛들을 BG-11 한천 상에 획선분획하고, 25℃에서 명암 주기(16:8시간)로 배양하였다. 그 후 단일 콜로니를, 메로페넴(20 ug/ ml)을 포함하는 새로운 BG-11 플레이트 상에 무균적으로 접종하여 무균 배양물을 수득하였다. 상기 무균 상태의 배양물을 KNUA021으로 명명하였다.

2. 형태학 및 분자 확인

상기 KNUA021의 형태적 분석을 위하여 20일 동안 BG-11 배지에서 배양하였다. 살아있는 세포들을 수확하여 멸균된 증류수에 현탁시키고, 차등간섭대비(DIC) 광학렌즈가 설치된 Zeiss Axioskop 2 광 현미경 (Carl Zeiss, Standort Gottingen, Vertrieb, Germany) 상에서 400배 배율로 관찰하였다.

결과는 도 1에 나타내었다.

도 1에 나타낸 바와 같이, 균주 KNUA021은 클라미도모나스 속의 일반적인 특징들을 가졌다. 상기 미생물은, 약 10um 정도의 크기를 가지고 있으며 세포의 전면부에 한 쌍의 편모(鞭毛, flagella)를 갖고, 그릇모양(bowl-shaped)의 엽록체를 포함하고 있다. 전체적으로, 균주 KNUA021의 형태학적 특징들은 클라미도모나스 속에 속한다는 것을 제시하였다.

분자생물학적 접근을 통해 균주의 분류학적 위치를 확인하기 위하여, 18S rRNA와 28S rRNA의 유전자 서열분석을 실시하였다. 분리균주의 DNA는 DNeasy Plant Mini kit (Qiagen, Hilden, Germany)를 사용하여 추출하였고, 18S rRNA 서열 분석에 사용된 PCR 조건과 프라이머 세트[NS1 (5'-GTA GTC ATA TGC TTG TCT C-3')과 NS8 (5'-TCC GCA GGT TCA CCT ACG GA-3')]는 White 등 (1990)의 문헌을 참조하였다. 상기 균주의 28S rRNA의 D1-D2 영역은 NL1 (5'-GCA TAT CAA TAA GCG GAG GAA AAG-3')과 NL4 (5'-GGT CCG TGT TTC AAG ACG G-3') 프라이머 세트(O'Donnell 등 1993)를 이용하여 증폭시켰다. 본 연구에 사용된 프라이머들의 합성 및 DNA 서열분석은 Macrogen사(社) (Macrogen, Seoul, Korea)에서 실시하였다. 본 연구에서 얻어진 DNA 염기서열들을 NCBI 데이터베이스에 제출하고 이들의 기탁 번호들을 표 1에 나타내었다.

표 1에 나타낸 바와 같이, 분자생물학적 접근에 근거하여 균주 KNUA021은 Chlamydomonas reinhardtii임을 확인하였으며, 18S rRNA 및 28s rRNA의 D1-D2 영역의 서열 분석으로부터 추론된 결과들은 일치하였다.

KNUA021의 18S rRNA 및 28s rRNA 블라스트(BLAST) 서열 비교 결과

마커 유전자	접근 번호	길이 (bp)	Closest match (GenBank 접근 번호)	중첩 (%)	시퀀스 유사성(%)	분류학적 관련성
18S rRNA	JN863299	1,762	Chlamydomonas reinhardtii (M32703)	100	99	C. reinhardtii
28S rRNA	JN863300	604	Chlamydomonas reinhardtii (EU410621)	100	99	C. reinhardtii

3. 균주 KNUA021의 생리학적 특성

균주 KNUA021의 생리학적 특성을 확인하기 위하여, 온도, pH, 염도 및 염도조건을 달리하면서 실험을 진행하였다. 20일 된 균주 KNUA021의 종균배양액(seed culture, 1 ml)을, 3회 반복으로, BG-11 배지(100ml)에 접종시키고, 20일 동안 배양하였다. 배양물의 최적성장 온도를 알기 위하여, 균주 KNUA021의 생존 및 성장을 5, 10, 15, 20, 25 및 30℃에서 관찰하였다. 염도 및 산성 내성 시험은 최적생장 온도인 25℃에서 수행하였다. 염도는 0.1, 0.2, 0.3 및 0.4 M 염화나트륨(NaCl)의 범위에서 산도는 pH 3.0부터 pH 13.0까지의 범위에서 각각 수행하였다. 배양물의 광학 밀도를 Optimizer 2120UV 분광기(Mecasys Co. Ltd., Daejeon, 대한민국)에서 680nm에서 측정하여 균주 KNUA021의 밀도를 측정하였다.

결과는 도 2 내지 도 4, 및 표 2에 나타내었다.

균주 KNUA 021의 생리학적 특징

생리학적 요소	성장
온도 pH NaCl 내성	15 ℃~30℃ pH 4 ~pH 12 NaCl에 의해 성장이 저해됨.

도 2 내지 도 4, 및 표 3 에 나타낸 바와 같이, 균주 KNUA021의 최적 성장 온도는 25℃였으나, 10℃의 낮은 온도에서도 생장 및 생존이 가능하였다. 성장 pH범위는 pH 4.0 부터12.0까지였으며, pH 2.0 또는 pH 13.0에서는 성장이 관찰되지 않았다. 균주 KNUA021은 NaCl 존재 하에서는 자랄 수 없었다.

4. GC/MS 분석 결과 확인

GC/MS 분석을 위하여, KNUA021 균주를 3 회 반복으로 BG-11(+) 배지(pH 9.4)에 접종하고 25℃에서 20일 동안 배양하였다. 세포들을 3,220 g (Centrifuge 5810R, Eppendorf, Hamburg, Germany)에서 원심분리하여 수확하고, 일부 수정된 블라이-다이어(Bligh-Dyer)법(Lee 등 2010)을 이용하여 미세조류 지질을 추출하였다. 구체적으로, 클로로포름:메탄올(2:1) 용매 혼합물을 이용하여 동결건조된 미세조류 바이오매스로부터 지질성분을 추출하였다. 지질과 메탄올간의 에스테르교환반응에 의하여 바이오디젤을 수득하였으며, 수산화칼륨 (KOH)이 기본 촉매로서 사용되었다. 배양물의 지방산 조성을 한국 기초과학연구센터(Korea Basic Science Institute (KBSI)) 대구센터에서, GC/MS (Agilent 6890N GC가 장착된 Jeol JMS700 질량 분광기)로 측정하였다.

결과는 도 5 및 표 3에 나타내었다.

KNUA021 균주의 지방산 및 지방 알코올 조성 성분

Peak No.	Component	Relative content (%)
1	Hexadecatrienoic acid (C₁₆ _:3ω)	5.2 ±0.3
2	Hexadecatetraenoic acid (C₁₆ _:4)	10.6 ±1.1
3	Hexadecadienoic acid (C₁₆ _:2 ω4)	4.0 ±0.7
4	Hexadecatrienoic acid (C₁₆ _:3 ω3)	2.3 ±0.5
5	Palmitoleic acid (C₁₆ _:1 ω7)	1.7 ±0.1
6	Palmitic acid (C₁₆ _:0)	16.3 ±0.4
7	г-linolenic acid (C₁₈ _:3 ω)	5.7 ±0.2
8	Unknown	1.4 ±0.1
9	Linoleic acid (C₁₈ _:2 ω6)	16.1 ±2.3
10	α-linolenic acid (C₁₈ _:3 ω3)	19.9 ±1.9
11	Oleic acid (C₁₈ _:1 ω9)	3.4 ±0.5
12	Hexadecenol (C₂₀H₄₀O)	11.3 ±0.9
13	Stearic acid (C₁₈ _:0)	2.1 ±0.1

도 5 및 표 3에 나타낸 바와 같이, GC/MS 결과들은 총 13개의 주요 피크를 포함하였고, 균주KNUA021가 주 지방산들로서 팔미트산(C₁₆ _:0), 헥사데카테트라에논산(C₁₆ _:4), 리놀레산 (C₁₈ _:2) 및 리놀렌산 (C₁₈ _:3)을 생산할 수 있었음을 보여주었다.

또한, 도 6에 나타난바와 같이, 주요 세포 성분들 중 하나로서 헥사데세놀(C₂₀H₄₀O, 분자량= 296)을 생합성할 수 있다는 것을 확인하였다.

한국생명공학연구원

KCTC12066BP

20111109

Claims

삭제
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1) 클라미도모나스 레인하르티 KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)를 배양하는 단계; 및
2) 상기 1)단계에서 얻은 배양액으로부터 헥사데세놀 및 Ｃ₁₆내지 Ｃ₁₈의 지방산을 추출하는 단계;를 포함하는, 헥사데세놀 및 Ｃ₁₆내지 Ｃ₁₈의 지방산의 생산방법.
제 3항에 있어서, 상기 1) 단계에서 균주의 배양 온도는 15℃에서 30℃ 범위인 것을 특징으로 하는 헥사데세놀 및 Ｃ₁₆내지 Ｃ₁₈의 지방산의 생산방법.
제 3항에 있어서, 상기 1) 단계에서 균주의 배양 pH는 4에서 12 범위인 것을 특징으로 하는 헥사데세놀 및 Ｃ₁₆내지 Ｃ₁₈의 지방산의 생산방법.
제 3항에 있어서, 상기 2) 단계에서 추출 용매는 펜탄, 핵산, 사이클로헥산, 톨루엔, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 아세톤, 크로로포름, 메탄올 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 헥사데세놀 및 Ｃ₁₆내지 Ｃ₁₈의 지방산의 생산방법.
제 3항에 있어서, 상기 C₁₆ 내지 C₁₈의 지방산은 팔미트산(C16:0), 팔미톨레산(C16:1), 리놀레산(C18:2) 및 리놀렌산(C18:3)으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 헥사데세놀 및 Ｃ₁₆내지 Ｃ₁₈의 지방산의 생산방법.
클라미도모나스 레인하르티 KNUA021 균주 (KCTC 12066BP)에 의해 생산된 C₁₆ 내지 C₁₈의 지방산을 트랜스 에스테르화시켜 지방산 에스테르를 생성하는 것을 특징으로 하는 바이오디젤의 제조 방법.