KR101070551B1 - 음파진동을 이용한 지방전구세포의 성장 조절방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 음파진동을 이용하여 지방전구세포의 성장을 조절하는 방법에 관한 것으로, 구체적으로 1 내지 10 Hz의 주파수를 갖는 음파진동을 지방전구세포에 처리하여 지방전구세포의 성장을 촉진시키고, 11 내지 50 Hz의 주파수를 갖는 음파진동을 지방전구세포에 처리하여 지방전구세포의 성장을 억제하는, 음파진동을 이용하여 지방전구세포의 성장을 조절하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 지방전구세포의 성장 조절방법은 특정 주파수대의 음파진동을 이용하여 안전하면서도 효과적으로 지방전구세포의 성장을 억제하여 비만을 예방하거나 억제할 수 있고, 지방전구세포를 이용한 생체이식재료의 이식 시 지방전구세포의 성장을 촉진시켜 생착률 및 이식 성공률을 향상시키는데도 유용하게 적용될 수 있다.

음파진동, 지방전구세포, 성장 조절, 비만 예방, 비만 억제, 지방 자가이식

Description

음파진동을 이용한 지방전구세포의 성장 조절방법{METHOD FOR THE GROWTH REGULATION OF PREADIPOCYTES USING SONIC VIBRATION}

본 발명은 특정 범위의 주파수대를 갖는 음파진동을 지방전구세포에 처리하여 이들의 성장을 억제하거나 촉진시키는 방법에 관한 것이다.

지방세포는 인체 내에 약 110억 개 이상이 존재하고 있으며 포유류의 생체 내에서 에너지를 축적하거나 방출하는 역할을 담당한다. 이 지방세포 내에서는 에너지의 축적과 방출에 대한 복잡한 조절 기작이 존재하는데, 에너지의 수요보다 공급이 월등히 많은 경우에는 지방세포 내에서 에너지를 중성지방으로 저장하고 에너지가 고갈되었을 때에는 이를 다시 유리 지방산과 글리세롤로 분해하여 에너지원으로 사용한다. 비만은 상기 과정의 불균형으로 인하여 과도한 에너지가 축적되어 발생하는 것으로서 지방세포의 크기가 커지는 현상에 기인하는 것으로 보고되어 있다.

비만을 치료하기 위하여 일부 환자들은 식이요법과 운동요법을 통해 체중을 줄이려고 노력하고 있으며, 그 외 행동요법, 정신요법, 약물요법 또는 외과요법(위축소술과 같은 수술요법) 등이 병행된다. 식이요법은 총 에너지 섭취량을 제어하 는 치료방법이나, 안정시의 대사율이 저하되기 때문에 기대와 같은 체중감소는 얻을 수 없고, 감량에 성공한 경우라도 제(除)지방 체중의 감소가 중심이 되는 경우가 많으며, 영양불량장해, 공복감 또는 스트레스라고 하는 육체적 및 정신적 고통을 야기하는 문제가 있다. 운동요법은 소비 에너지의 증가뿐만 아니라, 안정 시 대사율의 개선, 인슐린 저항성의 시정 및 체지방의 감소 등의 효과가 있는 것으로 보고되었으나, 1회에 11분간의 호기(好氣)적 운동을 주 3회 이상 수행하는 것이 요구되어 이를 지속적으로 시행하기에는 다소 어려움이 있다. 행동요법 또는 정신요법은 식이요법 또는 운동요법을 유지하기 위한 보조적인 수단으로, 충분한 효과를 얻는 것은 일반적으로 곤란하다.

상기의 치료방법이 유효하지 않은 경우, 또는 극도의 비만에 대한 긴급치료가 필요한 경우에, 약물요법 또는 외과요법 등이 행해지고 있으나, 외과요법은 환자에게 주는 부담이 매우 크다. 약물요법을 위해 사용되는 비만증 치료제로는 식욕 억제제, 소화흡수 저해제, 비만축적 방해제 또는 대사촉진제 등이 있으나, 이들 비만 치료제는 약물 의존성 등의 부작용을 일으킬 위험성이 있다. 또한, 투여한 환자에게 단기간에 내성이 생겨버리는 경우도 있기 때문에, 장기간 연속하여 사용할 수 없다는 문제점도 있다.

현재까지 비만의 억제 및 치료를 위하여 많은 연구개발이 이루어져 다양한 약물이 개발되었다. 최근 비만을 치료하는 약물들은 크게 3가지 범주로 구분되는데, 하나는 음식의 섭취량을 줄이기 위해 식욕을 감퇴시키는 것이고, 다른 하나는 체내 대사를 조절하는 것이며, 마지막으로는 체내 발열반응(thermogenesis)을 증가 시킴으로써 체내 열량을 소모하게 하는 약물이다.

그러나 현재 비만 치료제로서 임상에서 사용되고 있는 대부분의 약물들에서 많은 부작용이 발견되고 있다. 세로토닌(serotonin) 재흡수 억제제인 덱스펜플루라민(dexfenfluramine)과 펜플루라민(fenfluramine)은 미국 식품의약국(FDA)으로부터 비만 치료제로 승인받은 후 막대한 판매를 기록하였으나, 심장 판막이상의 부작용이 발견되어 1997년 10월에 시장에서 회수되었다. 플루오젝틴(fluoxectin)은 알레르기성 발진, 메스꺼움, 불면증 등의 부작용이 보고되고 있으며, 다이에틸프로피온(diethylpropion), 펜테민(phentermine), 마진돌(mazindol) 등에서도 불면증, 두통, 메스꺼움, 갈증 등의 부작용이 관찰되고 있다. 최근에는 비만 치료제 전문의약품으로 시판 중인 페닐프로파놀라민(phenylpropanolamine)의 뇌출혈 위험성을 증가시키는 부작용이 보고된 바 있다. 또한 현재 가장 각광받고 있는 비만 치료제 전문의약품인 오리스타트(Orlistat: Xenical) 역시 설사, 지방변, 분실금 등의 부작용이 나타나며, 한국인과 같이 지방섭취가 서양인에 비하여 적은 경우에는 약물의 효과가 뚜렷하지 않아 그 사용이 제한적이다. 따라서 부작용을 유발하지 않으면서 효과적으로 비만을 치료하고 예방할 수 있는 방법의 개발이 절실히 요구되고 있는 실정이다.

한편, 지방세포의 자가이식은 1890년대부터 시작되었고, 1980년대 이후 지방 흡입술이 시작된 이래 널리 사용됨으로써 그 사례도 상당히 많아져서 자가 지방이식의 안전성은 이미 입증되어 있다. 특히 지방이식은 나이가 들면서 노화된 피부의 주름 개선을 비롯하여 미용 성형수술에 사용되고 있고, 화상 또는 상처 부위, 암 절제 수술로 상실된 부분 등에도 지방을 이식하여 결함부위를 교정하는 방법으로서 좋은 성과를 보이고 있다.

그러나 단순히 지방흡입술로 얻어진 지방을 그대로 이식할 경우, 이식 후에 이식된 지방 부피의 40 내지 60%가 생체에 흡수되는 등 생존률과 생존기간이 기대에 미치지 못하여 재이식이 필요하다는 문제가 있다(S. Eremia 등, Dermatol . Sur. 26: 1150-1158, 1100; Fulton JE 등, Dermatol . Clin. 19(3): 523-530, 1101).

이에 지방흡입술로 얻은 지방 덩어리로부터 순수하게 지방세포만을 분리하고자 하는 연구가 지속되어 왔다. 이러한 노력의 일환으로 일부에서는 지방 덩어리로부터 섬유질, 혈액 등을 제거한 후 지방이식에 사용하고 있으나, 아직까지 그 효과가 만족스럽지 못한 수준이다(G Sattler 등, Dermatol. Sur. 26: 1140-1144, 1100).

지방조직에서 단순 분리된 지방세포를 이식하였을 때 나타나는 이식 부피의 감소는, 대부분의 지방세포가 충분히 성숙한 것이기 때문에 흡입 과정 중에 상당 부분이 파괴되거나 이식 후 생착율이 저하되고, 혈관 재생 또는 혈관 신생이 원활하게 진행되지 못함에 기인한다. 이러한 문제점을 해결하기 위한 방안으로 지방조직에 포함되어 있는 지방전구세포를 생체이식재료로 이용하는 방법이 개발되었다.

한편, 최근 수년에 걸쳐 생체적합물질(biomaterial) 분야에서 괄목할만한 성장이 이루어져 이미 많은 물질들이 임상에 적용되고 있으며, 대표적인 것으로는 콜라겐, 폴리-락트산(poly-lactic acid), 폴리-글리콜산(poly-glycolic acid), 콜라겐 타입 Ⅰ(collagen type Ⅰ) 유도체, 알지네이트(alginate) 등이 포함된다. 이 러한 생체적합물질에 스테로이드나 성장호르몬과 같은 외인성 요소를 처리하여 이식함으로써 이식한 매트릭스 내에서 세포의 성장을 촉진할 수 있다. 최근 발표된 논문에서는, bFGF(basic fibroblast growth factor)와 마트리겔(Matrigel, basement membrane collagen)을 함께 마우스에 주사하여 새로운 지방조직이 생성되는 것을 확인하고 있다(K Toriyama 등, Tissue Engineering 8: 157-165, 2002). 즉, 마트리겔 부위에는 내피세포(endothelial cell)가 모여들어 새로운 혈관이 형성되고 모여든 섬유모세포-유사세포(fibroblast-like cell) 내로 지방 방울이 형성되는 것을 확인하였다. 또한, PLGA(poly lactic-co-glycolic acid)로 만든 중합체 골격(scaffold)에 지방전구세포를 도입하여 랫트에 이식하였을 때 지방전구세포가 지방세포로 분화되어 지방조직을 형성하는 것이 확인되었다(CW Patrick 등, Tissue Engineering 8: 283-293, 2002).

그러나 이와 같은 생체적합물질 분야의 발전에도 불구하고 사람에 이식하여 효과적으로 지방조직을 재생할 수 있는 방법은 아직 개발된 바가 없다. 그 이유는 in vitro에서 사람의 동종 또는 이종 지방전구세포를 효과적으로 증식시키고 지방세포로 분화시킬 수 있는 적절한 조건, 이식에 사용하였을 때 안전상의 문제없이 잘 생착하고 지속적으로 유지될 수 있는 적절한 형태의 분화된 지방세포를 얻는 조건이 개발되지 않았기 때문이다. 따라서 연부조직의 결손 또는 결함 등을 효과적으로 치료하기 위해서는 세포 생산기술과 적절한 생체적합물질의 조화가 필요하고, 안전상에 문제를 야기하지 않으면서 지방전구세포의 성장을 촉진하거나 억제할 수 있는 새로운 기술 개발이 요구되고 있는 실정이다.

이에 본 발명자들은 비만 예방을 위해서는 지방전구세포의 성장을 억제하는 반면, 지방세포 자가이식의 효과를 향상시키기 위해서는 지방전구세포의 성장을 촉진시킬 수 있는 방법을 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 음파진동과 같이 안전상에 문제를 유발하지 않는 특정 주파수 대역의 외부적인 파동에너지를 지방전구세포에 전달하여 이의 성장을 촉진하거나 억제할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 비만 예방 및 억제와 지방세포를 포함하는 생체이식재료가 이식치료에 유용하게 사용될 수 있도록 음파진동 주파수에 따른 지방세포의 성장에 대한 영향을 조사하여 특정 주파수대의 음파진동을 이용하여 지방세포의 성장을 조절할 수 있는 방법을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 1 내지 10 Hz의 주파수를 갖는 음파진동을 지방전구세포에 전달하여 지방전구세포의 성장을 촉진시키고, 11 내지 50 Hz의 주파수를 갖는 음파진동을 지방전구세포에 전달하여 지방전구세포의 성장을 억제하는, 음파진동을 이용하여 지방전구세포의 성장을 조절하는 방법을 제공한다.

본 발명에 따른 지방전구세포의 성장 조절방법은 지방전구세포에 특정 주파수대의 음파진동을 전달함으로써 간단하게 주파수 변화에 따라 지방전구세포의 성장을 억제하거나 촉진시킬 수 있으므로 비만 예방 및 억제에 효과적일 뿐만 아니라, 지방전구세포를 포함하는 생체이식재료를 제조하고 이를 이용한 이식 치료에서 지방전구세포가 생체에 잘 생착하여 지속적으로 유지될 수 있게 하는데 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명은 1 내지 10 Hz의 주파수를 갖는 음파진동을 지방전구세포에 전달하 여 지방전구세포의 성장을 촉진시키고, 11 내지 50 Hz의 주파수를 갖는 음파진동을 지방전구세포에 전달하여 지방전구세포의 성장을 억제하는, 음파진동을 이용하여 지방전구세포의 성장을 조절하는 방법을 제공한다.

이하, 본 발명에 대하여 구체적으로 설명한다.

본 명세서에서 "음파" 또는 "음파 진동"은 20 kHz 미만의 주파수 영역대로 특정 음파 대역 주파수를 갖는 진동을 지방전구세포에 처리하여 진동에 의한 공명 현상을 일으켜 지방전구세포의 성장을 조절할 수 있다.

본 명세서에서 "지방전구세포(preadipocytes)"는 지방조직에서 회수된 세포로, 지방세포로 분화되기 전의 세포를 의미한다.

본 명세서에서 "이식"은 노화로 인한 주름개선, 얼굴 윤곽선 교정 등 신체의 윤곽을 바로 잡아주기 위하여, 또는 암 절제술로 인한 결손, 창상으로 인해 함몰된 부위의 재생, 기형으로 인한 함몰 부위 등 신체 전반에 걸쳐 함몰된 부위의 재생을 위하여 지방전구세포를 이식하는 것을 의미한다.

본 발명자들은 음파진동의 주파수 변화에 따른 지방전구세포의 성장 변화를 조사하기 위하여, 지방전구세포로서 한국 세포주은행(Korean Cell Line Bank, KCLB)으로부터 분양받은 마우스 유래 3T3-L1 세포주를 배양한 후, 배양된 지방전구세포에 0 Hz(대조군), 5 Hz, 10 Hz, 20 Hz, 30 Hz, 40 Hz 및 50 Hz의 주파수를 갖는 음파진동을 25 내지 60℃, 바람직하게는 37℃에서 0.1 내지 10일간, 바람직하게는 6일간 각각 처리하였다. 처리 후, 지방전구세포를 회수하여 세포수를 계수한 결과, 10 Hz 이하의 주파수대를 갖는 음파진동을 처리한 지방전구세포는 대조군에 비하여 세포수가 증가한 반면, 10 Hz 이상의 주파수대를 갖는 음파진동을 처리한 지방전구세포는 세포수가 감소한 것을 확인하였다.

상기 결과로부터 본 발명자들은 1 내지 10 Hz의 주파수를 갖는 음파진동을 지방전구세포에 처리하여 지방전구세포의 성장을 촉진시키고, 11 내지 50 Hz의 주파수를 갖는 음파진동을 지방전구세포에 처리하여 지방전구세포의 성장을 억제하는, 음파진동을 이용하여 지방전구세포의 성장을 조절하는 방법을 개발하였다.

본 발명에 따른 지방전구세포의 성장 조절방법은 지방전구세포에 특정 주파수대의 음파진동을 전달함으로써 주파수 변화에 따라 간단하게 지방전구세포의 성장을 억제하거나 촉진시킬 수 있으므로 비만 예방 및 억제, 생체이식재료 제조 및 이식 후 재건치료에 유용하게 활용될 수 있다.

구체적으로, 복부 또는 허벅지와 같이 지방이 과도하게 축적된 부위에 본 발명에 따른 지방전구세포의 성장 조절방법에 따라 11 내지 50 Hz의 주파수를 갖는 음파진동을 전달하게 되면 지방전구세포의 성장이 억제되어 지방세포의 수가 감소하게 되므로 비만을 예방하거나 억제할 수 있다.

또한, 지방전구세포를 포함하는 생체이식재료를 제조하고 이를 지방이식에 사용할 경우, 본 발명에 따른 지방전구세포의 성장 조절방법에 따라 이식 부위에 1 내지 10 Hz의 주파수를 갖는 음파진동을 전달하게 되면 지방전구세포의 성장이 촉진됨에 따라 이식세포의 부피가 점진적으로 증가하여 생체 조직에 대한 생착률도 증가하고, 따라서 연부조직결손 또는 미용상의 외형적 결함으로 인한 장애 등의 재건치료에 유용하게 이용될 수 있다.

따라서 본 발명에 따른 지방전구세포의 성장 조절방법을 이용하여 지방전구세포의 성장을 촉진시키거나 억제하기 위한 음파진동 치료기 및 미용기도 본 발명의 범위 내에 포함된다.

이하, 본 발명을 하기 실시예에 의해 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.

< 참조예 1> 지방전구세포의 보존

지방전구세포로 한국 세포주은행(Korean Cell Line Bank, KCLB, 서울대학교 의과대학 암센터 내 소재)으로부터 분양받은 마우스 유래 3T3-L1 세포주(KCLB 10092.1)의 세포 용액 1 ㎖을 10%(v/v) 우혈청(fetal bovine serum, FBS) 함유 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium, (주)웰진) 배지 19 ㎖과 혼합한 후 1,000 rpm에서 5분간 원심분리 하였다. 원심분리 후 상등액은 제거하고 분리된 세포 펠렛을 10%(v/v) FBS 함유 DMEM 배지 15 ㎖이 들어있는 75T-플라스크(표면적 75 ㎠)에 접종하여 3일마다 배지를 교환해 주면서 37℃로 유지되는 CO₂ 인큐베이터에서 4일간 배양하였다. 배양 완료 후 원심분리에 의해 배지는 제거하고 회수된 세포 펠렛을 항생제/항진균제(Antibiotic/Antimycotic) 200 ㎕ 및 젠타마이신(Gentamycin) 10 ㎕ 함유 PBS(Phosphate Buffered Saline) 10 ㎖을 사용하여 1회 세척하였다. 세척된 세포를 0.05%(w/v) 트립신 및 0.01%(w/v) EDTA 함유 PBS 용액에 넣고 37℃ 에서 5분간 처리한 후 10%(v/v) FBS 함유 DMEM 배지에 옮겨 1,000 rpm에서 5분간 원심분리 하였다. 원심분리 후 상등액은 버리고 회수된 세포 펠렛에 10%(v/v) FBS 함유 DMEM 배지, FBS 및 DMSO(dimethly sulfoxide)를 7:2:1의 비율로 첨가한 후 피펫팅을 약 5분간 실시하여 세포를 고르게 분산시켰다. 이 용액을 바이알에 1 ㎖씩 분주하고 이후 실험에 사용하기 전까지 액체 질소 탱크에서 냉동 보관하였다. 이때 바이알 당 세포수는 약 1.0×10⁶개 정도로 유지하였다.

< 참조예 2> 지방전구세포의 일차배양

액체 질소 탱크에 보관된 지방전구세포 3T3-L1 세포주의 바이알을 37℃로 유지되는 수조에서 해동시킨 후 10%(v/v) FBS 함유 DMEM 배지 9 ㎖을 첨가하여 혼합하고 1,000 rpm에서 5분간 원심분리 하였다. 원심분리 후 상등액은 제거하고 회수된 세포 펠렛을 10%(v/v) FBS 함유 DMEM 배지 15 ㎖이 들어있는 75T-플라스크에 접종하였다. 상기 플라스크를 3일마다 배지를 교환해 주면서 37℃로 유지되는 CO₂ 인큐베이터에서 4일간 배양하여 이후의 실험에 사용하였다.

< 실시예 1> 음파진동이 지방전구세포의 성장에 미치는 영향

음파진동 장치는 (주)티에스코리아(서울시 광진구 능동 18-11 어린이회관 과학관 2층 소재)에 의뢰, 제작하여 사용하였다. 도 3a는 본 실험에 사용된 음파진동 장치이고 도 3b는 음파진동 주파수 컨트롤러이다. 상기 참조예 2에서와 같이 일차배양 후 배지를 제거하고, 75T-플라스크 바닥에 부착된 세포에 항생제/항진균제 200 ㎕ 및 젠타마이신 10 ㎕ 함유 PBS(Phosphate Buffered Saline) 10 ㎖을 사용하여 1회 세척하였다. 세척된 세포를 0.05%(w/v) 트립신 및 0.01%(w/v) EDTA 함유 PBS 용액 5 ㎖을 첨가하고 37℃에서 5분간 처리하여 세포를 플라스크 바닥에서 떨어뜨려 용액 중에 부유시켰다. 상기 플라스크에 10%(v/v) FBS 함유 DMEM 배지 15 ㎖을 혼합한 후 1,000 rpm에서 5분간 원심분리 하여 세포만을 회수하였다. 이 세포를 10%(v/v) FBS 함유 DMEM 배지 15 ㎖이 들어있는 75T-플라스크에 3×10⁵ 세포/㎖ 농도로 접종하고 3일마다 배지를 교환해 주면서 37℃로 유지되는 CO₂ 인큐베이터에서 6일간 배양하였다. 이때, 음파진동 장치를 인큐베이터 내에 장착하고 음파진동 장치 위에 상기 75T-플라스크를 올려놓은 후 각각에 0 Hz(대조군), 5 Hz, 10 Hz, 20 Hz, 30 Hz, 40 Hz 및 50Hz의 주파수를 갖는 음파진동을 전달하면서 배양하였다. 배양이 완료된 후 배지는 제거하고 75T-플라스크 바닥에 부착된 세포에 항생제/항진균제 200 ㎕ 및 젠타마이신 10 ㎕ 함유 PBS 10 ㎖를 사용하여 1회 세척하였다. 세척 후 75T-플라스크 바닥에 부착된 세포에 0.05%(w/v) 트립신 및 0.01%(w/v) EDTA 함유 PBS 용액 5 ㎖을 첨가하고 37℃에서 5분간 처리하여 세포를 떨어뜨려 용액 중에 부유시켰다. 상기 플라스크에 10%(v/v) FBS 함유 DMEM 배지 15 ㎖을 첨가하고 1,000 rpm에서 5분간 원심분리 하였다. 원심분리 후 상등액은 버리고 회수된 세포 펠렛에 다시 10%(v/v) FBS 함유 DMEM 배지 10 ㎖을 첨가한 후 피펫팅을 약 5분간 실시하여 세포를 분리하였다. 생세포 계수(viable cell count) 는 PBS에 용해시킨 4.0 g/L의 트립판 블루(trypan blue, Sigma cat# T-5526) 용액으로 상기 세포를 염색한 후 혈구계(hemocytometer)를 이용하여 세포수를 세었다.

그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 대조군(0 Hz)을 기준으로 5 Hz 및 10 Hz의 주파수를 갖는 음파진동으로 각각 처리된 실험군에서는 세포 수가 증가한 반면, 20 Hz, 30 Hz, 40 Hz 및 50 Hz의 주파수를 갖는 음파진동으로 각각 처리된 실험군에서는 주파수가 증가할수록 세포 수가 감소하는 것을 알 수 있다.

상기 결과로부터 1 내지 10 Hz의 주파수를 갖는 음파진동을 지방전구세포에 처리하면 지방전구세포의 성장이 촉진되는 반면, 11 내지 50 Hz의 주파수를 갖는 음파진동을 지방전구세포에 처리하면 지방전구세포의 성장이 억제되는 것을 확인하였다.

도 1은 본 발명에 사용된 지방전구세포 3T3-L1 세포주의 배양시간에 따른 성장곡선을 나타낸 그래프이고,

도 2a, 2b, 2c 및 2d는 본 발명에 사용된 지방전구세포 3T3-L1 세포주의 형태를 배양시간에 따라 현미경으로 관찰한 사진(100×)이고,

도 3a 및 3b는 본 발명에 사용된 음파진동 장치와 음파진동 주파수 컨트롤러의 사진이고,

도 4는 지방전구세포 3T3-L1 세포주에 각각 0 Hz(대조군), 5 Hz, 10 Hz, 20 Hz, 30 Hz, 40 Hz 및 50 Hz의 주파수를 갖는 음파진동을 처리한 후 이들의 세포수를 측정한 결과이다.

Claims (7)

1. 지방전구세포를 5 내지 10 Hz의 주파수를 갖는 음파진동으로 37℃에서 6일 동안 처리하여 지방전구세포의 성장을 촉진시키는 방법.
2. 지방전구세포를 20 내지 50 Hz의 주파수를 갖는 음파진동으로 37℃에서 6일 동안 처리하여 지방전구세포의 성장을 억제하는 방법.
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