KR101387575B1 - 인지질 및 아세틸렌기를 포함하는 리포좀 및 그의 용도 - Google Patents

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Abstract

인지질 및 아세틸렌기를 포함하는 리포좀 및 그의 용도를 제공한다. 인지질 및 아세틸렌기를 포함하는 리포좀은 증가된 민감도를 갖는 센서를 제조하는데 사용될 수 있다.

Description

인지질 및 아세틸렌기를 포함하는 리포좀 및 그의 용도{Liposome having acetylene moiety and phospholipid and use thereof}
인지질 및 아세틸렌기를 포함하는 리포좀 및 그의 용도에 관한 것이다.
리포좀은 포집된 수성 매질을 포함하는 지질 이중막 (lipid bilayer membrane)을 포함하는 완전히 폐쇄된 구조이다. 리포좀은 수성상에 의하여 분리된 많은 동심 지질 이중층 (멀티라멜라 소포 또는 MLV) 또는 단일 막 이중층 (유니라멜라 소포)을 포함할 수 있다. 지질 이중층은 소수성 "꼬리(tail)" 영역과 친수성 "머리(head)" 영역을 갖는 2개 지질 단일층 (monolayer)로 구성된다. 막 이중층에서, 지질 단일층에서 소수성 "꼬리"는 상기 이중층의 중심쪽으로 향하여 배열되어 있고, 상기 친수성 "머리"는 수성상쪽으로 향하여 배열되어 있다.
리포좀의 기본구조는 알려진 방법에 의하여 제조될 수 있다. 예를 들면, 유기 용매 중에 현탁된 지질 분자를 감압하에 증발시켜 용기 내에 건조 필름을 형성하고, 적절한 양의 수성상을 상기 용기에 첨가한 후 혼합물을 교반한다. 그후, 상기 혼합물을 멀티라멜라 소포가 형성되기에 충분한 시간 동안 요동없이 방치함으로써 제조될 수 있다. 또한, 유니라멜라 소포도 알려진 기술에 의하여 제조될 수 있다 (예, 미국특허 제4522803호).
단백질이 접합된 리포좀은 진단용으로 설계될 수 있다. 리포좀은 단백질, 항체 및 면역글로불린에 공유적으로 결합될 수 있다. 예를 들면, 티올화된 IgG 또는 단백질 A는 지질 소포에 공유적으로 결합될 수 있고, 티올화된 항체 또는 Fab' 단편은 리포좀에 결합될 수 있다.
그러나, 상기한 종래 기술에 의하더라도, 민감도가 증가된 센서에 사용될 수 있는 리포좀은 여전히 요구되고 있다.
일 양상은 스트레스에 대하여 증가된 반응성을 보이는 아세틸렌기를 포함하는 리포좀을 제공하는 것이다.
다른 양상은 상기 리포좀을 포함하는 표적물질 검출 장치를 제공하는 것이다.
다른 양상은 상기 리포좀을 이용하여 시료 중의 표적물질을 효율적으로 확인하는 방법을 제공하는 것이다.
일 양상은 제1 지질 분자, 제2 지질 분자 및 표적물질에 결합하는 물질을 포함하는 지질이중층을 포함하고, 제1 지질분자는 말단에 에폭시기를 갖는 디아세틸렌 분자이고, 제2 지질 분자는 인지질 분자인 것인 아세틸렌기를 포함하는 리포좀을 제공한다.
상기 리포좀에 있어서, 상기 에폭시기를 갖는 디아세틸렌 분자는 상기 에폭시기를 포함하는 친수성 부분과 상기 디아세틸렌 모이어티를 포함하는 소수성 부분으로 구성된 것일 수 있다. 상기 에폭시기를 갖는 디아세틸렌 분자는 예를 들면, 식 I의 구조를 갖는 것이고,
Figure 112012064293607-pat00001
(I)
식 중 R1은 C1 내지 C20의 알킬기이고, R2는 C1 내지 C20의 알킬기이고, n은 0 내지 10의 정수인 것일 수 있다. 상기 알킬기는 직쇄 또는 분지쇄를 갖는 것일 수 있다. 상기 알킬기는 예를 들면, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틱, 옥틸, 노닐, 데카닐, 운데카닐 및 도데카닐 기와 같은 직쇄 알킬기일 수 있다.
상기 지질 이중층은 지질 분자와 분자 사이에 중합된 것일 수 있다. 상기 리포좀은 직경 30nm 내지 5000nm 인 것일 수 있다.
상기 인지질은 분자 내에 인산 에스테르를 가지고 있는 지질일 수 있다. 상기 인지질은 세포막에 구성하는 천연적인 인지지일 수 있다. 예를 들면, 상기 인지질은 글리세로인지질, 스핑고인지질 및 이들의 조합을 포함할 수 있다. 글리세로인지질은 포스파티딜세린, 포스파티딜 에탄올아민, 포스파티딜콜린, 포스파티딜 이노시톨, 디포스파티딜 글리세롤 (카르디올리핀), 및 이들의 조합으로부터 선택된 것일 수 있다. 상기 인지질은 상기 디아실글리세롤-3-포스페이트 분자는 C8-C22의 아실기를 갖는 것일 수 있다. 디아실기는 동일하거나 동일하지 않을 수 있다. 상기 아실기는 C8, C10, C12, C14, C16, C18, C20, 또는 C22의 포화 또는 불포화 아실기일 수 있다. 상기 디아실글리세롤-3-포스페이트 분자는 예를 들면, 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스페이트(DMPA)일 수 있다.
표적물질에 결합하는 물질은 아미노글리코시드에 결합하는 물질일 수 있다. 용어 "아미노글리코시드 (aminoglycoside)"란 네오미신 또는 그와 유사한 구조를 갖는 아미노글리코시드일 수 있다. 예를 들면, 네오미신, 겐타미신, 토브라미신, 스트렙토미신, 네틸미신, 카나미신, 파라메신, 아미카신, 아지트로미신 및 이들의 조합으로부터 선택된 것일 수 있다. 네오미신은 글리코시드 결합에 의하여 연결된 2이상의 아미노당을 포함하는 아미노글리코시드계 항생제에 속한다. 상기 아미노글리코시드는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한 염, 및 그의 유도체를 포함한다. 네오미신은 도 1의 구조식을 갖는 것일 수 있다.
상기 표적물질에 결합하는 물질은 PIP2일 수 있다. 네오미신을 포함하는 아미노글리코시드는 세포막 중의 PIP2와 결합하여, 포스포리파제 C (PLC)에 의하여 PIP2를 디아실글리세롤(DAG)과 이노실톨 1,4,5-트리포스페이트 (IP3)로 분해시키는 것을 저해하여, 세포질 내에서 DAG와 IP2 신호를 전달하는 신호 케스케이트를 저해하는 것으로 알려져 있다.
일 구체예의 리포좀은 상기 에폭시기를 갖는 디아세틸렌 분자는 R1은 도데카닐기이고, R2는 옥틸기이고, n은 1인 식 (I)의 분자 (이하 "PCDA-에폭시"라 함)이고,
Figure 112012064293607-pat00002
(I)
상기 디아실글리세롤-3-포스페이트 분자는 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스페이트인 것일 수 있다.
제1 지질 분자, 제2 지질 분자 및 표적물질에 결합하는 물질은 1: 0.2-0.5: 0.2-0.5 몰 비로 포함되는 것일 수 있다.
또한, 상기 리포좀은 상기 에폭시기를 통하여 표적물질에 결합하는 물질이 더 고정된 것일 수 있다. 상기 물질은 아미노기를 갖는 물질일 수 있다. 상기 아미노기는 천연적으로 존재하거나 도입된 것일 수 있다. 아미노기를 갖는 분자를 상기 에폭시기와의 반응을 통하여, 고체 입자 표면에 균일하게 결합시킬 수 있다. 상기 아민기를 갖는 분자는 검출하고자 하는 물질에 특이적 또는 비특이적으로 결합하는 활성이 있어, 검출하고자 하고자 하는 물질을 검출하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, 상기 아민기를 갖는 분자는 폴리펩티드, 핵산 및 이들을 포함하는 분자로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다. 폴리펩티드는 효소, 효소에 결합하는 기질 또는 저해제, 항체, 수용체 및 수용체에 결합하는 리간드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다. 상기 핵산은 DNA, RNA, PNA 및 이들의 하이브리드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다. 상기 물질은 항원이고, 표적물질은 상기 항원에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있다.
상기 디아세틸렌 분자는 디아세틸렌 기 사이의 중합 반응에 의하여 공유 결합에 의하여 연결된 것일 수 있다. 디아세틸렌 분자를 포함하는 리포좀 중에서 디아세틸렌 분자 사이에 중합을 유도하는 것을 알려져 있다. 예를 들면, 상기 연결은 예를 들면, 220nm 내지 300nm, 254nm 파장을 포함한, 자외선 조사에 이루어질 수 있다. 즉, 폴리디아세틸렌 (PDA)의 중합은 추가적인 촉매 및 개시제 없이 분자적으로 조립된 디아세틸렌 모노머 (molecularly assembled diaceylene monomers)의 UV 조사에에 의하여 제조될 수 있다. 상기 중합은 1,4-부가 중합에 의하여 이루어질 수 있으며, 중합 산물은 교대 엔-인 (ene-yne) 구조로 된 골격을 갖는 것일 수 있다. PDA 중합 산물은 스트레스-유도된 색 변이 (chromic transition) (청색-to-적색) 및 비선형 광학 특성으로 인하여, 센서로서 사용될 수 있다. 중합된 PDA를 포함하는 리포좀은 에폭시기를 통하여 표적물질에 결합하는 물질이 고정된 것일 수 있다.
다른 양상은 상기한 리포좀을 포함하는, 표적 물질 검출 장치를 제공한다. 상기 장치는 상기 리포좀 중의 표적물질에 결합하는 물질과 표적물질 사이의 결합에 의하여 야기되는 리포좀의 구조 변화로부터 야기되는 신호를 측정하는 수단을 더 포함할 수 있다. 상기 수단은 광 측정 장치일 수 있다. 상기 광 측정 장치는 예를 들면, 분광기,형광측정기, 또는 형광 현미경을 포함한 현미경일 수 있다.
또한, 다른 양상은 상기한 리포좀이 배열되어 있는 기판을 포함하는 마이크로어레이를 제공한다. 마이크로어레이를 제조하는 방법은 알려져 있다. 예를 들면, 기판 표면 상에 활성기, 예를 들면, 아미노기를 도입하고 상기 활성기에 반응성을 가진 기를 가진 상기 리포좀을 기판 표면에 스팟팅함으로써 제조될 수 있다.
다른 양상은 상기한 바와 같은 리포좀을 시료 중의 표적물질과 접촉시켜 상기 표적물질에 결합하는 물질을 상기 표적물질에 결합시키는 단계로서, 상기 표적물질은 아미노글리코시드인 것인 단계; 접촉 산물로부터 광학적 신호를 검출하는 단계; 및 광학적 신호로부터 시료 중 표적물질을 확인하는 단계;를 포함하는, 시료 중의 표적물질을 확인하는 방법을 제공한다.
상기 방법은 상기한 바와 같은 리포좀을 시료 중의 표적물질과 접촉시켜 상기 표적물질에 결합하는 물질을 상기 표적물질에 결합시키는 단계로서, 상기 표적물질은 아미노글리코시드인 것인 단계를 포함한다. 리포좀, 아미노글리코시드, 및 표적물질에 결합하는 물질에 대하여는 상기한 바와 같다. 표적물질에 결합하는 물질은 PIP2이고, 표적물질은 아미노글리코시드인 것일 수 있다.
상기 접촉은 리포좀과 시료를 액체 매질 중에서 혼합하는 것일 수 있다. 상기 혼합은 교반 또는 교반 없이 이루어질 수 있다. 상기 매질은 수성 매질일 수 있다. 예를 들면, 물 또는 인산완충염수 (phosphate buffered saline: PBS)와 같은 버퍼일 수 있다. 리포좀에 대하여는 상기한 바와 같다.
상기 시료는 아미노글리코시드를 포함하는 임의의 시료일 수 있다. 예를 들면, 생물 유래 시료, 예를 들면, 식품, 농작물, 생검물, 혈액, 뇨, 타액, 누액 등일 수 있다.
상기 방법은 접촉 산물로부터 광학적 신호를 검출하는 단계를 포함한다. 광학적 신호는 흡광도, 투과도, 산란광 측정 및 이들의 조합으로부터 선택된 것일 수 있다. 광학적 신호는 흡광도인 것일 수 있다. 흡광도는 자외선-가시 영역에서의 흡광도일 수 있다.
일 양상에 따른 아세틸렌기를 포함하는 리포좀에 의하면, 증가된 민감도 및 선택도를 갖는 센서에 사용될 수 있다.
다른 양상에 따른 표적 물질 검출 장치에 의하면, 증가된 민감도 및 선택도로 표적물질을 확인할 수 있다.
다른 양상에 따른 시료 중의 표적물질을 확인하는 방법에 의하면, 증가된 민감도 및 선택도로 표적물질을 확인할 수 있다.
도 1은 PIP2의 구조를 나타낸 것이다.
도 2는 일 구체예에 따른 PDA-PIP2 리포좀의 제조 과정 및 그를 이용한 아미노글리코시드 검출 방법을 도식적으로 나타낸 것이다.
도 3은 일 구체에에 따른 PDA-PIP2 리포좀과 네이미신의 반응 결과를 나타낸 도면이다.
도 4는 인큐베이션 전과 후에 파장에 형광 현미경으로 마이크로어레이를 촬영한 결과를 나타낸다.
도 5는 네오미신 농도에 따른 형광강도를 나타낸 도면이다.
도 6은 도 5의 결과를 네오미신 농도에 따른 형광강도로 플롯팅한 도면이다.
도 7은 아미노글리코시드에 따른 형광 강도를 나타낸 도면이다.
도 8은 아미노글리코시드에 따른 PDA-PIP2 리포좀 마이크로어레이의 형광 현미경 이미지를 나타낸 도면이다.
도 9는 비아미노글리코시드 항생제를 PDA-PIP2 리포좀 마이크로어레이와 반응시킬 결과를 나타낸 도면이다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
재료 및 방법
이하의 실시예에서는 달리 언급이 없으면, 다음의 재료 및 방법을 사용하였다.
(1) 재료
인지질, 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스페이트 (DMPA)는 Avanti Polar lipids사로부터 구입하였고, 10,12-펜타코사디인산 (10,12-pentacosadiynoic acid) (PCDA)은 Sigma-Aldrich Chemicals 사로부터 구입하였고, PCDA-Epoxy는 알려진 방법 (J. Lee, E. J. Jeong and J. Kim, Chem Commun, 2011, 47, 358-360; D. Seo and J. Kim, Adv Funct Mater, 2010, 20, 1397-1403)에 따라 합성하였다. PIP2, 아미노글리코시드 항생제 (네오미신, 겐타미신, 토브라미신, 및 스트렙토미신), 버퍼 및 차단제와 같은 다른 물질은 Sigma-Aldrich Chemicals 사로부터 구입하였다.
(2) 리포좀 조립 및 기판 상에 리포좀이 배열된 마이크로어레이의 제조
PCDA-에폭시, DMPA, 및 PIP2를 0.2ml 테트라히드로퓨란 중에 여러 몰비로 녹여 최종 농도 0.5 mM이 되게 하였다. 얻어진 용액을 20ml 5mM HEPES 버퍼 (pH 8) 중에 주입하고, 5분 동안 120 W로 프로브-초음파 처리하였다 (probe-sonicated). 리포좀 (이하 "PDA-PIP2 리포좀"이라고도 함)용액을 0.8μm 셀룰로즈 아세테이트 시린지 필터를 통하여 두번 여과하고 사용전에 4℃ 냉장고에서 24 시간 동안 저장하였다. 이때 PIP2는 별도의 관능기로 활성화되지 않은 것을 사용하였다.
아민 (NH2)-코팅된 유리 슬라이드 상에 상기 리포좀을 스팟팅하여 마이크로어레이를 제조하였다.
도 1은 PIP2의 구조를 나타낸 것이다.
도 2는 일 구체예에 따른 PDA-PIP2 리포좀의 제조 과정 및 그를 이용한 아미노글리코시드 검출 방법을 도식적으로 나타낸 것이다.
도 2에 나타낸 바와 같이, PCDA-epoxy: DMPA: PIP2를 용매 중에 혼합하고 분산시켜 자가조립된 리포좀을 만들고, 여기 자외선을 조사함으로써 PCDA 모노머 사이에 중합이 일어나 안정된 PDA-PIP2 리포좀을 얻었다. 이때 PIP2는 PCDA-epoxy와 DMPA 중 하나이상의 사이에 충진된 것일 수 있다. 즉, PIP2는 다른 리포좀 성분과 공유 결합에 의하여 연결된 것이 아니라, 비공유 결합에 의하여 결합된 것일 수 있다. 상기 리포좀에 있어서, DMPA는 리포좀 중의 PDA 골격을 더 유동적이도록 하여 검출의 민감도 (sensitivity)를 향상시키는 것일 수 있다. 다음으로, 상기 PDA-PIP2 리포좀을 아미노글리코시드, 예를 들면, 네이미신과 접촉시켜 아미노글리코시드를 PIP2와 결합시키고, 그에 따라 PDA 분자 사슬에 비틀림(distortion)을 유발시켜 발색 변화를 유도하는 것일 수 있다. 발색 변화는 육안 또는 분광기를 통하여 확인될 수 있다. 검출 결과로부터 시료 중에 존재하는 아미노글리코시드를 검출할 수 있다. 그러나, 본 발명이 특정한 기작에 한정되는 것은 아니다.
(3) 리포좀의 흡광도 분석
20초 동안 254 nm 1 mW/cm2 UV 조사하에서 얻어진 0.5 mM 중합된 PDA-인지질 리포좀 용액 200μl를 3 분 동안 70℃에 위치시켰다. PerkinElmer Lambda 45 UV/Vis spectrometer로부터 측정된 자외선/가시 흡광 스펙트럼을 발색 반응 (colorimetric response)을 측정하기 위하여 사용하였다.
실시예 1:
본 실시예에서는 PDA-PIP2 리포좀을 아미노글리코시드 예를 들면, 네이미신과 접촉시켜 아미노글리코시드를 PIP2와 결합시키고, 그에 따라 PDA 분자 사슬에 비트림(distortion)을 유발시켜 발색 변화를 유도하였다. 발색 변화는 육안 또는 분광기를 통하여 확인될 수 있다.
구체적으로, 물 중 리포좀 용액에 네오미신이 50uM이 되도록 첨가하고 37℃에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 전과 후에 파장에 따른 흡광도를 측정하였다.
도 3은 일 구체에에 따른 PDA-PIP2 리포좀과 네오미신의 반응 결과를 나타낸 도면이다. 도 3A는 파장에 따른 흡광도를 나타낸다. 도 3B는 PCDA-epoxy:DMPA:PIP2의 몰비에 따른 발색반응 (colorimetric response)(%)를 나타낸 도면이다.
도 3A에 나타낸 바와 같이, PDA-PIP2 리포좀은 용액 중의 네오미신에 결합함에 따라 급격한 색 변화를 보였다. 도 3B에 따르면, PDA-PIP2 리포좀은 PCDA:DMPA: PIP2의 몰비가 7: 2: 1일 때 민감도가 가장 높았다.
또한, 네오미신 농도에 따른 형광강도를 측정 및 결정하였다.
도 4는 인큐베이션 전과 후에 파장에 형광 현미경으로 마이크로어레이를 촬영한 결과를 나타낸다. 도 4는 PDA-PIP2 리포좀 마이크로어레이를 50uM의 네오미신 용액에 담근 후, 37℃에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 전과 후에 파장에 형광 현미경으로 마이크로어레이를 촬영한 결과이다. 도 5는 네오미신 농도에 따른 형광강도를 나타낸 도면이다. 도 5는 PDA-PIP2 리포좀 마이크로어레이를 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 50uM의 네오미신 용액에 담가서 37℃에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 전과 후에 파장에 형광 현미경으로 마이크로어레이를 촬영한 결과이다. 도 6은 도 5의 결과를 네오미신 농도에 따른 형광강도로 플롯팅한 도면이다. 도 6에 나타낸 바와 같이, 리포좀 스팟으로부터의 형광 강도는 네오미신 농도가 증가함에 따라 강해졌다. 도 6에 나타낸 바와 같이, 네오미신 농도와 형광강도는 좋은 상관관계를 가졌다. 상기 PDA-PIP2 리포좀을 사용한 네오미신의 검출 한계는 0.1uM (61ppb)이었다. 이 검출 한계는 WHO 및 FAO (육류 및 계란 중 500ppb 및 우유 중 1500ppb)에 정의된 네오미신의 규제 한계 (regulation limits)를 검출하기에 충분하였다.
또한, PIP2는 네오미신뿐만 아니라 네오미신과 비슷한 화학구조를 가진 다른 아미노글리코시드 항생제와도 결합하는 것으로 알려져 있기 때문에 다른 아미노글리코시드 항생제에 대하여도 검출 연구를 확장하였다. PDA-PIP2 리포좀과 아미노글리코시드와의 반응은 상기한 바와 같이 수행하였다.
도 7은 아미노글리코시드에 따른 형광 강도를 나타낸 도면이다. 도 8은 아미노글리코시드에 따른 PDA-PIP2 리포좀 마이크로어레이의 형광 현미경 이미지를 나타낸 도면이다. 도 7 및 8은 다양한 아미노글리코시드 50uM를 37℃ 및 생리적 pH에서 20분 동안 인큐베이션한 결과를 나타낸 것이다. 도 7에서 괄호 안의 숫자는 각 아미노글리코시드의 순 전하를 나타낸다.
도 7에 나타낸 바와 같이, 예상한 바와 같이, 다른 아미노글리코시드, 예를 들면, 겐타미신, 토브라미신, 및 스트렙토미신은 일정 수준의 형광 감작 신호 (fluorescence sensory signal)을 발생시켰다. 그러나, 다른 아미노글리코시드의 형광 강도는 네오미신에 비하여 약하였다. 도 7에 나타낸 바와 같이, 형광강도는 순전하가 감소함에 따라 선형적인 감소가 아닌 지수적 감소를 보였다. 신호 강도는 아미노글리코시드의 분자 크기뿐만 아니라 전하 밀도의 산물인 것으로 여겨진다. 상기 아미노글리코시드 중 가장 큰 전하 밀도를 가진 네오미신은 또한 겐타미신 (477.60 g/mol), 토브라미신 (467.52 g/mol), 및 스트렙토미신 (581.57 g/mol)에 비하여 큰 분자량 (614.64 g/mol)을 가지고 있다. 따라서, 큰 전하 밀도는 PDA-PIP2 리포좀과 더 강한 상호작용을 야키시킬 것이며 더 큰 크기는 더 강한 스트레스와 더 밝은 감작 신호 (sensory signal)을 유도할 것이다.
또한, 페닐실린 G, 옥시테트라시클린 및 술파메타진과 같은 비아미노글리코시드 항생제를 PDA-PIP2 리포좀 마이크로어레이에 대하여 비특이적 결합을 시험하였다. 도 9는 비아미노글리코시드 항생제를 PDA-PIP2 리포좀 마이크로어레이와 반응시킬 결과를 나타낸 도면이다. 도 9A는 네오미신과 비아미노글리코시드 각 50uM을 37℃에서 20분 동안 반응시킨 후 PDA-PIP2 리포좀 마이크로어레이의 형광 강도를 나타낸 도면이다. 도 9B는 37℃에서 1uM 네오미신와 함께 또는 없이 50uM 비아미노글리코시드 항생제의 혼합 용액과 PDA-PIP2 리포좀 마이크로어레이를 20 분 동안 인큐베이션한 후 PDA-PIP2 리포좀 마이크로어레이의 형광강도 및 대응하는 현미경 이미지를 나타낸 것이다. 도 9에 나타낸 바와 같이, 상기 아미노글리코시드와는 다른 구조를 가진 비아미노글리코시드는 감작 신호를 생산하지 않았으며, 이는 아미노글리코시드에 대한 PDA-PIP2 리포좀 감작 시스템의 좋은 선택성 (selectivity)를 확인하는 것이다. 또한, 본 발명자들은 심지어 페닐실린 G, 옥시테트라시클린 및 술파메타진 50uM (각 농도인지, 합쳐서 농도인지 확인 요망)의 칵테일 용액도 네오미신과 PDA-PIP2 리포좀 사이의 특이적 상호작용을 방해하지 않는 것을 확인하였다. 도 10B에 나타낸 바와 같이, 네오미신을 갖지 않은 상기 칵테일은 인지가능한 신호를 생성하지 않았으나, 1uM 네오미신을 갖는 상기 칵테일은 형광 신호를 생성하였다.

Claims (11)

  1. 제1 지질 분자, 제2 지질 분자 및 표적물질에 결합하는 물질을 포함하는 지질 이중층을 포함하고, 제1 지질분자는 말단에 에폭시기를 갖는 디아세틸렌 분자이고, 제2 지질 분자는 디아실글리세롤-3-포스페이트 분자인 것인 아세틸렌기를 포함하는 리포좀으로서,
    상기 에폭시기를 갖는 디아세틸렌 분자는 식 I의 구조를 갖는 것이고,
    Figure 112013120333516-pat00003
    (I)
    식 중 R1은 C1 내지 C20의 알킬기이고, R2는 C1 내지 C20의 알킬기이고, n은 0 내지 10의 정수인 것이고,
    상기 디아실글리세롤-3-포스페이트 분자는 C8-C22의 아실기를 갖는 것이고,
    상기 표적물질에 결합하는 물질은 아미노글리코시드에 결합하는 물질인 것으로서 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트 (PIP2)인 것이고,
    상기 아미노글리코시드는 네오미신, 겐타미신, 토브라미신, 스트렙토미신, 또는 그 조합인 것인 리포좀.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 에폭시기를 갖는 디아세틸렌 분자는 R1은 도데카닐기이고, R2는 옥틸기이고, n은 1인 식 (I)의 분자인 리포좀.
    Figure 112012064293607-pat00004
    (I)
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서, 디아실글리세롤-3-포스페이트 분자는 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스페이트 (DMPA)인 것인 리포좀.
  4. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 디아세틸렌 분자는 디아세틸렌 기 사이의 중합 반응에 의하여 공유 결합에 의하여 연결된 것인 리포좀.
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 청구항 1 또는 2에 따른 리포좀을 포함하는, 표적 물질 검출 장치.
  8. 청구항 1 또는 2에 따른 리포좀이 배열되어 있는 기판을 포함하는 마이크로어레이를 포함하는, 표적 물질 검출 장치.
  9. 청구항 1에 따른 리포좀을 시료 중의 표적물질과 접촉시켜 상기 표적물질에 결합하는 물질을 상기 표적물질에 결합시키는 단계로서, 상기 표적물질은 네오미신, 겐타미신, 토브라미신, 스트렙토미신, 또는 이들의 조합인 것인 아미노글리코시드인 것인 단계;
    접촉 산물로부터 광학적 신호를 검출하는 단계; 및
    광학적 신호로부터 시료 중 표적물질을 확인하는 단계;를 포함하는, 시료 중의 표적물질을 확인하는 방법.
  10. 삭제
  11. 청구항 9에 있어서, 광학적 신호는 흡광도인 것인 방법.
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