KR101382412B1 - 항산화 활성을 갖는 다래나무 추출물을 함유하는 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 다래나무(Actinidia arguta Planchon)의 잎 또는 줄기로부터 추출한 에탄올 추출물 또는 상기 다래나무 에탄올 추출물의 항산화 활성 분획물을 유효 성분으로 함유하는 항산화용 약제학적 조성물, 항산화용 기능성 식품 조성물 및 항산화용 화장품 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 다래나무 에탄올 추출물 및 항산화 활성 분획물의 경우 뛰어난 수준의 DPPH 라디칼 소거 능, ABTS 라디칼 소거 능 및 SOD 유사활성을 나타내어 결과적으로 우수한 항산화 효능을 가진다.

Description

항산화 활성을 갖는 다래나무 추출물을 함유하는 조성물{Composition containing extract of bower actinidia which has antioxidant activity}
본 발명은 다래나무 과에 속하는 덩굴성 낙엽만목인 다래나무(Actinidia arguta Planchon)의 잎 또는 줄기로부터 추출한 에탄올 추출물 또는 상기 다래나무 에탄올 추출물의 항산화 활성 분획 물을 유효 성분으로 함유하는 항산화용 약제학적 조성물, 항산화용 기능성 식품 조성물 및 항산화용 화장품 조성물에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 다래나무 분말에 70% 에탄올을 가하여 24시간동안 실온에서 진탕하여 2회 반복 추출한 후 여지로 여과한 뒤 농축기로 40℃에서 감압농축 및 동결건조 하여 70% 에탄올 추출물을 얻은 후, 물에 용해시켜 분액깔때기에 넣은 뒤 n-hexane, Chloroform, n-butanol 및 Aqueous 용매의 순서로 극성의 차이를 이용하여 분획 물을 얻었으며 분리된 각각의 용매 분획 물은 감압 농축하여 용매를 제거 한 후 -70℃에서 동결 건조하여 각 분획의 수율을 구하였다. 이후 최종적으로 분획 물을 대상으로 총 폴리페놀, 플라보노이드 함량과 항산화 활성(DPPH 라디칼 소거 능, ABTS 라디칼 소거 능, SOD 유사활성)을 측정하였고, 합성 항산화제인 BHT와 천연 항산화제인 ascorbic acid 및 α-tocopherol과 비교함으로써 다래 분획 추출물의 항산화활성을 규명하였다.
자유 라디칼은 쌍을 이루지 않은 전자를 갖는 원자, 이온, 또는 분자로서, 자유 라디칼, 특히 산소 분자로부터 유도된 자유 라디칼은 여러 가지 생물학적 현상에 있어서 기본적인 기능을 한다. 다양한 형태의 산소와 자유 라디칼의 농도가 과다할 경우, 생체 내에 막 지질의 과산화, 핵산 염기의 히드록실 화 및 설프히드릴기와 기타 단백질 내의 라디칼 활성 부분의 산화와 같은 심각한 역효과를 미칠 수 있으며, 이들이 억제되지 않을 경우, 변이와 세포 사멸을 초래할 수 있다.
많은 자유 라디칼 반응은 생체분자에 산화 손상을 일으키며, 단백질을 가교시키고, DNA를 변이시키며, 지질을 과 산화시킨다. 자유 라디칼이 일단 형성되면, 이들은 상호작용에 의해 다른 자유 라디칼 및 비 라디칼 산화제 등을 생성한다. 또한, 자유 라디칼 반응의 생성물 중 일부가 손상되면 잠재적으로 손상을 일으키는 화학종을 생성할 수 있다. 산소 자유 라디칼은 또한 단백질의 산화 변성을 일으킨다. 또한, 자유 라디칼의 산화 손상은 알츠하이머병, 류마티스 관절염, 암 및 죽상동맥경화증과 같은 노화 및 퇴행성 질환에서 주원인으로 작용한다고 보고되고 있다.
이에, 항산화 작용을 하는 여러 물질에 대한 요구 및 항산화 관련 화장품, 항산화 관련 기능성 식품 및 항산화 관련 약제 조성물에 대한 수요가 증가하고 있고, 그와 관련한 연구가 활발히 진행되고 있으며, 신규 항산화 물질을 발견하기 위한 노력이 계속되고 있다.
다래나무(Bower actinidia)는 다래나무과에 속하는 덩굴성 낙엽만목으로 학명은 Actinidia arguta PLANCH.이다. 우리나라·중국·일본에 자생하며 깊은 산의 숲속, 토양이 깊고 부식질이 많은 곳에서 잘 자란다. 줄기의 길이는 7m에 달하고 어린 가지에는 잔털이 있으며, 잎은 어긋나고 넓은 난형 또는 타원형이다. 꽃은 2가화(二家花)로서 5월에 피는데 백색으로 3∼10개가 달린다. 열매는 난상(卵狀) 원형으로 10월에 황록색으로 익는데 맛이 좋다.
다래 열매는 단맛이 있으므로 생식되고 있으며, 뜨거운 물을 끼얹어 건조시킨 것을 달여 마시면 신경통에도 좋다고 한다. 특히, 열매에 충영(蟲?: 혹처럼 생긴 식물체)이 생긴 것은 목천료(木天蓼)라 하여 귀중한 한약재로 여긴다.
다래주도 몸을 따뜻하게 해주며, 이뇨·강심·강장 등에 효능이 있다고 한다. 다래나무의 껍질과 줄기는 노끈으로 대용되기도 한다.
이와 같이 다래는 우리 민족이 즐겨 먹던 산과(山果)로 문학작품에서는 머루와 짝이 되어 나타난다. 특히 고려가요인 「청산별곡」에서 보이는 다래·머루는 평원의 생활에서 주식으로 삼는 쌀·보리와 상대적인 개념으로 이해된다.
또한 다래나무의 잎과 줄기의 경우 생체의 노화 과정과 관련성이 있는 유리기 및 만성질환의 피해를 막아주는 산화 방지 역할을 하는 페놀과 항균, 항암, 항바이러스, 항알레르기 및 항염증 활성을 나타내는 플라보노이드를 다량 함유하고 있어 상기와 같은 항산화 물질에 대한 요구 및 수요를 충족시킬 수 있으며, 천연물이기에 비교적 안전성이 높고 부작용이 적다는 장점이 있다. 이에 상기 요구 및 수요에 대한 적절한 충족 및 공급을 위해, 본 연구에서는 우리나라, 중국 및 일본 등지에 자생하는 다래나무의 잎 또는 줄기로부터 항산화 활성 분획물을 수득하여 항산화 활성을 규명하고 항산화 활성 분획물을 유효 성분으로 함유하는 항산화용 약제학적 조성물, 항산화용 기능성 식품 조성물 및 항산화용 화장품 조성물을 완성하였다.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌(한국 특허출원 제2002-0051310호, 제2009-0027495호)이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허 문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
본 발명자들은 상기와 같은 항산화 작용물질 요구를 충족시키기 위한 용도의 천연물을 찾기 위하여 연구 노력하였다. 그 결과, 다래나무의 잎 또는 줄기로부터 수득한 항산화 활성 분획물이 페놀 및 플라보노이드를 다량 함유하여 항산화 활성이 우수하고 생체 내 부작용이 적다는 것을 실험적으로 확인하여 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 다래나무의 잎 또는 줄기로부터 추출한 에탄올 용매 추출물 또는 상기 에탄올 추출물로부터 수득한 항산화 활성 분획물을 제공하는 것에 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기의 에탄올 추출물 및 항산화 활성 분획물을 유효 성분으로 함유하는 항산화용 약제학적 조성물, 항산화용 기능성 식품 조성물 및 항산화용 화장품 조성물을 제공하는 것에 있다.
본 발명의 목적 및 장점은 하기의 발명의 상세한 성명, 청구의 범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 항산화 활성이 있는 다래나무(Actinidia arguta Planchon) 에탄올 추출물을 제공한다.
본 발명의 명세서에서 용어 ‘다래나무(Bower Actinidia)’는 쌍떡잎식물 측막태좌목 다래나무과의 낙엽 덩굴나무를 의미한다.
본 발명의 명세서에서 용어 ‘항산화(抗酸化)’는 생체분자에 산화 손상을 일으키며, 단백질을 가교시키고, DNA를 변이시키며, 지질을 과 산화시킬 수 있는 자유 라디칼 및 활성 산소를 억제하는 것을 의미한다.
본 발명의 명세서에서 용어 ‘활성(活性)’은 자유 라디칼 및 활성 산소를 억제하는 항산화 효과의 활동이 활발하여 지거나 반응 속도가 빨라지는 성질을 의미한다.
본 발명의 명세서에서 용어 ‘에탄올(Ethanol)’은 사슬모양의 탄화수소 중 탄소의 수가 2개인 에테인에서 수소 원자 하나가 하이드록시기로 치환된 알코올로, 휘발성과 가연성을 가진 무색 액체를 의미한다.
본 발명의 명세서에서 용어 ‘추출물(抽出物)’은 다래나무의 잎 또는 줄기의 분말을 용매에 녹여 분리한 물질을 의미한다.
본 발명자들은 통상의 항산화 관련 약제 조성물, 화장품 조성물 및 기능성 식품 조성물들보다 항산화 효능이 개선된 항산화 물질을 제조하기 위하여 예의 연구 노력하였다. 그 결과, 상술한 장점을 가지는 다래나무 에탄올 추출물을 수득하였다. 다래나무의 잎 또는 줄기의 분말에 70% 에탄올을 가하여 24시간동안 실온에서 진탕하여 2 내지 3회 반복 추출한 후 여지로 여과한 뒤 농축기로 40℃에서 감압농축 및 동결건조 하여 70% 에탄올 추출물을 얻은 후, 이 에탄올 용매 추출물을 물에 용해시켜 분액깔때기에 넣은 뒤 앤-헥산(n-hexane), 클로로포름(Chloroform), 앤-부탄올(n-butanol) 및 에이퀴어스(Aqueous)를 포함하는 군으로부터 선택된 용매를 사용하여 항산화 활성 분획 물을 얻었으며 분리된 각각의 용매 분획 물은 감압 농축하여 용매를 제거 한 후 -70℃에서 동결 건조하여 각 분획의 수율을 구하였다. 이후 최종적으로 분획 물을 대상으로 총 폴리페놀, 플라보노이드 함량과 항산화 활성(DPPH 라디칼 소거 능, ABTS 라디칼 소거 능, SOD 유사활성)을 측정하였고, 합성 항산화제인 BHT와 천연 항산화제인 ascorbic acid 및 α-tocopherol과 비교함으로써 다래 분획 추출물의 항산화활성을 확인하였으며, 상기 추출물 및 분획 물을 유효성분으로 함유하는 항산화 관련 약제 조성물, 화장품 조성물 및 기능성 식품 조성물의 경우, 항산화 효능이 뛰어나며 생체 내에 어떤 부작용도 일으키지 않는다는 것을 확인하였다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 다래나무는 다래나무의 잎 또는 줄기를 의미한다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 다래나무 에탄올 추출물에 대한 분획 용매로는 바람직하게는 앤-헥산(n-hexane), 클로로포름(Chloroform), 앤-부탄올(n-butanol) 및 에이퀴어스(Aqueous)를, 더욱 바람직하게는 앤-헥산(n-hexane), 앤-부탄올(n-butanol) 및 에이퀴어스(Aqueous)를, 가장 바람직하게는 에이퀴어스(Aqueous)를 사용할 수 있다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 분획물은 페놀계 화합물 또는 폴리 페놀계 화합물을 유효 성분으로 함유한다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 분획물은 플라보노이드계 화합물을 유효 성분으로 함유한다.
본 발명의 명세서에서 용어 ‘페놀(Phenol)’은 벤젠고리(C6H6)의 수소 중 1개가 하이드록시기(-OH)로 치환된 물질을 의미한다.
본 발명의 명세서에서 용어 ‘폴리페놀(Polyphenol)’은 벤젠고리(C6H6)의 수소 중 2개 이상이 하이드록시기(-OH)로 치환된 물질을 의미한다.
본 발명의 명세서에서 용어 ‘플라보노이드(Flavonoid)’는 식물에 널리 함유되어 있으며 2개의 페닐기가 피란 고리 혹은 그와 유사한 구조의 탄소원자 3개를 매개로 결합하고 있는 물질 군을 의미한다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 분획물은 DPPH 라디칼 소거 능, ABTS 라디칼 소거 능 및 SOD 유사활성을 나타낸다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 방법에 의해 수득한 상기 에탄올 추출물 또는 항산화 활성 분획 물을 유효 성분으로 함유하는 항산화용 약제학적 조성물, 항산화용 기능성 식품 조성물 및 항산화용 화장품 조성물을 제공한다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 다래나무 에탄올 추출물 또는 항산화 활성 분획 물은 하기와 같은 특성을 가진다:
(a) 총 페놀 함량(Total phenolic contents) : 탄닌산(Tannic acid) 40 내지 250±1 내지 5 mg/g;
(b) 총 플라보노이드 함량(Total flavonid contents) : 퀘세틴(Quercetin) 10 내지 230±1 내지 4 mg/g;
(c) DPPH 라디칼 소거 능(DPPH radical scavenging activity) : 3 내지 60±0.1 내지 5%;
(d) ABTS 라디칼 소거 능(ABTS radical scavenging activity) : 0.5 내지 100±0.1 내지 5%; 및
(e) SOD 유사활성(SOD-like activity) ; 2 내지 20±0.1 내지 12%.
본 발명에 있어서 상기 다래나무 에탄올 추출물 또는 항산화 활성 분획 물의 총 페놀 함량 및 총 플라보노이드 함량은 매우 중요하다. 왜냐하면, 페놀 계 화합물의 경우 생체의 노화 과정과 관련성이 있는 유리기 및 만성질환의 피해를 막아주는 산화 방지 역할을 하고 플라보노이드 계 화합물의 경우 항균, 항암, 항바이러스, 항 알레르기 및 항염증 활성을 나타내어 총 페놀 함량과 총 플라보노이드 함량이 높을수록 항산화 효능이 향상되기 때문이다.
상기 다래나무 에탄올 추출물 또는 항산화 활성 분획 물의 수득 방법에 관해서는 상술한 내용과 중복되므로 본 명세서의 과도한 복잡성을 고려하여 생략하도록 한다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 본 발명의 조성물은 항산화 효과가 탁월한 화장료 조성물일 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 상술한 다래 추출물 이외에 다른 성분들을 포함할 수 있다. 본 발명의 실시예에 따르면, 본 발명의 화장료 조성물은 글리세린, 부틸렌 글라이콜, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 시트릭산, 판테놀, 스쿠알란, 소듐 시트레이트 및 알란토인으로 포함된 군으로부터 선택되는 최소 하나의 보조성분을 추가적으로 포함하며, 보다 바람직하게는 글리세린, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 스쿠알란 및 소듐 시트레이트을 추가적으로 포함하고, 부틸렌 글라이콜, 시트릭산, 판테놀 및 알란토인으로 구성된 군으로부터 선택되는 최소 하나의 성분을 포함하며, 가장 바람직하게는 글리세린, 부틸렌 글라이콜, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 시트릭산, 판테놀, 스쿠알란, 소듐 시트레이트 및 알란토인 모두를 추가적으로 포함한다.
본 발명의 화장료 조성물은 기본적으로 피부에 도포되는 것이므로, 당업계의 화장료 조성물을 참조하여 제공될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올, 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가, 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 본 발명의 조성물은 항산화 효과가 탁월한 약제학적 조성물일 수 있다.
본 발명의 조성물이 약제학적 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 경구 또는 비경구 등의 다양한 경로로 투여할 수 있으며, 예컨대 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여할 수 있다. 바람직하게는 비경구 투여 중 경피투여, 보다 바람직하게는 도포에 의한 국부 투여(topical application) 방식으로 적용된다.
본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은, 경구형 제형인 경우 성인 기준으로 0.1-100 ㎎/kg 의 양을 1일 1회 내지 수회 투여할 수 있으며, 외용제인 경우에는 성인 기준으로 1일당 1.0 내지 3.0 ml의 양으로 1일 1 내지 5회 도포하여 1개월 이상 계속 하는 것이 좋다. 다만, 상기 투여량은 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 산제, 과립제, 정제, 캅셀제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 연고, 크림 등의 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 사용할 수 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 본 발명의 조성물은 항산화 효과가 탁월한 식품 조성물일 수 있다.
본 발명의 조성물이 식품 조성물로 제조되는 경우, 유효성분뿐만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.
예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 본 발명의 유효성분 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 두충 추출액, 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
한편, 본 발명의 구체적 실시예에서 본 발명 조성물의 유효성분에 대한 세포 생존율 분석 결과 본 발명 조성물의 유효성분은 천연물질로서 인체에 무해한 물질임이 밝혀졌다. 따라서, 본 발명의 유효성분은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 장기간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있으며, 특히 상기한 바와 같은 화장료, 약제학적 및 식품 조성물에 안전하게 적용할 수 있다.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(a)본 발명은 다음 단계를 포함하는, 항산화 효능이 우수한 다래나무 추출물 및 분획 물 수득 방법을 제공한다: (ⅰ) 다래나무의 잎 또는 줄기의 분말에 70% 에탄올을 가하여 24시간동안 실온에서 진탕하여 2회 반복 추출한 후 여지로 여과한 뒤 농축기로 40℃에서 감압농축 및 동결건조 하여 70% 에탄올 추출물을 얻는 단계; (ⅱ) 상기 단계 (ⅰ)의 에탄올 추출물을 물에 용해시켜 분액깔때기에 넣은 뒤 분획 용매를 사용해 극성의 차이를 이용하여 분획 물을 얻는 단계를 포함시키는 다래나무 추출물 및 분획 물 수득법.
(b) 본 발명의 다래나무 추출물 및 분획물은 항산화 관련 약제, 화장품 및 기능성 식품 조성물로 활용할 수 있어 발명의 활용 범위가 매우 넓다.
(c) 본 발명의 다래나무는 생육 조건이 까다롭지 않고 한국의 풍토에 잘 서식하는 식물이기에 손쉽고 저렴하게 항산화 관련 제품 조성물의 원료를 대량 확보할 수 있다. 그리고 이는 추출물 및 분획 물을 활용한 제품의 가격을 낮추는 효과로 이어진다.
(d) 본 발명의 다래나무의 추출물 및 분획 물 수득 공정이 까다롭지 않아 실 산업에의 적용이 매우 용이하며, 따라서 추출물 및 분획 물을 활용한 제품의 가격 역시 저렴하게 맞출 수 있다.
(e) 본 발명의 다래나무의 추출물 및 분획 물의 경우, 페놀 계 화합물 및 플라보노이드 계 화합물을 다량 함유하고 있어 항산화 효능이 뛰어나다.
(f) 본 발명의 다래나무의 추출물 및 분획 물을 유효 성분으로 함유하는 항산화 관련 약제, 화장품 및 기능성 식품 조성물의 경우 인체에 어떠한 부작용도 일으키지 않는다.
도 1은 본 실험에서 다래나무의 잎 또는 줄기의 분말로부터 에탄올 추출물 및 항산화 활성 분획 물을 얻었던 과정을 모식 적으로 나타낸 것이다. 가장 상단의 Actinidia arguta Planchon는 다래나무의 잎 또는 줄기를 40 mesh로 마쇄한 분말을 의미한다. Vacuum evaporation은 감압 하에서 행하는 진공 증발을 의미한다. Freeze drying은 용액상태의 시료를 동결하여 그대로의 상태로 감압하에 방치함으로써 시료 중의 수분을 승화시켜 제거하는 동결건조를 의미한다. Etanol extract는 다래나무의 70% 에탄올 추출물을 의미한다. Etanol extract 하단의 과정은 다양한 종류의 용매에 의한 순차적 용매 분획 과정을 의미한다. Dissolve in water and extract with n-hexane은 상기 70% 에탄올 추출물을 물에 용해시켜 분액깔때기에 넣은 뒤 저 극성 용매인 n-hexane을 넣어 2 내지 4회 추출하여 n-hexane 분획 물을 얻는 것을 의미한다. 좌측의 n-hexane fraction이 n-hexane 분획 물을 의미한다. 우측의 Aqueous layer 및 그 하단의 과정들은 n-hexane 용매를 활용해서 n-hexane 분획 물을 얻고 난 이후의 수층을 다시 분액깔때기에 넣고 클로로포름(Chloroform)을 분획 용매로 하여 Chloroform 분획 물을 얻는 과정, 이후의 수층에 앤-부탄올(n-butanol) 분획 용매를 사용하여 n-butanol 분획 물을 얻는 과정 및 마지막에 남은 수층에서 Aqueous 분획 물을 얻는 과정을 의미한다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명 하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예
실시예 1 : 추출물의 제조와 분획물에 대한 분석 및 측정
재료 및 방법
70% 에탄올 추출물 제조
40 mesh로 마쇄한 다래나무(Actinidia arguta Planchon) 분말 100 g에 10배량의 70% 에탄올을 가하여 24시간동안 실온에서 진탕하였다(Shaker SK-71 JEIO TECH, Korea). 2회 반복 추출한 후 여지(Advantec No. 6, Japan)로 여과한 뒤 농축기(EYELA N-3000, Japan)로 40℃에서 감압농축 및 동결건조 하여 70% 에탄올 추출물을 얻었다.
70% 에탄올 추출물을 이용한 분획제조
순차적 용매 분획은 상기 70% 에탄올 추출물 10 g을 물 500 mL에 용해시켜 분액깔때기에 넣은 뒤 저 극성 용매인 n-hexane 500 mL을 넣어 3회 추출하여 n-hexane 분획 물을 얻었다. 그 수층을 다시 분액깔때기에 넣고 위와 같은 방법으로 클로로포름(Chloroform), 앤-부탄올(n-butanol) 및 에이퀴어스(Aqueous)의 순서로 극성의 차이를 이용하여 분획 물을 얻었다(도 1). 분리된 각각의 용매 분획 물은 감압 농축하여 용매를 제거 한 후 -70℃에서 동결 건조하여 각 분획의 수율을 구하고, 일정량을 취하여 항산화 활성 분석용 시료로 사용 하였다.
총 폴리페놀 함량 분석
1 mg/mL의 농도로 용해한 각 용매별 분획 물 10 ㎕에 폴린-시오칼토(Folin-Ciocalteau)시약 10 ㎕ 및 2% 탄산나트륨(Na2CO3) 200 ㎕를 차례로 가한 다음 실온에서 30분간 정치한 후 750 nm에서 흡광도를 측정하였다. 총 폴리페놀 함량은 탄닌산(Tannic acid)을 표준물질로 정하여 시료와 동일한 방법으로 분석하여 작성한 검량 선으로부터 계산하였다.
총 플라보노이드 함량
총 플라보노이드 함량은 용매별 분획 물 20 ㎕를 아질산나트륨 용액(Sodium nitrite solution) 75 ㎕와 혼합하여 5분간 반응시키고 염화알루미늄 용액(Aluminum chloride solution) 150 ㎕를 첨가하여 다시 5분간 반응시킨 후 1 M 수산화나트륨(NaOH) 20 ㎕와 섞어 510 nm에서 흡광도를 측정하였다. 총 플라보노이드 함량은 쿼세틴(Quercetin)을 이용하여 작성한 표준곡선으로부터 함량을 구하였다.
DPPH 라디칼 소거 능 측정
DPPH 라디칼에 대한 소거 능은 각 용매별 분획 물 40 ㎕와 1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl (DPPH)용액 160 ㎕를 가하여 잘 혼합한 후 암소에서 30분간 반응시킨 후 518 nm에서 흡광도를 측정하여 농도에 따른 DPPH 라디칼 소거 능을 확인하였다. 시료 무 첨가구와 비교하여 자유라디칼 소거활성을 백분율로 나타냈다.
ABTS 라디칼 소거능 측정
ABTS［2,2'-azin0-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonate)］라디칼 소거 능은 과 황산칼륨(Potassium persulfate)과의 반응에 의해 생성된 ABTS 유리 라디칼이 시료의 항산화 물질에 의해 제거되어 라디칼 특유의 색인 청록색이 탈색되는 것을 이용한 방법으로 측정하였다. 7.2 mM ABTS용액에 2.6 mM 과 황산칼륨을 혼합시킨 다음 암실에서 약 15시간 반응시켰다. 이를 734 nm에서 흡광도가 1.5가 되도록 희석한 후 300 ㎕를 취하여 용매별 분획 물 20 ㎕를 혼합하여 암소에서 30분간 반응시켜 734 nm에서 흡광도를 측정하여 시료첨가구와 무 첨가구의 흡광도 차이를 백분율로 나타내었다.
SOD 유사활성 측정
용매별 분획물의 SOD유사활성은 과산화수소(H2O2)로 전환시키는 반응을 촉매하는 피로갈롤(Pyrogallol)의 생성량을 측정하여 나타내었다. 용매별 추출물 20 ㎕에 트리스-염화수소 완충액(Tris-Hcl buffer, 50 mM tris (hydroxymethyl) amino-methane + 10 mM EDTA, pH 8.5)을 이용하여 pH 8.5로 조절된 시료 액을 만들어 시료 액 260 ㎕와 7.2 mM 피로갈롤 20 ㎕를 가하고 상온에서 10분간 방치 한 후 1N 염화수소 10 ㎕로 반응을 정지시킨 후 산화된 피로갈롤의 흡광도를 420 nm에서 측정하였다. SOD 유사활성은 시료 첨가구 및 무 첨가구의 흡광도 차이를 백분율로 나타내었다.
결과 및 고찰
다래의 용매분획별 추출수율은 표 1에서와 같이 극성이 높은 수용액 분획 물에서 가장 높은 수율을 보였고, 극성이 낮은 클로로포름 분획 물에서 가장 낮았다.
총 페놀과 총 플라보노이드(Flavonoid) 함량결과는 표 2에서 보이는 바와 같이 플라보노이드 배당체의 대다수가 부탄올 분획 물 층으로 이동하였기에 총 페놀 및 총 플라보노이드 함량이 다른 분획층보다 부탄올 분획 층에서 높게 나타났다.
다래 분획물의 DPPH 라디칼 소거 능은 표 3에서 보이는 바와 같이 천연항산화제보다 높게 나타나지 않았지만 농도 의존적인 활성을 보였다. 특히 100 ㎍/mL 농도에서의 부탄올 분획 물 층은 합성 항산화제인 BHT와 천연항산화제인 알파-토코페롤(α-tocopherol) 보다는 높은 DPPH 라디칼 소거 능을 보였다.
다래 분획물의 ABTS 라디칼 소거 능은 표 4에서 보이는 바와 같이 천연항산화제보다 높게 나타나지 않았지만 농도 의존적인 활성을 보였다. 특히 500 ㎍/mL 농도에서의 부탄롱 분획 물 층은 합성 항산화제인 BHT와 천연항산화제인 알파-토코페롤 및 엘-아스코르빈산(L-ascorbic acid)보다는 높은 ABTS 라디칼 소거 능을 보였다.
다래 분획물의 SOD 유사활성은 다른 항산화활성지표인 DPPH, ABTS 라디칼 소거 능보다는 높은 활성을 보이지 않았으나 농도 의존적으로 활성을 보였다(표 5).

Claims (8)

  1. (a) 다래나무의 잎 또는 줄기의 분말에 65~75중량% 에탄올을 가하여 22 ~ 26시간 동안 실온에서 진탕하여 2 내지 3회 반복 추출하는 단계;
    (b) 상기 (a)단계로 얻어진 추출물을 여지로 여과한 뒤 농축기로 35 ~ 45 ℃에서 감압농축 및 동결건조 하여 에탄올 추출물을 획득하는 하는 단계;
    (c) 상기 (b)로 얻어진 에탄올 추출물을 물에 용해시켜 분액깔때기에 넣은 뒤 앤-헥산(n-hexane), 클로로포름(Chloroform), 앤-부탄올(n-butanol) 및 에이퀴어스(Aqueous)를 포함하는 군으로부터 선택된 용매를 사용하여 항산화 활성 분획물을 획득하는 단계;
    (d) 상기 (c)단계로 획득한 분획물을 감압 농축하여 용매를 제거 한 후 -70℃에서 동결 건조하여 최종 분획물을 획득하는 단계;를
    포함하는 에탄올을 이용한 다래나무(Actinidia arguta Planchon)의 항산화 분획물 제조방법.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 제 1 항에 있어서, 상기 최종 분획물은 DPPH 라디칼 소거능, ABTS 라디칼 소거능 및 SOD 유사활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 에탄올을 이용한 다래나무(Actinidia arguta Planchon)의 항산화 분획물 제조방법.
  7. 삭제
  8. 삭제
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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임현우 외 3명. 국내산 다래나무 수피의 페놀성 화합물의 항산화 및 Nitric Oxide 생성 억제 활성. 생약학회지. 2005년, 제36권 제3호, 페이지 245-251. *
임현우 외 3명. 국내산 다래나무 수피의 페놀성 화합물의 항산화 및 Nitric Oxide 생성 억제 활성. 생약학회지. 2005년, 제36권 제3호, 페이지 245-251.*

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