KR101382730B1

KR101382730B1 - 헤테로환형 항바이러스성 화합물

Info

Publication number: KR101382730B1
Application number: KR1020137006395A
Authority: KR
Inventors: 짐 리; 프란시스코 자비어 탈라마스
Original assignee: 에프. 호프만-라 로슈 아게
Priority date: 2010-08-13
Filing date: 2011-08-10
Publication date: 2014-04-08
Also published as: JP2013537537A; CN103068819A; AR082628A1; BR112013003113A2; US20130209397A1; MX2013001273A; WO2012020037A1; CA2806547A1; EP2603501A1; EP2603501B1; RU2572835C2; ES2477342T3; CN103068819B; KR20130069763A; HK1184452A1; JP5617036B2; US8734777B2; TW201210598A; RU2013108055A

Abstract

본 발명은 C형 간염 바이러스(HCV) NS5B 중합효소 억제제 화합물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 HCV 감염을 치료 또는 예방하기 위한 약학 조성물에 관한 것이다.

Description

헤테로환형 항바이러스성 화합물{HETEROCYCLIC ANTIVIRAL COMPOUNDS}

본 발명은 HCV RNA-의존성 RNA 바이러스 중합효소를 억제하는 비-뉴클레오시드 화합물을 제공한다. 이러한 화합물은 RNA-의존성 RNA 바이러스 감염의 치료에 유용하다. 이들은 C형 간염 바이러스(HCV) NS5B 중합효소의 억제제로서, HCV 복제의 억제제로서, 그리고 C형 간염 감염의 치료에 특히 유용하다.

C형 간염 바이러스는 전세계 도처의 만성 간 질병의 주요 원인이다(문헌[Boyer, N. et al., J. Hepatol. 2000 32:98-112]). HCV에 감염된 환자는 간경변증 및 후속적인 간세포 암종이 발병할 위험이 있으며, 따라서 HCV는 간 이식을 받게 되는 주요 징후이다.

HCV는 플라비바이러스(flavivirus), 페스티바이러스(pestivirus), 및 C형 간염 바이러스를 포함하는 헤파시바이러스(hapaceivirus) 속을 포함하는 바이러스 과 플라비비리다에(Flaviviridae)의 일종으로 분류된다(문헌[Rice, C. M., Flaviviridae: The viruses and their replication. In: Fields Virology, Editors: B. N. Fields, D. M. Knipe and P. M. Howley, Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, Pa., Chapter 30, 931-959, 1996]). HCV는 약 9.4kb의 양성-센스 단일 가닥 RNA 게놈을 함유하는 외피 바이러스(enveloped virus)이다. 상기 바이러스 게놈은 고도로 보존된 5' 비번역 영역(UTR), 약 3,011개의 아미노산으로 이루어진 다단백질 전구체를 코딩하는 긴 오픈 리딩 프레임(open reading frame), 및 짧은 3' UTR로 구성된다.

HCV의 유전자 분석은 DNA 서열의 30%를 초과하여 분기하는 6개의 주요 유전자형을 규명하였다. 30개를 초과하는 아형을 따로 분류하였다. 미국에서, 감염 환자 중 약 70%는 유형 1a 및 1b 감염이다. 유형 1b는 아시아에서 가장 유행하는 아형이다(문헌[X. Forns and J. Bukh, Clinics in Liver Disease 1999 3:693-716]; 문헌[J. Bukh et al., Semin. Liv. Dis. 1995 15:41-63]). 불행하게도, 전염성 유형 1은 유형 2 또는 3 유전자형보다 큰 치료 내성을 갖는다(문헌[N. N. Zein, Clin. Microbiol. Rev., 2000 13:223-235]).

바이러스 구조 단백질은 뉴클레오캡시드 코어 단백질(C) 및 2개의 외피 당단백질(E1 및 E2)을 포함한다. HCV는 또한 2개의 프로테아제(NS2-NS3 영역에 의해 코딩된 아연-의존성 메탈로프로테인아제 및 NS3 영역에서 코딩된 세린 프로테아제)를 코딩한다. 이러한 프로테아제는 특이 영역의 전구체 다단백질을 성숙한 펩티드로 분열시키는 데 필요하다. 비구조 단백질 5(NS5B)의 카복실 절반은 RNA-의존성 RNA 중합효소를 함유한다. 나머지 비구조 단백질(NS4A 및 NS4B)의 기능 및 NS5A(비구조 단백질 5의 아미노-말단의 절반)의 기능은 알려지지 않았다. HCV RNA 게놈에 의해 코딩되는 대부분의 비구조 단백질은 RNA 복제에 관여하는 것으로 여겨진다.

현재, 제한된 수의 승인된 치료법이 HCV 감염의 치료에 이용가능하다. HCV 감염을 치료하고 HCV NS5B 중합효소 활성을 억제하기 위한 신규의 치료법 및 기존 치료법이 검토되었다(문헌[R. G. Gish, Sem. Liver. Dis., 1999 19:5]; 문헌[Di Besceglie, A. M. and Bacon, B. R., Scientific American, October: 1999 80-85]; 문헌[G. Lake-Bakaar, Current and Future Therapy for Chronic Hepatitis C Virus Liver Disease, Curr. Drug Targ. Infect Dis. 2003 3(3):247-253]; 문헌[P. Hoffmann et al., Recent patent on experimental therapy for hepatitis C virus infection (1999-2002), Exp. Opin. Ther. Patents 2003 13(11):1707-1723]; 문헌[M. P. Walker et al., Promising Candidates for the treatment of chronic hepatitis C, Exp. Opin. Investing. Drugs 2003 12(8):1269-1280]; 문헌[S.-L. Tan et al., Hepatitis C Therapeutics: Current Status and Emerging Strategies, Nature Rev. Drug Discov. 2002 1:867-881]; 문헌[J. Z. Wu and Z. Hong, Targeting NS5B RNA-Dependent RNA Polymerase for Anti-HCV Chemotherapy, Curr. Drug Targ. - Infect. Dis. 2003 3(3):207-219]).

리바비린(1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-하이드록시메틸-테트라하이드로-푸란-2-일)-1H-[1,2,4]트라이아졸-3-카복실산 아마이드; 비라졸(Virazole: 등록상표))은 합성 비-인테페론-유도성 광역 항바이러스성 뉴클레오시드 유사체이다. 리바비린은 플라비비리다에를 비롯한 수개의 DNA 및 RNA 바이러스에 대한 시험관내 활성을 갖는다(문헌[Gary L. Davis. Gastroenterology 2000 118:S104-S114]). 비록 단독요법에서 리바비린이 혈청 아미노 전이효소 수준을 40%의 환자에서 정상으로 감소시키지만, HCV-RNA의 혈청 수준을 저하시키지는 않는다. 리바비린은 또한 상당한 독성을 나타내고, 빈혈을 유도하는 것으로 알려져 있다. 비라미딘은 간세포에서 아데노신 탈아미노화효소에 의해 리바비린으로 전환되는 리바비린 전구약물이다(문헌[J. Z. Wu, Antivir. Chem. Chemother. 2006 17(1):33-9]).

인터페론(IFN)은 거의 10년 동안 만성 간염의 치료에 이용되었다. IFN은 바이러스 감염에 반응하여 면역 세포에 의해 생성된 당단백질이다. 2개의 별개 유형의 인터페론이 인정되었다: 유형 1은 수개의 인터페론 알파 및 하나의 인터페론 베타를 포함하고, 유형 2는 인터페론 감마를 포함한다. 유형 1 인터페론은 감염된 세포에 의해 주로 생성되고, 신생 감염으로부터 이웃하는 세포를 보호한다. IFN은 HCV를 비롯한 많은 바이러스의 바이러스 복제를 억제하고, C형 간염 감염의 유일한 치료법으로 사용되는 경우, IFN은 혈청 HCV-RNA를 검출될 수 없는 수준까지 억제한다. 부가적으로, IFN은 혈청 아미노 전이효소 수준을 정상화시킨다. 불행하게도, IFN의 효과는 일시적이다. 치료의 중단은 70% 재발률을 야기하고, 단지 10 내지 15%가 정상적인 혈청 알라닌 전이효소 수준을 갖는 지속적인 바이러스 반응을 나타낸다(상기 데이비스 루크-바카(Davis, Luke-Bakaar)의 문헌 참조).

초기 IFN 치료법의 한가지 한계는 혈액으로부터의 단백질의 신속한 제거(clearance)이다. 폴리에틸렌글리콜(PEG)에 의한 IFN의 화학적 유도체화는 실질적으로 개선된 약동학적 특성을 갖는 단백질을 생성하였다. 페가시스(PEGASYS: 등록상표)는 접합 인터페론 α-2a이고, 40kD 분지된 모노-메톡시 PEG 및 페그-인트론(PEG-INTRON: 등록상표)은 인터페론 α-2b 및 12kD 모노-메톡시 PEG의 접합체이다(문헌[B. A. Luxon et al., Clin. Therap. 2002 24(9):13631383]; 문헌[A. Kozlowski and J. M. Harris, J. Control. Release 2001 72:217-224]).

리바비린 및 인터페론-α를 사용한 HCV의 병용요법은 현재 HCV에 대한 최적 요법이다. 리바비린 및 PEG-IFN(하기)의 조합은 유형 1 HCV를 갖는 환자의 54 내지 56%에서 지속된 바이러스 반응(SVR)을 야기한다. SVR은 유형 2 및 3 HCV의 경우 80%에 가깝다(상기 워커(Walker)의 문헌 참조). 불행하게도, 상기 병용요법은 또한 임상적인 문제를 내포하는 부작용을 일으킨다. 우울증, 독감-유사 증상 및 피부 반응은 피하 IFN-α와 관련되고, 용혈성 빈혈은 리바비린에 의한 지속된 치료와 관련된다.

항-HCV 치료제로서 약물 개발을 위한 다수의 잠재적인 분자 표적, 예컨대 NS2-NS3 오토프로테아제, NS3 프로테아제, NS3 헬리카제 및 NS5B 중합효소 등이 현재 규명되었다. RNA-의존성 RNA 중합효소는 절대적으로 양성-센스 단일 가닥 RNA 게놈의 복제에 필수적이다. 이러한 효소는 의학 화학자 사이에서 상당한 관심을 유발하였다.

본 발명의 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염은 또한 서로 조합되거나 다른 생물학적 활성제, 예컨대 비제한적으로 인터페론, 페길화된 인터페론, 리바비린, 프로테아제 억제제, 중합효소 억제제, 작은 간섭 RNA 화합물, 안티센스 화합물, 뉴클레오티드 유사체, 뉴클레오시드 유사체, 면역글로불린, 면역조절제, 간보호제, 항염증제, 항생제, 항바이러스제 및 항감염성 화합물과 함께 사용되는 경우 살아있는 숙주내의 질병 및 바이러스 감염, 특히 C형 간염 감염의 치료 및 예방에 유용하다. 이러한 병용요법은 또한 본 발명의 화합물을 다른 약물 또는 약효 증강제, 예컨대 리바비린 및 관련 화합물, 아만타딘 및 관련 화합물, 다양한 인터페론, 예컨대 인터페론-α, 인터페론-β, 인터페론-γ 등, 및 인터페론의 대체 형태, 예컨대 페길화된 인터페론과 동시에 또는 순차적으로 제공하는 것을 포함할 수 있다. 추가로, 본 발명에 따른 하나 이상의 화합물과 함께, 부가적인 병용 치료법으로서, 리바비린과 인터페론의 조합물이 투여될 수도 있다.

현재 개발중인 다른 인터페론은 알빈터페론-α-2b(알부페론(Albuferon)), IFN-ω(두로스(DUROS)), 록테론(LOCTERON: 상표) 및 인터페론-α-2b XL을 포함한다. 이들 및 다른 인터페론이 시판중이기 때문에, 본 발명의 화합물과의 병용요법에서 이들이 사용될 것으로 예상된다.

HCV 중합효소 억제제가 약물 개발을 위한 또 다른 목표이고, 개발중인 화합물은 R-1626, R-7128, IDX184/IDX102, PF-868554(화이자(Pfizer)), VCH-759(비로켐(Virochem)), GS-9190(길리드(Gilead)), A-837093 및 A-848837(애봇(Abbot)), MK-3281(메르크(Merck)), GSK949614 및 GSK625433(글락소(Glaxo)), ANA598(아나디스(Anadys)) 및 VBY 708(비로베이(ViroBay))을 포함한다.

HCV NS3 프로테아제의 억제제가 또한 HCV의 치료에 잠재적으로 유용한 것으로 확인되었다. 임상 실험중인 프로테아제 억제제는 VX-950(텔라프레비르(Telaprevir), 버텍스(Vertex)), SCH503034(브로셉레비르(Broceprevir), 쉐링(Schering)), TMC435350(티보텍/메디비르(Tibotec/Medivir)) 및 ITMN-191(인터뮨(Intermune))을 포함한다. 초기 개발 단계인 다른 프로테아제 억제제는 MK7009(메르크), BMS-790052(브리스톨 마이어스 스큅(Bristol Myers Squibb)), VBY-376(비로베이), IDXSCA/IDXSCB(이데닉스(Idenix)), BI12202(뵈링거(Boehringer)), VX-500(버텍스) 및 PHX1766(페노믹스(Phenomix))을 포함한다.

연구중인 항-HCV 치료법을 위한 다른 목표는 NS5B에 결합하는 RNA를 억제하는 사이클로필린 억제제, 니타조자나이드, 셀고시비르(Celgosivir)(미게닉스(Migenix)), α-글루코시다제-1의 억제제, 카스파제 억제제, 톨-유사(Toll-like) 수용체 작용제 및 면역자극제, 예컨대 자닥신(Zadaxin)(사이클론(SciClone))을 포함한다.

현재 C형 간염 바이러스(HCV)의 예방법은 존재하지 않고, 현재 HCV에 대해서만 존재하는 승인된 치료법은 제한적이다. 새로운 약학 화합물의 고안 및 개발이 필수적이다.

본 발명은 N-{4-[7-t-부틸-8-메톡시-5-(2-옥소-다이하이드로-피리딘-3-일)-퀴놀린-2-일]-페닐}-메탄설폰아마이드; N-{4-[7-t-부틸-8-메톡시-5-(6-메틸-2-옥소-1,2-다이하이드로-피리딘-3-일)-퀴놀린-2-일]-페닐}-메탄설폰아마이드; 및 N-{4-[7-t-부틸-5-(2,4-다이옥소-3,4-다이하이드로-2H-피리미딘-1-일)-8-메톡시-퀴놀린-2-일]-페닐}-메탄설폰아마이드로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화합물을 포함하는, C형 간염 바이러스(HCV) 감염을 치료 또는 예방하기 위한 약학 조성물을 제공한다.

삭제

본원에 사용된 단수 형태는 하나 또는 그보다 많은 형태를 지칭하고; 예를 들어, 하나의 화합물은 하나 이상의 화합물 또는 적어도 하나의 화합물을 지칭한다. 이와 같이, 용어 "하나", "하나 이상의" 및 "적어도 하나"는 본원에서 상호교환적으로 사용될 수 있다.

"상기 정의된"이란 표현은 발명의 내용 및 광의의 특허청구범위에 제공되는 각각의 기에 대한 가장 넓은 의미의 정의를 나타낸다. 하기 제공되는 모든 다른 실시양태에서, 각각의 실시양태에 존재할 수 있는 명백히 정의되지 않은 치환기는 발명의 내용에 제공된 광의의 의미의 정의를 갖는다.

특허청구범위의 전이구 또는 본문에서, 본원에 사용된 "... 를 포함한다" 및 "... 를 포함하는"이란 문구는 개방적 의미를 갖는 것으로 해석되어야 한다. 즉, 이러한 용어는 "적어도 ... 를 갖는" 또는 "적어도 ... 를 포함하는"이란 문구와 동의어로 해석되어야 한다. 방법의 문맥에서 사용되는 경우, 용어 "포함하는"은 상기 방법이 적어도 인용된 단계를 포함하지만, 부가적인 단계를 포함할 수 있음을 의미한다. 화합물 또는 조성물의 문맥에 사용된 "포함하는"이라는 용어는 상기 화합물 또는 조성물이 적어도 인용된 특징 또는 성분을 포함하지만, 부가적인 특징 또는 성분을 포함할 수 있음을 의미한다.

본원에 사용된 "독립적으로"라는 용어는 변수가 동일한 화합물 내에서 동일하거나 상이한 정의를 갖는 변수의 존재 또는 부재와 무관하게 임의의 경우에 적용됨을 나타내기 위한 것이다. 따라서, R"이 2번 나타나고 "독립적으로 탄소 또는 질소"로 정의된 화합물에서, R"이 둘 다 탄소일 수 있거나, R"이 둘 다 질소일 수 있거나, 하나의 R"이 탄소이고 다른 하나가 질소일 수 있다.

임의의 변수(예컨대, R¹, R^4a, Ar, X¹ 또는 Het)가 본 발명에 사용되거나 청구된 화합물을 도시하고 기술하는 임의의 잔기 또는 화학식에서 1회 초과로 발생하는 경우, 각각의 경우에 이의 정의는 모든 다른 경우의 이의 정의와 독립적이다. 또한, 치환기 및/또는 변수의 조합은 이러한 화합물이 안정한 화합물을 생성하는 경우에만 허용된다.

결합의 말단에서의 기호 "*" 또는 결합을 관통하여 도시된 "

"는 각각 분자의 부분인 작용기 또는 다른 화학적 잔기의 분자의 나머지에 대한 부착 지점을 지칭한다. 따라서, 예를 들어, R⁴가

인 MeC(=O)OR⁴는

이다.

고리 시스템내로 도시된 결합(별개의 정점에서 연결된 결합과는 상반됨)은 상기 결합이 임의의 적합한 고리 원자에 부착될 수 있음을 나타낸다.

본원에 사용된 용어 "선택적인" 또는 "임의로"는 후속적으로 기술된 사건 또는 상황이 필수적이지는 않지만 발생할 수 있고, 이러한 기재가 사건 또는 상황이 발생한 경우 및 발생하지 않은 경우를 포함함을 의미한다. 예를 들어, "임의로 치환되는"은 임의로 치환되는 잔기가 수소 또는 치환기를 포함할 수 있음을 의미한다.

용어 "약"은 대략, 근처의, 개략적으로 또는 대충을 의미하도록 본원에서 사용된다. 용어 "약"이 수치 범위와 함께 사용되는 경우, 이는 인용된 수치 범위 위 및 아래의 경계를 확장함으로써 범위를 변경한다. 일반적으로, 용어 "약"은 20%의 편차만큼 인용된 값 위 및 아래로 수치 값을 변경하도록 본원에 사용된다.

본원에 사용된 바와 같이, 변수에 대한 수치 범위의 인용은 본 발명이 이러한 범위내의 임의의 값과 동일한 변수로 실시될 수 있음을 시사하도록 의도된다. 따라서, 본래 불연속적인 변수의 경우, 변수는 범위의 종말점을 비롯한 수치 범위의 임의의 정수 값과 동일할 수 있다. 유사하게, 본래 연속적인 변수의 경우, 변수는 범위의 종말점을 비롯한 수치 범위의 임의의 실수 값과 동일할 수 있다. 예를 들어, 0 내지 2의 값을 갖는 것으로 기술된 변수는 본래 불연속적인 변수의 경우 0, 1 또는 2일 수 있고, 본래 연속적인 변수의 경우 0.0, 0.1, 0.01, 0.001, 또는 임의의 다른 실수 값일 수 있다.

본 발명의 화합물은 호변이성질성을 나타낸다. 호변이성질성 화합물은 2개 이상의 상호전환가능한 종으로서 존재할 수 있다. 양성자성 호변이성질체는 2개의 원자 사이에 공유 결합된 수소 원자의 이동으로부터 유래한다. 호변이성질체는 일반적으로 평형으로 존재하고, 개별적인 호변이성질체를 단리하기 위한 시도는 통상적으로 이의 화학적 및 물리적 특성이 화합물들의 혼합물과 일치하는 혼합물을 생성한다. 평형의 위치는 분자 내의 화학적 특징에 따라 변한다. 예를 들어, 많은 지방족 알데하이드 및 케톤, 예컨대 아세트알데하이드에서는 케토 형태가 우세한 반면, 페놀에서는 에놀 형태가 우세하다. 통상적인 양성자성 호변이성질체는 케토/에놀(-C(=O)-CH-

-C(-OH)=CH-), 아마이드/이미드산(-C(=O)-NH-

-C(-OH)=N-) 및 아미딘(-C(=NR)-NH-

-C(-NHR)=N-) 호변이성질체를 포함한다. 뒤의 2개는 특히 헤테로아릴 및 헤테로사이클릭 고리에서 통상적이고, 본 발명은 화합물의 모든 호변이성질체 형태를 포함한다.

본 발명의 화합물은 산성 또는 염기성 중심을 함유할 수 있고, 적합한 염은 유사한 항바이러스 활성을 갖는 비-독성 염을 형성할 수 있는 산 또는 염으로부터 형성된다. 무기 산의 염의 예는 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 하이드로요오다이드, 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 설페이트, 바이설페이트, 나이트레이트, 포스페이트, 수소 포스페이트를 포함한다. 유기 산의 염의 예는 아세테이트, 푸마레이트, 파모에이트, 아스파테이트, 베실레이트, 카본에이트, 바이카본에이트, 캄실레이트, D- 및 L-락테이트, D- 및 L-타르트레이트, 에실레이트, 메실레이트, 말론에이트, 오로테이트, 글루셉테이트, 메틸설페이트, 스테아레이트, 글루쿠론에이트, 2-납실레이트, 토실레이트, 히벤제이트, 니코틴에이트, 이세티온에이트, 말레이트, 말리에이트, 시트레이트, 글루콘에이트, 숙신에이트, 사카레이트, 벤조에이트, 에실레이트 및 파모에이트 염을 포함한다. 적합한 염에 대한 검토를 위하여 문헌[Berge et al, J. Pharm. Sci., 1977 66:1-19] 및 문헌[G. S. PaμLekuhn et al. J. Med. Chem. 2007 50:6665]을 참고한다.

본원에 사용된 기술적 및 과학적 용어는 달리 정의되지 않는 한 본 발명이 속하는 분야의 숙련자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 갖는다. 당업자에게 공지된 다양한 방법론 및 물질이 본원에 참고된다. 약리학의 일반적인 원리를 설명하는 표준 참고 문헌은 문헌[Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th Ed., McGraw Hill Companies Inc., New York (2001)]을 포함한다. 화합물을 제조하는데 사용된 출발 물질 및 시약은 일반적으로 상업적인 공급자, 예컨대 알드리치 케미칼 캄파니(Aldrich Chemical Co.)가 시판중이거나, 문헌에 설명된 과정에 따라서 당업자에게 공지된 방법으로 제조된다. 하기 명세서 및 실시예에 참고된 물질, 시약 등은 달리 지시되지 않는 한 상업적인 공급원에 의해 수득가능하다. 일반적인 합성 과정은 논문, 예컨대 문헌[Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis; Wiley & Sons: New York, Volumes 1-21]; 문헌[R. C. LaRock, Comprehensive Organic Transformations, 2nd edition Wiley-VCH, New York 1999]; 문헌[Comprehensive Organic Synthesis, B. Trost and I. Fleming (Eds.) vol. 1-9 Pergamon, Oxford, 1991]; 문헌[Comprehensive Heterocyclic Chemistry, A. R. Katritzky and C. W. Rees (Eds) Pergamon, Oxford 1984, vol. 1-9]; 문헌[Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, A. R. Katritzky and C. W. Rees (Eds) Pergamon, Oxford 1996, vol. 1-11]; 및 문헌[Organic Reactions, Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-40]에 기술되어 있고, 당업자에게 익숙할 것이다.

삭제

본 발명의 다른 실시양태에서, R¹, R², R³, R⁴, R^4a, R^4b, R^4c, R⁵, R^a, R^b, R^c, R^d, R^e, R^f, R^g 및 n이 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 본 발명의 화합물을 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제와 함께 포함하는 조성물이 제공된다.

추가의 제한 없이 단독으로 또는 다른 기와 함께 본원에 사용된 용어 "알킬"은 1 내지 10개의 탄소 원자를 함유하는 비분지쇄 또는 분지쇄 포화 1가 탄화수소 잔기를 나타낸다. 본원에 사용된 "C_1-6 알킬"은 1 내지 6개의 탄소로 이루어진 알킬을 지칭한다. 알킬 기의 예는, 비제한적으로, 저급 알킬 기, 예컨대 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, t-부틸, 네오펜틸, 헥실 및 옥틸을 포함한다. 임의의 탄소 수소 결합은 본 발명의 범주로부터 출발하여 탄소 중수소 결합에 의해 대체될 수 있다.

본원에 기술된 정의가 덧붙어 화학적으로 관련된 조합, 예컨대 "헤테로알킬아릴", "할로알킬헤테로아릴", "아릴알킬헤테로사이클릴", "알킬카보닐", "알콕시알킬" 등을 형성할 수 있다. 용어 "알킬"이 "페닐알킬" 또는 "하이드록시알킬"에서와 같이 다른 용어 뒤에서 접미사로 사용되는 경우, 이는 다른 구체적으로 명명된 기로부터 선택된 1 또는 2개의 치환기로 치환되는 상기 정의된 바와 같은 알킬 기를 지칭한다. 따라서, 예를 들어, "페닐알킬"은 1 또는 2개의 페닐 치환기를 갖는 알킬 기를 지칭하고, 이에 따라 벤질, 페닐에틸 및 바이페닐을 포함한다. "알킬아미노알킬"은 1 또는 2개의 알킬아미노 치환기를 갖는 알킬 기이다. "하이드록시알킬"은 2-하이드록시에틸, 2-하이드록시프로필, 1-(하이드록시메틸)-2-메틸프로필, 2-하이드록시부틸, 2,3-다이하이드록시부틸, 2-(하이드록시메틸), 3-하이드록시프로필 등을 포함한다. 따라서, 본원에 사용된 용어 "하이드록시알킬"은 하기 정의된 헤테로알킬 기의 부분 집합을 정의하기 위해 사용된다. 용어 "(아르)알킬"은 비치환된 알킬 또는 아르알킬 기를 지칭한다. 용어 "(헤테로)아릴" 또는 "(헤테로)아릴"은 아릴 또는 헤테로아릴 기를 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "알킬렌"은, 달리 지시되지 않는 한, 1 내지 10개의 탄소 원자로 이루어진 2가 포화 선형 탄화수소 라디칼(예컨대, (CH₂)_n), 또는 2 내지 10개의 탄소 원자로 이루어진 2가 포화 분지형 탄화수소 라디칼(예컨대, -CHMe- 또는 -CH₂CH(i-Pr)CH₂-)을 나타낸다. C_0-4 알킬렌은 1 내지 4개의 탄소 원자를 포함하는 2가 포화 선형 또는 분지형 탄화수소 라디칼을 지칭하거나, 또는 C₀인 경우 알킬렌 라디칼은 생략된다. 메틸렌인 경우를 제외하고는, 알킬렌 기의 개방 원자가(open valence) 전자가 동일한 원자에 부착되지 않는다. 알킬렌 라디칼의 예는, 비제한적으로, 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌, 2-메틸-프로필렌, 1,1-다이메틸-에틸렌, 부틸렌, 2-에틸부틸렌을 포함한다.

본원에 사용된 용어 "알콕시"는 -O-알킬 기(이때, 알킬은 상기 정의된 바와 같다), 예컨대 메톡시, 에톡시, n-프로필옥시, i-프로필옥시, n-부틸옥시, i-부틸옥시, t-부틸옥시, 펜틸옥시, 헥실옥시 및 이들의 이성질체를 의미한다. 본원에 사용된 "저급 알콕시"는 상기 정의된 "저급 알킬" 기를 갖는 알콕시 기를 나타낸다. 본원에 정의된 "C_1-10 알콕시"는 알킬이 C_1-10인 -O-알킬을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "할로알킬"은 1, 2, 3개 또는 그 이상의 수소 원자가 할로겐으로 치환된 상기 정의된 바와 같은 비분지쇄 또는 분지쇄 알킬 기를 나타낸다. 예는 1-플루오로메틸, 1-클로로메틸, 1-브로모메틸, 1-요오도메틸, 다이플루오로메틸, 트라이플루오로메틸, 트라이클로로메틸, 1-플루오로에틸, 1-클로로에틸, 2-플루오로에틸, 2-클로로에틸, 2-브로모에틸, 2,2-다이클로로에틸, 3-브로모프로필 또는 2,2,2-트라이플루오로에틸이다. 본원에 사용된 용어 "플루오로알킬"은 할로겐이 불소인 할로알킬 잔기를 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "아실"(또는 "알칸오일")은 식 -C(=O)R의 기(이때, R은 수소 또는 본원에 정의된 저급 알킬임)를 나타낸다. 본원에 사용된 용어 "알킬카보닐"은 식 C(=O)R의 기(이때, R은 본원에 정의된 알킬임)를 나타낸다. 용어 "C_1-6 아실" 또는 "알칸오일"은 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 기 -C(=O)R을 나타낸다. C₁ 아실 기는 폼일 기(이때, R = H)이고, C₆ 아실 기는 알킬 쇄가 분지되지 않은 헥산오일을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "아릴카보닐" 또는 "아로일"은 식 C(=O)R의 기(이때, R은 아릴 기임)를 의미하고, 본원에 사용된 용어 "벤조일"은 R이 페닐인 "아릴카보닐" 또는 "아로일" 기이다.

본원에 사용된 용어 "알킬설포닐" 및 "아릴설포닐"은 식 -S(=O)₂R의 기(이때, R은 각각 알킬 또는 아릴이고, 알킬 및 아릴은 본원에 정의된 바와 같음)를 나타낸다. 본원에 사용된 용어 "C_1-3 알킬설포닐아미도"는 기 RSO₂NH-(이때, R은 본원에 정의된 C_1-3 알킬 기임)를 지칭한다. 용어 "C_1-6 할로알킬설포닐", "C_3-7 사이클로알킬설포닐", "C_3-7 사이클로알킬-C_1-3 알킬설포닐" 또는 "C_1-6 알콕시-C_1-6 알킬설포닐"은 R이 각각 C_1-6 할로알킬, C_3-7 사이클로알킬, C_3-7 사이클로알킬-C_1-3 알킬 및 C_1-6 알콕시-C_1-6 알킬인 화합물 S(=O)₂R을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "알킬설포닐아미도" 및 "아릴설포닐아미도"는 화학식 -NR'S(=O)₂R의 기(이때, R은 각각 알킬 또는 아릴이고, R'는 수소 또는 C₁ _-3 알킬이고, 알킬 및 아릴은 본원에 정의된 바와 같음)를 나타낸다. 용어 "설포닐아미노"는 접두사로서 사용될 수 있는 반면 "설포닐아마이드"는 상응하는 접미사이다.

본원에 사용된 용어 "사이클로알킬"은 3 내지 8개의 탄소 원자를 함유하는 포화 탄소환 고리, 즉, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸 또는 사이클로옥틸을 나타낸다. 본원에 사용된 "C_3-7 사이클로알킬"은 탄소환 고리 중 3 내지 7개의 탄소로 이루어진 사이클로알킬을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "사이클로알킬알킬"은 라디칼 R'R"-를 지칭하고, 상기 R'은 본원에 정의된 바와 같이 사이클로알킬 라디칼이고, R"은 사이클로알킬알킬 잔기의 부착점이 알킬렌 라디칼인 것으로 이해하여 본원에 정의된 바와 같은 알킬렌 라디칼이다. 사이클로알킬알킬 라디칼의 예는, 비제한적으로 사이클로프로필메틸, 사이클로헥실메틸 및 사이클로펜틸에틸을 포함한다. C_3-7 사이클로알킬-C_1-3 알킬은 라디칼 R'R"을 지칭하고, 상기 R'은 C_3-7 사이클로알킬이고, R"은 본원에 정의된 바와 같은 C_1-3 알킬렌이다.

본원에 사용된 용어 "할로겐" 또는 "할로"는 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 의미한다.

본원에 사용된 용어 "하이드록시알킬" 및 "알콕시알킬"은 상이한 탄소 원자상의 1 내지 3개의 수소 원자가 각각 하이드록실 또는 알콕시 기로 대체된, 본원에 정의된 바와 같은 알킬 라디칼을 나타낸다. C₁ _-3 알콕시-C₁ _-6 알킬 잔기는 1 내지 3개의 수소 원자가 C₁ _-3알콕시로 대체되고, 알콕시의 부착 지점이 산소 원자인 C₁ _-6 알킬 치환기를 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "알콕시카보닐" 및 "아릴옥시카보닐"은 식 -C(=O)OR의 기(이때, R은 각각 알킬 또는 아릴이고, 알킬 및 아릴은 본원에 정의된 바와 같음)를 나타낸다.

본원에 사용된 용어 "시아노"는 삼중 결합에 의해 질소에 연결된 탄소, 즉, -C≡N을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "니트로"는 기 -NO₂를 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "카복시"는 기 -CO₂H를 지칭한다.

용어 "옥소"는 이중 결합된 산소(=O), 즉 카보닐 기를 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "아실"(또는 "알칸오일")은 식 -C(=O)R의 기(이때, R은 수소 또는 본원에 정의된 저급 알킬임)를 나타낸다. 본원에 사용된 용어 "알킬카보닐"은 식 C(=O)R의 기(이때, R은 본원에 정의된 알킬임)를 나타낸다. 용어 "C_1-6 아실" 또는 "알칸오일"은 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 기 -C(=O)R을 나타낸다. C₁ 아실 기는 폼일 기(이때, R은 H임)이고, C₆ 아실 기는 알킬 쇄가 분지되지 않은 헥산오일을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "아릴카보닐" 또는 "아로일"은 식 C(=O)R의 기(이때, R은 아릴 기임)를 의미하고, 본원에 사용된 용어 "벤조일"은 R이 페닐인 "아릴카보닐" 또는 "아로일" 기이다.

본원에 사용된 용어 "헤테로아릴"은 추가 정의 또는 제한 없이 "피리디닐", "피라지닐" 및 "피리다지닐" 고리를 나타낸다. 용어 "피리딘"("피리디닐")은 1개의 질소 원자를 갖는 6-원 헤테로방향족 고리를 지칭한다. 용어 "피리미딘"(피리미디닐), "피라진"("피라지닐") 및 "피리다진"("피리다지닐")은 각각 1,3, 1,4 및 1,2 관계로 배치된 2개의 질소 원자를 갖는 6-원 비융합된 헤테로방향족 고리를 지칭한다. 각각의 라디칼 명칭이 괄호 안에 제시되어 있다.

본원에 사용된 용어 "설파모일"은 라디칼 -S(O)₂NH₂를 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "N-알킬설파모일" 및 "N,N-다이알킬설파모일"은 각각 R' 및 R"이 수소 및 저급 알킬이고, R' 및 R"이 독립적으로 저급 알킬인 라디칼 -S(O)₂NR'R"을 나타낸다. N-알킬설파모일 치환기의 예는, 비제한적으로, 메틸아미노설포닐, 이소-프로필아미노설포닐을 포함한다. N,N-다이알킬설파모일 치환기의 예는, 비제한적으로, 다이메틸아미노설포닐, 이소-프로필-메틸아미노설포닐을 포함한다.

본원에 사용된 용어 "카바모일"은 라디칼 -CONH₂를 의미한다. 접두사 "N-알킬카바모일" 및 "N,N-다이알킬카바모일"은 각각 라디칼 CONHR' 또는 CONR'R"(이때, R' 및 R" 기는 독립적으로 본원에 정의된 알킬임)을 의미한다. 접두사 "N-아릴카바모일"은 라디칼 CONHR'(이때, R'은 본원에 정의된 아릴 라디칼임)을 나타낸다.

본원에 사용된 용어 "알킬설피닐" 및 "아릴설피닐"은 식 -S(=O)R의 기(이때, R은 각각 알킬 또는 아릴이고, 알킬 및 아릴은 본원에 정의된 바와 같음)을 나타낸다.

본원에 사용된 용어 "알킬설포닐" 및 "아릴설포닐"은 식 -S(=O)₂R의 기(이때, R은 각각 알킬 또는 아릴이고, 알킬 및 아릴은 본원에 정의된 바와 같음)를 나타낸다.

본원에 사용된 용어 "벤질"은 C₆H₅CH₂ 라디칼을 지칭하되, 페닐 고리는 달리 언급되지 않는 한, 독립적으로 하이드록시, 티오, 시아노, 알킬, 알콕시, 저급 할로알콕시, 알킬티오, 할로겐, 할로알킬, 하이드록시알킬, 니트로, 알콕시카보닐, 아미노, 알킬아미노, 다이알킬아미노, 아미노알킬, 알킬아미노알킬, 다이알킬아미노알킬, 알킬설포닐, 아릴설피닐, 알킬아미노설포닐, 아릴아미노설포닐, 알킬설포닐아미노, 아릴설포닐아미노, 카바모일, 알킬카바모일, 다이알킬카바모일, 아릴카바모일, 알킬카보닐아미노 및 아릴카보닐아미노로부터 선택된 1개 이상, 바람직하게는 1 또는 3개의 치환기로 임의로 치환될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "헤테로아릴"은 추가 정의 또는 제한없이 "피리디닐", "피라지닐" 및 "피리다지닐" 고리를 지칭한다. 용어 "피리딘"("피리디닐)은 1개의 질소 원자를 갖는 6-원 헤테로방향족 고리를 지칭한다. 용어 "피리미딘"(피리미디닐), "피라진"("피라지닐") 및 "피리다진"("피리다지닐")은 각각 1,3, 1,4 및 1,2 관계로 배치된 2개의 질소 원자를 갖는 6-원 비융합된 헤테로방향족 고리를 나타낸다. 각각의 라디칼 명칭이 괄호 안에 제시되어 있다.

용어 "옥세탄"("옥세타닐"), "테트라하이드로푸란"("테트라하이드로푸라닐") 및 "테트라하이드로피란"("테트라하이드로피라닐")은 각각 1개의 산소 원자를 각각 함유하는 4-, 5- 및 6-원 비융합된 헤테로사이클릭 고리를 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "아릴"은 페닐을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "사이클릭 아민"은 상기 정의된 바와 같이 3 내지 6개의 탄소 원자를 함유하고 하나 이상의 탄소 원자가 N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로원자에 의해 대체된 포화 탄소 고리, 예를 들어, 피페리딘, 피페라진, 모폴린, 티오모폴린, 다이-옥소-티오모폴린, 피롤리딘, 피라졸린, 이미다졸리딘, 아제티딘(이때, 사이클릭 탄소 원자는 할로겐, 하이드록시, 페닐, 저급 알킬 및 저급 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 임의로 치환되거나, 탄소상의 2-수소 원자는 둘 다 옥소(=O)로 대체됨)을 지칭한다. 사이클릭 아민이 피페라진인 경우, 하나의 질소 원자는 C₁ _-6 알킬, C₁ _-6 아실 또는 C₁ _-6 알킬설포닐로 임의로 치환될 수 있다.

용어 (i) 2,4-다이옥소-1,2,3,4-테트라하이드로-피리미딘-5-일(R⁵가 H인 경우), (ii) 2,4-다이옥소-3,4-다이하이드로-2H-피리미딘-1-일, (iii) 2,4-다이옥소-1,2,3,4-테트라하이드로-2H-피리미딘-1-일, 또는 (iv) 3-메틸-5-옥소-1,5-다이하이드로-[1,2,4]트라이아졸-4-일은 하기 잔기를 지칭한다:

(i) 3-옥소-3,4-다이하이드로-피라진-2-일, (ii) 3-옥소-2,3-다이하이드로-피리다진-4-일, (iii) 2-옥소-1,2-다이하이드로-피리미딘-4-온-5-일, (iv) 2-옥소-1,2-다이하이드로-피리딘-3-일 및 (v) 6-옥소-1,6-다이하이드로-[1,2,4]트라이아진-5-일.

통상적으로 사용되는 약어는 다음과 같다: 아세틸(Ac), 수성(aq.), 대기(Atm), 2,2'-비스(다이페닐포스피노)-1,1'-바이나프틸(BINAP), t-부톡시카보닐(Boc), 다이-t-부틸 피로카본에이트 또는 Boc 무수물(Boc₂O), 벤질(Bn), 부틸(Bu), 화학 초록 등록 번호(CASRN), 벤질옥시카보닐(CBZ 또는 Z), 카보닐 다이이미다졸(CDI), 1,5-다이아자바이사이클로[4.3.0]논-5-엔(DBN), 1,8-다이아자바이사이클로[5.4.0]운데크-7-엔(DBU), N,N'-다이사이클로헥실카보다이이미드(DCC), 1,2-다이클로로에탄(DCE), 다이클로로메탄(DCM), 다이에틸 아조다이카복실레이트(DEAD), 다이-이소-프로필아조다이카복실레이트(DIAD), 다이-이소-부틸알루미늄하이드라이드(DIBAL 또는 DIBAL-H), 다이-이소-프로필에틸아민(DIPEA), N,N-다이메틸 아세트아마이드(DMA), 4-N,N-다이메틸아미노피리딘(DMAP), N,N-다이메틸폼아마이드(DMF), 다이메틸 설폭사이드(DMSO), 1-(3-다이메틸아미노프로필)-3-에틸카보다이이미드 하이드로클로라이드(EDCI), 에틸(Et), 에틸 아세테이트(EtOAc), 에탄올(EtOH), 2-에톡시-2H-퀴놀린-1-카복실산 에틸 에스터(EEDQ), 다이에틸 에터(Et₂O), O-(7-아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N'N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 아세트산(HATU), 아세트산(HOAc), 1-N-하이드록시벤조트라이아졸(HOBt), 고압 액체 크로마토그래피(HPLC), 이소-프로판올(IPA), 메탄올(MeOH), 융점(mp), MeSO₂-(메실 또는 Ms), 메틸(Me), 아세토나이트릴(MeCN), m-클로로퍼벤조산(MCPBA), 질량 스펙트럼(ms), 메틸 t-부틸 에터(MTBE), N-메틸모폴린(NMM), N-메틸피롤리돈(NMP), 페닐(Ph), 프로필(Pr), 이소-프로필(i-Pr), 평방 인치 당 파운드(psi), 피리딘(pyr), 실온(rt 또는 RT), 포화된(satd.), t-부틸다이메틸실릴 또는 t-BuMe₂Si(TBDMS), 트라이에틸아민(TEA 또는 Et₃N), 트라이플레이트 또는 CF₃SO₂-(Tf), 트라이플루오로아세트산(TFA), O-벤조트라이아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(TBTU), 박층 크로마토그래피(TLC), 테트라하이드로푸란(THF), 테트라메틸에틸렌다이아민(TMEDA), 트라이메틸실릴 또는 Me₃Si(TMS), p-톨루엔설폰산 모노하이드레이트(TsOH 또는 pTsOH), 4-Me-C₆H₄SO₂- 또는 토실(Ts), N-우레탄-N-카복시무수물(UNCA). 접두사 노말(n-), 이소(i-), 2차(sec-), 3차(t-) 및 네오(neo-)를 비롯한 통상적인 명명법은 알킬 잔기와 함께 사용되는 경우 통상적인 의미를 갖는다(문헌[J. Rigaudy and D. P. Klesney, Nomenclature in Organic Chemistry, IUPAC 1979 Pergamon Press, Oxford.]).

본 발명의 화합물은 하기 표 1에 제공된다.

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HCV 활성의 억제제로서 본 발명의 화합물의 활성은 당업자에게 공지된 임의의 적합한 방법, 예컨대 생체내 및 시험관내 분석에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, 화학식 I의 화합물의 HCV NS5B 억제 활성은 문헌[Behrens et al., EMBO J. 1996 15:12-22, Lohmann et al., Virology 1998 249:108-118] 및 문헌[Ranjith-Kumar et al., J. Virology 2001 75:8615-8623]에 기술된 표준 분석 과정을 사용하여 측정될 수 있다. 달리 지시되지 않는 한, 본 발명의 화합물은 이러한 표준 방법으로 시험관내 HCV NS5B 억제 활성을 보여 주었다. 본 발명의 화합물에 사용된 HCV 중합효소 분석 조건은 실시예 4에 기술되어 있다. HCV에 대한 세포-기반 레플리콘 시스템이 개발되었고, 이때 비-구조 단백질은 Huh7 세포에서 서브게놈 바이러스 RNA를 안정적으로 복제한다(문헌[V. Lohmann et al., Science 1999 285:110] 및 문헌[K. J. Blight et al., Science 2000 290:1972] 참고). 본 발명의 화합물에 사용된 세포-기반 레플리콘 분석 조건은 실시예 5에 기술되어 있다. 바이러스 비-구조 및 숙주 단백질로 이루어진 정제된 기능성 HCV 복제효소의 부재하에, 본 발명자들의 플라비비리다에 RNA 합성은 활성 재조합 RNA-의존성 RNA-중합효소 및 HCV 레플리콘 시스템에서의 이러한 연구의 입증으로부터 이해된다. 시험관내 생화학 분석에서 화합물에 의한 재조합 정제된 HCV 중합효소의 억제는 중합효소가 적절한 화학량론으로 다른 바이러스 및 세포 폴리펩티드와 결합된 복제효소 착물내에 존재하는 레플리콘 시스템을 사용하여 입증될 수 있다. HCV 복제의 세포-기반 억제의 입증은 시험관내 생화학 분석에서의 HCV NS5B 억제 활성의 입증보다는 생체내 기능을 더욱 잘 예측하는 것일 수 있다.

본 발명의 화합물은 광범위한 경구 투여 형태 및 담체로 제형화될 수 있다. 경우 투여는 정제, 코팅된 정제, 당의정, 경질 및 연질 젤라틴 캡슐, 용액, 에멀젼, 시럽 또는 현탁액일 수 있다. 본 발명의 화합물은 특히 연속(정맥내 적하) 국소 비경구, 근육내, 정맥내, 피하, 경피(침투 강화제를 포함할 수 있음), 구강, 비강, 흡입 및 좌제 투여를 비롯한 다른 투여 경로로 투여되는 경우 효능이 있다. 바람직한 투여 방식은 일반적으로 편리한 일일 투여 섭생법을 사용하는 경구 투여이고, 이는 활성 성분에 대한 환자의 반응 및 고통의 정도에 따라 조정될 수 있다.

본 발명의 화합물 및 이의 약학적으로 사용가능한 염은 하나 이상의 통상적인 부형제, 담체 또는 희석제와 함께 약학 조성물 및 단위 투여의 형태로 될 수 있다. 약학 조성물 및 단위 투여의 형태는 부가적인 활성 화합물 또는 성분의 존재 또는 부재하에 통상적인 비율의 통상적인 성분으로 이루어질 수 있고, 단위 투여 형태는 사용될 목적 일일 투여량 범위에 적당한 활성 성분의 임의의 적절한 효과량을 함유할 수 있다. 약학 조성물은 고체, 예컨대 정제 또는 충전된 캡슐, 반고체, 분말, 서방형 제형, 또는 액체, 예컨대 용액, 현탁액, 에멀젼, 엘릭시르, 또는 경구 사용을 위한 충전된 캡슐로서; 또는 직장 또는 질 투여를 위한 좌제의 형태로; 또는 비경구 사용을 위한 멸균 주사용 용액의 형태로 사용될 수 있다. 전형적인 제제는 약 5 내지 약 95%의 활성 화합물(w/w)을 함유한다. 용어 "제제" 또는 "투여 형태"는 활성 화합물의 고체 및 액체 제형 둘 다를 포함하는 것으로 의도되고, 당업자는 활성 성분이 표적 기관 또는 조직 및 목적 투여량 및 약동학적 변수에 따라서 상이한 비율로 존재할 수 있음을 인식할 것이다.

본원에 사용된 용어 "부형제"는 약학 조성물의 제조에 유용하고, 일반적으로 안전하고 비-독성이고 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않지 않은 화합물을 지칭하고, 인간 약학 용도뿐만 아니라 수의학 용도에 허용되는 부형제를 포함한다. 본 발명의 화합물은 단독으로 투여될 수 있지만, 일반적으로 의도하는 투여 경로 및 표준 약학 실무를 고려하여 선택된 하나 이상의 적합한 약학 부형제, 희석제 또는 담체와 혼합되어 투여된다.

"약학적으로 허용가능한"은 약학 조성물의 제조에 유용하고, 일반적으로 안전하고 비-독성이고 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않지 않음을 의미하고, 인간 약학 용도에 허용될 수 있는 것을 포함한다.

활성 성분의 "약학적으로 허용가능한 염" 형태는 또한 처음에 비-염 형태에서는 부재하는 바람직한 약동학적 특성을 활성 성분에 부여하고, 심지어 신체에서의 치료 활성에 관해 활성 성분의 약력학에 긍정적인 영향을 줄 수 있다. 화합물의 "약학적으로 허용가능한 염"이란 어구는 약학적으로 허용되고 모 화합물의 목적 약리 활성을 갖는 염을 의미한다. 이러한 염은 (1) 산 부가 염(무기 산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등에 의해 형성되거나; 또는 유기 산, 예컨대 아세트산, 프로피온산, 헥산산, 사이클로펜탄프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 락트산, 말론산, 숙신산, 말산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 3-(4-하이드록시벤조일)벤조산, 신남산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 1,2-에탄-다이설폰산, 2-하이드록시에탄설폰산, 벤젠설폰산, 4-클로로벤젠설폰산, 2-나프탈렌설폰산, 4-톨루엔설폰산, 캠퍼설폰산, 4-메틸바이사이클로[2.2.2]-옥트-2-엔-1-카복실산, 글루코헵톤산, 3-페닐프로피온산, 트라이메틸아세트산, 3차 부틸아세트산, 로릴 황산, 글루콘산, 글루탐산, 하이드록시나프토산, 살리실산, 스테아르산, 무콘산 등에 의해 형성됨); 또는 (2) 모 화합물에 존재하는 산성 양성자가 금속 이온, 예컨대 알칼리 금속 이온, 알칼리 토금속 이온, 또는 알루미늄 이온에 의해 대체되거나; 또는 유기 염기, 예컨대 에탄올아민, 다이에탄올아민, 트라이에탄올아민, 트로메타민, N-메틸글루카민 등에 의해 배위되는 경우에 형성되는 염을 포함한다.

고체 형태 제제는 분말, 정제, 환제, 캡슐, 교갑, 좌제 및 분산성 과립을 포함한다. 고체 담체는 희석제, 향미제, 가용화제, 윤활제, 현탁제, 결합제, 보존제, 정제 붕해제, 또는 캡슐화 물질로서 작용할 수도 있는 하나 이상의 물질일 수 있다. 분말의 경우, 담체는 일반적으로 미세하게 분할된 활성 성분과의 혼합물인 미세하게 분할된 고체이다. 정제의 경우, 활성 성분은 일반적으로 적합한 비율로 필수적인 결합 용량을 갖고 목적 형태 및 크기로 압축된 담체와 혼합된다. 적합한 담체는 비제한적으로 탄산 마그네슘, 스테아르산 마그네슘, 활석, 당, 락토스, 펙틴, 덱스트린, 전분, 젤라틴, 트라가칸트, 메틸셀룰로스, 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 저융점 왁스, 코코아 버터 등을 포함한다. 고체 형태 제제는, 활성 성분 외에, 착색제, 향미제, 안정화제, 완충제, 인공 및 천연 감미제, 분산제, 증점제, 가용화제 등을 함유할 수 있다.

경구 투여에 적합한 액체 제형은 에멀젼, 시럽, 엘릭시르, 수용액, 수성 현탁액을 비롯한 액체 제형을 포함한다. 이들은 사용 직전에 액체 형태 제제로 전환되도록 의도되는 고체 형태 제제를 포함한다. 에멀젼은 용액, 예를 들어, 프로필렌 글리콜 수용액중에서 제조될 수 있거나, 또는 에멀젼화제, 예컨대 레시틴, 소르비탄 모노올레에이트 또는 아카시아를 함유할 수 있다. 수용액은 활성 성분을 물에 용해시키고, 적합한 착색제, 향미제, 안정화제 및 증점제를 첨가함으로써 제조될 수 있다. 수성 현탁액은 미세하게 분할된 활성 성분을 점성 물질, 예컨대 천연 또는 합성 검, 수지, 메틸셀룰로스, 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 및 다른 널리 공지된 현탁제와 함께 물에 분산시킴으로써 제조될 수 있다.

본 발명의 화합물은 경구 투여를 위해 제형화될 수 있고(예컨대, 주사, 예를 들어 일시 주사 또는 연속 주입에 의해), 앰풀, 예비-충전된 주사기, 작은 부피 유입, 또는 첨가된 보존제를 갖는 다중-투여 용기 중의 단위 투여 형태로 존재할 수 있다. 상기 조성물은 유성 또는 수성 비히클 중의 현탁액, 용액 또는 에멀젼, 예를 들어 수성 폴리에틸렌 글리콜 중의 용액과 같은 형태를 가질 수 있다. 유성 또는 비-수성 담체, 희석제, 용매 또는 비히클의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일(예컨대, 올리브 오일), 및 주사용 유기 에스터(예컨대, 에틸 올레에이트)를 포함할 수 있고, 제형화제, 예컨대 보존제, 습윤제, 에멀젼화제 또는 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제를 함유할 수 있다. 다르게는, 상기 활성 성분은 멸균 고체의 무균 단리에 의해, 또는 적합한 비히클, 예컨대 멸균 발열원-부재 물에 의한 사용 전의 구성을 위한 용액으로부터의 동결건조에 의해 수득된 분말 형태일 수 있다.

본 발명의 화합물은 표피로의 국소 투여를 위해 연고, 크림, 로션 또는 경피 패치로서 제형화될 수 있다. 연고 및 크림은, 예를 들어, 적합한 증점제 및/또는 겔화제를 첨가하여 수성 또는 유성 베이스로 제형화될 수 있다. 로션은 수성 또는 유성 베이스로 제형화될 수 있고, 일반적으로 하나 이상의 에멀젼화제, 안정화제, 분산제, 현탁제, 증점제 또는 착색제를 또한 함유한다. 구강내의 국소 투여에 적합한 제형은 향미제 기재, 통상적으로 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸트내에 활성 약품을 포함하는 로젠지; 불활성 베이스, 예컨대 젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아내에 활성 성분을 포함하는 향정; 및 적합한 액체 담체내에 활성 성분을 포함하는 구강 세척액을 포함한다.

본 발명의 화합물은 좌제로서 투여하기 위해 제형화될 수 있다. 저융점 왁스, 예컨대 지방 산 글리세라이드 또는 코코아 버터의 혼합물이 먼저 용융되고, 활성 성분이, 예를 들어 교반에 의해 균질하게 분산된다. 이어서, 용융된 균질한 혼합물을 적절한 크기의 주형에 붓고, 냉각하고, 고체화시킨다.

본 발명의 화합물은 질 투여를 위해 제형화될 수 있다. 활성 성분 외에 상기 담체를 함유하는 페서리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 포말 또는 분말이 당해 분야에 적절한 것으로서 공지되어 있다. 본 발명의 화합물은 비강 투여를 위해 제형화될 수 있다. 용액 또는 현탁액은 통상적인 수단, 예를 들어, 점적기, 피펫 또는 분무기에 의해 비강에 직접 적용된다. 제형은 단위 또는 다중-투여 형태로 제공될 수 있다. 점적기 또는 피펫의 후자의 경우, 적절한 소정 부피의 용액 또는 현탁액을 투여하는 환자에 의해 달성될 수 있다. 스프레이의 경우, 예를 들어 칭량 분무 스프레이 펌프에 의해 달성될 수 있다.

본 발명의 화합물은 특히 기도로의 에어로졸 투여, 예컨대 비강내 투여를 위해 제형화될 수 있다. 화합물은 일반적으로, 예를 들어 약 5 ㎛ 이하의 작은 입자 크기를 갖는다. 이러한 입자 크기는 당해 분야에 공지된 수단, 예를 들어 마이크로화에 의해 수득될 수 있다. 활성 성분은 적합한 추진제, 예컨대 클로로플루오로카본(CFC), 예를 들어 다이클로로다이플루오로메탄, 트라이클로로플루오로메탄, 다이클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체에 의해 가압된 팩으로 제공된다. 에어로졸은 또한 계면활성제, 예컨대 레시틴을 편리하게 함유할 수 있다. 약물의 투여량은 칭량된 밸브에 의해 제어될 수 있다. 다르게는, 활성 성분을 무수 분말의 형태, 예를 들어 적합한 분말 베이스, 예컨대 락토스, 전분, 전분 유도체, 예컨대 하이드록시프로필메틸 셀룰로스 및 폴리비닐피롤리딘(PVP)중의 화합물의 분말 믹스로 제공될 수 있다. 분말 담체는 비강내에 겔을 형성한다. 분말 조성물은 단위 투여 형태, 예를 들어 분말이 흡입기에 의해 투여될 수 있는, 젤라틴 또는 블리스터 팩의 캡슐 또는 카트리지로 존재할 수 있다.

필요한 경우, 제형은 활성 성분의 지속되거나 제어된 방출 투여를 위해 채택된 장용 코팅으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 경피 또는 피하 약물 전달 장치로 제형화될 수 있다. 이러한 전달 시스템은 화합물의 지속된 방출이 필요한 경우 및 치료 섭생법과의 환자 순응도가 중요한 경우 유리하다. 경피 전달 시스템중 화합물은 종종 피부-접착성 고체 지지체에 부착된다. 해당 화합물은 또한 침투 강화제, 예컨대 아존(Azone)(1-도데실아자-사이클로헵탄-2-온)과 조합될 수 있다. 지속 방출 전달 시스템은 수술 또는 주사에 의해 피하 층으로 피하 삽입된다. 피하 이식물은 액체 가용성 막, 예컨대 실리콘 고무, 또는 생체분해성 중합체, 예컨대 폴리락트산내에 화합물을 캡슐화시킨다.

적합한 제형은 약학 담체, 희석제 및 부형제와 함께 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, edited by E. W. Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pennsylvania]에 기술되어 있다. 숙련된 제형 과학자는 명세서의 교시내용 중의 제형을 개질하여 본 발명의 조성물을 불안정하게 하거나 이의 치료 활성을 손상시키지 않으면서 특정 투여 경로를 위한 많은 제형을 제공할 수 있다.

물 또는 다른 비히클에서 더욱 가용성이 되도록 하는 본 발명의 화합물의 개질은, 예를 들어 당해 분야의 통상적인 지식에 속하는 사소한 개질(염 제형화, 에스터화 등)에 의해 용이하게 달성될 수 있다. 환자의 최대한 이로운 효과를 위한 본 발명의 화합물의 약동학을 관리하기 위하여 특정 화합물의 투여 경로 및 투여 섭생을 개질하는 것이 또한 당해 분야의 통상적인 기술에 속한다.

본원에 사용된 용어 "치료 효과량"은 개체의 질병의 증상을 완화시키는데 요구되는 양을 의미한다. 투여량은 각각의 특정 경우에 개별적인 요건에 따라 조정된다. 이러한 투여량은 수많은 인자, 예컨대 치료되는 질병의 중증도, 환자의 연령 및 일반적인 건강 상태, 환자가 치료받고 있는 다른 약제, 투여 경로 및 관여하는 의료진의 선호도 및 경험에 따라 광범위한 한계 내에서 변할 수 있다. 경구 투여의 경우, 1일 당 약 0.01 내지 1,000 mg/kg 체중의 일일 투여량이 단일 요법 및/또는 병용 요법에 적합하여야 한다. 바람직한 일일 투여량은 1일 당 약 0.1 내지 약 500 mg/kg 체중, 더욱 바람직하게는 0.1 내지 약 100 mg/kg 체중, 가장 바람직하게는 1.0 내지 약 10 mg/kg 체중이다. 따라서, 70 kg 인간에게 투여하는 경우, 투여량은 1일 당 약 7 mg 내지 0.7 g이다. 일일 투여량은 단일 투여량으로서, 또는 전형적으로 1일 당 1 내지 5회 투여량의 분할된 투여량으로 투여될 수 있다. 일반적으로, 치료는 화합물의 최적 투여량 미만의 보다 적은 투여량으로 시작된다. 이어서, 개별적인 환자에 대한 최적 효과에 도달할 때까지, 투여량은 작은 증분만큼 증가한다. 본원에 기술된 질병의 치료 분야의 당업자는 과도한 실험 없이 개인적인 지식, 경험 및 본원의 개시내용에 근거하여 소정 질병 및 환자를 위한 본 발명의 화합물의 치료 효과량을 확인할 수 있다.

본 발명의 실시양태에서, 활성 화합물 또는 염은 다른 항바이러스제, 예컨대 리바비린, 뉴클레오시드 HCV 중합효소 억제제, 다른 HCV 비-뉴클레오시드 중합효소 억제제 또는 HCV 프로테아제 억제제와 병용 투여될 수 있다. 활성 화합물 또는 이의 유도체 또는 염이 다른 항바이러스제와 병용 투여되는 경우, 활성이 모 화합물보다 증가할 수 있다. 치료법이 병용 요법인 경우, 이러한 투여는 뉴클레오시드 유도체의 투여에 대해 동시 또는 순차적일 수 있다. 따라서, 본원에 사용된 "동시 투여"는 동일한 시간 또는 상이한 시간에서의 약품의 투여를 포함한다. 2개 이상의 약품의 동시 투여는 2개 이상의 활성 성분을 함유하는 단일 제형에 의해, 또는 단일 활성 약품을 갖는 2개 이상의 투여 형태의 실질적인 동시 투여에 의해 달성될 수 있다.

본원에서 치료에 대해 언급한 것은 기존 병태의 치료뿐만 아니라 예방까지 확장되는 것으로 이해된다. 또한, 본원에 사용된 바와 같이, HCV 감염의 "치료"란 용어는 또한 HCV 감염 또는 이의 임상적인 증상과 관련되거나 이에 의해 매개되는 질병 또는 병태의 치료 또는 예방을 포함한다.

본 발명의 화합물 및 임의로 하나 이상의 부가적인 항바이러스제의 치료 효과량은 바이러스 로드를 완화시키거나 요법에 대한 지속된 바이러스 반응을 달성하기에 효과적인 양이다. 바이러스 로드 외의 지속된 반응에 유용한 지표는, 비제한적으로 간 섬유증, 혈청 아미노 전이효소 수준의 상승 및 간에서의 괴사염증(necroinflammatory) 활성을 포함한다. 예시적이고 비제한적인 표지자의 하나의 통상적인 예는 표준 임상 분석에 의해 측정된 혈청 알라닌 아미노 전이효소(ALT)이다. 본 발명의 일부 실시양태에서, 효과적인 치료 섭생법은 ALT 수준을 약 45 IU/㎖ 혈청 미만으로 감소시키는 것이다.

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실시예 1

N-{4-[7-t-부틸-8-메톡시-5-(2-옥소-다이하이드로-피리딘-3-일)-퀴놀린-2-일]-페닐}-메탄설폰아마이드

참고문헌[V. V. Kouznetsov, et al Molecular Delivery 2006, 10, 29-37]

단계 1: MeCN(10 mL) 중의 20(2.0 g, 7.75 mmol) 및 22(1.40 g, 11.62 mmol)의 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반하였다. 이 혼합물에 BiCl₃(0.49 g, 1.55 mmol) 및 MeCN(10 mL) 중의 N-비닐 피롤리딘온(24, 1.72 g, 15.50 mmol)의 용액을 적가하였다. 생성 혼합물을 16시간 동안 교반한 후, EtOAc 및 H₂O(약 20 mL)로 희석하였다. 백색 고체를 여과하고 H₂O로 세척하였다. 여액 중의 유기층을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 농축하였다. 조질 생성물을 EtOAc/헥산 구배(15 내지 75% EtOAc)로 용리하는 SiO₂ 크로마토그래피로 정제하여 312 mg의 26 및 978 mg의 28을 수득하였다.

단계 2: 0℃로 냉각된 MeCN(10 mL) 중의 부가물 28(705 mg, 1.40 mmol)의 용액에 MeCN(10 mL) 중의 CAN(1.92 g, 3.51 mmol)의 용액을 적가하였다. 이어서, 출발 물질이 모두 소모될 때까지 반응 혼합물을 0℃에서 교반하였다. 반응물을 EtOAc 및 H₂O로 희석하였다. 유기층을 분리하고, 염수로 세척하고, 건조시키고(MgSO₄), 여과하고 농축하였다. 조질 생성물을 EtOAc/헥산 구배(1 내지 15% EtOAc)로 용리하는 SiO₂ 크로마토그래피로 정제하여 302 mg의 26을 연황색 고체로서 수득하였다.

단계 3: MeOH(30 mL)와 H₂O(10 mL)의 혼합물 중의 26(300 mg, 0.72 mmol), 철 분말(121 mg, 2.17 mmol) 및 NH₄Cl(116 mg, 2.17 mmol)의 혼합물을 1.5시간 동안 가열 환류시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 셀라이트(Celite) 패드를 통해 여과시켰다. 여액을 농축시키고, 잔사를 EtOAc와 H₂O 사이에 분배하였다. 유기층을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고 진공에서 농축하여 202 mg의 30a를 수득하고 이를 추가 정제 없이 사용하였다.

단계 4: 0℃로 냉각된 DCM(5 mL) 중의 30a(200 mg, 0.52 mmol)의 용액에 피리딘(92 L, 1.14 mmol)을 첨가하고, 이어서 MsCl(42 L, 0.55 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 45분 동안 교반한 후, 이를 H₂O로 켄칭하고 EtOAc로 희석하였다. 유기층을 분리하고, 염수로 세척하고, 건조시키고(MgSO₄), 여과하고 농축하였다. 조질 생성물을 EtOAc/헥산 구배(20 내지 70% EtOAc)로 용리하는 SiO₂ 크로마토그래피로 정제하여 208 mg의 30b를 수득하였다.

단계 5: 튜브를 30b(50 mg, 0.11 mmol), 2-하이드록시-피리딘-3-일 보론산(18 mg, 0.16 mmol), Pd(dppf)Cl₂(CH₂Cl₂)(4 mg, 0.01 mmol), Na₂CO₃(17 mg, 0.16 mmol), MeOH(3 mL) 및 DCM(1 mL)으로 채우고, 밀봉하고, 115℃에서 25분 동안 마이크로파 반응기에서 조사하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 조질 생성물을 EtOAc로 용리하는 SiO₂ 크로마토그래피로 정제하여 32 mg의 32를 고체로서 수득하였다.

실시예 2

N-{4-[7-t-부틸-8-메톡시-5-(6-메틸-2-옥소-1,2-다이하이드로-피리딘-3-일)-퀴놀린-2-일]-페닐}-메탄설폰아마이드

실시예 1의 단계 5에서 2-하이드록시-피리딘-3-일 보론산을 2-메톡시-6-메틸-피리딘-3-일 보론산으로 대체한 것을 제외하고는, 실시예 1의 단계 1 내지 5에 기재된 바와 같이 N-{4-[7-t-부틸-8-메톡시-5-(2-메톡시-6-메틸-피리딘-3-일)-퀴놀린-2-일]-페닐}-메탄설폰아마이드(34)를 제조하였다.

단계 6: 밀봉된 튜브에서 AcOH(3 mL) 중의 피리딘 34(80 mg) 및 48% HBr(200 L)의 혼합물을 65℃에서 6.5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, EtOAc와 빙수의 혼합물에 부었다. 혼합물을 포화 수성 NaHCO₃으로 중화시켰다. 유기층을 분리하고, H₂O 및 염수로 연속해서 세척하고, 건조시키고(MgSO₄), 여과하고 농축하여 61 mg의 36을 고체로서 수득하였다.

실시예 3

N-{4-[7-t-부틸-5-(2,4-다이옥소-3,4-다이하이드로-2H-피리미딘-1-일)-8-메톡시-퀴놀린-2-일]-페닐}-메탄설폰아마이드(38)

튜브를 DMSO(5 mL) 중의 30b(60 mg), 우라실(73 mg), 피리딘-2-카복실산(2-시아노-페닐)-아마이드(14 mg), CuI(6 mg) 및 K₃PO₄(137 mg)로 채우고, 밀봉하고, 150℃에서 5시간 동안 마이크로파 반응기에서 조사하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, pH를 수성 HCl을 사용하여 약 2로 조정하였다. 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 H₂O 및 염수로 연속해서 세척하고, 건조시키고(MgSO₄), 진공에서 농축하였다. 조질 잔사를 5% MeOH/DCM으로 용리하는 SiO₂ 크로마토그래피로 정제하여 9.3 mg의 38을 수득하였다.

실시예 4

HCV NS5B RNA 중합효소 활성

HCV 중합효소(NS5B570n-Con1)의 효소적 활성을 방사성 표지된 뉴클레오티드 모노포스페이트의 산 불용성 RNA 생성물로의 혼입에 의해 측정하였다. 혼입되지 않은 방사성 표지된 기질을 여과에 의해 제거하고, 섬광체를 방사성 표지된 RNA 생성물을 함유하는 세척되고 건조된 필터 플레이트에 첨가하였다. 반응 종결시 NS5B570-Con1에 의해 생성된 RNA 생성물의 양은 섬광체에 의해 방출된 광의 양에 정비례하였다.

HCV Con1 균주로부터 유래하는 N-말단 6-히스티딘 태깅(tagging)된 HCV 중합효소(유전자형 1b(NS5B570n-Con1))는 전장 HCV 중합효소에 비해 C-말단에서 21 아미노산 결실을 갖고, 대장균(E. coli) 균주 BL21(DE) pLysS로부터 정제되었다. HCV NS5B Con1(젠뱅크(GenBank) 수탁 번호 AJ242654)의 코딩 서열을 함유하는 구축물을 플라스미드 구축물 pET17b(T7 프로모터 발현 카세트의 다운스트림)에 삽입하고 대장균 내로 형질전환하였다. 단일 콜로니를 출발 배양균으로서 밤새 성장시키고, 후에 37℃에서 100 ㎍/㎖ 암피실린으로 보충된 LB 배지 10 L를 접종하는데 사용하였다. 배양균의 600 nM에서의 광학 밀도가 0.6 내지 0.8이고 세포가 30℃에서 16 내지 18시간 후에 수확될 때, 0.25 mM 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노시드(IPTG)의 첨가에 의해 단백질 발현을 유도하였다. Ni-NTA, SP-세파로스(Sepharose) HP 및 수퍼덱스(Superdex) 75 수지상에서의 후속 칼럼 크로마토그래피를 비롯한 3-단계 프로토콜을 사용하여 NS5B570n-Con1을 균질하게 되도록 정제하였다.

각각 50 μL의 효소 반응물은 내부 리보좀 도입 부위의 상보적 서열(cIRES)로부터 유도된 20 nM RNA 주형, 20 nM NS5B570n-Con1 효소, 0.5 μCi의 삼중수소 UTP(퍼킨 엘머(Perkin Elmer) 카탈로그 번호 TRK-412; 비활성: 30 내지 60 Ci/mmol; 7.5 x 10 ^-5M 내지 20.6 x 10^-6M의 저장 용액 농도), 각각 1 μM의 ATP, CTP 및 GTP, 40 mM 트리스-HCl pH 8.0, 40 mM NaCl, 4 mM DTT(다이티오트레이톨), 4 mM MgCl₂, 및 DMSO 중에 계대 희석된 5 μL의 화합물을 함유하였다. 반응 혼합물을 96-웰 필터 플레이트(카탈로그 번호 MADVN0B, 밀리포어 캄파니(Millipore Co.))에 모으고, 30℃에서 2시간 동안 항온처리하였다. 10% 최종(v/v) 트라이클로로아세트산을 첨가하여 반응을 중단시키고, 4℃에서 40분 동안 항온처리하였다. 반응물을 여과하고, 8개의 반응 부피의 10%(v/v) 트라이클로로 아세트산으로 세척하고, 4개의 반응 부피의 70%(v/v) 에탄올로 세척하고, 공기 건조하고, 25 μL의 섬광체(마이크로신트(Microscint) 20, 퍼킨 엘머)를 각각의 반응 웰에 첨가하였다.

섬광체로부터 방출된 광의 양을 탑카운트(Topcount: 등록상표) 플레이트 판독기(퍼킨 엘머, 에너지 범위: 낮음, 효율 모드: 정상, 계수 시간: 1분, 배경 공제: 없음, 크로스 토크(Cross talk) 감소: 끔)상에서 분당 수(count per minute; CPM)로 전환시켰다.

데이터를 엑셀(Excel: 등록상표)(마이크로소프트(Microsoft: 등록상표)) 및 액티비티베이스(ActivityBase: 등록상표)(idbs(등록상표))에서 분석하였다. 효소 부재하의 반응을 배경 신호를 측정하는데 사용하고, 이를 효소 반응으로부터 공제하였다. 양성 대조군 반응을 화합물의 부재하에 수행하고, 이로부터 배경 보정된 활성을 100% 중합효소 활성으로 설정하였다. 모든 데이터를 양성 대조군의 백분율로 표시하였다. RNA 합성의 효소-촉매화된 속도가 50%만큼 감소되는 화합물 농도(IC₅₀)를 하기 수학식 i를 38의 데이터에 정합시킴으로써 계산하였다:

[수학식 i]

상기 식에서,

Y는 상대적인 효소 활성(%)이고;

% Min은 화합물 농도의 포화시 잔여 상대 활성이고;

% Max는 상대적인 최대 효소 활성이고;

X는 화합물 농도이고;

S는 힐(Hill) 계수(또는 기울기)이다.

실시예 5

HCV 레플리콘 분석

본 분석은 HCV RNA 복제를 억제하는 화학식 I의 화합물의 능력, 및 이에 따른 HCV 감염의 치료를 위한 잠재적인 유용성을 측정한다. 본 분석은 세포내 HCV 레플리콘 RNA 수준에 대한 단순한 판독치로서 리포터를 이용한다. 레닐라 루시퍼라제(Renilla luciferase) 유전자를 유전자형 1b 레플리콘 구축물 NK5.1(문헌[N. Krieger et al., J. Virol. 2001 75(10):4614])의 내부 리보좀 도입 부위(IRES) 서열 직후의 제 1 오픈 리딩 프레임에 도입하고, 직후에 구제역 바이러스로부터의 자가-분열 펩티드 2A를 통해 네오마이신 포스포전이효소(NPTII) 유전자와 융합시켰다(문헌[M.D. Ryan & J. Drew, EMBO 1994 13(4):928-933]). 시험관내 전사 후, RNA를 인간 간암 Huh7 세포에 전기천공하고, G418-내성 콜로니를 단리하고, 팽창시켰다. 안정적으로 선택된 세포주 2209-23은 증식성 HCV 서브게놈 RNA를 함유하고, 레플리콘에 의해 발현된 레닐라 루시퍼라제의 활성은 세포내의 RNA 수준을 반영한다. 화학적 화합물의 항바이러스 활성 및 세포 독성을 동시에 측정하기 위하여 하나는 불투명 백색이고 하나는 투명한 이중 플레이트에서 분석을 수행하였고, 이는 관찰된 활성이 감소된 세포 증식 또는 세포 사멸에 기인하지 않도록 한다.

레닐라 루시퍼라제 리포터를 발현하는 HCV 레플리콘 세포(2209-23)를 5% 소 태아 혈청(FBS, 인비트로겐(Invitrogen) 카탈로그 번호 10082-147)을 갖는 둘베코(Dulbecco) MEM(인비트로겐 카탈로그 번호 10569-010)에서 배양하고, 웰 당 5,000개의 세포로 96-웰 플레이트 상에서 평판 배양하고, 밤새 항온처리하였다. 24 시간 후, 성장 배지 내의 화학적 화합물의 상이한 희석액을 세포에 첨가한 후, 37℃에서 3일 동안 추가로 항온처리하였다. 항온처리 종결 시, 백색 플레이트 내의 세포를 수확하고, 루시퍼라제 활성을 레닐라 루시퍼라제 분석 시스템(프로메가(Promega) 카탈로그 번호 E2820)을 사용하여 측정하였다. 하기 문단에 기술된 모든 시약은 제조사의 키트에 포함되어 있고, 제조사의 설명서에 시약의 준비를 위해 제공되었다. 세포를 웰 당 100 μL의 포스페이트 완충된 염수(pH 7.0)(PBS)로 1회 세척하고, 20 μL의 1x 레닐라 루시퍼라제 분석 용해 완충액으로 용해시킨 후, 실온에서 20분 동안 항온처리하였다. 이어서, 플레이트를 센트로(Centro) LB 960 마이크로플레이트 루미노미터(버톨드 테크놀로지스(Berthold Technologies))에 삽입하고, 100 μL의 레닐라 루시퍼라제 분석 완충액을 각각의 웰에 주사하고, 2-초 지연 2-초 측정 프로그램을 사용하여 신호를 측정하였다. IC₅₀(레플리콘 수준을 미처리 세포 대조군 값에 비해 50%만큼 감소시키는데 요구되는 약물의 농도)을 상기 정의된 바와 같은 루시퍼라제 활성의 백분율 감소 대 약물 농도의 도표로부터 계산할 수 있다.

로슈 다이아그노스틱(Roche Diagnostic)(카탈로그 번호 1644807)으로부터의 WST-1 시약을 세포 독성 분석에 사용하였다. 10 μL의 WST-1 시약을 블랭크로서 배지만을 함유하는 웰을 포함하는 투명한 플레이트의 각각의 웰에 첨가하였다. 이어서, 세포를 37℃에서 2시간 동안 항온처리하고, OD 값을 450 nm에서 MRX 리벨레이션(Revelation) 마이크로티터 플레이트 판독기(랩 시스템(Lab System))를 사용하여 측정하였다(650 nm에서 기준 필터). 또한, CC₅₀(세포 증식을 미처리 세포 대조군 값에 비해 50%만큼 감소시키는데 요구되는 약물의 농도)을 상기 정의된 바와 같은 WST-1 값의 백분율 감소 대 약물 농도의 도표로부터 계산할 수 있다.

화합물 번호	HCV 레플리콘 활성 IC₅₀(μM)	세포 독성 활성 CC₅₀(μM)
I-3	0.017	44

실시예 6

여러 가지 경로를 통한 투여를 위한 본 발명의 화합물의 약학 조성물을 본 실시예에 기술된 바와 같이 제조하였다.

경구 투여용 조성물(A)

성분들을 혼합하고, 각각 약 100 mg을 함유하는 캡슐에 분배하였다: 하나의 캡슐이 대략 총 일일 투여량이다.

경구 투여용 조성물(B)

성분들을 조합하고, 메탄올과 같은 용매를 사용하여 과립화시켰다. 이어서, 제형을 건조하고, 적절한 타정기를 사용하여 정제(약 20 mg의 활성 화합물을 함유함)로 제형화시켰다.

경구 투여용 조성물(C)

성분들을 혼합하여 경구 투여용 현탁액을 형성하였다.

비경구 제형(D)

활성 성분을 주사용 물의 일부에 용해시켰다. 이어서, 충분량의 염화 나트륨을 교반하에 첨가하여 용액을 등장성으로 만들었다. 용액을 주사용 물의 잔여량으로 보충하고, 0.2 ㎛ 막 필터를 통해 여과하고, 멸균 조건하에 포장하였다.

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Claims

N-{4-[7-t-부틸-8-메톡시-5-(2-옥소-다이하이드로-피리딘-3-일)-퀴놀린-2-일]-페닐}-메탄설폰아마이드;
N-{4-[7-t-부틸-8-메톡시-5-(6-메틸-2-옥소-1,2-다이하이드로-피리딘-3-일)-퀴놀린-2-일]-페닐}-메탄설폰아마이드; 및
N-{4-[7-t-부틸-5-(2,4-다이옥소-3,4-다이하이드로-2H-피리미딘-1-일)-8-메톡시-퀴놀린-2-일]-페닐}-메탄설폰아마이드
로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물.
제 1 항에 따른 화합물을 포함하는, C형 간염 바이러스(HCV) 감염을 치료 또는 예방하기 위한 약학 조성물.
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