KR101364909B1 - 칼슘 채널 차단제로서의 벤지미다졸 유도체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 화학식 (I)의 화합물 및 이러한 화합물의 및 제약학적으로 허용 가능한 염 에 관한 것이고
Figure 112010077161232-pct00008

(I)
여기서
R 1 은 치환되지 않거나, 단일-, 이중-, 또는 삼중-치환된 아릴을 나타내고, 여기서 치환기는 (C1-4)알킬, (C1-4)알콕시, 할로겐, 및 트리플루오로메틸로 이루어진 군에서 독립적으로 선택되고;
R 2 는 수소, 또는 -CO-R 21 를 나타내고;
R 21 은 (C1-5)알킬, (C1-3)플루오로알킬, 또는 (C3-6)사이클로알킬을 나타내고;
m은 정수 2, 또는 3을 나타내고;
p는 정수 2 또는 3을 나타내며;
R 3 는 수소, 또는 (C1-5)알킬을 나타낸다.
이러한 화합물은 칼슘 채널 차단제로서 유용하다.

Description

칼슘 채널 차단제로서의 벤지미다졸 유도체 {BENZIMIDAZOLE DERIVATIVES AS CALCIUM CHANNEL BLOCKERS}
본 발명은 신규한 벤지미다졸 유도체 및 만성 안정형 협심증(angina), 고혈압, 허혈(ischemia)(신장허혈 및 심장허혈), 심방세동(atrial fibrillation)을 포함하는 심부정맥(cardiac arrhythmias), 심장비대(cardiac hypertrophy), 또는 울혈성 심부전(congestive heart failure)의 치료 또는 예방에서 유효한 칼슘 채널 차단제로서의 상기 화합물의 용도, 이러한 유도체를 포함하는 제약학적 조성물 및 상기 유도체의 제조 공정에 관한 것이다. 본 발명의 벤지미다졸 유도체는 또한 인간 및 다른 포유류에서 신장 질환, 당뇨병 및 당뇨병의 합병증, 고알도스테론혈증(hyperaldosteronism), 간질, 신경병증성 통증(neuropathic pain), 또는 암의 치료를 위하여 단독으로 사용되거나 제약학적 조성물에 포함되어 사용될 수 있다.
많은 심혈관 장애가 심장 및 혈관 평활근 세포의 원형질막을 통한 비정상적인 칼슘 유입 증가로 인한 '칼슘 과다'와 관계가 있다. 세포 외 칼슘이 상기 세포에 들어갈 수 있는 3 가지 주요 경로가 있다: 1) 수용체 활성화(receptor-activated) 칼슘 채널, 2) 리간드 개폐(ligand-gated) 칼슘 채널 및 3) 전압 작동성(voltage-operated) 칼슘 채널 (VOC).
VOC는 6 가지 주요 범주로 구분된다: L (Long-lasting), T (Transient), N (Neuronal), P (Purkinje cells), Q (P 다음) 및 R (Remaining 또는 Resistant).
L-형 칼슘 채널은 심장 및 평활근 세포의 수축을 개시하는 칼슘이 내부로 이동하는 것을 담당하며, 심장혈관 분야에서 이러한 채널의 차단제에 대하여 추정되는 적용을 암시한다. 이러한 견지에서, L-형 칼슘 채널 차단제는 60년대 초반 이래로 임상에서 사용되고 있고, 현재 수축기-이완기(systolic-diastolic) 고혈압 및 협심증(angina pectoris)에 대하여 1차 치료법으로 추천된다.
T-형 칼슘 채널은 심혈관계 및 말초혈관계, 굴심방결절 및 퍼킨제 섬유와 같은 다양한 조직, 뇌, 부신 그리고 콩팥에서 발견된다. 이러한 광범한 분포는, T-형 채널 차단제가 심혈관을 보호하는 것으로 추정됨을 암시하고, 수면장애, 기분장애, 우울증, 편두통, 고알도스테론혈증, 조기분만(preterm labor), 요실금, 뇌의 노화 또는 알츠하이머병과 같은 신경퇴행성 장애에 대하여 효과를 가질 것을 암시한다.
최초의 L-형 및 T-형 칼슘 채널 차단제인 미베프라딜(Posicor®)은 주로 L 채널을 표적으로 하는 칼슘 채널 차단제보다 우수한 효과를 나타냈다. 미베프라딜은 이노트로피 같은 L 채널 차단제에 의하여 흔히 나타나는 부정적 부작용인 수축력증가(inotropy), 반사성 빈맥, 혈관수축 호르몬 방출 또는 말초 부종을 나타내지 않고 고혈압과 협심증의 치료에 사용되었다. 또한 미베프라딜은 잠재적인 심근보호 효과(Villame, Cardiovascular Drugs and Therapy 15, 41-28, 2001; Ramires, J Mol Cell Cardiol 1998, 30, 475-83), 신장 보호 효과(Honda, Hypertension 19, 2031-37, 2001)를 나타냈고, 심부전의 치료에서 긍정적 효과를 나타냈다 (Clozel, Proceedings Association American Physicians 1999, 111, 429-37).
이러한 프로파일(profile)의 화합물에 대한 거대한 수요에도 불구하고, 미베프라딜은 수용할 수 없는 CYP 3A4 약물 상호작용으로 인하여 1998년(출시 후 1년)에 시장에서 철수했다. 더욱이, ECG 이상(즉 QT 연장) 및 MDR-1 매개된 디곡신 유출과의 상호작용 또한 보고되었다 (du Souich, Clin Pharmacol Ther 67, 249-57, 2000; Wandel, Drug Metab Dispos 2000, 28, 895-8).
T/L-형 칼슘 채널 차단제로 작용하지만 미베프라딜과 비교하여 개선된 안정성 프로파일을 가지는 신규한 화합물에 대한 수요가 명백히 존재한다.
본 발명의 화합물은 유효한 T/L 채널 차단제이고, 따라서 T 및 L 채널이 관련된 질환 모두에 유용하다.
i) 본 발명의 첫 번째 양태는 화학식 (I)의 벤지미다졸 유도체로 이루어지고
Figure 112010077161232-pct00001
(I)
여기서
R 1 은 치환되지 않거나, 단일-, 이중-, 또는 삼중-치환된 아릴을 나타내고, 여기서 치환기는 (C1-4)알킬, (C1-4)알콕시, 할로겐, 및 트리플루오로메틸로 이루어지 군에서 독립적으로 선택되고;
R 2 는 수소, 또는 -CO-R 21 을 나타내고;
R 21 은 (C1-5)알킬, (C1-3)플루오로알킬, 또는 (C3-6)사이클로알킬을 나타내고;
m은 정수 2, 또는 3을 나타내고;
p는 정수 2 또는 3을 나타내며;
R 3 는 수소, 또는 (C1-5)알킬을 나타낸다.
다음 단락은 본 발명에 따른 화합물의 다양한 화학적 부분(moiety)의 정의를 제공하고, 이러한 정의는 달리 명시된 정의가 더 넓거나 더 좁은 정의를 나타내지 않을 경우에 명세서와 특허청구범위 전반에서 균일하게 적용되도록 의도된다.
용어 "(C1-5)알킬"은 1 내지 5개의 탄소 원자를 보유하는 선형 사슬 또는 가지형 사슬 알킬기를 의미한다. 바람직한 것은 1 내지 4개의 탄소 원자를 보유하는 기이다. 용어 "(Cx-y)알킬"(x 및 y는 정수)은 x 내지 y개의 탄소 원자를 보유하는 선형 또는 가지형 사슬 알킬기를 지칭한다. (C1-5)알킬기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, sec.-부틸, tert.-부틸, 이소부틸, n-펜틸 및 이소펜틸이다. 바람직한 것은 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필이다. 가장 바람직한 것은 메틸이다. 치환기 R 21 에 대하여, 이소프로필이 가장 바람직하다.
용어 "(C1-3)플루오로알킬"은 1 내지 7개의 플루오린 원자로 치환된 선형 사슬 또는 가지형 사슬 (C1-3)알킬기를 의미한다. (C1-3)플루오로알킬기의 예는 트리플루오로메틸, 2-플루오로에틸, 2,2-디플루오로에틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 및 펜타플루오로에틸이다. 바람직한 것은 트리플루오로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 및 펜타플루오로에틸이다. 가장 바람직한 것은 트리플루오로메틸이다. R 21 에 대하여, 2,2,2-트리플루오로에틸이 가장 바람직하다.
용어 "(C3-6)사이클로알킬"은 3 내지 6개의 탄소 원자를 보유하는 포화 환형 알킬기를 의미한다. (C3-6)사이클로알킬기의 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 및 사이클로헥실이다. 치환기 R 21 에 대하여, 사이클로프로필이 가장 바람직하다 .
용어 "(C1-5)알콕시"는 화학식 (C1-5)알킬-O-의 기를 의미하고, 여기서 용어 (C1-5)알킬은 앞에서 주어진 의미를 가진다. 용어 "(Cx-y)알콕시"(x 및 y는 정수임)는 x 내지 y개의 탄소 원자를 보유하는 선형 또는 가지형 사슬 알콕시 그룹을 지칭한다. (C1-5)알콕시기의 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, 이소부톡시, sec-부톡시 및 tert.-부톡시이다. 바람직한 것은 메톡시 및 에톡시이다.
용어 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 또는 아이오도, 특히 플루오로 또는 클로로를 의미한다.
용어 "아릴"은 페닐 또는 나프틸기를 의미한다. 바람직한 것은 페닐기이다. 아릴기는 치환되지 않거나, 단일-, 이중-, 또는 삼중-치환될 수 있고, 여기서 치환기는 (C1-4)알킬, (C1-4)알콕시, 할로겐, 및 트리플루오로메틸로 이루어진 군에서 독립적으로 선택된다. 하위-구체예에서, 아릴기는 바람직하게는 치환되지 않는다. "아릴"기의 예는 페닐, 나프틸, 2-메틸페닐, 3-메틸페닐, 4-메틸페닐, 3,4-디메틸페닐, 2,3-디메틸페닐, 2,4-디메틸페닐, 2,6-디메틸페닐, 3,4-디메틸페닐, 3,5-디메틸페닐, 2-메톡시페닐, 3-메톡시페닐, 4-메톡시페닐, 2,3-디메톡시페닐, 3,4-디메톡시페닐, 2-플루오로페닐, 3-플루오로페닐, 4-플루오로페닐, 3,4-디플루오로페닐, 3-클로로페닐, 2,3-디클로로페닐, 3,4-디클로로페닐, 2-트리플루오로메틸페닐, 3-트리플루오로메틸페닐, 및 4-트리플루오로메틸페닐이다. 바람직한 것은 페닐이다.
다음에서, 본 발명의 또 다른 구체예가 설명된다:
ii) 본 발명의 또 다른 구체예는, 가교된 사이클로헥센 부분의 배열이 R2-O- 치환기와 사이클로헥센 부분의 가교 -(CH2)p-가 시스 관계인 (즉, 절대 배열이 아래의 화학식 (IE1) 또는 화학식 (IE2)에 나타나는 것과 같은) 구체예 i)에 따른 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다.
iii) 본 발명의 또 다른 구체예는, 절대 배열이 화학식 (IE1)에 나타나는 것과 같은 구체예 i)에 따른 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다
Figure 112010077161232-pct00002
.
(IE1)
iv) 본 발명의 또 다른 구체예는, 절대 배열이 화학식 (IE2)에 나타나는 것과 같은 구체예 i)에 따른 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다
Figure 112010077161232-pct00003
.
(IE2)
v) 본 발명의 또 다른 구체예는, R 1 이 치환되지 않은 페닐을 나타내는 구체예 i) 내지 iv) 중 하나에 따른 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다.
vi) 본 발명의 또 다른 구체예는, p가 정수 2를 나타내는 구체예 i) 내지 v)에 따른 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다.
vii) 본 발명의 또 다른 구체예는, p가 정수 3을 나타내는 구체예 i) 내지 v)에 따른 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다.
viii) 본 발명의 또 다른 구체예는, R 2 가 -CO-R 21 을 나타내는 구체예 i) 내지 vii) 중 하나에 따른 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다.
ix) 본 발명의 또 다른 구체예는, R 21 이 (C1-5)알킬, 또는 (C3-6)사이클로알킬을 나타내는 구체예 i) 내지 viii) 중 하나에 따른 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다.
x) 본 발명의 또 다른 구체예는 구체예 i) 내지 ix) 중 하나에 따른 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이고, 여기서 R 21 은 (C1-5)알킬(특히 이소프로필)을 나타낸다.
xi) 본 발명의 또 다른 구체예는, R 2 가 수소를 나타내는 구체예 i) 내지 vii) 중 하나에 따른 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다.
xii) 본 발명의 또 다른 구체예는, m이 정수 3을 나타내는 구체예 i) 내지 xi) 중 하나에 따른 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다.
xiii) 본 발명의 또 다른 구체예는, R 3 가 수소를 나타내는 구체예 i) 내지 xii) 중 하나에 따른 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다.
xiv) 본 발명의 또 다른 구체예는, R 3 가 (C1-5)알킬(특히 메틸)을 나타내는 구체예 i) 내지 xii) 중 하나에 따른 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다.
화학식 (I)의 화합물은 비대칭 탄소 원자와 같은 입체 중심(stereogenic center) 또는 비대칭 중심(asymmetric center)을 보유한다. 따라서 화학식 (I)의 화합물은 입체이성질체(stereoisomer)의 혼합물 또는 바람직하게는 순수한 입체이성질체로서 존재할 수 있다. 입체이성질체의 혼합물은 당업자에게 공지인 방식으로 분리될 수 있다.
바람직한 화학식 (I)의 화합물은 다음으로 이루어진 군에서 선택된다:
(1R,2R,4R)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-올;
(1S,2S,4S)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-올; 및
(1R*,5R*,6R*)-6-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]논-8-엔-6-올.
추가로, 구체예 i)에 따른 또 다른 바람직한 화학식 (I)의 화합물이 다음으로 이루어진 군에서 선택된다:
이소부티르산 (1R,2R,4R)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일 에스테르;
이소부티르산 (1S,2S,4S)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일 에스테르; 및
이소부티르산 (1R*,5R*,6R*)-6-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]논-8-엔-6-일 에스테르.
입체이성질체의 상대 배열은 다음과 같이 표시된다: 예를 들어, 이소부티르산 (1R*,5R*,6R*)-6-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]논-8-엔-6-일 에스테르는
이소부티르산 (1R,5R,6R)-6-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]논-8-엔-6-일 에스테르,
이소부티르산 (1S,5S,6S)-6-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]논-8-엔-6-일 에스테르,
또는 이들 두 가지 거울상이성질체(enantiomer)의 혼합물을 나타낸다.
화합물, 염, 제약학적 조성물, 질병 등에 대하여 복수 형태가 사용될 경우, 이는 또한 단일 화합물, 염 등을 의미하도록 의도된다.
화학식 (I), (IE1), 및/또는 (IE2)의 화합물에 대한 언급은 또한 적절하고 적당한 이러한 화합물의 염(및 특히 제약학적으로 허용 가능한 염)을 일컫는 것으로 이해해야 한다.
용어 "제약학적으로 허용되는 염"은 무독성의, 무기 또는 유기 산 및/또는 염기 부가염(addition)을 일컫는다. "Salt selection for basic drugs", Int. J. Pharm. (1986), 33, 201-217을 참조할 수 있다.
화학식 (I), (IE1), 및/또는 (IE2)의 화합물 및 이들의 제약학적으로 허용 가능한 염은 약제(medicament)로서, 예를 들어 장관 또는 비경구 투여를 위한 제약학적 조성물 형태로 사용될 수 있다.
제약학적 조성물의 제조는 임의의 당업자에게 익숙할 방식으로 수행될 수 있는데 (예를 들어 Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition (2005), Part 5, "Pharmaceutical Manufacturing" [Lippincott Williams & Wilkins에서 출판] 참조), 이는 기재된 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 제약학적으로 허용 가능한 염을, 치료적으로 유용한 다른 물질과 선택적으로 조합하여, 적절한 무독성, 불활성의, 치료적으로 적합한 고체 또는 액체 담체(carrier) 물질, 필요한 경우 일반적인 제약학적 어쥬번트(adjuvant)와 함께 갈레누스(galenical) 투여 형태로 만드는 것이다.
화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 제약적으로 허용 가능한 염은,
· 만성 안정형 협심증, 고혈압, 허혈(신장허혈 및 심장허혈), 심방세동을 포함하는 심부정맥, 심장비대, 또는 울혈성심부전의 치료 또는 예방을 위한 약제 제조에 유용하다.
화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 제약적으로 허용 가능한 염은 단독 또는 조합의 다음의 질환군을 위한 약제의 제조에도 또한 유용하다:
· 인간 및 다른 포유류의 신장 질환, 당뇨병 및 당뇨병의 합병증, 고알도스테론혈증, 간질, 신경병증성 통증, 또는 암의 치료;
· 항세동제(anti-fibrillatory agent), 항천식제, 항죽상경화제(anti-atherosclerotic agent), 폐 바이패스(pulmonary bypass)용 심정지용액에 첨가하는 첨가제, 혈전용해요법(thrombolytic therapy)에 대한 보조약(adjunct), 항응집제(antiaggregant agent), 또는 불안정형 협심증의 치료용제로서 사용;
· 고혈압, 특히 간문맥 고혈압, 에리스로포이에틴을 사용하는 치료에 대한 속발성(secondary) 고혈압 및 저레닌 고혈압의 치료 또는 예방;
· 저산소성 또는 허혈성 질환에서 사용, 또는 예를 들어 심장허혈, 신장허혈 및 뇌허혈 그리고 재관류(예를 들어 심폐 바이패스 수술 후 발생하는 재관류), 관상동맥 및 뇌혈관 연축 등의 치료, 말초 혈관 질환(예를 들어 레이노병, 간헐성 파행, 타카야스병), 통증위기의 개시 및/또는 발전을 포함하는 겸상적혈구 질환을 위한 요법용 항허혈제로서 사용;
· 급성 및 만성 신부전, 당뇨병성 신장병, 고혈압-유발 신장병, 사구체 손상, 연령 또는 투석 관련 신장 손상, 신장경화증, 영상 및 조영제 관련 및 사이클로스포린 관련 신독성, 신장 허혈, 원발성 방광요관 역류, 또는 사구체경화증을 포함하는, 신장 세포, 사구체 세포 및 혈관사이 세포 기능 관련 장애의 치료 또는 예방;
· 심근경색증을 위한 요법, 심장비대, 원발성 및 속발성 폐고혈압의 치료, 섬유증 저해, 좌심실 확장, 재형성 및 기능장애 저해를 포함하는 울혈성심부전을 위한 요법, 또는 혈관성형술 또는 스텐팅(stenting) 다음의 재협착에서 사용;
· 내독소혈증 또는 내독소 쇼크, 또는 출혈성 쇼크의 치료;
· 남성 성기능장애 (예를 들어 당뇨병, 척수 손상, 근치적 전립선절제술, 심인성 병인 및 다른 원인으로 인한 발기 기능장애) 및 생식기, 특히 음핵해면체를 향한 혈류 증가에 의한 여성 성기능장애의 치료;
· 암 또는 세포 증식 관련 종말 기관 손상의 예방 및/또는 감소;
· 대사 장애 또는 만성 염증성 질환, 인슐린 의존성 및 인슐린 비의존성 당뇨병 및 당뇨병의 합병증(예를 들어 신경병증, 망막병증), 고알도스테론혈증, 골 재형성, 건선, 관절염, 류마티스 관절염, 골관절염 사르코이드증, 또는 습진성 피부염의 치료;
· 간독성과 돌연사, 초기 및 진행된 간질환 및 수반하는 합병증(예를 들어 간독성, 섬유증, 경화증)을 포함하는 간손상, 혈관주위세포종에서 기인한 고열압과 같은 종양의 유해한 결과, 요로 및/또는 방광의 경직성 질환, 간신증후군, 루푸스와 같은 혈관염, 전신 경화증, 혼합 한랭글로불린증을 포함하는 면역 질환, 신장 기능장애 관련 섬유증 및 간독성의 치료;
· 궤양성 대장염, 크론병, 위점막 손상, 궤양 염증성 장질환 및 허혈성 장질환과 같은 위장관 질환, 담관염, 이자염과 같은 담낭 또는 담관계 질환, 세포 성장 조절, 양성 전립선 비대증, 또는 이식에서의 사용, 또는 항설사제로서 사용;
· 기관지수축 또는 폐쇄성 폐질환 및 성인성 호흡곤란 증후군과 같은 만성 또는 급성 염증 장애를 포함하는 장애의 치료;
· 신경병증성 통증, 말초성 통증 및 전립선암 또는 골암 관련 통증과 같은 암 관련 통증을 포함하는 통증 완화;
· 뇌졸중, 일과성 허혈 발작, 편두통 및 지주막하 출혈과 같은 중추신경계 혈관성 장애, 중추신경계 행동 장애의 치료, 알츠하이머성 치매, 노인성 치매 및 혈관성 치매를 포함하는 치매, 간질, 또는 수면장애의 치료; 또는
· 상기 효용의 결과로서 일반적인 질병률 및/또는 사망률의 감소.
본 발명은 또한 본 명세서에 언급한 질환 또는 장애의 예방 또는 치료 방법에 관한 것이며, 이는 환자에게 제약학적으로 활성인 양의 화학식 (I)의 화합물을 투여하는 것을 포함한다.
더욱이, 화학식 (I)의 화합물은 또한 바람직하게는 스타틴과 같은 지질강하제, 쿠마린과 같은 항응고제, 클로피도그렐과 같은 항혈전제, β-차단제, 및 다른 심장보호제에서 선택된 하나 이상의 제제와 조합하여 사용될 수 있다.
이외에도, (화합물 자체, 이의 염, 화합물 또는 이의 염을 함유하는 조성물, 화합물 또는 이의 염의 용도 등 어떤 것에 대한 것이던) 화학식 (I)의 화합물에 대하여 나타난 임의의 선호를 화학식 (IE1), 및/또는 (IE2)의 화합물에 준용하고 그 반대도로 적용된다.
화학식 (I)의 화합물의 제조:
본 발명의 또 다른 양태는 본 발명의 화학식 (I)의 화합물의 제조 공정이다. 수득된 화합물은 또한 공지 방식으로 이의 제약학적으로 허용 가능한 염으로 전환될 수 있다.
일반적으로, 모든 화학적 변환은 문헌에 설명되거나 하기 반응식 1 내지 3에 요약된 절차에 설명된 공지의 표준 방법에 따라 수행될 수 있다. 별도로 명시하지 않으면, 일반적인 기 또는 정수 R1, R2, R3, p, 및 m은 화학식 (I)에 대하여 정의한 바와 같다. 사용된 다른 약어는 실험 부분에서 정의된다. 일부 예에서, 일반적인 기 R1, R2, R3는 하기 반응식에 나타난 어셈블리에 부적합할 수 있고, 따라서 보호기(PG)의 이용을 필요로 할 것이다. 보호기의 이용은 당해 분야에 공지이다 (예를 들어 "Protective Groups in Organic Synthesis", T.W. Greene, P.G.M. Wuts, Wiley-Interscience, 1999 참조). 이러한 논의의 목적을 위하여, 이러한 보호기가 필요한 경우 적소에 위치하는 것으로 가정할 것이다.
화학식 (I)의 화합물은 아래 반응식 1에 개략된 절차에 따라 제조된다.
R2가 H를 나타내는 화학식 (I)의 화합물은, rt에서 에탄올, 메탄올, THF 또는 물과 같은 용매에서 LiOH 또는 NaOH와 같은 표준 염기성 조건을 이용하거나, rt에서 에탄올, 메탄올, THF, DCM, 또는 물과 같은 용매에서 aq. HCl 또는 TFA와 같은 표준 산성 조건을 이용한 에스테르 K의 비누화에 의하여, 산 유도체 1.1를 산출하여 제조될 수 있다. 이후 상기 산이 NEt3 또는 DIPEA와 같은 염기의 존재하에 그리고 THF, DCM 또는 DMF와 같은 용매에서 바람직하게는 rt에서, EDC, HOBt 또는 PyBOP와 같은 표준 결합제(coupling reagent)를 사용하여 벤지미다졸 유도체 BB와 결합되어 아미드 유도체 1.2를 제공한다. 이후 아미드 1.2가 0℃ 내지 rt의 온도에서 톨루엔과 같은 적절한 용매에서 LiAlH4 또는 Red-Al과 같은 표준 환원제를 사용하여 환원되어 R2가 H를 나타내는 원하는 화학식 (I)의 화합물을 제공한다.
반응식 1
Figure 112010077161232-pct00004
R2가 H를 나타내는 화학식 (I)의 화합물의 알코올은 필요한 경우 MgBr2와 같은 루이스산의 존재하에, 또는 NEt3와 같은 염기의 존재하에 0℃ 내지 65℃의 온도에서 DCM 또는 THF와 같은 비활성 용매에서, 산 염화물, 산 무수물, 클로로포르메이트, 이소시아네이트, 또는 카르바모일클로라이드와 같은 표준 시약을 사용하여 아실화되어 R2가 -COR21을 나타내는 화학식 (I)의 화합물을 제공할 수 있다.
핵심 중간체 K는 반응식 2에 따라 제조된다. 디케톤 2.1 및 단일 보호된 케톤 2.2가 공지 절차에 따라 제조될 수 있다 (Can. J. Chem. 1992, 70, 974-980, Can. J. Chem. 1968, 46, 3713-17, JOC 1978, 43, 4648-4650).
반응식 2
Figure 112010077161232-pct00005
-78℃ 내지 rt의 온도에서 Et2O 또는 THF와 같은 적절한 용매에서 그리냐르 시약(Grignard reagent) 또는 리튬화된 시약(표준 반응 조건을 이용하여, 예를 들어 부틸리튬을 사용하여 대응하는 브로모 화합물로부터 제조됨), 예컨대 페닐마그네슘브로마이드와 같은 친핵체를 사용한 케톤 2.2의 알킬화가 알코올 2.3을 산출한다.
알코올 유도체의 케탈 2.3의 가수분해 및 바람직하게는 rt에서 아세톤과 같은 적절한 용매에서 TsOH와 같은 표준 탈수 시약 및 절차를 이용한 후속하는 물의 제거가 케톤 2.4를 생성한다.
대안으로, 이러한 탈보호/제거 반응이 두 단계로 수행될 수 있다. 알코올 유도체의 케탈 2.3은 rt에서 아세톤과 같은 용매에서 TsOH와 같은 양성자성 조건을 이용하여 상기한 바와 같이 가수분해되어 케톤 유도체 2.5를 산출한다. 물의 제거가 NEt3와 같은 염기의 존재하에 그리고 0℃ 내지 rt의 온도에서 DCM과 같은 적절한 용매에서 Ms-Cl과 같은 표준 조건을 사용하거나, 0℃ 내지 rt의 온도에서 THF와 같은 적절한 용매에서 버제스 시약(Burgess reagent)을 사용하여 수행되어 케톤 유도체 2.4을 생성할 수 있다.
또 다른 변형에서, 디케톤 2.1이 약 0℃의 온도에서 Et2O 또는 THF와 같은 표준 용매에서 그리냐르 시약과 같은 적절한 친핵체에 의하여 케톤 유도체 2.5로 직접, 선택적으로 모노-알킬화될 수 있다. 이후 물의 제거가 앞에서 언급한 것과 동일한 조건을 적용하여 수행될 수 있다.
케톤 유도체 2.4는 -50℃ 내지 rt의 온도에서 리튬화된 tert.-부틸아세테이트(-50℃의 온도에서 톨루엔-THF 또는 헥산-THF과 같은 용매의 혼합물에서 tert.-부틸 브로모아세테이트, n-부틸리튬 및 DIPA를 사용하여 제자리에서(in situ) 제조됨)와 같은 리튬화된 알킬기 또는 그리냐르 시약과 같은 친핵체를 첨가하여 원하는 핵심 중간체 K로 변형된다.
벤지미다졸 유도체 BB(반응식 1)의 합성이 반응식 3에 개략된다. 적절하게 치환된 디아닐린 유도체 3.1(예를 들어 1,4-디메톡시-2,3-디니트로-벤젠(Eur.J.Org.Chem. 2006, 2786-2794)으로부터 표준 절차에 따르거나 아래의 실험 부분에 주어진 방법에 따라 합성됨)이, rt에서 THF, DCM과 같은 용매에서 DIPEA, NEt3, DMAP와 같은 염기의 존재하에 EDC/HOBt와 같은 조건 및 표준 결합제를 사용하여 적절히 보호된 상용화되어 구입 가능한 N-알킬아미노-알칸산 유도체와 결합되어, PG가 Cbz 또는 BOC와 같은 아미노 보호기를 지칭하는 아닐린 유도체 3.2를 제공한다. 용매 없이 또는 톨루엔 또는 아세트산과 같은 적절한 용매에서, 바람직하게는 마이크로웨이브 조건하에 3.2를 약 150℃로 가열하는 것은, 보호된 아미노알킬 벤지미다졸 유도체 3.3을 생성한다. 선택적으로, R3가 알킬인 경우에, 치환기가 약 0℃의 온도에서 아세톤, DMF 또는 THF와 같은 용매에서 NaH 또는 K2CO3와 같은 염기의 존재하에 적절한 알킬 할로게나이드를 사용하는 알킬화와 같은 표준 반응을 이용하여 도입될 수 있다. 표준 탈보호 절차(PG = Cbz에 대하여 수소화; PG = BOC에 대하여 TFA 또는 HCl)를 이용하는 탈보호가 원하는 아미노알킬 벤지미다졸 유도체 BB를 제공한다.
반응식 3
Figure 112010077161232-pct00006
화학식 (I)의 화합물이 거울상이성질체의 혼합물 형태로 수득될 때마다, 거울상이성질체가 당업자에게 공지인 방법을 이용하여: 예를 들면 부분입체이성질성 염 또는의 형성 및 분리에 의하거나, Regis Whelk-O1(R,R) (10 ㎛) 컬럼, Daicel ChiralCel OD-H (5-10 ㎛) 컬럼, 또는 Daicel ChiralPak IA (10 ㎛) 또는 AD-H (5 ㎛) 컬럼과 같은 카이랄 정지상에 걸친 HPLC에 의하여 분리될 수 있다. 카이랄 HPLC의 전형적인 조건은 0.8 내지 150 mL/min의 유량에서 용리액 A(EtOH, NEt3, 디에틸아민과 같은 아민의 존재 또는 부재하에)와 용리액 B(Hex)의 등용매(isocratic) 혼합물이다.
실험 부분
다음의 실시예는 본 발명을 설명하지만 발명의 범위를 전혀 한정하지 않는다.
모든 온도는 ℃로 나타난다. 화합물은 1H-NMR (400 MHz) 또는 13C-NMR (100 MHz)에 의하여 (Bruker; 화학 이동(chemical shift)은 사용된 용매에 대하여 ppm으로 주어짐; 다중도(multiplicity): s = 단일선, d = 이중선, t = 삼중선, q = 사중선, p = 오중선, hex = 육중선, hept = 칠중선, m = 다중선, br = 넓음, 커플링 상수는 Hz로 주어짐); LC-MS에 의하여 (HP 1100 Binary Pump 및 DAD를 구비한 Finnigan Navigator, 컬럼: 4.6x50 mm, Zorbax SB-AQ, 5 ㎛, 120 Å, 구배: 물에서 5-95% 아세토니트릴, 1 min, 0.04% 트리플루오로아세트산 함유, 유량: 4.5 mL/min), tR는 min으로 주어짐; TLC에 의하여 (Merck사의 TLC-플레이트, 실리카겔 60 F254); 또는 녹는점에 의하여 특성이 규명된다. 화합물은 조제용(preparative) HPLC(컬럼: X-terra RP18, 50x19 mm, 5 ㎛, 구배: 0.5 %의 포름산을 포함하는 물에서 10-95% 아세토니트릴)에 의하여 또는 실리카겔상의 컬럼 크로마토그래피에 의하여 정제된다. 라세미체는 조제용 HPLC(바람직한 조건: Daicel, ChiralCel OD 20x250 mm, 10 ㎛, 헥산에서 4% 에탄올, 유량 10-20 mL/min)에 의하여 거울상이성질체로 분리될 수 있다.
약어: (실시예 또는 상세한 설명에서 사용됨)
aq. 수성
Ac 아세틸
anh. 무수
BOC tert.-부톡시카르보닐
BSA 소 혈청 알부민
Bu 부틸
Cbz 벤질옥시카르보닐
CC 실리카겔상의 컬럼 크로마토그래피
버제스 시약 (메톡시카르보닐설파모일)트리에틸암모늄 하이드록사이드
d 일
DCM 디클로로메탄
dil. 희석된
DIPA 디이소프로필아민
DIPEA 디이소프로필-에틸아민, 휘니히 염기(Huenig's base),
에틸-디이소프로필아민
DMAP 디메틸아미노피리딘
DMF 디메틸포름아미드
DMSO 디메틸설폭사이드
EDC N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드
eq. 당량
Et 에틸
EtOAc 에틸 아세테이트
EtOH 에탄올
Et2O 디에틸 에테르
h 시간
Hept 헵탄
Hex 헥산
HOBt 1-하이드록시벤조트리아졸
HPLC 고성능 액체 크로마토그래피
LC-MS 액체 크로마토그래피 - 질량 분석법
Me 메틸
MeCN 아세토니트릴
MeOH 메탄올
min 분
Ms 메탄설포닐
NEt3 트리에틸아민
Pd/C 탄소상의 팔라듐
prep. 조제용
PyBOP 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스-피롤리디노-포스포늄
헥사플루오로포스페이트
sat. 포화
tert.- 삼차 (tert.-부틸 = t-부틸 = 삼차 부틸)
TFA 트리플루오로아세트산
THF 테트라하이드로퓨란
TLC 박막 크로마토그래피
Red-Al 소듐 -비스(2-메톡시에톡시)알루미늄하이드라이드
rt 실온
tR 체류시간
Ts 파라-톨루엔설포닐
TsOH 파라-톨루엔설폰산
중간체의 제조
핵심 중간체 K의 제조를 위한 일반적인 절차:
바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일 또는 바이사이클로[3.2.2]논-8-엔-6-일 유도체인 핵심 중간체 K1A 및 K2A가 상대 배열 (R*,R*,R*)을 가지는 주(major) 라세미체(즉, 사이클로헥센 부분의 가교 -(CH2)p-가, 하이드록시인 기 -OR2에 대하여 시스) 및 상대 배열 (R*,S*,R*) 또는 (R*,R*,S*) 각각을 가지는 부(minor) 라세미체(즉, 사이클로헥센 부분의 가교 -(CH2)p-가 (p는 각각 2 또는 3을 나타냄), 하이드록시인 기 -OR2에 대하여 트랜스)의 혼합물로서 수득된다. 주 라세미체 및 부 라세미체는 절차 A1.5에서 핵심 중간체 K1A에 대하여 설명한 바와 같이 분리될 수 있다. 달리 명시되지 않으면, 주 라세미체만이 하기 실시예의 제조에서 분리되고 사용된다.
K1A: rac-(1R*,2R*,4R*)-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산 tert.-부틸 에스테르
K1A.1 (절차 A1.1): rac-(1R*,4R*)-바이사이클로[2.2.2]옥탄-2,5-디온
25 mL의 2-(트리메틸실릴옥시)-1,3-사이클로헥사디엔 및 13 mL의 α-아세톡시아크릴로니트릴을 혼합하고 밀폐 용기에서 22 h 동안 150℃에서 가열했다. 수득한 어두운 주황색 점성 오일을 200 mL의 MeOH에 용해했다. 2.2 g의 소듐 메톡사이드의 150 mL의 MeOH 용액을 한 방울씩 첨가한 후, 반응 혼합물을 3 h 동안 rt에서 교반하고, 얼음/물에 붓고, DCM으로 추출했다. 유기상을 진공에서 농축했고, 미정제 잔류물을 EtOAc-Hept(1:2)를 사용하는 CC로 정제하여 7.9 g의 rac-(1R*,4R*)-바이사이클로[2.2.2]옥탄-2,5-디온을 산출했다.
LC-MS: tR = 0.44 min.
K1A.2 (절차 A1.2): rac-(1R*,4R*)-스피로[바이사이클로[2.2.2]옥탄-2,2'-[1,3]디옥솔란]-5-온
120 mL의 톨루엔에 용해된 4.0 g의 rac-(1R*,4R*)-바이사이클로[2.2.2]옥탄-2,5-디온(중간체 K1A.1)에, 1.7 mL의 에틸렌 글리콜 및 0.27 g의 TsOH를 첨가하고, 용액을 3.5 h 동안 격렬한 교반하에 가열하여 환류시켰다. 반응 혼합물을 rt로 냉각하고, 포화 aq. NaHCO3로 퀀칭(quenching)하고, Et2O로 추출하고, 유기상을 증발시켰다. 미정제 생성물을 Hex-EtOAc(7:3)를 사용하는 CC로 정제하여 2.41 g의 rac-(1R*,4R*)-스피로[바이사이클로[2.2.2]옥탄-2,2'-[1,3]디옥솔란]-5-온을 황색 오일로 산출했다.
LC-MS: tR = 0.64 min; [M+H+CH3CN]+: 224.35.
K1A.3 (절차 A1.3): rac-(7R*,8R*,10R*) 및 rac-(7R*,8S*,10R*)-7,10-(1,2-에틸렌)-8-페닐-1,4-디옥사-스피로[4.5]데칸-8-올의 혼합물
2.41 g의 rac-(1R*,4R*)-스피로[바이사이클로[2.2.2]옥탄-2,2'-[1,3]디옥솔란]-5-온(중간체 K1A.2)의 80 mL Et2O 용액에, 14.5 mL 페닐마그네슘 브로마이드 용액(Et2O에서 1M)을 10 min에 걸쳐 한 방울씩 첨가했다. 반응 혼합물을 4 h 동안 rt에서 교반했다. 이후, 혼합물을 얼음으로 조심스럽게 퀀칭하고, 8 mL 2N HCl을 첨가했으며, 상이 분리되었다. 유기상을 증발시키고, 미정제 생성물을 Hept-EtOAC(7:3)을 사용하는 CC로 정제하여 0.37 g의 7,10-(1,2-에틸렌)-8-페닐-1,4-디옥사-스피로[4.5]데칸-8-올을 무색 오일로 제공했다. (CC에 의한 부분입체이성질체의 분리가 가능하지만, 언급한 경우에만 수행된다.)
LC-MS: tR = 0.84 min; [M-H2O+H]+: 243.34.
K1A.4 (절차 A1.4): rac-(1R*,4R*)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-온
0.54 g의 7,10-(1,2-에틸렌)-8-페닐-1,4-디옥사-스피로[4.5]데칸-8-올(중간체 K1A.3)의 20 mL 아세톤 용액에 200 mg의 TsOH를 첨가한 다음 혼합물을 2 d 동안 rt에서 교반했다. 반응 혼합물을 sat. aq. NaHCO3로 퀀칭하고, EtOAC로 추출하고, 유기상을 증발시켰다. 미정제 생성물을 Hept-EtOAC(7:3)을 사용하는 CC로 정제하여 0.34 g의 rac-(1R*,4R*)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-온을 무색 오일로 제공했다.
LC-MS: tR = 0.93 min; [M+H+CH3CN]+: 240.11.
K1A.5 (절차 A1.5): rac-(1R*,2R*,4R*)-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산 tert.-부틸 에스테르 및 rac-(1R*,2S*,4R*)-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산 tert.-부틸 에스테르
0.51 mL의 DIPA의 0.5 mL THF 용액에, 2.2 mL의 n-부틸리튬(Hex에서 1.6M)을 -20℃에서 한 방울씩 첨가했다. 10 min 후, 0.5 mL의 톨루엔을 첨가하고, 용액을 30 min 동안 교반했다. 혼합물을 -50℃로 냉각하고, 0.73 mL의 tert.-부틸 아세테이트를 첨가했으며, 교반을 -50℃에서 1 h 동안 계속했다. 이후 1 mL의 THF에 용해된 0.32 g의 rac-(1R*,4R*)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-온(중간체 K1A.4)을 첨가했고, 용액을 -50 내지 -20℃에서 2.5 h에 걸쳐 교반했다. 반응 혼합물을 얼음/aq. HCl에 붓고, 유기상을 분리하고 세척하고 증발시켰다. 미정제 반응 생성물을 Hept-EtOAc(9:1)를 사용하는 CC로 정제하여, 0.30 g의 주 라세미체, rac-(1R*,2R*,4R*)-2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산 tert.-부틸 에스테르를 백색 고체로 산출하고, 0.07 g의 부 라세미체, rac-(1R*,2S*,4R*)-2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산 tert.-부틸 에스테르를 무색 오일로 산출했다.
LC-MS (주 라세미체): tR = 1.06 min; [M-(CH3)3-H2O+H]+: 241.11.
LC-MS (부 라세미체): tR = 1.05 min; [M+H]+: 315.18.
K1A.6: (1S,2S,4S)-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산 tert.-부틸 에스테르 및 (1R,2R,4R)-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산 tert.-부틸 에스테르
rac-(1R*,2R*,4R*)-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산 tert.-부틸 에스테르를 prep. 카이랄 HPLC(컬럼: Daicel ChiralPak AD-H, 20x250 mm, 5 ㎛; Hex/ EtOH 95:5, 유량 16 mL/min), 카이랄 분석 HPLC(Daicel ChiralPak AD-H, 4.6x250 mm, 5 ㎛; Hex/ EtOH 95:5, 유량 0.8 mL/min)를 사용하여 각각의 거울상이성질체로 분리했다:
거울상이성질체 A: tR = 6.70 min.
거울상이성질체 B: tR = 7.93 min.
K2A: rac-(1R*,5R*,6R*)-(6-하이드록시-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]논-8-엔-6-일)-아세트산 tert.-부틸 에스테르
K2A.1 (절차 A1.6): rac-(1R*,5R*,8R*) 및 rac-(1R*,5R*,8S*)-8-하이드록시-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]노난-6-온의 혼합물
1.4 g의 rac-(1R*,5R*)-바이사이클로[3.2.2]노난-6,8-디온(공지 절차에 따라 합성됨: Can.J.Chem. 1968, 46, 3713-3717)의 45 mL의 Et2O 현탁액에 10.3 mL의 페닐마그네슘브로마이드 용액(THF에서 1M)을 15 min 동안 0℃에서 연속으로 첨가하고, 혼합물을 2 h 동안 rt에서 교반했다. 이후 반응 혼합물을 0℃로 냉각하고, 얼음-물로 퀀칭하고, aq. HCl로 산성화하고, Et2O로 추출했다. 유기상을 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조하고, 진공에서 농축하여 미정제 표제 화합물을 황색 오일로 수득했다.
LC-MS: tR = 0.79 min; [M+H+CH3CN]+: 272.33.
K2A.2 (절차 A1.7): rac-(1R*,5R*)-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]논-8-엔-6-온
상기 미정제 8-하이드록시-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]노난-6-온(중간체 K2A.1)을 55 mL의 아세톤에 용해하고, 1.7 g의 TsOH를 첨가하고, 혼합물을 rt에서 하룻밤 동안 교반했다. 추가의 3.5 g의 TsOH를 첨가하고 교반을 5 h 더 계속했다. 이후 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 유기상을 sat. aq. NaHCO3로 세척하고 증발시켰다. 미정제 물질을 Hept-EtOAc(4:1)를 사용하는 CC로 정제하여 0.9 g의 rac-(1R*,5R*)-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]논-8-엔-6-온을 황색을 띠는 오일로 산출했다.
LC-MS: tR = 0.99 min; [M+H]+: 213.11.
K2A.3: rac-(1R*,5R*,6R*)-(6-하이드록시-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]논-8-엔-6-일)-아세트산 tert.-부틸 에스테르
절차 A1.5를 이용하여 rac-(1R*,5R*)-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]논-8-엔-6-온(중간체 K2A.2)으로부터 제조한다.
LC-MS (주 라세미체): tR = 1.11 min; [M-(CH3)3-H2O+H]+: 254.02.
BB. [3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아민
BB.1 3,6-디메톡시-벤젠-1,2-디아민
6.0 g의 1,4-디메톡시-2,3-디니트로-벤젠(Eur.J.Org.Chem. 2006, 2786-2794)을 220 mL EtOH에 용해하고, N2로 3 회 이베큐에이션(evacuation)하고, 600 mg의 10wt% Pd/C를 첨가하여 3,6-디메톡시-벤젠-1,2-디아민을 합성했다. 반응을 H2 대기(풍선)하에 교반했다. 2 일 후 추가의 300 mg의 10wt% Pd/C를 첨가했고, 혼합물을 추가로 24 h 동안 교반했다. 셀라이트 패드로 여과하고 EtOH 및 EtOAc로 세척하여 진공에서 농축 후 4.3 g의 3,6-디메톡시-벤젠-1,2-디아민을 검정색 고체로 산출했다.
LC-MS: tR = 0.48 min; [M+H]+: 169.09.
BB.2 [3-(2-아미노-3,6-디메톡시-페닐카르바모일)-프로필]-메틸-카르밤산 벤질 에스테르
3.1 g의 4-(벤질옥시카르보닐-메틸-아미노)-부티르산의 80 mL DCM 용액에 6.5 mL의 DIPEA, 1.8 g의 HOBt, 2.6 g의 EDC 및 154 mg의 DMAP를 첨가했다. 10 min 동안 교반한 후, 20 mL DCM에 용해된 2.1 g의 3,6-디메톡시-벤젠-1,2-디아민을 첨가했고, 혼합물을 rt에서 하룻밤 동안 교반했다. 반응을 sat. aq. NaHCO3로 퀀칭했고, 상이 분리되었으며, 유기상을 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조하고, 진공에서 농축하여 미정제 표제 화합물을 검정색 오일로 산출했다.
LC-MS: tR = 0.88 min; [M+H]+: 402.06.
BB.3 [3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-카르밤산 벤질 에스테르
상기 미정제 3-(2-아미노-3,6-디메톡시-페닐카르바모일)-프로필]-메틸-카르밤산 벤질 에스테르의 16 mL 톨루엔 혼합물에 4 mL의 DMF 및 1.9 g의 TsOH를 첨가했고, 반응물을 150℃로 2 h 동안 마이크로웨이브에서 가열했다. Sat. aq. NaHCO3를 첨가했고, 상이 분리되었다. 유기상을 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조하고, 진공에서 농축하고, EtOAc를 사용하여 실리카겔의 쇼트 패드로 여과하고, 다시 농축했다. EtOAc를 사용한 CC에 의한 정제가 2.7 g의 3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-카르밤산 벤질 에스테르를 갈색 수지로 산출했다.
LC-MS: tR = 0.85 min; [M+H]+: 384.62.
BB.4 [3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아민
2.6 g의 3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-카르밤산 벤질 에스테르의 60 mL EtOH 용액을 N2로 3 회 이베큐에이션한 후, 260 mg의 10 wt% Pd/C를 첨가했다. 이후 반응 혼합물을 H2 대기(풍선)하에 5 h 동안 rt에서 교반했다. 셀라이트 패드로 여과하고 EtOH로 세척하여 진공에서 농축한 후 1.7 g의 3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아민을 갈색 폼(foam)으로 산출했다.
LC-MS: tR = 0.57 min; [M+H]+: 250.13.
실시예의 제조
실시예 1: rac-(1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-올
1.1 (절차 P1.1): rac-(1R*,2R*,4R*)-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산
4.0 g의 rac-(1R*,2R*,4R*)-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산 tert.-부틸 에스테르의 25 mL EtOH 용액에 2.1 g의 LiOH.H2O, 8 mL H2O 및 22 mL MeOH를 첨가했다. 반응 혼합물을 rt에서 3 d 동안 교반한 다음 농축했다. 잔류물이 물과 Et2O 사이에 분배되었다. aq. 층이 분리되었고 1N HCl로 산성화되어 백색 고체를 형성했다. 고체를 여과하고, 5 mL dil. HCl로 세척하고, 진공에서 건조하여 3.2 g의 rac-(1R*,2R*,4R*)-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산을 백색 고체로 수득했다.
LC-MS: tR = 0.86 min; [M-H2O+H]+: 241.28.
1.2 (절차 P1.2): rac-(1R*,2R*,4R*)-N-[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-2-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-N-메틸-아세트아미드
280 mg의 rac-(1R*,2R*,4R*)-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산의 7 mL THF 용액에 0.58 mL의 DIPEA, 175 mg의 HOBt 및 250 mg의 EDC를 rt에서 첨가했다. 10 min 동안 교반한 후, 270 mg의 3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아민을 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 하룻밤 동안 교반했다. 반응 혼합물을 sat. aq. NaHCO3로 퀀칭했고, 상이 분리되었으며, 유기상을 물 및 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조하고, 진공에서 농축했다. EtOAc-MeOH(5:1 내지 2:1)를 사용하는 CC에 의한 정제가 475 mg의 rac-(1R*,2R*,4R*)-N-[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-2-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-N-메틸-아세트아미드를 백색 폼으로 산출했다.
LC-MS: tR = 0.91 min; [M+H]+: 490.06.
1.3 (절차 P1.3): rac-(1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-올
310 mg의 rac-(1R*,2R*,4R*)-N-[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-2-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-N-메틸-아세트아미드의 8 mL 톨루엔 용액에 0.77 mL의 Red-Al 용액(톨루엔에서 65%)을 0℃에서 한 방울씩 첨가했다. 10 min 동안 0℃에서 교반한 후, 냉각조를 제거하고 교반을 3 h 동안 rt에서 계속했다. 이후 반응 혼합물을 1M NaOH/얼음의 혼합물에 조심스럽게 붓고 10 min 동안 교반했다. aq. 상을 톨루엔으로 추출하고, 조합된 유기상을 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조하고, 진공에서 농축했다. EtOAc-MeOH(2:1)를 사용하는 CC에 의한 정제가 230 mg의 rac-(1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-올을 백색 폼으로 산출했다.
LC-MS: tR = 0.79 min; [M+H]+: 476.13.
실시예 1A: rac-이소부티르산 (1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일 에스테르
1A.1 (절차 P1.4): rac-이소부티르산 (1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일 에스테르
199 mg의 rac-(1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-올의 4 mL DCM 용액에 0.2 mL의 NEt3 및 0.1 mL의 이소부티릴클로라이드를 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 하룻밤 동안 교반하여 온도가 서서히 rt에 도달하도록 했다. 반응을 sat. aq. NaHCO3로 퀀칭했고, 상이 분리되었으며, 수상을 DCM으로 재추출했다. 조합된 유기상을 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조하고, 진공에서 농축했다. 잔류물을 3 mL EtOAc에 재용해했고, 실리카겔 및 1.5 mL MeOH를 첨가했으며, 혼합물을 7 d 동안 격렬하게 교반했다. 혼합물을 여과하고, EtOAc-MeOH(2:1)로 완전히 세척하고 증발시켰다. EtOAc-MeOH(5:1 내지 3:1 + 0.1% NEt3)를 사용하는 CC에 의한 정제가 186 mg의 rac-이소부티르산 (1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일 에스테르를 베이지색 폼으로 산출했다.
LC-MS: tR = 0.90 min; [M+H]+: 546.23.
1A.2 (절차 P1.5): rac-이소부티르산 (1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일 에스테르 디하이드로클로라이드
상기 생성물은 다음의 절차를 이용하여 대응하는 디하이드로클로라이드 염으로 전환될 수 있다.
186 mg의 rac-이소부티르산 (1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일 에스테르의 2 mL EtOAc 용액에 0.3 mL의 EtOAc에서 3M인 HCl를 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 가열하지 않고 증발로 건조하여 199 mg의 rac-이소부티르산 (1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일 에스테르를 디하이드로클로라이드로 제공했다.
실시예 2: (1R,2R,4R)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-올 또는 (1S,2S,4S)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-올
2.1: (1R,2R,4R)-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산 또는 (1S,2S,4S)-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산
rac-(1R*,2R*,4R*)-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산 tert.-부틸 에스테르의 거울상이성질체 B를 사용하여 실시예 1의 절차 P1.1에 따라 제조했다 (K1A.6 참조).
LC-MS: tR = 0.91 min; [M-H2O+H]+: 241.10.
2.2: (1R,2R,4R)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-올 또는 (1S,2S,4S)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-올
상기 (2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산을 사용하여 실시예 1의 절차 P1.2 내지 P1.3에 따라 제조했다.
LC-MS: tR = 0.78 min; [M+H]+: 476.09.
실시예 2A: 이소부티르산 (1R,2R,4R)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일 에스테르 또는 이소부티르산 (1S,2S,4S)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일 에스테르
상기 2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-올(실시예 2의 화합물)을 사용하여 실시예 1A의 절차 P1.4에 따라 제조했다.
LC-MS: tR = 0.89 min; [M+H]+: 546.19.
실시예 3: (1R,2R,4R)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-올 또는 (1S,2S,4S)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-올
3.1: (1R,2R,4R)-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산 또는 (1S,2S,4S)-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산
rac-(1R*,2R*,4R*)-(2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산 tert.-부틸 에스테르의 거울상이성질체 A를 사용하여 실시예 1의 절차 P1.1에 따라 제조했다 (K1A.6 참조).
LC-MS: tR = 0.91 min; [M-H2O+H]+: 241.16.
3.2: (1R,2R,4R)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-올 또는 (1S,2S,4S)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-올
상기 (2-하이드록시-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일)-아세트산을 사용하여 실시예 1의 절차 P1.2 내지 P1.3에 따라 제조했다.
LC-MS: tR = 0.79 min; [M+H]+: 476.09.
실시예 3A: 이소부티르산 (1R,2R,4R)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일 에스테르 또는 이소부티르산 (1S,2S,4S)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일 에스테르
상기 2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-올(실시예 3의 화합물)을 사용하여 실시예 1A의 절차 P1.4에 따라 제조했다.
LC-MS: tR = 0.89 min; [M+H]+: 546.11.
실시예 4: rac-(1R*,5R*,6R*)-6-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]논-8-엔-6-올
4.1: rac-(1R*,5R*,6R*)-(6-하이드록시-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]논-8-엔-6-일)-아세트산
rac-(1R*,5R*,6R*)-6-하이드록시-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]논-8-엔-6-일)-아세트산 tert.-부틸 에스테르를 사용하여 실시예 1의 절차 P1.1에 따라 제조했다 (K2A.3 참조).
LC-MS: tR = 0.96 min; [M+Na+H]+: 296.10.
4.2: rac-(1R*,5R*,6R*)-6-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]논-8-엔-6-올
rac-(1R*,5R*,6R*)-(6-하이드록시-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]논-8-엔-6-일)-아세트산을 사용하여 실시예 1의 절차 P1.2 내지 P1.3에 따라 제조했다.
LC-MS: tR = 0.80 min; [M+H]+: 490.06.
실시예 4A: rac-이소부티르산 (1R*,5R*,6R*)-6-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]논-8-엔-6-일 에스테르
rac-(1R*,5R*,6R*)-6-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-8-페닐-바이사이클로[3.2.2]논-8-엔-6-올을 사용하여 실시예 1A의 절차 P1.4에 따라 제조했다.
LC-MS: tR = 0.91 min; [M+H]+: 560.05.
생물학적 시험
생체외 분석( In vitro assay) L 채널
화학식 (I)의 화합물의 L 채널 길항 활성(IC50 값)을 다음의 실험 방법에 따라 결정한다.
보조 아단위(auxiliary subunit) β-2a 및 α2δ-1 이외에 인간 Cav1.2 채널을 발현하는 인간 배아 신장(HEK293) 세포를 배지(10% 열-비활성화된 소 태아 혈청 (FCS), 100 U/ml 페니실린, 100 ㎍/ml 스트렙토마이신, 100㎍/ml G418, 40㎍/ml 제오신 및 100㎍/ml 하이그로마이신을 함유하는 DMEM)에서 성장시켰다. 세포를 20,000 세포/웰로 384-웰 검정 투명 바닥 무균 플레이트(폴리-L-라이신-코팅됨, Becton Dickinson)에 접종(seeding)한다. 접종된 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 하룻밤 동안 배양한다. 20 mM의 최종 농도로 분석에 사용하기 위하여, KCl 용액을 분석 완충액(assay buffer)(0.1% BSA, 20 mM HEPES, 0.375g/l NaHCO3를 함유하는 HBSS, NaOH를 사용하여 pH 7.4로 조정됨) 중의 80 mM 저장 용액(stock solution)으로서 제조한다. 길항제(antagonist)를 DMSO 중의 10 mM 저장 용액으로 제조한 다음, 384w 플레이트에서 먼저 DMSO로, 이후 분석 완충액으로 희석하여 3x 저장액을 수득한다. 분석 당일에, 25 ㎕의 염색 완충액(staining buffer)(20 mM HEPES, 0.375g/l NaHCO3, 및 3 μM의 형광 칼슘 지시약 플루오-4 AM(DMSO 중의 1 mM 저장 용액, 10% 플루로닉(pluronic)을 함유)을 함유하는 HBSS)을 접종된 플레이트의 각 웰에 첨가한다. 384-웰 세포-플레이트를 37℃, 5% CO2에서 60 min 동안 배양하고, 이어서 분석 완충액을 사용하여 웰당 2 x 50㎕로 세척하고, 실온에서 평형을 이루도록(30-60 min) 상기 완충액을 50 ㎕/웰로 남긴다. 형광 영상 플레이트 판독기(FLIPR, Molecular Devices) 내에서, 길항제를 25 ㎕/웰 부피로 플레이트에 첨가하고, 3 min 동안 배양하고, 마지막으로 세포 탈분극(cellular depolarization)을 위하여 25 ㎕/웰의 KCl 용액을 첨가한다. 각 웰에 대하여 형광을 2 초 간격으로 8 분 동안 측정하고, 각 형광 피크 곡선 아래의 면적을 길항제 대신 부형제(vehicle)와 함께 20 mM KCl에 의하여 유도된 형광 피크의 면적과 비교한다. 각 길항제에 대하여, IC50 값(50 %의 KCl-유도된 형광 반응을 억제하기 위하여 필요한 화합물의 농도(nM))이 최대 10μM으로 결정된다.
실시예 1, 2, 3, 4의 화합물이 이 분석에서 검사되지 않았다. 실시예 화합물 1A, 2A, 3A 및 4A의 IC50 값은 156 내지 439 nM의 범위이며 평균은 305 nM이다.
생체외 분석 T 채널:
화학식 (I)의 화합물의 T 채널 길항 활성(IC50 값)이 다음의 실험 방법 및 표 1에 나타나는 데이터에 따라 결정된다.
인간 Cav3.1 Cav3.2 또는 Cav3.3 채널을 각각 발현하는 인간 배아 신장(HEK293) 세포를 배지(10% 열-비활성화된 소 태아 혈청 (FCS), 100 U/ml 페니실린, 100 ㎍/ml 스트렙토마이신 및 1 mg/ml G418을 함유하는 DMEM)에서 성장시켰다. 세포를 20,000 세포/웰로 384-웰 검정 투명 바닥 무균 플레이트(폴리-L-라이신-코팅됨, Becton Dickinson)에 접종한다. 접종된 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 하룻밤 동안 배양한다. 10 mM의 최종 농도로 분석에 사용하기 위하여, Ca2+ 용액을 100 mM 테트라에틸암모늄클로라이드(TEA-클로라이드), 50 mM HEPES, 2.5 mM CaCl2, 5 mM KCl, 1 mM MgCl2 중의 100 mM 저장 용액으로 제조하고, TEA-하이드록사이드를 사용하여 pH 7.2로 조정한다. 길항제를 DMSO 중의 10 mM 저장 용액으로 제조한 다음, 384w 플레이트에서 먼저 DMSO로, 이후 100 mM TEA-클로라이드, 50 mM HEPES, 2.5 mM CaCl2, 5 mM KCl, 1 mM MgCl2로 희석하고, TEA-하이드록사이드를 사용하여 pH 7.2로 조정하여 9x 저장액을 수득한다. 분석 당일에, 25 ㎕의 염색 완충액(20 mM HEPES, 0.375g/l NaHCO3 및 3 μM의 형광 칼슘 지시약 플루오-4 AM(DMSO 중의 1 mM 저장 용액, 10% 플루로닉을 함유)를 포함하는 HBSS)를 접종된 플레이트의 각 웰에 첨가한다. 384-웰 세포-플레이트를 37℃, 5% CO2에서 60 min 동안 배양하고, 이어서 0.1% BSA, 20 mM HEPES, 0.375g/l NaHCO3을 함유하는 HBSS를 사용하여 웰당 2 x 50㎕로 세척하고, 실온에서 평형을 이루도록(30-60 min) 상기 완충액을 50 ㎕/웰로 남긴다. 형광 이미지 플레이트 판독기(FLIPR, Molecular Devices) 내에서, 길항제를 6.25 ㎕/웰 부피로 플레이트에 첨가하고, 3 min 동안 배양하고, 마지막으로 6.25 ㎕/웰의 Ca2+ 용액을 첨가한다. 각 웰에 대하여 형광을 2 초 간격으로 8 분 동안 측정하고, 각 형광 피크 곡선 아래의 면적을 길항제 대신 부형제(vehicle)와 함께 10 mM Ca2+의하여 유도된 형광 피크의 면적과 비교한다. 각 길항제에 대하여, IC50 값(50 %의 Ca2+-유도된 형광 반응을 억제하기 위하여 필요한 화합물의 농도(nM))이 최대 10μM로 결정된다.
화합물 IC50 화합물 IC50 화합물 IC50 화합물 IC50
1 NA 2 NA 3 NA 4 NA
1A 571 2A 778 3A 793 4A 727
NA = 이용 불가능/ 시험하지 않음
Langendorff 법(Lgdff)에 따른 적출심장에 미치는 영향
화합물을 혈압 강하 효능 및 심장근육의 수축성에 미치는 영향에 대하여 시험했다. 마우스 적출심장에 대한 EC50 값을 문헌(Doring HJ., The isolated perfused heart according to Langendorff technique--function--application, Physiol. Bohemoslov. 1990, 39(6), 481-504; Kligfield P, Horner H, Brachfeld N., A model of graded ischemia in the isolated perfused rat heart, J. Appl. Physiol. 1976 Jun, 40(6), 1004-8)에 따라 결정했다.
실시예 1A의 화합물이 Langendorff 실험에 대하여 앞에서 설명한 절차를 이용하여 5 nM의 EC50를 가지는 것으로 측정되었다.

Claims (13)

  1. 만성 안정형 협심증, 고혈압, 신장 또는 심장 허혈, 심방세동을 포함하는 심부정맥, 심장비대, 또는 울혈성심부전의 치료 또는 예방을 위한, 최소한 한 가지의 제약학적으로 비활성인 부형제(excipient) 및 활성 성분(active principle)으로서 화학식 (I)의 화합물 또는 이러한 화합물의 제약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 제약학적 조성물:
    Figure 112013095718367-pct00007

    (I)
    여기서
    R1 은 치환되지 않은 페닐을 나타내고;
    R2 는 -CO-R21 을 나타내고; R21 은 (C1-5)알킬을 나타내고;
    m은 정수 3을 나타내고;
    p는 정수 2 또는 3을 나타내며;
    R3 는 수소를 나타냄.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 청구항 1에 있어서, 화합물은
    이소부티르산 (1R,2R,4R)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일 에스테르; 또는
    이소부티르산 (1S,2S,4S)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일 에스테르;
    또는 이의 제약학적으로 허용 가능한 염임을 특징으로 하는, 만성 안정형 협심증, 고혈압, 신장 또는 심장 허혈, 심방세동을 포함하는 심부정맥, 심장비대, 또는 울혈성심부전의 치료 또는 예방을 위한 제약학적 조성물.
  8. 청구항 1에 정의된 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 제약학적으로 허용 가능한 염을 이용하여, 만성 안정형 협심증, 고혈압, 신장 또는 심장 허혈, 심방세동을 포함하는 심부정맥, 심장비대, 또는 울혈성심부전의 치료 또는 예방을 위한 약제(medicament)를 제조하는 방법.
  9. 삭제
  10. 청구항 8에 있어서, 화합물은
    이소부티르산 (1R,2R,4R)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일 에스테르; 또는
    이소부티르산 (1S,2S,4S)-2-(2-{[3-(4,7-디메톡시-1H-벤조이미다졸-2-일)-프로필]-메틸-아미노}-에틸)-5-페닐-바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-2-일 에스테르;
    또는 이의 제약학적으로 허용 가능한 염임을 특징으로 하는, 만성 안정형 협심증, 고혈압, 신장 또는 심장 허혈, 심방세동을 포함하는 심부정맥, 심장비대, 또는 울혈성심부전의 치료 또는 예방을 위한 약제를 제조하는 방법.
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 삭제
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