KR101314166B1 - 석이버섯 가수분해 효소 추출물 또는 이로로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 항산화 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 석이버섯 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 항산화 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 석이버섯에 효소를 처리함으로써 단백질 또는 당 가수분해 효소 반응을 통한 석이버섯 가수분해 효소 추출물 또는 추출물로부터 분리된 1-디옥시 카스타노스퍼민 또는 6-메틸우라실 계열 화합물을 유효성분으로 함유하는 항산화 조성물에 관한 것이다.

Description

석이버섯 가수분해 효소 추출물 또는 이로로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 항산화 조성물{Antioxidant composition comprising enzymatic extracts of Umbilicaria escuenta and the compounds isolated therefrom}
본 발명은 석이버섯 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 항산화 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 석이버섯에 효소를 처리함으로써 단백질 또는 당 가수분해 효소 반응을 통한 석이버섯 가수분해 효소 추출물 또는 추출물로부터 분리된 1-디옥시 카스타노스퍼민 또는 6-메틸우라실 계열 화합물을 유효성분으로 함유하는 항산화 조성물에 관한 것이다.
산소는 지구상에서 가장 많은 원소로서(53.8%) 건조대기 중의 21%를 차지하고 있으며, 모든 생물체들은 산소를 이용하여 생명 유지에 필요한 에너지를 발생하게 된다. 그러나, 이와 같이 생명 유지에 절대적으로 필요한 산소이지만 안정한 분자상태인 기저삼중항산소(ground state triplet oxygen)가 체내 효소계, 환원대사, 화학약품, 공해물질, 광화학반응 등의 각종 물리적, 화학적, 환경적 요인 등에 의하여 수퍼옥사이드 라디칼(superoxide radical, O2), 하이드록실 라디칼(hydroxyl radical, HO), 과산화수소(hydrogen peroxide, H2O2), 일중항산소(singlet oxygen, HO)와 같은 반응성이 매우 큰 활성산소(active oxygen)로 전환되면 생체에 치명적인 산소 독성을 일으키는 양면성을 지니고 있다. 즉, 이들 활성산소는 세포구성 성분들인 지질, 단백질, 당, DNA 등에 대하여 비선택적, 비가역적인 파괴 작용을 함으로써 노화는 물론 암을 비롯하여 뇌졸중, 파킨슨병 등의 뇌혈관 심장질환, 허혈, 동맥경화, 피부질환, 소화기질환, 염증, 류마티스, 자기면역질환 등의 각종 질병을 일으키는 것으로 알려져 있다(Halliwell B. 1991. Drug antioxidant effects. Drugs 42: 596-605). 또한, 이들 활성산소에 의한 지질과산화 결과 생성되는 지질과산화물을 비롯하여 여러 가지 체내 과산화물도 세포에 대한 산화적 파괴로 인한 각종 기능장애를 야기함으로써 노화와 질병의 원인이 되기도 한다.
한편, 정상적인 세포에서도 대사과정 중 어느 정도의 자유 라디칼(free radical)과 기타 활성산소 및 과산화물이 생성되고 있으나, 생체내에는 이들에 대한 방어기구로서 SOD(superoxide dismutase), 퍼옥시다제(peroxidase), 카탈레이즈(catalase) 등의 항산화효소와 함께 비타민 E, 비타민 C, 글루타티온(glutathione), 유비퀴논(ubiquinone, 코엠자임 Q10), 요산 등과 같은 항산화물질이 존재하여 스스로를 보호하고 있다. 그러나 이와 같은 생체방어기구에 이상이 초래되거나 각종 물리적, 화학적 요인들에 의하여 활성산소의 생성이 생체방어계의 용량을 초과하게 될 경우 산화적 스트레스가 야기된다. 따라서, 이와 같은 자유 라디칼을 소거할 수 있는 화합물 또는 과산화물 생성 억제물질과 같은 항산화제들은 이들 산화물들에 기인하는 노화 및 각종 질환의 억제 또는 치료제로서 기대된다.
항산화제에 대한 연구는 1969년 McCord와 Fridovich가 수퍼옥사이드 라디칼을 소거하는 효소인 SOD를 발견한 것을 계기로 본격적으로 진행되었으며, 최근에는 노화나 성인병 등의 질환이 활성산소의 존재에 의한 것으로 알려져, 활성산소를 조절할 수 있는 항산화제에 관한 연구가 활발히 진행되고 있다. 항산화제로는 효소계인 SOD, 카탈레이즈 외에 BHT(tert-butylhydroxytoluene), BHA(tert-butylhydroxyanisol) 등과 같은 합성 항산화제 및 토코페롤(tocopherol), 아스코르브산(ascorbic acid), 탄닌, 카로테노이드(carotenoids), 플라보노이드(flavonoids) 등과 같은 일부 천연 항산화제가 있으며, 그 외에도 다양한 종류의 항산화제 개발이 이루어지고 있다(Kitahara K., Matsumoto Y., Ueda H.A. and Ueoka R. 1992. Chem. Pharm. Bull. 40: 2208-2209; Hatano T. 1995. Natural Medicines 49: 357-363).
그러나, 이들 항산화제는 독성, 낮은 활성 및 용도의 한계성 등의 여러 가지 문제로 인하여 사용에 제한을 받고 있다.
이에 본 발명자들은 독성 및 부작용이 거의 없는 천연물 유래의 항산화제를 개발하기 위하여 예의 연구한 결과, 석이버섯의 가수분해 효소추출물의 알킬 라디칼 소거 효능을 측정하여 우수한 항산화 효과를 갖는 것을 확인하였으며, 추출물로부터 분리된 1-디옥시 카스타노스퍼민 또는 6-메틸우라실 계열 화합물을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
결국, 본 발명의 주된 목적은 석이버섯에 효소를 처리함으로써, 단백질 또는 당 가수분해 효소 반응을 통해 석이버섯 가수분해 효소 추출물을 제조하는 방법을 제공하는데 있다.
또한, 본 발명은 상기 방법으로 제조된 석이버섯 가수분해 효소 추출물로부터 1-디옥시 카스타노스퍼민 또는 6-메틸우라실 계열 화합물을 분리 정제하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 1-디옥시 카스타노스퍼민 또는 6-메틸우라실 계열 화합물을 유효성분으로 함유하는 활성산소에 의해 생성되는 산화물들에 기인하는 노화 및 각종 질환의 억제 또는 치료에 안전하고 효과적인 조성물을 제공하는데 또 다른 목적이 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 석이버섯에 효소를 처리함으로써 단백질 또는 당 가수분해 효소 반응을 통해 석이버섯 가수분해 효소 추출물을 제조하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 방법으로 제조된 석이버섯 가수분해 효소 추출물로부터 1-디옥시 카스타노스퍼민 또는 6-메틸우라실 계열 화합물을 분리 정제하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 1-디옥시 카스타노스퍼민 또는 6-메틸우라실 계열 화합물을 유효성분으로 함유하는 항산화 조성물을 제공한다.
상기와 같은 본 발명에 따르면, 석이버섯 가수분해 효소 추출물은 자유 라디칼 소거능이 우수하여 탁월한 항산화 효과를 나타내므로, 본 발명의 석이버섯 가수분해 효소 추출물을 포함하는 항산화 조성물은 천연물 유래의 물질로써 독성 및 부작용 없이 장기간 복용 시에도 안전할 뿐만 아니라, 활성산소에 의해 생성되는 산화물들에 기인하는 노화 및 각종 질환의 억제 또는 치료에 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 석이버섯 가수분해 효소 추출물중 알킬라디칼 소거 활성이 뛰어난 프라보자임(Flavourzyme) 가수분해물의 분자량별(5,000이하, 5,000~10,000, 10,000~30,000, 30,000이상)로 분획 후 알킬라디칼 소거 활성을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 석이버섯 단백질 가수분해물(프라보자임)의 분자량 5,000~10,000 해당하는 물질을 분취용 당 컬럼을 사용한 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 분리한 것을 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 석이버섯 단백질 가수분해물(프라보자임)의 분자량 5,000~10,000 해당하는 물질을 분취용 당 컬럼을 사용한 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 분리한 것을 동결건조하여 알킬라디칼 소거 활성을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 석이버섯 단백질 가수분해물(프라보자임)의 분자량 5,000~10,000 해당하는 물질을 분취용 당 컬럼을 사용한 고성능 액체 크로마토그래피로 분리하여 효능이 입증된 분획물을 분석용 당 컬럼을 사용한 고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 분리한 것을 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 석이버섯 단백질 가수분해물(프라보자임)의 분자량 5,000~10,000 해당하는 물질을 분취용 당 컬럼을 사용한 고성능 액체 크로마토그래피로 분리하여 효능이 입증된 분획물을 분석용 당 컬럼을 사용한 고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 분리한 것을 동결건조하여 알킬라디칼 소거 활성을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명의 석이버섯 단백질 가수분해물(프라보자임)의 분자량 5,000~10,000 해당하는 물질을 분취용 당 컬럼을 사용한 고성능 액체 크로마토그래피로 분리하여 효능이 입증된 분획물을 분석용 당 컬럼을 사용한 고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 정제한 물질을 1H NMR을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 본 발명의 석이버섯 단백질 가수분해물(프라보자임)의 분자량 5,000~10,000 해당하는 물질을 분취용 당 컬럼을 사용한 고성능 액체 크로마토그래피로 분리하여 효능이 입증된 분획물을 분석용 당 컬럼을 사용한 고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 정제한 물질을 13C NMR을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 본 발명의 석이버섯 단백질 가수분해물(프라보자임)의 분자량 5,000~10,000 해당하는 물질을 분취용 당 컬럼을 사용한 고성능 액체 크로마토그래피로 분리하여 효능이 입증된 분획물을 분석용 당 컬럼을 사용한 고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 정제한 물질을 ESI-MS를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 석이버섯에 효소를 처리함으로써 단백질 또는 당 가수분해 효소 반응을 통해 석이버섯 가수분해 효소 추출물을 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명의 석이버섯(Umbilicaria escuenta)은 석이과(Umbilicariaceae) 식물인 석이의 전주 자실체이다. 고지대 절벽 바위에 기생하는 버섯으로 바위에 붙어있는 귀와 같다하여 석이라고 명명한다. 한국(강원), 중국, 일본 등지에 분포하며, 장기 복용하면 기력이 좋아지고, 얼굴색이 좋아지며, 면역력을 증강시키는 효과가 있고, 알라닌과 페닐알라닌, 글루타민산과 같은 단백질 구성 요소인 아미노산 성분이 많이 함유되어 있다.
또한, 여러 암에 대한 항암작용도 있고, 오랫동안 설사를 할 때 복용하면 효과가 뛰어나다.
본 발명의 석이버섯 가수분해 효소 추출물은 석이버섯을 완충액에 용해시킨 후, 여기에 효소 또는 효소 혼합물을 첨가하여 교반시키면서 가수분해 반응을 진행시킨 다음, 열수 중에서 가열하여 반응을 종료시키고 이를 농축 및 건조하여 얻을 수 있다.
구체적으로는, 석이버섯 건조 분말을 pH 2.0 ~ 8.0으로, 바람직하게는 pH 2.2 ~ 7.0으로 인산염 완충액(phosphate buffer), 아세트산 완충액(sodium acetate-acetic acid buffer) 또는 글리신-HCl(Glycine-HCl) 중에서 선택되는 1종 이상의 용매에 용해시키고, 여기에 단백질 또는 당의 단일효소를 첨가한 후, 30 ~ 80℃, 바람직하게는 37 ~ 70℃의 온도에서 6 ~ 10시간, 바람직하게는 8시간 동안 교반시키면서 충분히 가수분해 반응이 진행되도록 한 다음, 80 ~ 120℃, 바람직하게는 90 ~ 100℃에서 10분간 가열하여 반응을 종료하고, 반응액을 감압증발기로 농축시킨 후 동결건조하여 석이버섯 가수분해 효소 추출물을 얻는다.
본 발명에 있어서, 상기 효소는 단백질을 가수분해하는 단백질 가수분해 효소와 당결합을 가수분해하는 당 가수분해 효소로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 상기 단백질 가수분해 효소는 프로타멕스(Protamex), 플라보자임(Flavourzyme), 뉴트라제(Neutrase), 알카라제(Alcalase), 키모트립신(α-Chymotrypsin), 펩신(Pepsin), 트립신(Trypsin), 파파인(papain) 등에서 선택되는 1종 이상인 것이 좋고, 상기 당 가수분해 효소는 프로모자임(Promozyme), 셀루클라스트(Celluclast), 말토게나제(Maltogenase), 비스코자임(Viscozyme), 테르마밀(Termamyl), 덱스트로자임(Dextrozyme), 아밀로글루코시다제(Amyloglucosidase; AMG), α,β-글루코시다제(α,β-glucosidase), 펙티나제(pectinase), 나린지나제(naringinase), 셀루라제(celluase), 헤미셀루라제(hemicelulase) 등에서 선택되는 1종 이상인 것이 좋다.
또한, 본 발명은 상기 방법으로 제조된 석이버섯 가수분해 효소 추출물로부터 1-디옥시 카스타노스퍼민 또는 6-메틸우라실 계열 화합물을 분리 정제하는 방법을 제공한다.
구체적으로, 석이버섯 가수분해 효소 추출물 중 항산화 활성이 뛰어난 플라보자임 가수분해물을 대량 가수분해하여 TFF 시스템을 이용하여 분자량별로 분리하여 그 중 가장 높은 활성을 보인 분자량 5,000~10,000 Da을 분취용 당 컬럼이 장착된 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 분리·정제한 후 가장 항산화 활성이 높은 분획을 분석용 컬럼이 장착된 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 분리·정제하여 그 물질을 NMR과 MS 기법을 사용하여 구조를 분석한다.
따라서, 본 발명은 석이버섯 가수분해 효소 추출물 또는 이로부터 분리된 1-디옥시 카스타노스퍼민 또는 6-메틸우라실 계열 화합물을 유효성분으로 함유하는 항산화 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명의 석이버섯 가수분해 효소 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 함유하는 조성물은 활성산소에 의해 생성되는 산화물들에 기인하는 노화 및 각종 질환의 억제 또는 치료를 위한 의약품, 건강보조제, 화장료, 식품, 식품 첨가제 등에 유용하게 이용될 수 있으며, 이에 의해 제한되지 않는다.
본 발명의 조성물이 의약품으로 이용될 경우에는 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용되는 제형으로 제조될 수 있다.
상기 담체 또는 부형제로는 물, 덱스트린, 칼슘카보네이드, 락토스, 프로필렌글리콜, 리퀴드, 파라핀, 생리식염수, 덱스트로스, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물류가 있으며, 이들은 1종 이상 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 담체 및 부형제는 모두 사용 가능하다. 또한 항산화 조성물을 약제화하는 경우, 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 계면활성제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 더욱 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물이 화장료로 이용될 경우에는 주름개선 및 미백 기능성 화장품, 유연화장수, 영양화장수, 아이크림, 영양크림, 맛사지크림, 클렌징크림, 에센스 등의 제형으로 제조될 수 있으며, 각 제형의 화장료 조성물에 있어서, 석이버섯 가수분해 효소 추출물을 포함하여 주름개선 및 미백 원료 또는 통상의 화장료 원료로서 이외의 성분들을 화장료의 제형 또는 사용목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1. 석이버섯의 단백질 가수분해 효소 추출물의 제조
음지에서 건조하고 마쇄기로 분쇄하여 분말화 한 석이버섯 분말은 0.1 M 인산염 완충액(phosphate buffer, pH 7.0)[단, 단백질 가수분해 효소로 펩신(Pepsin)을 사용할 경우에는 0.1 M 글리신-HCl(pH 2.2)을 사용함]에 석이버섯 분말 : 인산염 완충액을 1 : 50의 비율(w/w)로 용해한 후 30분간 150 rpm에서 교반하면서 30 ~ 60℃로 예열한 다음, 여기에 단백질 가수분해 효소 : 석이버섯 분말 = 1 : 50의 비율(w/w)로 단백질 가수분해 효소를 첨가하여 8시간 동안 180 rpm으로 교반하면서 37 ~ 70℃에서 가수분해 하였다.
가수분해가 완료되면, 100℃에서 10분간 더 가열하여 반응을 종결하고, 반응액은 감압증발기로 농축시킨 후 동결건조하여 석이버섯 단백질 가수분해 추출물을 제조하였다. 이 때 사용된 효소의 조성 및 반응 조건은 하기 표 1에 나타내었다.
실시예 2. 석이버섯의 당 가수분해 효소 추출물의 제조
음지에서 건조하고 마쇄기로 분쇄하여 분말화한 석이버섯 분말은 0.1 M 아세트산 완충액(sodium acetate-acetic acid buffer, pH 4.5~5.0)[단, 당 가수분해 효소로 테르마밀(Termamyl)을 사용할 경우에는 0.1 M 인산염 완충액(pH 6.0)을 사용함)에 석이버섯 분말 : 아세트산 완충액을 1 : 50의 비율(w/w)로 용해한 후 30분간 150 rpm에서 교반하면서 50 ~ 60℃로 예열한 다음, 여기에 단백질 가수분해 효소 : 석이버섯 분말 = 1 : 50의 비율(w/w)로 단백질 가수분해 효소를 첨가하여 8시간 동안 180 rpm으로 교반하면서 50 ~ 60℃에서 가수분해 하였다.
가수분해가 완료되면, 100℃에서 10분간 더 가열하여 반응을 종결하고, 반응액은 감압증발기로 농축시킨 후 동결건조하여 석이버섯 단백질 가수분해 추출물을 제조하였다. 이때 사용된 효소의 조성 및 반응 조건은 하기 표 1과 같다.
Figure 112011045647899-pat00001
단, 상기에서 a는 효소 가수분해(in Enzymatic hydrolysis), b는 인산염 완충액(Phosphate buffer), c는 아세트산 완충액(Sodium acetate-acetic acid buffer) 및 d는 글리신-HCl(Glycine-HCl)을 의미한다.
실험예 1. 알킬 라디칼 소거능을 이용한 항산화 효과 측정
본 발명에 따른 석이버섯 가수분해 효소 추출물의 항산화 효과를 확인하기 위하여 전자스핀공명기(ESR spectrometer, JEX-PX 2000-300, JEOL, 일본)를 이용해 알킬 라디칼 소거능을 측정하였다.
AAPH(2,2'-아조비스(2-아미노프로판) 다이하이드로클로라이드에 의해 생성되는 알킬 라디칼의 소거능은 POBN(α-(4-프로디닐 1-옥사이드)-N-3가-부틸니트론)과의 반응물의 양으로 측정할 수 있다.
구체적으로, PBS(phosphate buffered saline, 인산염 완충액) 10 ㎕에 실시예 1과 2의 석이버섯 가수분해 효소 추출물 10 ㎕, 40 mM의 AAPH 10 ㎕, 40 mM의 POBN 10 ㎕를 순차적으로 첨가하여 10초간 강하게 vertex한 반응 혼합물을 37℃ 수욕조(water bath)에서 30분간 반응시킨 다음 모세관 튜브에 옮겨 ESR 스펙트로미터에서 알킬 라디칼 발생량을 측정하였다[ESR 측정 조건 - central field: 3475G, Modulation frequency: 100 ㎑, modulation amplitude: 2G, microwave power: 5 ㎽, gain: 6.3×105, 온도: 298K].
실험예 2. 석이버섯 유래 플라보자임 가수분해물로부터 항산화 물질 소재 분리 및 정제 I
석이버섯을 플라보자임으로 가수분해시킨 가수분해물의 항산화 물질을 분리 및 정제하기 위하여 멤브레인 사이즈에 따라 항산화 물질을 분리, 정제하는 TFF 시스템을 이용하여 5,000 Da 미만, 5,000 ~ 10,000 Da, 10,000 ~ 30,000 Da, 30,000 Da 이상의 분자량별로 4개의 분획물으로 구분하여 알킬 라디칼 소거율을 측정하였다. 그 결과, 4개의 획분 중 5,000 ~ 10,000 Da의 크기에서 가장 높은 활성을 나타냄을 확인 할 수 있었다(도 1참조).
실험예 3. 석이버섯 유래 플라보자임 가수분해물로부터 항산화 물질 소재 분리 및 정제 II
본 실험 예는 석이버섯 플라보자임 가수분해물로부터 항산화 물질을 얻기 위해 분리, 정제하는 두 번째 과정으로, TFF 시스템을 사용한 위 실험 예 2에서 가장 우수한 항산화 활성을 나타낸 분획인 분자량 5,000~10,000 Da을 분취용 당 컬럼이 장착된 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 분리, 정제하였다.
고성능크로마토그래피는 적당한 충전물이 균일하게 담긴 관(분리관) 안에서 기체 시료나 기체화한 액체 또는 고체 시료를 운반기체에 의해 전개시키되 분해하지 않고 기체인 상태로 통과시켜 각 성분을 분리시키는 방법인데, 본 실험에서는 분취용 당 컬럼인 NH2P-50 10E을 장착하여 크로마토그래피를 실시하였으며, 최종적으로 5개의 분획물을 얻었다(도 2참조).
각 분획물을 동결건조하여 항산화 활성을 측정한 결과 도 3에 보듯이, Peak I 분획물에서 알킬 라디칼 소거 활성이 가장 뛰어났으며 IC50 값은 0.328 μg/ml이었다.
실험예 4. 석이버섯 유래 플라보자임 가수분해물로부터 항산화 물질 소재 분리 및 정제 III
본 실험 예는 석이버섯 플라보자임 가수분해물로부터 항산화 물질을 얻기 위해 분리, 정제하는 세 번째 과정으로, 분취용 당 컬럼을 사용한 위 실험 예 3에서 가장 우수한 항산화 활성을 나타낸 분획인 Peak I을 분석용 당 컬럼이 장착된 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 분리, 정제하였다.
본 실험에서는 분석용 당 컬럼인 NH2P-50 4E을 장착하여 크로마토그래피를 실시하였으며, 최종적으로 1개의 분획물을 얻었다(도 4참조).
최종적으로 얻은 분획물을 동결건조하여 항산화 활성을 측정한 결과 도 5에서와 같이, 알킬 라디칼 소거 활성을 보여주었으며 IC50 값은 0.314 μg/ml이었다.
실험예 5. 석이버섯 유래 플라보자임 가수분해물로부터 분리된 항산화 물질 소재의 구조 분석 I
본 실험 예는 석이버섯 플라보자임 가수분해물로부터 분리된 항산화 물질의 구조를 분석하는 첫 번째 과정으로, 위 실험 예 4에서 분리·정제된 항산화물질을 CD3OD에 녹여 500 MHz와 125 MHz의 Varian Unity Inova spectrometer 기기(Varian, Palo Alto, CA, USA)를 사용하여 1H NMR을 측정하여 도 6의 결과를 얻었다.
실험예 6. 석이버섯 유래 플라보자임 가수분해물로부터 분리된 항산화 물질 소재의 구조 분석 II
본 실험 예는 석이버섯 플라보자임 가수분해물로부터 분리된 항산화 물질의 구조를 분석하는 두 번째 과정으로, 위 실험 예 4에서 분리·정제된 항산화물질을 CD3OD에 녹여 500 MHz와 125 MHz의 Varian Unity Inova spectrometer 기기(Varian, Palo Alto, CA, USA)를 사용하여 13C NMR을 측정하여 도 7의 결과를 얻었고, 도 6과 도 7을 분석하여 화학식 1의 1-디옥시 카스타노스퍼민임을 알 수 있었다.
[화학식 1]
Figure 112011045647899-pat00002

실험예 7. 석이버섯 유래 플라보자임 가수분해물로부터 분리된 항산화 물질 소재의 구조 분석 III
본 실험 예는 석이버섯 플라보자임 가수분해물로부터 분리된 항산화 물질의 구조를 분석하는 세 번째 과정으로, 위 실험 예 4에서 분리·정제된 항산화물질을 Heated ESI를 장착한 LCQ Fleet 기기(Thermo Fisher Scientific, San Jose, CA, USA)를 사용하여 MS을 측정하여 도 8의 결과를 얻었고, 결과를 분석한 결과 6-메틸우라실 계열 화합물임을 알 수 있었다.
[화학식 2]
Figure 112011045647899-pat00003
이상, 본 발명의 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (7)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 1-디옥시 카스타노스퍼민을 유효성분으로 함유하는 항산화 조성물.
    [화학식 1]
    Figure 112012089003771-pat00004

  2. 제 1항에 있어서,
    상기 화학식 1로 표시되는 1-디옥시 카스타노스퍼민은 석이버섯 가수분해 추출물로부터 분리된 것을 특징으로 하는 항산화 조성물.
  3. 제 2항에 있어서,
    상기 석이버섯 가수분해 추출물은 (1) 석이버섯을 완충액에 용해시키는 단계; (2) 단백질 가수분해 효소 또는 당 가수분해 효소를 첨가하여 30 내지 80℃에서 6 내지 10시간 동안 가수분해하는 단계; 및 (3) 80 내지 120℃의 열수에서 10분간 가열하여 가수분해 반응을 종료시킨 후 농축 및 건조시키는 단계; 를 포함하여 제조되는 것을 특징으로 하는 항산화 조성물.
  4. 제 3항에 있어서,
    상기 (1)단계에서 완충액은 pH 2.0 내지 8.0의 인산염 완충액(phosphate buffer), 아세트산 완충액(sodium acetate-acetic acid buffer) 및 글리신-HCl 완충액(Glycine-HCl buffer) 중에서 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 항산화 조성물.
  5. 제 3항에 있어서,
    상기 (2)단계에서 단백질 가수분해 효소는 프로타멕스(Protamex), 플라보자임(Flavourzyme), 뉴트라제(Neutrase), 알카라제(Alcalase), 키모트립신(α-chymotrypsin), 펩신(Pepsin), 트립신(Trypsin) 및 파파인(Papain) 중에서 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 항산화 조성물.
  6. 제 3항에 있어서,
    상기 (2)단계에서 당 가수분해 효소는 프로모자임(Promozyme), 셀루클라스트(Celluclast), 말토게나제(Maltogenase), 비스코자임(Viscozyme), 테르마밀(Termamyl), 덱스트로자임(Dextrozyme), 아밀로글루코시다제(Amyloglucosidase; AMG), α,β-글루코시다제(α,β-glucosidase), 펙티나제(pectinase), 나린지나제(naringinase), 셀루라제(celluase) 및 헤미셀루라제(hemicellulase) 중에서 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 항산화 조성물.
  7. 제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항산화 조성물은 의약품으로 사용되는 것을 특징으로 하는 항산화 조성물.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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