KR101326537B1 - 카텝신 ｇ 발현 억제제 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 갈근추출물 또는 루테올린을 유효성분으로 포함하는 카텝신 G 억제제 조성물에 관한 것이다.

갈근추출물, 루테올린, 부착단백질, 파이브로넥틴, 카텝신 Ｇ

Description

카텝신 Ｇ 발현 억제제 조성물{Composition for inhibition of Cathepsin G}

본 발명은 카텝신 G 발현 억제제 조성물을 제공하는 것으로, 구체적으로는 갈근추출물 또는 루테올린이 부착단백질의 분해 억제를 통해 매트릭스 메탈로프로티아제의 발현을 막을 수 있는 카텝신 G를 억제하도록 하는 조성물에 관한 것이다.

피부노화는 자외선과 같은 외적요인에 의한 광노화와 호르몬 변화, 스트레스 등의 내적 인자들의 변화로 인한 자연노화의 복합적인 작용에 의해 피부의 주름살 증가나 탄력성 감소 등이 나타난다. 이러한 이유로 인해 피부노화가 진행될수록 피부를 구성하는 물질인 콜라겐, 엘라스틴, 히아루론산, 프로테오글리칸, 글리코스아미노글리칸, 피브로넥틴 및 당단백질의 함유량 및 배열이 변하거나 감소하고, 수분과 결합할 수 있는 능력이 저하되고, 그 결과 피부를 구성하는 기질물질이 감소하고, 피부의 수분함유능력이 상실되어 탄력상실, 피부 건조, 피부처짐 등의 증상들이 나타나게 된다.

이러한 피부변화를 예방하거나 치료할 수 있는 기능성 화장품 원료나 의약품 개발을 위해 다양한 연구들이 진행되고 있다. 현재 가장 많이 항노화 억제물질로 연구되고 있는 것은 콜라겐의 생성과 자외선에 의한 콜라겐을 분해하는 효소인 매 트릭스 메탈로프로테아제(MMP)의 적절한 조절을 위한 연구들이 활발히 진행되고 있다.

파이브로넥틴은 정상적인 상태에서 피부의 진피층에서 세포와 콜라겐을 연결하는 부착단백질로 세포의 이동이나 증식, 분화 등에 관여하며 세포의 내부신호와 밖의 신호를 전달하는 매개체로 보고되고 있다. 파이브로넥틴은 모든 척추동물에서 발견되며 두 개의 서브유닛(subunit)로 구성된 다이머(dimer)로 구성되어 있으며 440 Kda의 당 단백으로서 가용성인 혈장(plasma Fn;pFN)과 세포내(cellular Fn(cFN)) 두 가지 형태로 존재한다. pFN은 대부분 간세포에서 생산되고 cFn은 섬유아세포, 상피세포, 대식세포 등 다양한 세포들에서 생산되며 이러한 두 가지 형태의 Fn은 정상피부에서 모두 발견된다 (Roberger DJ. Fibronectin. Int J Biochem Cell Biol 1997;29:939-943). 파이브로넥틴은 세포 표면에서 발현되는 a, b 두 개의 서브유닛(subunit)로 구성된 당 단백인 인테그린 수용체나 비인테그린 수용체와 결합하여 세포의 접착이나 신장의 촉진, 세포이동 촉진, 세포분화 조절, 조직 회복 등의 다양한 생물학적 기능을 나타내는 것으로 알려져 있다(Couchman JR, Austria MR, Woods A. Fibronectin-cell interactions. J.I.D. 1990;94:7s-14s. Hynes RO, Yamada KM. Fibronectin; multifunctional modular glycoPEotein. J. cell boil 1982; 92;369-377).

이러한 부착단백질들의 분해산물들은 관절염 환자의 연골세포 연구를 통해 메탈로프로티아제의 발현에 영향을 미친다는 것이 알려져 있다. 즉 파이브로넥틴의 분해물들이 다양한 염증반응을 매개하는 사이토킨(cytokine)(인터루킨-1과 6, TNF- 1)의 발현을 촉진시키(Arthritis & Rheumatism, 2002)고 메탈로프로티아제의 발현을 증가시킨다(J Cell Bio, 1983)는 연구가 보고되었다.

또한 UV 조사시 ECM(extracellular matrix)에서는 콜라겐 감소와 MMP-1 증가와 같은 구조적인 ECM 단백질들의 변화가 관찰되는데 파이브로넥틴의 경우 UV 조사 시 엘라스타아제의 활성이 증가하여 파이브로넥틴의 분해가 촉진되고 이러한 파이브로넥틴의 분해산물들이 피부 노화에 해로운 역할을 할 수 있다는 동물시험 결과가 보고되고(Journal of photochemistry and photobiology, 2000) 있다. 그리고, 피부에는 많은 프로티아제들이 있으며 대표적으로 세린 프로티아제와 메탈로프로티아제가 존재한다. 그러나 세포내와 세포밖의 pH 영향에 의해서 위의 프로티아제들 중 세린프로티아제들인 카텝신 B, D, H, L, K, S 등은 산성의 pH를 갖는 세포 내에서 작용하며 카텝신 G는 중성 pH를 보이는 세포 밖에서 작용하는 효소로 언급되고 있다(Arthritis Research Campaign 1998). 카텝신 G는 분자량이 약 30 kDa을 보이며 기질로는 콜라겐과 파이브로넥틴이 보고되고 있고, 자외선에 의해 피부 섬유아세포에서 카텝신 G의 발현이 촉진된다고 보고되었다 (Biochemistry 2002).

한편, 현재 사용되고 있는 대표적인 in vitro 항노화 물질개발 스크리닝 방법은 피부세포에 자외선 조사 후 세포에서 메탈로프로티아제의 발현이 촉진되는 양을 억제시키기 위하여 자외선을 조사한 피부세포에 후보 효능물질을 처리하여 메탈로프로티아제의 발현을 억제시키는 방법과 정상적인 상태의 피부섬유아세포에 물질을 처리한 후 콜라겐 생성을 증가시키는 물질을 찾는 방법을 사용하고 있다. 그러나 우리 피부에서는 자외선과 같은 직접적인 작용 외에도 다른 염증성 인자들과 같 은 다양한 인자들에 의해서도 메탈로프로티아제의 발현과 활성증가가 나타난다.

본 발명은 피부 부착단백질인 파이브로넥틴의 분해산물들이 피부세포에서 메탈로프로티아제의 발현을 촉진시키는 것과 부착단백질의 분해효소로 카텝신 G가 관여하는 것을 발견하게 되었고, 카텝신 G 억제 스크리닝을 통해 항노화용 물질인 카텝신 G 발현 억제제가 카텝신 G의 억제 효과와 피부부착 단백질인의 분해를 막아 피부세포에서 메탈로프로티아제의 생성을 억제하는 것을 발견하였다.

따라서 카텝신 G 억제제를 함유하는 외용제를 사용할 경우, 자연노화와 광노화에 의해 발생하는 피부부착 단백질의 분해를 막고 메탈로프로티아제의 생성을 줄일 뿐만 아니라 활성도 억제할 수 있어 기존의 항노화 물질보다 더욱 강한 항노화 물질개발을 할 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 인체에 무해하며 효과적으로 카텝신 G 발현을 억제할 수 있는 조성물을 제공하는 것이다.

또한 본 발명의 목적은 갈근추출물 또는 루테올린을 유효성분으로 포함하는 카텝신 G 발현 억제제 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명은 피부 부착단백질의 분해 산물들이 피부세포에서 콜라겐 분해 효소인 메탈로프로티아제의 발현을 증가시킨다는 사실로부 터 부착단백질의 분해를 억제함으로써 메탈로프로티아제의 발현을 막을 수 있는 카텝신 G 억제제에 관한 것으로, 구체적으로는 갈근추출물 또는 루테올린을 유효성분으로 포함하여 피부세포의 부착력 증가 및 부착 단백질의 분해억제를 통해 메탈로프로티아제의 발현과 활성을 막는 조성물을 제공하는 것이다.

즉, 본 발명은 카텝신 G 발현 억제제 조성물을 제공하는 것으로, 구체적으로는 카텝신 G 발현 억제제로서 갈근추출물 또는 루테올린을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하며, 갈근추출물 또는 루테올린이 부착단백질의 분해 억제를 통해 메탈로프로티아제의 발현을 막을 수 있는 카텝신 G를 억제하는 조성물에 관한 것이다.

이때, 본 발명에서 사용되는 기술 용어 및 과학용어에 있어서 다른 정의가 없다면, 이 발명이 속하는 통상의 지식을 가진 자가 통상적으로 이해하고 있는 의미를 가진다. 또한, 종래와 동일한 기술적 구성 및 작용에 대한 반복되는 설명은 생략하기로 한다.

이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.

본 발명자들은 카텝신 G 발현을 효과적으로 억제할 수 있는 방안을 연구하던 중 갈근추출물 또는 루테올린이 카텝신 G 발현을 억제하는 효능이 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다. 즉, 본 발명은 갈근추출물 또는 청피추출물 유래화합물인 루테올린을 포함하는 카텝신 G 발현 억제제를 제공한다.

본 발명에 따른 카텝신 G 발현을 억제하는 조성물은 약제, 화장료, 식품첨가제 등으로 사용할 수 있으며, 특히 약제학적 조성물로서 적용이 가능하며, 경구 또 는 비경구로 사용할 수 있으며, 비경구는 직장내, 국소, 정맥내, 복강재, 근육내, 동맥내, 경피, 비측내, 흡임, 안구내 또는 피내경로를 통한 통상적인 투여방식 또는 도포방법이다. 약제의 제형은 주사용 형태(용액, 현탁액 또는 유탁액)나 정제, 캅셀제, 연질캅셀제, 수액제, 과립제, 환제 등의 경구용일 수 있다. 본 발명의 갈근추출물 또는 루테올린을 약제로 제조할 경우 당해 기술분야에서 알려진 적합한 제제[Remington's Pharmaceutical Science (최근판), Mack Publishing Company, Easton PA를 사용하는 것이 바람직하다. 또한 투여량은 특정 환자에 대한 구체적인 치료적 유효량 정도는 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 경우에 따라 다른 제제가 사용되는지의 여부를 비롯한 구체적 조성물과 함께 사용되거나 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자와 의약 분야에 잘 알려진 유사 인자에 따라 적절하게 조절하여 사용하는 것이 바람직하다.

또한 본 발명에 따른 조성물은 그 제형을 한정되지 않으나 피부외용제가 바람직하다.

본 발명에서 피부외용제 조성물이란 일반적으로 두피를 포함하는 피부에 적용되는 조성물 전부를 의미하고, 의약품, 의약부외품, 화장료, 입욕제, 양모료(養毛料), 스칼프 토닉 등을 포함하는 것이다.

본 발명에 따른 카텝신 G 발현 억제제는 갈근추출물 또는 루테올린에서 선택된 것으로, 전제 조성물 중 건조중량으로 0.0001 내지 5 중량%로 함유되는 것이 바람직하다. 함량이 0.0001 중량％ 미만일 경우에는 효과가 미미하고, 함량이 5중량％ 초과가 될 경우에는 함량 증가에 비해 효과의 증가가 크지 않기 때문이다.

본 발명에 따른 갈근추출물은 갈근으로부터 추출되는 것으로, 갈근(葛根, Pueraria lobata)은 칡(Pueraria lobata(wild.) Ohwi)의 뿌리이며, 루테올린(luteoin)은 청피에서 다량으로 얻을 수 있다.

이들의 추출방법은 통상의 해당분야에서 사용하는 방법에 의해 추출이 가능하므로 제한되지는 않으나 보다 바람직하게는, 유기용매를 이용한 추출방법을 사용하는 것이 수율이 좋다.

구체적으로 설명하면, 갈근 또는 청피를 헥산 또는 이와 유사한 유기용매(에테르, 석유 에테르 등)를 이용하여 오일 성분을 제거한다. 그리고 오일이 제거된 잔류물들을 물 또는 유기용매(에탄올, 메탄올, 부탄올, 에틸아세테이트, 크로로포름 등) 또는 물과 유기용매의 혼합용매로 추출하고, 이 추출물을 여과, 농축하여 1차 추출물을 얻는다. 이때 물과 유기용매의 혼합비율은 통상의 당업자에게 알려진 것이므로 구체적으로 기재하지 않는다.

먼저 갈근추출물의 추출방법에 대하여 설명하면, 유기용매를 이용하여 오일성분을 제거시킨 1차 추출물을 물 또는 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트, 크로로포름에서 선택되는 어느 하나 이상의 유기용매 또는 물과 상기 유기용매의 혼합용매를 이용하여 통상의 방법으로 환류추출하고 진공여과하여 건조분말로 제조한다.

다음으로 청피추출물에 대하여 설명하면, 유기용매를 이용하여 오일 성분을 제거시킨 1차 추출물을 물 또는 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트, 크로로포름에서 선택되는 어느 하나 이상의 유기용매 또는 물과 상기 유기용매의 혼합용매를 이용하여 통상의 방법으로 환류추출하고 진공여과하여 건조분말로 제조한다. 이렇게 제조된 건조분말을 산, 알칼리 가수분해 또는 효소를 이용하여 가수분해하는 방법으로 가수분해물을 제조한 후, 클로포름과 메탄올의 농도구배를 이용한 실리카겔 크로마토그래피를 이용하여 루테올린(Luteolin)을 제조한다.

이때 사용하는 효소는 당결합을 분해하는 β-glucosidase, α,β-arabinosidase, α,β-rhamosidase 등 엑소 당결합분해효소 및 이들을 함유하고 있는 복합효소제를 사용한다.

본 발명의 조성물을 피부외용제로 사용하는 경우, 그 제형에 있어서 특별히 한정되지 않으며, 예를 들면, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 에센스, 마사지크림, 아이크림, 팩, 바디로션, 바디크림, 바디오일 또는 바디에센스의 화장료의 제형 및 로션, 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제의 경피투여용 제형일 수 있다.

또, 본 발명의 피부외용제에는 상기 이외에 타르계 색소, 디메틸폴리실록산, 메틸페닐폴리실록산, 고리상 실리콘 등의 실리콘오일, 루테인, 아스타크산틴, 푸코크산틴 등의 카로티노이드계 색소, 산화철 등의 착색 안료, 파라벤, 페녹시에탄올 등의 방부제, 파라핀, 바세린 등의 탄화수소류, 올리브 스쿠알렌, 쌀 스쿠알렌, 쌀 배아오일, 호호바오일, 피마자유, 홍화유, 올리브오일, 마카다미아너트오일, 해바라기유 등의 식물유, 밀랍, 목랍, 카르나바납 등의 납류, 밀리스트산옥틸도데실, 팔미트산세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 밀리스트산이소프로필 등의 에스테르오일, 에탄올 등의 저급 알콜류, 세탄올, 베헤닐알콜, 스테아릴알콜, 장쇄 분지 지 방족 알콜 등의 고급 알콜류, 콜레스테롤, 피토스테롤, 분지 지방산콜레스테롤에스테르, 마카다미아너트 지방산피토스테릴에스테르 등의 스테롤류 및 유도체, 경화오일 등의 가공오일류, 스테아르산, 밀리스트산, 이소스테아르산, 올레산, 이소형 장쇄 지방산, 안테이소형 장쇄 지방산등의 고급 지방산, 리모넨, 수소첨가 비사보롤 등의 텔펜류, 트리카프릴, 카프린산글리세릴, 2-에틸헥산산글리세릴, 트리이소형 장쇄 지방산글리세릴, 트리팔미트산글리세릴 등의 트리글리세리드, 세틸황산나트륨, N-스테아로일-L-글루타민산염 등의 음이온 계면활성제, 폴리옥시에틸렌 알킬에테르, 폴리옥시에틸렌 지방산에스테르, 폴리옥시에틸렌 다가 알콜 지방산에스테르, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 다가 알콜 지방산에스테르, 폴리옥시에틸렌 편성 실리콘 등의 변성 실리콘, 폴리글리세린 지방산에스테르, 자당 에스테르 등의 비이온 계면활성제, 테트라알킬암모늄염 등의 양이온 계면활성제, 베타인형, 술포베타인형, 술포아미노산형 등의 양성 계면활성제, 레시틴, 리소포스파티딜콜린, 세라미드, 셀레브로시드 등의 천연계 계면활성제, 산화티탄, 산화아연 등의 안료, 디부틸히드록시톨루엔 등의 항산화제, 염화나트륨, 염화마그네슘, 황산나트륨, 질산칼륨, 황산나트륨, 메타규산나트륨, 염화칼슘 등의 무기염류, 시트르산나트륨, 아세트산칼륨, 숙신산나트륨, 아스파라긴산나트륨, 락트산나트륨, 디클로로아세트산, 메발론산, 글리틸리틴산 등의 유기산 및 그 염, 염산에탄올아민, 질산암모늄, 염산아르기닌, 디이소프로필아민염, 우레아, 데카르복시카르노신 등의 유기 아민류 및 그 염, 에디트산 등의 킬레이트제, 크산탄검, 카르복시비닐폴리머, 카라기닌, 펙틴, 알킬 변성 카르복시비닐폴리머, 한천 등의 증점제, 수산화칼륨, 디이소프로판올아 민, 트리에탄올아민 등의 중화제, 히드록시메톡시벤조페논술폰산염 등의 자외선 흡수제, 디프로필렌글리콜, 말티톨, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 프로필렌글리콜, 소르비톨, 디글리세린, 라피노오스 등의 다가 알콜, 각종 아미노산, 아스코르브산, 비오틴, 토코페롤 등의 비타민류 및 아스코르브산황산에스테르염, 아스코르브산인산에스테르염, 니코틴산토코페롤 등의 비타민 유도체 등을 본 발명의 목적을 달성하는 범위 내에서 적절하게 배합할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 조성물은 상기한 카텝신 G 억제제 외에 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유하는 것도 무방하다.

이하, 시험예 및 실시예를 들어 본 발명의 구성 및 작용효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 본 발명이 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.

[실시예 1]

갈근 추출물 제조

헥산 3L에 분쇄된 갈근 500g을 넣고 상온에서 3시간 추출하여 오일 성분이 포함된 유기용매 층을 분리하여 제거하였다. 위 공정을 3회 이상 반복하여 오일이 완전히 제거된 갈근 1차 추출물 470g을 얻었다.

오일이 제거된 1차 추출물 470g을 70% 에탄올 3L에 넣고, 환류 추출(80℃, 3시간)한 후, 15℃에서 하루 동안 방치하여 침적시켰다. 위 공정을 3회 반복하여 추 출액을 얻으며, 추출액을 여과한 후 그 여과액을 진공 농축기에서 농축하여 건조 고형분 65g을 얻었다.

[실시예 2]

청피 추출물 제조

청피 500g을 실시예 1과 동일한 방법으로 제조하여 청피추출물 45g을 얻었다.

효소분해방법을 통한 루테올린(luteolin)의 제조

제조된 청피 추출물 5g을 100㎖의 0.1M 초산완충용액(pH 4.5)에 용해시키고, 여기에 효소 2.5g(pectinase 0.5g, naringinase 0.5g, cellulase 0.5g, β-glucuronidase 0.2g, β-galactosidase 0.5g, amyloglucosidase 0.3g ; Sigma社製)을 첨가하여 37℃ 수욕상에서 48시간동안 교반시키면서, 박층크로마토그래피에 의해 주기적으로 확인하여, 기질이 완전히 소실되면 열수 중에서 10분간 가열(90℃)하여 반응을 종료시킨 다음, 반응액을 동량의 에테르로 3회 추출, 여과, 농축하여 효소가수분해물 0.5g을 얻었다. 얻은 효소가수분해물 0.5g을 실리카겔 칼럼크로마토그래피(실리카겔 100g 충진)를 수행하였다. 전개용매로는 크로로포름과 메탄올을 사용하였고 클로로포름과 메탄올의 비를 10:1에서 2:1까지 농도구배를 높여 분획을 얻었고 이들 분획으로부터 루테올린(luteolin) 0.03g을 얻었다.

[시험예 1 및 2]

카텝신 G 저해제 시험

96공 평판배양기에 카텝신 G 효소(Sigma, C-4428), 기질(N-Succinyl-Ala-Ala-PEo-Phe p-nitrroanilide), 실시예 1, 실시예 2 그리고 하기 화학식 1의 양성대조물질(Cathepsin G Inhibitor I, Calbiochem.사) 및 완충용액을 하기 표 1과 같이 혼합하여 전체 볼륨을 200㎕로 만든 후 37℃에서 3시간 반응시킨 후 504 nm 흡광도를 이용해 카텝신 G 효소의 활성이 있는지를 확인하였다. 또한 표 2에서와 같이 카텝신 G 활성을 억제하는 정도를 대조군을 100으로 카텝신 G 효소의 활성이 있다면 기질이 분해되어 노란색의 색깔을 띠게 된다.

이때 카텝신 G 효소와 기질만 넣은 군을 대조군으로 하였다. 그 결과는 대조군을 100으로 하여 비교치를 표 2에 나타내었다.

[화학식 1]

[표 1]

[표 2] Cathepsin G 발현양

(In : Inhibitor, PE : Pueraria lobata Extract, LT : Luteolin)

표 2로부터 양성대조군의 양성대조물질이 1μM에서 보이는 카텝신 G의 활성억제를, 본 발명의 갈근추출물의 경우는 1000ppm에서, 루테올린의 경우에는 100ppm에서 카텝신 G의 활성억제가 있는 것으로 나타났다.

[시험예 3 내지 5]

MMP -1 발현 억제 확인

갈근추출물과 루테올린이 세포수준에서도 작용하는지 확인하기 위하여 피부 섬유아세포에 처리하여 메탈로프로티아제의 발현 정도를 웨스턴 블럿으로 측정하였다. 즉 10%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM(fibroblast Growth Media)배지가 함유된 6공 평판배양기(6well microtiter plate)에 사람의 섬유아세포를 10,000세포/well가 되도록 넣고, 세포가 부착한 후 우태아혈청이 없는 DMEM 배지로 갈아주고 80% 로 자랄 때까지 배양하였다. 그 다음, 카텝신 G(1mU)와 갈근추출물(10ppm) 그리고 루테올린(10ppm)을 각각 처리하고, 2일 후 상징액을 취하여 메탈로프로티나제 양적변화를 표 3에서 비교하였다. 이때 카텝신 G와 시험물질을 모두 처리하지 않은 군을 대조군으로 하였다.

[표 3]Active MMP -1 발현양

표 3으로부터 카텝신 G만을 처리한 군에서는 카텝신 G를 처리하지 않은 군에 비해 메탈로프로티아제의 발현이 증가하는 것으로 나타났으며, 이는 카텝신 G가 피부부착단백질을 분해시켜 분해산물인 메탈로프로티아제를 증가시키기 때문인 것으로 판단된다.

반면, 루테올린과 갈근추출물을 처리한 군에서는 카텝신 G을 함께 처리했음에도 불구하고 메탈로프로티아제의 발현이 카텝신 G만을 처리한 군에 비해 모두 줄 어든 것을 확인할 수 있다.

이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 따른 갈근추출물 또는 루테올린을 유효성분으로 함유하는 카텝신 G 발현 억제제는 효과적으로 파이브로넥틴의 분해를 막고, 피부세포에서 메탈로프로티아제의 생성을 억제시키는 것을 알 수 있었다. 또한 인체에 무해하게 사용할 수 있다.

Claims (5)

1. 루테올린을 유효성분으로 포함하는 카텝신 G발현을 억제하는 노화방지용 화장료 조성물.
2. 제 1항에 있어서,

   상기 루테올린은 전체 조성물 중 건조중량으로 0.0001 ~ 5 중량%로 포함되는 노화방지용 화장료 조성물.
3. 삭제
4. 제 2항에 있어서,

   상기 루테올린은 청피로부터 추출된 건조분말을 산, 알칼리 가수분해 또는 효소를 이용하여 가수분해하는 방법으로 가수분해물을 제조한 후, 클로로포름과 메탄올의 농도구배를 이용한 실리카겔 크로마토그래피를 이용하여 제조하는 것을 특징으로 하는 노화방지용 화장료 조성물.
5. 제 1항, 제 2항 및 제4항에서 선택되는 어느 한 항에 있어서,

   상기 조성물은 피부외용제인 것을 특징으로 하는 노화방지용 화장료 조성물.