KR101325960B1 - OsHCI1 gene from rice for enhancing high temperature stress resistance of plant and uses thereof - Google Patents

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Abstract

본 발명은 벼 유래 OsHCI1 (Oryza sativa Heat Cold Induced 1) 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 식물세포에 형질전환시키는 단계를 포함하는 식물의 고온 스트레스에 대한 내성을 조절하는 방법, 상기 OsHCI1 유전자를 포함하는 재조합 벡터로 식물세포를 형질전환하는 단계를 포함하는 고온 스트레스에 대한 내성이 조절된 형질전환 식물체의 제조 방법, 상기 방법에 의해 제조된 고온 스트레스에 대한 내성이 조절된 형질전환 식물체 및 이의 종자 및 상기 OsHCI1 유전자를 포함하는 식물체의 고온 스트레스 내성 조절용 조성물을 제공한다.The present invention is derived from rice OsHCI1 (Oryza sativa Heat Cold Induced 1) A method of controlling resistance to high temperature stress of a plant, comprising transforming a plant cell with a recombinant vector comprising a gene, the OsHCI1 A method for producing a transformed plant with controlled resistance to high temperature stress, comprising the step of transforming plant cells with a recombinant vector comprising a gene, a transformed plant with controlled resistance to high temperature stress produced by the method and Its seeds and said OsHCI1 It provides a composition for controlling high temperature stress resistance of a plant comprising a gene.

Description

식물의 고온 스트레스 내성을 증가시키는 벼 유래의 OsHCI1 유전자 및 이의 용도{OsHCI1 gene from rice for enhancing high temperature stress resistance of plant and uses thereof}OsHCI1 gene from rice for enhancing high temperature stress resistance of plant and uses approximately}

본 발명은 식물의 고온 스트레스 내성을 증가시키는 벼 유래의 OsHCI1 유전자 및 이의 용도에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 벼 유래 OsHCI1 (Oryza sativa Heat Cold Induced 1) 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 식물세포에 형질전환시키는 단계를 포함하는 식물의 고온 스트레스에 대한 내성을 조절하는 방법, 상기 OsHCI1 유전자를 포함하는 재조합 벡터로 식물세포를 형질전환하는 단계를 포함하는 고온 스트레스에 대한 내성이 조절된 형질전환 식물체의 제조 방법, 상기 방법에 의해 제조된 고온 스트레스에 대한 내성이 조절된 형질전환 식물체 및 이의 종자 및 상기 OsHCI1 유전자를 포함하는 식물체의 고온 스트레스 내성 조절용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to OsHCI1 gene derived from rice and its use to increase the high temperature stress resistance of plants, and more particularly, to OsHCI1 derived from rice (Oryza sativa Heat Cold Induced 1) A method of controlling resistance to high temperature stress of a plant, comprising transforming a plant cell with a recombinant vector comprising a gene, the OsHCI1 A method for producing a transformed plant with controlled resistance to high temperature stress, comprising the step of transforming plant cells with a recombinant vector comprising a gene, a transformed plant with controlled resistance to high temperature stress produced by the method and Its seeds and said OsHCI1 It relates to a composition for controlling high temperature stress resistance of a plant comprising a gene.

천연 및 농업 조건 하에서, 식물은 끊임없이 스트레스를 견뎌내야 한다. 어떤 환경 인자(예를 들면 고온 또는 저온)는 매우 단시간 내에 많은 스트레스를 줄 수 있고, 또 다른 스트레스(예를 들면, 토양수 함유량 또는 미네랄 영양분)는 식물에 스트레스를 주는데 장시간이 소요될 수 있다. 일반적으로, 식물에 영향을 주는 환경 스트레스는 기후 관련 스트레스, 공기오염 스트레스, 화학적 스트레스 및 영양적 스트레스의 형태가 있을 수 있다. 기후 관련 스트레스의 예로는 가뭄, 홍수, 서리, 저온, 고온, 과도한 빛 및 불충분한 빛을 들 수 있다. 공기오염 스트레스는 이산화탄소, 일산화탄소, 이산화황, NOx, 탄화수소, 오존, 자외선 및 산성비의 형태일 수 있다. 화학적 스트레스는 살충제, 살균제, 제초제 및 중금속의 살포로부터 초래될 수 있다. 영양적 스트레스는 비료, 미량 영양소(micronutrient) 및 다량 영양소(macromutrient)에 의하여 초래될 수 있다.Under natural and agricultural conditions, plants must constantly withstand stress. Some environmental factors (eg, hot or cold) can be very stressful in a very short time, while others (eg soil water content or mineral nutrients) can take a long time to stress plants. In general, environmental stresses affecting plants can be in the form of climate-related stress, air pollution stress, chemical stress and nutritional stress. Examples of climate-related stresses include drought, floods, frost, low temperatures, high temperatures, excessive light and insufficient light. Air pollution stress can be in the form of carbon dioxide, carbon monoxide, sulfur dioxide, NOx, hydrocarbons, ozone, ultraviolet light and acid rain. Chemical stress can result from the application of pesticides, fungicides, herbicides and heavy metals. Nutritional stress can be caused by fertilizers, micronutrients and macromutrients.

정상적으로 성장하기에는 너무 낮고 얼 정도까지는 낮지 않은 온도에서 감수성 종들은 냉해(冷害)를 입는다. 이러한 손상은 통상적으로 열대지방 또는 아열대지방 기원의 종들에게서 발생한다. 냉각되는 경우, 잎에서 탈색 현상 또는 병반 현상이 나타나게 되고, 이는 이들 잎에 수침지(water-soaked) 외관을 부여한다. 뿌리가 냉각되면, 식물이 시들 수 있다. 반면, 동결 온도 및 이에 수반되는 식물체 내에서의 얼음 결정의 형성은 얼음 결정이 원형질체로 확장되거나 장시간 동안 유지되는 경우 치명적일 수 있다.Susceptible species suffer cold damage at temperatures that are too low to grow normally and not too low to freeze. Such damage typically occurs in species of tropical or subtropical origin. When cooled, decolorization or lesions appear on the leaves, which give these leaves a water-soaked appearance. When the roots cool down, the plants can wither. On the other hand, freezing temperatures and subsequent formation of ice crystals in plants can be fatal if the ice crystals expand to protoplasts or are maintained for a long time.

스트레스는 또한 그 이외의 과도한 온도에 의해서도 초래될 수 있으며, 거의 모든 식물은 고온에서 생존할 수 없다. 고등 식물의 세포 또는 조직이 탈수되거나 성장하지 않은 경우, 이들 세포는 수화 세포, 영양 세포 및 성장 중의 세포들보다는 고온에서 잘 생존할 수 있다. 활발하게 성장하고 있는 조직은 45℃를 넘는 온도에서는 거의 생존이 불가능하다.Stress can also be caused by other excessive temperatures, and almost all plants cannot survive at high temperatures. If the cells or tissues of the higher plant are not dehydrated or grown, these cells can survive better at higher temperatures than hydrated cells, feeder cells, and cells during growth. Actively growing tissues are rarely viable at temperatures above 45 ° C.

한편, 한국등록특허 제0742193호에서는 보리로부터 신규한 환경 스트레스 저항성 전사인자를 분리하고 상기 전사인자를 식물체에 도입하여 환경 스트레스 저항성 식물체를 제조한 내용이 기재되어 있고, 한국등록특허 제0742194호에서는 애기장대 유래의 환경 스트레스 저항성 조절 유전자인 AIA 유전자를 포함하는 벡터를 식물체에 도입하여 과발현시킴으로써 식물체의 환경 스트레스 저항성을 증가시키는 방법이 기재되어 있다. 그러나, 본 발명에서와 같이 식물의 고온 스트레스 내성을 증가시키는 벼 유래의 OsHCI1 유전자 및 이의 용도에 관해서는 밝혀진 바가 없다.Meanwhile, Korean Patent No. 0742193 describes the production of an environmental stress resistant plant by separating a novel environmental stress resistant transcription factor from barley and introducing the transcription factor into a plant, and in Korean Patent Registration No. 0742194 A method of increasing the environmental stress resistance of a plant by introducing a vector containing the AIA gene, which is a rod-derived environmental stress resistance regulatory gene, into the plant is overexpressed. However, as described in the present invention, the OsHCI1 gene derived from rice and its use for increasing the high temperature stress resistance of plants have not been found.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자는 고온 스트레스 조건에서 벼 식물체의 OsHCI1 유전자 발현이 증가하는 것을 확인하였고, OsHCI1 유전자를 과발현시킨 형질전환 애기장대 식물체가 고온 스트레스 내성을 나타내는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.The present invention was derived from the above requirements, the present inventors confirmed that OsHCI1 gene expression of rice plants increased under high temperature stress conditions, transgenic Arabidopsis plants overexpressing the OsHCI1 gene show high temperature stress resistance By confirming, the present invention was completed.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 벼 유래 OsHCI1 (Oryza sativa Heat Cold Induced 1) 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 식물세포에 형질전환시키는 단계를 포함하는 식물의 고온 스트레스에 대한 내성을 조절하는 방법을 제공한다.In order to solve the above problems, the present invention is rice-derived OsHCI1 (Oryza sativa Heat Cold Induced 1) Provides a method for controlling the resistance of plants to high temperature stress, comprising the step of transforming a plant cell with a recombinant vector comprising a gene.

또한, 본 발명은 상기 OsHCI1 유전자를 포함하는 재조합 벡터로 식물세포를 형질전환하는 단계를 포함하는 고온 스트레스에 대한 내성이 조절된 형질전환 식물체의 제조 방법을 제공한다.In addition, the present invention is OsHCI1 Provided is a method for producing a transgenic plant having controlled resistance to high temperature stress, comprising transforming plant cells with a recombinant vector comprising a gene.

또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 고온 스트레스에 대한 내성이 조절된 형질전환 식물체 및 이의 종자를 제공한다.In addition, the present invention provides a transgenic plant and its seed whose controlled resistance to high temperature stress produced by the method.

또한, 본 발명은 상기 OsHCI1 유전자를 포함하는 식물체의 고온 스트레스 내성 조절용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention is OsHCI1 It provides a composition for controlling high temperature stress resistance of a plant comprising a gene.

본 발명에 따른 벼 유래 OsHCI1 유전자는 고온 스트레스 조건하에 강하게 발현이 유도되고 OsHCI1 유전자를 과발현시킨 형질전환 애기장대 식물체가 고온 스트레스 내성을 나타내는 것을 나타내었다. 따라서 고온 스트레스에 대해 저항성이 강한 형질전환 식물체의 개발을 위해 OsHCI1 유전자는 유용할 것으로 기대된다.Rice-derived OsHCI1 according to the present invention Genes were strongly induced under high temperature stress conditions and transgenic Arabidopsis plants overexpressing the OsHCI1 gene showed high temperature stress resistance. Therefore, the OsHCI1 gene is expected to be useful for the development of transgenic plants resistant to high temperature stress.

도 1은 비생물적 스트레스 및 식물 호르몬 처리시 OsHCI1 유전자 및 이와 관련된 유전자들의 발현 패턴을 나타낸다. OsSalT , OsbZIP23 , OsLIP19 Hsp90 -1은 비생물적 스트레스 처리에 대한 마커 유전자로 사용되었고, OsSalT , OsPBZ1 , OsPR1b OsERF3은 각 식물 호르몬 처리에 대한 마커 유전자로 사용되었다. C 및 T는 각각 대조군 및 스트레스 처리된 시료를 나타낸다.
도 2는 OsHCI1 단백질의 세포내 위치를 확인한 결과이다.
도 3은 OsHCI1 단백질과 상호결합하는 기질 단백질 분석을 위한 이스트 투-하이브리드 스크리닝(yeast two-hybrid screening) 결과를 나타낸다.
도 4는 OsHCI1 단백질과 상호결합하는 6개 기질 단백질을 나타낸다.
도 5는 고온 및 저온 스트레스 조건에서 벼의 OsHCI1과 상호작용하는 단백질 코딩 유전자의 발현 패턴을 나타낸다. C 및 T는 각각 대조군 및 스트레스 처리된 시료를 나타낸다.
도 6은 벼의 OsHCI1과 상호작용하는 OsPSA7, OsPGLU1, OsbHLH065, OsGRP1, OsPOX1 및 Os14-3-3인 6개 단백질의 세포내 위치를 나타낸다.
도 7은 고온 스트레스 조건에서 벼의 OsHCI1과 상호작용하는 OsPSA7, OsPGLU1, OsbHLH065, OsGRP1, OsPOX1 및 Os14-3-3인 6개 기질 단백질의 BiFC 분석을 나타낸다.
도 8은 OsHCI1가 E3 유비퀴틴 리가아제 기능이 있고, 시험관 내에서 OsPGLU1, OsbHLH065, OsGRP1 및 OsPOX1 단백질과 유비퀴틴화를 매개하는 것을 나타낸다.
도 9는 OsHCI1가 핵-세포질 트래픽킹(nuclear-cytoplasmic trafficking)을 매개하는 것을 나타낸다.
도 10은 35S::OsHCI1-EYFP의 고온 내성 표현형을 나타낸다. 35S::EYFP(EV) 및 35S::OsHCI1-EYFP T3 형질전환 식물체(3개의 독립된 라인)의 유식물체는 7일 동안 광 조건의 아가 플레이트에서 재배하였고, 38℃, 90분 가열하고, 24℃, 2시간 냉각한 다음, 45℃, 3시간 동안 가열(acquired thermotoleracne) 또는 45℃, 60분 동안 가열(basal thermotolerance)하였다. A, 7개의 독립적인 Col-0/35S::OsOSHCI1 T3 형질전환 식물체, 대조군인 야생형(WT) 및 빈 벡터(EV)의 RT-PCR 분석; B, 빈 벡터(EV) 및 세개의 독립적인 OsHCI1 과발현 식물체의 표현형은 다양한 온도의 고온 스트레스로 처리되었다. 이미지는 열 스트레스 처리 후 5일째 촬영한 것이다.; C, 같은 플레이트에서 빈 벡터(EV)에 대해 상대적인 식물체 생존율을 열 스트레스 처리 후 5일째 측정한 것이다.
1 shows OsHCI1 upon abiotic stress and plant hormone treatment Expression patterns of genes and genes related thereto are shown. OsSalT , OsbZIP23 , OsLIP19 And Hsp90 -1 was used as marker genes for abiotic stress treatment, OsSalT , OsPBZ1 , OsPR1b and OsERF3 was used as a marker gene for each plant hormone treatment. C and T represent control and stressed samples, respectively.
2 shows the results of confirming the intracellular location of the OsHCI1 protein.
Figure 3 shows the yeast two-hybrid screening results for the analysis of matrix proteins that interact with OsHCI1 protein.
4 shows six substrate proteins that interact with OsHCI1 protein.
5 shows expression patterns of protein coding genes that interact with OsHCI1 in rice under high and low temperature stress conditions. C and T represent control and stressed samples, respectively.
6 shows the intracellular locations of six proteins, OsPSA7, OsPGLU1, OsbHLH065, OsGRP1, OsPOX1 and Os14-3-3, which interact with OsHCI1 in rice.
7 shows BiFC analysis of six substrate proteins, OsPSA7, OsPGLU1, OsbHLH065, OsGRP1, OsPOX1 and Os14-3-3, which interact with OsHCI1 in rice under high temperature stress conditions.
8 shows that OsHCI1 has E3 ubiquitin ligase function and mediates ubiquitination with OsPGLU1, OsbHLH065, OsGRP1 and OsPOX1 proteins in vitro.
9 shows that OsHCI1 mediates nuclear-cytoplasmic trafficking.
10 shows the high temperature resistant phenotype of 35S :: OsHCI1-EYFP. Seedlings of 35S :: EYFP (EV) and 35S :: OsHCI1-EYFP T 3 transgenic plants (3 independent lines) were grown on agar plates in light conditions for 7 days, heated at 38 ° C., 90 min, 24 After cooling for 2 hours at 45 ° C., it was heated for 3 hours (acquired thermotoleracne) or at 45 ° C. for 60 minutes (basal thermotolerance). A, 7 independent Col-0 / 35S :: OsOSHCI1 T 3 RT-PCR analysis of transgenic plants, control wild type (WT) and empty vector (EV); Phenotypes of B, empty vector (EV) and three independent OsHCI1 overexpressing plants were treated with high temperature stress at various temperatures. Image was taken 5 days after heat stress treatment; C, Plant survival relative to empty vector (EV) in the same plate was measured on day 5 after heat stress treatment.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 벼 유래 OsHCI1 (Oryza sativa Heat Cold Induced 1) 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 식물세포에 형질전환시키는 단계를 포함하는 식물의 고온 스트레스에 대한 내성을 조절하는 방법을 제공한다. In order to achieve the object of the present invention, the present invention is a rice-derived OsHCI1 (Oryza sativa Heat Cold Induced 1) Provides a method for controlling the resistance of plants to high temperature stress, comprising the step of transforming a plant cell with a recombinant vector comprising a gene.

본 발명의 일 구현 예에 따른 방법은 벼 유래 OsHCI1 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 식물세포에 형질전환시켜 OsHCI1 유전자를 과발현시킴으로써 식물의 고온 스트레스에 대한 내성을 증가시키는 것을 특징으로 하나, 이에 제한되지 않는다.Method according to an embodiment of the present invention is rice-derived OsHCI1 Recombinant vector containing genes were transformed into plant cells and OsHCI1 It is characterized by increasing the plant's resistance to high temperature stress by overexpressing the gene, but not limited thereto.

본 발명의 일 구현 예에 따른 방법에서, 상기 고온은 40℃ 이상, 바람직하게는 40~50℃, 더욱 바람직하게는 45℃일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In the method according to an embodiment of the present invention, the high temperature may be 40 ° C. or higher, preferably 40-50 ° C., more preferably 45 ° C., but is not limited thereto.

본 발명의 일 구현 예에 따른 방법에서, 상기 OsHCI1 유전자는 바람직하게는 서열번호 1의 염기서열로 이루어질 수 있다. 또한, 상기 염기 서열의 변이체가 본 발명의 범위 내에 포함된다. 구체적으로, 상기 유전자는 서열번호 1의 염기 서열과 각각 70% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 염기 서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드에 대한 "서열 상동성의 %"는 두 개의 최적으로 배열된 서열과 비교 영역을 비교함으로써 확인되며, 비교 영역에서의 폴리뉴클레오티드 서열의 일부는 두 서열의 최적 배열에 대한 참고 서열(추가 또는 삭제를 포함하지 않음)에 비해 추가 또는 삭제(즉, 갭)를 포함할 수 있다.In the method according to an embodiment of the present invention, the OsHCI1 gene may be preferably composed of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1. In addition, variants of the above nucleotide sequences are included within the scope of the present invention. Specifically, the gene has a base sequence having a sequence homology of at least 70%, more preferably at least 80%, even more preferably at least 90%, most preferably at least 95% with the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1, respectively. It may include. "% Of sequence homology to polynucleotides" is ascertained by comparing the comparison region with two optimally aligned sequences, and a portion of the polynucleotide sequence in the comparison region is the reference sequence for the optimal alignment of the two sequences (I. E., A gap) relative to the < / RTI >

용어 "재조합"은 세포가 이종의 핵산을 복제하거나, 상기 핵산을 발현하거나 또는 펩티드, 이종의 펩티드 또는 이종의 핵산에 의해 암호된 단백질을 발현하는 세포를 지칭하는 것이다. 재조합 세포는 상기 세포의 천연 형태에서는 발견되지 않는 유전자 또는 유전자 절편을, 센스 또는 안티센스 형태 중 하나로 발현할 수 있다. 또한 재조합 세포는 천연 상태의 세포에서 발견되는 유전자를 발현할 수 있으며, 그러나 상기 유전자는 변형된 것으로서 인위적인 수단에 의해 세포 내 재도입된 것이다.The term "recombinant" refers to a cell in which a cell replicates a heterologous nucleic acid, expresses the nucleic acid, or expresses a protein encoded by a peptide, heterologous peptide or heterologous nucleic acid. The recombinant cell can express a gene or a gene fragment that is not found in the natural form of the cell in one of the sense or antisense form. In addition, the recombinant cell can express a gene found in a cell in its natural state, but the gene has been modified and reintroduced intracellularly by an artificial means.

본 발명에서, 상기 OsHCI1 유전자 서열은 재조합 발현 벡터 내로 삽입될 수 있다. 용어 "재조합 발현 벡터"는 세균 플라스미드, 파아지, 효모 플라스미드, 식물 세포 바이러스, 포유동물 세포 바이러스, 또는 다른 벡터를 의미한다. 대체로, 임의의 플라스미드 및 벡터는 숙주 내에서 복제 및 안정화할 수 있다면 사용될 수 있다. 상기 발현 벡터의 중요한 특성은 복제 원점, 프로모터, 마커 유전자 및 번역 조절 요소(translation control element)를 가지는 것이다.In the present invention, the OsHCI1 gene sequence can be inserted into a recombinant expression vector. The term "recombinant expression vector" means a bacterial plasmid, a phage, a yeast plasmid, a plant cell virus, a mammalian cell virus, or other vector. In principle, any plasmid and vector can be used if it can replicate and stabilize within the host. An important characteristic of the expression vector is that it has a replication origin, a promoter, a marker gene and a translation control element.

OsHCI1 유전자 서열 및 적당한 전사/번역 조절 신호를 포함하는 발현 벡터는 당업자에 주지된 방법에 의해 구축될 수 있다. 상기 방법은 시험관내 재조합 DNA 기술, DNA 합성 기술 및 생체 내 재조합 기술 등을 포함한다. 상기 DNA 서열은 mRNA 합성을 이끌기 위해 발현 벡터 내의 적당한 프로모터에 효과적으로 연결될 수 있다. 또한 발현 벡터는 번역 개시 부위로서 리보좀 결합 부위 및 전사 터미네이터를 포함할 수 있다.Expression vectors comprising OsHCI1 gene sequences and appropriate transcriptional / translational control signals can be constructed by methods well known to those of skill in the art. Such methods include in vitro recombinant DNA technology, DNA synthesis techniques, and in vivo recombination techniques. The DNA sequence can be effectively linked to appropriate promoters in the expression vector to drive mRNA synthesis. The expression vector may also include a ribosome binding site and a transcription terminator as a translation initiation site.

본 발명의 재조합 벡터의 바람직한 예는 아그로박테리움 투머파시엔스와 같은 적당한 숙주에 존재할 때 그 자체의 일부, 소위 T-영역을 식물 세포로 전이시킬 수 있는 Ti-플라스미드 벡터이다. 다른 유형의 Ti-플라스미드 벡터 (EP 0 116 718 B1호 참조)는 현재 식물 세포, 또는 잡종 DNA를 식물의 게놈 내에 적당하게 삽입시키는 새로운 식물이 생산될 수 있는 원형질체로 잡종 DNA 서열을 전이시키는데 이용되고 있다. Ti-플라스미드 벡터의 특히 바람직한 형태는 EP 0 120 516 B1호 및 미국 특허 제4,940,838호에 청구된 바와 같은 소위 바이너리(binary) 벡터이다. 본 발명에 따른 DNA를 식물 숙주에 도입시키는데 이용될 수 있는 다른 적합한 벡터는 이중 가닥 식물 바이러스(예를 들면, CaMV) 및 단일 가닥 바이러스, 게미니 바이러스 등으로부터 유래될 수 있는 것과 같은 바이러스 벡터, 예를 들면 비완전성 식물 바이러스 벡터로부터 선택될 수 있다. 그러한 벡터의 사용은 특히 식물 숙주를 적당하게 형질전환하는 것이 어려울 때 유리할 수 있다.A preferred example of the recombinant vector of the present invention is a Ti-plasmid vector capable of transferring a so-called T-region to a plant cell when present in a suitable host, such as Agrobacterium tumefaciens. Other types of Ti-plasmid vectors (see EP 0 116 718 B1) are currently used to transfer hybrid DNA sequences to plant cells or protoplasts in which new plants capable of properly inserting hybrid DNA into the plant's genome can be produced have. A particularly preferred form of the Ti-plasmid vector is a so-called binary vector as claimed in EP 0 120 516 B1 and U.S. Patent No. 4,940,838. Other suitable vectors that can be used to introduce the DNA according to the invention into the plant host include viral vectors such as those that can be derived from double-stranded plant viruses (e. G., CaMV) and single- For example, from non -complete plant virus vectors. The use of such vectors may be particularly advantageous when it is difficult to transform the plant host properly.

발현 벡터는 바람직하게는 하나 이상의 선택성 마커를 포함할 것이다. 상기 마커는 통상적으로 화학적인 방법으로 선택될 수 있는 특성을 갖는 핵산 서열로, 형질전환된 세포를 비형질전환 세포로부터 구별할 수 있는 모든 유전자가 이에 해당된다. 그 예로는 글리포세이트(glyphosate) 또는 포스피노트리신(phosphinothricin)과 같은 제초제 저항성 유전자, 카나마이신(kanamycin), G418, 블레오마이신(Bleomycin), 하이그로마이신(hygromycin), 클로람페니콜(chloramphenicol)과 같은 항생제 내성 유전자, aadA 유전자 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The expression vector will preferably comprise one or more selectable markers. The marker is typically a nucleic acid sequence having a property that can be selected by a chemical method, and includes all genes capable of distinguishing a transformed cell from a non-transformed cell. Examples include herbicide resistance genes such as glyphosate or phosphinothricin, kanamycin, G418, bleomycin, hygromycin, and chloramphenicol. Resistance gene, aadA gene, and the like, but are not limited thereto.

본 발명의 재조합 벡터에서, 프로모터는 CaMV 35S, 액틴, 유비퀴틴, pEMU, MAS, 히스톤 프로모터, Clp 프로모터일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. "프로모터"란 용어는 구조 유전자로부터의 DNA 업스트림의 영역을 의미하며 전사를 개시하기 위하여 RNA 폴리머라아제가 결합하는 DNA 분자를 말한다. "식물 프로모터"는 식물 세포에서 전사를 개시할 수 있는 프로모터이다. "구성적(constitutive) 프로모터"는 대부분의 환경 조건 및 발달 상태 또는 세포 분화하에서 활성이 있는 프로모터이다. 형질전환체의 선택이 각종 단계에서 각종 조직에 의해서 이루어질 수 있기 때문에 구성적 프로모터가 본 발명에서 바람직할 수 있다. 따라서, 구성적 프로모터는 선택 가능성을 제한하지 않는다.In the recombinant vector of the present invention, the promoter may be, but is not limited to, CaMV 35S, actin, ubiquitin, pEMU, MAS, histone promoter, Clp promoter. The term "promoter " refers to the region of DNA upstream from the structural gene and refers to a DNA molecule to which an RNA polymerase binds to initiate transcription. A "plant promoter" is a promoter capable of initiating transcription in plant cells. A "constitutive promoter" is a promoter that is active under most environmental conditions and developmental conditions or cell differentiation. Constructive promoters may be preferred in the present invention because the choice of transformants can be made by various tissues at various stages. Thus, constitutive promoters do not limit selectivity.

본 발명의 재조합 벡터에서, 통상의 터미네이터를 사용할 수 있으며, 그 예로는 노팔린 신타아제(NOS), 벼 α-아밀라아제 RAmy1 A 터미네이터, 파세올린(phaseoline) 터미네이터, 아그로박테리움 투메파시엔스(Agrobacterium tumefaciens)의 옥토파인(Octopine) 유전자의 터미네이터, 대장균의 rrnB1/B2 터미네이터 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 터미네이터의 필요성에 관하여, 그러한 영역이 식물 세포에서의 전사의 확실성 및 효율을 증가시키는 것으로 일반적으로 알려져 있다. 그러므로, 터미네이터의 사용은 본 발명의 내용에서 매우 바람직하다.In the recombinant vectors of the present invention, conventional terminators can be used, for example nopalin synthase (NOS), rice α-amylase RAmy1 A terminator, phaseoline terminator, Agrobacterium tumefaciens ( Agrobacterium tumefaciens) Terminator of the octopine gene, and the rrnB1 / B2 terminator of E. coli, but are not limited thereto. Regarding the need for terminators, it is generally known that such regions increase the certainty and efficiency of transcription in plant cells. Therefore, the use of a terminator is highly desirable in the context of the present invention.

본 발명의 벡터를 숙주세포 내로 운반하는 방법은, 미세주입법, 칼슘포스페이트 침전법, 전기천공법, 리포좀-매개 형질감염법, DEAE-덱스트란 처리법, 및 유전자 밤바드먼트 등에 의해 벡터를 숙주세포 내로 주입할 수 있다.The method of carrying the vector of the present invention into the host cell may be carried out by microinjection, calcium phosphate precipitation, electroporation, liposome-mediated transfection, DEAE-dextran treatment, gene bombardment or the like. Can be injected.

또한, 본 발명은 벼 유래 OsHCI1 유전자를 포함하는 재조합 벡터로 식물세포를 형질전환하는 단계; 및 상기 형질전환된 식물세포로부터 식물을 재분화하는 단계를 포함하는 고온 스트레스에 대한 내성이 조절된 형질전환 식물체의 제조 방법을 제공한다. In addition, the present invention is derived from OsHCI1 rice Transforming the plant cell with a recombinant vector comprising the gene; And it provides a method for producing a transformed plant is controlled resistance to high temperature stress comprising the step of regenerating the plant from the transformed plant cells.

본 발명의 일 구현 예에 따른 방법은 벼 유래 OsHCI1 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 식물세포에 형질전환시켜 OsHCI1 유전자를 과발현시킴으로써 식물의 고온 스트레스에 대한 내성을 증가시키는 것을 특징으로 하나, 이에 제한되지 않는다.Method according to an embodiment of the present invention is rice-derived OsHCI1 Recombinant vector containing genes were transformed into plant cells and OsHCI1 It is characterized by increasing the plant's resistance to high temperature stress by overexpressing the gene, but not limited thereto.

바람직하게는, 상기 OsHCI1 유전자는 서열번호 1의 염기서열로 이루어질 수 있다. Preferably, the OsHCI1 gene may be composed of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1.

본 발명의 방법은 본 발명에 따른 재조합 벡터로 식물 세포를 형질전환하는 단계를 포함하는데, 상기 형질전환은 예를 들면, 아그로박테리움 튜머파시엔스(Agrobacterium tumefiaciens)에 의해 매개될 수 있다. 또한, 본 발명의 방법은 상기 형질전환된 식물 세포로부터 형질전환 식물을 재분화하는 단계를 포함한다. 형질전환 식물 세포로부터 형질전환 식물을 재분화하는 방법은 당업계에 공지된 임의의 방법을 이용할 수 있다.The method of the invention comprises the step of transforming a plant cell with a recombinant vector according to the present invention, the transformant is, for example, Agrobacterium tyumeo Pacific Enschede may be mediated by (Agrobacterium tumefiaciens). In addition, the method of the present invention comprises regenerating a transgenic plant from the transformed plant cell. Any of the methods known in the art can be used for regeneration of transgenic plants from transgenic plant cells.

형질전환된 식물세포는 전식물로 재분화되어야 한다. 캘러스 또는 원형질체 배양으로부터 성숙한 식물의 재분화를 위한 기술은 수많은 여러 가지 종에 대해서 당업계에 주지되어 있다(Handbook of Plant Cell Culture, 1-5권, 1983-1989 Momillan, N.Y.).Transformed plant cells must be regenerated into whole plants. Techniques for the regeneration of mature plants from callus or protoplast cultures are well known in the art for a number of different species (Handbook of Plant Cell Culture, Vol. 1-5, 1983-1989, Momillan, N. Y.).

또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 고온 스트레스에 대한 내성이 조절된 형질전환 식물체 및 이의 종자를 제공한다. In addition, the present invention provides a transgenic plant and its seed whose controlled resistance to high temperature stress produced by the method.

바람직하게는, 상기 형질전환 식물체 및 이의 종자는 고온 스트레스에 대한 내성이 증가된 형질전환 식물체 및 이의 종자이다.Preferably, the transgenic plant and its seeds are transgenic plants and their seeds with increased resistance to high temperature stress.

바람직하게는, 상기 식물체는 쌍자엽 식물체일 수 있고, 더욱 바람직하게는 애기장대, 감자, 가지, 담배, 고추, 토마토, 우엉, 쑥갓, 상추, 도라지, 시금치, 근대, 고구마, 샐러리, 당근, 미나리, 파슬리, 배추, 양배추, 갓무, 수박, 참외, 오이, 호박, 박, 딸기, 대두, 녹두, 강낭콩, 완두 등의 쌍자엽 식물체일 수 있고, 가장 바람직하게는 애기장대 식물체일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.Preferably, the plant may be a dicotyledonous plant, more preferably Arabidopsis, potato, eggplant, tobacco, pepper, tomato, burdock, garland chrysanthemum, lettuce, bellflower, spinach, chard, sweet potato, celery, carrot, buttercup, It may be a dicotyledonous plant, such as parsley, Chinese cabbage, cabbage, cat radish, watermelon, melon, cucumber, pumpkin, gourd, strawberry, soybean, mung bean, kidney bean, pea, and most preferably, it may be a Arabidopsis plant, but is not limited thereto. .

또한, 본 발명은 서열번호 1의 염기서열로 이루어진, 벼 유래 OsHCI1 유전자를 포함하는, 식물체의 고온 스트레스 내성 조절용 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 유효성분으로 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 OsHCI1 유전자를 포함하며, 상기 유전자를 식물체에 형질전환시킴으로써 식물체의 고온 스트레스 내성을 조절할(바람직하게는, 증가시킬) 수 있는 것이다.
In addition, the present invention comprises a rice sequence OsHCI1 consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 It provides a composition for controlling high temperature stress resistance of plants, including genes. The composition is OsHCI1 consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient Genes, which are capable of controlling (preferably increasing) the high temperature stress resistance of the plant by transforming the gene into the plant.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples. However, the following examples are illustrative of the present invention, and the present invention is not limited to the following examples.

실시예Example 1.  One. 비생물적Abiotic 스트레스 및 식물 호르몬 처리시  When processing stress and plant hormones OsHCI1OsHCI1 유전자 발현 패턴Gene expression patterns

RING 핑거 단백질 코딩 유전자들 가운데 고온 스트레스 하에서 mRNA의 증가가 두드러진 Os10g30850(진뱅크 등록번호) 유전자를 선발하여 분자생물학적 분석을 수행하였다. 2주된 벼를 고온 (45℃), 저온 (4℃), 한발, 염해 (250mM NaCl) 처리와 식물 호르몬 엡시스산 (ABA, 0.1mM), 자스몬산 (JA, 0.1mM), 살리실산(SA, 1mM), 에틸렌 (50 uL L-1)을 시간별로 처리하였다. 처리된 식물 잎을 액체 질소를 이용하여 마쇄한 후 Trizol (Invitorogen 사)을 사용하여 총 RNA를 추출하였다. 추출한 총 RNA는 역전사효소(reverse transcriptase)를 이용하여 첫번째 가닥 cDNA를 합성하였으며, OsACTII 유전자를 기준으로 정량하였다. 정량된 cDNA는 각 스트레스 조건에서 유전자의 발현량이 증가하는 마커 유전자를 이용하여 확인한 후, OsHCI1 유전자 특이 프라이머를 사용하여 반정량적 RT-PCR(semi-quantitative RT-PCR)을 수행하였다. 특이적으로 비생물적 스트레스인 고온 (45℃) 및 저온 (4℃)에서 발현이 증가하여 이를 토대로 OsHCI1 (Oryza sativa Heat Cold Induced 1)으로 명명하였다. 4 종의 식물호르몬 처리에서는 12시간까지 증가하였고 그 이후로 점차 감소함을 확인하였다(도 1).
Among the RING finger protein coding genes, molecular biological analysis was performed by selecting Os10g30850 (GenBank Accession No.) gene whose mRNA was prominent under high temperature stress. Two main rice plants were treated with high temperature (45 ℃), low temperature (4 ℃), drought, salt (250mM NaCl) and plant hormone epsis acid (ABA, 0.1mM), jasmonic acid (JA, 0.1mM), salicylic acid (SA, 1mM) ), Ethylene (50 uL L -1 ) was treated hourly. The treated plant leaves were triturated with liquid nitrogen and total RNA was extracted using Trizol (Invitorogen). The total RNA extracted was synthesized the first strand cDNA using reverse transcriptase, and quantified based on the OsACTII gene. Quantified cDNA was confirmed using a marker gene that increases the expression level of the gene under each stress condition, and then OsHCI1 Semi-quantitative RT-PCR was performed using gene specific primers. The expression was increased at high temperatures (45 ° C.) and low temperatures (4 ° C.), specifically abiotic stresses, and was named OsHCI1 (Oryza sativa Heat Cold Induced 1). In the four plant hormone treatments, it increased up to 12 hours and gradually decreased thereafter (FIG. 1).

실시예Example 2.  2. OsHCI1OsHCI1 단백질의  Protein 세포내Intracellular 위치 확인 Location verification

OsHCI1의 세포내 위치를 확인하기 위하여 바이너리 벡터인 pBIN35S::EGFP 벡터에 OsHCI1 유전자를 클로닝하여 아그로박테리움에 형질전환 하였다. 형질전환된 박테리아는 16시간 동안 28℃ 암조건에서 배양한 후 약 1달 된 담배 잎을 사용하여 아그로-인필트레이션(agro-infiltration) 분석을 실시하였다. 3일 후 담배 잎을 0.5cm 크기로 잘라낸 후 공초점 현미경을 이용하여 세포내 위치를 관찰하였다. 그 결과 대조군(도 2A)으로 사용된 35S::EYFP는 핵과 세포질에 형광시그널이 관찰되었으며, 35S::OsHCI1-EGFP의 경우 세포 내에 수많은 점 형태로 세포골격(cytoskeleton)을 따라 빠르게 움직이는 것을 확인하였다(도 2B와 D). 다른 실험 결과들과 비교 했을 때 이러한 형광시그널이 골지체와 유사함을 확인하였고, ABRC(Arabidopsis Biological Resource Center)에서 분양받은 골지 마커 단백질인 35S::G-rk-mCherry와 공동 형질전환(co-transformation)하여 OsHCI1이 세포내의 골지체에 위치하고 있음을 확인하였다(도 2E). 이 단백질의 이동성과 RT-PCR로 확인된 고온 스트레스에서의 특이적인 발현패턴을 기반으로 OsHCI1 단백질을 발현시킨 담배 잎을 45℃에서 1시간 처리하여 형광 시그널을 관찰하였다. 흥미롭게도 세포 전체에 위치하고 있던 시그널들이 열 처리에 의해 핵 주위로 이동하여 발현되는 것을 확인하였다 (도 2C).
In order to confirm the intracellular location of OsHCI1 , the Agrobacterium was transformed by cloning the OsHCI1 gene in the binary vector pBIN35S :: EGFP vector. The transformed bacteria were incubated at 28 ° C. in the dark for 16 hours and subjected to agro-infiltration analysis using tobacco leaves about 1 month old. After 3 days, the tobacco leaves were cut to a size of 0.5 cm, and then intracellular location was observed using a confocal microscope. As a result, the 35S :: EYFP used as a control (FIG. 2A) showed fluorescence signals in the nucleus and cytoplasm, and the 35S :: OsHCI1-EGFP was found to move rapidly along the cytoskeleton in numerous dots in the cell. (Figures 2B and D). When compared with other experimental results, it was confirmed that these fluorescent signals were similar to Golgi, and co-transformation with 35S :: G-rk-mCherry, a Golgi marker protein distributed at the Arabianpsis Biological Resource Center (ABRC) OsHCI1 was located in the Golgi apparatus within the cell) (Fig. 2E). The fluorescence signal was observed by treating the tobacco leaves expressing OsHCI1 protein at 45 ° C. for 1 hour based on the mobility of the protein and the specific expression pattern at high temperature stress confirmed by RT-PCR. Interestingly, it was confirmed that signals located throughout the cells were moved and expressed around the nucleus by heat treatment (FIG. 2C).

실시예Example 3.  3. OsHCI1OsHCI1 단백질과 상호결합하는 기질 단백질 분석 Analysis of Substrate Proteins That Interact with Proteins

OsHCI1과 상호결합하는 기질 단백질을 찾기 위해 Y2H (Yeast Two-Hybrid) 스크린을 실시하였다. OsHCI1 유전자의 총 길이 코딩 서열을 GAL DNA-결합 도메인이 탑재되어 있는 pGBKT7-BD 벡터에 삽입하여 Y2H-Gold 효모 균주에 형질전환하여 베이트(bait)로 사용하였다. 염해 처리한 벼를 이용하여 cDNA를 합성한 후 GAL4 활성 도메인이 탑재된 pGADT7-rec 벡터에 삽입한 후 Y187 효모 균주에 형질전환하여 라이브러리를 제작하였다. 효모 메이팅 방법을 이용하여 30℃에서 24시간 배양하여 DDO/X/A (-Leu-Trp, 40ug/ml, X-α-Gal, 70 ng/ml Aureobasidin A) 배지에 도말하였다. 1차 스크린을 통해 약 280개의 클론들을 얻었으며, QDO/X/A (-Leu-Trp-Ade-His, 40ug/ml, X-α-Gal, 70 ng/ml Aureobasidin A)배지로 옮겨서 2차 스크린을 실시하였다. 최종적으로 24개의 양성 클론들을 확인하였으며 (도 3A), 그 중 강한 X-α-GAL 활성을 보이는 OsPSA7 (Os01g59600, 20S proteasome subunit α7), OsPGLU1 (Os03g53800, Periplasmic beta-glucosidase), OsbHLH065, (Os04g14570, basic/Helix-Loop-Helix transcription factor), OsGRP1 (Os05g02770, Glycin-rich cell wall structural protein), OsPOX1 (Os07g48020 , Peroxidase) 및 Os14-3-3 (14-3-3 protein) 6개의 유전자를 선발하였으며 총 길이 CDS를 RT-PCR을 통하여 얻은 후 pGADT7 벡터에 삽입하였다. pGBKT7-OsHCI1과 pGADT7 벡터에 삽입된 6개의 유전자들을 Y2H Gold 효모 균주에 공동 형질전환하여 얻은 클론들을 DDO 배지와 QDO/X/A 배지에 drop하여 단백질-단백질 상호결합을 확인하였다 (도 4B). 양성 대조군으로는 BD-뮤린 p53와 AD-SV40 라지 T-항원을 사용하였고, 음성 대조군으로는 BD-라민 및 AD-SV40 라지 T-항원을 사용하였다.A Y2H (Yeast Two-Hybrid) screen was performed to find substrate proteins that interact with OsHCI1. The total length coding sequence of OsHCI1 gene was inserted into pGBKT7-BD vector loaded with GAL DNA-binding domain, transformed into Y2H-Gold yeast strain, and used as bait. CDNA was synthesized using brine-treated rice, inserted into a pGADT7-rec vector loaded with a GAL4 active domain, and transformed into a Y187 yeast strain to prepare a library. Cultured for 24 hours at 30 ℃ using a yeast mating method was plated in DDO / X / A (-Leu-Trp, 40ug / ml, X-α-Gal, 70 ng / ml Aureobasidin A) medium. Approximately 280 clones were obtained through the primary screen and transferred to QDO / X / A (-Leu-Trp-Ade-His, 40 ug / ml, X-α-Gal, 70 ng / ml Aureobasidin A) medium. Screen was performed. Finally, 24 positive clones were identified (FIG. 3A), among which OsPSA7 (Os01g59600, 20S proteasome subunit α7) showing strong X-α-GAL activity, OsPGLU1 (Os03g53800, Periplasmic beta-glucosidase), OsbHLH065, (Os04g14570, Six genes were selected: basic / Helix-Loop-Helix transcription factor), OsGRP1 (Os05g02770, Glycin-rich cell wall structural protein), OsPOX1 (Os07g48020, Peroxidase) and Os14-3-3 (14-3-3 protein). Total length CDS was obtained via RT-PCR and then inserted into the pGADT7 vector. Clones obtained by cotransforming the six genes inserted into the pGBKT7-OsHCI1 and pGADT7 vectors into the Y2H Gold yeast strain were dropped into DDO medium and QDO / X / A medium to confirm protein-protein interaction (FIG. 4B). BD-murine p53 and AD-SV40 large T-antigen were used as a positive control, and BD-lamin and AD-SV40 large T-antigen were used as a negative control.

OsHCI1과 상호결합하는 6개의 유전자들이 고온과 저온에서의 어떠한 발현 패턴을 보이는지 확인하기 위해 RT-PCR을 실시하였다. 실험방법은 실시예 1과 동일하며, 6개의 유전자들 중 전사인자를 포함한 4개의 유전자들이 OsHCI1과 정반대의 발현 패턴을 보였다. 또한 6개의 유전자들은 고온 및 저온 스트레스에 모두 같은 발현 양상을 보였다 (도 5). RT-PCR was performed to confirm the expression patterns of the six genes that interact with OsHCI1 at high and low temperatures. Experimental method is the same as in Example 1, four genes including transcription factors of the six genes showed the opposite expression pattern to OsHCI1. In addition, the six genes showed the same expression pattern for both high and low temperature stress (FIG. 5).

OsHCI1과 상호결합하는 6개 유전자들의 세포내 위치를 확인함으로 OsHCI1과의 연관성을 찾기 위해 6개의 유전자들을 pBIN35S::DsRed2에 삽입하여 아그로박테리움에 형질전환 하였다. 담배 잎을 이용하여 아그로-인필트레이션을 하여 공초점 현미경으로 관찰하였다. 실험방법은 실시예 1과 동일하다. OsPGLU1, OsbHLH065 및 OsGRP1-DsRed2의 형광 시그널은 핵에서만 관찰되었고, OsPSA7, OsPOX1 및 Os14-3-3은 세포질 또는 세포질 핵에서 시그널이 관찰되었다(도 6). 이 결과는 고온 스트레스에서 OsHCI1이 핵으로 이동하여 핵에 위치한 적어도 3개의 단백질과 상호결합하여 핵 단백질들의 세포내 위치를 세포질로 이동시키는 기능을 하는 것으로 생각된다.Agrobacterium was transformed by inserting six genes into pBIN35S :: DsRed2 to find the association with OsHCI1 by identifying the intracellular locations of the six genes that interact with OsHCI1. Agro-infiltration using tobacco leaves was observed under confocal microscopy. Experimental method is the same as in Example 1. Fluorescent signals of OsPGLU1, OsbHLH065 and OsGRP1-DsRed2 were observed only in the nucleus, while OsPSA7, OsPOX1 and Os14-3-3 were observed in the cytoplasm or cytoplasmic nucleus (FIG. 6). This result suggests that OsHCI1 migrates to the nucleus at high temperature and interacts with at least three proteins located in the nucleus to transfer the intracellular positions of the nuclear proteins into the cytoplasm.

Y2H를 통해 발굴된 6개의 유전자와 OsHCI1 유전자와의 상호결합을 식물세포 내에서 재확인하기 위해 BiFC (Bimolecular fluorescence complementation) 분석을 실시하였다. OsHCI1 유전자는 35S-HA-SPYCE(M) 벡터에 삽입하고, 6개 유전자들은 35S-c-myc-SPYNE(R)173 벡터에 삽입하여 아그로박테리움에 형질전환 하였다. 각 클론들을 28℃에서 16시간 동안 배양한 후, 6개의 조합으로 동시에 담배 잎에 인필트레이션(infiltration)하였다. 6개의 유전자 모두 YFP 시그널이 강하게 확인되었으며, 흥미롭게도 OsPGLU1-, OsbHLH065- 및 OsGRP1-DsRed2에 단독으로 주입하여 관찰하였을 때에는 핵에서만 시그널이 관찰되었으나, OsHCI1과 동시에 주입한 BiFC 결과는 핵과 세포질에서 동시에 관찰되었다. 이러한 결과는 OsHCI1이 상호결합하는 유전자들의 세포내 위치를 이동시킬 수 있다는 가능성을 보여주었다.
BiFC (Bimolecular fluorescence complementation) analysis was performed to reconfirm the interaction between the six genes identified through Y2H and the OsHCI1 gene in plant cells. OsHCI1 gene was inserted into the 35S-HA-SPYCE (M) vector, and six genes were inserted into the 35S-c-myc-SPYNE (R) 173 vector to transform Agrobacterium. Each clone was incubated at 28 ° C. for 16 hours and then infiltrated into tobacco leaves in six combinations simultaneously. In all six genes, YFP signal was strongly confirmed. Interestingly, only when injected with OsPGLU1-, OsbHLH065- and OsGRP1-DsRed2, the signal was observed in the nucleus, but the BiFC result injected simultaneously with OsHCI1 was observed in the nucleus and cytoplasm. It became. These results demonstrate the possibility that OsHCI1 can shift the intracellular positions of the genes that it interacts with.

실시예Example 4.  4. OsHCI1OsHCI1 of 유비퀴틴화Ubiquitination 분석( analysis( ubiquitinationubiquitination assayassay ))

다음 단계로 OsHCI1이 E3 리가제(ligase) 역할을 수행하는지 확인하기 위해 시험관 내 유비퀴틴화 분석(in vitro ubiquitination assay)을 실시하였다. OsHCI1 유전자의 코딩영역을 PCR로 증폭하여 pMAL-c5X 벡터에 삽입하였다. MBP-OsHCI1과 MBP 벡터를 대장균 BL21 (DE3)에 형질전환하여 아밀로스 레진(amylose resin)을 사용하여 순화하였다. E2로 사용한 atUBC10와 atUBC11은 pET-28a-c(+) 벡터에 삽입하여 대장균에 형질전환 하였으며, Ni-NTA 정제 시스템을 이용하여 순화하였다. 순화된 MBP-OsHCI1 (250ng)와 효모 E1 (50 ng), 애기장대 E2 (250 ng), 10ug 보바인 유비큐틴을 유비큐틴 반응 버퍼 (50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 10 mM MgCl2, 0.05 mM ZnCl2, 1 mM ATP, 0.2 mM DTT, 10 mM phosphocreatine, creatine kinase 0.1 unit)에 넣어주고 시간별로 샘플링하였다. 도 8의 A에서 E1, E2, 유비퀴틴이 모두 함께 반응된 레인에서 유비퀴틴 폴리체인(ubiquitin polychain)이 형성되는 것을 보임으로 OsHCI1 단백질이 E3 리가아제 활성을 갖고 있음을 확인하였다. 또한 반응 시간별로 측정하여 시간에 따라 폴리체인이 형성되는 것을 확인하였다. OsHCI1과 상호결합하는 3개의 핵 단백질들과 1개의 세포질 단백질들을 이용하여 OsHCI1이 이 단백질들을 기질로 사용하는지에 대한 테스트를 하였다 (도 8의 C-F). 4개의 유전자에 His-Trx를 붙여서 대장균에서 발현 후 Ni-NTA 정제 시스템을 이용하여 순화하였다. OsHCI1과 4개의 정제된 상호결합 단백질을 사용하여 OsHCI1이 상호결합하는 단백질을 기질로 사용하여 유비퀴틴화 시키는지 확인하기 위해서 유비퀴틴화 분석을 실시하였다. 3개의 핵 단백질들에 모노 유비퀴틴화를 형성하였으며, 세포질에 위치하는 OsPOX1 단백질에는 폴리유비퀴틴 체인을 형성하는 것을 확인하였다. 이 결과는 핵단백질에 OsHCI1이 모노 유비퀴틴을 부착하여 기질 단백질의 번역 후 변형(post translational modification)을 유도함으로써 핵에 위치한 단백질들의 위치를 세포질로 이동시키는 것으로 생각된다. In the next step, in vitro ubiquitination assay was performed to confirm whether OsHCI1 plays the role of E3 ligase. The coding region of OsHCI1 gene was amplified by PCR and inserted into pMAL-c5X vector. MBP-OsHCI1 and MBP vectors were transformed into E. coli BL21 (DE3) and purified using amylose resin. AtUBC10 and atUBC11 used as E2 were inserted into the pET-28a-c (+) vector and transformed into E. coli, and purified using Ni-NTA purification system. Purified MBP-OsHCI1 (250 ng) and yeast E1 (50 ng), Arabidopsis E2 (250 ng), 10 ug bovine ubicutin were ubiquitin reaction buffer (50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 10 mM MgCl2, 0.05 mM ZnCl2, 1 mM ATP, 0.2 mM DTT, 10 mM phosphocreatine, creatine kinase 0.1 unit) and sampled over time. In FIG. 8A, the ubiquitin polychain was formed in the lane where E1, E2, and ubiquitin were all reacted, confirming that the OsHCI1 protein had E3 ligase activity. In addition, by measuring the reaction time it was confirmed that the poly chain is formed over time. Three nuclear proteins and one cytoplasmic protein that interact with OsHCI1 were used to test whether OsHCI1 used these proteins as substrates (CF in FIG. 8). His-Trx was attached to four genes and expressed in E. coli and purified using a Ni-NTA purification system. The ubiquitination assay was performed to confirm that OsHCI1 and four purified cross-linking proteins were ubiquitized using OsHCI1-interacting protein as a substrate. Mono ubiquitination was formed in three nuclear proteins, and the polyphosphoryl chain was confirmed in the OsPOX1 protein located in the cytoplasm. The results suggest that OsHCI1 attaches mono ubiquitin to nucleoproteins to induce post translational modification of matrix proteins, thereby shifting the position of proteins located in the nucleus to the cytoplasm.

골지체에 위치하고 세포내에서 빠른 이동성을 보이는 OsHCI1 유전자가 이와 상호결합하는 유전자들, 특히 핵에 위치한 단백질들을 세포질로 이동시키는지 확인하기 위해 OsPGLU1, OsbHLH065 및 OsGRP1-DsRed 구조체와 35S::OsHCI1-EYFP를 동시에 담배 세포에 주입하여 형광 시그널을 관찰하였다. 도 9와 같이 단독으로 발현시켰을 때 핵에서만 시그널이 확인된 단백질들(도 6의 B-D)이 세포질과 핵에서 동시에 관찰됨을 확인하였는데, 이는 OsHCI1 단백질이 핵에 위치한 기질 단백질들을 모노 유비퀴틴화시켜 세포질로 이동하게 하는 기능을 수행하고 있음을 확인할 수 있게 하였다.
OsPGLU1, OsbHLH065 and OsGRP1-DsRed constructs and 35S :: OsHCI1-EYFP were used to confirm that OsHCI1 genes located in the Golgi apparatus and fast-moving genes in the cell move genes that interact with them, particularly proteins located in the nucleus, into the cytoplasm. Simultaneously, the cells were injected into tobacco cells to observe the fluorescence signal. When expressed alone, as shown in FIG. 9, the proteins whose signals were identified only in the nucleus (BD of FIG. 6) were observed simultaneously in the cytoplasm and the nucleus. You can see that you are performing the function to move.

실시예Example 5.  5. OsHCI1OsHCI1 과발현 애기장대 식물체의 고온 스트레스 내성 분석 High Temperature Stress Tolerance Analysis of Overexpressed Arabidopsis Plants

이러한 OsHCI1 단백질의 분자세포학적 기능이 실제 식물체의 고온 스트레스에 어떤 영향을 주는지에 대해 확인하기 위해 OsHCI1이 과발현되는 형질전환 애기장대를 제작하였다. 35S::OsHCI1-EYFP 벡터를 아그로박테리움에 형질전환한 뒤, 플로랄 딥(floral dip) 방법을 통해 애기장대에 삽입하였다. 독립적인 7개의 T3 라인에서 발현량을 RT-PCR로 확인하여 가장 발현이 강한 라인을 선발하여 고온 스트레스 저항성 실험을 진행하였다 (도 10의 A). 대조군으로는 EYFP만 단독으로 형질전환된 애기장대를 사용하였다. 고온 스트레스는 basal thermotolerance와 acquired thermotolerance로 나누어 실험을 진행하였으며, 45℃에서 한 시간을 처리한 basal thermotolerance에서의 생존률은 대조군과 비교시에 유의성 있는 차이가 없었다. 하지만 38℃에서 90분 동안 pre-heat 처리를 한 실험에서 대조군과 비교시 55-60% 이상의 높은 저항성을 획득하였음이 확인되었다 (도 10의 B와 C). 결론적으로 벼의 E3 리가제인 OsHCI1 단백질이 핵에 위치하는 단백질들의 위치를 세포질로 이동시킴으로 acquired thermotolerance에 저항성을 수여하는 것으로 판단되며, 이러한 고온 스트레스에 저항성을 수여하는 OsHCI1 유전자를 차후 모델 식물이 아닌 작물에 이용하여 기후변화 대응 작물의 유전육종을 위한 재료로 사용될 수 있을 것이다. In order to confirm how the molecular cytological function of the OsHCI1 protein actually affects the high temperature stress of the plant, a transgenic Arabidopsis is expressed in which OsHCI1 is overexpressed. The 35S :: OsHCI1-EYFP vector was transformed into Agrobacterium and then inserted into the Arabidopsis through a floral dip method. In the seven independent T 3 lines, the expression level was confirmed by RT-PCR, and the line with the strongest expression was selected to carry out the high temperature stress resistance experiment (FIG. 10A). As a control, Arabidopsis transformed with EYFP alone was used. The high temperature stress was divided into basal thermotolerance and acquired thermotolerance. Survival in basal thermotolerance after one hour treatment at 45 ° C was not significantly different from the control group. However, in the experiment pre-heat treatment for 38 minutes at 38 ℃ it was confirmed that obtained a high resistance of 55-60% or more compared to the control (Fig. 10 B and C). In conclusion, the OsHCI1 protein, an rice E3 ligase, is believed to confer resistance to acquired thermotolerance by shifting the proteins located in the nucleus to the cytoplasm, and the OsHCI1 gene, which confers resistance to such high temperature stress, is not a model plant. It could be used as a material for genetic breeding of climate change-response crops.

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Claims (12)

서열번호 1의 염기서열로 이루어진 벼 유래 OsHCI1 (Oryza sativa Heat Cold Induced 1) 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 식물세포에 형질전환시키는 단계를 포함하는 식물의 고온 스트레스에 대한 내성을 조절하는 방법.A method of controlling the resistance of plants to high temperature stress, comprising the step of transforming a plant cell with a recombinant vector comprising a rice-derived OsHCI1 (Oryza sativa Heat Cold Induced 1) gene consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1. 제1항에 있어서, 상기 벼 유래 OsHCI1 유전자를 식물세포에서 과발현시켜 식물의 고온 스트레스에 대한 내성을 증가시키는 것을 특징으로 하는 방법.The method of claim 1, wherein the rice-derived OsHCI1 Overexpressing the gene in plant cells, thereby increasing the plant's resistance to high temperature stress. 삭제delete 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 벼 유래 OsHCI1 (Oryza sativa Heat Cold Induced 1) 유전자를 포함하는 재조합 벡터로 식물세포를 형질전환하는 단계; 및
상기 형질전환된 식물세포로부터 식물을 재분화하는 단계를 포함하는 고온에 대한 내성이 조절된 형질전환 식물체의 제조 방법.
Transforming a plant cell with a recombinant vector comprising a rice-derived OsHCI1 (Oryza sativa Heat Cold Induced 1) gene consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1; And
A method for producing a transgenic plant having controlled resistance to high temperature, comprising the step of regenerating a plant from the transformed plant cell.
제4항에 있어서, 상기 벼 유래 OsHCI1 유전자를 식물세포에서 과발현시켜 고온 스트레스에 대한 내성이 증가된 형질전환 식물체를 제조하는 것을 특징으로 하는 방법.The method according to claim 4, wherein the rice-derived OsHCI1 Overexpressing the gene in plant cells to produce a transgenic plant having increased resistance to high temperature stress. 삭제delete 제4항의 방법에 의해 제조된 고온 스트레스에 대한 내성이 조절된 형질전환 식물체.Transgenic plant with controlled resistance to high temperature stress produced by the method of claim 4. 제7항에 있어서, 상기 식물체는 고온 스트레스에 대한 내성이 증가된 것을 특징으로 하는 식물체.8. The plant of claim 7, wherein the plant has increased resistance to high temperature stress. 제7항에 있어서, 상기 식물체는 쌍자엽 식물인 것을 특징으로 하는 형질전환 식물체. 8. The transgenic plant of claim 7, wherein the plant is a dicotyledonous plant. 제9항에 있어서, 상기 쌍자엽 식물은 애기장대인 것을 특징으로 하는 형질전환 식물체.10. The transgenic plant of claim 9, wherein the dicotyledonous plant is Arabidopsis thaliana. 제7항에 따른 식물체의 종자.Seeds of plants according to claim 7. 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 벼 유래 OsHCI1 (Oryza sativa Heat Cold Induced 1) 유전자를 포함하는, 식물체의 고온 스트레스 내성 조절용 조성물.Rice-derived OsHCI1 consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 (Oryza sativa Heat Cold Induced 1) A composition for controlling high temperature stress resistance of a plant, comprising a gene.
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08266179A (en) * 1995-02-01 1996-10-15 Toyota Motor Corp Environmental stress resistant plant and its production
JP2001320993A (en) 1998-10-02 2001-11-20 Atsushi Iba High temperature resistant plant
WO2004058975A1 (en) 2002-12-25 2004-07-15 Showa Denko K.K. Method of enhancing tolerance to environmental stresses of plant

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08266179A (en) * 1995-02-01 1996-10-15 Toyota Motor Corp Environmental stress resistant plant and its production
JP2001320993A (en) 1998-10-02 2001-11-20 Atsushi Iba High temperature resistant plant
WO2004058975A1 (en) 2002-12-25 2004-07-15 Showa Denko K.K. Method of enhancing tolerance to environmental stresses of plant

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220068335A (en) 2020-11-18 2022-05-26 대한민국(농촌진흥청장) OsERF Gene enhancing heat or drought stress tolerance derived from Oryza sativa and uses thereof
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