KR100974390B1

KR100974390B1 - 궤양성 대장염 또는 간질성 폐렴의 병기 판정 방법 및 그를위한 시약 키트

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Publication number: KR100974390B1
Application number: KR1020077026365A
Authority: KR
Inventors: 무쯔노리 후지와라; 이사오 오까야스; 유조 하야시
Original assignee: 무쯔노리 후지와라; 이사오 오까야스; 유조 하야시; 후지레비오 가부시키가이샤
Priority date: 2005-04-14
Filing date: 2006-04-14
Publication date: 2010-08-05
Also published as: US20090130775A1; US8053202B2; US7829295B2; WO2006118004A1; NZ584369A; CN101133323B; AU2006242054B2; EP1870708B1; NZ562455A; US20110020952A1; EP1870708A4; EP1870708A1; JP4914347B2; CN102305865B; AU2006242054A1; EP1870708A8; EP2312320B1; KR20080016799A; CN101133323A; EP2312320A1

Abstract

종래 궤양성 대장염이나 간질성 폐렴 병기의 판정에 사용되었던 내시경에 의한 숙련을 요한 점막 병변의 관찰이나 생체로부터 채취한 병리 조직 표본의 해석에 의한 판정 방법과는 달리, 용이하게 병변을 판별할 수 있어, 치료약의 선택, 치료 효과의 정도, 투약 중지 등을 판단할 수 있는 방법이며, 뇨 중에 포함되는 물질을 수치화함으로써 정량적으로 병기를 판정하는 방법을 제공한다. 뇨 중의 프로스타글란딘 E 주요 대사물(PGE-MUM)의 농도값을 측정하여, 궤양성 대장염의 관해 직전기(Pre-remission phase)와 궤양성 대장염의 관해기(Remission phase)의 병기를 판정한다. 또한, 뇨 중의 상기 PGE-MUM의 농도값을 측정하여, 간질성 폐렴의 활동기와 간질성 폐렴의 비활동기의 병기를 판정한다.

궤양성 대장염, 간질성 폐렴, 병기 판정 방법, 시약 키트

Description

궤양성 대장염 또는 간질성 폐렴의 병기 판정 방법 및 그를 위한 시약 키트 {METHOD FOR CLINICAL STAGING OF ULCERATIVE COLITIS OR INTERSTITIAL PNEUMONIA AND REAGENT KIT FOR THE SAME}

본 발명은 궤양성 대장염 또는 간질성 폐렴의 병기 판정 방법 및 그를 위한 시약 키트에 관한 것이다.

궤양성 대장염은 난치성 염증 질환으로서 알려져 있고, 환자수(특정 질환 수급자)는 평성 14년도 77,073명이고, 매년 약 5,000명씩 증가하고 있는 것이 보고되었다. 상기 궤양성 대장염은 대장 점막에 미란이나 궤양이 생긴 대장의 염증성 질환이다. 이 질환의 원인은, 장내 세균의 관여나 면역 기능이 정상적으로 기능하지 못하는 자기 면역 반응의 이상, 또는 식생활 변화의 관여 등을 생각할 수 있지만, 아직 명확해지지는 않았다. 특징적인 증상으로는, 하혈을 수반하거나 또는 수반하지 않는 설사와 자주 일어나는 복통이다. 병변은 직장으로부터 연속적으로, 또한 상행성(입구측)으로 퍼지는 성질이 있어, 최대로 직장으로부터 결장 전체에 퍼진다. 이 질환은 병변의 확대나 경과 등에 의해 하기와 같이 분류되어 있다.

(1) 병변의 확대에 의한 분류: 전 대장염, 좌측 대장염, 직장염

(2) 병기의 분류: 활동기, 관해(寬解)기

(3) 중증도에 의한 분류: 경증, 중등증, 중증, 극증

(4) 임상 경과에 의한 분류: 재연 관해형, 만성 지속형, 급성 극증형, 초회 발작형

상기 궤양성 대장염의 진단에는, 임상 증상으로서 지속성 또는 반복성 점혈, 혈변, 또는 그의 기왕증에 의해 행하고, 또한 결장 또는 S형 결장 내의 내시경 검사와 생검을 병용하며, 필요에 따라서 고도하면서도 다대(多大)한 비용이 소요되는 주장(主腸) X선 검사나 전체 대장 내시경 검사를 행하고 있다. 우선, 임상 증상으로부터 얻어진 데이터를 해석하여, 수술에 대한 필요와 불필요, 치료약의 선택, 치료약 투여의 중지 결정 등 최적인 치료 방법의 선택이 행해진다. 또한, 병태를 확인하기 위해서 내시경 검사가 행해지지만, 상기 궤양성 대장염의 활동기에는 천공이나 장관 점막의 손상에 의한 출혈의 위험도 수반되고, 거듭되는 검사는 의료 경제상 큰 부담으로 가중되어, 검사 환자에게 부담과 고통이 따르는 방법이었다.

또한, 프로스타글란딘류(이하 PGs라 함)나 그의 유도체는 생체 내에서 여러 병태와의 관계가 보고되고, 간편한 조작으로 미량의 PGs를 정량하는 방법이 알려져 있다. 이 측정법으로서는, 가스 크로마토그래피 질량 분석법(GC-MS), 방사 면역 측정법(RIA), 효소 면역 측정법(EIA) 등이다. 프로스타글란딘 E₂(PGE)는 생체 내의 염증 반응에 관여하는 중요한 화학적 매개자로서 알려져 있고, 그의 뇨 중 주요 대사물(PGE Main Urinary Metabolite, 이하 「PGE-MUM」이라 함)을 경합법에 의해서 효소 면역법으로 측정하는 방법이 보고되었다(특허 문헌 1).

부가적으로, 상기 궤양성 대장염 환자로부터 얻은 뇨 검체로부터 상기 PGE-MUM을 측정한 값과 상기 궤양성 대장염 환자의 복수개의 임상 증상(임상 질환 활성)을 수치화한 스코어의 합계 스코어(개정 탈스타드 스코어)를 관계짓고자 하는 시도가 본 발명자들에 의해서 행해졌다(비특허 문헌 1).

한편, 난치성 염증 질환의 하나로서 간질성 폐렴이 알려져 있다.

이러한 간질성 폐렴은 간질의 염증에 따라서 폐포의 섬유화를 최종적으로 야기하는 증례의 총칭이고, 특발성 폐선유증, 비특이적 간질성 폐렴, 특발성 기질화 폐렴 증의 증례가 알려져 있다.

이러한 간질성 폐렴은 그의 발생 메카니즘이 충분히 해명되어 있지 않고, 그의 진단에는 고도한 경험이 요구되며, 개개의 증례에 대하여 환자의 증례, 각종 채취 데이터의 검사 결과 등을 종합적으로 판단해야만 하는 곤란이 따랐다.

이러한 문제를 해결하기 위해서, 혈장 중의 오스테오폰틴 양을 측정한 값과 상기 간질성 폐렴의 증상을 관련짓도록 하는 검토도 행해졌다(특허 문헌 2).

또한, 이러한 간질성 폐렴의 증상을 판단하는 마커로서, 서팩턴트 프로테인 D(SP-D), 서팩턴트 프로테인 A(SP-A), 시알화 당쇄 항원 KL-6 등이 알려져 있다.

그러나, 이들 마커는, 상기 간질성 폐렴 증상이 진행된 후에 그 결과로서 검출되는 것이므로, 상기 간질성 폐렴의 병기 단계를 판정하는 수단으로서 이들 마커에 의존하는 방법은 반드시 적절한 것은 아닌 것으로 판명되었다.

특허 문헌 1: 일본 특허 공개 (소)61-11664호 공보

특허 문헌 2: 일본 특허 공개 제2005-030852호 공보

비특허 문헌 1: Digestion 2000; 61: 201-206

<발명의 개시>

<발명이 해결하려고 하는 과제>

우선, 상기 궤양성 대장염에 대해서는, 지금까지의 궤양성 대장염은 병기에 의해서 이하와 같이 크게 2개의 기로 분류되어 있었다.

활동기(Active phase): 혈변을 호소하고, 내시경적으로 혈관 투시상의 소실, 출혈 용이성, 미란, 또는 궤양 등이 확인되는 상태.

관해기(Remission phase): 혈변이 소실되고, 내시경적으로는 활동기의 소견이 소실되며, 혈관 투시상이 출현한 상태.

그러나, 상기 궤양성 대장염에 대하여 상기 활동기와 상기 관해기 사이에는 관해 직전기(Pre-remission phase)라 불리는 이행 병기가 있고, 병리학적으로는 상기 활동기에 가까운 관해 직전기로부터 상기 관해기에 가까운 관해 직전기에 이르는 넓은 범위의 병상이 관찰된다. 상기 관해기에 가까운 증례에서는, 객관성을 가지고 판단하는 것이 어렵고, 임상적으로는 증상이 소실되었지만, 투약 중지의 여부에 대한 판단에는, 내시경에 의한 관찰 소견과 생체로부터 채취한 10 부분 이상의 병리 조직 표본의 해석을 행하여, 모든 조직 표본을 이하에 나타내는 마츠(Matts) 분류에 의해서 스코어화하고, 스코어의 평균값을 구하여 오랜 세월의 경험에 의해 판단을 하고 있었다. 혹시 상기 관해 직전기를 관해되었다고 판단하여 투약을 중지하면, 상기 궤양성 대장염의 재발뿐 아니라 대장암으로의 이행 위험 등 각종 문제를 일으키는 것으로 알려져 있다.

상기 비특허 문헌 1에 있어서는, 상기 PGE-MUM을 측정한 결과와, 상기 궤양성 대장염 병태의 활동기와 관해기를 나타내는 개정 탈스타드 스코어가 상관되는 것이 개시되고, 내시경 검사를 행하지 않고 병기를 판단하는 기준은 개시되었지만, 개정 탈스타드 스코어에서 관해기로 판단되는 증례 중에는 계속적인 투약을 요구하는 본 발명에서 나타내는 상기 관해 직전기의 증례가 포함되는 경우가 있어, 구별할 수 없었다. 개정 탈스타드 스코어에서 판정에 이용되는 항목으로서는, 설사, 체온, 빈맥, 적혈구 침강 속도, 헤모글로빈, 백혈구, 혈소판, 총 단백질, 알부민, 철 등이고, 측정한 각 항목의 수치를 스코어화하고, 이 스코어를 합계하여 개정 탈스타드 스코어를 구하였다.

한편, 간질성 폐렴에 대해서도 활동기와 비활동기의 판단이 어려워, 이들 병기를 판정하기 위해서는 상기 간질성 폐렴 환자에 대한 청진, X선 검사 등에 부가적으로, 폐 조직의 생검에 의한 병리 조직학적 진단 등이 필요하였다. 특히 상기 폐 조직의 생검을 실시하기 위해서는 상기 환자의 기도에 내시경을 삽입하거나 하여 상기 폐 조직의 생검에 필요한 양의 폐 조직을 실제로 상기 환자의 체 내로부터 채취할 필요가 있어, 상기 환자에 대한 신체적, 정신적 부담이 매우 컸다.

또한, 상기 간질성 폐렴의 병기를 비활동기라고 판단하여 투약을 중지하면, 상기 간질성 폐렴이 재발하고, 더 진행될 뿐 아니라 폐암으로의 이행 위험 등 각종 문제를 일으키는 것도 알려져 있다.

또한, 앞의 특허 문헌 2에 의한 방법에 대해서도 상기 간질성 폐렴 환자의 혈장 또는 혈청을 채취하여, 다단계 조작을 거쳐 이들에 포함되는 오스테오폰틴 양을 정량할 필요가 있었다.

본 발명은 활동기와 관해기 사이에 존재하는 상기 궤양성 대장염의 관해 직전기 병기를 상세하게 객관적으로 분류하는 방법을 제공하고, 지금까지 내시경에 의한 관찰 소견이나 생체로부터 채취한 조직 표본의 해석에 의해서도 판단이 어려웠던 상기 궤양성 대장염의 병기에 대하여 판정하기 위한 간편한 병기 판정 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 간질성 폐렴의 활동기와 상기 간질성 폐렴의 비활동기의 병기를 상세히 객관적으로 분류하는 방법을 제공하고, 지금까지 판단하기가 어려웠던 상기 간질성 폐렴의 병기에 대하여 판정하기 위한 간편한 병기 판정 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

<과제를 해결하기 위한 수단>

본 발명자들은 예의 연구한 결과, 궤양성 대장염의 관해기에 있다고 진단된 환자로부터 뇨를 채취하고, 그 뇨에 포함되는 상기 PGE-MUM 농도값을 기초값으로 하여 사전에 파악해두고, 상기 환자의 상기 PGE-MUM 농도가 이 기초값을 초과하며 상기 기초값의 3배 이하 값의 범위를 나타낼 때에는, 상기 환자의 병기는 상기 궤양성 대장염의 관해 직전기에 대응하는 것을 발견하였다.

또한, 본 발명자들은 간질성 폐렴의 비활동기에 있다고 진단된 환자로부터 뇨를 채취하고, 그 뇨에 포함되는 상기 PGE-MUM 농도값을 기초값으로서 사전에 파악해두고, 상기 환자의 상기 PGE-MUM 농도가 이 기초값을 초과하는 범위를 나타낼 때에는, 상기 환자의 병기는 상기 간질성 폐렴의 활동기에 대응하는 것을 발견하여, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

즉, 본 발명은 이하의 (1) 내지 (10)을 제공한다.

(1) 소염제 투여를 수반하는 치료 관리하에서, 궤양성 대장염의 관해기에 있다고 진단된 환자의 뇨 중에 포함되는 프로스타글란딘 주요 대사물(PGE-MUM)을 측정함으로써 얻어진 상기 뇨 중의 PGE-MUM 농도값을 기초값으로 하여,

상기 환자의 뇨 중의 PGE-MUM 농도값이 이 기초값을 초과하며 상기 기초값의 3배 이하의 범위에 있을 때를 궤양성 대장염의 관해 직전기(Pre-remission phase)라 판정하고,

상기 환자의 뇨 중의 PGE-MUM 농도값이 이 기초값 이하의 범위에 있을 때를 궤양성 대장염의 관해기(Remission phase)라고 판정하는 것을 특징으로 하는,

상기 궤양성 대장염의 관해 직전기와 상기 궤양성 대장염의 관해기의 병기 판정 방법.

(2) 상기 (1)에 있어서, 상기 궤양성 대장염의 관해 직전기는, 궤양성 대장염의 병리학적 스코어(마츠 분류)가 2 내지 3의 범위에 있는 경우로 하고,

상기 궤양성 대장염의 관해기는, 상기 마츠 분류가 2 미만인 범위에 있는 경우로 하는 것을 특징으로 하는 병기 판정 방법.

(3) 소염제 투여를 수반하는 치료 관리하에서, 간질성 폐렴 환자의 뇨 중에 포함되는 프로스타글란딘 주요 대사물(PGE-MUM)을 측정하는 것에 의한, 간질성 폐렴의 활동기(Active phase)와 상기 간질성 폐렴의 비활동기(Non-active phase)의 병기 판정 방법.

(4) 상기 (3)에 있어서, 상기 간질성 폐렴의 비활동기에 있다고 진단된 환자의 뇨 중에 포함되는 PGE-MUM을 측정함으로써 얻어진 상기 뇨 중의 PGE-MUM 농도값을 기초값으로 하여,

상기 환자의 뇨 중의 PGE-MUM 농도값이 이 기초값을 초과하는 범위에 있을 때를 간질성 폐렴의 활동기라고 판정하고,

상기 환자의 뇨 중의 PGE-MUM 농도값이 이 기초값 이하의 범위에 있을 때를 간질성 폐렴의 비활동기라고 판정하는 것을 특징으로 하는 병기 판정 방법.

(5) 상기 (1) 내지 (4) 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PGE-MUM을 항 PGE-MUM 항체에 의해 면역 측정하는 것을 특징으로 하는 병기 판정 방법.

(6) 표지된 PGE-MUM 시약, 및 항 PGE-MUM 항체 시약을 포함하는 검체 중의 PGE-MUM 측정에 의한, 궤양성 대장염의 병리학적 스코어(마츠 분류)에 의해서 분류된 궤양성 대장염의 관해 직전기(Pre-remission phase)와 궤양성 대장염의 관해기(Remission phase)의 병기 판정용 시약 키트.

(7) 표지된 PGE-MUM 시약, 및 항 PGE-MUM 항체 시약을 포함하는 검체 중의 PGE-MUM 측정에 의한, 간질성 폐렴의 활동기(Active phase)와 간질성 폐렴의 비활동기(Non-active phase)의 병기 판정용 시약 키트.

(8) 상기 (6) 또는 (7)에 있어서, 항 PGE-MUM 항체가 항 PGE-MUM 폴리클로날 항체인 병기 판정용 시약 키트.

(9) 상기 (6) 또는 (7)에 있어서, 항 PGE-MUM 항체가 항 PGE-MUM 모노클로날 항체인 판정용 시약 키트.

(10) 상기 (6) 내지 (9) 중 어느 한 항에 있어서, 항 PGE-MUM 항체와 반응하는 항 면역 글로불린 항체 시약을 더 포함하는 병기 판정용 시약 키트.

<발명의 효과>

본 발명에 따르면, 뇨 중의 상기 PGE-MUM을 정량 측정함으로써 상기 궤양성 대장염의 관해 직전기와 상기 궤양성 대장염의 관해기의 병기를 간편하게 판별하는 것이 가능해졌다. 또한, 뇨 중의 상기 PGE-MUM을 정량 측정함으로써 상기 간질성 폐렴의 활동기와 상기 간질성 폐렴의 비활동기의 병기를 간편하게 판별하는 것이 가능해졌다.

덧붙여, 본 발명의 방법에 따르면, 종래 사용되었던 숙련을 요하고 더구나 고액의 검사 비용이 소요되는 내시경 등에 의한 관찰이나 생체로부터 채취한 병리 조직 표본의 해석에 의한 판정 방법을 본 발명의 방법으로 대체할 수 있기 때문에, 상기 궤양성 대장염의 환자나 상기 간질성 폐렴 환자의 체 내에 내시경을 삽입하는 등의 검사나 상기 환자의 체 내 조직 등을 채취하는 시술 등에 따른 신체적, 정신적 부담을 상기 환자에게 일체 제공하지 않으며 검사를 실시하는 의사 등의 판단의 개인차에 결과를 의존하지 않고 상기 궤양성 대장염 또는 상기 간질성 폐렴에 대하여 용이하게 그의 병기를 판정할 수 있기 때문에, 치료약의 선택, 투약 중지 등의 판단이 용이해질 뿐 아니라 치료 효과의 판정이 용이해지며 환자의 QOL(Quality of Life)의 향상이나 의료비의 삭감이 가능해진다.

도 1은 관해기의 궤양성 대장염 환자 병리 사진을 나타낸다. 얼마간의 염증성 세포 침윤을 나타내는 세포의 핵이 검은 점으로서 관찰된다.

도 2는 관해 직전기의 궤양성 대장염 환자 병리 사진을 나타낸다. 많은 염증성 세포 침윤을 나타내는 세포의 핵이 검은 점으로서 관찰된다.

도 3은 활동기의 궤양성 대장염 환자 병리 사진을 나타낸다. 많은 염증성 세포 침윤을 나타내는 세포의 핵이 검은 점으로서, 또한 활동기의 특징인 세포 침윤에 의한 음와 농양이 관찰된다.

<발명을 실시하기 위한 최선의 형태>

본 발명의 방법에 의해 측정되는 PGE-MUM(7알파-히드록시-5,11-디케토테트라노르-프로스타-1,16-디온산)은 PGE₁과 E₂, 특히 PGE₂의 뇨 중의 주요 대사물로서 발견된다. 상기 PGE-MUM의 농도값을 측정하는 데 있어서는, 검체로서 뇨를 이용하여, 예를 들면 GC-MS, HPLC, 항 PGE-MUM 항체를 이용한 면역 측정법 등에 의해서 실시할 수 있다. 상기 PGE-MUM의 농도값의 측정은, 다량의 검체를 동시에 간편하게 측정할 수 있기 때문에, 면역 측정법으로 실시하는 것이 바람직하고, 수산화나트륨 등에 의한 알칼리 처리를 부가하여 화학적으로 안정한 비시클로체로 하는 측정법에 의해 실시하는 것이 바람직하다. 상기 면역 측정법에 이용되는 항 PGE-MUM 항체로서는, 예를 들면 상기 항체에 대해서는 폴리클로날 항체 또는 모노클로날 항체 등을 들 수 있다. 본 발명에서 사용되는 항체는 비시클로화한 PGE-MUM(이하, 비시클로 PGE-MUM이라 함)에 특이적으로 반응하는 항체인 폴리클로날 항체 또는 모 노클로날 항체 등이면 바람직하다. 상기 항체에 대해서는, 예를 들면 일본 특허 공개 (소)61-11664호(특허 문헌 1)에 기재된 방법에 따라서 폴리클로날 항체를 제조할 수 있다. 상기 항체의 제조에 있어서는, 상기 PGE-MUM이 합텐이기 때문에, 우선 상기 PGE-MUM을 알칼리 처리에 의해 PGE-MUM의 비시클로체로 만들고, 적당한 단백질, 예를 들면 소혈청 알부민(BSA), 글로불린, 티로글로불린, 헤모시아닌 등과 결합시킨 후, 적당한 어쥬번트와 현탁 혼합하여 동물(래트, 마우스, 몰모트, 토끼, 개, 고양이, 양, 염소 등)에 투여 간격을 두고 투여하고, 소정 기간 경과후 동물의 혈청을 채취하여 공지된 방법으로 처리를 함으로써 폴리클로날 항체를 취득할 수 있다.

또한, 모노클로날 항체는, 상기 폴리클로날의 제조시에 이용한 PGE-MUM의 비시클로체를, 상기한 적당한 단백질과 결합시켜 면역원으로서 이용하여 동물을 면역시키고, 비장으로부터 얻어지는 모노클로날 항체 생산 세포와 종양 세포를 세포 융합함으로써 제조되는 하이브리도마로부터 생산시킬 수 있다.

상기 하이브리도마는 다음 방법으로 얻을 수 있다. 상술한 바와 같이 하여 얻은 PGE-MUM의 비시클로체 결합 단백질을 프로인트의 완전 어쥬번트와 함께, 수회로 나누어 마우스 등의 동물에게 2 내지 3 주간 간격으로 복강내 또는 정맥 투여함으로써 면역시킨다. 이어서, 비장 등에서 유래하는 항체 생산 세포와, 골수종 세포주에서의 세포(미엘로마 세포) 등의 시험관 내에서 증식 가능한 종양 세포를 융합시킨다. 융합 방법으로서는, 쾰러와 밀슈타인의 통상법[네이처(Nature), 256권, 495 페이지, 1975년]에 따라서 폴리에틸렌글리콜에 의해서 행할 수 있고, 또는 센 다이 바이러스 등에 의해서 행할 수도 있다.

상기 방법에 의해 얻어지는 항 PGE-MUM 항체를 이용하여, 상기 PGE-MUM의 면역 측정을 실시한다. 이러한 면역 측정법으로서는, 측정 대상 물질의 상기 PGE-MUM에 대한 주지의 경합법에 의한 면역 측정법으로 행하는 것이 바람직하고, 표지 물질로 분류한 효소 면역 측정법(EIA), 형광 면역 측정법, 발광 면역 측정법, 방사 면역 측정법(RIA) 등을 들 수 있다.

통상, 경합법에는 표지된 항원이 이용된다. 표지 물질로서는, 예를 들면 효소, 형광 물질, 발광 물질, 방사성 동위 원소 등이다. 표지물과 항원과의 결합 방법은 공지된 공유 결합 또는 비공유 결합을 만드는 방법을 이용하여 제조할 수 있다. 결합 방법에는, 예를 들면 축합제를 이용하여 공유 결합을 제조하는 방법, 각종 가교제를 이용하는 방법 등을 들 수 있다(예를 들면 문헌[「단백질 핵산 효소」 별책 31호, 37 내지 45 페이지(1985)] 참조). 공유 결합에 의한 방법에서는, 항원에 존재하는 관능기를 사용할 수 있을 뿐 아니라, 예를 들면 티올기, 아미노기, 카르복실기, 수산기 등의 관능기를 통상법에 의해 도입한 후, 상기 결합법에 의해 표지 항원을 제조할 수 있다. 또한, 비공유 결합에 의한 방법으로서는 물리 흡착법 등을 들 수 있다.

상기 PGE-MUM의 측정은, 예를 들면 이하에 기재된 면역 측정법으로 실시하는 것이 바람직하다. 소정량의 상기 표지된 PGE-MUM, 상기 항 PGE-MUM 항체, 측정 실시하는 PGE-MUM을 함유하는 검체를 경합적으로 반응시켜, 상기 항체와 결합하거나 또는 결합하지 않은 표지된 항원의 양으로부터 상기 검체 중의 상기 PGE-MUM을 정 량한다.

앞서 설명한 대로, 상기 PGE-MUM으로서는, 예를 들면 비시클로화한 PGE-MUM(비시클로 PGE-MUM)을 사용하는 것이 바람직하고, 상기 항 PGE-MUM 항체로서는, 예를 들면 항 비시클로 PGE-MUM을 사용하는 것이 바람직하다.

상기 항체와 결합한 표지된 항원을 결합하지 않은 것과 분리하기 위해서는, 추가로 항 면역 글로불린 항체를 첨가하여 침전시켜 분리하고, 복합체에 결합되어 있는 표지 물질 또는 결합되지 않은 표지 물질을 측정함으로써 실시할 수 있다. 이러한 방법은 이항체법이라 불리고, 챠콜 필터를 이용한 방법 등에 의해서도 실시할 수도 있다. 상기 항 면역 글로불린 항체는 고상에 결합된 항 면역 글로불린 항체, 고상에 결합된 표지 물질 또는 결합되지 않은 표지 물질을 측정함으로써도 실시된다. 상기 항 면역 글로불린 항체는 주지된 방법, 예를 들면 물리 흡착법, 가교제 또는 공유 결합을 이용한 화학 결합법, 아비딘-비오틴 결합을 이용한 결합법 등에 의해 고상에 결합시킬 수 있다. 상기 표지 물질의 측정에 있어서는 상기 표지 물질에 대응하여 선택하는 것은 물론이다.

본 발명의 병기 판정용 시약 키트에는 상기 표지된 PGE-MUM 시약, 상기 항 PGE-MUM 항체 시약이 포함된다. 보다 바람직하게는 상기 비시클로 PGE-MUM 시약, 상기 항 비시클로 PGE-MUM 항체 시약이 포함된다. 또한, 키트에는, 상기 항 PGE-MUM 항체와 결합하는 항 면역 글로불린 항체 시약 외, 필요에 따라서 검체 희석액, 시약 희석액, 이미 알려진 농도의 표준 PGE-MUM 등, EIA에 있어서는 기질, 정지액 등을 부가하여 구성된다.

본 발명에서 사용되는 상기 PGE-MUM의 측정을 실시하는 검체로서는, 예를 들면 인간, 동물 등으로부터 채취되는 뇨를 들 수 있다.

그 중에서도, 상기 궤양성 대장염의 관해 직전기와 상기 궤양성 대장염의 관해기의 병기 판정에 사용되는 검체로서는, 소염제 투여를 수반하는 치료 관리하에서 채취된 상기 궤양성 대장염 환자의 뇨를 사용한다.

또한, 상기 간질성 폐렴의 활동기와 비활동기의 병기 판정에 사용하는 검체로서는, 소염제 투여를 수반하는 치료 관리하에서 채취된 상기 간질성 폐렴 환자의 뇨를 사용한다.

본 발명에서 사용되는 소염제로서는, 예를 들면 스테로이드 피질 호르몬, 비스테로이드계 소염 진통제(non-steroidal anti-inflammatory drug, NSAID) 등을 예시할 수 있다.

이들 소염제는 1종 또는 2종 이상을 사용할 수 있다.

상기 검체는 1일분을 축뇨(蓄尿)한 검체를 이용하지만, 축뇨하지 않고 채취한 검체를 이용하여 측정을 행할 수도 있다. 채취한 뇨는 측정에 이용할 때까지 저온, -20 ℃ 이하에서 보존하는 것이 바람직하다.

또한, 상기 검체에 포함되는 상기 PGE-MUM 농도값의 측정은, 채취되는 상기 검체 전량을 기준으로 하여 실시할 수도 있고, 채취되는 상기 검체의 일부에 대하여 크레아티닌에 의한 보정을 고려하여 실시할 수도 있다.

조작의 간편성 때문에, 상기 검체에 포함되는 상기 PGE-MUM 농도값의 측정은, 채취되는 상기 검체의 일부에 대하여 크레아티닌에 의한 보정을 고려하여 실시 하는 것이 바람직하다.

다음에 본 발명에서 사용되는 기초값에 대하여 설명한다.

상기 궤양성 대장염 환자의 기초값에 대해서는, 소염제 투여를 수반하는 치료 관리하에서 궤양성 대장염의 관해기에 있다고 진단된 환자의 뇨 중에 포함되는 PGE-MUM 농도값을 상기에 설명한 방법에 의해 측정함으로써 얻을 수 있다.

또한, 상기 간질성 폐렴 환자의 기초값에 대해서도, 소염제 투여를 수반하는 치료 관리하에서, 간질성 폐렴의 비활동기에 있다고 진단된 환자의 뇨 중에 포함되는 PGE-MUM 농도값을 상기에 설명한 방법에 의해 측정함으로써 얻을 수 있다.

상기 기초값을 구할 때는, 상기 관해기 또는 상기 비활동기라고 진단된 환자에 대하여 소염제 등의 투여를 시행한 후에, 1일 축뇨 또는 정해진 시각 등에 뇨를 채취하는 것이 바람직하다.

또한 상기 기초값을 정하는 데 있어서는 미리 시험 평가하여 어림된 상기 PGE-MUM을 측정하는 시약의 측정간 오차 등을 고려하여 정하는 것이 바람직하다.

상기 궤양성 대장염의 병기를 판정하는 방법에는, 마츠 분류(Matts Classification)에 의한 병리학적 스코어를 사용할 수 있다. 마츠 분류는, 내시경에 의해 생체로부터 채취한 복수개의 조직 표본의 해석을 행하여, 모든 조직 표본에 대하여 1 내지 5로 스코어화하고, 스코어의 평균값을 구하여 판단된다. 마츠 분류를 표 1에 나타낸다.

상기 궤양성 대장염의 병태를 판단하기 위한 마츠 분류에 따르면, 병리학적 스코어의 평균값이 2 미만인 것을 상기 궤양성 대장염의 관해기, 2 이상 3 미만을 상기 궤양성 대장염의 관해 직전기, 3 이상을 상기 궤양성 대장염의 활동기로 분류하였다. 병리학적 판단에 의해서, 통상적으로 상기 궤양성 대장염의 관해 직전기와 상기 궤양성 대장염의 활동기에서는, 투약 치료를 계속한다고 판단된다.

상기 간질성 폐렴의 병기를 판정하는 방법은 상기 간질성 폐렴 환자의 뇨 중에 포함되는 상기 PGE-MUM을 측정함으로써 실시된다.

상기 PGE-MUM의 측정 방법은 앞서 설명한 상기 궤양성 대장염의 경우와 거의 동일하다.

소염제 투여를 수반하는 치료 관리하에서, 상기 간질성 폐렴의 비활동기에 있다고 진단된 간질성 폐렴 환자의 뇨 중에 포함되는 PGE-MUM 농도값을 기초값으로 하여,

상기 뇨 중의 PGE-MUM 농도값이 이 기초값을 초과하는 범위에 있을 때는 간질성 폐렴의 활동기(Active phase)라고 판정되고,

상기 뇨 중의 PGE-MUM 농도값이 이 기초값 이하의 범위에 있을 때를 간질성 폐렴의 비활동기(Non-active phase)라고 판정된다.

본 발명은 검체 중의 PGE-MUM의 농도값을 측정함으로써 상기 궤양성 대장염의 병기 판정을 용이하게 행하는 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 검체 중의 PGE-MUM의 농도값을 측정함으로써 상기 간질성 폐렴의 병기 판정을 용이하게 행하는 방법을 제공한다.

또한, 본 발명에서 측정되는 상기 PGE-MUM은 각종 염증성 질환에 있어서 PGE 및/또는 PGE-MUM 생산 항진에서 기인하여 뇨 중에 배출되기 때문에, 예를 들면 염증성 장질환, 대장암 또는 대장 선종에 의한 점막 고유층의 염증, 폐암 등의 진단 마커가 될 수 있다.

또한, PGE-MUM 측정은 프로스타글란딘 합성 효소인 시클로옥시게나제(COX-2)의 활성이나 COX-2 억제제 등의 약제 작용을 확인하는 마커도 된다.

실시예 1

이하 실시예에 의해 본 발명을 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명이 실시예로 한정되는 것은 아니다.

실시예 1 PGE-MUM의 측정

궤양성 대장염의 증상을 나타내는 환자에 대하여 소염제로서 스테로이드 피 질 호르몬 및 사잘로피린을 투여하였다.

이들 환자의 뇨 중 PGE-MUM의 추출, 정량에는 이나가와(Inagawa) 등의 액상 이항체법에 의한 RIA 측정법[Adv. PG. TX. LT. Res., 11, 191-196(1983)]으로 행하였다. 즉, 측정 전까지 -80 ℃에서 보존한 각 병기의 상기 궤양성 대장염 환자의 뇨(1일분 축뇨) 100 μl를 반응 용기에 분주하고, 동량의 2 N NaOH를 첨가하여 1 시간 실온에 방치하고, 상기 PGE-MUM을 비시클로체화한 후, 2 N HCl 100 μl를 첨가하여 중화시켰다. 다음에, 0.1 M NaCl과 0.1 ％ 젤라틴을 포함하는 0.1 M 인산 완충액(pH 7.3)을 700 μl 첨가하여 측정용 샘플로 하였다. 반응 조작법으로서는, 뇨 또는 각 농도의 표준 시료액(PGE-MUM의 비시클로체 함유) 100 μl에 ¹²⁵I 표지 PGE-MUM 용액 및 희석 제1 항체 용액(토끼 항 인간 PGE-MUM 항체; 일본 특허 공개 (소)61-11664호(특허 문헌 1) 참조)을 각각 100 μl 첨가하여 혼합하고, 37 ℃, 60 분간 인큐베이팅하였다.

그 후, 각 샘플에 정상 토끼 혈청(50배 희석; 제일라디오아이소토프사 제조) 및 제2 항체(10배 희석한 양 항 토끼 IgG 항체; 제일라디오아이소토프사 제조)를 각각 100 μl 첨가하여 4 ℃에서 하룻밤 더 인큐베이팅하였다. 다음에, 4 ℃, 3000 rpm에서 10 분간 원심 분리를 행하고, 상청을 제거하여 침전물의 방사 활성을 오토웰 카운터 RAW-300(시마즈 세이사꾸쇼사 제조)로 측정하여 뇨 중 PGE-MUM을 측정하였다. 마찬가지로 표준 시료액에 대하여 측정을 행하여 검량선을 작성하였다. 또한, 각 뇨에 대한 측정 결과와 상기 검량선으로부터 PGE-MUM의 농도를 구하였다.

궤양성 대장염 환자는 생체로부터 채취한 복수개(10 개 이상)의 조직 표본에 대하여 병리학적 스코어(마츠 분류)를 구하여 관해기, 관해 직전기 또는 활동기로 분류하고, 그 환자 뇨에 대하여 PGE-MUM의 측정을 행하였다. 그 결과를 표 2에 나타낸다.

소염제 투여를 수반하는 치료 관리하에 측정된 기초값은 각 개인차가 있지만, 대강 상기 PGE-MUM 농도로서 10 ng/ml였다.

표 2에 나타낸 바와 같이, 마츠 분류에 의해 병리학적 스코어가 2 미만이며 관해기라고 판단된 환자 시료에 대하여 시료 A-3 및 시료 A-4 이외에 대해서는, 모두 상기 PGE-MUM 농도가 10 ng/ml 미만이고, 병리학적 판단과 상기 PGE-MUM 농도가 상관을 나타내었다. 또한, 마츠 분류에서, 병리학적 스코어가 2 이상 3 미만인 관해 직전기라고 판별된 환자 시료에 대하여 시료 B-4 이외의 시료에 대해서는, 모두 상기 PGE-MUM 농도가 기초값인 10 ng/ml를 초과하고, 기초값의 3배인 30 ng/ml 이하이며, 병리학적 판단과 상기 PGE-MUM 농도가 깊은 상관을 나타내었다.

또한, 마츠 분류에 의해 관해기, 관해 직전기 또는 활동기의 각 병기로 판단된 상기 궤양성 대장염 환자의 병리 사진을 도 1 내지 3에 나타낸다. 각 병기와 PGE-MUM 농도와의 관계도 깊은 상관이 있는 것이, 병리 사진으로부터도 확인할 수 있다.

실시예 2

실시예 1의 경우에 있어서의 각 병기의 상기 궤양성 대장염 환자의 뇨 대신에, 각 병기의 상기 간질성 폐렴 환자의 뇨를 사용한 것 이외에는, 실시예 1의 경우와 완전히 동일한 조작에 의해 상기 PGE-MUM의 농도를 구하였다.

또한, 환자에 대하여, 소염제로서 스테로이드 피질 호르몬 및 비스테로이드계 소염 진통제를 투여하였다.

결과를 표 3에 나타낸다.

여기서 상기 간질성 폐렴의 활동기란, 환자의 간질 염증이 진행되거나, 환자 폐포의 섬유화가 진행되거나 하는 병기를 의미한다.

청진, X선 검사 및 생검 재료에 의한 병리학적 검사 등에 의해 상기 간질성 폐렴의 비활동기와 진단된 각 환자의 기초값은 대략 10 ng/ml 이하인 것에 대하여, 상기 간질성 폐렴의 활동기라고 진단된 각 환자의 뇨 중의 PGE-MUM 농도는 시료 D-2 이외에는 10 ng/ml를 초과하는 것이었다.

이와 같이 상기 간질성 폐렴의 경우에 있어서도 병리학적 판단과 상기 PGE-MUM 농도가 깊은 상관을 나타내었다.

[비교예 1]

급성 위염 또는 만성 위염의 증상을 나타내는 환자에 대하여, 실시예 1의 경우와 완전히 동일한 조작에 의해 상기 PGE-MUM의 농도를 구한 결과, 상기 급성 위염 또는 만성 위염의 증상을 나타내는 환자로부터 얻어진 뇨 중의 상기 PGE-MUM의 농도와, 상기 환자 증상의 진행도 사이에 유의한 상관은 확인되지 않았다.

[비교예 2]

GPT(=ALT)의 값이 200 IU/L 이하인 증상을 나타내는 C형 간염의 증상을 나타내는 환자에 대하여, 실시예 1의 경우와 완전히 동일한 조작에 의해 상기 PGE-MUM의 농도를 구한 결과, 상기 C형 간염의 증상을 나타내는 환자로부터 얻어진 뇨 중의 상기 PGE-MUM의 농도와, 상기 환자 증상의 진행도 사이에 유의한 상관은 확인되지 않았다.

B형 간염의 증상을 나타내는 환자의 경우에도, 상기와 동일하게 상기 환자 증상의 진행도 사이에 유의한 상관은 확인되지 않았다.

[비교예 3]

갑상선염의 증상을 나타내는 환자에 대하여, 실시예 1의 경우와 완전히 동일한 조작에 의해 상기 PGE-MUM의 농도를 구한 결과, 상기 갑상선염의 증상을 나타내는 환자로부터 얻어진 뇨 중의 상기 PGE-MUM의 농도와, 상기 환자 증상의 진행도 사이에 유의한 상관은 확인되지 않았다.

[비교예 4]

직경 2 cm 이하의 화농성 병변이 생긴 환자에 대하여, 실시예 1의 경우와 완전히 동일한 조작에 의해 상기 PGE-MUM의 농도를 구한 결과, 상기 화농성 병변이 생긴 환자로부터 얻어진 뇨 중의 상기 PGE-MUM의 농도와, 상기 환자 증상의 진행도 사이에 유의한 상관은 확인되지 않았다.

상기 실시예 1 내지 2 및 비교예 1 내지 4의 결과에 나타내어지는 바와 같이, 본 발명은 상기 궤양성 대장염에 관한 병기 판정 및 상기 간질성 폐렴에 관한 병기 판정에 대하여 특히 유용한 방법인 것을 알 수 있다.

본 명세서는 2005년 4월 14일 출원의 일본 특허 출원 제2005-117521호에 기초한다. 이 내용은 전부 여기에 포함된다.

Claims

소염제 투여를 수반하는 치료 관리하의 궤양성 대장염 관해기 환자의 뇨 중에 포함되는 프로스타글란딘 주요 대사물(PGE-MUM)을 측정함으로써 얻어진 상기 뇨 중의 PGE-MUM 농도값을 기초값으로 하고,

상기 환자의 뇨 중의 PGE-MUM 농도값을 정량하여 그 양을 기초값과 비교하는 것을 특징으로 하며,

여기서 상기 환자의 뇨 중의 PGE-MUM 농도값이 기초값을 초과하며 상기 기초값의 3배 이하의 범위에 있을 때에는 궤양성 대장염의 관해 직전기(Pre-remission phase)를 나타내고, 상기 환자의 뇨 중의 PGE-MUM 농도값이 이 기초값 이하의 범위에 있을 때에는 궤양성 대장염의 관해기(Remission phase)를 나타내는 것인, 궤양성 대장염의 관해 직전기와 궤양성 대장염의 관해기의 병기 판정에 필요한 정보를 제공하기 위한 PGE-MUM의 농도를 측정하는 방법.
삭제
소염제 투여를 수반하는 치료 관리하의 간질성 폐렴의 비활동기 환자의 뇨 중에 포함되는 프로스타글란딘 주요 대사물(PGE-MUM)을 측정함으로써 얻어진 상기 뇨 중의 PGE-MUM 농도값을 기초값으로 하고,

상기 환자의 뇨 중의 PGE-MUM의 농도값을 정량하여 그 양을 기초값과 비교하는 것을 특징으로 하며,

여기서 상기 환자의 뇨 중의 PGE-MUM의 농도값이 기초값을 초과하는 범위에 있을 때에는 간질성 폐렴의 활동기(Active phase)를 나타내고, 상기 환자의 뇨 중의 PGE-MUM 농도값이 기초값 이하의 범위에 있을 때에는 간질성 폐렴의 비활동기(Non-active phase)를 나타내는 것인, 간질성 폐렴의 활동기와 간질성 폐렴의 비활동기의 병기 판정에 필요한 정보를 제공하기 위한 PGE-MUM의 농도를 측정하는 방법.
삭제
제1항 또는 제3항에 있어서, 상기 PGE-MUM을 항 PGE-MUM 항체에 의해 면역 측정하는 것을 특징으로 하는 PGE-MUM의 농도를 측정하는 방법.
표지된 PGE-MUM 시약, 및 항 PGE-MUM 항체 시약을 포함하는 검체 중의 PGE-MUM 측정에 의한, 궤양성 대장염의 병리학적 스코어(마츠 분류)에 의해서 분류된 궤양성 대장염의 관해 직전기(Pre-remission phase)와 궤양성 대장염의 관해기(Remission phase)의 병기 판정용 시약 키트.
표지된 PGE-MUM 시약, 및 항 PGE-MUM 항체 시약을 포함하는 검체 중의 PGE- MUM 측정에 의한, 간질성 폐렴의 활동기(Active phase)와 간질성 폐렴의 비활동기(Non-active phase)의 병기 판정용 시약 키트.
제6항 또는 제7항에 있어서, 항 PGE-MUM 항체가 항 PGE-MUM 폴리클로날 항체인 병기 판정용 시약 키트.
제6항 또는 제7항에 있어서, 항 PGE-MUM 항체가 항 PGE-MUM 모노클로날 항체인 병기 판정용 시약 키트.
제6항 또는 제7항에 있어서, 항 PGE-MUM 항체와 반응하는 항 면역 글로불린 항체 시약을 추가로 포함하는 병기 판정용 시약 키트.