KR101134626B1 - 관절염 치료제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 관절염을 예방, 치료 또는 완화하는 약학적 조성물에 관한 것으로서, 본 발명의 일 측면은, β-1,3-1,6-분지 D-글루칸을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 좀 더 상세하게는 상기 약학적 조성물은 상기 β-1,3-1,6-분지 D-글루칸은 글루코오스가 베타-1,3 결합하고, 상기 글루코오스는 1 내지 20 개마다 글루코오스가 1,6 결합을 하되, 상기 1,6 결합을 한 글루코오스는 젖산과 결합한 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따르면, 상기 약학적 조성물을 포함하는 치료제 및 건강보조제는 골관절염 또는 류마티스 관절염을 예방, 치료 또는 완화하는데 효과적이다.

골관절염. 류마티스 관절염. 연골보호제, β-1,3-1,6-분지 D-글루칸

Description

관절염 치료제{TREATMENT AGENT FOR ARTHRITIS}

본 발명은 관절염을 예방, 치료 또는 완화하는 약학적 조성물에 관한 것으로서, 본 발명의 일 측면은, β-1,3-1,6-분지 D-글루칸을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 좀 더 상세하게는 상기 약학적 조성물은 상기 β-1,3-1,6-분지 D-글루칸은 글루코오스가 베타-1,3 결합하고, 상기 글루코오스는 1 내지 20 개 마다 글루코오스가 1,6 결합을 하되, 상기 1,6 결합을 한 글루코오스는 젖산과 결합한 것을 특징으로 한다.

인체는 약 200여개의 관절로 이루어져 있다. 상기 관절이란 뼈와 뼈가 만나는 부위이다. 관절은 뼈와 뼈 사이가 부드럽게 운동할 수 있도록 연골, 관절낭, 활막, 인대, 힘줄, 근육 등으로 구성되어 있으며, 움직임에 따라 발생하는 충격을 흡수하는 역할을 한다.

이러한 관절에 나타나는 염증성 질환은 자가면역이 원인인 것으로 이해되는 만성 관절 류마티스, 세균감염에 의한 감염성 관절염, 여러 원인으로 인하여 관절 연골이나 뼈에 변성이나 파괴가 일어나는 변형성 관절염, 결합조직의 퇴행성 변화 로 인하여 가용성 대사산물이 관절주변의 결합조직 내에 결정으로 침작되는 결정성 관절염 등으로 크게 구분될 수 있다.

퇴행성 관절염, 즉 골관절염은 관절을 구성하는 연골세포(chondrocytes)에 노화 등의 퇴행이 발생하여 연골세포에서 관절의 기질 물질들인 제 2형 콜라겐(type II collagen) 및 프로테오글리칸 등의 합성이 저해됨과 동시에 인터루킨-1β (interleukin-1β) 및 종양괴사인자-α (tumor necrosis factor-α)등의 염증성사이토카인이 생성됨에 따라 관절기질을 분해하는 기질 금속단백질 분해효소 (matrix metalloproteinase; MMP)의 합성 및 활성이 관절세포에서 증가됨으로 인해 관절조직이 파괴됨으로써 유발되는 질병이다.

또한, 관절염은 염증성사이토카인에 의한 일산화질소의 생성과 생성된 일산화질소에 의한 자가증폭적인 사이토카인의 생성으로 더욱 많은 MMP의 합성이 유발되게 되어 관절기질의 분해가 촉진됨으로써 더욱 악화된다. 이와 동시에 염증성사이토카인은 지질대사산물인 프로스타글란딘 E2의 생성을 증가시켜 관절염에서 염증반응을 유발시킨다.

류마티스 관절염은 만성 전신성 염증질환으로 대칭성, 다발성의 관절염과 이에 따른 관절의 손상 및 변형이 생기는 질환이다. 류마티스 관절염에 대한 치료를 받지 않을 경우에는 경과가 불량하여 관절 기능의 장애를 나타내며 더 지속되면 관절 기능의 장애로 인하여 일상생활에 지장을 받는다. 국내에서는 전인구의 약 1 % 가 류마티스 관절염으로 고생하고 있을 것으로 추정되는데, 류마티스 관절염의 발생률은 남성보다 여성이 3 배정도 높으며, 주로 20 ～ 40 대에서 발생하는 것으로 알려져 있다.

류마티스 관절염의 주요원인이 점차 밝혀지고 있으며, 유전적인 요인과 감염, 호르몬의 이상 등이 원인 인자로 생각되고 있다. 이러한 원인 인자로 인하여 '자가면역' 현상이 생기는데, 자가면역이란 우리 몸의 면역조절 기능 이상으로 인하여 만성 염증이 몸의 여러 부위에서 다발적, 지속적으로 일어나는 현상이다.

한편, 상기 관절염 치료에 사용되는 약물은 염증의 감소, 질병 진행의 지연, 요산 농도의 감소라는 주된 작용기전을 근거로 대별할 수 있는데, 많은 신경관절염 치료 약물들이 염증을 감소시키는 작용을 한다. 염증은 통증, 부종, 열감, 발작, 경직을 일으키는 병적 과정이며, 염증을 신속히 완화시키는 약물에는 아스피린을 비롯한 비스테로이드성 항염제와 코티손을 비롯한 스테로이드성 항염제가 있다.

비스테로이드성 항염제는 통증을 감소시켜서 신경관절을 편안하게 하고 염증을 완화시키는 효과가 있으나, 위장장애가 나타나거나 복통을 유발하는 경우도 있기 때문에 활동성 소화성 궤양이나 위장 부위의 출혈적 병력이 있는 사람에게는 사용이 금지된다. 스테로이드성 항염제는 그 효과에 비해 체중 증가나 고혈압 등의 부작용이 심각하여 퇴행성 신경관절염에는 잘 사용하지 않는다.

특히, 스테로이드성 항염제는 질환의 원인 치료와는 전혀 무관하고 단순히 통증을 일시적으로 감소시켜 관절을 과잉 사용하도록 유도할 소지가 있으며, 이는 신경관절을 파괴하고 장애를 악화시키는 요인이 되기 때문에 사용에 주의를 요한다.

따라서 관절염 등의 관절손상에 사용되는 종래의 치료법은 한정적인 유효성 을 갖고, 명백한 유독성 부작용을 수반하며, 장기간동안 지속적으로 사용할 수 없어 그 유효성이 제한되므로, 기존의 치료법이 갖는 단점을 극복한 새로운 신규 치료법 내지는 치료제가 절실히 요구되고 있는 실정이다.

본 발명은 β-1,3-1,6-분지 D-글루칸을 포함하여 관절염을 예방, 치료 또는 완화하는 약학적 조성물, 상기 조성물을 포함하는 골관절염 및 류마티스 관절염 치료, 그리고, 건강보조제를 제공하는 데에 있다.

본 발명의 일 측면은, β-1,3-1,6-분지 D-글루칸을 포함하여 관절염을 예방, 치료 또는 완화하는 약학적 조성물을 제공한다.

바람직하게는, 상기 β-1,3-1,6-분지 D-글루칸은 글루코오스가 베타-1,3 결합하고, 상기 글루코오스는 1 내지 20개마다 글루코오스가 1,6 결합을 하되, 상기 1,6 결합을 한 글루코오스는 유기산과 결합한 것을 특징으로 한다. 바람직하게는, 상기 유기산은 젖산, 옥살산, 옥살아세트산, 푸마르산, 말산, 숙신산, 아세트산, 부티르산, 팔미트산, 타르타르산, 아스코르브산, 요산, 술폰산, 술핀산, 페놀, 주석산, 포름산, 시트르산, 이소시트르산, 알파케토글루타르산, 호박산, 핵산, PGAL, DPGA, PGA로 이루어진 그룹에서 선택되는 것을 특징으로 한다.

바람직하게는, 상기 약학적 조성물을 21.25mg/kg 내지 85mg/kg로 포함하는 것을 특징으로 한다.

바람직하게는, 상기 관절염은 골관절염 또는 류마티스 관절염인 것을 특징으로 한다.

그리고, 본 발명의 또 다른 일 측면은 상술한 약학적 조성물을 포함하는 골관절염 치료제를 제공한다.

또한, 본 발명의 또 다른 일 측면은 상술한 약학적 조성물을 포함하는 류마티스 관절염 치료제를 제공한다.

아울러, 본 발명의 또 다른 일 측면은 상술한 약학적 조성물을 포함하는 건강보조제를 제공한다.

상술한 바와 같이, 본 발명에 따르면, 상기 약학적 조성물 및 상기 조성물을 포함하는 관절염 치료제 및 건강보조제는 부작용이 적고, 관절염의 원인을 치료하여 기존의 치료법이 갖는 단점을 극복한 새로운 신규 치료법 내지는 치료제를 제시하여 관절염의 치료에 매우 효과적이다.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 바람직한 실시형태들을 설명한다. 그러나 본 발명의 실시형태는 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 이하 설명하는 실시형태로 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명의 실시형태는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 더욱 완전하게 설명하기 위해서 제공되는 것이다. 따라서 도면에서의 요소들의 형상 및 크기 등은 보다 명확한 설명을 위해 과장될 수 있으며, 도면상의 동일한 부호로 표시되는 요소는 동일한 요소이다.

본 발명에 따른 관절염을 예방, 치료 또는 완화하는 약학적 조성물은 β-1,3-1,6-분지 D-글루칸을 포함한다. 상기 β-1,3-1,6-분지 D-글루칸은 글루코오스가 베타-1,3 결합한다. 또한, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 관절염 중 골관절염뿐만 아니라 류마티스 관절염의 예방, 치료 또는 완화에 효과가 있다.

상기 글루코오스는 연골세포를 자극하여 연골형성을 촉진한다. 상기 베타-1,3 결합을 한 글루코오스 1 내지 20개마다 글루코오스가 1,6 결합을 한다. 상기 베타-1,3 결합을 한 글루코오스가 5개마다 글루코오스가 1,6 결합을 한 것이 가장 바람직하다. 상기 베타-1,3 결합 글루코오스의 사슬이 1 미만이면 연골형성 촉진 효과가 저하되며, 베타-1,3 결합 글루코오스의 사슬이 20을 초과하면 분자량이 커져서 체내 흡수가 어려워져 연골형성 효과가 저하되므로 상기 범위 내가 바람직하다. 그리고 상기 글루코오스는 직쇄상, 측쇄상 또는 환형을 이루며 결합할 수 있다.

또한, 바람직하게 상기 β-1,3-1,6-분지 D-글루칸은 하기 화학식 Ⅰ:

과 같은 구조로 형성될 수 있다.

상기 화학식 Ⅰ에서 1,6-분지 글루코오스의 잔기에는 유기산이 결합될 수 있다. 상기 유기산으로는 젖산 제 2 항 또는 제 3 항에 있어서, 상기 유기산은 젖산, 옥살산, 옥살아세트산, 푸마르산, 말산, 숙신산, 아세트산, 부티르산, 팔미트산, 타르타르산, 아스코르브산, 요산, 술폰산, 술핀산, 페놀, 주석산, 포름산, 시트르산, 이소시트르산, 알파케토글루타르산, 호박산, 핵산, PGAL, DPGA, PGA등을 들 수 있다. 상기 유기산은 칼슘의 흡수를 촉진하고 연골세포를 활성화 한다.

한편, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다. 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.

상기 약학적 조성물의 투여는 약학적 조성물에 21.25mg/kg 내지 85mg/kg로 포함되어 투여되는 것이 바람직하다. 상기 약학적 조성물의 양을 21.25mg/kg으로 하여 투여하면, 관절염 치료 예방이 효과적으로 되지 않으며, 85mg/kg를 초과하면 오히려 효과가 저하되므로, 상기 범위 내가 바람직하다.

상기 약학적 조성물은 골관절염 치료제 및 류마티스 관절염 치료제로서 사용될 수 있다. 상기 골관절염 연골소실 및 관절경직을 일으키는데, 상기 약학적 조성물은 매우 이를 효과적으로 억제하며, 경골 및 대퇴골 관절 손실 역시 매우 효과적으로 억제한다.

또한, 상기 골관절염은 염증성 질환으로, 연골 손상 등에 의해 주위 관절의 부종이 초래되고, 관절 두께의 현저한 증가를 일으킨다.[ Guo et al., 2006]. 상기 조성물은 이러한 염증을 방지하기 위해 면역반응세포를 현저히 증가시키며, 연골도 증가시킨다.

아울러, 상기 류마티스 관절염의 경우 자가면역 체계의 이상으로 관절이 붓는데 상기 조성물은 면역조절 또는 항염효과를 통해 류마티스 관절염을 예방, 치료 또는 완화시킬 수 있다.

상기 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 약학적 조성물을 포함하는 관절염 치료제는 글루코사민, 콘드로이틴, 히알루론산, 메틸술포닐메탄 및 크레아틴 또는 그의 적합한 유도 체 및/또는 제제 보조제(formulation agent), 안정제, 충전제, 향미제, 염료 및 감미료와 같은 추가적인 생리 활성 성분을 포함하여 사용될 수 있다.

상기 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨 , 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합 제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 부형제를 더 포함할 수 있다. 상기 부형제는 적어도 하나 이상으로 추출액에 포함될 수 있다. 상기 부형제로는 예를 들어, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등이 있으며, 이를 상기 고형제제에 섞어 조제될 수 있다.

또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사 용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존 제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

상기 약학적 조성물은 상기 살펴본 바와 같이 관절염 치료제로 사용될 수 있을 뿐만 아 니라 관절염을 예방 또는 완화시키기 위한 건강보조제로서도 사용될 수 있다. 상기 건강보조제로서 식품으로 제공될 수 있는데, 본원에서 정의되는 "건강기능식품"은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.

상기 외에 본 발명 건강보조제는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료 에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 추출물은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 추출물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본원의 건강보조제는 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 약학적 조성물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

이하, 본원발명의 약학적 조성물을 포함하는 일예로서 폴리칸(Polycan)TM을 사용하여, 골관절염 및 류마티스 관절염에 대한 효과를 도면을 참고하여 살펴보겠다. 하기의 실험예는 본 발명을 보다 잘 이해하기 위한 것이며, 이로써, 본 발명을 한정하는 것은 아니다.

실험예 1 - 폴리칸(polycan)의 효능 검증 방법

실험예 1-1 : 실험준비

본원발명의 약제학적 조성물 중 하나인 폴리칸(1.7brix)[Glucan Corp. Ltd., KOREA]을 준비하고 상기 폴리칸의 대조약물로서 디클로페낙 소디움(Diclofenac sodium)[Sigma, USA]을 준비하였다. 실험동물로는 Sprague-Dawley Rats (6 주령 수컷 , SLC., JAPAN) [ANNEX I ~ III]을 준비하였다.

실험예 1-2 : 군분리

실험군을 총 6개 군으로 마련하고, 상기 각각의 군마다 상기 Sprague-Dawley Rats를 8마리씩 준비하였다. 상기 군은 골관절염 을 유발시키지 않은 렛드로서 멸균 증류수를 투여한 정상군인 Sham 대조군을 마련하였다. 또한, 음성대조군 으로써 골관절염 유발 후 증류수(vehicle)를 투여한 OA 대조군과 양성대조군으로써, 골관절염 유발 후 2mg/kg의 디클로페낙 소디움 투여군을 준비하였다.

처리군으로써, 골관절염을 유발한 후 각각 다른 농도인 폴리칸 85mg/kg, 42.5mg/kg, 21.25mg/kg로 처리한 폴리칸 투여군을 마련하였다.

실험예 1-3 : 투여

폴리칸 85, 42.5 및 21.25 mg/kg 을 매일 84일간 경구투여 하였다. 상기 투여시 멸균 증류수를 매체로 사용하였으며, 5ml/kg로 투여하였다. 또한, 상기 폴리칸을 배양액에 희석하여 1ml/kg의 농도로 단회 관절낭내 주입하였다.

양성대조군에 상기 디클로페낙 소디움을 2mg/kg 을 매일 84 일간 경 피투여 하였으며, 생리식염수를 매체로 사용하여 1ml/kg 으로 투여하였다. 배양액에 희석된 상기 폴리칸의 주입은 골관절염 유발 1 주일 후 실시하였으며, 디클로페낙 소디움 역시 골관절염 유발 1주일 후부터 투여를 시작하였다.

실험예 1-4 : 골관절염의 유발

상기 실험동물인 마우스를 졸레틸(Zoletile 50; Vir bac Lab., France)로 마취한 다음, 왼쪽 관절낭을 노출하고 Anterior cruciate ligament transaction 및 partial medial meniscectomy 실시하여 골관절염을 유발하였다. Sham 수술군에서는 관절낭을 절제하여 medial meniscus를 확인한 다음 절제하지 않고 관절낭을 폐쇄하였다.

실험예 1-5 : 관찰

투여일부터 84 일간의 체중, 슬관절 두께의 변화를 1 주일에 한번씩 측정하여 관찰하였으며, 최종 희생일에 슬관절의 최대 신장 각도 및 capsule 노출 후 슬관절 두께를 각각 측정하였고, Safranin-O 염색 하에서 대퇴골 및 경골의 Makin score과 연골의 두께를 각각 histomorphometry적으로 측정하였으며, 대퇴골 및 경골 관절면의 연골에서 각각 BrdU 면역반응성 역시 평가하였다.

실험예 2 - 폴리칸의 골관절염에 대한 효능 분석

실험예 2-1 : 체중의 변화

도 1을 참고하면, 상기 실험예 1과 같이 한 결과, 정상군 및 음성대조군에서 의미 있는 체중 및 증체량의 변화는 실험 전 기간 동안 인정되지 않았다. 84 일간의 증체량이 OA 대조군에서는 Sham 대조군에 비해 -0.82%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움 2mg/kg, 폴리칸 85, 42.5 및 21.25mg/kg 투여군에서는 각각 OA 대조군에 비해 -2.98, 1.76, 7.76 및 8.88% 변화를 나타내었다.

실험예 2-2 : 슬관절 두께의 변화

도 2를 참고하면, 골관절염 대조군의 경우, 정상 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 유발 슬관절 두께의 증가가 각각 투여일부터 관찰되었다. 한편 3 용량의 폴리칸 및 디클로페낙 소디움 투여군에서는 각각 투여 21일 후부터 골관절염 유발 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01 또 는 p<0.05) 슬관절 두께의 감소가 인정되었다. 최종부검시 슬관절의 두께는 OA 대조군에서는 Sham 대조군에 비해 18.66%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움 2mg/kg, 폴리칸 85, 42.5 및 21.25mg/kg 투여군에서 는 각각 OA 대조군에 비해 -5.79, -5.61, -4.28 및 -5.74% 변화를 나타내었다.

실험예 2-3 : Capsule 노출 후 슬관절 두께의 변화

모든 OA 유발군에서는 Sham 대조군과 비교하여 유의성 있는 (p< 0.01) capsule 노출 후 관절 두께의 증가가 각각 인정되었고, 디클로페낙 소디움 및 모든 폴리칸 투여군에서는 골관절염 유발 대조군과 유사한 두께를 각각 나타내었다. Joint capsule 노출 후 슬관절의 두께는 OA 대조군에서는 Sham 대조군에 비해 15.40%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움 2mg/kg, Polycan 85, 42 .5 및 21.25mg/kg 투여군에서는 각각 OA 대조군에 비해 -0.99, -2.77, -1.00 및 -2.17% 변화를 나타내었다.

실험예 2-4 : 슬관절 최대 신장각도

도 3을 참고하면 OA 대조군의 경우, Sham 대조군에 비해 유의 성 있는 (p<0.01) 슬관절 최대신장 각도의 증가가 인정되었으나 모든 폴리칸 처리군 및 디클로페낙 소디움 투여군에서는 OA 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 슬관절 최대신장 각도의 감소가 각각 인정되었다. 슬관절 최대 신장 각도는 OA 대조군의 경우 Sham 대조군에 비해 159.39%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움 2mg/kg, 폴리칸 85, 42.5 및 21.25mg/kg 투여군에서는 각각 OA 대조군에 비해 -18.18, -18.52, -28. 96 및 -24.07% 변화를 나타내었다.

실험예 2-5 : Mankin score

상기 Mankin score는 관절염의 정도를 나타내는 지표로서 신장각, 통증, 발열, 두께 등을 포괄하여 수치로 나타낸 값으로 수치가 적을수록 정상에 가까운 것이다. 도 4를 참고하면, OA 대조군에 서는 Sham 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 경골 및 대퇴골 관절면 연골의 Mankin score의 증가가 각각 인정되었으나, 모든 폴리칸 처리군 및 디클로페낙 소디움 투여군에서 OA 대조군에 비해 현저한 대퇴골 및 경 골 Mankin score의 감소가 각각 인정되었다.

대퇴골의 mankin score는 OA 대조군의 경우 Sham 대조군에 비해 1216.67%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움 2mg/kg, 폴리칸 85, 42.5 및 21.25mg/kg 투여 군에서는 각각 OA 대조군에 비해 -27.85, -36.71, -48.10 및 -31.65% 변화를 나타내었다.

경골의 mankin score는 OA 대조군의 경우 Sham 대조군에 비해 2166.67%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움 2mg/kg, 폴리칸 85, 42.5 및 21.25mg/kg 투여군에서는 각각 OA 대조군에 비해 -20.59, -29.41, -27.94 및 -20. 59% 변화를 나타내었다.

실험예 2-6 : 연골 두께의 변화

도 5를 참고하면, OA 대조군에 서는 Sham 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 경골 및 대퇴골 관절면 연골 두께의 감소가 각각 인정되었으나, 모든 폴리칸 처리군 및 디클로페낙 소디움 투여군에서 OA 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 경골 및 대퇴골 연골 두께의 증가가 폴리칸 21.25mg/kg 투여군을 제외하고 각각 인정되었다.

한편, Polycan 21.25mg/kg 투여군에서도 OA 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 대퇴골 연골 두께의 증가가 인정되었으며, 경골 연골두께 역시 증가를 나타내었다.

대퇴골 관절면의 연골두께는 OA 대조군의 경우 Sham 대조군에 비해 -46.78%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움 2mg/kg, 폴리칸 85, 42.5 및 21.25mg/kg 투여군에서는 각각 OA 대조군에 비해 35.11, 71.84, 86.87 및 69.38% 변화를 나타내었다.

대퇴골 관절면의 연골두께는 OA 대조군의 경우 Sham 대조군에 비해 -61.99%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움 2mg/kg, 폴리칸 85, 42.5 및 21.25mg/kg 투여군에서는 각각 OA 대조군에 비해 68.81, 96.23, 79.51 및 18.74% 변화를 나타내었다.

실험예 2-7 BrdU 면역반응성의 변화

도 6을 참고하면, OA 대 조군에서는 Sham 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 경골 및 대퇴골 관절면 연골의 BrdU 면역반응 세포수의 감소가 각각 인정되었으나, 폴리칸 85 및 42.5mg/kg 투여군에서는 OA 대조군에 비해 유의성 있는(p<0.01 ) BrdU 면역반응성을 나타내는 연골세포의 수적 증가가 경골 및 대퇴골 관절면 연골에서 각각 인정되었다.

한편 디클로페낙 소디움 투여군에서는 OA 대조군과 유사한 BrdU 면역반응 세포수가 경골 및 대퇴골에서 각각 인정되었고, 폴리칸 21.25mg/kg 투여군에서는 OA 대조군에 비해 현저한 BrdU 면역반응세포의 증가가 경골 관절 연골에서 인정되었으며, 대퇴골 관절연골애서는 OA 대조군과 유사한 세포 수가 인정되었다 .

대퇴골 관절면 연골에서 BrdU 면역반응세포의 수는 OA 대조군의 경우 Sham 대조군에 비해 -82.69%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움 2mg/kg, 폴리칸 85, 42.5 및 21.25mg/kg 투여군에서는 각각 OA 대조군에 비해 9.52, 239.68, 207.94 및 6.35% 변화를 나타내었다.

경골 관절면 연골에서 BrdU 면역반응세 포의 수는 OA 대조군의 경우 Sham 대 조군에 비해 -80.43%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움 2mg/kg, 폴리칸 85, 42.5 및 21.25mg/kg 투여군에서는 각각 OA 대조군에 비해 1.56, 259.38, 245.31 및 57.81% 변화를 나타내었다.

실험예 3 - 폴리칸(polycan)의 류마티스 치료 효능검증 실험방법

실험예 3-1 : 조직처리

가슴샘 및 비장의 주변 결합조직을 분리하여 10% 중성포르말린에 고정시킨 다음 일반적인 방법으로 탈수 및 파라핀 포매를 실시하고, 3~4μm 의 longitudinal 절편을 제작하여 Hematoxylin-eosin 염색을 실시하고, 광학현미경하에서 관찰하였다.

또한, 양측 후지의 슬관절(Knee joint) 역시 주변 결합조직을 분리하여 10% 중성포르말린에 고정시킨 다음, 탈회액[24.4% formic acid, and 0.5N sodium hydroxide]을 이용하여 5일 동안 탈회시키고, 일반적인 방법으로 탈수 및 파라핀 포매를 실시하고, 3~4μm 의 longitudinal 절편을 제작하여 Hematoxylineosin 염색을 실시하고, 광학현미경하에서 관찰하였다.

실험예 3-2 : H ISTOMORPHOMETRY

폴리칸이 콜라겐으로 유발된 류마티스 관절염(RA) DBA 마우스의 면역 이상에 미치는 영향을 평가하기 위해, 가슴샘 전체 및 피질의 두께, 비장 전체 및 백색 수 질의 직경, 백색 수질의 단 위 면적(1mm²) 당 수를 40 배 현미경 시야에서 자동영상분석장치 (DMI-300 Image Processin g; DMI, Korea)를 이용하여 각각 측정하였으며, 이전의 방법 [Dudler et al., 2000; van Holten et al., 20 04; Kim et al., 2007]에 따라 슬관절의 대퇴골 및 경골 관절면 연골의 두께, 프로테오글리칸(proteoglycans) 소실 정도 및 erosion 을 각각 100배 현미경 시야에서 자동영상분석장치 (DMI-300 Image Processing; D MI, Korea)를 이용하여 평가하였다.

프로테오글리칸의 소실 정도는 이전의 방법들 [Williams et al., 1992; Dudler et al., 2000; van Holten et al., 2004]에 따라 proteoglycans 특수 염색인 Safranin-O 염색성을 3등급으로 구분하여 평가하였다. 즉, 프로테오글리칸의 소실이 없는 경우를 0, 완전 소실되어 전혀 염색성을 나타내지 않는 경우를 3으로 평가하였다.

관절 연골면의 손상 정도 역시 이전의 방법들 [Willi ams et al., 1992; van Holten et al., 2004; Kim et al.,2007]에 따라 erosion이 전혀 인정되지 않는 경우를 0, 심한 erosion에 의해 골 조직의 손상까지 일어난 경우를 4로 하여, 4등급으로 구분하여 평가하였다.

실험예 3-3 : 동물 모델

콜라겐을 이용한 RA 유발 마우스 모델은, 현재 여러 가지 물질들의 RA에 대 한 효력평가에 가장 널리 이용되고 있는 동물모델 중 하나로 [Liu et al., 2008; Miyake et al., 2008; Pa nayi et al.,2008], 자가면역에 의한 RA의 유발이 초래된다. 따라서 콜라겐 유발 RA시 가슴샘과 비장의 임파구 증가 등 전형적인 면역증가가 일어나는 것으로 알려져 있다 [Agata et al., 2000; Chen and Wei, 2003 ; Zhang et al., 2004]. 그러므로 상기 콜라겐을 이용한 RA 유발 마우스의 가슴샘과 비장을 관찰하여 본원 발명의 효과를 분석하였다.

실험예 3-4 : 동물모델의 가슴샘과 비장 분석

상기 실험예의 결과, 디클로페낙 소디움 및 폴리칸 85mg/kg 투여군에 국한되어 가슴샘 피질 두께의 유의성 없는 증가가 인정되었으나, 가슴샘에서는 정상 대조군과 비교하여 유의성 있는 변화가 모든 RA 유발군에서 인정되지 않았다 .

한편, 도 7 및 도 8을 참고하면, 비장에서는 정상 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 비장 전체 및 백색 수질 직경 증가와 현저한 백색 수질의 수적 증가, 즉 비장의 비대 및 임파구 증생이 RA유발 대조군에서 인정되었다. 이러한 비장의 비대는 3 용량의 모든 폴리칸 투여에 의해 현저히 억제되는 것으로 관찰된 반면 디클로페낙 소디움 투여군에서는 RA 대조군에 비해 오히려 유의성 있는 (p<0.01) 비장 전체 두께의 증가를 나타내었다.

이러한 디클로페낙 소디움의 효과는 투여 경로가 경구가 아닌 주사 경로를 취한 결과, 염증 반응성의 증가에 의한 이차적인 증가로 판단되고, 폴리칸은 면역조절 효과의 결과로 판단된다.

본 실험의 결과 폴리칸 21.25mg/kg 투여군과 42.5mg/kg 투여군에서는 명백한 용량 의존성이 인정되었으나, 85mg/kg 투여군에서는 42.5mg/kg 투여군과 유사하거나 다소 감소된 효과가 인정되었다.

가슴샘 전체 두께는 RA 대조군에서 정상 대조군에 비해 2.84%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움, 폴리칸 21.25, 42.5 및 85mg/kg 투여군에서는 RA 대조군에 비해 -2.80, 1.45, 6.17 및 4.85%의 변화를 각각 나타내었다.

가슴샘 피질의 두께는 RA 대조군에서 정상 대조군에 비해 4.37%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움, 폴리칸 21.25, 42.5 및 85mg/kg 투여군에서는 RA 대조군에 비해 18.83, 4.37, 9.82 및 16.30%의 변화를 각각 나타내었다. 아울러 하기 표 1를 참고하면 처리군에서 가슴샘의 전체 두께 및 피질의 두께가 증가하고 있음 을 알 수 있다.

군	전체 두께(mm/lobules)	피질 두께(mm/lobules)
대조군
Sham	1.941±0.532	1.074±0.273
류마티즘 관절염	1.997±0.255	1.121±0.194
처리군
디클로페낙 소디움	1.941±0.916	1.333±0.705
폴리칸 21.25mg/kg	2.025±0.354	1.170±0.192
폴리칸 42.5mg/kg	2.120±0.393	1.232±0.201
폴리칸 85mg/kg	2.093±0.403	1.305±0.255

비장 전체 두께는 RA 대조군에서 정상 대조군에 비해 24.32%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움, 폴리칸 21.25, 42.5 및 85mg/kg 투여군에서는 RA 대조군에 비해 17.49, -6.71, -11.12 및 -10.44%의 변화를 각각 나타내었다.

실험예 3-5 : 동물 모델의 비장 백색 수질 분석

비장 백색 수질의 수는 RA 대조군 에서 정상 대조군에 비해 19.40%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움, 폴리칸 21.25, 42.5 및 85mg/kg 투여군에서는 RA 대조군에 비해 5.00, -6.25, -5.00 및 -13.75%의 변화를 각각 나타내었다.

비장 백색 수질의 직경은 RA 대조군에서 정상 대조군에 비해 24.09%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움, 폴리칸 21.25, 42.5 및 85mg/kg 투여군에서는 RA 대조군에 비해 -8.14, -16.99, -22.65 및 -22.01%의 변화를 각각 나타내었다. 아울러, 하기 표 2를 참고하면, 처리군의 전체 두께, 백색 수질의 수 및 백색 수질의 두께가 감소하는 것을 알 수 있다. 하기 표에서 8마리의 동물모델의 평균± 표준편차 값으로 나타내었으며, ^*p<0.01 및 ^**p<0.05로서 Sham 대조군과 비교하였다. ^† p<0.01 류마티스 관절염 대조군과 비교하였다.

군	전체 두께 (mm/중추부)	백색수질 수 (/1mm2)	백색수질의 두께 (mm/백색수질)
대조군
Sham	3.180±0.218	8.375±1.768	0.865±0.118
류마티즘 관절염	3.954±0.279*	10.000±0.926	1.073±0.119*
처리군
디클로페낙 소디움	4.464±0.585*†	10.500±2.121	0.986±0.304
폴리칸 21.25mg/kg	3.689±0.223*	9.375±2.134	0.891±0.076†
폴리칸 42.5mg/kg	3.515±0.247**†	9.500±1.604	0.830±0.056†
폴리칸 85mg/kg	3.541±0.281**†	8.625±1.408	0.837±0.067†

실험예 3-6 : 프로테오글리칸 소실 및 erosion 분석

콜라겐 유발 관절염에서는 조직학적으로 관절 연골의 프로테오글리칸의 소실과 이에 따른 erosion, 즉 전형적인 RA가 관찰되는 것으로 알려져 있다 [Williams et al., 1992; Dudler et al., 2000; van Holten et al., 2004; Kim et al., 2007]. 본 실험의 결과에서도 정상 대조군에 비해 유의성 있는(p<0.01) 슬관절의 대퇴골 및 경골 관절면 연골의 프로테오글리칸의 감소, erosion score의 증가 및 연골 두께 자체의 감소가 RA 유발 대조군에서 각각 인정되었다.

한편, 도 9 및 도 10을 참고하면, 이러한 콜라겐 유발 RA 소견이 21.25mg/kg 투여군의 경골을 제외한 모든 폴리칸 투여군에서 투여 용량 의존적으로 현저히 억제되었으며, 폴리칸 21.25mg/kg 투여군에서도 유의성 있는 (p<0.05) 프로테오글리칸의 소실의 억제가 인정되었으나, erosion score 및 경골 관절연골의 두께는 RA 대조군과 유사하게 관찰되었다.

반면, 디클로페낙 소디움 투여에 의해서도 콜라겐 유발 RA 소견이 현저히 억제되었다. 디클로페낙 소디움은 비스테로이드계 항염증제로, 프로스타글란딘 합성 억제에 의한 콜라겐 유발 RA 에 대한 효과는 이미 잘 알려져 있으며, 여러 가지 물질의 항 RA 효과 평가에 비교 약물로 사용되어져 왔다[Sanchez-Pernaute et al., 1997; Rordorf et al., 2005].

실험예 3-7 : 동물모델의 대퇴골 관절연골 분석

대퇴골 관절연골의 Safranin-O score 는 RA 대조군에서 정상 대조군에 비해 1000.00%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움, 폴리칸 21.25, 42.5 및 85mg/kg 투여군에서는 RA 대조군 에 비해 -63.64, -36.36, -63.64 및 -59.09%의 변화를 각각 나타내었다.

대퇴골 관절연골의 Erosion score 는 RA 대조군에서 정상 대조군에 비해 400.00%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움, 폴리칸 21. 25, 42.5 및 85mg/kg 투여군에서는 RA 대조군에 비해 -36.00, -20.00, -44.00 및 -44.00%의 변화를 각각 나타내었다.

대퇴골 관절연골의 두께는 RA 대조군에서 정상 대조군에 비해 -43.79%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움, 폴리칸 21.25, 42.5 및 85mg/kg 투여군에서는 RA 대조군에 비해 333.70, 21.12, 44 .14 및 64.65%의 변화를 각각 나타내었다. 하기 표 3을 참고하면, 처리군은 대조군에 비하여 Safranin-O 값, erosion 값 및 경골 관절 연골의 두께는 현저하게 감소하는 것을 알 수 있다. 또한, 하기 표는 16관절의 평균± 표준편차로서 나타내었으며, p<0.01 및 ^**p<0.05로서 Sham 대조군과 비교하였다. ^† p<0.01류마티스 관절염 대조군과 비교하였다.

군	Safranin 값 (Max = 3)	erosion 값 (Max = 3)	경골 관절 연골의 두께 (mm)
대조군
Sham	0.125±0.342	0.313±0.479	0.193±0.030
류마티즘 관절염	1.375±0.957*	1.563±1.094*	0.108±0.025*
처리군
디클로페낙 소디움	0.500±0.577	1.000±0.000**	0.470±0.674††
폴리칸 21.25mg/kg	0.875±0.719*	0.250±0.683*	0.131±0.030*††
폴리칸 42.5mg/kg	0.500±0.516†	0.875±0.500**	0.156±0.024*†
폴리칸 85mg/kg	0.563±0.629††	0.875±0.691**	0.178±0.046†

실험예 3-8 : 동물모델의 경골 관절 연골 분석

경골 관절연골의 Safranin-O score 는 RA 대조군에서 정상 대조군에 비해 209.09%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움, 폴리칸 21.25, 42.5 및 85mg/kg 투여군에서는 RA 대조군에 비해 -29.41, -29.41, -50.00 및 -73.53%의 변화를 각각 나타내었다.

경골 관절 연골의 Erosion score 는 RA 대조군에서 정상 대조군에 비해 966.67%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움, 폴리칸 21.25, 42.5 및 85mg/kg 투여군에서는 RA 대조군에 비해 -75.00, -6.25, -46.88 및 -46.88%의 변화를 각각 나타내었다.

경골 관절연골의 두께는 RA 대조군에서 정상 대조군에 비해 -43.00%의 변화를 나타내었으며, 디클로페낙 소디움, 폴리칸 21.25, 42.5 및 85mg/kg 투여군에서는 RA 대조군에 비해 38.75, 0.67, 14.08 및 36.64%의 변화를 각각 나타내었다.

하기 표 3을 참고하면, 처리군은 류마티스 대조군에 비하여 Saf ranin-O 값 및 erosion 값은 감소하는 추세를 보였으며, 경골 관절연골의 두께는 증가하는 것을 알 수 있다. 또한, 하기 표는 16관절의 평균± 표준편차로서 나타내었으며, p<0.01 및 ^**p<0.05로서 Sham 대조군과 비교하였다. ^†p<0.01 류마티스 관절염 대조군과 비교하였다.

군	Safranin 값 (Max = 3)	erosion 값 (Max = 4)	경골 관절 연골의 두께 (mm)
대조군
Sham	0.688±0.704	0.188±0.403	0.213±0.038
류마티즘 관절염	2.125±0.885*	2.000±1.265	0.122±0.050*
처리군
디클로페낙 소디움	1.500±0.577	0.500±1.000	0.169±0.024††
폴리칸 21.25mg/kg	1.500±0.966*††	1.875±1.455	0.122±0.038*
폴리칸 42.5mg/kg	1.063±0.929†	1.063±0.929	0.139±0.043*
폴리칸 85mg/kg	0.563±0.629†	1.063±0.998	0.166±0.043*†

실험예 4 - 폴리칸(polycan)의 독성실험

실험예 4-1 : 마우스 준비

6주령의 수컷 ICR 마우스와 암컷 ICR 마우스(Charles River, Japan) 각각 20마리를 준비하였다. 상기 마우스를 20~25℃의 온도, 30~35%의 습도에서 폴리카보네이트 케이지 마다 5마리 씩 넣어두었다. 낮과 밤의 사이클을 12시간:12시간으로 하였다. 또한, 제한을 두지 않고 물을 공급하였으며 , 모든 쥐들은 희생시키기 전까지 밤 동안은 절식하였다.

실험예 4-2 : 시험물 및 배합

폴리칸(Glucan Corp. Ltd., Korea)은 갈색을 띤 점액질이지만 균일한 용액이다. 상기 폴리칸을 4℃의 냉장실에 보관하였다. 수컷 및 암컷 마우스의 그룹마다 각각 1000, 500 및 250㎎/㎏으로 시험물을 경구투여 하였다. 마우스들은 하기 표 5와 같이 그룹을 나누고 번호를 붙였다.

그룹	성별	마리수	실험동물 번호	총 투여량(㎎/㎏)
G0M	수컷	5	G0B-01~G0M-05	0
G1M	수컷	5	G1B-01~G0M-05	1000
G2M	수컷	5	G2B-01~G0M-05	500
G3M	수컷	5	G3B-01~G0M-05	250
G0F	암컷	5	G0F-01~G0F-05	0
G1F	암컷	5	G1F-01~G1F-05	1000
G2F	암컷	5	G2F-01~G2F-05	500
G3F	암컷	5	G3F-01~G3F-05	250

실험예 4-3 : 통계학적 분석

LD₅₀은 Probit 방법으로 계산되었다. 통계학적 분석은 Window에 사용되는 SPSS(Release 6.1.3, SPSS Inc., USA)를 사용하여 수행되었다.

실험예 4-4 : 결과

표 5에서 나타난 조건과 같이 각각의 투여량을 달리하여 경구투여한 모든 마우스들의 날짜 경과에 따른 생존율을 하기 표 6에 나타내었다.

그룹 ID

일수

전체

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

수컷

G0M

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5(0%)

G1M

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5(0%)

G2M

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5(0%)

G3M

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5(0%)

암컷

G0F

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5(0%)

G1F

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5(0%)

G2F

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5(0%)

G3F

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5

0/5(0%)

표 6을 살펴보면, 상기 암컷과 수컷 마우스들이 모두 살아남은 것을 알 수 있었다. 그러므로, 폴리칸을 경구투여한 후의 암컷 및 수컷 마우스 모두는 LD₅₀ 및 근사치 LD는 1000㎎/㎏이 넘는 것으로 산정되었다.

본 발명은 상술한 실시 형태 및 첨부된 도면에 의해 한정되는 것이 아니며, 첨부된 청구범위에 의해 한정하고자 한다. 따라서, 청구범위에 기재된 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 당 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에 의해 다양한 형태의 치환, 변형 및 변경이 가능할 것이며, 이 또한 본 발명의 범위에 속한다고 할 것이다.

도 1은 아무런 처리를 하지 않은 군, 디클로페낙 소디움을 처리한 군, 폴리칸 85, 42.5 및 21.25mg/kg을 처리한 군에 속하는 동물모델의 몸무게 변화를 일수에 따라 나타낸 그래프이다.

도 2는 아무런 처리를 하지 않은 군, 디클로페낙 소디움을 처리 한 군, 폴리칸 85, 42.5 및 21.25mg/kg을 처리한 군에 속하는 동물모델의 슬관절 두께 변화를 일수에 따라 나타낸 그래프이다.

도 3은 정상인 군, 디클로페낙 소디움을 처리한 군, 폴리칸 85, 42.5 및 21.25mg/kg을 처리한 군에 속하는 동물모델 각각의 슬관절 두께 및 최대신장각을 나타낸 그래프이다.

도 4 디클로페낙 소디움을 처리한 군, 폴리칸 85, 42.5 및 21.25mg/kg을 처리한 군에 속하는 동물모델의 Mankin score를 나타낸 그래프이다.

도 5는 디클로페낙 소디움을 처리한 군, 폴리칸 85, 42.5 및 21.25mg/kg을 처리한 군에 속하는 동물모델의 관절부위를 절단하여 관절에서 연골의 두께를 나타낸 그래프이다.

도 6은 디클로페낙 소디움을 처리한 군, 폴리칸 85, 42.5 및 21.25mg/kg을 처리한 군에 속하는 동물모델의 연골세포의 수를 나타낸 그래프다.

도 7은 Sham 대조군(a,b), 류마티스 관절염 대조군(c,d), 디클로페낙 소디움 처리군(e,f), 폴리칸 85(k,l), 42.5(i,j) 및 21.25(g,h)mg/kg을 처리한 군의 흉선피질의 두께 증가를 나타낸 것이다. 여기서 C는 피질 영역이고, M은 골수 영역이 다.

도 8은 Sham 대조군(a,b), 류마티스 관절염 대조군(c,d), 디클로페낙 소디움 처리군(e,f), 폴리칸 85(k,l), 42.5(i,j) 및 21.25(g,h)mg/kg을 처리한 군의 비장동맥을 나타낸 것이다. 여기서 W는 백색속질 영역이고, R은 적색속질 영역, A는 중추 소동맥이다.

도 9는 Sham 대조군(a), 류마티스 관절염 대조군(b), 디클로페낙 소디움 처리군(c), 폴리칸 85(f), 42.5(e) 및 21.25(d)mg/kg을 처리한 군의 Femur의 슬관절 관절표면을 나타낸 것이다. 여기서, S는 슬관절의 활액강이 고, B는 미세뼈이다.

도 10은 Sham 대조군(a), 류마티스 관절염 대조군(b), 디클로페낙 소디움 처리군(c), 폴리칸 85(f), 42.5(e) 및 21.25(d)mg/kg을 처리한 군의 Tibia의 슬관절 관절표면을 나타낸 것이다. 여기서, S는 슬관절의 활액강이고, B는 미세뼈이다.

Claims (10)

1,6-분지 글루코오스 잔기에 젖산이 결합된 하기 화학식 1 을 기본 다량체 구조로 갖는 β-1,3-1,6-분지 D-글루칸을 유효성분으로 포함하는 골관절염 또는 류마티스 관절염을 예방, 치료 또는 완화하는 약학적 조성물

(화학식1)

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제1항에 있어서, 상기 약학적 조성물의 투여량은 체중 kg당 21.25mg 내지 85mg인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.

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1,6-분지 글루코오스 잔기에 젖산이 결합된 하기 화학식 1을 기본 다량체 구조로 갖는 β-1,3-1,6-분지 D-글루칸을 유효성분으로 포함하는 골관절염 또는 류마티스 관절염 예방 또는 개선용 건강보조제.

(화학식1)

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