KR101347823B1

KR101347823B1 - 중합효소 연쇄반응에 의한 종 특이적 푸자리움 베르티실리오이드 검출을 위한 올리고뉴클레오티드 및 이를 포함하는 키트

Info

Publication number: KR101347823B1
Application number: KR1020110117328A
Authority: KR
Inventors: 윤성환; 강미란; 김지혜; 김희경; 이데레사; 이승호; 류재기
Original assignee: 순천향대학교 산학협력단
Priority date: 2011-11-11
Filing date: 2011-11-11
Publication date: 2014-01-20
Also published as: KR20130054477A

Abstract

본 발명은 Fusarium verticillioides의 PCR 검출을 위한 올리고뉴클레오티드에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 옥수수에서 발생하는 F. verticillioides 균주를 다른 푸모니신 생성 추정 G. fujikuroi 종 복합체 소속 균주들과 구별할 수 있는 신규한 종 특이 올리고뉴클레오티드(프라이머) 조합 및 이를 포함하는 키트에 관한 것이다.
본 발명은 서열번호 1 및 서열번호 2를 포함하는 것을 특징으로 하는 PCR에 의한 종 특이적 Fusarium verticillioides 검출을 위한 올리고뉴클레오티드인 것을 특징으로 한다. 또한, 상기 올리고뉴클레오티드들을 포함하는 Fusarium verticillioides 검출용 키트인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 프라이머 조합은 여러 곡물시료에 오염되어 있는 F. verticillioides 균주를 신속하게 검출하고 동정할 수 있다.

Description

중합효소 연쇄반응에 의한 종 특이적 푸자리움 베르티실리오이드 검출을 위한 올리고뉴클레오티드 및 이를 포함하는 키트{Oligonucleotides for detecting Fusarium verticillioides species-specificly by PCR and the kit comprising the same}

본 발명은 Fusarium verticillioides의 PCR 검출을 위한 올리고뉴클레오티드에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 옥수수에서 발생하는 푸모니신을 생성하는 F. verticillioides 균주를 다른 푸모니신 생성 추정 G. fujikuroi 종 복합체 소속 균주들과 구별할 수 있는 신규 종 특이 올리고뉴클레오티드(프라이머) 조합 및 이를 포함하는 키트에 관한 것이다.

Gibberella fujikuroi 종 복합체(species complex)는 Fusarium을 불완전세대로 갖는 사상성 자낭균 곰팡이 집단으로서 벼, 옥수수, 수수, 기장 등을 비롯한 각종 곡물에 광범위하게 오염되어 주요 병해를 일으키는 식물병원균이다(Leslie et al., 1990; Leslie and Summerell, 2006). 이 집단에 속한 종들은 형태학적 특징만으로 정확히 구분되기 어렵기 때문에 균주 사이의 교배 여부에 따른 교배 군집(mating population, MP)으로 나뉘기도 하였으나(Leslie and Summerell, 2006; Leslie et al., 2007) 무성세대로만 존재하는 종들의 구분은 여전히 명확하지 않았다. 이를 극복하기 위하여 DNA 염기서열의 비교분석을 통해 지금까지 집단 내 최소 40여 종 이상의 계통발생학적 종(phylogenetic species)이 동정 되었다(O'Donnell et al., 1998). 이들 중 일부 종은 식물병 뿐 아니라 이병 또는 오염식물 내 푸모니신(fumonisins)이라는 폴리케티드(polyketide) 계통의 곰팡이독소(mycotoxin)를 생성하여 사람과 가축에 심각한 중독증을 일으키기도 한다(Marasas et al., 1988; Nelson et al., 1993 Munkvold and Desjardins, 1997; Marasas, 2001). 특히 사람의 경우, 푸모니신 오염 곡물의 섭취와 식도암 발생 사이의 병역학적 연관관계가 대두되면서 발암물질 후보로서 더욱 많은 관심을 얻게 되었다(Yoshizawa et al., 1994; Marasas, 2001).

Fusarium verticillioidess(완전세대: G. moniliformins , MP A)는 G. fujikuroi 종 복합체에 속하는 종으로서 전 세계적으로 옥수수에 자주 발생하여 줄기나 이삭에 뿌리 썩음병을 일으킬 뿐 아니라 다량의 푸모니신을 생산하는 것으로 알려졌다(Jurjevic et al., 2005). 하지만 옥수수에 빈번히 오염되는 G. fujikuori 종 복합체 중에는 F. verticillioides 뿐 아니라 F. proliferatum (G. intermedia, MP D 소속), F. subglutinas(G. subglutinans, MP E), F. fujikuroi(G. fujikuroi, MP C) 등의 다른 종들도 푸모니신 을 생성한다(Jurjevic et al., 2005). 곡물 시료 내 이들 푸모니신 생성 균주들의 검출과 동정은 푸모니신 생합성에 필수적인 폴리케티드 합성(polyketide synthase) 유전자인 FUM1 (Proctor et al., 1999) 의 PCR 증폭 여부로 쉽게 가능하나(Baird et al., 2008; Bezuidenhout et al., 2006), 푸모니신 생성 균주 내 정확한 종 동정은 여전히 계통발생학적 분석으로만 가능하다. 이를 극복하기 위해 F. verticillioides , F. proliferatum , F. subglutinans의 특이적인 검출을 위한 프라이머 조합의 개발이 시도되었다(Mulㄷ et al., 2004; Patino et al., 2004; Sreenivasa et al., 2008; Yazeed et al., 2011). 한편 국내 친환경 농법의 확산과 농산물의 안전성에 대한 관심이 커지면서 옥수수를 비롯한 곡물 시료 내 이들 푸모니신 생성 균주들의 오염 여부를 신속하게 검정할 수 있는 기술의 필요성이 더욱 부각되고 있다.

본 발명은 상기 문제를 해결하기 위해 도출된 것으로서, 우리나라 옥수수에서 발생하는 F. verticillioides 균주를 다른 푸모니신 생성 추정 G. fujikuroi 종 복합체 소속 균주들과 구별할 수 있는 신규 특이 프라이머 조합을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 프라이머 조합을 포함하는 상기 균의 검출을 위한 키트를 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 PCR에 의한 종 특이적 Fusarium verticillioides 검출을 위한 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1(RVER1) 및 서열번호 2(RVER2)를 포함하는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 올리고뉴클레오티드 세트를 포함하는 Fusarium verticillioides 검출용 키트인 것을 특징으로 한다.

본 발명의 PCR에 의한 종 특이적 Fusarium verticillioides 검출을 위한 올리고뉴클레오티드 및 이를 포함하는 키트를 이용하여, 상기 균주를 다른 푸모니신 생성 추정 G. fujikuroi 종 복합체 소속 균주들과 구별하여 곡물시료로부터 쉽고 용이하게 검출할 수 있다.

도 1은 본 발명에 사용된 Fusarium 대표종으로부터 분리된 RPB2 유전자의 일부 핵산 서열의 배열이다. 프라이머 RVER1 및 RVER2의 서열은 검은색 화살표로 표시하였으며, 종 간 프라이머 내의 다양한 핵산서열은 검은색 박스로 표시하였다. (//는 핵산 서열의 불연속성을 나타냄; F. verticillioides: OS9로부터 분리된 RPB2 ; F. fujikuroi: OS5; F. proliferatum: OS17; F. subglutinans: OS12; F. oxysporum: K41087; F. graminearum: PH-1)
도 2는 프라이머 각각 RVER1 및 RVER2 (A)와 rp32 및 rp33 (B)를 사용하여 본 발명에 사용된 Fusarium 종으로부터 PCR 증폭된 사진이다; [(A) 레인 1-10 및18: F. verticilloides 분리; 11-15: F. fujikuori ; 16-17: F. subglutinans; 19-27: F. proliferatum; 28-34: 다른 Fusarium 종. M: a 100-bp 래더. (B) 레인 1-8: F. verticillioides; 9-15: F. proliferatum; 16-21: F. fujikuroi; 22-23: F. subglutinans].
도 3은 RVER1 및 RVER2를 이용하여 F. verticillioides 게놈 DNA로부터 RBP2 가 증폭된 사진이다; [M: a 100-bp 래더; 레인 1: 곰팡이 게놈 0.125 mg/ml; 레인 2-6: 레인 1의 게놈 DAN의 10-배 연속적 희석].
도 4는 프라이머 RVER1 및 RVER2를 이용하여 옥수수 샘플로부터 게놈 DNA의 F. verticillioides 특이적 DNA 절편의 증폭 사진이다; [M: a 100-bp 래더; 레인 1-5: 옥수수 게놈 DNA, 레인 6: F. verticillioides 의 게놈 DNA].

본 발명은 Fusarium verticillioides의 PCR 검출을 위한 올리고뉴클레오티드에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 옥수수에서 발생하는 F. verticillioides 균주를 다른 푸모니신 생성 추정 G. fujikuroi 종 복합체 소속 균주들과 효과적으로 구별할 수 있는 신규한 종 특이 올리고뉴클레오티드(프라이머) 조합 및 이를 이용한 상기 균의 검출을 위한 키트에 관한 것이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 예시적인 것으로 이 분야에서 통상의 지식을 가지는 자는 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위에서 제시된 실시예에 대한 다양한 변형 및 수정 발명을 만들 수 있을 것이다. 이러한 변형 및 수정 발명에 의하여 본 발명의 범위는 제한되지 않는다.

균주 수집 : 본 연구에서 사용된 G. fujikuroi 종 복합체들은 2009-2010년 동안 우리나라 옥수수와 벼로부터 분리한 균주로서 농촌진흥청 국립농업과학원 유해생물과로부터 분양 받아 진핵생물 번역 연장인자 1-알파(EF1A) 유전자 염기서열을 이용한 계통발생학 분석으로 동정된 균주들(Kim et al., unpublished data)과 농업유전자원센터 (KACC)로부터 분양받은 균주들이다(표 1). 이외 다른 종의 Fusarium 속 곰팡이는 Fusarium Research Center (USA) 와 KACC로부터 분양받았다(표 1).

본 발명에서 사용된 Fusarium종 및 특이적 프라이머를 이용한 PCR 증폭

species	isolate	host	source^a (origin)	primer pairs^b
species	isolate	host	source^a (origin)	PRO1/2	VER1/2	rp32/33	RVER 1/2
F. fujikuroi	K44021	rice	KACC	+^c	-d	+
	K44019	rice	KACC	+		+
	K44017	rice	KACC	+		+
	K44015	rice	KACC	+		+
	K44010	rice	KACC	+		+
	K44009	rice	KACC	+		+
	K44004	rice	KACC	+		+
	K42687	rice	KACC	+		+
	K42686	rice	KACC	+		+
	OS5	corn	Kim et al^e			+
	OS6	corn	Kim et al	+		+
	OS8	corn	Kim et al			+
	OS11	corn	Kim et al			+
	OS25	corn	Kim et al	+		+
F. proliferatum	K44025	rice	KACC	+		+
	K44024	rice	KACC	+		+
	K42694		KACC	+		+
	K42693		KACC	+		+
	K42692		KACC(China)	+		+
	OS17	corn	Kim et al			+
	OS18	corn	Kim et al			+
	OS30	corn	Kim et al			+
	OS32	corn	Kim et al	+		+
	OS46	corn	Kim et al	+		+
	OS58	corn	Kim et al	+		+
	OS65	corn	Kim et al	+		+
	OS66	corn	Kim et al	+		+
F. verticilliodes	K42699		KACC		+	+	+
	K42698		KACC(China)		+	+	+
	K41321		KACC		+	+	+
	OS9	corn	Kim et al	+	+	+	+
	OS14	corn	Kim et al	+	+	+	+
	OS20	corn	Kim et al		+	+	+
	OS21	corn	Kim et al		+	+	+
	OS24	corn	Kim et al		+	+	+
	OS26	corn	Kim et al	+	+	+	+
	OS34	corn	Kim et al		+	+	+
	OS35	corn	Kim et al		+	+	+
	OS40	corn	Kim et al		+	+	+
	OS44	corn	Kim et al		+	+	+
	OS45	corn	Kim et al		+	+	+
	OS48	corn	Kim et al		+	+	+
F. subglutinans	OS12	corn	Kim et al			+
	OS13	corn	Kim et al			+
	OS23	corn	Kim et al			+
	OS47	corn	Kim et al		+	+
F. oxysporum	K41087	cymbidium	KACC
	K40236	carnation	KACC
	O1565	banana	FRC(Taiwan)
	O1566	banana	FRC(Honduras)
	O1567	banana	FRC(Australia)
F. oxysporum f. sp. radicis -lycopersici	O1090	tomato		FRC(Canada)
	O1092	tomato		FRC(Canada)
	O1097	tomato		FRC(Canada)
F. graminearum	PH-	wheat		FRC (USA)
	Z03643	wheat		FRC (USA)
	GZ3639	wheat		FRC (USA)
	SCK04	barley		KACC
^aKACC: Korean Agricultural Culture Collection, Suwon, Korea. KACC without parenthesis indicates the fungal isolates from Korea. FRC: Fusarium Research Center, University Park, PA, USA. ^bPrimer pairs used in PCR amplification. Refer to Table 2. ^c+: amplification of a specific DNA fragment ^d- no amplification ^eunpublished data

RPB2 유전자의 증폭 및 염기서열 정렬 : 수집된 균주들의 게놈 DNA 추출을 위하여 감자 한천 배지 (PDA)에서 3일간 배양한 각 균주의 아가 블록(agar block)을 감자 한천 액체 배지(Potato Dextrose Broth, Difco, USA)에 접종하여 3일 동안 24℃에서 진탕 배양하였다. 균체로부터 Chi등 (2009) 이 보고한 방법에 따라 게놈 DNA를 추출한 후 F. verticillioides 14 주, F. proliferatum 8 주, F. fujikuroi 5 주, F. subglutinas 4 주의 게놈 DNA로부터 RNA 폴리머라아제 II 베타 서브유닛(RPB2) 유전자를 증폭하였다. 본 연구에서 사용한 모든 PCR 증폭용 프라이머는 Bioneer사 (Korea)에서 제작하였으며, PCR 반응을 위해 총량 50㎕ 반응액에 50ng 의 주형 DNA, 1×PCR buffer, 각각의 dNTP 0.2 mM, 각 프라이머 10μM, 1.25 U ExTaq 폴리머라아제(Takara Biomedicals, Japan)을 첨가하였다. RPB2 유래 프라이머 조합(fRPB2-7cF 과 fRPB2-11aR)(표 2)을 이용한 PCR 을 증폭은 다음과 같은 조건으로 수행하였다: 94℃ 2분의 변성 이후 30 사이클 의 94℃ 30초, 58℃ 30초, 72℃ 1분 반응, 72℃ 10분의 연장 반응. 전기영동을 통하여 단일한 크기 (~970 bp) 의 PCR 증폭을 확인한 후 PCR 정제 키트(NucleoGen, Korea)를 이용하여 해당 증폭 DNA를 순화하였다.

증폭 DNA의 염기서열을 결정하기 위하여 PCR 증폭용 프라이머 조합을 염기서열용 프라이머로 사용하여 직접적 시퀀싱 방법을 주로 사용하였다. 하지만 염기서열의 결과가 명확하지 않을 경우, 해당 증폭 DNA를 이미 보고된 방법에 따라 pGEMT- T Easy Vector System (Promega, USA)에 클로닝한 후(Hong et al., 2010), T7과 SP6 프라이머 조합으로 염기서열을 결정하였다. 증폭 유전자의 최종 염기서열을 확정하기 위하여 양 방향 프라이머에 의해 결정된 염기서열을 DNASTAR사 (USA)의 SEQMAN 프로그램으로 비교하였으며, 이후 증폭 유전자 염기서열들을 DNA STAR MEGALIGN 프로그램 내 Clustral W 방법을 사용하여 정렬하였다.

본 연구에서 얻은 서열 중 일부는 NCBI (The National Center for Biotechnology Information, USA)의 GenBank 에 기탁하였으며(GenBank accession numbers JN968201-JN968212) 관련 연구자의 요청에 의해 언제든지 분양이 가능하다.

종 특이 프라이머 의 제작 : F. verticillioies 의 종 특이 프라이머를 제작하기 위하여 수집 균주의 EF1A 유전자(Kim et al., unpublished data)와 본 연구에서 증폭한 RPB2 유전자 염기서열을 사용하였다. 680bp 크기 이하의 EF1 유전자 염기서열을 균주 별로 정렬하였을 경우, 3 종의 G. fujikuroi 종 복합체 균주 내에서 총 68 bp의 염기서열의 변이를 확인할 수 있었다. 하지만 이들 변이 부위는 증폭된 EF1A 유전자에 골고루 분포하고 있었기 때문에 F. verticillioides 균주에 특이적인 프라이머를 제작할 정도의 연속적인 변이 부위를 찾기 어려웠다. 실제로 몇 몇 변이부위로부터 제작한 프라이머 조합을 사용하여 PCR 증폭을 한 결과, F. verticillioides 균주 특이적 증폭 양상을 관찰할 수 없었다(데이터 미도시).

반면, 970 bp 크기 이하의 RPB2 유전자 염기서열의 정렬을 통해 총 50여bp의 변이 서열을 확인하였으며, 이들 부위로부터 RVER1 과 RVER2를 특이 프라이머 후보 조합으로 제작할 수 있었다(Fig 1). 이들 프라이머는 모두 RPB2 유전자의 코딩 영역에 위치하였다.

F. verticillioides 특이 프라이머를 이용한 PCR 증폭 : 위에서 제작된 RVER1 과 RVER2 조합을 이용한 PCR 증폭(조건은 위의 RPB2 증폭조건과 같으며, 어닐링 온도로 55℃ 사용)결과, 3 종의 푸모니신 생성 G. fujikuroi 종 복합체 수집 균주들 중 오직 F. verticillioides 의 게놈 DNA로부터 208 bp의 DNA 절편이 특이적으로 증폭되었다(표 1, 도 2).

이들 프라이머의 특이성을 좀 더 검정하기 위하여 이들 3 종 외 다른 Fusarium 속 곰팡이(F. oxysporum , F. graminearum , 등)(도 2). 와 옥수수에서 자주 발생하는 Fusarium 속 외 다른 곰팡이 (C. heterostrophus , C. carbonum , 등) (데이터 도시하지 않음)의 게놈 DNA 를 주형으로 PCR 을 수행한 결과, 특이적 DNA 절편이 전혀 검출되지 않았다. 이를 통해 RVER1 과 RVER2 프라이머의 종 특이성이 검정되었다.

한편 푸모니신 생합성에 필수적인 폴리케티드 유전자인 FUM1 유전자로부터 유래한 rp32 와 rp33 프라이머 로 PCR을 수행한 결과, 모든 F. verticillioides 균주의 게놈 DNA로부터 ~680bp 의 DNA 절편이 증폭되었다(표 1, 도 2). FUM1 특이 절편이 증폭된 F. verticillioides 균주 모두가 실제 쌀 배지에서 푸모니신 을 생성하였다는 이전 보고(Baird et al., 2008) 의 결과를 참조할 경우, 본 연구에서 조사한 모든 균주는 푸모니신 을 생성할 가능성이 높다고 판단된다. 하지만 FUM1 증폭용 프라이머 조합은 F. verticillioides 뿐 아니라 푸모니신 고생산 균주로 알려진 F. proliferatum 과 심지어 저생산 또는 미생산 균주로 알려진 F. fujiukuroi 와 F. subglutinans 균주로부터도 같은 크기의 DNA를 증폭하였다(표 1, 도 2). 한편, 기존에 제작된 F. verticillioides 증폭용 프라이머 조합 (VER1 과 VER2, 표 2)을 사용하였을 경우에도, 분석대상 곰팡이 균주 중 오직 F. verticillioides 균주의 DNA로부터만 특이 절편이 증폭되어(표 1), 본 연구에서 개발된 프라이머들의 특이성이 최소한 기존 개발 프라이머 와 비슷함을 알 수 있었다. 하지만 본 연구에서 개발된 특이 프라이머는 지금까지 시도되지 않았던 RPB2 유전자로부터 제작되었기 때문에 칼모듈린(calmodulin) 유전자(Mule et al., 2004), EF -1 유전자(Bezuidenhout et al., 2006), 유전자간 스패이서 서열(intergenic spacer sequence, IGS) 부위(Patino et al., 2004; Sreenivasa et al., 2008), RAPD 표지인자(Yazeed et al., 2011) 등으로부터 유래된 기존 특이 프라이머 조합들과 달리 신규성을 갖는다고 할 수 있다.

한편 기존에 발표된 F. proliferatum 특이 프라이머 조합(Mule et al., 2004) 을 본 연구에서 수집한 G. fujikuroi 종 복합체 균주 집단에 적용한 결과, 종 특이적 양상의 PCR 검출이 관찰되지 않았다(표 1). 따라서 이들 F. proliferatum 특이 프라이머로는 옥수수 발생 푸모니신 고생산 균주인 F. proliferatum과 F. verticillioides를 구분할 수 없었다. 오히려 본 연구에서 개발한 F. verticillioides 프라이머 조합(혹은 기존 프라이머조합 추가)을 rp21 와 rp33 조합과 함께 사용할 경우, 푸모니신 생성 가능 F. verticillioides 균주의 신속하고 보다 정확한 종 동정이 가능할 것으로 예상된다. 그리고 RVER1과 RVER2 프라이머의 검출한계를 검정하기 위하여 F. verticillioides 균주 게놈 DNA를 125ng/ml의 농도로부터 10배씩 희석하여 PCR을 수행한 결과, 0.125 pg/ml 수준의 곰팡이 DNA로부터도 특이 프라이머를 증폭할 수 있었다(도 3).

한편, 여러 곡물시료로부터 F. verticillioides 의 PCR 검출여부를 검정하기 위하여, 200mg 의 벼와 옥수수 시료로부터 Food Kit (NucleoSpin® Food, Germany)를 이용하여 게놈 DNA를 추출한 후, 위에서 언급한 조건으로 PCR 을 수행하였다. 실험 결과, 총 5 종의 옥수수 시료 중 3 종에서 특이 절편이 검출되었으며(도 4), 총 10 종의 벼 시료로부터는 특이 절편이 증폭되지 않았다.

이와 같은 결과는 우리나라의 경우, F. verticiliioides가 옥수수와 달리 벼에서는 거의 발생하지 않는다는 결과(Kim et al., unpublished data)를 뒷받침 한다. 따라서 우리나라 볍씨와 각종 도정미 시료에서 자연 발생하는 미량의 푸모니신(Lee et al., unpublished data)은 F. verticillioides 가 아니라 대부분 F. proliferatum 에 의한 것으로 추정할 수 있다. 하지만 우리나라 외 다른 아시아나 아프리카 지역에서는 벼에서도 F. verticillioides 가 발생된다는 보고가 있기 때문에(Amoah et al., 1995; Desjardin et al., 2000), 우리나라의 경우도 F. verticillioides 에 의한 벼의 푸모니신 오염 가능성에 주의하여야 할 것이다.

한편, 곡물 내 F. verticillioides 의 오염 여부뿐 아니라 정량적인 오염량 분석은 정량적 실시간 PCR (qRT-PCR)을 통해 가능할 것이다. 본 연구에서 개발된 RVER1 과 RVER2 프라이머 조합은 이들에 의해 증폭된 DNA 절편의 크기 (208 bp)를 고려할 때 qRT-PCR 에 직접 사용되기 적당할 것으로 예상된다. 또한 이들 프라이머 는 옥수수나 벼뿐만 아니라 다른 곡물에서도 F. verticillioides의 오염과 이에 따른 푸모니신 발생위험 정도를 예측하는 데에도 유용하게 활용될 수 있을 것이다. 특히 화학농약사용을 최소화하는 친환경농법으로 재배된 농산물 내 곰팡이 오염 분석에 중요하게 활용될 수 있을 것이다. 이를 위해서는 곡물 내 F. verticillioides 오염률과 푸모니신 발생량 사이의 보다 정밀한 상관관계 규명이 필요할 것이다.

이와 같이, 본 발명의 종 특이적 Fusarium verticillioides 검출을 위한 올리고뉴클레오티드 및 이를 포함하는 키트를 이용하여, 상기 균주를 다른 푸모니신 생성 추정 G. fujikuroi 종 복합체 소속 균주들과 구별하여 곡물시료로부터 쉽고 용이하게 검출할 수 있다.

서열목록 전자파일 첨부

Claims

서열번호 1 및 서열번호 2를 포함하는 것을 특징으로 하는 PCR에 의한 종 특이적 Fusarium verticillioides 검출을 위한 올리고뉴클레오티드.
제1항의 올리고뉴클레오티드들을 포함하는 Fusarium verticillioides 검출용 키트.