KR101352639B1 - 세포 배양 관찰 장치 - Google Patents

세포 배양 관찰 장치 Download PDF

Info

Publication number
KR101352639B1
KR101352639B1 KR1020110146640A KR20110146640A KR101352639B1 KR 101352639 B1 KR101352639 B1 KR 101352639B1 KR 1020110146640 A KR1020110146640 A KR 1020110146640A KR 20110146640 A KR20110146640 A KR 20110146640A KR 101352639 B1 KR101352639 B1 KR 101352639B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cell
culture vessel
culture
image
cells
Prior art date
Application number
KR1020110146640A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20130077957A (ko
Inventor
신상모
Original Assignee
광주과학기술원
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 광주과학기술원 filed Critical 광주과학기술원
Priority to KR1020110146640A priority Critical patent/KR101352639B1/ko
Publication of KR20130077957A publication Critical patent/KR20130077957A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101352639B1 publication Critical patent/KR101352639B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/48—Automatic or computerized control
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
    • C12M41/36—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of biomass, e.g. colony counters or by turbidity measurements
    • G—PHYSICS
    • G02—OPTICS
    • G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
    • G02B21/00—Microscopes
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A90/00—Technologies having an indirect contribution to adaptation to climate change
    • Y02A90/10—Information and communication technologies [ICT] supporting adaptation to climate change, e.g. for weather forecasting or climate simulation

Abstract

본 발명은 (a) 세포 및 배지를 수용하기 위한 배양용기(culture vessel)를 지지하는 배양용기 지지체; 및 (b) (i) 상기 세포가 차지하는 상기 배양용기의 저부(bottom)의 면적에 대한 이미지, (ii) 상기 배양용기의 저부의 일정 부위에서의 세포에 대한 이미지 또는 (i) 및 (ii)의 이미지를 얻기 위한 이미징 수단을 포함하는 세포 배양 관찰 장치에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 세포 배양 중에 세포가 차지하는 배양용기의 면적을 분석함으로써, 세포 배양 상태를 정보를 용이하게 얻을 수 있으며, 이러한 정보로부터 배지 교체 시간, 배양 종료 시간, 세포 생존도에 영향을 미치는 물질의 시험 및 세포 이동에 영향을 미치는 물질을 시험할 수 있다.

Description

세포 배양 관찰 장치{Apparatus for Observing Cell Culture}
본 발명은 세포 배양 관찰 장치 및 세포 배양 관찰 방법에 관한 것이다.
일반적으로 생물학 및 의학 연구실에서는 대부분 세포를 배양하여 세포 실험을 하고 있다. 연구실마다 경험으로 결정된 세포의 수를 배양접시에 씨딩한 다음 배지를 일정량 넣고 온도 및 습도가 일정하게 유지되며 CO2의 공기 중 농도가 일정하게 유지되는 배양기에 넣은 다음, 세포마다 경험으로 결정된 일정 배양 시간 동안 유지를 하든지, 실험의 경우 계획된 일정한 시간에 맞추어 세포를 꺼낸다.
세포를 배양기에 넣고 배양하는 동안 세포 주기에 따라 세포가 성장하고 분열하여 세포 수가 늘어난다. 세포가 배양 중에 여러 가지 이유로 성장하지 않거나 분열하지 않을 수도 있고 또는 세균 감염 등의 원인에 의해 세포가 죽는 수도 발생한다. 이에, 세포 배양 중에 가끔 세포를 배양기에서 꺼내어 현미경 하에서 관찰하여 이러한 원치 않는 현상이 발생하는지 여부를 검사한다. 대체적으로 경험으로 얻어진 세포 배양 종료 시간에 이르면 세포를 꺼내 관찰을 해서 세포 수가 더 늘어나지 않는 정지상태(컨플루언시)에 도달하면 세포를 꺼내 분양을 한다. 이러한 작업은 모두 경험에 의한 주관적인 판단에 의해 결정되고 이루어진다.
한편, 상술한 경험적 주관적 방법 이외에, 세포 배양 상태를 관찰하는 기술로서 ECIS(Electric Cell Impedance System)라는 전기적 기술이 있다. 이 기술에 따르면, 특정한 처리를 한 일정한 면적을 가진 전극 위에 세포를 배양하면, 이 전극과 다른 전극 간의 직류 또는 교류 저항(resistance 또는 impedance)가 변한다. 즉 일정 면적의 전극 상에서 세포가 성장하거나 세포 수가 증가하면 세포가 차지하는 면적이 증가하고 이에 따라 양 전극 간의 저항 값이 증가하며, 이를 통하여 세포의 배양 상태를 검사한다.
상술한 종래의 경험적 주관적 방법은 동일한 세포주를 단일 실험자가 배양해도 경험으로 얻어진 배양 종료 시간이 항상 같은 것은 아니며, 배양 계대(passage)에 따라 또는 조절할 수 없는 변수(uncontrolled variables)에 의해 정해진 시간까지 배양 정도가 차이가 있을 수 있다. 또한, 시각 관찰(세포 수, 세포상태, 색깔 등)에 의한 배양 종료 시간의 판단은 경험적이며 주관적이기 때문에 동일한 세포주라 할지라도 실험자마다 다를 수 있다. 세포가 현미경 광원 및 실험실 조명등에 노출 되며 이러한 노출은 배양에 변수로 작용할 수 있다.
또한, 종래의 경험적 주관적 방법은 배양기에서 배양 중 간헐적으로 꺼내서 관찰하는데, 이는 감염 방지를 위한 번거로운 추가 작업이 필요하고 또 작업을 할지라도 감염의 확률이 있으며, 관찰 과정에서 세포가 실온에서 냉각되고, CO2 공급이 중단되는 문제점이 있다.
한편, 종래의 경험적 주관적 방법은 번거롭고 실험자가 관찰시간(주말, 야간 및 식사 시간)에 항상 대기하여야 하는 문제가 있다.
상술한 종래의 전기적 세포 배양 관찰 방법은, 특별한 전극이 설치된 고가의 배양접시를 요구하며, 배양 중 소량이지만 세포에 전기가 흐르거나 전장에 노출되어 영향을 받게 된다. 본 발명자들의 실험에 따르면, 이러한 전장이나 전류에 의해 세포가 전극 상에서는 잘 성장하지 않고, 전류 밀도가 약한 부분에 세포가 모이거나 더 잘 성장하는 현상을 발견하였다.
또한, 종래의 전기적 방법은 배양디쉬에 부착하여 배양되는 세포의 경우는 저항이 증가하지만 부유세포의 경우는 저항이 증가하지 않기 때문에 세포 배양 상태의 정확한 관찰이 어렵다. 부착 세포의 경우도 세포의 바닥면이 전극에 어느 정도 잘 부착되었는가에 따라 저항값이 변하기 때문에 이 측정 방법은 신뢰성이 떨어지는 문제점이 있다. 또한, 전기적 방법은 배양기 내부에 위치한 전극이 달린 배양디쉬 및 배양기 외부에 위치한 전원 공급 장치 등을 별도로 필요로 하며, 일반적으로 고가라는 문제점이 있다(실험실 구매가 한화 6000만원-1억2000만원).
본 발명자들은 상술한 종래기술의 문제점을 해결하기 위하여 예의 연구 노력하였다. 그 결과 세포 배양 중에 세포가 차지하는 배양용기의 면적에 대한 이미지를 분석하면 세포의 배양 상태를 용이하면서도 편리하게 정확한 분석을 할 수 있고, 또한 세포의 배양 상태를 신뢰성 있게 분석할 수 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명의 목적은 세포 배양 관찰 장치를 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 세포 배양 상태의 분석 방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 다음을 포함하는 세포 배양 관찰 장치를 제공한다:
(a) 상기 세포 배양기 내에 위치하고 세포 및 배지를 수용하기 위한 배양용기(culture vessel)를 지지하는 배양용기 지지체; 및
(b) (i) 상기 세포가 차지하는 상기 배양용기의 저부(bottom)의 면적에 대한 이미지, (ii) 상기 배양용기의 저부의 일정 부위에서의 세포에 대한 이미지 또는 (i) 및 (ii)의 이미지를 얻기 위한 이미징 수단; 상기 이미징 수단으로부터 얻은 이미지는 상기 세포가 차지하는 상기 배양용기의 저부의 면적을 분석하도록 하여 세포 배양 상태에 대한 정보를 얻는다.
본 발명자들은 상술한 종래기술의 문제점을 해결하기 위하여 예의 연구 노력하였다. 그 결과 세포 배양 중에 세포가 차지하는 배양용기의 면적에 대한 이미지를 분석하면 세포의 배양 상태를 용이하면서도 편리하게 정확한 분석을 할 수 있고, 또한 세포의 배양 상태를 신뢰성 있게 분석할 수 있음을 확인하였다.
본 발명의 장치는 세포 및 배지를 수용하기 위한 배양용기를 지지하는 배양용기 지지체를 포함한다. 상기 지지체는 상기 배양용기를 지지할 수 있는 어떠한(any) 재료 및 형상을 포함한다. 바람직하게는, 상기 지지체는 수평의 면을 가지는 형상을 갖는다. 바람직하게는, 상기 지지체는 상기 광원으로 나오고 세포를 투과한 광이 대물렌즈에 도달할 수 있도록, 일정 부분에 홈이 형성되어 있다. 택일적으로, 상기 지지체는 상기 광원으로 나오고 세포를 투과한 광이 대물렌즈에 도달할 수 있도록, 투명한 재질일 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 장치는 세포 및 배지를 수용하기 위한 배양용기를 추가적으로 포함한다.
본 발명에서 이용되는 배양용기는 당업계에 공지된 어떠한 배양용기도 포함한다. 예를 들어, 배양 플레이트, 배양 디쉬 및 배양 플라스크 등이 배양용기로서 이용할 수 있다. 배양용기는 다양한 크기를 가질 수 있으며, 지름 35 mm, 50 mm 및 100 mm의 배양용기를 이용할 수 있다.
본 발명이 동물세포에 적용되는 경우, 배양용기는 고분자 중합체의 재질을 일반적으로 가지며, 예컨대 폴리스틸렌, 폴리에틸렌 또는 폴리프로필렌 재질의 배양용기가 이용될 수 있다. 본 발명은 기본적으로 세포가 차지하는 배양용기의 저부 면적을 분석하는 것이기 때문에, 배양용기의 저부 표면에 부착되어 증식하는 세포에 적용될 수 있으며, 이러한 세포의 부착을 용이하게 하기 위하여 상술한 중합체 재질의 배양용기가 이용된다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 배양용기의 저부는 플랫(flat)한 면을 갖는다. 이러한 플랫한 면은 세포가 차지하는 배양용기의 저부 면적 분석을 용이하게 한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 장치는 복수의 배양용기를 포함한다. 바람직하게는, 복수의 배양용기는 회전(바람직하게는, 자동회전)되어 복수의 배양용기에 대한 세포 배양 관찰이 가능하도록 한다. 예를 들어, 본 발명의 장치가 개폐가 가능한 컨테이너(예컨대, 인큐베이터)에 포함되어 있는 경우, 복수의 배양용기를 컨테이너에 넣고 배양하면서 배양용기를 하나씩 이미징 하도록 한다. 이 경우, 배양용기가 이미징이 되도록 적합한 위치에 놓이려면, 배양용기는 회전이 되도록 한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 이미징 수단은 광원, 렌즈 및 이미지 센서를 포함한다.
본 명세서에서 용어 “광원”은 광을 발산하는 어떠한 디바이스도 포함하고, 예컨대, 전구, LED(light emitting diode) 및 레이저를 포함한다. 광원으로부터 발산되는 조사(illumination)를 집중시키거나 분산시키기 위한 리플렉터를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 광원은 상기 배양용기의 상부에 위치하며, 상기 렌즈는 집광렌즈 및 대물렌즈이고, 상기 집광렌즈는 상기 광원과 상기 배양용기 사이에 위치하며, 상기 대물렌즈는 상기 배양용기와 상기 이미징 센서 사이에 위치한다.
본 명세서에서 용어 “집광렌즈”는 상기 광원으로부터 나오는 광을 관찰 대상 즉 상기 배양용기 내의 세포에 가이드하는 렌즈를 의미한다. 본 명세서에서 용어 “대물렌즈”는 관찰 대상으로부터 나오는 광을 수집하고 광을 포커싱 하여 이미지를 형성시키는 렌즈를 의미한다.
상기 광원이 배양용기의 상부에 위치하는 경우, 바람직하게는, 본 발명의 장치는 상기 집광렌즈와 상기 배양용기 사이에 위상차 조절 디바이스를 추가적으로 포함한다.
본 발명의 장치는 상술한 바와 같이, 광원을 관찰 대상의 상부에 위치시켜 제작할 수 있지만, 택일적으로 광원을 관찰 대상의 하부에 위치시켜 제작할 수도 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 광원은 상기 배양용기의 하부에 위치하며, 상기 렌즈는 대물렌즈이고, 상기 대물렌즈는 상기 배양용기와 상기 이미징 센서 사이에 위치하고 상기 세포는 형광성 물질을 포함하며 상기 이미징 센서는 상기 세포로부터 발생하는 형광에 대한 이미지를 얻는다. 즉, 형광성 물질을 포함하는 세포로부터 나오는 형광을 대물렌즈가 수집 및 포커싱하여 이미지를 형성시킨다.
본 발명에서 이용되는 이미징 수단에 포함되는 “이미지 센서”는 대물렌즈로부터 형성된 이미지를 전기적 신호로 전환하는 디바이스를 의미한다. 본 발명에서 이용되는 이미지 센서는 CCD(charge-coupled device) 및 CMOS(complementary metaloxidesemiconductor) 활성 픽셀 센서를 포함한다. 본 발명에서 이용되는 이미지 센서는 디지털 카메라 및 디지털 광학 현미경에서 이용되는 어떠한 이미지 센서도 포함할 수 있다.
이미징 수단에 포함되는 상기 광원, 렌즈 및/또는 이미지 센서는 움직임이 가능한 (movable) 것이다. 상기 움직임은 상하 및/또는 좌우 움직임을 포함한다. 예를 들어, 상기 렌즈(집광렌즈 또는 대물렌즈)는 초점을 맞추기 위하여 상하로 움직일 수 있고, 또한 배양용기의 다양한 부분을 차지하고 있는 세포에 대한 이미지를 얻기 위하여 좌우로 움직일 수 있다. 또한, 상기 렌즈(집광렌즈 또는 대물렌즈)는 세포의 이동을 관찰하기 위하여 좌우로 움직일 수 있다. 이와 같은 초점 맞추기(즉, 포커싱)는 자동으로 되도록 할 수 있다. 예를 들어, 후술하는 작동 프로세서를 통하여, 상기 광원, 렌즈 및/또는 이미지 센서를 이동가능하게 하여 자동 포커싱이 가능하도록 할 수 있다.
바람직하게는, 이미징 수단의 광원, 렌즈 및 이미지 센서는 사용자-맞춤형(tailor-made) 또는 배양 목적-맞춤형으로 제작 및 교환이 가능하다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 세포 배양 관찰 장치는 상기 이미징 수단으로부터 얻은 이미지로부터 상기 세포가 차지하는 상기 배양용기의 저부의 면적을 분석하기 위한 분석 수단을 추가적으로 포함한다.
바람직하게는, 상기 분석수단은 면적을 계산하고 계산된 면적을 다양한 변수(예컨대, 배양시간)에 대하여 분석을 하여 이를 그래프 형태로 전환하는 프로그램을 포함한다. 바람직하게는, 상기 분석수단은 계산된 면적 및 분석된 면적을 기초로 하여 배양한 세포를 그룹화(grouping 또는 classifying)하는 프로그램을 포함한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 분석 수단은 상기 분석된 면적으로부터 세포 배양 상태를 판단하는 세포 배양 상태 프로그램을 포함한다. 상기 세포 배양 상태 프로그램은 상기 분석된 면적으로부터 세포 배양 상태, 예컨대 세포 증식도, 세포 생존도, 세포 사멸도 및 세포의 이동 정도를 분석하여 그 결과를 사용자에게 제공한다. 예를 들어, 세포 배양 시간이 증가할수록 세포가 차지하는 배양용기의 저부 면적은 증가하며, 이러한 증가 정도를 시간을 기준으로 하여 그래프로 나타내면 시그모이덜(sigmoidal) 곡선을 보이는 것이 일반적이다. 사용자가 원하는 시기(예컨대, 대수기 또는 정지기 시작점)에서 배양을 정지하는 경우, 상기 분석수단에 의해 산출되는 세포 배양 시그모이덜 곡선에서 사용자가 원하는 시기에 도달하였는 지 여부를 확인할 수 있다. 원하는 시기에 도달하는 경우, 사용자가 본 발명의 장치의 작동을 정지시킬 수 있으며, 또한 본 발명의 장치가 원하는 시기를 감지하여 장치의 작동으로 자동으로 정지시킬 수도 있다. 한편, 본 발명의 장치는 동물세포를 배양하는 경우 컨플루언시를 분석하여 컨플루언시 정도에 대한 분석 결과를 사용자에게 제공할 수 있다.
상기 분석수단은 다양한 방식으로 장착될 수 있다. 예를 들어, 상기 분석수단은 장치 내 내장된 작동 프로세서(processor)에 분석 프로그램으로 장착될 수 있다. 또는, 분석 프로그램이 있는 외부 저장매체[예컨대, USB(Universal Serial Bus)]를 장치에 연결하여 이미징 수단으로부터 생성된 이미지를 분석하도록 할 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 장치는 장치를 구동시키고 조절하는 프로세서를 포함한다. 예를 들어, 이미지의 분석, 광원의 턴 온과 턴 오프, 자동 포커싱, 이미지 센서의 작동, 광원의 턴 온과 이미지 센서 작동의 동기화, 이미징 시간, 이미징 빈도, 장치의 온도 및 CO2 농도 조절 등을 가능하게 하는 작동 프로세서를 포함한다. 상기 작동 프로세서는 바람직하게는, 하나의 칩 상에 CPU(central processing unit)으로 이루어진 마이크로프로세서이다.
본 발명의 장치는 전원(power source)을 포함한다. 상기 전원은 내부에 장착된 배터리 또는 외부전원을 포함한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 세포 배양 관찰 장치는 온도조절 수단을 추가적으로 포함한다. 상기 온도조절 수단은 세포 배양의 최적 온도를 유지하거나 또는 세포 배양에 대한 온도의 영향을 분석하기 위하여 온도를 조절하는 데 이용된다. 상기 온도조절 수단은 온도센서, 히터 또는 냉각기를 포함한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 세포 배양 관찰 장치는 대기 중 CO2 농도조절 수단을 추가적으로 포함한다. 예를 들어, 동물세포를 배양하는 경우에는, 배양용기의 CO2 농도를 5%가 되도록 조절한다. 본 발명의 장치 내 대기에 있는 CO2는 배지의 pH를 완충하는 작용을 한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 세포 배양 관찰 장치는 배양용기 내 배지의 pH, 색상 또는 탁도를 측정하는 수단을 추가적으로 포함한다. 예컨대, 동물세포를 배양하는 경우. 배지의 pH를 7.2-7.5로 하여 배양하는 것이 적합하며, 배양 중에 pH가 변화되어 상기 최적 pH를 이탈하는 경우에는 산 또는 염기를 배지에 첨가하여 최적 pH가 되도록 한다. 또한, pH 인디케이터(예컨대, 페놀레드)를 이용하면, 배지의 pH 변화를 색상으로 판단할 수 있다. 한편, 배양용기 내 세포의 증식 정도는 배지의 탁도를 측정함으로써 판단할 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 세포 배양 관찰 장치는 정해진 시간 간격으로 연속적으로 이미지를 얻어 연속적으로 세포 배양 상태를 관찰하도록 한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 세포 배양 관찰 장치는 개폐가 가능한 컨테이너(container)에 포함되어(housed) 있다. 예를 들어, 본 발명의 장치는 세포 배양 중에는 외부환경과 차단하여 작동시키는 것이 바람직하다. 바람직하게는, 상기 컨테이너는 당업계에 공지된 세포배양용 인큐베이터이다. 컨테이너로서의 세포배양용 인큐베이터는 온도, 습도 및 공기조성(atmosphere)을 일정하게 할 수 있는 것이다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 세포 배양 관찰 장치는 상기 광원 및 상기 이미지 센서의 작동시간을 동기화(synchronization)하는 수단(예컨대, 프로세서)을 추가적으로 포함한다. 상기 동기화는 이미지를 얻는 경우에만, 세포에 광을 조사하도록 함으로써 광에 의한 세포 배양의 간섭을 최대한 줄일 수 있도록 한다. 상기 동기화 수단으로서 프로세서가 이용되는 경우, 이 프로세서는 본 발명의 장치를 구동하게 하는 프로세서에 통합하여 장착되거나 또는 별도로 장착될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 세포 배양 관찰 장치는 배양 용기 내의 세포를 개수하는 세포 개수 프로세서를 추가적으로 포함한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 세포 배양 관찰 장치는 상기 이미징 수단으로부터 얻은 이미지, 상기 분석수단으로부터 분석된 면적 또는 상기 이미지와 면적을 저장하기 위한 저장 수단을 추가적으로 포함한다. 상기 저장 수단은 당업계에 공지된 다양한 저장 매체를 포함하며, 예컨대 관찰 장치에 내장된 저장 매체 및 외부 저장 매체를 포함한다. 상기 저장 매체의 예는 플로피 디스크, ZIP 디스크, 홀로그래픽, CD 및 DVD와 같은 광학 디스크, 미니디스크, 하드 디스크 드라이브, xD-Picture 카드, 멀티미이어카드 및 USB(Universal Serial Bus)를 포함한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 세포 배양 관찰 장치는 상기 분석수단으로부터 나오는 세포 상태 분석 결과를 사용자에게 시각화 하여 보여 주는 디스플레이 수단을 추가적으로 포함한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 세포 배양 관찰 장치는 상기 이미징 수단으로부터 나오는 이미지 또는 상기 분석수단으로부터 나오는 세포 상태 분석 결과를 사용자에게 유/무선으로 송신하는 송신수단을 추가적으로 포함한다. 예를 들어, 분석수단으로부터 나오는 세포 상태 분석 결과를 상기 송신수단을 통하여 무선으로 송신하면 3세대(3G) 광대역 부호분할다중접속망(WCDMA), 무선랜(Wi-Fi) 또는 와이브로(휴대인터넷) 망을 이용하여 사용자들이 전송받을 수 있다.
세포 배양이 사용자가 원하는 상태에 도달한 경우, 상기 송신수단을 통하여 사용자에게 얼러밍(alarming)하도록 할 수도 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 배지를 포함하는 배양용기(culture vessel)에서 세포를 배양하면서 상기 세포가 차지하는 상기 배양용기의 저부(bottom)의 면적을 분석하는 단계를 포함하는 세포 배양 상태의 분석 방법을 제공한다.
본 발명의 방법은 상술한 본 발명의 세포 배양 관찰 장치를 이용하여 실시되는 것을 하나의 구현예로 하기 때문에, 이 둘 사이에 공통된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 그 기재를 생략한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 면적 분석은 (i) 상기 세포가 차지하는 상기 배양용기의 저부(bottom)의 면적에 대한 이미지, (ii) 상기 배양용기의 저부의 일정 부위에서의 세포에 대한 이미지 또는 (i) 및 (ii)의 이미지를 분석하여 실시한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 배양은 지정된 온도 또는 CO2 농도 하에서 실시된다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 방법은 상기 배양용기 내 배지의 pH, 색상 또는 탁도를 분석하는 단계를 추가적으로 포함한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 방법은 정해진 시간 간격으로 연속적으로 이미지를 얻어 연속적으로 세포 배양 상태를 분석한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 방법은 상기 배양 용기 내의 세포를 개수하는 단계를 추가적으로 포함한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 방법이 적용되는 세포는 원핵세포 또는 진핵세포이다. 상기 원핵세포는 박테리아(또는 유박테리아) 및 아키박테리아를 포함한다. 본 발명의 방법이 적용되는 박테리아의 예는 Escherichia coli , Thermus thermophilics , Bacillus subtilis , Bacillus stearothermophilus, Salmonella typhimurium , Pseudomonas , Streptomyces , Staphylococcus , Lactobacillus, Lactococcus 및 Streptococcus를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 방법이 적용되는 아키박테리아의 예는 Methanococcus jannaschii ( Mj ), Methanosarcina mazei ( Mm ), Methanobacterium thermoautotrophicum ( Mt ), Methanococcus maripaludis , Methanopyrus kandleri , Halobacterium, Archaeoglobus fulgidus ( Af ), Pyrococcus horikoshii ( Ph ), Pyrobaculum aerophilum , Pyrococcus abyssi , Sulfolobus solfataricus ( Ss ), Sulfolobus tokodaii , Aeuropyrum pernix ( Ap ), Thermoplasma acidophilum 및 Thermoplasma volcanium를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 방법이 적용되는 진핵세포는 균류 세포, 이스트, 식물세포(예컨대, 단자엽 식물, 쌍자엽 식물 및 앨지) 및 동물세포(예컨대, 포유동물, 곤충, 파충류, 조류)를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 방법이 적용되는 동물세포는 인간, 마우스, 래트, 소, 돼지, 말, 양, 토끼, 염소, 조류, 어류 및 곤충의 세포를 포함한다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 방법이 적용되는 동물세포는 혈액세포, 면역세포, 줄기세포, 체세포, 성세포, 종양세포, 암세포 및 정상세포를 포함한다.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(a) 본 발명은 세포 배양 중에 세포가 차지하는 배양용기의 면적을 분석하여 세포의 배양 상태를 용이하면서도 편리하게 정확한 분석을 할 수 있도록 한다.
(b) 본 발명에 따르면, 종래의 방법에 의해 주관적으로 결정되는 배지 교체 시간 및 배양 종료 시간을 보다 정확하면서 신뢰성 있게 결정할 수 있다.
(c) 종래의 주관적 방법에 따르면, 배양 중 간헐적으로 배양용기를 배양기로부터 꺼내어 관찰하는데, 이는 배양 작업을 번거롭게 할 뿐만 아니라 감염 위험도 있다. 본 발명의 방법에 따르면, 배양 중에 배양 상태를 확인하기 위하여 배양용기를 배양기로부터 꺼낼 필요가 없다.
(d) 종래의 전기적 방법은 고가의 장비를 요구하며 사용되는 전기 또는 전장이 세포 배양을 영향을 미칠 수 있다. 그러나 본 발명의 방법은 전극을 이용하지 않으며 저가로 제작할 수 있는 이점이 있다.
(e) 본 발명에 따르면, 세포 배양 중에 세포가 차지하는 배양용기의 면적을 분석함으로써, 세포 배양 상태를 정보를 용이하게 얻을 수 있으며, 이러한 정보로부터 배지 교체 시간, 배양 종료 시간, 세포 생존도에 영향을 미치는 물질의 시험 및 세포 이동에 영향을 미치는 물질을 시험할 수 있다.
(f) 본 발명에 따르면 세포 배양 과정에서의 인 시투 세포 관찰이 가능하다.
도 1은 본 발명의 구체적인 일 실시예에 따른 본 발명의 세포 배양 관찰 장치에 대한 모식도이다.
도 2는 본 발명의 구체적인 일 실시예에 따른 본 발명의 세포 배양 관찰 장치의 스태킹 버전에 대한 모식도이다.
도 3은 본 발명의 구체적인 다른 실시예에 따른 본 발명의 세포 배양 관찰 장치에 대한 모식도이다.
도 1은 세포 배양기와 관련하여, 본 발명의 세포 배양 관찰 장치의 원리를 보여준다. 또한, 본 발명의 세포 배양 관찰 장치는 도 1과 같이 세포 배양기와 일체형으로 제작될 수 있다. 한편, 도 3은 현미경 형태로 본 발명의 세포 배양 관찰 장치를 구현한 것이다. 도 3의 경우, 운반성(portability)이 우수하여 종래의 세포 배양기 내에 위치시켜 사용할 수 있다.
이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 첨부된 도면들을 참조하여 상세히 설명한다. 우선 각 도면의 구성 요소들에 참조 부호를 부가함에 있어서, 동일한 구성 요소들에 대해서는 비록 다른 도면상에 표시되더라도 가능한 한 동일한 부호를 가지도록 하고 있음에 유의해야 한다. 또한, 본 발명을 설명함에 있어, 관련된 공지 구성 또는 기능에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명은 생략한다. 또한, 이하에서 본 발명의 바람직한 실시예를 설명할 것이나, 본 발명의 기술적 사상은 이에 한정하거나 제한되지 않고 당업자에 의해 변형되어 다양하게 실시될 수 있음은 물론이다.
도 1은 본 발명의 구체적인 일 실시예에 따른 본 발명의 세포 배양 관찰 장치(1)에 대한 모식도이다.
본 발명에 따라 세포 배양 상태를 관찰하고자 하는 세포(6)와 배지를 수용하고 있는 배양용기(5)를 본 발명의 배양용기 지지체 상에 위치시킨다. 이어, 세포 배양 관찰 장치(1)를 폐쇄시켜 외부환경으로부터 장치를 차단하여 장치 내부의 조건이 일정하게 유지되도록 한다.
동물세포를 배양하는 경우, 온도조절수단(예컨대, 히터)을 이용하여 장치의 온도를 37℃로 유지하고 CO2 농도 조절 수단을 이용하여 장치 내 대기 중 CO2 농도를 5%로 유지시킨다.
세포(6)를 배양하면서, 배양 30분 또는 1시간 간격으로 광원(3)이 턴 온 되도록 하고 이때 동기화 수단을 이용하여 이미지 센서(8)도 동시에 작동하도록 한다. 광원(3)이 턴 온 되도록 하는 시간은 1초 또는 2초로 설정할 수 있다. 동기화 수단은 본 발명 장치의 구동을 전체적으로 조절하는 프로세서(10)에 통합되어 장착될 수 있다.
세포(6)를 배양하면 세포가 차지하는 면적은 증가하게 된다. 세포(6)가 차지하는 배양용기(5)의 저부의 면적에 대한 이미지, 배양용기(5)의 저부의 일정 부위에서의 세포(6)에 대한 이미지 또는 상기 두 이미지를 이미징 수단으로부터 얻는다.
상기 이미지는 대물렌즈(7)에 의한 광학 이미지를 이미지 센서(8)가 전기적 신호로 전환하여 디지털 이미지를 생성한다. 대물렌즈(7)의 배율은 세포의 배양정도를 간단하게 분석하는 경우에는 100-200배가 적합하고, 세포에 대한 정밀한 분석을 하는 경우에는 400-600배가 적합하다. 상기 디지털 이미지로부터 분석수단이 세포가 차지하는 상기 배양용기의 저부의 면적을 분석한다. 분석수단은 작동 프로세서인 마이크로프로세서(10)에 포함되어 있다.
마이크로프로세서(10)에 포함된 분석수단에 의해 분석된 결과를 통하여 다양한 정보를 얻을 수 있다. 우선, 배양시간에 따른 세포가 차지하는 배양용기의 저부의 면적으로부터 세포의 배양 상태에 대한 정보를 얻을 수 있다. 예를 들어, 세포가 대수기 또는 정지기에 도달하였는지 여부를 알 수 있고, 동물세포의 경우에는 컨플루언시 정도를 알 수 있다. 이와 같은 정보를 통하여, 배지 교체 시간 및 배양 종료 시간을 파악할 수 있다.
또한, 세포 생존도에 영향을 미치는 물질을 시험하는 경우, 배양되는 세포에 상기 물질을 처리하고 일정 기간 배양한 다음, 세포가 차지하는 배양용기의 저부의 면적을 분석하면 상기 물질이 세포 생존도에 미치는 영향을 정확하게 분석할 수 있다.
또한, 세포 이동에 영향을 미치는 물질을 시험하는 경우, 세포가 없는 배양 용기의 한쪽 끝 부분에 상기 물질을 위치시키고, 다른 쪽 끝 부분에 세포를 접종하고 일정 시간 배양한 다음, 상기 물질이 위치한 부위에서 세포가 차지하는 면적을 분석하면 상기 물질이 세포 이동에 미치는 영향을 정확하게 분석할 수 있다.
본 발명의 장치는 전체적으로, 종래의 CO2 배양기와 유사한 형태로 제작할 수 있다. 컨테이너(2)에 본 발명의 구성요소 및 수단을 포함시켜 제작할 수 있다. 본 발명의 장치는 작은 크기로 제작될 수 있으며, 공간의 효율적인 이용을 위하여 필요한 경우 이러한 장치를 스태킹 하여 사용할 수 있다(도 2).
1: 본 발명의 세포 배양 관찰 장치 2: 컨테이너
3: 광원 4: 집광렌즈
5: 배양용기 6: 세포
7: 대물렌즈 8: 이미지 센서
9: 지지체 10: 마이크로프로세서

Claims (25)

  1. 다음을 포함하는 세포 배양 관찰 장치:
    (a) 상기 세포 배양기 내에 위치하고 세포 및 배지를 수용하기 위한 배양용기(culture vessel)를 지지하는 배양용기 지지체;
    (b) (i) 상기 세포가 차지하는 상기 배양용기의 저부(bottom)의 면적에 대한 이미지, (ii) 상기 배양용기의 저부의 일정 부위에서의 세포에 대한 이미지 또는 (i) 및 (ii)의 이미지를 얻기 위한 이미징 수단; 및
    (c) 상기 이미징 수단으로부터 얻은 이미지로부터 상기 세포가 차지하는 상기 배양용기의 저부의 면적을 분석하기 위한 이미지 정보 분석수단.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 세포 배양 관찰 장치는 개폐가 가능한 컨테이너(container)에 포함되어(housed) 있는 것을 특징으로 하는 장치.
  3. 삭제
  4. 제 1 항에 있어서, 상기 배양용기의 저부는 플랫(flat)한 면을 가지는 것을 특징으로 하는 장치.
  5. 제 1 항에 있어서, 상기 이미징 수단은 광원, 렌즈 및 이미지 센서를 포함하는 것을 특징으로 하는 장치.
  6. 제 5 항에 있어서, 상기 광원은 상기 배양용기의 상부에 위치하며, 상기 렌즈는 집광렌즈 및 대물렌즈이고, 상기 집광렌즈는 상기 광원과 상기 배양용기 사이에 위치하며, 상기 대물렌즈는 상기 배양용기와 상기 이미징 센서 사이에 위치하는 것을 특징으로 하는 장치.
  7. 제 6 항에 있어서, 상기 장치는 상기 집광렌즈와 상기 배양용기 사이에 위상차 조절 디바이스를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 장치.
  8. 제 5 항에 있어서, 상기 광원은 상기 배양용기의 하부에 위치하며, 상기 렌즈는 대물렌즈이고, 상기 대물렌즈는 상기 배양용기와 상기 이미징 센서 사이에 위치하고 상기 세포는 형광성 물질을 포함하며 상기 이미징 센서는 상기 세포로부터 발생하는 형광에 대한 이미지를 얻는 것을 특징으로 하는 장치.
  9. 제 5 항에 있어서, 상기 광원, 렌즈 또는 이미지 센서는 움직임이 가능한 (movable) 것을 특징으로 하는 장치.
  10. 제 1 항에 있어서, 상기 장치는 온도조절 수단을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 장치.
  11. 제 1 항에 있어서, 상기 장치는 대기 중 CO2 농도조절 수단을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 장치.
  12. 제 1 항에 있어서, 상기 장치는 상기 배양용기 내 배지의 pH, 색상 또는 탁도를 측정하는 수단을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 장치.
  13. 제 1 항에 있어서, 상기 장치는 정해진 시간 간격으로 연속적으로 이미지를 얻어 연속적으로 세포 배양 상태를 관찰하는 것을 특징으로 하는 장치.
  14. 제 5 항에 있어서, 상기 장치는 상기 광원 및 상기 이미지 센서의 작동시간을 동기화(synchronization)하는 수단을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 장치.
  15. 제 1 항에 있어서, 상기 장치는 상기 배양 용기 내의 세포를 개수하는 세포 개수 프로세서를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 장치.
  16. 제 1 항에 있어서, 상기 장치는 상기 이미징 수단으로부터 얻은 이미지, 상기 분석수단으로부터 분석된 면적 또는 상기 이미지와 면적을 저장하기 위한 저장 수단을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 장치.
  17. 제 1 항에 있어서, 상기 장치는 상기 이미징 수단으로부터 나오는 이미지 또는 상기 분석수단으로부터 나오는 세포 상태 분석 결과를 사용자에게 유/무선으로 송신하는 송신수단을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 장치.
  18. 배지를 포함하는 배양용기(culture vessel)에서 세포를 배양하면서 상기 세포가 차지하는 상기 배양용기의 저부(bottom)의 면적을 분석하는 단계; 및 상기 배양용기 내 배지의 pH, 색상 또는 탁도를 분석하는 단계를 포함하는 세포 배양 상태의 분석 방법.
  19. 제 18 항에 있어서, 상기 면적 분석은 (i) 상기 세포가 차지하는 상기 배양용기의 저부(bottom)의 면적에 대한 이미지, (ii) 상기 배양용기의 저부의 일정 부위에서의 세포에 대한 이미지 또는 (i) 및 (ii)의 이미지를 분석하여 실시하는 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 제 18 항에 있어서, 상기 배양은 지정된 온도 또는 CO2 농도 하에서 실시되는 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 삭제
  22. 제 19 항에 있어서, 상기 방법은 정해진 시간 간격으로 연속적으로 이미지를 얻어 연속적으로 세포 배양 상태를 분석하는 것을 특징으로 하는 방법.
  23. 제 18 항에 있어서, 상기 방법은 상기 배양 용기 내의 세포를 개수하는 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  24. 제 18 항에 있어서, 상기 세포는 원핵세포 또는 진핵세포인 것을 특징으로 하는 방법.
  25. 제 22 항에 있어서, 상기 세포는 진핵세포이고 상기 진핵세포는 동물세포인 것을 특징으로 하는 방법.
KR1020110146640A 2011-12-30 2011-12-30 세포 배양 관찰 장치 KR101352639B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020110146640A KR101352639B1 (ko) 2011-12-30 2011-12-30 세포 배양 관찰 장치

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020110146640A KR101352639B1 (ko) 2011-12-30 2011-12-30 세포 배양 관찰 장치

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20130077957A KR20130077957A (ko) 2013-07-10
KR101352639B1 true KR101352639B1 (ko) 2014-01-17

Family

ID=48991026

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020110146640A KR101352639B1 (ko) 2011-12-30 2011-12-30 세포 배양 관찰 장치

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101352639B1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20230102230A (ko) 2021-12-30 2023-07-07 메디칸(주) 이동가능한 영상 촬영 장치를 구비한 세포 관찰 장치 및 이를 이용한 세포 관찰 방법

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6359931B2 (ja) * 2014-09-29 2018-07-18 富士フイルム株式会社 細胞情報取得装置および方法並びにプログラム
JP6942636B2 (ja) * 2015-12-15 2021-09-29 オリンパス株式会社 細胞培養装置および細胞培養システム

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100737295B1 (ko) 2003-05-19 2007-07-09 도꾸리쯔교세이호징 가가꾸 기쥬쯔 신꼬 기꼬 세포배양용 마이크로 챔버
KR20090020614A (ko) * 2006-06-16 2009-02-26 산요덴키가부시키가이샤 배양물 관찰 시스템
KR20110062762A (ko) * 2009-12-04 2011-06-10 한국과학기술연구원 형광단백질발현 미생물을 이용한 분리막 오염도 정량분석 방법 및 장치
JP4810093B2 (ja) * 2004-12-28 2011-11-09 オリンパス株式会社 培養観察装置および標本トレー保温装置および蓋

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100737295B1 (ko) 2003-05-19 2007-07-09 도꾸리쯔교세이호징 가가꾸 기쥬쯔 신꼬 기꼬 세포배양용 마이크로 챔버
JP4810093B2 (ja) * 2004-12-28 2011-11-09 オリンパス株式会社 培養観察装置および標本トレー保温装置および蓋
KR20090020614A (ko) * 2006-06-16 2009-02-26 산요덴키가부시키가이샤 배양물 관찰 시스템
KR20110062762A (ko) * 2009-12-04 2011-06-10 한국과학기술연구원 형광단백질발현 미생물을 이용한 분리막 오염도 정량분석 방법 및 장치

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20230102230A (ko) 2021-12-30 2023-07-07 메디칸(주) 이동가능한 영상 촬영 장치를 구비한 세포 관찰 장치 및 이를 이용한 세포 관찰 방법

Also Published As

Publication number Publication date
KR20130077957A (ko) 2013-07-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6063967B2 (ja) 細胞画像取得および遠隔モニタリングシステム
JP6851636B2 (ja) 組み込み式撮像システムを備える細胞培養インキュベータ
KR101377694B1 (ko) 세포 분석 및 세포배양 모니터링 장치 및 이를 이용한 세포 분석 및 세포배양 모니터링 방법
JP6426704B2 (ja) 液体試料のリアルタイム分析のための光学システムと方法
JP6360840B2 (ja) 培養サンプル発達モニタリングのための装置、方法およびシステム
US20160152941A1 (en) Device for analyzing cells and monitoring cell culturing and method for analyzing cells and monitoring cell culturing using same
JP6233864B2 (ja) 生体物質の発育を監視するための装置
CN104081204B (zh) 用于微生物早期检测的装置
US20200182774A1 (en) Systems and methods for cell dissociation
CN110446803A (zh) 自动收集指定数目的细胞
US20040241832A1 (en) Cell culture detection apparatus, cell culture observation apparatus, and cell culture observation method
KR101352639B1 (ko) 세포 배양 관찰 장치
WO2012115153A1 (ja) 細胞評価方法、細胞培養方法、細胞評価装置、インキュベータ、細胞評価プログラム、コロニー分類プログラム、幹細胞の培養方法、幹細胞評価装置および幹細胞評価プログラム
JP6608423B2 (ja) 培養および検出装置
CN108300663B (zh) 细胞培养监测系统及培养监测方法
GB2494202A (en) Microorganism imaging and incubating apparatus able to maintain a temperature gradient
JP2013021960A (ja) 培養観察装置
ES2784462A1 (es) Sistema de control del desarrollo de un cultivo en un medio solido en una incubadora robotizada
CN113544507A (zh) 用于监测细胞培养物的具有集成电极或光学元件的装置和系统以及相关方法
JP4722343B2 (ja) 個数計数方法、そのためのプログラム、記録媒体および個数計数装置
JP2024502568A (ja) 細胞培養デバイスからの画像解析および非侵襲的データ収集
JPWO2006057444A1 (ja) 細胞の分化度自動診断方法
CN104342367A (zh) 基于智能手机的便携细菌学检测系统
CN220043534U (zh) 一种摄像器及定量盘培养观察集成装置
Te Hwu et al. Real-time optical monitoring of cell culture in centrifugal microfluidics

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
LAPS Lapse due to unpaid annual fee