KR101354168B1

KR101354168B1 - 단백질 타이로신 탈인산화 효소 １ｂ를 저해하는 디터펜 푸라노이드 화합물 및 그 용도

Info

Publication number: KR101354168B1
Application number: KR1020110108223A
Authority: KR
Inventors: 임정한; 김일찬; 한세종; 이형석; 오현철
Original assignee: 한국해양과학기술원
Priority date: 2011-10-21
Filing date: 2011-10-21
Publication date: 2014-01-24
Also published as: CN104080466A; KR20130043996A; CN104080466B

Abstract

본 발명은 단백질 타이로신 탈인산화효소 1B(PTP1B)의 활성을 저해하는 디터펜 푸라노이드 화합물 및 그 용도에 대한 것으로, 보다 상세하게는 남극의 지의류인 추출물인 디터펜 푸라노이드(Diterpene Furanoids), 상기 디터펜 푸라노이드의 제조방법 및 상기 디터펜 푸라노이드를 유효성분으로 함유하는 이형당뇨치료용 약학조성물 및 기능성 식품에 관한 것이다.

Description

단백질 타이로신 탈인산화 효소 １Ｂ를 저해하는 디터펜 푸라노이드 화합물 및 그 용도 {Diterpene Furanoids for Inhibiting Protein Tyrosine Phosphatase 1B and Use Thereof}

본 발명은 단백질 타이로신 탈인산화효소 １Ｂ(PTP1B)의 활성을 저해하는 디터펜 푸라노이드 화합물 및 그 용도에 대한 것으로, 보다 상세하게는 남극의 지의류인 후에아 코라리게라(Huea coralligera) 유래 디터펜 푸라노이드(Diterpene Furanoids) 및 상기 화합물을 유효성분으로 함유하는 이형당뇨치료용 약학 조성물 및 기능성 식품에 관한 것이다.

당뇨병은 췌장의 β 세포에서 분비되는 인슐린이 부족하거나 그 기능을 제대로 발휘하지 못하여 포도당이 근육이나 간 등의 세포에서 흡수되어 저장되지 않고 혈액 내에 고농도로 존재하다가 소변으로 배설되는 질환으로, 일반적으로 두 가지 형태로 알려져 있다.

제1형 당뇨병은 유전적 원인, 바이러스 감염 등에 의해 췌장의 β 세포의 기능이 저하되어 거의 인슐린이 분비되지 않는 상태로, 인슐린을 주사로 공급해 주어야 혈당이 조절되기 때문에 인슐린 의존형 당뇨병이라고 한다.

이에 반하여, 제2형 당뇨병은 인슐린은 생성되나 인슐린의 활성이 떨어지거나 말초조직세포에서 작용감도가 약해져서 인슐린 내성이 생겨서 혈당조절에 문제가 되는 것으로, 인슐린 주사에 의해서는 혈당이 조절되지 않고 혈당강하제나 식이요법 등에 의해서 혈당을 조절해야 하기 때문에 인슐린 비의존성 당뇨병이라고 한다. 이러한 제2형 당뇨병은 생활수준이 향상되며 전반적인 식생활의 향상으로 섭취열량이 많이 증가하고, 운동부족 및 스트레스에 노출되는 생활이 지속하면서 인슐린의 성능이 떨어지며, 또한 이러한 생활습관으로 인한 비만이 발생하면서 발병이 증가되는 추세를 보이고 있는데, 전체 당뇨병 환자 중 95% 이상이 제2형 당뇨병에 해당한다.

현재 제2형 당뇨병의 치료제로 주로 사용되는 것은 혈당강하제로, 치료기전 및 작용약물의 작용점에 따라 설포닐우레아계(sulfonylureas) 약물, 비구아니드계(biguanides) 약물 및 티아졸리딘디온계(thiazolidinedione) 약물로 나눌 수 있다. 설포닐우레아 계통은 주로 췌장의 β세포 안에 있는 인슐린을 함유한 과립포의 이동을 촉진하여 간접적으로 인슐린을 분비시키는 약물로 저혈당 유발 등 심각한 부작용이 보고되었으나, 최근에는 부작용을 최소화한 약물이 개발되고 있다. 비구아니드 계통은 근육세포로 당을 이동시키고 간에서 당이 만들어지지 못하게 하는 약물로 비만인 당뇨 환자에게 사용하는데 고령자와 심혈관 질환 환자에게는 주의해야 한다. 티아졸리딘디온 계통은 최근 개발된 것으로, 핵막 수용체이면서 유전자 전사 촉진인자인 피피에이알 감마(PPAR-)를 활성화하여 인슐린 내성을 개선시킨다. 그러나, 경구용 혈당강하제만으로는 혈당이 효과적으로 저하되지 않으며, 이미 알려진 대부분의 약물에서 부작용이 나타나므로, 천연물 유래의 보다 안전한 당뇨병 치료제 또는 예방제의 개발이 요청되고 있다.

최근에는 제2형 당뇨병과 단백질 타이로신 탈인산화 효소 1B(protein tyrosin phosphatase 1B, PTP1B)와의 관련성이 밝혀지면서, 이의 저해물질의 당뇨병 치료제로서의 개발 가능성이 주목받았다 (Exp. Opin. Invest. Drugs, 8:139, 1999). 단백질 타이로신 탈인산화 효소 1B 유전자를 제거한 쥐의 경우 인슐린에 대해 민감한 성질을 보인다고 보고되었는데, 이는 쥐에게 인슐린을 투여하였을 때 간과 근육세포에서 인슐린 수용체의 인산화가 증가하고 오래 지속된다는 사실을 보였으며, 이는 단백질 타이로신 탈인산화 효소 1B가 활성화된 인슐린 수용체의 탈인산화에 결정적인 역할을 하여 이 효소의 억제가 제2형 당뇨병 치료에 매우 효과적임을 보였다 (Elchevly et al., Science, 283:1544, 1999). 또한 단백질 타이로신 탈인산화 효소 1B 저해물질이 제2형 당뇨병 질환모델 쥐에서 혈당강하나 인슐린 내성 극복 등 제2형 당뇨병에 효과가 있음이 보고되었다 (J. Med. Chem., 42:3199, 1999; J. Biol. Chem., 275:10300, 2000). 이에 단백질 타이로신 탈인산화 효소 1B의 저해제를 당뇨병 치료제로 개발하기 위한 노력이 활발히 진행되고 있다(Nature Review Drug Discovery, 1,696~709).

단백질 타이로신 탈인산화 효소 1B (Protein tyrosine phosphatase 1B, PTP1B)는 인슐린 감수성 조직에서 주로 발현되는 효소이며, PTP1B가 결여된 마우스는 정상 마우스와 비교하여 인슐린 과민성과 비만저항성의 특징을 보이는 것을 확인하였다. PTP1B는 또한 에너지 집적과 소비를 조절하는 렙틴의 활성을 조절하였다. PTP1B 가 결여된 마우스는 눈에 띄게 비만도가 낮았으며, 기초대사량과 총 에너지 소비량의 증가로 인해 식이유도 비만이 억제되었다. 이것은 PTP1B가 생체 내에서 에너지 균형, 인슐린 감수성, 체지방 축적의 주요 조절인자임을 확인시켜준다. 따라서, PTP1B의 억제는 제 2형 당뇨 및 비만의 새로운 치료방법으로 사용될 수 있다. PTP1B의 여러 질병과의 생화학적 유전적 관련성을 감안하여, PTP1B의 억제제를 개발하려는 노력이 화학합성/의약계에서 이루어지고 있다. 반면, 최근들어 자연물로부터 PTP1B 억제제를 스크리닝하기 위한 연구가 시작되고 있다.

지의류(Lichens)는 균류(fungi)와 조류(algae) 또는/및 시아노박테리아(cyanobacteria)의 공생 복합체로서, 약 17,000종으로 분류된다. 한때 지의류의 2차 대사산물(secondary metabolites)을 항균제(antimicrobial agent) 또는 항초식동물제(antiherbivore agent)로 사용하는 것이 제안된 바 있다. 또한, 몇몇 지의류 추출물은 민간에서 다양한 치료제로 이용되어 왔으며, 지의류 대사산물이 항생 (antibiotic agent), 항마이코박테리아(antimycobacterial), 항바이러스 (antiviral), 진통(analgesic), 해열능(antipyretic properties) 및 항산화능(antioxidative properties) 등의 다양한 생물학적 활성을 갖는다는 사실이 밝혀지고 있다. 따라서, 지의류 대사산물은 잠재적인 약학(pharmacological agents)제의 소스로서 상당한 관심을 받고 있다.

이에, 본 발명자들은 상기 문제점을 해결하기 위하여 예의 노력한 결과, 남극 지의류로부터 PTP1B활성억제물질 (PTP1B inhibitory compounds)을 찾는 과정에서, 후에아 코라리게라의 건조샘플에서 얻은 메탄올 추출물을 생물활성추적분획법 (bioassay-guided fractionation)에 따라 4 가지 새로운 지의류 대사산물을 분리하였고, 이들을 디터페노이즈(diterpenoids, 1-4)로 분류하였으며, 추출단계에서 확연한 PTP1B 저해효과를 나타냄을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 PTP1B 활성을 저해하는, 후에아 코라리게라로부터 분리된 디터펜 후라노이드(Diterpene Furanoids)를 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은, 상기 디터펜 후라노이드(Diterpene Furanoids)를 유효성분으로 함유하는 이형당뇨치료용 약학 조성물 및 기능성 식품을 제공하는 데 있다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 PTP1B의 활성을 저해하는 후에아 코라리게라 추출물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택된 용매로 추출된 것임을 특징으로 할 수 있다.

본 발명은 또한, 화학식 1 내지 4로 표시되는 디터펜 후라노이드(Diterpene Furanoids) 화합물을 제공한다.

본 발명은 또한, (a) 후에아 코라리게라를 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택된 용매로 추출하는 단계; (b) 상기 (a)단계에서 추출된 후후에아 코라리게라의 추출물을 컬럼크로마토그래피를 이용하여 70%(v/v) 메탄올 수용액(메탄올:물=70:30)에서 용출하는 단계; 및 (c) 상기 (b)단계에서 용출된 분획물을 역상 고속 액체 크로마토그래피를 이용하여 20~60%(v/v) 아세토니트릴(CH₃CN) 수용액(CH₃CN:물=20~60:80~40)에서 다음 화학식 1 및 2로 표시되는 화합물을 분리하는 단계를 포함하는 다음 화학식 1 또는 다음 화학식 2로 표시되는 화합물의 분리방법을 제공한다.

[화학식 1]

[화학식 2]

본 발명은 또한, (a) 후에아 코라리게라를 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택된 용매로 추출하는 단계; (b) 상기 (a)단계에서 추출된 후에아 코라리게라의 추출물을 컬럼크로마토그래피를 이용하여 75%(v/v) 메탄올 수용액(메탄올:물=75:25)에서 용출하는 단계; 및 (c) 상기 (b)단계에서 용출된 분획물을 역상 고속 액체 크로마토그래피를 이용하여 40~60%(v/v) 아세토니트릴(CH₃CN) 수용액(CH₃CN:물=20~60:80~40)에서 다음 화학식 3 및 4로 표시되는 화합물을 분리하는 단계를 포함하는 다음 화학식 3 또는 다음 화학식 4로 표시되는 화합물의 분리방법을 제공한다.

[화학식 3]

[화학식 4]

본 발명은 또한, 후에아 코라리게라 추출물을 유효성분으로 함유하는 이형당뇨치료용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, 상기 화학식 1 내지 4로 표시되는 화합물로 구성된 군에서 선택된 어느 하나 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 이형당뇨치료용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, 후에아 코라리게라 추출물을 유효성분으로 함유하는 이형당뇨치료용 기능성 식품을 제공한다.

본 발명은 또한, 상기 화학식 1 내지 4로 표시되는 화합물로 구성된 군에서 선택된 어느 하나 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 이형당뇨치료용 기능성 식품을 제공한다.

본 발명에 따른 남극 지의류 후에아 코라리게라 추출물 및 이로부터 분리한 디터펜 푸라노이드(Diterpene Furanoids)계 화합물은 단백질 타이로신 탈인산화 효소 1B의 활성 저해활성이 우수하므로, 당뇨병 치료 및 예방에 유용하게 사용할 수 있으며, 특히 제2형 당뇨병인 인슐린 비의존형 당뇨병에 대하여 치료효과가 뛰어나다.

도 1은 후에아푸라노이드 A(화학식 1의 화합물)에 의한 단백질 타이로신 탈인산화효소 1B(PTP1B) 저해의 운동분석을 나타내는 것으로, Lineveaver-Burk 플롯이다.
도 2은 후에아푸라노이드 A(화학식 1의 화합물)의 1H NMR 스펙트럼이다.
도 3은 후에아푸라노이드 A(화학식 1의 화합물)의 13C NMR 스펙트럼이다.
도 4은 후에아푸라노이드 A(화학식 1의 화합물)의 COSY 스펙트럼이다.
도 5은 후에아푸라노이드 A(화학식 1의 화합물)의 HMQC스펙트럼이다.
도 6은 후에아푸라노이드 A(화학식 1의 화합물)의 HMBC 스펙트럼이다.
도 7은 후에아푸라노이드 A(화학식 1의 화합물)의 QC-TOCSY 스펙트럼이다.
도 8은 후에아푸라노이드 A(화학식 1의 화합물)의 NOESY 스펙트럼이다.
도 9은 후에아푸라노이드 B(화학식 2의 화합물)의 1H NMR 스펙트럼이다.
도 10은 후에아푸라노이드 B(화학식 2의 화합물)의 13C NMR 스펙트럼이다.
도 11은 후에아푸라노이드 B(화학식 2의 화합물)의 COSY 스펙트럼이다.
도 12은 후에아푸라노이드 B(화학식 2의 화합물)의 HMQC스펙트럼이다.
도 13은 후에아푸라노이드 B(화학식 2의 화합물)의 NOESY 스펙트럼이다.
도 14은 후에아푸라노이드 C(화학식 3의 화합물)의 1H NMR 스펙트럼이다.
도 15은 후에아푸라노이드 C(화학식 3의 화합물)의 13C NMR 스펙트럼이다.
도 16은 후에아푸라노이드 C(화학식 3의 화합물)의 COSY 스펙트럼이다.
도 17은 후에아푸라노이드 C(화학식 3의 화합물)의 HMQC스펙트럼이다.
도 18은 후에아푸라노이드 C(화학식 3의 화합물)의 NOESY 스펙트럼이다.
도 19은 후에아푸라노이드 D(화학식 4의 화합물)의 1H NMR 스펙트럼이다.
도 20은 후에아푸라노이드 D(화학식 4의 화합물)의 13C NMR 스펙트럼이다.
도 21은 후에아푸라노이드 D(화학식 4의 화합물)의 COSY 스펙트럼이다.
도 22은 후에아푸라노이드 D(화학식 4의 화합물)의 HMQC스펙트럼이다.
도 23은 후에아푸라노이드 D(화학식 4의 화합물)의 NOESY 스펙트럼이다.

본 발명은 일 관점에서, 단백질 타이로신 탈인산화효소 1B의 활성 저해능을 갖는 후에아 코라리게라 추출물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 후에아 코라리게라 추출물은 남극 지의류의 일종인 후에아 코라리게라를 통상의 추출방법에 따라 제조할 수 있다.

본 발명에 있어서 후에아 코라리게라를 추출하기 위한 용매로는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 용매를 사용할 수 있다. 상기 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올로는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등을 예시할 수 있으며, 메탄올 또는 메탄올 수용액을 사용하는 것이 바람직하다. 이때, 후에아 코라리게라는 그대로 사용하거나, 분쇄한 후 사용할 수 있으며, 사용되는 용매의 사용량은 건조된 후에아 코라리게라 100g당 0.1 내지 5L를 사용할 수 있다. 상기 추출을 위한 온도는 4 내지 120일 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다. 또한, 추출시간은 특별히 한정되지는 않으나 10분 내지 30일일 수 있으며, 통상의 추출기기, 초음파분쇄 추출기 또는 분획기를 이용할 수 있다. 제조된 추출물은 이후 감압 여과 또는/및 동결 건조하여 용매를 제거할 수 있다.

본 발명은 다른 관점에서, PTP1B의 활성을 저해하는 디터펜 푸라노이드(Diterpene Furanoids)계 화합물에 관한 것이다.

본 발명의 디터펜 푸라노이드(Diterpene Furanoids)계 화합물은 상기 후에아 코라리게라 추출물로부터 크로마토그래피를 이용하여 용출해 내어 분리된 것이다.

다음 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 디터펜 푸라노이드 (Diterpene Furanoids)계 화합물의 분리방법은 (a) 후에아 코라리게라를 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택된 용매로 추출하는 단계; (b) 상기 (a)단계에서 추출된 후에아 코라리게라의 추출물을 컬럼크로마토그래피를 이용하여 70%(v/v) 메탄올 수용액(메탄올:물=70:30)에서 용출하는 단계; 및 (c) 상기 (b)단계에서 용출된 분획물을 역상 고속 액체 크로마토그래피를 이용하여 20~60%(v/v) 아세토니트릴(CH₃CN) 수용액(CH₃CN:물=20~60:80~40)에서 다음 화학식 1 및 2로 표시되는 화합물을 분리하는 단계를 포함한다.

[화학식 1]

[화학식 2]

다음 화학식 3 또는 화학식 4로 표시되는 디터펜 푸라노이드(Diterpene Furanoids)계 화합물의 분리방법은 (a) 후에아 코라리게라를 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택된 용매로 추출하는 단계; (b) 상기 (a)단계에서 추출된 후에아 종의 추출물을 컬럼크로마토그래피를 이용하여 75%(v/v) 메탄올 수용액(메탄올:물=75:25)에서 용출하는 단계; 및 (c) 상기 (b)단계에서 용출된 분획물을 역상 고속 액체 크로마토그래피를 이용하여 40~60%(v/v) 아세토니트릴(CH₃CN) 수용액(CH₃CN:물=40~60:60~40)에서 다음 화학식 3 및 4로 표시되는 화합물을 분리하는 단계를 포함한다.

[화학식 3]

[화학식 4]

이들 화합물의 구조는 NMR 과 MS 자료 분석과 기존 문헌과의 비교를 통해 밝혀졌다. 화합물 1은 치료상의 표적단백질인 PTP1B(IC₅₀=13.9uM)에 대해 저해활성을 나타냈다. 후에아푸라노이드 A에 의한 PTP1B 저해의 카이네틱 분석으로 디터펜 후라노이드가 PTP1B 의 비경쟁적 활성저해제임을 확인하였다.

자료에 따르면, 지금까지 대략 1,000여종의 지의류 대사산물이 밝혀졌고, 대부분 폴리케타이드 생합성경로로부터 생성되는 페놀계 화합물류이다. 지의류는 또한 메바로네이트 경로(mavalonate pathway)를 통해 터페노이드(terpenoids)를 생산하는 것으로 알려져 있다. 제로인(zeroin)과 같은 트리터펜(triterpenes)은 지의류 대사산물로 흔히 사용되는데 비해, 디터펜(diterpenes)의 추출은 드물다. 또한, 후에아푸라노이드는 Huea 속(Huea sp.)으로부터 보고된 첫 번째 이차대사산물이며, 이러한 생물체에 작용하는 대사산물의 발견은 남극의 지의류가 자연물질로서의 중요한 자원이 될 수 있음을 증명한다.

본 발명은 다른 관점에서, 후에아 코라리게라 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈당강하용 약학 조성물 및 상기 화학식 1 내지 4로 표시되는 화합물로 구성된 군에서 선택된 어느 하나 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 이형당뇨치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 혈당강하용 약학조성물은 상기 후에아 코라리게라 추출물, 바람직하게는 후에아푸라노이드(Hueafuranoids 1-4) 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택되는 화합물을 유효성분으로 포함할 수 있으며, 이외 제형, 사용방법 및 사용목적에 따라 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다. 혼합물로 제공되는 경우, 상기 유효성분은 이형당뇨치료용 약학 조성물에 0.001 내지 99.9 중량%로 포함될 수 있으나, 통상 0.1 내지 50 중량%의 함량으로 포함되는 것이 바람직하다.

상기 이형당뇨치료용 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 화합물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

또한, 상기 혈당강하용 약학 조성물의 인체에 대한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 화합물은 1일 0.0001 내지 100mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 10mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명은 또 다른 관점에서, 후에아 코라리게라 추출물을 유효성분으로 함유하는 이형당뇨치료용 기능성 식품 및 상기 화학식 1 내지 4로 표시되는 화합물로 구성된 군에서 선택된 어느 하나 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 이형당뇨치료용 기능성 식품에 관한 것이다.

후에아 코라리게라 추출물 및 상기 화학식 1 내지 4로 표시되는 화합물로 구성된 군에서 선택된 어느 하나 이상의 화합물은 혈당을 강하시키기 위한 목적으로 식품에 첨가될 수 있다. 기능성 식품의 개발을 위하여 상기 화합물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 육류, 음료수, 쵸콜렛, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류, 알콜음료류, 비타민 복합제, 건강보조식품류 등이 있다.

상기 식품에 상기 화학식 1내지 4의 후에아플라노이드를 0.01 내지 50중량%, 바람직하게는 0.05 내지 10중량%의 양으로 혼합하여 제조하여 동물에게 투여할 경우 이형당뇨의 치료가 가능하다.

[ 실시예 ]

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 후에아 코라리게라 추출물의 제조

후에아 코라리게라는 세종 남국 킹조지섬의 세종기지(S 62°13.3', W58°47.0') 주위의 바튼반도(Barton Peninsular)에서 채취·동정되었고, 증거표본(voucher specimen)은 한국 극지 연구소에 보관되어 있다.

채취된 후에아 코라리게라의 건조 샘플(50g)을 24시간 동안 메탄올(9L)로 추출한 후, 감압 농축하여 메탄올 조추출물(Crude MeOH extract) 6.97g을 수득하였다.

실시예 2: 후에아 종 추출물로부터의 화합물의 분리

상기 실시예 1에서 제조된 후 후에아 코라리게라의 메탄올 조추출물 6.97g을 C₁₈ 기능성 실리카 겔 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(C₁₈ functionalized silica gel flash column chromatography, 3x15cm, Aldrich)에 첨가시킨 후, 물 500mL 당 각 20%, 40%, 60%, 70%, 80%, 90% 및 100%(v/v) 메탄올의 혼합용매를 순차적으로 주입하여 각각의 분획물을 획득하였다. 80% 메탄올 수용액으로 용출한 분획물은 다시 C₁₈ 기능성 실리카 겔 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(C₁₈ functionalized silica gel flash column chromatography)에 로딩한 후, 물 100mL 당 각 50%, 55%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 및 100%(v/v) 메탄올의 혼합용매를 순차적으로 주입하여 각각의 분획물을 획득하였다.

70% 메탄올 수용액으로 용출한 분획물은 0.1% 포름산(formic acid)을 함유하는 아세토니트릴(CH₃CN) 수용액을 20 내지 60%의 농도로 사용한 혼합용매를 80분 이상 반-분취 역상(semi-preparative reverse-phase) HPLC에 주입하여 화학식 1의 화합물(1.7mg; tR=48분) 및 화학식 2의 화합물(0.9mg; tR=49분)을 분리하였다.

또한, 75% 메탄올로 용출한 분획물은 반-분취 역상(semi-preparative reverse-phase) HPLC에 주입한 후, 0.1% 포름산(formic acid)을 함유하는 아세토니트릴(CH₃CN) 수용액을 40 내지 60%의 농도로 사용한 혼합용매를 80분 정도 사용하여 화학식 3의 화합물(0.3mg; tR=41분) 및 화학식 4의 화합물(0.3mg; tR=44분)을 분리하였다.

실시예 3: 분리된 화합물의 구조분석

상기 실시예 2에서 생물활성추적분획법(bioassay-guided fractionation)에 따라 네가지 새로운 지의류 대사산물을 분리하였고, 분리한 화합물들의 화학구조를 규명하기 위하여 NMR 및 HRESIMS 데이터를 측정하여 분석하였으며, NMR 데이터는¹H-NMR 스펙트럼 및 ¹³C-NMR 스펙트럼을 분석하여, 이들을 디터페노이즈(diterpenoids, 1-4)로 분류하였다.

본 발명자들이 신규하게 밝혀낸 화학식 1 내지 4의 화합물에 대한 구조분석 및 물성 등의 측정결과는 다음과 같다.

3-1. 화학식 1의 화합물 : Hueafuranoid 1

[화학식 1]

NMR data for Hueafuranoid A (1) in CD₃OD

Position	δ_C ^a	d_H, mult. (J in Hz)^b	HMBC (H → C#)
1	112.1	5.20, dd (17.6, 1.5) 5.02, dd (10.6, 1.5)	2, 3
2	146.3	5.92, dd (17.6, 10.6)	3
3	73.7	--	--
4	46.4	2.23, m	2, 3, 5, 6, 20
5	124.1	5.65, m	4, 6, 7
6	140.6	5.66, m	4, 5, 7
7	84.2	--	--
8	39.0	1.85, m 1.78, m	9
9	27.3	1.94, m 1.87, m	8, 10, 11
10	85.7	3.93, t, 7.0	12, 18
11	74.7	--	--
12	52.0	2.74, d (14.6) 2.47, d (14.6)	10, 11, 13, 14, 18
13	203.1	--	--
14	126.5	6.27, br s	13, 16, 17
15	157.3	--	--
16	20.9	2.13, d (1.1)	13, 14, 15, 17
17	27.8	1.91, d (1.1)	14, 15, 16
18	23.1	1.17, s	10, 11, 12
19	26.3	1.27, s	6, 7, 8
20	27.2	1.22, s	2, 3, 4

^aRecorded at 100 MHz. ^bRecorded at 400 MHz.

도 2 내지 도 8은 각각 화학식 1의 화합물의 ¹H-NMR 스펙트럼, ¹³C-NMR 스펙트럼, COSY 스펙트럼, HMQC 스펙트럼, HMBC 스펙트럼 및 NOESY 스펙트럼 결과를 나타내는 그래프이다.

후에아푸라노이드 A (Hueafuranoid A, 화합물 1)은 고해상 전자분무이온화 질량측정기 (HRESIMS [m/z 337.2383 (m + H)⁺ ; + 0.4 mmu])로 예측한 바와 같이 C₂₀H₃₂O₄의 분자식을 갖으며, 이는 ¹H-자기공명장치(NMR) 및 ¹³C-NMR을 이용해 측정하고 분석한 데이터를 바탕으로 밝혀졌다(표 1, 도 2 및 도 3). 이것은 다섯단계의 불포화성을 예측할 수 있고, CD₃OD에서 ¹H NMR 및 DEPT 스펙트라는 두개의 하이드록실기 존재 하에서 5개의 메틸기, 하나의 올레피닉 메틸렌기(δ112.0), 네 개의 sp ³ 메틸렌기, 네 개의 sp ² 메틴기 및 하나의 산화된 메틴(oxygenated methane)을 갖는 구조로 밝혀졌다. 상기 탄소에 해당하는 신호와 더불어, ¹³C-NMR스펙트럼은 하나의 케톤 카보닐기 (ketone carbonyl group (δ203.1)),하나의 sp ² 4급 탄소(quaternary carbon (δ157.2)),및 세 개의 sp ³ 산화된 4급 탄소(quaternary oxygenated carbons (δ73.7,δ74.7,andδ84.2))로 이루어진 구조를 밝혔다. 그러므로, 4개의 분자식을 구성하는 다섯 단계의 불포화성은 ¹³C-NMR 자료를 분석함으로 직접적으로 유추할 수 있으며, 화합물 1의 추가적인 환구조 (ring system)의 존재를 예측할 수 있었다. 화합물 1의 2차구조는 주로 2D-NMR자료를 기초로 예측하며, ¹H-¹HCOSY및 HMQC-TOCSY의 데이터 분석으로 메틸렌(C-12) 및 메틸기(C-18, C-19 및 C-20)와 더불어 C-1-C2, C4-C6, C8-C10 및 C14-C17 기초구조(substructure)에 해당하는 양자 간 네트워크를 확인하였다. 화합물 1의 HMBC 스펙트럼에서 관찰된 양자-탄소 상관관계는 COSY 및 HMQC-TOCSY의 데이터로부터 예측한 기본단위(subunit)에 대한 확실한 증거가 되었다. H₂-4에 대한 신호를 조사하는 동종 연계제거 실험(homonuclear decoupling experiment)에 의해 획득된 J (H,H) value [H-5 (d_H 5.65)/H-6 (d_H 5.66): 15.8 Hz]로 C5-C6에 2기 치환된 E-이중결합의 존재를 확인하였다 (도 4 및 도 5). H-1 및 C-3 간의 HMBC 상관관계 뿐 아니라, C-2, C-3 및 C-4와 H₃-20사이의 HMBC 상관관계도 C1 내지 C2 및 C4 내지 C6 기본단위가 C-3에 결합되는 것으로 확인되었다 (도 6). 또한, C-7과 H-5간의 상관관계와 더불어 C-6, C-7 및 C-8과 H₃-19간의 HMBC 상관관계가 두개의 4급 탄소, C-3 및 C-7을 포함한 메틸기와 함께 C-1 내지 C-10의 탄소골격의 연장과 연관이 있음을 확인하였다. 분리된 메틸렌 H₂-12와 C-10, C-11, C-13, C-14 및 C-18 간의, H₃-18과 C-10, C-11 및 C-12 간의, 및 H-14와 C-13 간의 HMBC 상관관계가 분자에서 최종 탄소구조를 결정하였다.

이러한 관점에서, 두개의 하이드록실기와 산소원자가 아직 남아있다. C-3, C-7, C-10 및 C-11의 화학적 이동으로 탄소가 산소와 결합할 것이라 하기에는 하이드록실기의 위치와 에테르 고리화를 확인할 증거가 없다. 그러므로, 화합물 1의 총체적인 구조는 화학적 이동과 기존 문헌에서 관련 탄소와 비교함으로서 제안되었다. 화합물 1과 유사한 구조적 특징을 갖는 다수의 자연물질에서 나타나는 화학적 이동에 대한 ¹³C-NMR 조사로 다이하이드로퓨란(dihydrofuran)의 산화된 탄소가 80ppm 이상에서 공명하는 것을 확인하였고, 반면에 선형 탄소 골격의 하이드록실기를 포함한 4급탄소는 80ppm 이하에서 공명하는 것으로 확인하였다.

따라서, C-7 (δ 84.2) 및 C-10 (δ 85.7)는 테트라하이드로퓨란(tetrahydrofuran) 링 구조를 형성하기 위해 산소원자와 결합되어 있고, C-3 및 C-11은 화합물 1의 구조를 완성하기 위해 하이드록실기를 포함하는 것으로 확인되었다. C-7 및 C-10에서 입체중심의 상대적 위치는 링 구조에서 같은 측면에 위치한 H-10과 H-18 및 H-19의 NOESY 분석을 통한 상관관계 예측으로부터 확인할 수 있었다 (도 7 및 도 8).

3-2. 화학식 2의 화합물 : Hueafuranoid 2

[화학식 2]

¹H and ¹³CNMR Data for Hueafuranoids B(2) in CD₃OD

position	δ_C ^a	d_H, mult. (J in Hz)^b
1	112.1	5.17, dd (17.6, 1.5) 5.00, dd (11.0, 1.5)
2	146.2	5.90, dd (17.6, 11.0)
3	73.7	--
4	46.1	2.22, dd (7.0, 0.7)
5	124.2	5.62, dt (15.7, 7.0)
6	139.7	5.48, dt (15.7, 0.7)
7	84.5	--
8	38.4	1.90, m 1.86, m
9	27.1	1.86, m 1.64, m
10	85.3	3.86, t (7.3)
11	74.8	--
12	52.1	2.72, d (14.3) 2.47, d (14.3)
13	203.2	--
14	126.5	6.27, m
15	157.3	--
16	21.0	2.13, d (1.1)
17	27.8	1.91, d (1.1)
18	22.8	1.16, s
19	27.4	1.28, s
20	27.0	1.20, s

^aRecorded at 100 MHz. ^bRecorded at 400 MHz.

도 9내지 도 13은 각각 화학식 2의 화합물의 ¹H-NMR 스펙트럼, ¹³C-NMR 스펙트럼, COSY 스펙트럼, HMQC 스펙트럼, HMBC 스펙트럼 및 NOESY 스펙트럼 결과를 나타내는 그래프이다.

HRESIMS 스펙트럼[m/ z337.2374(M+H)⁺;D - 0.5 mmu]을 통해 후에아푸라노이드 B(화합물 2)의 분자식이 화합물 1의 것과 동일함을 확인할 수 있었다. DEPT 및 ¹³C-NMR 데이터를 통해 화합물 2의 메틸, 메틸렌, 메틴, 및 4급 탄소의 수가 화합물 1의 것과 동일함을 확인하였다 (표 1 및 표 2). 또한 ¹H NMR 및 ¹³C-NMR 스펙트라 (표 2)는 C-5, C-6, C-8 및 C-9의 위치에 따른 각각의 화학전이의 차이를 제외한 나머지에 대해 화합물 1의 것과 거의 동일하였다 (도 9 및 도 10). 이는 화합물 2가 후에아푸라노이드 A(화합물 1)의 입체이성질체(stereoisomer)임을 의미하며, 1D-, COSY 및 HSQC NMR 데이터의 상세한 분석을 통해 화합물 2가 화합물 1과 동일한 선형구조를 가지고 있음을 확인하였다 (표 2, 도 11 및 12). C5-C6의 2기치환된 이중결합의 위치는 J (H,H) value [H-5 (d_H 5.62)/H-6 (d_H 5.48): 15.7 Hz]에 기초한 E에 해당되었다. CH₃-18과 CH₃-19간의 NOESY 상관관계를 통해 두 메틸기가 테트라하이드로퓨란 링 구조와 같은 형태로 위치함을 확인하였다 (도 13). 따라서 화합물 2의 총체적 구조는 보여지는 바와 같다.

3-3. 화학식 3의 화합물 : Hueafuranoid C

[화학식 3]

¹H and ¹³CNMR Data for Hueafuranoids C (3) in CD₃OD

position	δ_C ^a	d_H, mult. (J in Hz)^b
1	112.1	5.17, dd (17.2, 1.5) 5.00, dd (10.6, 1.5)
2	146.3	5.91, dd (17.2, 10.6)
3	73.7	--
4	46.4	2.22, m
5	124.1	5.63, m
6	140.6	5.64, m
7	85.6	--
8	38.9	1.82, m 1.76, m
9	27.3	1.91, m 1.86, m
10	84.2	3.92, t (6.6)
11	74.3	--
12	51.1	2.75, d (14.6) 2.44, d (14.6)
13	213.7	--
14	54.9	2.42, m
15	25.4	2.10, m
16	23.0	0.91, d (6.6)
17	22.9	0.91, d (6.6)
18	22.8	1.16, s
19	26.3	1.26, s
20	27.1	1.22, s

^aRecorded at 100 MHz. ^bRecorded at 400 MHz.

도 14 내지 도 18은 각각 화학식 3의 화합물의 ¹H-NMR 스펙트럼, ¹³C-NMR 스펙트럼, COSY 스펙트럼, HMQC 스펙트럼, HMBC 스펙트럼 및 NOESY 스펙트럼 결과를 나타내는 그래프이다.

HRESIMS 스펙트럼을 통해 후에아푸라노이드 C(화합물 3)이 화합물 1 및 화합물 2보다 수소원자가 2개 더 많은 C₂₀H₃₄O₄의 분자식을 갖는 것을 확인하였다. 이것은 화합물 3이 화합물 1 및 화합물 2보다 하나 적은 올레피닉기(olefinic group)을 갖는 것을 의미한다. 화합물 3의 ¹H NMR 데이터를 통해 두 개의 알릴 메틸 싱글릿(allylic methyl singlets, CH₃-16및 CH₃-17)이 한 쌍의 메틸 더블릿(methyl doublet, d 0.91)으로 대체된 부분을 제외한 나머지는 화합물 1의 것과 유사하였고, 지방족 메틸렌(aliphatic methylene, d 2.42)과 메틴(d 2.10)에 해당하는 시그널이 추가되어 있음을 확인하였다 (표 3 및 도 14). ¹³C-NMR스펙트럼에는 화합물 1에 대한 데이터에서 관찰된 두 개의 sp ² 탄소 (δ 157.3 and δ 126.5)가 결여되어 있으나, sp ³탄소 (δ 54.9 and δ 25.4)에 대한 공명이 추가되어 있음을 확인하였다 (도 15).

이를 종합하면, 화합물 1의 C14-C15 올레핀은 화합물 2에서 제거되었음을 HSQC 및 COSY 데이터를 통해 확인하였고, 화합물 3의 각 구성요소의 화학전이(chemical shift)는 화합물 1과 비교하였으며, 화합물 3의 상대적 위치는 NOESY 데이터를 분석하여 확인하였다 (도 16 및 17). NOESY분석에 따른 H-3와 H₃-19의 상관관계를 통해 양자들이 모두 링 구조의 같은 면에 위치하는 것을 예측할 수 있었다 (도 18). 따라서 화합물 3은 화합물 1의 테트라하이드로퓨란 링 구조와 같은 상대적 배치 구조를 갖고 있음을 확인하였다.

3-4. 화학식 4의 화합물 : Hueafuranoid D

[화학식 4]

¹H and ¹³CNMR Data for Hueafuranoids D (4) in CD₃OD

position	δ_C ^a	d_H, mult. (J in Hz)^b
1	112.1	5.17, dd (17.4, 1.6) 5.00, dd (10.8, 1.6)
2	146.2	5.91, dd (17.4, 10.8)
3	73.7	--
4	46.3	2.22, dd (7.3, 1.0)
5	124.2	5.62, dt (15.5, 7.3)
6	139.7	5.48, dt (15.5, 1.0)
7	85.3	--
8	38.4	1.89, m 1.84, m
9	27.04	1.84, m 1.63, m
10	84.5	3.87, t (7.1)
11	74.3	--
12	51.2	2.73, d (14.8) 2.45, d (14.8)
13	213.7	--
14	54.8	2.43, dd (7.1, 3.3)
15	25.4	2.10, m
16	23.0	0.91, d (6.7)
17	22.9	0.91, d (6.7)
18	22.6	1.15, s
19	27.4	1.28, s
20	27.0	1.21, s

^aRecorded at 100 MHz. ^bRecorded at 400 MHz.

도 19 내지 도 23은 각각 화학식 4의 화합물의 ¹H-NMR 스펙트럼, ¹³C-NMR 스펙트럼, COSY 스펙트럼, HMQC 스펙트럼, HMBC 스펙트럼 및 NOESY 스펙트럼 결과를 나타내는 그래프이다.

후에아푸라노이드 D(화합물 4)의 NMR데이터를 통해 화합물 4가 화합물 3과 동일한 분자식을 갖고 있음을 확인하였다 (표 4). ¹H-NMR스펙트럼에서 일차적 차이는 H-5 및 H-6의 신호가 화합물 3의 것과 확연히 구별된다는 것이다. 화합물 1 내지 3의 ¹H NMR 스펙트라를 면밀히 조사한 결과, 화합물 4는 화합물 3의 테트라하이드로퓨란의 링 구조의 우측방면과 거의 동일한 신호를 포함하고 있는 반면, 화합물 2의 링구조의 좌측에 해당하는 ¹H NMR 신호와 거의 동일한 신호를 포함하고 있음을 확인하였다 (도 19 및 20). 이러한 관찰을 통해 화합물 4의 구조가 화합물 2와 동일한 입체구조를 가지며, C14-C15 올레핀에 있어서 환원된 물질임을 의미한다. 이러한 화합물 4의 구조는 HSQC, COSY 및 NOESY 데이터의 분석을 통해 입증되었다 (도 21, 22, 및 23).

실시예 4: PTP1B 저해 활성 확인

PTP1B (human, recombinant)는 BIOMOL Research Laboratories, Inc.로부터 구입하여 실험에 사용하였으며, 효소활성은 기질로 p-nitrophenyl phosphate을 사용하여 측정하였다. 저해반응을 위해, 저해제는 최종부피 100ul로 완충용액(50mM citrate(pH5.5), 0.1M NaCl, 1mM EDTA 및 1mM DTT)에 PTP1B(0.05-0.1ul)와 2mM pNPP가 포함된 반응혼합물을 제조, 첨가했다. 반응혼합물은 30℃ 인큐베이터에 30분간 넣어두었다가, 10ul의 10M NaOH 용액을 넣음으로서 반응을 종결시켰다. 생성된 p-nitrophenol의 양은 405nm에서 흡광도 측정을 통해 평가했다. 2mM pNPP의 비효소성 가수분해는 PTP1B가 없는 상태에서 405nm 흡광도 측정을 통해 평가했다. 반응속도 분석(kinetic analysis)를 위해, 반응혼합물은 화합물 1의 유무에 따라 PTP1B 기질로서 pNPP의 농도를 달리 구성하였고, 분석시험은 상기와 같이 진행하였다.

후에아푸라노이드 A(화합물 1)는 농도에 따라 (IC₅₀=13.9uM) PTP1B 활성에 대한 저해효과를 나타냈다. 화합물 2 내지 4의 저해 활성은 물질의 부족으로 평가할 수 없었다. 측정시 기존의 알려진 PTP1B 억제제인 우르솔산(Ursolic acid, IC50=3.08uM)을 양성대조군(positive control)로 사용하였고, 화합물 1에 의한 PTP1B 억제 반응속도를 측정하기 위해 기질의 농도를 달리하여 반응시켰다. p-니트로페닐인산(p-nitrophenyl phosphate)을 기질로 사용하였을 때, 화합물 1은 V_max 값을 감소시켰으나, PTP1B의 K_m 값은 바뀌지 않았다 (도 2). 그러므로, 후에아푸라노이드 A (화합물 1)은 PTP1B의 비경쟁적 저해제로 작용하는 것임을 확인하였고, 후에아푸라노이드가 효소-기질 복합체나 PTP1B 내에 알로스테릭 부위 (allosteric site)에 결합할 수도 있음을 나타냈다.

실시예 5: PTP1B 활성 저해 모습 분석

후에아푸라노이드 A(화합물 1)의 저해 방식을 설명하기 위하여, 화학식 1의 화합물을 각각 5.57μM, 11.15μM, 14.87μM의 농도로 하여 실시예 4과 같이 PTP1B의 저해 실험을 수행하였다 (도 1). 이때, PTP1B 효소의 Km(Michaelis-Menten constant) 및 최대속도 (V_max)는 GraphPad Prism 4 프로그램(GraphPad Software Inc., USA)을 사용한 Lineweaver-Burk 플롯에 의해 결정하였다. 그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이, pNPP가 기질로서 사용되었을 때, 화학식 1의 화합물은 PTP1B의 최대속도 값은 감소시키나, Km 값은 실험조건 하에서 변하지 않는 것으로 나타났다. 즉, 화학식 1의 화합물은 5.5μM의 K_i값을 갖는 비경쟁적 저해제로 나타났다. 한편, 화학식 2 내지 4의 화합물 역시 화학식 1이 화합물과 구조상 유사하므로, PTP1B의 저해 방식은 유사한 것으로 보인다.

제조예 1: 캡슐제의 제조

유효성분 100mg

옥수수전분 100mg

유당 100mg

스테아린산마그네슘 2mg

상기 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제 제조방법에 따라 젤라틴 캡슐에 충진하여 캡슐제를 제조하였다.

제조예 2: 정제의 제조

유효성분 100mg

옥수수전분 100mg

유당 100mg

스테아린산마그네슘 2mg

상기 성분들을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라 타정하여 정제를 제조하였다.

제조예 3: 산제의 제조

유효성분 2g

유당 1g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

이상으로 본 발명의 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

다음 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 단백질 타이로신 탈인산화 효소 1B(PTP1B)의 활성 저해능을 갖는 후에아 코라리게라 추출물.
[화학식 1]
제 1항에 있어서, 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택된 용매로 추출된 것을 특징으로 하는 후에아 코라리게라 추출물.
다음 화학식 1로 표시되는 화합물인 후에아 코라리게라 유래 디터펜 푸라노이드(Diterpene Furanoids)계 화합물:
[화학식 1]
다음의 단계를 포함하는 다음 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 후에아 코라리게라 유래 후에아푸라노이드(Hureafuranoids) 화합물의 분리방법:
[화학식 1]

[화학식 2]

(a) 후에아 코라리게라를 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택된 용매로 추출하는 단계;
(b) 상기 (a)단계에서 추출된 후에아 코라리게라의 추출물을 컬럼크로마토그래피를 이용하여 70%(v/v) 메탄올 수용액(메탄올:물=70:30)에서 용출하는 단계;
및 (c) 상기 (b)단계에서 용출된 분획물을 역상 고속 액체 크로마토그래피를 이용하여 20~60%(v/v) 아세토니트릴(CH₃CN) 수용액(CH₁₈CN:물=20~60:80~40)에서 다음 화학식 1 및 2로 표시되는 화합물을 분리하는 단계.
다음의 단계를 포함하는 다음 화학식 3 또는 화학식 4로 표시되는 후에아 코라리게라 유래 후에아푸라노이드(Hureafuranoids) 화합물의 분리방법:
[화학식 3]

[화학식 4]

(a) 후에아 코라리게라를 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택된 용매로 추출하는 단계;
(b) 상기 (a)단계에서 추출된 후에아 코라리게라의 추출물을 컬럼크로마토그래피를 이용하여 75%(v/v) 메탄올 수용액(메탄올:물=75:25)에서 용출하는 단계;
및 (c) 상기 (b)단계에서 용출된 분획물을 역상 고속 액체 크로마토그래피를 이용하여 40~60%(v/v) 아세토니트릴(CH₃CN) 수용액(CH₃CN:물=40~60:60~40)에서 다음 화학식 3 및 4로 표시되는 화합물을 분리하는 단계.
다음 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 후에아 코라리게라 추출물을 포함하는 이형당뇨치료용 약학 조성물.
[화학식 1]
다음 화학식 1로 표시되는 후에아 코라리게라 유래 화합물을 유효성분으로 함유하는 이형당뇨치료용 약학 조성물 :
[화학식 1]
다음 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 후에아 코라리게라(Huea coralligera) 추출물을 포함하는 이형당뇨개선용 기능성 식품.
[화학식 1]
다음 화학식 1로 표시되는 후에아 코라리게라 유래 화합물을 유효성분으로 함유하는 이형당뇨개선용 기능성 식품 :
[화학식 1]