KR101218086B1

KR101218086B1 - Feed for fish culture and method making of feed for fish culture

Info

Publication number: KR101218086B1
Application number: KR1020090076476A
Authority: KR
Inventors: 이승완; 박대훈; 김나래; 유제숙
Original assignee: 이승완
Priority date: 2009-08-19
Filing date: 2009-08-19
Publication date: 2013-01-03
Also published as: KR20110018975A

Abstract

본 발명은 단백질원과, 지방원, 및 탄수화물원을 주 성분으로 한 양어사료 분말 96.5~99중량%에 무 알콜 수용성 프로폴리스1~3.5중량%을 첨가하되, 채집한 벌집에 물, C1 내지 C4 저급 알콜을 가하여 꿀과 프로폴리스를 분리하는 단계와, 상기 분리된 프로폴리스를 감압농축하여 프로폴리스 농축액을 수득하는 단계와, 상기 프로폴리스 농축액을 감압농축기를 이용하여 무 알콜 수용성으로 분리하는 단계와, 상기 무 알콜 수용성 프로폴리스1~3.5중량%을 단백질원과, 지방원, 및 탄수화물원을 주 성분으로 한 양어사료 분말 96.5~99중량%에 첨가하여 배합하는 단계와, 상기 배합된 사료를 1~3㎜ 크기로 압출 성형하는 단계, 및 상기 압출 성형된 사료를 자연건조 시키는 단계를 포함하는 양어사료 및 그 제조방법에 관한 것이다.The present invention adds 1 to 3.5% by weight of non-alcoholic water-soluble propolis to 96.5 to 99% by weight of fish feed powder mainly containing protein, fat and carbohydrate sources, and water, C1 to C4 to the collected honeycomb. Separating honey and propolis by adding a lower alcohol, concentrating the separated propolis under reduced pressure to obtain a propolis concentrate, and separating the propolis concentrate into an alcohol-free aqueous solution using a reduced pressure concentrator; , 1 to 3.5% by weight of the alcohol-free water-soluble propolis is added to 96.5 to 99% by weight of a fish feed powder containing a protein source, a fat source, and a carbohydrate source as a main ingredient, and the blended feed 1 The present invention relates to a fish feed comprising the step of extruding to a size of ˜3 mm, and a step of naturally drying the extruded feed.

양어사료 및 그 제조방법, 프로폴리스(Propolis) Fish farming and manufacturing method, Propolis

Description

Fish farming and manufacturing method {FEED FOR FISH CULTURE AND METHOD MAKING OF FEED FOR FISH CULTURE}

본 발명은 양어사료 및 그 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 프로폴리스를 양어사료에 첨가하여 항균효과, 체중 증가, 체조성 변화, 면역증강과 내병원성 증가의 기능을 얻는 양어사료 및 그 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a fish farming feed and a method of manufacturing the same, more specifically, to a fish farming feed to obtain a function of antimicrobial effect, weight gain, gymnastic change, immune enhancement and pathogenic resistance by adding propolis to fish farming feed It is about.

일반적으로, 가축이나 어류의 사료에는 성장을 촉진하고 질병을 예방하기 위해서 항생제를 첨가하고 있다.In general, antibiotics are added to feed for livestock and fish to promote growth and prevent disease.

하지만, 항생제가 첨가된 사료를 섭취한 가축과 어류를 사람이 섭취할 경우 인체에 항생제에 대한 내성이 생기는 문제점이 있었다.However, when humans ingested livestock and fish ingested with the feed of antibiotics, there was a problem that the human body is resistant to antibiotics.

따라서, 최근 화학제제가 아닌 친환경적인 양어 사료 첨가제에 대한 관심이 집중되고 있고, 양식 어류의 육질개선, 성장 촉진과 내병성을 향상시킴과 동시에 사료유실을 최소화하기 위한 첨가제의 필요성이 대두되고 있다.Therefore, attention has recently been focused on environmentally friendly fish feed additives, not chemicals, and the need for additives to minimize feed loss while improving meat quality, promoting growth and disease resistance of farmed fish.

상기한 종래 문제점을 해결하기 위한 본 발명의 목적은 프로폴리스를 첨가하여 항균효과, 체중 증가, 체조성의 변화, 면역증강효과, 및 내병원성 증가 효과를 갖는 양어사료 및 그 제조방법을 제공하는 데 있다. An object of the present invention for solving the above-mentioned conventional problems is to provide a fish farming feed having a antimicrobial effect, weight gain, gymnastic change, immune enhancing effect, and pathogenic resistance by adding propolis and a method for producing the same .

상기한 종래 문제점을 해결하고 상기 목적을 달성하기 위한 본 발명에 따른 양어사료는 단백질원 70 ~ 75 중량%와, 지방원 8 ~ 10 중량%와, 탄수화물원 10 ~ 15 중량%, 및 비타민 또는 미네랄 4 ~ 6 중량%로 이루어지는 양어사료 분말 96.5~99중량%에 무 알콜 수용성 프로폴리스1~3.5중량%을 첨가하되, 상기 단백질원은 어분, 오징어 간분, 카제인 중 적어도 둘 이상을 사용하고, 상기 지방원은 어유, 대두유 중 적어도 어느 하나 이상을 사용하며, 상기 탄수화물원은 전분을 사용하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 양어사료 제조방법은 채집한 벌집에 물과 C1 내지 C4 저급 알콜을 벌집 중량의 2~10배로 첨가하여 꿀과 프로폴리스를 분리하는 단계와, 상기 분리된 프로폴리스를 35℃~55℃의 온도에서 감압농축하여 프로폴리스 농축액을 수득하는 단계와, 상기 프로폴리스 농축액을 감압농축기를 이용하여 무 알콜 수용성으로 분리하는 단계와, 상기 무 알콜 수용성 프로폴리스1~3.5중량%을 단백질원 70 ~ 75 중량%와, 지방원 8 ~ 10 중량%와, 탄수화물원 10 ~ 15 중량%, 및 비타민 또는 미네랄 4 ~ 6 중량%로 이루어지는 양어사료 분말 96.5~99중량%에 첨가하여 배합하는 단계와, 상기 배합된 사료를 1~3㎜ 크기로 압출 성형하는 단계, 및 상기 압출 성형된 사료를 직사광선을 피한 서늘한 곳에서 자연건조 시키는 단계로 이루어지되, 상기 양어사료 분말의 단백질원은 어분, 오징어 간분, 카제인 중 적어도 둘 이상을 사용하고, 지방원은 어유, 대두유 중 적어도 하나 이상을 사용하며, 탄수화물원은 전분을 사용하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 양어사료 제조방법에서, 상기 프로폴리스 농축액 수득단계는 30℃ 내지 100℃의 온도 범위 내에서 추출하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 양어사료 제조방법에서, 상기 프로폴리스 농축액 수득단계는 1일 내지 5일 범위 내에서 추출하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 양어사료 제조방법에서, 상기 프로폴리스 농축액 수득단계는 2회 내지 5회 반복하여 추출하는 것을 특징으로 한다.Fish farming according to the present invention to solve the above problems and achieve the above object is 70 to 75% by weight protein source, 8 to 10% by weight fat source, 10 to 15% by weight carbohydrate source, and vitamins or minerals 1 to 3.5% by weight of alcohol-free water-soluble propolis is added to 96.5 to 99% by weight of fish feed powder consisting of 4 to 6% by weight, wherein the protein source uses at least two or more of fishmeal, squid liver powder and casein, and the fat The raw material uses at least one of fish oil and soybean oil, and the carbohydrate source is characterized by using starch.
Fish production method according to the present invention is the step of separating the honey and propolis by adding water and C1 to C4 lower alcohol 2 to 10 times the weight of the honeycomb to the collected honeycomb, and the separated propolis 35 ℃ ~ 55 Concentrating under reduced pressure at a temperature of ℃ to obtain a propolis concentrate, and separating the propolis concentrate with a non-alcoholic water-soluble using a reduced pressure concentrator, 1 to 3.5% by weight of the alcohol-free water-soluble propolis protein source 70 Adding to 75% by weight, 8 to 10% by weight of fat source, 10 to 15% by weight of carbohydrate source, and 96.5 to 99% by weight of fish feed powder consisting of 4 to 6% by weight of vitamins or minerals; Extruding the blended feed to a size of 1 to 3 mm, and drying the extruded feed in a cool place away from direct sunlight, wherein the protein source of the fish feed powder is , Using squid ganbun, at least two of the casein and the fat source, and using at least one or more of fish oil, soybean oil, carbohydrate source is characterized by using starch.
In the method of preparing fish feed of the present invention, the propolis concentrate obtaining step is characterized in that the extraction within the temperature range of 30 ℃ to 100 ℃.
In the method of preparing fish farming of the present invention, the propolis concentrate obtaining step is characterized in that the extraction within the range of 1 day to 5 days.
In the method of preparing fish feed of the present invention, the propolis concentrate obtaining step is characterized in that the extraction is repeated 2 to 5 times.

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상기한 바와 같이, 본 발명의 양어사료 및 그 제조방법은 프로폴리스를 유효성분으로 함유함으로써 항균, 체중 증가, 체조성의 변화, 면역증강, 및 내병원성을 향상시키는 효과가 있다. As described above, the fish farming feed of the present invention and the preparation method thereof have the effect of improving antibacterial, weight gain, gymnastic change, immune enhancement, and pathogenic resistance by containing propolis as an active ingredient.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명에 따른 양어사료 제조방법을 상세히 설명하면 다음과 같다.Hereinafter, with reference to the accompanying drawings will be described in detail a method for manufacturing fish farming according to the present invention.

본 발명은 사료 분말에 프로폴리스를 첨가하여 양어사료를 제조한다.The present invention prepares a fish feed by adding propolis to the feed powder.

여기서, 상기 프로폴리스는 무 알콜 수용성인 것이 바람직하나 이에 한정되 지 않는다. 또한, 상기 양어사료는 뱀장어 양어용을 위한 것으로 사용되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.Here, the propolis is preferably alcohol-free but is not limited thereto. In addition, the fish feed is preferably used for eel fish farming, but is not limited thereto.

상기 양어사료의 제조공정은 하기와 같은 단계를 포함하는 방법으로 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The manufacturing process of the fish feed is preferably prepared by a method including the following steps, but is not limited thereto.

본 발명에 따른 양어사료는 단백질원과, 지방원, 및 탄수화물원을 주 성분으로 한 양어사료 분말 96.5~99중량%에 무 알콜 수용성 프로폴리스1~3.5중량%을 첨가한다.Fish farming according to the present invention is added to 16.5% to 3.5% by weight of alcohol-free water-soluble propolis to 96.5 ~ 99% by weight of fish farming powder containing a protein source, a fat source, and a carbohydrate source.

여기서, 상기 양어사료 분말은 단백질원 70 ~ 75 중량%와, 지방원 8 ~ 10 중량%와, 탄수화물원 10 ~ 15 중량%, 및 비타민 또는 미네랄 4 ~ 6 중량%로 이루어진다.Here, the fish feed powder is composed of 70 to 75% by weight protein source, 8 to 10% by weight fat source, 10 to 15% by weight carbohydrate source, and 4 to 6% by weight vitamin or mineral.

이때, 상기 단백질원은 어분, 오징어 간분, 카제인 중 적어도 어느 하나 이상을 사용하고, 상기 지방원은 어유, 대두유 중 적어도 어느 하나 이상을 사용하며, 상기 탄수화물원은 전분을 사용한다.In this case, the protein source uses at least one or more of fish meal, squid liver flour, casein, the fat source uses at least one or more of fish oil, soybean oil, the carbohydrate source uses starch.

도 1은 본 발명에 따른 양어사료 제조방법을 나타낸 순서도이다.1 is a flow chart showing a method for producing fish feed according to the present invention.

도 1에 도시한 바와 같이 본 발명에 따른 양어사료 제조방법은 채집한 벌집에 물, C1 내지 C4 저급 알콜을 가하여 꿀과 프로폴리스를 분리하는 단계(S110)와, 상기 분리된 프로폴리스를 감압농축하여 프로폴리스 농축액을 수득하는 단계(S120)와, 상기 프로폴리스 농축액을 감압농축기를 이용하여 무 알콜 수용성으로 분리하는 단계(S130)와, 상기 무 알콜 수용성 프로폴리스1~3.5중량%을 단백질원과, 지방원, 및 탄수화물원을 주 성분으로 한 양어사료 분말 96.5~99중량%에 첨가하여 배합 하는 단계(S140)와, 상기 배합된 사료를 1~3㎜ 크기로 압출 성형하는 단계(S150), 및 상기 압출 성형된 사료를 자연건조 시키는 단계(S160)를 포함한다.As shown in FIG. 1, the method for preparing fish farming according to the present invention is to separate honey and propolis by adding water, C1 to C4 lower alcohol to the collected honeycomb (S110), and decompressing the separated propolis under reduced pressure. Obtaining a propolis concentrate (S120), separating the propolis concentrate into an alcohol-free aqueous solution using a reduced pressure concentrator (S130), and 1 to 3.5% by weight of the alcohol-free water-soluble propolis with a protein source. , A fat source, and a carbohydrate feed powder containing 96.5 to 99% by weight of the main ingredient is added to the compounding step (S140), and the step of extrusion molding the blended feed to a size of 1 to 3mm (S150), And naturally drying the extruded feed (S160).

여기에서, 상기 물, C1 내지 C4 저급 알콜은 상기 벌집 중량의 2~10배를 첨가하여 꿀과 프로폴리스를 분리하는 것이 바람직하며, 3배 내지 5배를 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.Here, the water, C1 to C4 lower alcohol is preferably added to separate honey and propolis by adding 2 to 10 times the weight of the honeycomb, and more preferably extracted by adding 3 to 5 times, but not limited thereto. It doesn't work.

또한, 상기 감압농축은 약 35℃ ~약 55℃의 온도에서 행해진다. 이때, 감압농축은 회전식 감압농축기(Rotary Vacuum Evaporator)을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.In addition, the decompression concentration is carried out at a temperature of about 35 ℃ to about 55 ℃. In this case, the decompression concentration is preferably a rotary vacuum evaporator, but is not limited thereto.

그리고, 상기 프로폴리스 농축액 수득단계는 30℃ 내지 100℃의 온도 범위 내에서 추출하는 것이 바람직하며, 50℃ 내지 80℃인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.In addition, the propolis concentrate obtaining step is preferably extracted within a temperature range of 30 ° C to 100 ° C, more preferably 50 ° C to 80 ° C, but is not limited thereto.

이때, 상기 프로폴리스 농축액 수득단계는 1일 내지 5일 범위 내에서 추출하는 것이 바람직하며, 2일 내지 3일인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.At this time, the propolis concentrate obtaining step is preferably extracted within the range of 1 day to 5 days, more preferably 2 to 3 days, but is not limited thereto.

상기 프로폴리스 농축액 수득단계는 2회 내지 5회 반복 추출하는 것이 바람직하며, 3회 내지 4회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The propolis concentrate obtaining step is preferably repeated extraction 2 to 5 times, more preferably 3 to 4 times repeated extraction is not limited thereto.

이때, 상기 단백질원은 어분, 오징어 간분, 카제인 중 적어도 어느 하나 이상을 사용하고, 상기 지방원은 어유, 대두유 중 적어도 어느 하나 이상을 사용하 며, 상기 탄수화물원은 전분을 사용한다.At this time, the protein source uses at least one or more of fish meal, squid liver flour, casein, the fat source uses at least one or more of fish oil, soybean oil, the carbohydrate source uses starch.

또한, 상기 자연건조는 직사광선을 피한 서늘한 곳에서 이루어지는 것이 바람직하다.In addition, the natural drying is preferably made in a cool place away from direct sunlight.

본 발명은 프로폴리스를 첨가한 양어사료의 항균활성을 알아보기 위해 Edwardsiella tarda (KCTC 12267), Vibrio alginolyticus (KCTC 2472), Staphylococcus aureus subsp. aureus (KCTC 1621) 3종으로 한국생명공학연구원 유전자은행(KTCT)에서 분양 받아 실험에 사용하였으며, 각기 다른 배양액을 이용하여 incubator에서 하룻밤 배양하여 접종군주로 사용하였다(표 2 참조). 항균 활성측정은 Disc diffusion method (paper disc: Ø 6mm, Whatman)로 측정한 결과 Edwardsiella tarda (KCTC 12267)에 대해 가장 높고 Vibrio alginolyticus (KCTC 2472), Staphylococcus aureus subsp. aureus (KCTC 1621)의 순으로 나타났다 (표 3 참조). The present invention is to investigate the antimicrobial activity of fish feed with added propolis Edwardsiella tarda (KCTC 12267), Vibrio alginolyticus (KCTC 2472), Staphylococcus aureus subsp. Three kinds of aureus (KCTC 1621) were used in the experiments obtained from the Korea Biotechnology Research Institute Gene Bank (KTCT), and were cultured overnight in incubator using different culture media (see Table 2). Antimicrobial activity was determined by the Disc diffusion method (paper disc: Ø 6 mm, Whatman), which was highest for Edwardsiella tarda (KCTC 12267) and Vibrio alginolyticus (KCTC 2472), Staphylococcus aureus subsp. aureus (KCTC 1621) in that order (see Table 3).

또한, 본 발명은 프로폴리스를 첨가한 양어사료가 치어기 뱀장어 성장에 미치는 영향을 알아보기 위해서, 하기 표1에 표기된 성분을 함유한 양어사료를 이용하였다 (표 1 참조). 양어사료에 0%, 1.25%, 2.5%, 5%, 10%, 20%의 6가지 수준으로 설정하여 사료 내 각 수준별로 첨가한 결과 2.5% 첨가의 경우 유의하게 높았다 (표 4 참조). In addition, the present invention used the fish feed containing the components shown in Table 1 in order to determine the effect of the fish feed added with propolis on the growth of fry eel (see Table 1). Six levels of 0%, 1.25%, 2.5%, 5%, 10%, and 20% were added to the fish farms, which were significantly higher in the case of 2.5% addition (see Table 4).

또한, 본 발명은 프로폴리스를 첨가한 양어사료가 치어기 뱀장어의 체조성에 미치는 영향을 알아보기 위해서, 하기 표1에 표기된 성분을 함유한 양어사료를 이용하였다 (표 1 참조). 양어사료에 0%, 1.25%, 2.5%, 5%, 10%, 20%의 6가지 수준 으로 설정하여 사료 내 각 수준별로 첨가한 결과 전어체의 수분 함량에 있어서, 사료 내 프로폴리스 10% 첨가군은 대조군을 포함한 나머지 모든 첨가구들에 비해 유의하게 높았고(P<0.05), 20% 첨가군은 10% 첨가군을 제외한 나머지 실험구들에 비해 유의하게 높은 것으로 나타났다(P<0.05). 그리고, 프로폴리스 5% 첨가군은 1.25%와 2.5% 첨가군에 비해 유의하게 높은 반면, 대조군과는 유의한 차이가 없는 것으로 나타났다(P>0.05)(표 5 참조).In addition, the present invention used the fish feed containing the ingredients shown in Table 1 in order to determine the effect of the propolis-added fish feed on the gymnastics of the juvenile eel (see Table 1). Six levels of 0%, 1.25%, 2.5%, 5%, 10% and 20% were added to the fish feed and added to each level in the feed. The group was significantly higher (P <0.05) than all the other groups including the control group, and the 20% group was significantly higher than the other groups except the 10% group (P <0.05). In addition, the 5% addition group of propolis was significantly higher than the 1.25% and 2.5% addition groups, but not significantly different from the control group (P> 0.05) (see Table 5).

또한, 본 발명은 프로폴리스를 첨가한 양어사료가 치어기 뱀장어의 면역기능에 미치는 영향을 알아보기 위해서, 하기 표1에 표기된 성분을 함유한 양어사료를 이용하였다 (표 1 참조). 양어사료에 0%, 1.25%, 2.5%, 5%, 10%, 20%의 6가지 수준으로 설정하여 사료 내 각 수준별로 첨가한 결과 치어기 뱀장어의 혈장 내 헤마토크리트(Hematocrit)에 있어서, 사료 내 프로폴리스 0% ~ 5% 첨가군은 39.2% ~ 39.9%로 프로폴리스 10% 첨가군과 20% 첨가군의 25.6% ~ 30.8%에 비해 유의하게 높은 반면(P<0.05), 0% ~ 5% 첨가군들에 대한 유의한 차이는 없었다(P>0.05). 그리고, 사료 내 프로폴리스 10% 첨가군과 20% 첨가군간의 유의한 차이는 없는 것으로 나타났다(P>0.05). 또한, 혈장 내 라이소자임 활성(Plasma lysozyme activity)에 있어서, 사료 내 프로폴리스 2.5%와 5% 첨가군의 활성(105.7~106.0 units/mL)은 0%, 1.25%, 10%, 20% 첨가군들의 활성(61.5~77.5 units/mL)에 비해 유의하게 높은 반면(P<0.05), 2.5%와 5% 첨가군에 대한 유의한 차이는 없었다(P>0.05). 그리고 사료 내 프로폴리스0%, 1.25%, 10%, 20% 첨가군간의 유의한 차이는 없는 것으로 나타났다 (P>0.05). 체표면의 점액 라이소자임 활성(Mucos lysozyme activity)에 있어 서, 5% 첨가군의 활성(8.4 units/10 cm2)은 0%, 10% 그리고 20% 첨가군의 활성(4.9~6.0 units/10 cm2)에 비해 유의하게 높은 반면 (P<0.05), 1.25%와 2.5% 첨가군의 활성(7.1~7.4 units/10 cm2)과는 유의한 차이가 없었다(P>0.05). 그리고, 사료 내 프로폴리스 2.5% 첨가군의 활성은 20% 첨가군의 활성에 비해 유의하게 높은 반면(P<0.05), 0%, 1.25%, 10% 첨가군과의 활성과는 유의한 차이가 없는 것으로 나타났다(P>0.05) (표 6 참조). In addition, the present invention used fish farm containing the ingredients shown in Table 1 in order to determine the effect of fish feed added with propolis on the immune function of the eel fry (see Table 1). As a result of adding 6 levels of 0%, 1.25%, 2.5%, 5%, 10%, and 20% to the fish feed and adding them to each level in the feed, hematocrit in the plasma of fry eel Propolis 0% ~ 5% added group was 39.2% ~ 39.9%, significantly higher than 25.6% ~ 30.8% of propolis 10% and 20% added group (P <0.05), 0% ~ 5% There was no significant difference between the groups (P> 0.05). In addition, there was no significant difference between the 10% and 20% added groups of propolis in the feed (P> 0.05). In addition, in plasma lysozyme activity, the activity (105.7-106.0 units / mL) of the 2.5% and 5% addition groups of propolis in the feed was 0%, 1.25%, 10%, 20% While significantly higher than the activity (61.5-77.5 units / mL) (P <0.05), there was no significant difference between the 2.5% and 5% addition groups (P> 0.05). There was no significant difference between the 0%, 1.25%, 10%, and 20% dietary supplements (P> 0.05). In the mucosal lysozyme activity of the body surface, the activity of the 5% addition group (8.4 units / 10 cm2) was 0%, 10% and the activity of the 20% addition group (4.9 to 6.0 units / 10 cm2). While significantly higher (P <0.05), there was no significant difference (P> 0.05) from the activity of the 1.25% and 2.5% groups (7.1-7.4 units / 10 cm2). In addition, the activity of the propolis 2.5% addition group was significantly higher than the activity of the 20% addition group (P <0.05), while the activity with the 0%, 1.25%, and 10% addition groups was significantly different. None (P> 0.05) (see Table 6).

또한, 본 발명은 프로폴리스를 첨가한 양어사료가 치어기 뱀장어의 내병성에 미치는 영향을 알아보기 위해서, 하기 표1에 표기된 성분을 함유한 양어사료를 이용하였다 (표 1 참조). 양어사료에 0%, 1.25%, 2.5%, 5%, 10%, 20%의 6가지 수준으로 설정하여 사료 내 각 수준별로 첨가하여 섭취한 치어기 뱀장어에 있어 Edwardsiella tarda FPC 799 균주로 복강 내 주사 후 각 실험구별 누적 생존율을 조사한 공격실험의 결과 프로폴리스 비첨가군인 대조군에서는 접종 1일 후부터 폐사 개체가 확인되어 68%의 누적 생존율을 나타내었고, 접종 2일 후 누적 생존율은 40.5%로 프로폴리스 1.25%, 2.5% 그리고 5% 첨가군에 비해 유의하게 낮은 반면(P<0.05), 고농도의 프로폴리스를 첨가한 10%와 20% 첨가군과 비교 시 유의한 차이가 없는 것으로 확인되었다(P>0.05). 또한, 접종 3일 후 22.5%, 4일 후 18%, 그리고 5일 후 13.6%의 누적 생존율을 나타내어 지속적으로 감소하는 경향을 나타내었고, 접종 10일 후까지 증감 없이 일정하게 유지되는 경향을 나타내었다. 누적 생존율에 있어서, 프로폴리스 1.25%, 2.5% 그리고 5%를 첨가한 군은 대조군과 고농도의 10%와 20%를 첨가한 군에 비해 접종 2일과 3일 후까지 유의하게 높은 것으로 나 타났으나(P<0.05), 접종 4일 이후부터 10일 이후까지는 유의한 차이 없이 높은 경향을 나타내었다(P>0.05). In addition, the present invention used the fish feed containing the components shown in Table 1 in order to determine the effect of the propolis-added fish feed on the disease resistance of the juvenile eel (see Table 1). Intraperitoneal injection with Edwardsiella tarda FPC 799 strains in fry eel taken from each level of feed set at 6 levels of 0%, 1.25%, 2.5%, 5%, 10%, 20% As a result of the attack experiment which investigated the cumulative survival rate by each experimental group, the control group which was not added to the propolis group was confirmed to be 68% cumulative survival rate after 1 day of inoculation, and the cumulative survival rate was 40.5% after 2 days of propolis 1.25. While significantly lower than the%, 2.5% and 5% added groups (P <0.05), there was no significant difference compared to the 10% and 20% added groups with high concentrations of propolis (P> 0.05). ). In addition, cumulative survival rate of 22.5% after 3 days, 18% after 4 days, and 13.6% after 5 days showed a tendency to decrease continuously, and remained constant without increase or decrease until 10 days after the inoculation. . In the cumulative survival rate, the groups added with 1.25%, 2.5% and 5% of propolis were significantly higher until 2 and 3 days after the inoculation compared to the control and high concentration groups of 10% and 20%. (P <0.05), there was a high trend (P> 0.05) without significant difference from 4 days after inoculation to 10 days after inoculation.

그러므로, 본 발명의 프로폴리스를 첨가한 양어사료를 이용하여, 6가지 수준별로 프로폴리스를 첨가한 양어사료를 16주간 공급한 결과 성장과 체조성 및 면역반응에 영향을 미치는 것으로 나타났고, 성장실험 이후 공격실험을 통해 내병성 증대에도 효과가 있는 것으로 확인되어 프로폴리스가 양어사료의 첨가제로 이용될 수 있음을 알 수 있다.Therefore, using the fish feed supplemented with propolis of the present invention, 16 weeks of feeding the fish feed added with propolis by six levels appeared to affect the growth, gymnastics and immune response, after the growth experiment As a result of the aggressive experiments, it was confirmed that it is also effective in increasing disease resistance, indicating that propolis may be used as an additive for fish farming.

본 발명의 양어사료는 상기 프로폴리스 농축액에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.Fish farming of the present invention may further contain at least one active ingredient exhibiting the same or similar function in addition to the propolis concentrate.

본 발명의 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 프로폴리스 농축액을 1 내지 3.5 중량 %로 포함하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The composition of the present invention preferably comprises 1 to 3.5% by weight of the propolis concentrate relative to the total weight of the composition, but is not limited thereto.

본 발명의 프로폴리스 농축액은 양어용 일반사료에 첨가도 가능하며 기타 단일형태로도 사용될 수 있다. 즉, 실제 양어사료 첨가물로 사용할 경우 액상의 형태로 일반사료로 첨가될 수 있으나 환제, 산제, 과립제 및 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 본 발명의 농축액에 적어도 하나 이상의 부형제(예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토오스 및 젤라틴 등)를 섞어 조제된다. 또한, 단일 투여 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제(예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 및 보존제 등)가 포함될 수 있다.Propolis concentrate of the present invention can be added to the general feed for fish farming can also be used in other single forms. That is, when used as a real fish feed additive may be added as a general feed in the form of a liquid, but include pills, powders, granules and capsules, such solid formulations in the concentrate of the present invention at least one or more excipients (for example , Starch, calcium carbonate, sucrose, lactose and gelatin). In addition, single-dose liquid preparations include suspensions, solutions, emulsions, and syrups, and include various excipients (such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives) in addition to commonly used simple diluents, water and liquid paraffin. Can be.

또한, 본 발명은 상기 프로폴리스 농축액을 이용하여 양어사료 첨가물로 이 용하는 방법을 제공한다. In addition, the present invention provides a method for using as a fish feed additive using the propolis concentrate.

또한, 본 발명은 항균활성 증가를 위한 사료첨가제로 이용하는 방법을 제공한다. In addition, the present invention provides a method of using as a feed additive for increasing the antimicrobial activity.

상기 항균활성 증가에 대한 대상균은 Edwardsiella tarda와 Vibrio alginolyticus, Staphylococcus aureus subsp. aureus 등을 대상으로 하나 이에 한정되지 않는다.The target bacteria for the increase of the antimicrobial activity is Edwardsiella tarda, Vibrio alginolyticus, Staphylococcus aureus subsp. aureus and the like, but is not limited thereto.

또한, 본 발명은 뱀장어 치어의 성장 증가를 위한 양어사료로 이용하는 방법을 제공한다. 상기 뱀장어 치료의 성장 증가를 위한 양어사료로 이용되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. In addition, the present invention provides a method for use as a fish feed for the growth of eel fry. Preferably used as fish feed for growth growth of the eel treatment is not limited thereto.

또한, 본 발명은 뱀장어의 면역기능 증가를 위한 양어사료로 이용하는 방법을 제공한다. 상기 뱀장어의 면역기능 증가를 위한 양어사료로 이용되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. In addition, the present invention provides a method for use as fish feed for increasing the immune function of the eel. Preferably used as fish feed for increasing the immune function of the eel is not limited thereto.

상기 면역기능 증가는 혈장 내 라이소자임 활성(Plasma lysozyme activity)의 증가와 체표면 점액 라이소자임 활성(Mucos lysozyme activity)의 증가를 통한 면역기능 증가 목적으로 이용되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The increase in immune function is preferably used for the purpose of increasing immune function through an increase in plasma lysozyme activity and an increase in body surface mucosal lysozyme activity, but is not limited thereto.

또한, 본 발명은 뱀장어의 내병성 증가를 위한 양어사료로 이용하는 방법을 제공한다. In addition, the present invention provides a method for use as fish feed for increased disease resistance of eel.

[실시예] [Example]

이하, 본 발명을 실시 예, 실험 예 및 제조 예를 도면 또는 표를 통하여 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail through Examples, Experimental Examples and Preparation Examples through the drawings or tables.

단, 하기 실시 예, 실험 예 및 제조 예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것이며, 본 발명의 내용이 실시 예, 실험 예 및 제조 예에 의해 한정되는 것은 아니다. However, the following Examples, Experimental Examples, and Production Examples specifically illustrate the present invention, and the content of the present invention is not limited to Examples, Experimental Examples, and Production Examples.

하기 표기된 알파벳 “P”는 프로폴리스(Propolis)를 나타낸다.The letter “P” shown below represents Propolis.

도 1은 본 발명에 따른 양어사료 제조방법을 나타낸 순서도이고, 도 2는 본 발명에 따른 양어사료를 통해 체중의 증가를 나타내는 그래프이며, 도 3은 본 발명에 따른 양어사료를 통해 일간성장율의 변화를 나타내는 그래프이고, 도 4는 본 발명에 따른 양어사료를 통해 단백질효율을 나타내는 그래프이며, 도 5는 본 발명에 따른 양어사료를 통해 생존율의 변화를 나타내는 그래프이다.1 is a flow chart showing a method of manufacturing fish farming according to the present invention, Figure 2 is a graph showing the increase in weight through the fish feed according to the present invention, Figure 3 is a change in daily growth rate through the fish feed according to the present invention 4 is a graph showing the protein efficiency through the fish feed according to the present invention, Figure 5 is a graph showing a change in survival rate through the fish feed according to the present invention.

먼저, 도 1 내지 도 5에 도시한 바와 같이 본 발명에 따른 실시 예, 실험 예 및 제조 예를 설명하면 다음과 같다.First, as illustrated in FIGS. 1 to 5, examples, experimental examples, and manufacturing examples according to the present invention will be described.

[실시예 1] 프로폴리스 첨가한 양어사료의 제조 Example 1 Preparation of Fish Feed Added with Propolis

양어사료 제조방법은 채집한 벌집에 물, C1 내지 C4 저급 알콜을 가하여 꿀과 프로폴리스를 분리하는 단계(S110)와, 상기 분리된 프로폴리스를 감압농축하여 프로폴리스 농축액을 수득하는 단계(S120)와, 상기 프로폴리스 농축액을 감압농축기를 이용하여 무 알콜 수용성으로 분리하는 단계(S130)와, 상기 무 알콜 수용성 프로폴리스1~3.5중량%을 단백질원과, 지방원, 및 탄수화물원을 주 성분으로 한 양어사료 분말 96.5~99중량%에 첨가하여 배합하는 단계(S140)와, 상기 배합된 사료를 1~3㎜ 크기로 압출 성형하는 단계(S150), 및 상기 압출 성형된 사료를 자연건조 시키는 단계(S160)로 이루어진다.Fish production method is a step of separating the honey and propolis by adding water, C1 to C4 lower alcohol to the collected honeycomb (S110), and concentrating the separated propolis under reduced pressure to obtain a propolis concentrate (S120) And separating the propolis concentrate into an alcohol-free aqueous solution using a reduced pressure concentrator (S130), and 1 to 3.5% by weight of the alcohol-free water-soluble propolis as a protein source, a fat source, and a carbohydrate source. Adding to the fish feed powder 96.5 ~ 99% by weight of the blending step (S140), the step of extruding the blended feed to the size of 1 ~ 3mm (S150), and the step of naturally drying the extruded feed It is made of (S160).

여기에서, 상기 물, C1 내지 C4 저급 알콜은 상기 벌집 중량의 2~10배를 첨가하여 꿀과 프로폴리스를 분리하는 것이 바람직하고, 3배 내지 5배를 첨가하여 분리하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.Here, the water, C1 to C4 lower alcohol is preferably added to separate honey and propolis by adding 2 to 10 times the weight of the honeycomb, and more preferably to separate by adding 3 to 5 times, but not limited thereto. It doesn't work.

이때, 상기 프로폴리스 농축액 수득단계는 1일 내지 5일 범위 내에서 추출하는 것이 바람직하며, 2일 내지 3일인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. At this time, the propolis concentrate obtaining step is preferably extracted within the range of 1 day to 5 days, more preferably 2 to 3 days, but is not limited thereto.

상기 프로폴리스 농축액 수득단계는 2회 내지 5회 반복 추출하는 것이 바람직하며, 3번 내지 4번 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The propolis concentrate obtaining step is preferably repeated extraction 2 to 5 times, more preferably 3 to 4 times repeated extraction is not limited thereto.

또한, 상기 자연건조는 직사광선을 피한 서늘한 곳에서 이루어지는 것이 바 람직하다.In addition, the natural drying is preferably done in a cool place away from direct sunlight.

[1-1] 프로폴리스의 에탄올 농축액의 제조 [1-1] Preparation of Ethanol Concentrate of Propolis

본 발명은 벌집을 브라질, 중국, 국내 등의 산지로부터 채집 혹은 구입하였다. 상기 프로폴리스(벌집)를 직사광선을 피한 서늘한 곳에서 완전히 건조한 후 시표 100 g을 에탄올 400㎖로 40℃, 500rpm로 8시간 방치하여 두 번 반복 추출하였다. 상기 농축액을 1㎛ (pore size)의 여과지로 여과한 후 상등액을 40 ℃ 감압 하에 농축시켜서 에탄올 농축액(20 g, 수득율: 20%)을 수득하였고 실험에 사용할 때까지 냉암소에 보관하였다. In the present invention, the honeycomb is collected or purchased from producers in Brazil, China, Korea, and the like. After completely drying the propolis (honeycomb) in a cool place away from direct sunlight, 100 g of the sample was extracted twice with 400 ethanol at 40 ° C. and 500 rpm for 8 hours. The concentrate was filtered through a filter paper of 1 μm (pore size), and then the supernatant was concentrated under reduced pressure at 40 ° C. to obtain an ethanol concentrate (20 g, yield: 20%) and stored in a cool dark until use in experiments.

[1-2] 수용성 프로폴리스의 제조 [1-2] Preparation of Water Soluble Propolis

수용성 프로폴리스의 제조는 (주)서울 프로폴리스가 취득한 특허 “수용성 프로폴리스의 제조방법(국내, 등록번호 제0550165호, 출원일: 2006. 2. 1) 및 (일본, 등록번호 제 4113520호, 2008. 4. 18)”에 의해 제조되었으며 실험에 사용할 때까지 상온에 보관하였다.The preparation of water soluble propolis is obtained by Seoul Propolis Co., Ltd., entitled “Production method of water soluble propolis (Domestic No. 0050165, filing date: Feb. 1, 2006) and (Japan, No. 4113520, 2008). 4. 18 ”” and stored at room temperature until use in experiments.

[1-3] 실험어 및 사육설계 [1-3] Experimental Fish and Breeding Design

본 발명은 실험어를 전라남도에 소재한 P양만장으로부터 구입한 뱀장어 치어를 국립 군산대학교 수산과학연구소 내 실험실로 운반하여 500 L 수조에서 실험환경에 적응할 수 있도록 4주간 예비사육 후, 평균 어체중 7.7±0.22 g (mean±SD)인 치어기 뱀장어를 100 L 사각수조에 각 실험군별 30마리씩 3반복으로 무작위 배치하여 16주간 사육실험을 진행하였다. 각 실험 수조는 순환 여과식으로 유수량은 3~4 L/min으로 조절하였고, 에어레이션을 통해 충분한 산소를 공급하였으며, 평균수온 은 25±1℃를 유지하였다. 일일 사료공급량은 전 실험기간 동안 1일 2회 어체중의 3~4% (10:00,18:00)로 공급하였고, 사료공급 30~60분 후 남은 사료는 수거하여 -20℃에서 보관하였다. In the present invention, the eel purchased from P Yang Manjang in Jeollanam-do is transported to a laboratory in the National Fisheries Research and Development Institute of Kunsan National University after preliminary breeding for 4 weeks to adapt to the experimental environment in a 500 L tank. A group of 0.22 g (mean ± SD) juvenile eel was randomly placed in a 100 L square tank of 30 rats in each experiment in three replicates for 16 weeks. Each tank was circulating and the flow rate was adjusted to 3 ~ 4 L / min, sufficient oxygen was supplied through aeration, and the average water temperature was maintained at 25 ± 1 ℃. Daily feed was supplied at 3 ~ 4% (10: 00,18: 00) of fish weight twice a day during the entire experimental period, and the remaining feed was collected and stored at -20 ℃ after 30 ~ 60 minutes of feeding. .

[1-4] 실험사료 및 실험설계 [1-4] Experimental Feed and Experimental Design

본 발명은 하기의 [표 1]과 같은 조성의 실험사료를 사용하였다. 사료는 단백질원으로 어분, 오징어 간분 및 카제인을 사용하였고, 지방원으로는 어유와 대두유를 사용하였으며, 탄수화물원으로는 전분을 사용하여 단백질 약55%, 지방질 약15%, 회분 약30%, 및 가용에너지 약17.7 kJ/g로 조절하였다. 상기의 [실시예1]의 양어사료에 0%, 1.25%, 2.5%, 5%, 10%, 20%의 6가지 수준으로 설정하여 첨가하여 실험사료를 배합하였다. 모든 실험사료는 원료를 혼합하여 펠렛기로 압출 성형하여 제조하였고(diameter 1 mm), 자연건조 시킨 다음 밀봉하여 -20℃에서 보관하면서 실험어에 공급하였다.The present invention used the experimental feed of the composition as shown in Table 1 below. For food, fish meal, squid liver powder and casein were used as protein sources, fish oil and soybean oil were used as fat sources, starch was used as carbohydrate sources, about 55% protein, about 15% fat, about 30% ash, and The available energy was adjusted to about 17.7 kJ / g. Experimental feed was formulated by adding six levels of 0%, 1.25%, 2.5%, 5%, 10%, 20% to the fish farming of [Example 1]. All experimental feeds were prepared by mixing the raw materials and extruding with a pellet machine (diameter 1 mm), dried naturally, and then sealed and stored at -20 ° C and fed to the experimental fish.

[실험예 2] 양어용 프로폴리스 사료첨가제에 의한 항균효과 측정 Experimental Example 2 Measurement of Antimicrobial Effects by Propolis Feed Additives for Fish Farming

[2-1] 균주의 구입 및 배양 [2-1] Purchase and Cultivation of Strains

본 발명은 한국생명공학연구원 유전자은행 (KTCT)로부터 Edwardsiella tarda (KCTC 12267), Vibrio alginolyticus (KCTC 2472), Staphylococcus aureus subsp. aureus (KCTC 1621) 등 3종을 분양 받아 하기 [표 2]의 생육조건에 따라 배양하였다.The present invention is derived from Edwardsiella tarda (KCTC 12267), Vibrio alginolyticus (KCTC 2472), Staphylococcus aureus subsp. Three species, including aureus (KCTC 1621), were distributed and cultured according to the growth conditions shown in Table 2 below.

[2-2] 프로폴리스의 항균 활성실험 (Antibacterial activity test) [2-2] Antibacterial activity test of propolis

본 발명은 상기 실험예 [2-1]에서 배양한 균주와 생육조건을 이용하여 배양기에서 하룻밤 배양하여 접종균주로 사용하였다. 항균 활성측정은 디스크확산법 (종이디스크: Ø 6mm, Whatman)로 측정하였다. 먼저 pour-plate method에 의해 45℃로 조제된 멸균배지 15mL에 전 배양액 0.1mL를 옮겨 잘 혼합시킨 후 지름이 8.8cm인 페트리디시에 넣고 굳혔다. 여기에 종이디스크를 올린 뒤 시료를 흡수시킨 다음 배양기에서 배양하여 종이디스크 주위의 억제영역의 크기로 항균 활성정도를 측정하였다. The present invention was used as inoculation strains by culturing overnight in an incubator using the strains and growth conditions cultured in Experimental Example [2-1]. Antimicrobial activity was measured by disk diffusion method (paper disk: Ø 6 mm, Whatman). First, 0.1mL of the whole culture solution was transferred to 15mL of the sterilized medium prepared at 45 ° C. by the pour-plate method, mixed well, and placed in a Petri dish having a diameter of 8.8 cm. Here, the paper disks were raised, the samples were absorbed, and then cultured in an incubator, and the antimicrobial activity was measured by the size of the inhibition zone around the paper disks.

그 결과, 하기 [표 3]에서 보는 바와 같이 수용성 프로폴리스에서 Edwardsiella tarda → Vibrio alginolyticus → Staphylococcus aureus의 순으로 항균활성을 나타내었다.As a result, as shown in the following [Table 3] showed the antimicrobial activity in the order of Edwardsiella tarda → Vibrio alginolyticus → Staphylococcus aureus in water-soluble propolis.

[실험예 3] 프로폴리스를 첨가한 양어사료의 체중증가 실험 Experimental Example 3 Weight Gain Test of Fish Farm with Propolis Added

본 발명은 16주간의 사육실험 종료 후, 어체 측정을 위해 실험어를 24시간 절식시킨 후 90% 에틸렌글라이콜 페닐에테르 (ethylene glycol phenyl ether, 200 ppm)로 마취시켜 수준별 실험어의 전체무게를 측정하였고, 이를 통해 증체율, 사료효율, 일간성장률, 단백질전환효율 및 생존율을 조사하였다. 상기 측정 항목들의 계산 [수학식 1]은 하기와 같다. In the present invention, after the 16-week breeding experiment, the fish were fasted for 24 hours to measure the body, and then anesthetized with 90% ethylene glycol phenyl ether (200 ppm) to determine the total weight of the fish by level. We measured the weight gain, feed efficiency, daily growth rate, protein conversion efficiency and survival rate. Calculation of the measurement items [Equation 1] is as follows.

그 결과, 하기 [표 4]에서 보는 바와 같이 증체율에 있어서 치어기 뱀장어의 사료 내 프로폴리스 2.5% (P2.5) 첨가군은 대조군 (0%;P0)과 5%(P5), 10%(P10),그리고 20%(P20) 첨가군에 비해 유의하게 높은 반면(P<0.05), 1.25%(P1.25) 첨가군과는 유의한 차이가 없었다(P>0.05). 그리고 1.25%(P1.25) 첨가군은 10%(P10)와 20%(P20) 첨가군에 비해 유의하게 높은 반면(P<0.05), 0%(P0)와 5%(P5) 첨가군과는 유의한 차이가 없는 것으로 나타났다(P>0.05).As a result, as shown in the following [Table 4], the addition of 2.5% (P2.5) propolis in the feed of the juvenile eel was increased in the control group (0%; P0), 5% (P5), and 10% ( P10), and significantly higher than the 20% (P20) addition group (P <0.05), but did not significantly differ from the 1.25% (P1.25) addition group (P> 0.05). The 1.25% (P1.25) added group was significantly higher than the 10% (P10) and 20% (P20) added groups (P <0.05), while the 0% (P0) and 5% (P5) added groups Showed no significant difference (P> 0.05).

일간성장률에 있어서 치어기 뱀장어의 사료 내 프로폴리스 2.5% (P2.5) 첨가군은 대조구(0%; P0)와 5%(P5), 10%(P10) 그리고 20%(P20) 첨가군에 비해 유의하게 높은 반면(P<0.05), 1.25% (P1.25) 첨가군과는 유의한 차이가 없었다(P>0.05). 그리고 1.25% (P1.25) 첨가군은 5%(P5) 10%(P10), 20%(P20) 첨가군에 비해 유의하게 높은 반면(P<0.05), 0%(P0) 첨가군과는 유의한 차이가 없는 것으로 나타났다(P>0.05). In the daily growth rate, the control group added 2.5% (P2.5) of propolis in the fry diets to the control (0%; P0), 5% (P5), 10% (P10) and 20% (P20) groups. It was significantly higher (P <0.05), but there was no significant difference (P> 0.05) from the 1.25% (P1.25) group. The 1.25% (P1.25) group was significantly higher than the 5% (P5), 10% (P10), and 20% (P20) groups (P <0.05), but not with the 0% (P0) group. There was no significant difference (P> 0.05).

단백질전환효율에 있어서 치어기 뱀장어의 사료 내 프로폴리스 2.5% (P2.5) 첨가군은 대조군 (0%; P0)과 5%(P5), 10%(P10), 그리고 20% (P20) 첨가군에 비해 유의하게 높은 반면(P<0.05), 1.25%(P1.25) 첨가군과는 유의한 차이가 없었다(P>0.05). 그리고, 1.25% (P1.25) 첨가군은 5% (P5), 10%(P10), 20%(P20) 첨가군에 비해 유의하게 높은 반면(P<0.05), 0% (P0)첨가군과는 유의한 차이가 없는 것으로 나타났다(P>0.05). In terms of protein conversion efficiency, the control group (0%; P0), 5% (P5), 10% (P10), and 20% (P20) were added to the propolis added group of propolis in the feed of juvenile eel. While significantly higher than the group (P <0.05), there was no significant difference (P> 0.05) from the 1.25% (P1.25) group. And, 1.25% (P1.25) added group was significantly higher than 5% (P5), 10% (P10), 20% (P20) added group (P <0.05), 0% (P0) added group There was no significant difference between and (P> 0.05).

생존율에 있어서 치어기 뱀장어의 사료 내 프로폴리스의 첨가수준에 따른 각 실험군간의 유의한 차이는 없는 것(P>0.05)을 알 수 있다(표 4). There was no significant difference (P> 0.05) between the experimental groups according to the level of propolis in the feed of juvenile eel in the survival rate (Table 4).

도 6은 본 발명에 따른 양어사료를 통해 전어체의 수분변화를 나타내는 그래프이고, 도 7은 본 발명에 따른 양어사료를 통해 전어체의 단백질조성의 변화를 나타내는 그래프이며, 도 8은 본 발명에 따른 양어사료를 통해 전어체의 지방질 조성의 변화를 나타내는 그래프이고, 도 9는 본 발명에 따른 양어사료를 통해 전어체의 조회분의 변화를 나타내는 그래프이며, 도 10은 본 발명에 따른 양어사료를 통해 전어체의 포화지방산 조성의 변화를 나타내는 그래프이고, 도 11은 본 발명에 따른 양어사료를 통해 전어체의 단순불포화지방산 조성의 변화를 나타내는 그래프이며, 도 12는 본 발명에 따른 양어사료를 통해 전어체의 다불포화지방산 조성의 변화를 나타내는 그래프이고, 도 13은 본 발명에 따른 양어사료를 통해 전어체의 고도불포화지방산 조성의 변화를 나타내는 그래프이다. Figure 6 is a graph showing the change in moisture of the whole fish word through the fish farming fish according to the present invention, Figure 7 is a graph showing the change in protein composition of the whole fish word through fish farming according to the present invention, Figure 8 is a present invention Figure 9 is a graph showing the change in fat composition of the fish body through the fish feed according to, Figure 9 is a graph showing the change of the inquiry content of the whole fish word through fish fish according to the present invention, Figure 10 is a fish feed according to the present invention Is a graph showing a change in the saturated fatty acid composition of the whole fish body, Figure 11 is a graph showing a change in the monounsaturated fatty acid composition of the whole fish body through the fish feed according to the present invention, Figure 12 is through a fish feed according to the present invention It is a graph showing a change in the polyunsaturated fatty acid composition of the whole body, Figure 13 shows the polyunsaturated fatty acid composition of the whole body through the fish feed according to the present invention The graph shows the screen.

[실험예 4] 프로폴리스를 첨가한 양어사료의 체조성 변화 실험 Experimental Example 4 Changes in the Gymnastic Properties of Fish Ponds Added with Propolis

[4-1] 일반성분 분석 [4-1] General Component Analysis

도 6 내지 도 13에 도시한 바와 같이, 본 발명은 16주간 실험종료 후, 체조성 변화를 확인하기 위하여 일반성분은 실험사료와 전어체에 대해서 실시하였고, 전어체 분석을 위해 수조별로 10마리씩 무작위로 추출하여 분쇄한 전어체를 사용하였다. AOAC (1995)에 의해 수분은 상압 가열 건조법(125℃, 3시간), 단백질은 Kjeldahl 질소 정량법(N×6.25), 그리고 회분질은 직접 회화법으로 각각 분석하였다. 또한, 지방질은 샘플을 12시간 동결 건조한 후 Soxtec system 1046 (Tacator AB, Sweden)을 사용하여 Soxhlet 추출법으로 분석하였다. As shown in Figures 6 to 13, after the end of the 16 weeks the experiment, the general component was carried out for the experimental feed and whole body in order to confirm the change in gymnastics, 10 randomly per tank for whole body analysis Extracted and ground whole fish was used. Water was analyzed by AOAC (1995) at atmospheric pressure heating and drying (125 ° C., 3 hours), protein as Kjeldahl nitrogen assay (N × 6.25), and ash as direct ashing. In addition, the lipid was analyzed by Soxhlet extraction method using Soxtec system 1046 (Tacator AB, Sweden) after freeze-drying the sample for 12 hours.

그 결과, 하기 [표 5]에서 보는 바와 같이 전어체의 수분 함량에 있어서 사료 내 프로폴리스 10%(P10) 첨가군은 대조군을 포함한 나머지 모든 첨가군들에 비해 유의하게 높았고(P<0.05), 20%(P20) 첨가군은 10%(P10) 첨가군을 제외한 나머지 실험군들에 비해 유의하게 높은 것으로 나타났다(P<0.05). 그리고, 프로폴리스 5%(P5) 첨가군은 1.25%(P1.25)와 2.5%(P2.5) 첨가군에 비해 유의하게 높은 반면, 대조군(P0)과는 유의한 차이가 없는 것(P>0.05)을 알 수 있었다.As a result, as shown in [Table 5], in the water content of the whole fish body, the propolis 10% (P10) addition group in the feed was significantly higher than all the other addition groups including the control group (P <0.05), The 20% (P20) group was significantly higher than the other groups except the 10% (P10) group (P <0.05). The propolis 5% (P5) added group was significantly higher than the 1.25% (P1.25) and 2.5% (P2.5) added group, but there was no significant difference from the control group (P0) (P0). > 0.05).

전어체의 단백질 함량에 있어서 사료 내 프로폴리스 1.25% ~ 5% (P1.25 - P5) 첨가군은 10%(P10)와 20%(P20) 첨가군에 비해 유의하게 높은 반면(P<0.05), 대조군(P0)과는 유의한 차이가 없었다(P>0.05). 그리고 대조군(P0)은 프로폴리스20% (P20) 첨가군에 비해 유의하게 높은 반면, 10%(P10) 첨가군과는 유의한 차이가 없는 것(P>0.05)으로 나타났다. The protein content of whole fish was significantly higher than that of 10% (P10) and 20% (P20) supplemented groups of 1.25% to 5% (P1.25-P5) in feed (P <0.05). There was no significant difference from the control group (P0) (P> 0.05). The control group (P0) was significantly higher than the propolis 20% (P20) addition group, but was not significantly different from the 10% (P10) addition group (P> 0.05).

전어체의 지방질 함량에 있어서 사료 내 프로폴리스 2.5% (P2.5) 첨가군 대조군(P0)을 포함한 나머지 모든 첨가군들(P1.25, P5, P10, P20)에 비해 유의하게 높았다(P<0.05). 그리고, 대조군(P0)과 1.25%(P1.25) 첨가군은 5% ~ 20% 첨가군(P5, P10, P20)들에 비해 유의하게 높았고(P<0.05), 5% 첨가군은 10%(P10)와 20%(P20) 첨가군에 비해 유의하게 높았으며(P<0.05), 20%(P20) 첨가군은 10%(P10) 첨가군에 비해 유의하게 높은 것(P<0.05)으로 나타났다. The fat content of whole fish was significantly higher than that of all other groups (P1.25, P5, P10, P20), including the control group (P0) in the propolis 2.5% (P2.5) group (P <). 0.05). In addition, the control group (P0) and the 1.25% (P1.25) addition group were significantly higher than the 5% to 20% addition groups (P5, P10, and P20) (P <0.05), and the 5% addition group was 10%. It was significantly higher (P <0.05) and the 20% (P20) addition group was significantly higher than the 10% (P10) addition group (P <0.05). appear.

전어체의 조회분 함량에 있어서 사료 내 프로폴리스 20%(P20) 첨가군은 대조군(P0)을 포함한 나머지 모든 첨가군들(P1.25, P2.5, P5, P10)에 비해 유의하게 높았다(P<0.05). 그리고, 프로폴리스 10%(P10) 첨가군은 20%(P20) 첨가군을 제외한 나머지 첨가군들(P0, P1.25, P2.5, P5)에 비해 유의하게 높았고(P<0.05), 프로폴리스0% ~ 5%의 4가지 첨가군들(P0, P1.25, P2.5, P5)에 대한 유의한 차이는 없는 것으로 나타났다(P>0.05)(표 5). In the total ash content of whole fish, 20% (P20) of propolis in the feed group was significantly higher than the other groups (P1.25, P2.5, P5, P10) including the control group (P0). P <0.05). Propolis 10% (P10) added group was significantly higher than the other groups (P0, P1.25, P2.5, P5) except the 20% (P20) added group (P <0.05), There was no significant difference (P> 0.05) for the four addition groups (P0, P1.25, P2.5, P5) of 0% to 5% of the polis (Table 5).

[4-2] 지방산 분석 [4-2] Fatty Acid Analysis

본 발명은 16주간 실험종료 후, 체조성변화를 확인하기 위하여 전어체의 지방산 분석에 있어 분쇄한 전어체에서 추출한 지방의 methylation은 Metcalfe et al. (1966)의 방법에 의해 feries silica capillary column을 장착한 gas chromatography (Trace GC)에 의해 분석하였다. 캐리어 기체는 질소를 사용하였고, detection은 FID 모드를 사용하였으며 분석조건은 다음과 같다(Instrument: Trace GC gas chromatograph, column: quadrex, 30M, bonded carbowax 0.25 mm I.D × 0.25 ㎛ film, cat. No.: 007-CW-30-0.25F, injector temperature: 250℃, Detector temperature: 250℃, flow (gas press): 65 psi. helium, splite: 1:50). 도출된 크로마토그램은 분석 프로그램인 peak sample (Maestro, Chrompack)에 의해 분석하였다. In the present invention, after completion of the experiment for 16 weeks, the methylation of the fat extracted from the crushed whole body in fatty acid analysis of whole body in order to confirm the change in gymnastics is Metcalfe et al. (1966) was analyzed by gas chromatography (Trace GC) equipped with a feries silica capillary column. The carrier gas used nitrogen, detection used FID mode and the analysis conditions were as follows (Instrument: Trace GC gas chromatograph, column: quadrex, 30M, bonded carbowax 0.25 mm ID × 0.25 μm film, cat. 007-CW-30-0.25F, injector temperature: 250 ° C., Detector temperature: 250 ° C., flow (gas press): 65 psi.helium, splite: 1:50). Derived chromatogram was analyzed by peak sample (Maestro, Chrompack).

그 결과, 하기 [표 6]에서 보는 바와 같이 프로폴리스의 첨가 수준별 6가지 실험사료를 섭취한 치어기 뱀장어의 전어체 내 포화지방산(Saturated fatty acid, Saturates) 함량은 30.12% ~ 32.05% (in fatty acid)로 사료 내 프로폴리스의 첨가수준에 따른 유의한 차이는 없는 것으로 나타났다(P>0.05). As a result, as shown in the following [Table 6], the saturated fatty acid (Saturates) content in the whole fish body of the eel eel fed six experimental feeds according to the addition level of propolis was 30.12% ~ 32.05% (in fatty) acid) showed no significant difference according to the level of propolis in the feed (P> 0.05).

프로폴리스의 첨가 수준별 6가지 실험사료를 섭취한 치어기 뱀장어의 전어체 내 단순불포화지방산(Mono-unsaturated fatty acid, Monoenes) 함량에 있어서 사료 내 프로폴리스 20%(P20) 첨가군은 대조군(P0)을 포함한 나머지 모든 첨가군들(P1.25, P2.5, P5, P10)에 비해 유의하게 높았다(P<0.05). 그리고, 프로폴리스 10%(P10) 첨가군은 20%(P20) 첨가군을 제외한 나머지 첨가군들(P0, P1.25, P2.5, P5)에 비해 유의하게 높았고(P<0.05), 프로폴리스0% ~ 5%의 4가지 첨가군(P0, P1.25, P5, P10)들에 대한 유의한 차이는 없는 것으로 나타났다(P>0.05). In the mono-unsaturated fatty acid (Monoenes) content of the larvae eel fed six experimental diets for each level of propolis addition, 20% (P20) of propolis in the feed group was the control group (P0). The other groups (P1.25, P2.5, P5, P10) were significantly higher (P <0.05). Propolis 10% (P10) added group was significantly higher than the other groups (P0, P1.25, P2.5, P5) except the 20% (P20) added group (P <0.05), There was no significant difference (P> 0.05) for the four addition groups (P0, P1.25, P5, P10) from 0% to 5% of polis.

프로폴리스의 첨가 수준별 6가지 실험사료를 섭취한 치어기 뱀장어의 전어체 내 다불포화지방산(Poly-unsaturated fatty acid, PUFA) 함량은 사료 내 프로폴리스 2.5%(P2.5) 첨가군은 나머지 모든 첨가군들(P0, P1.25, P5, P10, P20)에 비해 유의하게 높았다(P<0.05). 또한, 대조군(P0), 1.25%(P1.25), 5%(P5) 첨가군은 10%(P10)와 20%(P20) 첨가군에 비해 유의하게 높은 반면(P<0.05), 이들 3가지 첨가군간의 유의한 차이는 없었다(P>0.05). 그리고, 10%(P10) 첨가군은 20%(P20) 첨가군에 비해 유의하게 높은 것으로 나타났다(P<0.05). The content of polyunsaturated fatty acid (PUFA) in the whole fish of eel eel fed six experimental diets according to the level of propolis supplementation was 2.5% (P2.5) in the feed group. It was significantly higher than the groups (P0, P1.25, P5, P10, P20) (P <0.05). In addition, the control group (P0), 1.25% (P1.25), 5% (P5) addition group was significantly higher than the 10% (P10) and 20% (P20) addition group (P <0.05), these 3 There was no significant difference between eggplant addition group (P> 0.05). The 10% (P10) addition group was significantly higher than the 20% (P20) addition group (P <0.05).

프로폴리스의 첨가 수준별 6가지 실험사료를 섭취한 치어기 뱀장어의 전어체 내 고도불포화지방산(Highly-unsaturated fatty acid, HUFA) 함량에 있어, 5%(P5) 첨가군은 대조군(P0), 10%(P10) 그리고 20% (P20) 첨가군에 비해 유의하게 높은 반면(P<0.05), 1.25%(P1.25)와 2.5%(P2.5) 첨가군과는 유의한 차이가 없었다(P>0.05). 그리고 1.25%(P1.25)와 2.5%(P2.5) 첨가군은 20%(P20) 첨가군에 비해 유의하게 높은 반면(P<0.05), 대조군(P0)과 10%(P10)첨가군과는 유의한 차이가 없었다(P>0.05). 또한, 대조군(P0)과 10%(P10) 첨가군은 20%(P20) 첨가군에 비해 유의하게 높은 반면(P<0.05), 이들 두 가지 첨가 수준간의 유의한 차이는 없는 것으로 나타났다(P>0.05)(표 6). The content of highly-unsaturated fatty acid (HUFA) in the whole fish of eel eel fed six experimental diets according to the level of propolis addition was 5% (P5) in the control group (P0), 10% (P10) and significantly higher than the 20% (P20) group (P <0.05), while there was no significant difference between the 1.25% (P1.25) and 2.5% (P2.5) groups (P>). 0.05). The 1.25% (P1.25) and 2.5% (P2.5) added groups were significantly higher than the 20% (P20) added groups (P <0.05), while the control group (P0) and 10% (P10) added groups. There was no significant difference between and (P> 0.05). In addition, the control group (P0) and the 10% (P10) addition group was significantly higher than the 20% (P20) addition group (P <0.05), but there was no significant difference between these two addition levels (P>). 0.05) (Table 6).

도 14는 본 발명에 따른 양어사료를 통해 혈장 내 헤마토크리트치의 변화를 나타내는 그래프이고, 도 15는 본 발명에 따른 양어사료를 통해 혈장 내 라이소자임 활성의 변화를 나타내는 그래프이며, 도 16은 본 발명에 따른 양어사료를 통해 체표면의 점액 라이소자임 활성의 변화를 나타내는 그래프이다.14 is a graph showing a change in hematocrit levels in plasma through fish farming according to the present invention, Figure 15 is a graph showing a change in lysozyme activity in plasma through fish farming according to the present invention, Figure 16 is according to the present invention It is a graph showing the change of mucous lysozyme activity of the body surface through the fish feed.

[실험예 5] 프로폴리스를 첨가한 양어사료의 면역활성 실험 Experimental Example 5 Immune Activity Test of Fish Farm with Propolis Added

도 14 내지 도 16에 도시한 바와 같이, 본 발명은 사육실험 종료 후, 혈장 내 헤마토크리트분석을 위해 90% 에틸렌글라이콜 페닐에테르 (200 ppm)로 마취하고 두부를 절단하여 헤파린처리된 미세유리관 (Tomas)를 사용하여 혈액을 채취하였다. 헤마토크리트 원심분리기 (한일)를 사용하여 3,800×g로 5분간 원심분리한 후 헤마토크리트치를 측정하였다. 어류 당 2개의 tube를 사용하여 측정한 후 평균값을 각 개체의 값으로 하였다. 미세유리관에 분리된 혈장을 2-3개체씩 합하여 라이소자임활성의 측정에 사용하기 위해 -70℃에 보관하였다. As shown in Figure 14 to 16, the present invention is anesthetized with 90% ethylene glycol phenyl ether (200 ppm) for hematocrit analysis in plasma after the end of the breeding experiment, cut the tofu heparinized microglass tube ( Tomas) was used to collect blood. Hematocrit values were measured after centrifugation at 3,800 × g for 5 minutes using a hematocrit centrifuge (Hanil). Measured using two tubes per fish, the average value was taken for each individual. Plasma separated in a micro glass tube was stored at -70 ℃ for use in measuring the lysozyme activity of 2-3 individuals.

또한, 혈청 라이소자임활성 분석을 위해 Micrococcus lysodeikticus의 균체(Sigma)를 50 mM의 소디움포타슘버퍼 (sodium phosphate buffer, pH 6.2)에 0.2 mg/mL의 농도로 현탁하고, 이 균체에 함유된 버퍼 475 μL와 상기 혈장 25 μL를 스펙트로포토메터 측정용 큐빗에 넣고 25℃에서 스펙트로포토메터 (Shimadzu PC-1601 model)를 사용하여 450 nm에서의 흡광도 변화를 10분간 측정하였다. 흡광도 0.001/min의 변화를 효소 1 unit으로 정의하여 혈장 mL당 활성을 표현하였다. In addition, micrococcus lysodeikticus cells (Sigma) were suspended in 50 mM sodium phosphate buffer (pH 6.2) at a concentration of 0.2 mg / mL for serum lysozyme activity analysis, and 475 μL of the buffer contained in the cells 25 μL of the plasma was placed in a spectrophotometer measurement qubit and the absorbance change at 450 nm was measured for 10 minutes using a spectrophotometer (Shimadzu PC-1601 model) at 25 ° C. A change in absorbance of 0.001 / min was defined as 1 unit of enzyme to express activity per mL of plasma.

또한, 점액 라이소자임활성 분석을 위해 뱀장어의 등 부위에 플라스틱판으로 제작한 0.5×1.0 cm의 구멍을 통해 멸균면봉으로 점액을 채취하였다. 면봉의 팁을 잘라 1.5 mL centrifuge tube에 넣고 sodium phosphate buffer (pH 6.2) 0.5 mL를 가해 원심분리(2,000×g, 20min, 3℃)하여 점액을 유출시켰다. 이 점액 25 μL와 Micrococcus lysodeikticus의 균체(0.2 mg/mL, Sigma)를 함유한 소디움포타슘버퍼 (pH 6.2)를 475 μL를 스펙트로포토메터 측정용 큐빗에 가하였다. 25℃에서 스펙트로포토메터 (Shimadzu PC-1601 model)을 사용하여 450 nm에서의 흡광도 변화를 10분간 측정하였다. 흡광도 0.001/min의 변화를 효소 1 단위로 정의하여 피부 10 cm2당 활성을 표현하였다. In addition, mucus was collected with a sterile swab through a hole of 0.5 × 1.0 cm made of a plastic plate on the back of the eel for mucus lysozyme activity analysis. The tip of the swab was cut into a 1.5 mL centrifuge tube, 0.5 mL of sodium phosphate buffer (pH 6.2) was added, and centrifuged (2,000 × g, 20min, 3 ° C) to drain the mucus. 475 μL of sodium potassium buffer (pH 6.2) containing 25 μL of this mucus and Micrococcus lysodeikticus cells (0.2 mg / mL, Sigma) was added to a qubit for the spectrophotometer measurement. The absorbance change at 450 nm was measured for 10 minutes at 25 ° C. using a spectrophotometer (Shimadzu PC-1601 model). A change in absorbance of 0.001 / min was defined as one unit of enzyme to express activity per 10 cm 2 of skin.

그 결과, 하기 [표 7]에서 보는 바와 같이 프로폴리스의 첨가 수준별 6가지 실험사료를 섭취한 치어기 뱀장어의 혈장 내 헤마토크리트에 있어서, 사료 내 프로폴리스 0% ~ 5% 첨가군(P0, P1.25, P2.5, P5)은 39.2% ~ 39.9%로 프로폴리스 10%(P10)와 20%(P20) 첨가군의 25.6% ~ 30.8%에 비해 유의하게 높은 반면(P<0.05), 이들 4개의 첨가군들(P0, P1.25, P2.5, P5)에 대한 유의한 차이는 없었다(P>0.05). 그리고 사료 내 프로폴리스 10%(P10)와 20%(P20) 첨가군간의 유의한 차이는 없는 것으로 나타났다(P>0.05).As a result, in the hematocrit in the plasma of fry eel fed six experimental feeds for each level of propolis addition, as shown in [Table 7], 0% to 5% addition of propolis in feed (P0, P1. 25, P2.5, P5) were 39.2% to 39.9%, significantly higher than 25.6% to 30.8% of the propolis 10% (P10) and 20% (P20) groups (P <0.05). There were no significant differences (P> 0.05) for the two groups (P0, P1.25, P2.5, P5). There was no significant difference between the groups of 10% (P10) and 20% (P20) supplemented propolis in the diet (P> 0.05).

프로폴리스의 첨가 수준별 6가지 실험사료를 섭취한 치어기 뱀장어의 혈장 내 라이소자임활성에 있어서, 사료 내 프로폴리스 2.5%와 5% 첨가군(P2.5, P5)의 활성(105.7~106.0 units/mL)은 0%, 1.25%, 10%, 20% 첨가군들(P0, P1.25, P10, P20)의 활성(61.5~77.5 units/mL)에 비해 유의하게 높은 반면(P<0.05), 이들 두 가지 첨가군들(P2.5, P5)에 대한 유의한 차이는 없었다(P>0.05). 그리고, 사료 내 프로폴리스 0%, 1.25%, 10%, 20% 첨가군들(P0, P1.25, P10, P20)간의 유의한 차이는 없는 것으로 나타났다(P>0.05).Plasma lysozyme activity of fry eel fed six experimental diets according to the level of propolis supplementation, activity of 2.5% and 5% supplemented groups (P2.5, P5) (105.7 ~ 106.0 units / mL) ) Were significantly higher (P <0.05) compared to the activity (61.5-77.5 units / mL) of the 0%, 1.25%, 10%, 20% added groups (P0, P1.25, P10, P20). There was no significant difference between the two groups (P2.5, P5) (P> 0.05). In addition, there was no significant difference between the 0%, 1.25%, 10%, and 20% added groups (P0, P1.25, P10, P20) in the feed (P> 0.05).

프로폴리스의 첨가 수준별 6가지 실험사료를 섭취한 치어기 뱀장어 체표면의 점액 라이소자임 활성에 있어서 5%(P5) 첨가군의 활성(8.4 units/10 cm2)은 0%, 10% 그리고 20% 첨가군들(P0, P10, P20)의 활성(4.9~6.0 units/10 cm2)에 비해 유의하게 높은 반면(P<0.05), 1.25%(P1.25)와 2.5% 첨가군(P2.5)의 활성(7.1~7.4 units/10 cm2)과는 유의한 차이가 없었다(P>0.05). 그리고 사료 내 프로폴리스 2.5% (P2.5)첨가군의 활성은 20%(P20) 첨가군의 활성에 비해 유의하게 높은 반면(P<0.05), 0%(P0), 1.25%(P1.25) 그리고 10%(P10)첨가군의 활성과는 유의한 차이가 없는 것으로 나타났다(P>0.05) (표 7). In the mucous lysozyme activity of the fry body of the eel eel fed six experimental diets according to the level of propolis, the activity of the 5% (P5) group (8.4 units / 10 cm2) was 0%, 10% and 20% group Were significantly higher than those of the plants (P0, P10, P20) (4.9 ~ 6.0 units / 10 cm2) (P <0.05), while the activities of 1.25% (P1.25) and 2.5% added group (P2.5) There was no significant difference from (7.1 ~ 7.4 units / 10 cm2) (P> 0.05). In addition, the activity of the propolis 2.5% (P2.5) added group was significantly higher than that of the 20% (P20) added group (P <0.05), 0% (P0), 1.25% (P1.25). ) And there was no significant difference with the activity of the 10% (P10) addition group (P> 0.05) (Table 7).

도 17은 본 발명에 따른 양어사료를 통해 내병성평가를 나타내는 그래프이다.17 is a graph showing the disease resistance evaluation through the fish feed according to the present invention.

[실험예 6] 공격실험에 의한 내병성 실험 Experimental Example 6 Resistance to Disease by Attack Experiment

도 17에 도시한 바와 같이, 본 발명은 내병성에 대한 효과를 확인하기 위해 Edwardsiella tarda FPC 799 균주의 복강주사에 의한 누적 생존율 조사는 Choi et al. (2004)의 방법에 따라 8주 동안의 사육실험 종료 후 24시간 동안 안정화 후, 어류에 독성을 미치는 E. tarda 부유액(1×106cfu/mL)을 1.5% NaCl이 첨가된 트립티케이스 단백질아가 (trypticase soy agar, TSA) 에 27℃에서 48시간 배양하여 준비하였다. 100 L 사각수조에 실험구별 각 10마리씩 3반복으로 배치하였고, 부유물을 실험어의 복강에 주사(0.1 mL/fish) 후 일별 폐사량을 기록하였다. As shown in Figure 17, the present invention is to investigate the cumulative survival rate by intraperitoneal injection of Edwardsiella tarda FPC 799 strain to confirm the effect on the disease resistance Choi et al. (2004), after stabilization for 24 hours after the completion of the 8-week breeding experiment, E. tarda suspension (1 × 10 6 cfu / mL), which is toxic to fish, was added to tryticase protein agar containing 1.5% NaCl. trypticase soy agar (TSA) was prepared by incubating for 48 hours at 27 ℃. Ten rats of each experiment were placed in a 100 L square tank in three repetitions. The suspended matter was injected into the abdominal cavity of the experimental fish (0.1 mL / fish) and the daily mortality was recorded.

그 결과, 프로폴리스 비첨가구인 대조군(P0)에서는 접종 1일 후부터 폐사 개체가 확인되어 68%의 누적 생존율을 나타내었고, 접종 2일 후 누적 생존율은 40.5%로 프로폴리스 1.25%(P1.25), 2.5%(P2.5) 그리고 5%(P5) 첨가군들에 비해 유의하게 낮은 반면(P<0.05), 고농도의 프로폴리스를 첨가한 10%(P10)와 20%(P20) 실험군과 비교 시 유의한 차이가 없는 것으로 확인되었다(P>0.05). 또한, 접종 3일 후 22.5%, 4일 후 18%, 그리고 5일 후 13.6%의 누적 생존율을 나타내어 지속적으로 감소하는 경향을 나타내었고, 접종 10일 후까지 증감 없이 일정하게 유지되는 경향을 나타내었다. As a result, in the control group (P0), which was not added to propolis, mortality was confirmed after 1 day of inoculation, and the cumulative survival rate was 68%, and the cumulative survival rate was 40.5% after 2 days of inoculation, 1.25% (P1.25). , Significantly lower than the 2.5% (P2.5) and 5% (P5) groups (P <0.05), compared with the 10% (P10) and 20% (P20) groups with high concentrations of propolis. There was no significant difference (P> 0.05). In addition, cumulative survival rate of 22.5% after 3 days, 18% after 4 days, and 13.6% after 5 days showed a tendency to decrease continuously, and remained constant without increase or decrease until 10 days after the inoculation. .

누적 생존율에 있어서 프로폴리스 1.25%(P1.25), 2.5%(P2.5) 그리고 5%(P5)를 첨가한 실험군은 대조군과 고농도의 10%(P10)와 20%(P20)를 첨가한 실험군에 비해 접종 2일과 3일 후까지 유의하게 높은 것으로 나타났으나(P<0.05), 접종 4일 이후부터 10일 이후까지는 유의한 차이 없이 높은 경향을 나타내었다(P>0.05). In the cumulative survival rate, the experimental group added 1.25% (P1.25), 2.5% (P2.5), and 5% (P5) of propolis added control group and high concentrations of 10% (P10) and 20% (P20). Compared to the experimental group, it was significantly higher until 2 and 3 days after inoculation (P <0.05), but after 4 to 10 days after inoculation, there was no significant difference (P> 0.05).

이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명의 상세한 설명에서는 본 발명의 바람직한 실시 예에 관하여 설명하였으나, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 범주에서 벗어나지 않는 한도 내에서 여러 가지 변형이 가능함은 물론이다. 따라서 본 발명의 권리 범위는 설명된 실시 예에 국한되어 정해져서는 안되며, 후술하는 청구범위뿐만 아니라, 이와 균등한 것들에 의해 정해져야 한다.While the present invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments, it is to be understood that the invention is not limited to the disclosed exemplary embodiments, Of course, this is possible. Therefore, the scope of the present invention should not be limited to the described embodiments, but should be defined by the equivalents as well as the claims that follow.

도 2는 본 발명에 따른 양어사료를 통해 체중의 증가를 나타내는 그래프이다.Figure 2 is a graph showing the increase in weight through the fish feed according to the present invention.

도 3은 본 발명에 따른 양어사료를 통해 일간성장율의 변화를 나타내는 그래프이다.Figure 3 is a graph showing the change in daily growth rate through the fish feed according to the present invention.

도 4는 본 발명에 따른 양어사료를 통해 단백질효율을 나타내는 그래프이다.4 is a graph showing the protein efficiency through the fish feed according to the present invention.

도 5는 본 발명에 따른 양어사료를 통해 생존율의 변화를 나타내는 그래프이다.5 is a graph showing a change in survival rate through the fish feed according to the present invention.

도 6은 본 발명에 따른 양어사료를 통해 전어체의 수분변화를 나타내는 그래프이다.Figure 6 is a graph showing the water change of the whole fish word through the fish feed according to the present invention.

도 7은 본 발명에 따른 양어사료를 통해 전어체의 단백질조성의 변화를 나타내는 그래프이다.7 is a graph showing the change in protein composition of the whole fish word through the fish feed according to the present invention.

도 8은 본 발명에 따른 양어사료를 통해 전어체의 지방질조성의 변화를 나타내는 그래프이다.8 is a graph showing a change in fat composition of the whole fish body through the fish feed according to the present invention.

도 9는 본 발명에 따른 양어사료를 통해 전어체의 조회분의 변화를 나타내는 그래프이다.Figure 9 is a graph showing the change in inquiry of the whole word through the fish feed according to the present invention.

도 10은 본 발명에 따른 양어사료를 통해 전어체의 포화지방산 조성의 변화를 나타내는 그래프이다.10 is a graph showing the change in saturated fatty acid composition of the whole fish body through the fish feed according to the present invention.

도 11은 본 발명에 따른 양어사료를 통해 전어체의 단순불포화지방산 조성의 변화를 나타내는 그래프이다.11 is a graph showing a change in the monounsaturated fatty acid composition of the whole fish body through the fish feed according to the present invention.

도 12는 본 발명에 따른 양어사료를 통해 전어체의 다불포화지방산 조성의 변화를 나타내는 그래프이다.12 is a graph showing a change in the polyunsaturated fatty acid composition of the whole fish body through the fish feed according to the present invention.

도 13은 본 발명에 따른 양어사료를 통해 전어체의 고도불포화지방산 조성의 변화를 나타내는 그래프이다.Figure 13 is a graph showing the change in the polyunsaturated fatty acid composition of the whole fish body through the fish feed according to the present invention.

도 14는 본 발명에 따른 양어사료를 통해 혈장 내 헤마토크리트치의 변화를 나타내는 그래프이다.14 is a graph showing changes in hematocrit levels in plasma through fish farming according to the present invention.

도 15는 본 발명에 따른 양어사료를 통해 혈장 내 라이소자임 활성의 변화를 나타내는 그래프이다.Figure 15 is a graph showing the change in lysozyme activity in plasma through fish farming according to the present invention.

도 16은 본 발명에 따른 양어사료를 통해 체표면의 점액 라이소자임 활성의 변화를 나타내는 그래프이다.16 is a graph showing a change in the mucous lysozyme activity of the body surface through the fish feed according to the present invention.

Claims

In fish farming,

Non-alcoholic water-soluble water-soluble protein in 96.5-99% by weight of fish feed powder consisting of 70-75% by weight of protein source, 8-10% by weight of fat source, 10-15% by weight of carbohydrate source, and 4-6% by weight of vitamin or mineral. Add 1-3% by weight of polis,

The protein source is at least two or more of fish meal, squid liver powder, casein, the fat source is at least any one of fish oil, soybean oil, carbohydrate source is used for fish farming, characterized in that using starch.

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In the method of manufacturing fish feed,

Separating the honey and the propolis by adding water and C1 to C4 lower alcohol at 2 to 10 times the weight of the honeycomb to the collected honeycomb;

Concentrating the separated propolis at a temperature of 35 ℃ ~ 55 ℃ to obtain a propolis concentrate,

Separating the propolis concentrate into an alcohol-free aqueous solution using a reduced pressure concentrator,

1 to 3.5% by weight of the alcohol-free water-soluble propolis, 70 to 75% by weight protein source, 8 to 10% by weight fat, 10 to 15% by weight carbohydrate, and 4 to 6% by weight vitamin or mineral fish Adding to 96.5 to 99% by weight of the feed powder and blending it;

Extruding the blended feed to a size of 1 to 3 mm, and

The extruded feed is made of a step of natural drying in a cool place away from direct sunlight,

The protein source of the fish feed powder is at least two or more of fishmeal, squid liver powder, casein, fat source is used at least one or more of fish oil, soybean oil, carbohydrate source is prepared by using a fish feed Way.

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