KR101297573B1 - 클로로필 함량이 높은 클로렐라의 대량 배양용 배지 조성물 - Google Patents

클로로필 함량이 높은 클로렐라의 대량 배양용 배지 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 유효성분으로 질산칼륨(KNO3), 인산이수소칼륨(KH2PO4), 황산마그네슘 칠수화물(MgSO4·7H2O), 질산암모늄(NH4NO3), 염화칼슘(CaCl2), 염화코발트 육수화물(CoCl2·6H2O), 황산구리 오수화물(CuSO4·5H2O), 이디티에이 철나트륨(EDTA FeNa), 붕산(H3BO3), 요오드화 칼륨(KI), 황산아연 칠수화물(ZnSO4·7H2O), 황산망간 일수화물(MnSO4·H2O) 및 몰리브덴산나트륨 이수화물(Na2MoO4·2H2O)을 포함하거나 또는 질산칼륨(KNO3), 인산이수소칼륨(KH2PO4), 황산 마그네슘 칠수화물(MgSO4·7H2O), 황산암모늄((NH4)2SO4), 염화칼슘(CaCl2), 이디티에이 철나트륨(EDTA FeNa), 붕산(H3BO3), 요오드화 칼륨(KI), 황산아연 칠수화물(ZnSO4·7H2O) 및 황산망간 일수화물(MnSO4·H2O)을 포함하는 클로렐라의 대량 배양용 배지 조성물, 상기 배지 조성물을 이용하여 제조한 액체 배지 및 상기 액체 배지에 클로렐라를 접종하여 배양하는 단계를 포함하는 클로렐라를 대량 배양하는 방법에 관한 것이다.

Description

클로로필 함량이 높은 클로렐라의 대량 배양용 배지 조성물{Medium composition for mass culture of chlorella containing high content of chlorophylls}
본 발명은 클로로필 함량이 높은 클로렐라의 대량 배양용 배지 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 유효성분으로 질산칼륨(KNO3), 인산이수소칼륨(KH2PO4), 황산마그네슘 칠수화물(MgSO4·7H2O), 질산암모늄(NH4NO3), 염화칼슘(CaCl2), 염화코발트 육수화물(CoCl2·6H2O), 황산구리 오수화물(CuSO4·5H2O), 이디티에이 철나트륨(EDTA FeNa), 붕산(H3BO3), 요오드화 칼륨(KI), 황산아연 칠수화물(ZnSO4·7H2O), 황산망간 일수화물(MnSO4·H2O) 및 몰리브덴산나트륨 이수화물(Na2MoO4·2H2O)을 포함하거나 또는 질산칼륨(KNO3), 인산이수소칼륨(KH2PO4), 황산 마그네슘 칠수화물(MgSO4·7H2O), 황산암모늄((NH4)2SO4), 염화칼슘(CaCl2), 이디티에이 철나트륨(EDTA FeNa), 붕산(H3BO3), 요오드화 칼륨(KI), 황산아연 칠수화물(ZnSO4·7H2O) 및 황산망간 일수화물(MnSO4·H2O)을 포함하는 클로렐라의 대량 배양용 배지 조성물, 상기 배지 조성물을 이용하여 제조한 액체 배지 및 상기 액체 배지에 클로렐라를 접종하여 배양하는 단계를 포함하는 클로렐라를 대량 배양하는 방법에 관한 것이다.
클로렐라는 녹조류의 단세포식물로 분류학상 녹조식물강(chlorophyceae), 클로로코쿰목(Chlorococcum), 클로렐라(Chlorella)속으로, 종(species)으로는 불가리스(vulgaris), 피레노이도사(pyrenoidosa) 및 엘립소이대(ellipsoidea)가 널리 알려져 있으며, 이들은 2~10 ㎛의 구형 단세포 조류로 현미경으로만 볼 수 있을 정도이다. 이러한 클로렐라는 초기에 일본 건강보조식품으로 널리 알려져 있었으며, 우리나라에서도 활발하게 연구되고 있는 건강관련 식품 중 하나로 단백질, 식이섬유, 비타민 및 미네랄 등이 대량 함유된 영양식품으로 인정받고 있으며, 다른 식품원료와는 달리 증식속도가 빠르기 때문에 미래식품으로 기대되어 많은 연구가 이뤄지고 있다. 특히 클로렐라에 포함된 CGF(Chlorella growth factor, 클로렐라 성장인자) 성분은 성장발육 및 질병회복 등에 효과가 큰 것으로 보고되었으며, 그 외 성인병 및 항암관련 연구가 보고되고 있고, 또한 풍부한 미네랄을 함유하고 있어서 향장소재, 바이오에너지 원료 등 최근 널리 이용되고 있다.
다양한 생리활성을 지닌 클로렐라는 탄소원에 따라 빛과 CO2를 이용하여 광합성을 통해 배양하는 독립영양배양(autotrophic growth), 유기 탄소원을 이용하여 배양하는 종속영양배양(heterotrophic growth) 및 탄소원으로 빛, CO2, 유기 탄소원을 사용하여 배양하는 혼합영양배양(mixotrophic growth)으로 배양할 수 있다. 또한 배양환경에 따라 크게 옥외배양 및 옥내배양으로 나뉘며, 옥외배양은 옥외개방형 및 옥외 밀폐형 배양방식이 있고 주로 광합성을 위한 광원은 태양광을 사용하고 배지는 해양 심층수를 이용해 생산 단가를 낮춰 대량 배양한다. 옥내배양은 주로 밀폐형 배양시스템으로 광원은 형광등, LED 등 다양한 인공조명을 사용해 실내에서 배양하는 방식으로 옥외배양에 비해 생산단가는 높지만 배양환경을 조절할 수 있고, 세균 등 다양한 미생물의 오염을 차단할 수 있어서 옥외배양보다 품질이 향상된 클로렐라를 생산가능하며 고가의 제품으로 판매된다.
클로렐라의 표준배양 배지로는 JM 배지(Jaworski's Medium) 및 f/2 배지가 널리 알려져 있다. 하지만 JM 배지 또는 f/2 배지는 독립영양배양(명배양)을 위한 배지 조성으로서 광합성을 위해 반드시 빛과 이산화탄소가 필요하며, 또한 클로렐라의 성장 속도가 느리고 생산량이 낮은 단점이 있다. 이러한 단점을 극복하고 대량배양을 하기 위한 많은 연구가 이루어지고 있는데 현재 국내에서 가장 많이 사용하는 방법으로는 유기 탄소원으로 포도당을 사용해 밀폐된 탱크 내에서 발효과정을 통해 대량 생산하는 방법을 주로 사용하고 있다. 클로렐라 표준배양을 위한 JM 배지 및 f/2 배지의 조성은 다음의 표 1과 같다.
클로렐라 표준배양 배지 조성물
배지성분 JM 배지
(per liter) 		f/2 배지
(per liter)
질산 나트륨(NaNO3) 80 mg 75 mg
인산수소나트륨 일수화물(NaH2PO4·H2O) - 5 mg
인산수소이나트륨 십이수화물(Na2HPO4·12H2O) 36 mg -
인산이수소칼륨(KH2PO4) 12.4 mg -
황산마그네슘 칠수화물(MgSO4·7H2O) 50 mg -
규산나트륨 구수화물(Na2SiO3·9H2O) - 30 mg
탄산수소나트륨(NaHCO3) 15.9 mg -
이디티에이 철나트륨(EDTAFeNa) 2.25 mg -
염화철 육수화물(FeCl3·6H2O) - 3.15 mg
이디티에이나트륨 이수화물(Na2EDTA·2H2O) 2.25 mg 4.36 mg
황산구리 오수화물(CuSO4·5H2O) - 0.0098 mg
몰리브덴산나트륨 이수화물(Na2MoO4·2H2O) 1 mg 0.0063 mg
황산아연 칠수화물(ZnSO4·7H2O) - 0.022 mg
염화코발트 육수화물(CoCl2·6H2O) - 0.01 mg
염화망간 사수화물(MnCl2·4H2O) 1.39 mg 0.18 mg
붕산(H3BO3) 2.48 mg -
질산칼슘 사수화물(Ca(NO3)2·4H2O) 20 mg -
사이아노코밸라민(Cyanocobalamin) 0.04 mg 0.0005 mg
티아민 염화수소(Thiamine HCl) 0.04 mg 0.0005 mg
비오틴(Biotin) 0.04 mg 0.0001 mg
미세조류가 성장하는데 있어서 영양염류는 필수요소인데 이 중 질소원은 핵산 및 클로로필의 구성요소이며, 인은 핵산, 인지질 및 효소의 구성성분이고, 마그네슘은 클로로필의 구성성분이면서 효소의 활성에 중요한 요소이다. 또한 식물 호르몬은 식물의 조직배양에서 뿌리, 새싹, 배아의 재분화 및 캘러스(callus) 형성 등을 조절하는 중요한 물질이지만 아직까지 이러한 식물 호르몬이 미세조류에 어떠한 영향을 미치는지는 정확하게 조사된 바는 없다.
현재까지 알려진 클로렐라의 배양방법으로는 종속영양배양(암배양)으로 포도당류를 주 탄소원으로 하고 암모니아, 요소 또는 이들의 화합물을 주 질소원으로 하여 차광된 무균 배양조 내에서 초기에 당 농도를 4~8%(W/V), 조체 접종량을 4~10%(V/V)의 범위 내에서 배양하는 방법(대한민국특허 공보 제0193748호), 탄소원으로서 포도당, 인버타제 또는 상기 효소를 함유한 균체에 의해 연화 처리한 당밀을 사용하는 방법(일본특허공보 소 55-016636호), 배양액 중에 축합 인산을 첨가하여 충분한 양의 철분을 용해시킨 배지에서 종균을 암배양하는 방법(일본특허공보 소 56-54785호) 및 배양종료 전에 비타민 C를 배양액 중에 클로렐라 건조중량의 0.2% 이상 첨가하는 방법(일본특허공보 소 61-048917호) 등이 있다. 또한, 당류 및 질소를 함유한 배지를 이용한 배양 방법에 있어서, 배양액에 당화 효소 1.5~2.5% 중량을 첨가함과 동시에 배지를 살균하기 위하여 오존을 통하게 하고 일광을 조사시켜 클로렐라를 증식 배양하는 방법(한국특허공고 제1982-0001310호)이 개시되어 있다.
상기 대부분의 연구들이 빛이 차단된 밀폐된 탱크 내에 유기 탄소원인 포도당, 영양염류로 질소 또는 인 등을 사용해 배양액을 만들고 살균해서 무균상태로 클로렐라를 접종해 배양하는 종속영양배양(암배양) 방법들에 관한 것으로 자연광 또는 인공 광원을 사용해 명배양으로 배양하는 것과 비교해 대량의 클로렐라의 바이오매스를 생산할 수는 장점은 있지만, 클로로필 탄소원으로 포도당을 사용하기에 생산비용이 많이 들어가고 발효 미생물들의 오염을 막기 위해 무균상태를 유지해야 하며, 세포벽이 두꺼워지고 오히려 클로로필 함량이 낮아지는 단점들이 있다. 반면 독립영양배양(명배양)의 경우 유기 탄소원을 사용하지 않기에 값싸게 클로렐라를 생산할 수 있지만 광합성을 위해 빛과 이산화탄소가 있어야 하고, 생산량이 낮고, 광원으로 자연광을 이용할 경우 빛이 투과되는 깊이가 약 10 ㎝ 정도이기 때문에 클로렐라 배양을 위한 많은 면적이 필요하며, 배양면적을 넓히기 위해 옥외배양을 할 경우 기후변화와 같은 환경적인 요인을 조절할 수 없는 가장 큰 단점이 있다. 또한 광원으로 LED와 같은 인공 광원을 사용할 경우 초기 부대 시설비용이 많이 들어가는 단점이 있다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자들은 클로로필 함량이 높은 클로렐라의 대량 배양용 배지 조성물을 발견하고 상기 클로렐라가 잘 생장하는 최적의 빛, 온도 및 진탕배양 조건을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 질산칼륨(KNO3), 인산이수소칼륨(KH2PO4), 황산마그네슘 칠수화물(MgSO4·7H2O), 질산암모늄(NH4NO3), 염화칼슘(CaCl2), 염화코발트 육수화물(CoCl2·6H2O), 황산구리 오수화물(CuSO4·5H2O), 이디티에이 철나트륨(EDTA FeNa), 붕산(H3BO3), 요오드화 칼륨(KI), 황산아연 칠수화물(ZnSO4·7H2O), 황산망간 일수화물(MnSO4·H2O) 및 몰리브덴산나트륨 이수화물(Na2MoO4·2H2O)을 포함하거나 또는 질산칼륨(KNO3), 인산이수소칼륨(KH2PO4), 황산 마그네슘 칠수화물(MgSO4·7H2O), 황산암모늄((NH4)2SO4), 염화칼슘(CaCl2), 이디티에이 철나트륨(EDTA FeNa), 붕산(H3BO3), 요오드화 칼륨(KI), 황산아연 칠수화물(ZnSO4·7H2O) 및 황산망간 일수화물(MnSO4·H2O)을 포함하는 클로렐라의 대량 배양용 배지 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 배지 조성물을 이용하여 제조한 액체 배지를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 액체 배지에 클로렐라를 접종하여 배양하는 단계를 포함하는 클로렐라를 대량 배양하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 액체 배지에 클로렐라를 접종하고, 액체 배지 기준으로 유기 탄소원으로 2~4 %(w/v)의 자당(sucrose)을 첨가하고 빛을 조사하여 배양하는 단계를 포함하는 클로렐라를 대량 배양하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 액체 배지에 클로렐라를 접종하고, 액체 배지 기준으로 탄소원으로 2~4 %(w/v)의 자당(sucrose)을 첨가하고 비타민 또는 식물 호르몬을 첨가하여 배양하는 단계를 포함하는 클로렐라를 대량 배양하는 방법을 제공한다.
본 발명에 따르면, 본 발명의 클로렐라 대량 배양용 배지 조성물을 이용하면 기존의 표준배양 배지에 비해 클로로필 함량이 높은 클로렐라를 쉽고 간편하게 대량 생산할 수 있으므로, 건강식품 및 바이오에너지 산업에 있어서 유용할 것으로 기대된다.
도 1은 JM, f/2, NBM1+S, NBM2+S, NBM2+S+V 및 NBM2+S+V+2,4-D+kinetin 각각의 배지에 7종의 클로렐라 균주를 10%(v/v)씩 접종하고 광원으로 20 μ㏖ photon/m2/s 형광등을 사용하여 25~28℃에서, 120 rmp으로 진탕 배양 4일 후 위상차 현미경(×200)으로 관찰한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 JM, f/2, NBM1+S, NBM2+S, NBM2+S+V 및 NBM2+S+V+2,4-D+kinetin 각각의 배지에 7종의 클로렐라 균주를 10%(v/v)씩 접종하고 광원으로 20 μ㏖ photon/m2/s 형광등을 사용하여 25~28℃에서, 120 rmp으로 진탕 배양 4일 및 8일 후의 액체 배지에서의 모습을 나타낸 것이다.
도 3은 각각의 배지에서 선택된 클로렐라 균주의 배양시간에 따른 배양 양상을 나타낸 것이다.
도 4는 각각의 배지에서 선택된 클로렐라 균주 배양 4일 후 위상차 현미경을 이용하여 클로렐라 균주를 관찰한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 각각의 배지에서 선택된 클로렐라 균주 배양 8일 후 클로렐라의 클로로필 함량 분석 결과를 나타낸 것이다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 유효성분으로 질산칼륨(KNO3), 인산이수소칼륨(KH2PO4), 황산마그네슘 칠수화물(MgSO4·7H2O), 질산암모늄(NH4NO3), 염화칼슘(CaCl2), 염화코발트 육수화물(CoCl2·6H2O), 황산구리 오수화물(CuSO4·5H2O), 이디티에이 철나트륨(EDTA FeNa), 붕산(H3BO3), 요오드화 칼륨(KI), 황산아연 칠수화물(ZnSO4·7H2O), 황산망간 일수화물(MnSO4·H2O) 및 몰리브덴산나트륨 이수화물(Na2MoO4·2H2O)을 포함하거나 또는 질산칼륨(KNO3), 인산이수소칼륨(KH2PO4), 황산 마그네슘 칠수화물(MgSO4·7H2O), 황산암모늄((NH4)2SO4), 염화칼슘(CaCl2), 이디티에이 철나트륨(EDTA FeNa), 붕산(H3BO3), 요오드화 칼륨(KI), 황산아연 칠수화물(ZnSO4·7H2O) 및 황산망간 일수화물(MnSO4·H2O)을 포함하는 클로렐라의 대량 배양용 배지 조성물을 제공한다. 바람직하게는, 상기 배지 조성물은 클로렐라의 클로로필 함량을 높일 수 있다.
상기 배지 조성물에서, 질산칼륨(KNO3)의 농도는 1850~1950 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 1900 ㎎/L이다. 상기 인산이수소칼륨(KH2PO4)의 농도는 160~180 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 170 ㎎/L이다. 상기 황산마그네슘 칠수화물(MgSO4·7H2O)의 농도는 360~380 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 369.7 ㎎/L이다. 상기 질산암모늄(NH4NO3)의 농도는 1600~1700 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 1650㎎/L이다. 상기 염화칼슘(CaCl2)의 농도는 320~340 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 332 ㎎/L이다. 상기 염화코발트 육수화물(CoCl2·6H2O)의 농도는 0.02~0.03 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 0.025 ㎎/L이다. 상기 황산구리 오수화물(CuSO4·5H2O)의 농도는 0.02~0.03 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 0.025 ㎎/L이다. 상기 이디티에이 철나트륨(EDTA FeNa)의 농도는 30~40 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 36.7 ㎎/L이다. 상기 붕산(H3BO3)의 농도는 5~7 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 6.2 ㎎/L이다. 상기 요오드화 칼륨(KI)의 농도는 0.7~0.9 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 0.83 ㎎/L이다. 상기 황산아연 칠수화물(ZnSO4·7H2O)의 농도는 7~10 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 8.6 ㎎/L이다. 상기 황산망간 일수화물(MnSO4·H2O)의 농도는 15~18 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 16.9㎎/L이다. 상기 몰리브덴산나트륨 이수화물(Na2MoO4·2H2O)의 농도는 0.2~0.3 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 0.25 ㎎/L이다.
또한, 상기 배지 조성물에서, 질산칼륨(KNO3)의 농도는 2780~2880 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 2830 ㎎/L이다. 상기 인산이수소칼륨(KH2PO4)의 농도는 390~410 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 400 ㎎/L이다. 상기 황산 마그네슘 칠수화물(MgSO4·7H2O)의 농도는 175~190 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 184.8 ㎎/L이다. 상기 황산암모늄((NH4)2SO4)의 농도는 450~480 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 463 ㎎/L이다. 상기 염화칼슘(CaCl2)의 농도는 120~130 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 125.3 ㎎/L이다. 상기 이디티에이 철나트륨(EDTA FeNa)의 농도는 34~38 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 36.7 ㎎/L이다. 상기 붕산(H3BO3)의 농도는 1~5 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 1.6 ㎎/L이다. 상기 요오드화 칼륨(KI)의 농도는 0.5~1 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 0.8 ㎎/L이다. 상기 황산아연 칠수화물(ZnSO4·7H2O)의 농도는 1~2 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 1.5 ㎎/L이다. 상기 황산망간 일수화물(MnSO4·H2O)의 농도는 2~4 ㎎/L일 수 있으나, 바람직하게는 3.33 ㎎/L이다.
따라서, 본 발명은 더욱 바람직하게는
유효성분으로 질산칼륨(KNO3) 1850~1950 ㎎/L, 인산이수소칼륨(KH2PO4) 160~180 ㎎/L, 황산마그네슘 칠수화물(MgSO4·7H2O) 360~380 ㎎/L, 질산암모늄(NH4NO3) 1600~1700 ㎎/L, 염화칼슘(CaCl2) 320~340 ㎎/L, 염화코발트 육수화물(CoCl2·6H2O) 0.02~0.03 ㎎/L, 황산구리 오수화물(CuSO4·5H2O) 0.02~0.03 ㎎/L, 이디티에이 철나트륨(EDTA FeNa) 30~40 ㎎/L, 붕산(H3BO3) 5~7 ㎎/L, 요오드화 칼륨(KI) 0.7~0.9 ㎎/L, 황산아연 칠수화물(ZnSO4·7H2O) 7~10 ㎎/L, 황산망간 일수화물(MnSO4·H2O) 15~18 ㎎/L 및 몰리브덴산나트륨 이수화물(Na2MoO4·2H2O) 0.2~0.3 ㎎/L을 포함하거나 또는 질산칼륨(KNO3) 2780~2880 ㎎/L, 인산이수소칼륨(KH2PO4) 390~410 ㎎/L, 황산 마그네슘 칠수화물(MgSO4·7H2O) 175~190 ㎎/L, 황산암모늄((NH4)2SO4) 450~480 ㎎/L, 염화칼슘(CaCl2) 120~130 ㎎/L, 이디티에이 철나트륨(EDTA FeNa) 34~38 ㎎/L, 붕산(H3BO3) 1~5 ㎎/L, 요오드화 칼륨(KI) 0.5~1 ㎎/L, 황산아연 칠수화물(ZnSO4·7H2O) 1~2 ㎎/L 및 황산망간 일수화물(MnSO4·H2O) 2~4 ㎎/L을 포함하는 클로렐라의 대량 배양용 배지 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 배지 조성물을 이용하여 제조한 액체 배지를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 액체 배지에 클로렐라를 접종하여 배양하는 단계를 포함하는 클로렐라를 대량 배양하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 액체 배지에 클로렐라를 접종하고, 액체 배지 기준으로 유기 탄소원으로 2~4 %(w/v)의 자당(sucrose)을 첨가하고 빛을 조사하여 배양하는 단계를 포함하는 클로렐라를 대량 배양하는 방법을 제공한다. 바람직하게는, 상기 자당의 농도는 액체 배지 기준으로 3 %(w/v)일 수 있다. 바람직하게는, 상기 빛은 15~25 μ㏖ photon/m2/s일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
또한, 본 발명은 상기 액체 배지에 클로렐라를 접종하고, 액체 배지 기준으로 탄소원으로 2~4 %(w/v)의 자당(sucrose)을 첨가하고 비타민 또는 식물 호르몬을 첨가하여 배양하는 단계를 포함하는 클로렐라를 대량 배양하는 방법을 제공한다. 바람직하게는, 상기 자당의 농도는 액체 배지 기준으로 3 %(w/v)일 수 있다.
바람직하게는, 상기 비타민은 글리신(Glycine) 1.5~2.5 ㎎/L, 티아민 염화수소(Thiamine HCl) 0.5~1.5 ㎎/L, 피리독신 염화수소(Pyridoxine HCl) 0.1~1 ㎎/L 및 니코틴산(Nicotinic acid) 0.1~1 ㎎/L 일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 상기 식물 호르몬은 2,4-D(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid) 1~5 ppm 및 카이네틴(kinetin) 0.1~0.5 ppm 일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 가장 바람직하게는, 상기 비타민은 글리신(Glycine) 2 ㎎/L, 티아민 염화수소(Thiamine HCl) 1 ㎎/L, 피리독신 염화수소(Pyridoxine HCl) 0.5 ㎎/L 및 니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 ㎎/L 일 수 있다. 가장 바람직하게는, 상기 식물 호르몬은 2,4-D 2 ppm 및 카이네틴 0.2 ppm 일 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 본 발명에 사용한 클로렐라 균주의 선별
본 발명에 사용한 클로렐라 균주는 부경대학교 한국 해양 미세조류은행에서 분양받은 FC-001, FC-041, C-074, C-090, C-156, C-210 및 C-228이며, FC-001 및 FC-041은 클로렐라 불가리스(Chlorella vulgaris)이고 C-074, C-090, C-156 및 C-228은 클로렐라 종(Chlorella sp .) 균주이며, C-210은 클로렐라(Chlorella)이다. 분양받은 각각의 클로렐라 균주는 조성을 가지는 표준배양 배지 조성인 JM 배지 또는 f/2 배지(표 1)에서 계대 배양하였다. 일반적으로 클로렐라 균주는 광독립영양(photoautotrophic) 조건에서 생육하기 때문에 광원으로 20 μ㏖ photon/m2/s 형광등을 사용하였다. 25~28℃에서, 120 rmp으로 20일간 진탕 배양하였고, 배양된 균체는 세포 수 및 클로렐라 세포의 모양을 위상차 현미경(Optinity, KI-400)으로 관찰하여 일정한 균주 상태를 유지하였다. 본 발명에 사용한 NBM1 및 NBM2의 영양염류의 배지 조성은 다음 표 2와 같다.
NBM1 및 NBM2의 배지 조성
배지성분 NBM1
(per liter) 		NBM2
(per liter)
질산칼륨(KNO3) 1900 mg 2830 mg
인산이수소칼륨(KH2PO4) 170 mg 400 mg
황산마그네슘 칠수화물(MgSO4·7H2O) 369.7 mg 184.8 mg
질산암모늄(NH4NO3) 1650 mg -
황산암모늄((NH4)2SO4) - 463 mg
염화칼슘(CaCl2) 332 mg 125.3 mg
염화코발트 육수화물(CoCl2·6H2O) 0.025 mg -
황산구리 오수화물(CuSO4·5H2O) 0.025 mg -
이디티에이 철나트륨(EDTA FeNa) 36.7 mg 36.7 mg
붕산(H3BO3) 6.2 mg 1.6 mg
요오드화 칼륨(KI) 0.83 mg 0.8 mg
황산아연 칠수화물(ZnSO4·7H2O) 8.6 mg 1.5 mg
황산망간 일수화물(MnSO4·H2O) 16.9 mg 3.33 mg
몰리브덴산나트륨 이수화물(Na2MoO4·2H2O) 0.25 mg -
또한 본 발명에서 사용한 비타민복합체의 조성은 다음 표 3과 같다.
비타민복합체
성 분 비타민복합체
(per liter)
글리신(Glycine) 2 mg
티아민 염화수소(Thiamine HCl) 1 mg
피리독신 염화수소(Pyridoxine HCl) 0.5 mg
니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 mg
클로렐라 균주를 선발하기 위해 표준 배양 배지로 JM 및 f/2 배지를 사용하였고 영양염류의 성분과 농도를 조절한 NBM1 및 NBM2 배지 조성물을 각각 사용하여 다음과 같은 조성의 배지를 각각 만들었다. NBM1 배지 조성물에 유기 탄소원으로 3%의 자당을 첨가한 배지(NBM1+S), NBM2 배지 조성물에 유기 탄소원으로 3%의 자당을 첨가한 배지(NBM2+S), NBM2 배지 조성물에 유기 탄소원으로 3%의 자당과 비타민복합체를 첨가한 배지(NBM2+S+V) 및 NBM2 배지 조성물에 유기 탄소원으로 3%의 자당, 비타민복합체, 식물호르몬인 2,4-D 2 ppm과 카이네틴(kinetin) 0.2 ppm 을 모두 첨가한 배지(NBM2+S+V+2,4-D+Kinetin)를 각각 표 2 및 3의 조성으로 만들고 1L 삼각플라스크에 500 mL씩 분주하여 121℃, 15분간 고압살균 한 후 냉각하였다. JM, f/2, NBM1+S, NBM2+S, NBM2+S+V 및 NBM2+S+V+2,4-D+kinetin 각각의 배지에 7종의 클로렐라 균주를 10%(v/v)씩 접종하고 광원으로 20 μ㏖ photon/m2/s 형광등을 사용하여 25~28℃에서, 120 rmp으로 8일간 진탕 배양하였다. 상기 배지 조성물에서 배양 4일 후, 클로렐라의 성장속도 및 세포크기의 변화 등을 현미경으로 관찰하였다(도 1). 상기 관찰을 통해 표준 배지에 비해 발명한 배지에서 성장속도가 빠르고 클로로필 농도가 높은 균주를 선발하였다.
또한 상기 각각의 배지에서 클로렐라의 클로로필 함량을 육안으로 관찰하고, 생산된 바이오매스를 비교하기 위해 배양 후 4일째 및 8일째 배양 모습을 관찰하였다(도 2).
NBM1 및 NBM2 배지 조성물을 영양염류로 사용하고, 유기 탄소원으로 3% 자당을 사용해 클로렐라를 혼합영양배양 한 결과 클로렐라 불가리스(Chlorella vulgaris) 균주인 FC-001 및 FC-041은 클로렐라 균주의 표준 배양 배지인 JM 및 f/2 배지에서 배양한 것에 비해 NBM1+S, NBM2+S, NBM2+S+V 및 NBM2+S+V+2,4-D+kinetin 배지에서 성장 속도가 빨라지고 세포크기는 커지며, 진한 녹색으로 생장하고 바이오매스 또한 증가하는 것을 확인하였다. 반면 클로렐라 종(Chlorella sp .) 균주 및 클로렐라(Chlorella) 균주는 C-074 균주를 제외하고 표준 배지인 f/2 배지에서 성장 속도와 비슷하였고, 세포크기 변화가 없었다. 클로렐라 종(Chlorella sp.) 균주 중 C-074는 성장속도는 표준 배지와 비슷하지만 세포 크기가 약간 증가하는 것을 확인하였다. NBM1 및 2 배지 조성물에서 클로렐라를 배양함에 있어서 비타민 및 식물호르몬의 영향은 거의 없었다. 따라서 상기 결과를 바탕으로 FC-001과 FC-041 및 C-074 균주를 본 발명에 사용된 클로렐라 균주로 선택하였다.
실시예 2 : 선택된 클로렐라 균주의 NBM1 및 NBM2 배지 조성물을 이용한 배양
가. 본 발명에서 사용된 클로렐라 균주의 표준 배양 배지인 JM 및 f/2 배지를 각각 만들고 1L 삼각플라스크에 500 ㎖씩 분주한 후 121℃, 15분 동안 고압 살균한 뒤 냉각하여 사용하였다.
나. 표준 배양 배지인 JM 및 f/2 배지에 유기 탄소원으로 3%의 자당을 첨가해 JM+S 및 f/2+S배지를 만든 후 상기 방법과 동일하게 준비하였다.
다. 영양염류의 성분과 농도가 표준 배지와 다른 NBM1 및 NBM2 배지를 각각 만든 후 상기 방법과 동일하게 준비하였다.
라. NBM1 및 NBM2 배지 조성물에 유기 탄소원으로 3%의 자당을 첨가해 NBM1+S 및 NBM2+S 배지를 만든 후 상기 방법과 동일하게 준비하였다.
각각 준비된 액체 배지에 FC-001, FC-041 및 C-074 균주는 각각 10% 씩 접종하고 광원으로 20 μ㏖ photon /m2/s 형광등을 사용하였고, 25~28℃에서, 120 rmp으로 8일간 진탕 배양하면서 매일 클로로필의 함량을 육안으로 관찰하였고, 사진을 촬영하였다. 배양 4일 후 배양한 클로렐라 균체의 세포의 모양을 위상차 현미경(Optinity, KI-400)으로 관찰하며 각각의 배지에 대한 클로렐라 균주의 변화를 관찰하였다. 배양 8일 후, 각각의 클로렐라 균주의 배양액을 모아 생산된 바이오매스의 건조량을 측정하였다. 여과하기 전 준비한 건조 여과지 무게를 측정하였고, 상기 여과지를 사용하여 배양 8일 후에 배양액을 채취한 다음, 여과하였다. 건조량은 여과지를 1시간 동안 60℃에서 건조한 다음 무게를 측정하여 여과 전과 후의 무게의 차이로 산정하였다. 8일 동안의 배양 모습의 사진은 도 3, 배양 4일 후 클로렐라의 현미경 사진은 도 4이다.
실시예 3 : NBM1 및 NBM2 배지 조성물을 영양염류로 사용해 배양한 클로렐라의 클로로필 함량 분석
실시예 2에서 8일간 배양한 클로렐라 배양액을 각각 5 ㎖씩 채취한 후 사전에 건조하여 무게를 측정해 둔 2 mL를 튜브에 넣고, 12,000 rpm으로 상온에서 10분간 원심분리해서 배양액을 제거하여 침전된 바이오매스를 3차 증류수로 3번 세척한 후 원심분리해서 클로렐라 바이오매스를 얻었다. 클로렐라 바이오매스가 들어 있는 2 ㎖ 튜브를 1시간 동안 60℃에서 건조한 다음 무게를 측정하였다. 여기에 각각 1 ㎖의 아세톤을 넣고 균질기를 사용하여 세포가 흰색의 잔여물이 될 때까지 균질화한 후 12,000 rmp으로 10분간 원심분리 하여 상층액의 아세톤 추출물을 얻었다. 각각의 아세톤 추출물의 클로로필 함량을 비교하기 위해 Beckman사의 DU800 UV-spectrophotometer를 사용해, 1 ㎖의 석영 큐벳에 아세톤 900 ㎕를 넣고 각각의 아세톤 추출물 100 ㎕ 넣고 혼합한 뒤 350~750 ㎚까지 파장을 측정하였다. 클로로필 a 및 b의 함량은 클로로필 a = (12.7 × A663 ㎚)-(2.69 × A645 ㎚), 클로로필 b=(22.9 × A645㎚)-(4.64 × A663) 식에 의하여 계산하였다(Becker, E., Biotechnology and Microbiology Cambridge University Press, Cambridge, UK (1994)). 본 실시예에 있어서 클로로필 a 및 b의 함량은 결과적으로 빛과 높은 상관관계를 나타내었다. 각각의 독립영양배양과 혼합영양배양을 통해 배양한 클로렐라의 클로로필 함량을 건조중량(㎎ 색소/g)으로 산정하였다. 클로렐라의 클로로필 함량은 도 5와 같다.
클로렐라 표준 배양 배지 JM 또는 f/2에서 광독립영양배양한 시료 및 표준 배양 배지에 유기 탄소원으로 3%의 자당을 넣고 혼합영양 배양한 시료의 클로로필 함량은 NBM1 및 NBM2 배지 조성물을 영양염류로 사용해 독립영양 배양 한 시료와 비교해서 2배 정도 낮은 것을 확인하였다(도 5). 또한 유기 탄소원으로 3%의 자당을 넣고 혼합배양한 경우, 클로로필 함량은 광독립영양배양에 비해 약 3배 정도 낮은 것을 확인하였다. FC-001 균주는 NBM2 배지를 영양염류로 사용해 배양하였을 때, 클로로필 함량이 약 19 mg 색소(pigment)/g 건조량으로 가장 높았고, FC-041의 경우 NBM1 및 NBM2 배지에서 유사하게 약 15 ㎎ 색소/g 건조량이었고, C-074의 경우는 NBM2 배지에서 약 17 ㎎ 색소/g 건조량으로 가장 많이 함유하고 있었다. 따라서 클로렐라의 클로로필 함량은 광합성과 밀접한 상관관계가 있으며 클로로필의 함량이 높은 클로렐라를 배양하기 위해서는 유기 탄소원을 사용한 배양보다는 영양염류와 빛과 이산화탄소를 이용해 광독립영양배양을 하는 것이 효과적임을 확인하였다.

Claims (7)

  1. 유효성분으로 질산칼륨(KNO3) 1850~1950 ㎎/L, 인산이수소칼륨(KH2PO4) 160~180 ㎎/L, 황산마그네슘 칠수화물(MgSO4·7H2O) 360~380 ㎎/L, 질산암모늄(NH4NO3) 1600~1700 ㎎/L, 염화칼슘(CaCl2) 320~340 ㎎/L, 염화코발트 육수화물(CoCl2·6H2O) 0.02~0.03 ㎎/L, 황산구리 오수화물(CuSO4·5H2O) 0.02~0.03 ㎎/L, 이디티에이 철나트륨(EDTA FeNa) 30~40 ㎎/L, 붕산(H3BO3) 5~7 ㎎/L, 요오드화 칼륨(KI) 0.7~0.9 ㎎/L, 황산아연 칠수화물(ZnSO4·7H2O) 7~10 ㎎/L, 황산망간 일수화물(MnSO4·H2O) 15~18 ㎎/L 및 몰리브덴산나트륨 이수화물(Na2MoO4·2H2O) 0.2~0.3 ㎎/L으로 이루어지거나 또는 질산칼륨(KNO3) 2780~2880 ㎎/L, 인산이수소칼륨(KH2PO4) 390~410 ㎎/L, 황산 마그네슘 칠수화물(MgSO4·7H2O) 175~190 ㎎/L, 황산암모늄((NH4)2SO4) 450~480 ㎎/L, 염화칼슘(CaCl2) 120~130 ㎎/L, 이디티에이 철나트륨(EDTA FeNa) 34~38 ㎎/L, 붕산(H3BO3) 1~5 ㎎/L, 요오드화 칼륨(KI) 0.5~1 ㎎/L, 황산아연 칠수화물(ZnSO4·7H2O) 1~2 ㎎/L 및 황산망간 일수화물(MnSO4·H2O) 2~4 ㎎/L으로 이루어진 클로렐라 불가리스(Chlorella vulgaris)의 클로로필 함량 증진용 배지 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항의 배지 조성물을 이용하여 제조한 액체 배지.
  5. 제4항의 액체 배지에 클로렐라 불가리스(Chlorella vulgaris)를 접종하여 배양하는 단계를 포함하는 클로렐라 불가리스(Chlorella vulgaris)를 대량 배양하는 방법.
  6. 제4항의 액체 배지에 클로렐라 불가리스(Chlorella vulgaris)를 접종하고, 액체 배지 기준으로 유기 탄소원으로 2~4 %(w/v)의 자당(sucrose)을 첨가하고 빛을 조사하여 배양하는 단계를 포함하는 클로렐라 불가리스(Chlorella vulgaris)를 대량 배양하는 방법.
  7. 제4항의 액체 배지에 클로렐라 불가리스(Chlorella vulgaris)를 접종하고, 액체 배지 기준으로 탄소원으로 2~4 %(w/v)의 자당(sucrose)을 첨가하고 비타민 또는 식물 호르몬을 첨가하여 배양하는 단계를 포함하는 클로렐라 불가리스(Chlorella vulgaris)를 대량 배양하는 방법.
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11262336A (ja) * 1998-03-16 1999-09-28 Sanyo Electric Co Ltd 藻類増殖方法
KR20010101212A (ko) * 1998-12-17 2001-11-14 사토 야스히로 고클로로필함유 내염성 클로렐라
KR20040064243A (ko) * 2004-05-14 2004-07-16 최점출 녹색 담수 클로렐라의 배양방법과 조성물
KR20040101854A (ko) * 2003-05-27 2004-12-03 학교법인 한양학원 규소 또는 철을 배제시킨 담수 녹조 클로렐라 고밀도배양배지

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11262336A (ja) * 1998-03-16 1999-09-28 Sanyo Electric Co Ltd 藻類増殖方法
KR20010101212A (ko) * 1998-12-17 2001-11-14 사토 야스히로 고클로로필함유 내염성 클로렐라
KR20040101854A (ko) * 2003-05-27 2004-12-03 학교법인 한양학원 규소 또는 철을 배제시킨 담수 녹조 클로렐라 고밀도배양배지
KR20040064243A (ko) * 2004-05-14 2004-07-16 최점출 녹색 담수 클로렐라의 배양방법과 조성물

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