KR100920972B1 - Method to enhance the content of free amino acid, anti-oxidant activity and anti-tumor activity in traditional sauce using deepsea water by adding sea tangle powder - Google Patents

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Abstract

본 발명은 다시마 분말을 사용하여 해양 심층수를 사용한 장류에서 유리 아미노산의 함량을 증진시키는 방법, 항산화 활성을 증진시키는 방법 및 항암 활성을 증진시키는 방법으로 천연소재인 다시마를 첨가함으로써 다시마 무첨가 심층수 장류에 비해 유리 아미노산의 함량을 증진시키고, 항산화 활성과 항암 활성을 증진시킬 뿐만 아니라 맛을 좋게 하는 효과가 있다.The present invention is a method of increasing the content of free amino acids in the marine life using deep sea water using kelp powder, a method of enhancing the antioxidant activity, and a method of enhancing the anticancer activity compared to the deep sea water without added kelp It enhances the content of free amino acids, enhances antioxidant activity and anticancer activity, as well as improves taste.

다시마, 해양 심층수, 고추장, 된장, 간장 Kelp, deep sea water, red pepper paste, miso, soy sauce

Description

다시마 분말을 사용하여 해양 심층수를 사용한 장류에서 유리 아미노산의 함량을 증진시키는 방법, 항산화 활성을 증진시키는 방법 및 항암 활성을 증진시키는 방법{Method to enhance the content of free amino acid, anti-oxidant activity and anti-tumor activity in traditional sauce using deepsea water by adding sea tangle powder}Method of Enhancing Free Amino Acid Content, Enhancing Antioxidant Activity, and Enhancing Anticancer Activity in Seaweed Using Deep Sea Water Using Sea Tangle Powder (Method to enhance the content of free amino acid, anti-oxidant activity and anti -tumor activity in traditional sauce using deepsea water by adding sea tangle powder}

본 발명은 다시마 분말을 사용하여 해양 심층수를 사용한 장류에서 유리 아미노산의 함량을 증진시키는 방법, 항산화 활성을 증진시키는 방법 및 항암 활성을 증진시키는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for enhancing the content of free amino acids in enteric fish using deep sea water using kelp powder, a method for enhancing antioxidant activity, and a method for enhancing anticancer activity.

해양 심층수는 태양광이 도달하지 않는 수심 200m 이상 깊은 곳의 바닷물로 그린랜드에서 발원하여 2000년 주기로 대서양과 인도양 및 태평양을 순환하는 해수자원을 의미한다.Deep ocean water means seawater resources originating from Greenland that are more than 200 meters deep without solar light, and cycle through the Atlantic, Indian and Pacific Oceans in 2000 cycles.

해양 심층수는 수온이 연중 저온으로 거의 일정하고 일반 세균과 병원성 대장균등 10종류의 세균 검사에서도 세균이 검출되지 않으며 총 생균수가 표층수의 10분의 1에서 100분의 1 정도로 매우 청정하다. Deep sea water is almost constant at low temperatures throughout the year, and bacteria are not detected in 10 types of bacteria, including general bacteria and pathogenic E. coli, and the total number of live bacteria is very clean, ranging from one tenth to one hundredth of surface water.

해양 심층수는 표층수에 비해 약 5~10배 정도의 무기 영양염류가 포함되어 있고, 사람의 건강에 해가 될 수 있는 아연, 동과 같은 원소는 극소량을 포함하면서도 70종류 이상의 미네랄이 존재하여 미네랄 밸런스가 좋다. 또한, 산화-환원 반응의 반복으로 2가-3가 철이 다량 존재하기 때문에 자화처리를 하면 처리효율이 향상되므로 양질의 활성미네랄을 만들 수 있다.Deep sea water contains about 5 to 10 times more inorganic nutrients than surface water, and elements such as zinc and copper, which may be harmful to human health, contain very small amounts but more than 70 kinds of minerals are present. Is good. In addition, since a large amount of divalent-3 valent iron is present in the repetition of the oxidation-reduction reaction, the magnetization treatment improves the processing efficiency, thereby making it possible to produce high quality active minerals.

한편, 장류는 고추장, 된장 및 간장 등을 지칭하는 것으로 우리나라의 대표적인 발효 식품이자 한식 전통요리에 없어서는 안 되는 중요한 조미료이다. Meanwhile, Jangjang refers to red pepper paste, soybean paste and soy sauce, and is a representative fermented food in Korea and an important seasoning that is indispensable to traditional Korean food.

장류의 기원은 확실히 밝혀진 바 없으나 역사적 기록에 통일신라시대 초기 약 1200년 전에 장류와 유사한 것이 있었다고 기록되어 있다. 하지만 그 후 조선 초기에 이르기까지 장류 제조법에 대한 기록이 없어 구체적인 내용을 알 수 없다. The origin of the jang is not clear, but historical records indicate that something similar to the jang was recorded about 1200 years before the early Silla period. But since then, there is no record of how to make Jangjang until the beginning of Joseon.

장류는 항산화 기능 및 항암 기능이 있다고 많이 알려져 있으며 그 효과를 증대시키기 위한 연구가 많이 시도되어 왔다.It is known that Jangjang has antioxidant and anticancer functions, and many studies have been attempted to increase the effects.

한편, 해양 심층수를 이용한 장류는 많이 개발되어 왔으나, 해양 심층수 장류에 여러 부재료를 첨가하여 장류의 물리적 특성의 변화 및 기능성의 변화를 더욱 촉진시킬 수 있는 기술에 대한 개발은 미미했다.On the other hand, many kinds of deep sea foods have been developed, but the development of technologies that can further promote changes in physical properties and functionalities of the sea foods by adding various subsidiary materials to the deep sea waters.

이에 본 발명은 천연물 유래의 부재료를 첨가함으로써 심층수를 사용하여 제조한 장류의 아미노산을 증진시켜 장류의 맛을 증진시킬 수 있는 방법을 제공하는데 그 목적이 있다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a method capable of improving the taste of enteric soybeans by adding amino acids derived from natural products to enhance amino acids of enteric soybeans prepared using deep water.

또한, 본 발명은 천연물 유래의 부재료를 첨가함으로써 심층수를 사용하여 제조한 장류의 항산화 활성을 증진 시킬 수 있는 방법을 제공하는데 그 목적이 있다. In addition, an object of the present invention is to provide a method capable of enhancing the antioxidant activity of enteric foods prepared using deep water by adding a subsidiary material derived from natural products.

또한, 본 발명은 천연물 유래의 부재료를 첨가함으로써 심층수를 사용하여 제조한 장류의 항암 활성을 한층 증진시킬 수 있는 방법을 제공하는데 그 목적이 있다. In addition, an object of the present invention is to provide a method for further enhancing the anticancer activity of enteric liquor prepared using deep water by adding a substance derived from natural products.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 일반소금 대신 해양 심층수로부터 얻은 염을 사용하여 제조한 장류에 있어서, 부재료로 다시마 분말을 추가로 첨가하는 것을 특징으로 하는 해양 심층수 장류의 유리 아미노산의 함량을 증진시키는 방법, 항산화 활성을 증진시키는 방법 및 암세포 저해 활성을 증진시키는 방법을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention is to increase the content of the free amino acid in the marine deep seawater enteric, characterized in that the seaweed prepared by using the salt obtained from the deep seawater instead of ordinary salt, additionally the kelp powder as a subsidiary material A method, a method of enhancing antioxidant activity, and a method of enhancing cancer cell inhibitory activity are provided.

다시마는 2~3년생의 갈색 해조류로서 몸의 길이는 보통 2~4m, 폭은 20~30㎝ 내외이고 잎 바탕은 두꺼우며 거죽이 미끄럽고 약간 쭈글쭈글한 무늬를 가진다. Kelp is 2 ~ 3 years old brown algae, usually 2 ~ 4m long, about 20 ~ 30㎝ wide, thick leafy, slippery, slightly crunchy.

다시마는 B1 , B2 , C, 니아신(Niacin) 등의 비타민과 칼슘, 인, 철, 마그네슘, 요오드 등의 무기질, 섬유질 및 점질성의 다당류를 다량으로 함유하고 있다. Kelp contains a large amount of vitamins such as B 1 , B 2 , C, and niacin, and inorganic, fibrous, and viscous polysaccharides such as calcium, phosphorus, iron, magnesium, and iodine.

다시마에 함유된 다당류는 알긴산 형태로 20~30% 함유되어 있는데, 알긴산은 콜레스테롤를 저하시키고, 중금속 방출 및 정장작용을 하며, 다량으로 함유되어 있는 산성 다당류인 후코이단(fucoidan)과 중성 다당류인 라미나란(laminaran)은 항혈액응고, 항암 및 항AIDS 등 다양한 생리적 기능을 한다.Polysaccharides contained in kelp are 20 ~ 30% in the form of alginic acid.Alginic acid lowers cholesterol, releases heavy metals and acts as a form of fatty acid. Fucoidan, a polysaccharide, and laminaran, a neutral polysaccharide, laminaran) has various physiological functions such as anticoagulant, anticancer and anti AIDS.

본 발명은 해양 심층수를 사용한 장류에 다시마 분말을 첨가함으로써 유리 아미노산의 함량을 증진시킬 수 있고, 항산화 활성을 증진시킬 수 있으며, 항암 활성을 증진시킬 수 있음을 실시예 1~4를 통하여 입증하였다. The present invention has been demonstrated through Examples 1 to 4 that the content of free amino acids can be increased, antioxidant properties can be enhanced, and anticancer activity can be enhanced by adding kelp powder to enteric seawater containing deep sea water.

이상 상기에서 살펴본 바와 같이 본 발명의 다시마를 첨가하여 제조한 해양심층수 이용 장류는 다시마 무첨가 해양 심층수 이용 장류에 비해 유리 아미노산의 함량, 항산화 활성 및 항암활성이 증진된 효과가 발휘된다. As described above, the deep sea water-using enteric seaweed prepared by adding the kelp of the present invention exhibits an enhanced effect of free amino acid content, antioxidant activity, and anticancer activity, compared to the deep sea water-using seaweed without tangle.

이하, 본 발명의 구성 및 작용에 대해 하기 실시예에서 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 이와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다. Hereinafter, the configuration and operation of the present invention will be described in more detail with reference to the following examples, but the scope of the present invention is not limited to the following examples, and includes modifications of equivalent technical spirit.

<< 제조예Production Example 1> 다시마 첨가 심층수 장류 및 다시마 무첨가 심층수 장류(대조군) 시료의 제조 1> Preparation of kelp added deep water enteric and kelp-free deep water enteric (control) samples

실시예에서 사용할 된장, 고추장, 간장은 통상적 제조방법에 따라 제조하였으며 각각 장류의 대조군은 성분에 차이가 있고 그 성분은 다음과 같다. Doenjang, red pepper paste, and soy sauce used in the Examples were prepared according to a conventional manufacturing method, and the control of each type of soy sauce differs in the components and the components are as follows.

다시마 첨가 심층수 된장은 코지, 심층수 소금, 다시마 분말 및 삶은 콩을, 다시마 무첨가 심층수 된장은 다시마 분말은 첨가하지 않고 코지, 심층수 소금 및 삶은 콩을 첨가하여 제조하였다.Kelp-added deep-water miso was prepared by adding koji, deep-water salt, kelp powder, and boiled soybean, and no kelp-free deep-water miso, without adding kelp powder, koji, deep-water salt, and boiled soybean.

다시마 첨가 심층수 고추장은 다시마 분말과 심층수 소금을, 다시마 무첨가 심층수 고추장은 다시마 분말은 첨가하지 않고 심층수 소금은 첨가하여 제조하였다.Kelp-added deep-water kochujang was prepared by adding kelp powder and deep-water salt, and no kelp-free deep-water kochujang without adding kelp powder.

심층수 간장은 코지와 심층수 소금이 첨가된 소금물의 비율을 1:6로 하여 제조하였다. 다시마 첨가 심층수 간장은 다시마 분말과 심층수 소금을, 다시마 무첨가 심층수 간장은 다시마 분말은 첨가하지 않고 심층수 소금을 첨가하여 제조하였다.Deep water soy sauce was prepared with a ratio of 1: 6 of brine to which koji and deep water salt were added. Kelp-added deep-water soy sauce was prepared by adding kelp powder and deep-water salt and kelp-free deep-water soy sauce without adding kelp powder.

이후 하기의 실시예에서 샘플로 사용하기 위해 상기에서 제조한 다시마 첨가 심층수 장류 및 다시마 무첨가 심층수 장류로부터 메탄올 추출물을 획득하였다. 먼저 제조된 된장과 고추장을 동결건조시킨 후 시료를 마쇄하여 20 (w/v)의 메탄올을 첨가하였다. 이것을 12시간 교반하고 3회 반복한 후 여과하여 회전식 진공 농축기로 농축 메탄올 추출물을 얻었다. 그 후, 동결건조기를 이용하여 메탄올 추출물을 건조함으로써 하기 실험에 사용할 샘플(시료)을 최종 획득하였다. Then, methanol extracts were obtained from the kelp-added deep water enteric and the kelp-free deep water enteric materials prepared above for use as samples in the following examples. First, the prepared doenjang and red pepper paste were lyophilized, and the sample was ground to add 20 (w / v) methanol. This was stirred for 12 hours, repeated three times, and filtered to obtain a concentrated methanol extract with a rotary vacuum concentrator. Thereafter, the methanol extract was dried using a lyophilizer to finally obtain a sample (sample) to be used in the following experiment.

한편, 간장은 여과를 한 다음, 증류수로 희석을 하여 하기 실험에 사용한 샘플(시료)을 최종 획득하였다. Meanwhile, the soy sauce was filtered and then diluted with distilled water to finally obtain a sample (sample) used in the following experiment.

<< 실시예Example 1> 다시마 첨가 심층수 장류의 아미노산 함량 측정 Amino Acid Content Determination

다시마 분말과 해양 심층수 소금을 사용한 장류의 아미노산분석은 피코테그(Pico-Tag) 방법에 따라 실시하였다.Amino acid analysis of enteric seaweeds using kelp powder and deep sea salt was carried out according to the Pico-Tag method.

상기 제조예 1에서 제조한 시료 (단백질 10 ㎎)의 적당량을 시험관에 넣고 0.03% 베타 멜캅토 에탄올을 함유하는 6N 염산용액 10 ml를 가한 다음, 탈기하여 밀봉하였다. 밀봉한 후, 110℃에서 24시간 가수분해하여 농축하고 건조한 다음, 염산을 날려 보내고 pH 2.2로 맞추어 시료로 사용하였다. A suitable amount of the sample prepared in Preparation Example 1 (10 mg of protein) was added to a test tube, and 10 ml of 6N hydrochloric acid solution containing 0.03% beta melcapto ethanol was added thereto, followed by degassing and sealing. After sealing, the mixture was hydrolyzed at 110 ° C. for 24 hours, concentrated and dried, blown off with hydrochloric acid, and used as a sample at pH 2.2.

상기의 전처리 한 시료 50 ㎕를 취하여 진공펌프가 장착된 피코테그 워크스테이션(Pico-Tag workstation; Waters, USA)에서 건조한 후, 물 : 메탄올:트리메틸아민(2:2:1) 혼합용액 10 ㎕를 첨가하여 재건조 시켰다. 재건조된 시료에 물:메탄올:트리메틸아민:페닐이소티오시아네이트(7:1:1:1) 혼합 용액 20 ㎕를 첨가하여 페닐티오카바밀 아미노산으로 유도체화 시킨 후 다시 건조시켰다. 건조된 시료에 희석액(Waters) 250 ㎕를 첨가하여 용해한 후 HPLC로 분석을 행하였다. 분석은 Waters 717 U6K injector, 510 pump, 680 gradient controller, 486 흡광검출기(absorbance detector), millennium software로 이루어진 HPLC system에서 행하였고, 칼럼은 피코태그(Pico-Tag) 칼럼 (3.9 × 150 ㎜, 4 ㎛, Waters)을 사용하였 으며, 분석 중에는 47℃로 유지하였다. 이때 이동상으로는 eluent A는 물(Waters)을 사용하였고 eluent B는 60% 아세토니트릴을 사용하였다. Take 50 μl of the pretreated sample, dry it in a Pico-Tag workstation (Waters, USA) equipped with a vacuum pump, and then 10 μl of a water: methanol: trimethylamine (2: 2: 1) mixed solution. It was added and redried. 20 µl of a mixed solution of water: methanol: trimethylamine: phenylisothiocyanate (7: 1: 1: 1) was added to the re-dried sample, followed by derivatization with phenylthiocarbamyl amino acid and drying again. 250 µl of diluent (Waters) was added to the dried sample, dissolved, and analyzed by HPLC. The analysis was carried out on an HPLC system consisting of Waters 717 U6K injector, 510 pump, 680 gradient controller, 486 absorbance detector, millennium software, and the column was a Pico-Tag column (3.9 × 150 mm, 4 μm). , Waters), and was maintained at 47 ℃ during analysis. In this case, eluent A was used as the mobile phase, and eluent B was 60% acetonitrile.

하기 표 1은 심층수 된장 시료의 아미노산 함량을 측정한 결과이다. 측정된 아미노산 함량의 단위는 ng/mg이다.Table 1 shows the results of measuring the amino acid content of the deep water miso sample. The unit of amino acid content measured is ng / mg.

Figure 112008007881141-pat00001
Figure 112008007881141-pat00001

해양 심층수 된장의 아미노산을 분석한 결과, 다시마 첨가 심층수 된장이 다시마 무첨가 심층수 된장보다 아스파라긴, 글루타민 및 아르기닌 등의 아미노산 함량이 높게 측정되었고 총 아미노산 함량도 높게 나타났다. 따라서 다시마를 첨가함으로써 심층수 된장의 맛을 상승시키는 아미노산 함량이 증진된 사실을 확인할 수 있었다. As a result of analyzing the amino acids of deep seawater doenjang, the amino acid content of asparagine, glutamine and arginine was higher than that of kelp-free deep water miso and the total amino acid content was higher. Therefore, it was confirmed that the addition of kelp increased the amino acid content to increase the taste of deep water miso.

한편, 하기 표 2는 다시마 첨가 심층수 간장 시료의 아미노산 함량을 측정한 결과이다. 측정된 아미노산 함량의 단위는 ㎍/㎖이다.On the other hand, Table 2 is a result of measuring the amino acid content of kelp added deep water soy sauce sample. The unit of amino acid content measured is μg / ml.

Figure 112008007881141-pat00002
Figure 112008007881141-pat00002

해양 심층수 간장의 아미노산을 분석한 결과, 다시마 첨가 심층수 간장이 다시마 무첨가 심층수 간장보다 글리신, 아르기닌, 알라닌 등의 아미노산 함량이 높게 나타났으며, 총 아미노산 함량도 역시 높게 측정되었다. 따라서 다시마를 첨가함으로써 심층수 간장의 맛을 상승시키는 아미노산 함량을 증진시킬 수 있다는 사실을 확인할 수 있었다. As a result of analyzing the amino acid of deep seawater, the amino acid content of glycine, arginine, alanine, etc. was higher than that of kelp-free deep water, and the total amino acid content was also higher. Therefore, it was confirmed that the addition of kelp can enhance the amino acid content that enhances the taste of deep soy sauce.

한편, 하기 표 3은 심층수 고추장 시료의 아미노산 함량을 측정한 결과이다. 측정된 아미노산의 단위는 ng/mg이다.On the other hand, Table 3 is a result of measuring the amino acid content of the deep water kochujang sample. The unit of amino acid measured is ng / mg.

Figure 112008007881141-pat00003
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해양 심층수 고추장의 아미노산을 분석한 결과, 다시마 첨가 심층수 고추장이 다시마 무첨가 심층수 고추장보다 아스파라긴, 글루타민, 아르기닌, 트립토판 등의 아미노산 함량이 높게 측정되었고, 총 아미노산 함량도 역시 높게 나타났다. 따라서 다시마를 첨가함으로써 심층수 고추장의 맛을 상승시키는 아미노산 함량을 증진시킬 수 있다는 사실을 확인할 수 있었다.As a result of analyzing the amino acid of marine deep-water pepper paste, the amino acid content of asparagus, glutamine, arginine, tryptophan was higher than that of kelp-free deep-water pepper paste. Therefore, it was confirmed that the addition of kelp can enhance the amino acid content that enhances the taste of deep-water kochujang.

<< 실시예Example 2> 다시마 첨가 심층수 장류의 항산화 활성 측정 2> Determination of Antioxidant Activity of Deep Sea Water Entered with Sea Tangle

산화과정 중 생성되는 자유 라디칼은 생체 내 제거 기작에 의해 대부분 소멸되지만 조직의 방어능을 초월한 자유 라디칼은 심장병, 파킨스씨병 및 암 등의 원인되고 있다. Most of the free radicals generated during the oxidation process are destroyed by in vivo elimination mechanisms, but the free radicals beyond the defense of tissues are the cause of heart disease, Parkinson's disease and cancer.

본 발명의 자유라디칼 소거능을 측정하기 위해 상기 제조예 1에서 제조한 시료들을 하기의 방법에 따라 항산화 활성을 측정하였다. In order to measure the free radical scavenging ability of the present invention, the samples prepared in Preparation Example 1 were measured for antioxidant activity according to the following method.

여러 농도의 시료를 4 mL의 메탄올에 녹여 1.5×10-4 M DPPH 용액 (메탄올 용액) 1 mL를 첨가한 다음, 30분간 방치하였고, 그 후 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. Samples of different concentrations were dissolved in 4 mL of methanol, 1 mL of 1.5 × 10 −4 M DPPH solution (methanol solution) was added, and left for 30 minutes, after which the absorbance was measured at 517 nm.

RC50은 30분 후에 DPPH를 50% 억제하는데 요구되는 양을 뜻하고, 표시 방법은 시료가 대조군의 흡광도를 1/2로 감소시키는 농도로 표시하였으며, 검체의 농도에 따른 수소 전자 공여능 변화 곡선에 의해 항산화 활성을 측정하였다. .RC 50 refers to the amount required to inhibit DPPH by 50% after 30 minutes, and the labeling method is expressed as the concentration at which the sample decreases the absorbance of the control by 1/2. Antioxidant activity was measured. .

하기 표 4는 해양 심층수 된장의 항산화 활성 측정 결과이다.Table 4 below shows the results of measuring antioxidant activity of deep seawater doenjang.

Figure 112008007881141-pat00004
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심층수 된장의 항산화 활성을 측정한 결과, 다시마 첨가 심층수 된장의 RC50 값은 783 ㎍, 다시마 무첨가 심층수 된장의 RC50 값은 2555㎍로 나타났다. 다시마를 첨가함으로써 항산화 활성이 눈에 띄게 증가한 것을 확인할 수 있었고 이로부터 다시마를 첨가함으로써 심층수 된장의 항산화 활성을 증진시킬 수 있음을 확인할 수 있었다. The antioxidant activity of deep-water miso was measured and RC 50 The value is 783 ㎍, RC 50 of kelp-free deep-water miso The value was found to be 2555 μg. It was confirmed that the antioxidant activity was significantly increased by the addition of kelp, and from this, it was confirmed that the antioxidant activity of the deep-water doenjang could be enhanced by adding kelp.

한편, 하기 표 5는 심층수 고추장의 항산화 활성을 측정한 결과이다. On the other hand, Table 5 is a result of measuring the antioxidant activity of deep water kochujang.

Figure 112008007881141-pat00005
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심층수 고추장의 항산화 활성을 측정한 결과, 다시마 첨가 심층수 고추장의 RC50 값은 537㎍, 다시마 무첨가 심층수 고추장의 RC50 값은 994㎍로 나타났다. 다시마를 첨가함으로써 항산화 활성이 눈에 띄게 증가한 것을 확인할 수 있었고 이로부터 다시마를 첨가함으로써 심층수 고추장의 항산화 활성을 증진시킬 수 있음을 확인할 수 있었다. Determination of antioxidant activity of deep-water kochujang revealed that the RC 50 value of deep-water kochujang with kelp was 537 ㎍ and RC 50 of deep-water kochujang without kelp The value was found to be 994 µg. It was confirmed that the antioxidant activity was significantly increased by the addition of kelp, and from this, it was confirmed that the antioxidant activity of the deep-water kochujang could be enhanced by the addition of kelp.

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심층수 간장의 항산화 활성을 측정한 결과, 다시마 첨가 심층수 간장의 RC50 값은 637㎍, 다시마 무첨가 심층수 간장의 RC50 값은 1038㎍로 나타났다. 다시마를 첨가함으로써 항산화 활성이 눈에 띄게 증가한 것을 확인할 수 있었고, 이로부터 다시마를 첨가함으로써 심층수 간장의 항산화 활성을 증진시킬 수 있음을 확인할 수 있었다. Determination of antioxidant activity of deep soy sauce revealed that RC 50 Value was 637 ㎍, RC 50 of kelp-free deep water soy sauce The value was found to be 1038 μg. It was confirmed that the antioxidant activity was significantly increased by the addition of kelp, from which it was confirmed that the antioxidant activity of the deep-water liver was enhanced.

<< 실시예Example 3> 다시마 첨가 심층수 장류의 항암 활성측정 3> Determination of anticancer activity of deep seawater enteric tangle added with kelp

세포 단백질 염색을 이용하여 세포증식 및 독성을 측정하는 SRB (Sulforhodamine B) 방법으로 다시마를 첨가한 심층수 장류의 항암 활성을 측정하였다. Cell proliferation and toxicity using cellular protein staining The anticancer activity of deep seawater enteric tangle added with kelp was measured by SRB (Sulforhodamine B) method.

실험을 위해 인간 암세포인 유방암세포(MCF-7), 간암세포(Hep3B), 폐암세포(A549), 위암세포(AGS), 자궁암세포(HeLa) 및 인간 정상세포(293)를 한국세포은행(Korea Cell Bank)으로부터 구입하여 배양하였다.  Human cancer cells such as breast cancer cells (MCF-7), liver cancer cells (Hep3B), lung cancer cells (A549), gastric cancer cells (AGS), uterine cancer cells (HeLa) and human normal cells (293) were tested for the experiment. Cell bank) and incubated.

정상세포, 자궁암세포, 유방암세포 및 간암 세포주는 DMEM(Dulbeco's Modified Eagle Medium) 배지를, 폐암세포와 위암세포는 RPMI-1640 배지를 이용하여 10% 우태아 혈청( Fetal bovine serum ), 37℃, 5% CO 2 에 적응시켜 각각 배양 시켰다. Normal cells, uterine cancer cells, breast cancer cells and liver cancer cell lines were treated with DMEM (Dulbeco's Modified Eagle Medium) medium, and lung and gastric cancer cells were treated with 10% fetal bovine serum ( Fetal) using RPMI-1640 medium. bovine serum ), 37 ° C., and 5% CO 2 to incubate.

그 후, 배양한 10% 우태아 혈청 및 각각의 폐암세포, 위암세포, 유방암세포, 간암세포, 정상세포 그리고 자궁암세포를 함유하는 RPMI 1640과 DMEM 배지를 5×104 cell/mL 농도로 100㎕씩 웰에 첨가하여 24시간 동안 배양 시킨 후 각각의 배지에 녹인 시료( 제조예 1)를 농도별로 100㎕로 첨가하여 48시간 다시 배양하였다. 배양이 끝난 후 시료와 함께 배양된 세포에 아스피레이터로 상등액을 제거하여 냉장 보관한 10%(w/v) 트리클로로아세트산(TCA)을 100㎕ 첨가하고 1시간 동안 4℃에서 방치한 다음 증류수로 다섯 번 헹구었다. 행굼이 마친 후, 실온에서 건조하였고 1%(v/v) 초산에 녹인 0.4%(w/v) SRB 용액 100㎕를 첨가하여 세포를 30분간 염색시켰다. 결합되지 않은 SRB 염색액은 1%(v/v) 초산 용액으로 네 번 헹구어 다시 건조시키고, 10mM 트리스 버퍼(pH 10.5) 100㎕로 염색제를 충분히 녹인 다음 540nm에서 흡광도를 측정하였다. Then, 100 μl of RPMI 1640 and DMEM medium containing 10% fetal bovine serum and cultured lung cancer cells, gastric cancer cells, breast cancer cells, liver cancer cells, normal cells and uterine cancer cells at a concentration of 5 × 10 4 cells / mL. Each well was added to the wells and incubated for 24 hours, and then the samples dissolved in each medium ( Preparation Example 1) were added in 100 μl of each concentration and incubated again for 48 hours. After the incubation, 100 μl of 10% (w / v) trichloroacetic acid (TCA), which was refrigerated, was stored in cells incubated with the sample with an aspirator, and stored in distilled water for 1 hour. Rinse five times. After the rinse, the cells were stained for 30 minutes by adding 100 μl of 0.4% (w / v) SRB solution, dried at room temperature and dissolved in 1% (v / v) acetic acid. Unbound SRB stain was rinsed four times with 1% (v / v) acetic acid solution and dried again, and the dye was dissolved in 100 μl of 10 mM Tris buffer (pH 10.5), and then absorbance was measured at 540 nm.

① 다시마 첨가 심층수 된장의 항암활성 측정① Determination of anticancer activity of deep seaweed miso added with kelp

다시마 첨가 심층수 된장의 암세포 성장 억제 효과를 측정하기 위해 암세포에 대한 세포독성을 측정하였다. Cytotoxicity against cancer cells was measured to determine the cancer cell growth inhibitory effect of deep seaweed doenjang added with sea tangle.

먼저 인간 자궁암 세포(HeLa)에 대한 다시마 첨가 심층수 된장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 1), 시료가 최고 농도 1mg/mL 일 때, 다시마 첨가 심층수 된장의 자궁암 세포에 대한 세포 독성은 71.1%, 다시마 무첨가 심층수 된장은 68.9%로 다시마 첨가 심층수 된장이 더 높았다. 또한, 다시마 첨가 심층수 된장은 시료 농도가 증가할수록 자궁암 세포에 대한 세포독성이 증가하는 경향을 보였으며, 60~71%로 가장 높은 세포 독성을 나타냈다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 자궁암 세포 성장에 대한 심층수 된장의 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다. First, as a result of measuring the growth inhibitory effect of kelp-added deep-water doenjang on human uterine cancer cells (HeLa) (FIG. 1), when the sample was at a maximum concentration of 1 mg / mL, the cytotoxicity of cervical cancer cells of kelp-containing deep-water doenjang was 71.1%. In addition, 68.9% of deep-water miso without kelp was higher in deep-water miso added with kelp. In addition, the deep seaweed doenjang added with sea tangle showed a tendency to increase cytotoxicity against uterine cancer cells as the sample concentration increased, showing the highest cytotoxicity (60-71%). From these results, it was confirmed that the addition of kelp enhances the inhibitory effect of deep water miso on uterine cancer cell growth.

인간 간암세포(Hep3B)에 대한 다시마 첨가 심층수 된장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 2), 농도에 상관없이 다시마 첨가 심층수 된장은 다시마 무첨가 심층수 된장보다 간암세포에 대한 세포 독성이 높게 측정되었고, 시료가 최고 농도 1mg/mL일 때, 다시마 첨가 심층수 된장의 세포독성이 74.4%로 가장 높게 측정되었다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 간암 세포 성장에 대한 심층수 된장의 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다. As a result of measuring the growth inhibitory effect of kelp-added deep-water miso on human liver cancer cells (Hep3B) (FIG. 2), kelp-added deep-water miso was higher in cytotoxicity to liver cancer cells than kelp-free deep-water miso, regardless of concentration. When the sample was at the highest concentration of 1 mg / mL, the cytotoxicity of deep seaweed doenjang added with sea tangle was the highest with 74.4%. From these results, it was confirmed that the addition of kelp enhances the inhibitory effect of deep water doenjang on liver cancer cell growth.

인간 위암세포(AGS)에 대한 다시마 첨가 심층수 된장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 3), 시료가 최고 농도 1mg/mL일때, 다시마 첨가 심층수 된장의 위암세포에 대한 세포독성이 65.7%로 다시마 무첨가 심층수 된장보다 높은 세포독성을 나타내었다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 위암 세포 성장에 대한 심층수 된장의 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다. As a result of measuring the growth inhibitory effect of kelp-added deep-water doenjang on human gastric cancer cells (AGS) (FIG. 3), when the sample was at the highest concentration of 1 mg / mL, the cytotoxicity to the stomach cancer cells of kelp-added deep-water doenjang was 65.7% It showed higher cytotoxicity than the additive-free deep water doenjang. From these results, it was confirmed that the addition of kelp enhances the inhibitory effect of deep water miso on gastric cancer cell growth.

인간 폐암세포(A549)에 대한 다시마 첨가 심층수 된장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 4), 시료가 최고농도 1mg/mL일 때, 다시마 첨가 심층수 된장은 77.3%, 다시마 무첨가 심층수 된장은 58%로 다시마 첨가 심층수 된장의 세포 독성이 월등히 높았다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 폐암세포 성장에 대한 심층수 된장의 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다.As a result of measuring the growth inhibitory effect of kelp-containing deep-water miso on human lung cancer cells (A549) (FIG. 4), when the sample concentration was 1 mg / mL, 77.3% of kelp-containing deep-water miso and 58% of kelp-free deep-water miso were 58%. The cytotoxicity of deep seaweed miso added with kelp was significantly higher. From these results, it was confirmed that the addition of kelp enhances the inhibitory effect of deep water miso on lung cancer cell growth.

인간 유방암 세포(MCF-7)에 대한 다시마 첨가 심층수 된장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 5), 시료가 최고 농도 1 mg/mL일 때, 다시마 첨가 심층수 된장은 70% 이상, 다시마 무첨가 심층수 된장은 67.3%로 나타났다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 유방암 세포 성장에 대한 심층수 된장의 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다. As a result of measuring the growth inhibitory effect of kelp-added deep-water miso on human breast cancer cells (MCF-7) (FIG. 5), when the sample concentration is 1 mg / mL, the kelp-added deep-water miso is 70% or more and no kelp-free deep water. Doenjang was 67.3%. From these results, it was confirmed that the addition of kelp enhances the inhibitory effect of deep water miso on breast cancer cell growth.

마지막으로 인간 정상세포 293에 대한 다시마 첨가 심층수 된장의 세포 독성효과를 측정한 결과(도 6), 시료가 최고 농도 1mg/mL일 때, 다시마 첨가 심층수 된장과 다시마 무첨가 심층수 된장 모두 40% 이하의 낮은 세포독성을 나타냈다. 이와 같은 결과로부터 정상세포 성장에 대한 다시마 첨가 심층수 된장의 낮은 억제 활성을 확인할 수 있었다.Finally, as a result of measuring the cytotoxic effect of kelp-added deep-water doenjang on human normal cells 293 (FIG. 6), when the sample concentration was 1 mg / mL, both the kelp-containing deep-water miso and kelp-free deep-water miso were lower than 40%. Cytotoxicity was shown. From these results, it was confirmed that the low inhibitory activity of deep seaweed doenjang added with seaweed against normal cell growth.

이상, 상기의 결과들로부터 다시마를 첨가함으로써 심층수 된장의 항암활성 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다. In the above results, it was confirmed that the anticancer activity effect of the deep soybean paste was enhanced by adding kelp.

② 심층수 간장의 항암활성 측정(심층수와 코지 비율 1:6 간장)② Determination of anticancer activity of deep-water liver (deep water-to-cozy ratio 1: 6 soy sauce)

심층수와 코지 비율이 1:6으로 제조된 다시마 첨가 심층수 간장의 항암활성을 측정하였다. 다시마 첨가 심층수 간장과 다시마 무첨가 심층수 간장 시료의 염도는 16%로 하여 측정하였다. The anticancer activity of deep seawater with kelp added with a deep water and koji ratio of 1: 6 was measured. The salinity of the kelp added deep soy sauce and the kelp-free deep water soy sauce samples was measured at 16%.

먼저 인감 자궁암 세포(HeLa)에 대한 다시마 첨가 심층수 간장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 7), 시료가 최고 농도 1mg/mL 일 때, 다시마 첨가 심층수 간장의 자궁암 세포에 대한 세포 독성은 65.8%, 다시마 무첨가 심층수 간장은 60.8%로 다시마 첨가 심층수 간장이 높았다. 또한, 다시마 첨가 심층수 간장은 시료의 농도가 증가할수록 세포독성이 증가하는 경향을 보였다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 자궁암 세포에 대한 심층수 간장의 성장 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다. First, as a result of measuring the growth inhibitory effect of kelp-derived deep soy sauce on seal uterine cancer cells (HeLa) (FIG. 7), when the sample was at a maximum concentration of 1 mg / mL, cytotoxicity against cervical cancer cells of kelp-containing deep-water liver was 65.8%. In addition, deep water soy sauce containing no kelp was 60.8%, and deep soy sauce containing kelp was high. In addition, kelp-rich deep soy sauce showed a tendency to increase cytotoxicity as the sample concentration increased. From these results, it was confirmed that the addition of kelp enhances the growth inhibitory effect of deep water liver on uterine cancer cells.

인간 간암세포(Hep3B)에 대한 다시마 첨가 심층수 간장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 8), 농도에 상관없이 다시마 첨가 심층수 간장은 다시마 무첨가 심층수 간장보다 간암세포에 대한 세포 독성이 높게 측정되었다. 특히, 시료 농도가 1mg/mL일 때 다시마 첨가 심층수 간장의 세포 독성이 69.4%로 가장 높게 측정되었다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 간암세포 성장에 대한 심층수 간장의 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다. As a result of measuring the growth inhibitory effect of kelp-added deep-water liver on human liver cancer cells (Hep3B) (FIG. 8), kelp-added deep-water liver was measured to have higher cytotoxicity against liver cancer cells than kelp-free deep-water liver regardless of concentration. In particular, when the sample concentration was 1 mg / mL, the cytotoxicity of kelp-containing deep soy sauce was 69.4%. From these results, it was confirmed that the addition of kelp enhances the inhibitory effect of deep-water liver on liver cancer cell growth.

인간 위암세포(AGS)에 대한 다시마 첨가 심층수 간장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 9), 농도와 상관없이 다시마 첨가 심층수 간장은 다시마 무첨가 심층수 간장보다 위암세포에 대한 세포독성이 높았다. 또한, 시료의 농도가 증가할수록 위암세포에 대한 세포 독성도 증가하였다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 위암세포 성장에 대한 심층수 간장의 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다. As a result of measuring the growth inhibitory effect of kelp-added deep-water liver on human gastric cancer cells (AGS) (FIG. 9), the kelp-added deep-water liver was higher in cytotoxicity to gastric cancer cells than no kelp-free deep-water liver. In addition, as the concentration of the sample increased, cytotoxicity against gastric cancer cells also increased. From these results, it was confirmed that the addition of kelp enhances the inhibitory effect of deep water liver on gastric cancer cell growth.

인간 폐암세포(A549)에 대한 다시마 첨가 심층수 간장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 10), 시료의 농도가 0.25mg/mL로 낮은 때, 다시마 첨가 심층수 간장은 다시마 무첨가 심층수 간장보다 폐암세포에 대한 세포독성이 낮았지만, 시료의 농도가 증가할수록 다시마 무첨가 심층수 간장보다 폐암세포에 대한 세포독성이 증가하였다. 특히, 시료가 최고 농도 1mg/mL일 때, 다시마 첨가 심층수 간장의 폐암세포에 대한 세포독성은 70%이상의 높은 억제율을 나타냈다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 폐암세포 성장에 대한 심층수 간장의 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다. As a result of measuring the growth inhibitory effect of kelp-containing deep-water liver on human lung cancer cells (A549) (FIG. 10), when the concentration of the sample was low at 0.25 mg / mL, the kelp-containing deep-water liver was found in lung cancer cells more than the kelp-free deep-water liver. Although cytotoxicity was low, as the concentration of the sample increased, the cytotoxicity to lung cancer cells was higher than that of the tangle-free deep-water liver. In particular, when the sample was at the highest concentration of 1 mg / mL, cytotoxicity against lung cancer cells of kelp-containing deep-water liver showed high inhibition rate of 70% or more. From these results, it was confirmed that the addition of kelp enhances the inhibitory effect of deep water liver on lung cancer cell growth.

인간 유방암 세포(MCF-7)에 대한 다시마 첨가 심층수 간장의 성장 억제 효과를 측정한 결과 (도 11), 시료가 최고 농도 1 mg/mL일 때 유방암 세포에 대한 세포독성이 다시마 첨가 심층수 간장은 65%이상으로 다시마 무첨가 심층수 간장보다 높게 측정되었다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 유방암 세포 성장에 대한 심층수 간장의 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다. As a result of measuring the growth inhibitory effect of kelp-derived deep-water liver on human breast cancer cells (MCF-7) (FIG. 11), the cytotoxicity against kelp-derived deep-water liver of kelp was 65 when the sample had the highest concentration of 1 mg / mL. More than%, it was higher than kelp-free deep water soy sauce. From these results, it was confirmed that the addition of kelp enhances the inhibitory effect of deep-water liver on breast cancer cell growth.

마지막으로 인간 정상세포 293에 대한 다시마 첨가 심층수 간장의 세포 독성효과를 측정한 결과(도 12), 시료가 최고 농도 1mg/mL일 때, 다시마 첨가 심층수 간장과 다시마 무첨가 심층수 간장 모두 정상 세포에 대해 40% 이하의 낮은 세포 독성을 나타냈다. 이와 같은 결과로부터 정상세포의 성장에 대한 다시마 첨가 심층수 간장의 낮은 억제 활성을 확인할 수 있었다.Finally, as a result of measuring the cytotoxic effect of kelp-containing deep-water liver on human normal cells 293 (Fig. 12), when the sample concentration is 1 mg / mL, both the kelp-rich deep-water liver and the kelp-free deep-water liver were 40 for normal cells. A low cytotoxicity of less than% was shown. From these results, it was confirmed that the low inhibitory activity of kelp-containing deep soy sauce on the growth of normal cells.

이상, 상기의 결과들로부터 다시마를 첨가함으로써 심층수 간장의 항암활성 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다. As described above, it was confirmed that the anticancer activity effect of the deep water liver was enhanced by the addition of kelp from the above results.

심층수 고추장의 항암활성 측정 Determination of anticancer activity of deep water kochujang

다시마 첨가 심층수 고추장의 암세포 성장 억제 효과를 측정하기 위해 암세포에 대한 세포독성을 측정하였다.Cytotoxicity against cancer cells was measured to determine the inhibitory effect of cancer cell growth in kochujang added with kelp.

먼저 인간 자궁암 세포(HeLa)에 대한 다시마 첨가 심층수 고추장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 13), 시료가 최고 농도 1mg/mL 일 때, 다시마 첨가 심층수 고추장의 자궁암세포에 대한 세포독성은 61.5%, 다시마 무첨가 심층수 고추장은 49.8%로 다시마 첨가 심층수 고추장이 높게 측정되었다. 또한, 농도에 상관없이 다시마 첨가 심층수 고추장의 자궁암 세포 성장에 대한 억제율은 다시마 무첨가 심층수 고추장보다 높았으며, 시료 농도가 증가할수록 세포독성이 증가하는 경향을 보였다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 자궁암 세포 성장에 대한 심층수 고추장의 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다. First, as a result of measuring the growth inhibitory effect of kelp-containing deep-water kochujang on human uterine cancer cells (HeLa) (FIG. 13), when the sample had a maximum concentration of 1 mg / mL, cytotoxicity against cervical cancer cells of kelp-containing deep-water kochujang was 61.5%. In addition, the depth of kochujang added with kelp was 49.8%, and the depth of kochujang added with kelp was high. Regardless of the concentration, the inhibition rate of cervical cancer cell growth of kelp-containing deep-water kochujang was higher than that of kelp-free deep-water kochujang, and cytotoxicity increased with increasing sample concentration. From these results, it was confirmed that the addition of kelp enhances the inhibitory effect of deep water kochujang on uterine cancer cell growth.

인간 간암세포(Hep3B)에 대한 다시마 첨가 심층수 고추장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 14), 시료가 저농도일 때, 간암세포에 대한 세포독성은 다시마 첨가 심층수 고추장이 다시마 무첨가 심층수 고추장보다 낮았지만, 시료의 농도가 증가할수록 다시마 첨가 심층수 고추장은 다시마 무첨가 심층수 고추장보다 높게 측정되었다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 간암세포 성장에 대한 심층수 고추장의 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다. As a result of measuring the growth inhibitory effect of kelp added deep water kochujang on human liver cancer cells (Hep3B) (FIG. 14), when the sample was low concentration, the cytotoxicity to the liver cancer cells was lower than that of kelp-free deep water kochujang. As the concentration of the sample increased, the depth of kochujang added with kelp was higher than that of kochujang without added kelp. From these results, it was confirmed that the addition of kelp enhances the inhibitory effect of deep water kochujang on liver cancer cell growth.

인간 위암세포(AGS)에 대한 다시마 첨가 심층수 고추장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 15), 시료의 농도가 증가할수록 다시마 첨가 심층수 고추장과 다시마 무첨가 심층수 고추장의 세포독성은 증가하였지만, 다시마 첨가 심층수 고추장의 세포독성이 더 높게 측정되었다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 위암세포에 대한 심층수 고추장의 성장 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다. As a result of measuring the growth inhibition effect of kelp added deep water kochujang on human gastric cancer cells (AGS) (FIG. 15), the cytotoxicity of kelp added deep water kochujang and kelp-free deep water kochujang increased as the concentration of the sample increased, but the kelp added deep water The cytotoxicity of kochujang was measured higher. From these results, it was confirmed that the addition of kelp enhances the growth inhibitory effect of the deep water kochujang on gastric cancer cells.

인간 폐암세포 (A549)에 대한 다시마 첨가 심층수 고추장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 16), 시료의 농도와 무관하게 다시마 첨가 심층수 고추장의 세포독성은 다시마 무첨가 심층수 고추장보다 높게 측정되었다. 특히, 시료가 최고 농도 1mg/mL일 때, 다시마 첨가 심층수 고추장은 77.7%로 높은 세포독성을 나타냈다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 폐암세포에 대한 심층수 고추장의 성장 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다. As a result of measuring the growth inhibitory effect of kelp added deep water kochujang on human lung cancer cells (A549) (FIG. 16), the cytotoxicity of kelp added deep water kochujang was higher than that of kelp-free deep water kochujang. In particular, when the sample was at the highest concentration of 1 mg / mL, the deep sea kochujang added with kelp showed high cytotoxicity of 77.7%. From the above results, it was confirmed that the addition of kelp enhances the growth inhibitory effect of deep water kochujang on lung cancer cells.

인간 유방암 세포(MCF-7)에 대한 다시마 첨가 심층수 고추장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 17), 시료 농도와 무관하게 다시마 첨가 심층수 고추장은 다시마 무첨가 심층수 고추장보다 유방암 세포에 대한 세포독성이 높게 측정되었고, 시료가 최고 농도 1 mg/mL일 때, 51.4%로 가장 높았다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 유방암 세포에 대한 심층수 고추장의 성장 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다. As a result of measuring the growth inhibitory effect of kelp-containing deep-water kochujang on human breast cancer cells (MCF-7) (FIG. 17), regardless of sample concentration, kelp-containing deep-water kochujang had higher cytotoxicity against breast cancer cells than kelp-free deep-water kochujang. It was measured and was highest at 51.4% when the sample was at the highest concentration of 1 mg / mL. From these results, it was confirmed that the addition of kelp enhances the growth inhibitory effect of deep water kochujang on breast cancer cells.

마지막으로 인간 정상세포 293에 대한 다시마 첨가 심층수 고추장의 세포 독성효과를 측정한 결과(도 18), 다시마 첨가 심층수 고추장과 다시마 무첨가 심층수 고추장 모두 40% 이하의 낮은 억제효과를 나타냈다. 이와 같은 결과로부터 정상세포의 성장에 대한 다시마 첨가 심층수 고추장의 낮은 억제활성을 확인할 수 있었다.Finally, as a result of measuring the cytotoxic effect of kelp added deep water kochujang on human normal cells 293 (FIG. 18), both kelp added deep water kochujang and kelp-free deep water kochujang showed low inhibitory effect of 40% or less. From these results, it was confirmed that the low inhibitory activity of kochujang added with kelp on the growth of normal cells.

이상, 상기의 결과들로부터 다시마를 첨가함으로써 심층수 고추장의 항암활성 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다. In the above results, it was confirmed that the anticancer activity of deep-water kochujang was enhanced by adding kelp.

<< 실시예Example 4>  4> 고형암Solid rock 성장 저지 확인을 위한  To identify growth jerseys SarcomaSarcoma -180 -180 cellcell 을 이용한 항암실험 Anticancer test

체중 25g 전후의 웅성 Balb/c 마우스를 각각 실험 군당 5마리씩 정하여 온도 21~26℃, 습도 45~55%로 유지시켰고 조명은 오전 9시에 자동 점등과 오후 9시에 자동 소등하였다. 사료는 삼양유지사료(주)의 마우스용 배합사료(조단백질 22.1%, 조지방 3.5%, 조섬유 5.0%, 회분 8.0%, 칼슘 0.6%, 인 0.4%)를 사용하였고, 물은 증류수를 공급하였으며 사료와 물을 자유롭게 먹도록 하였다. Male Balb / c mice of 25g body weight were set to 5 mice per experimental group and maintained at a temperature of 21-26 ° C. and a humidity of 45-55%. The lights were automatically turned on at 9 am and automatically turned off at 9 pm. For the feed, Samyang Oil Feed Co., Ltd. used mouse feed (crude protein 22.1%, crude fat 3.5%, crude fiber 5.0%, ash 8.0%, calcium 0.6%, phosphorus 0.4%), and water was supplied with distilled water. Water was allowed to eat freely.

상기의 Balb/c 마우스의 복강 내에 7~10일간 배양된 sarcoma-180 세포를 복수와 함께 취하여 phosphate buffered saline (PBS)와 함께 원심분리(1,200 rpm, 10 min.)하였다. 원심분리하여 분리된 세포를 다시 PBS에 부유시켜 재차 원심분리하고 상등액을 제거한 후 1.0×106 cell/mL가 되도록 종양세포 부유액을 만들었다. 제조한 부유액을 1 mL씩 복강 주사하여 이식 보존을 하면서 실험에 사용하였다. Sarcoma-180 cells cultured in the abdominal cavity of the Balb / c mouse for 7 to 10 days were taken with ascites and centrifuged (1,200 rpm, 10 min.) With phosphate buffered saline (PBS). The cells separated by centrifugation were suspended in PBS again, centrifuged again, and the supernatant was removed. Then, the tumor cell suspension was prepared to be 1.0 × 10 6 cells / mL. 1 mL of the prepared suspension was intraperitoneally injected and used for the experiment while preserving the graft.

고형암 성장저지 실험은 Brouard 등의 방법으로 실험하였다. 즉, 각 군당 5마리의 마우스의 왼쪽 서해부에 sarcoma-180 종양세포 부유액 0.2 mL (6.0×106 cell/mouse)씩을 피하 이식하고, 24시간 후부터 20일간 매일 1회씩 제조예 1에서 제조한 시료 용액을 복강으로 투여하여 식이를 섭취시켰다. 종양세포 이식 26~30일째 되는 날 마우스를 치사시켜 생성된 고형암을 적출한 후 각각의 종양 무게(수학식 1)와 종양 성장 저지 백분율(Tumor growth ratio, I.R. : %; 수학식 2)를 계산하였다. 대조군의 유의 수준은 p<0.05이다.Solid rock growth inhibition experiment was performed by Brouard et al. In other words, 0.2 mL (6.0 × 10 6 cell / mouse) of sarcoma-180 tumor cell suspension was subcutaneously implanted into the left west sea of 5 mice in each group, and the sample prepared in Preparation Example 1 once daily for 20 days after 24 hours. The solution was taken intraperitoneally to ingest the diet. Solid tumors produced by killing mice on day 26-30 of tumor cell transplantation were extracted, and the respective tumor weights (Equation 1) and Tumor growth ratio (IR:%; Equation 2) were calculated. . The significance level of the control group is p <0.05.

Figure 112008007881141-pat00007
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Figure 112008007881141-pat00008
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고형암Solid rock 성장 저지 확인을 위한  To identify growth jerseys SarcomaSarcoma -180 -180 cellcell 을 이용한 다시마 첨가 해양 심층수 된장의 항암실험 Anticancer Test of Deep Sea Soybean Paste Added with Kelp

Sarcoma-180 cell에 대한 다시마 첨가 해양 심층수 된장의 항암효과를 측정하였다. The anticancer effects of marine deep-water doenjang added with seaweed on Sarcoma-180 cells were measured.

Figure 112008007881141-pat00009
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시료의 농도가 12.5 mg/kg body weight 일 때, 다시마 첨가 심층수 된장의 종양무게와 억제율은 각각 3.8±0.72, 23.0±14.66으로 다시마 무첨가 심층수 된장의 종양 무게와 억제율이 4.27±0.41, 13.49±8.33인 것에 비해 종양 무게가 현저히 낮았고, 억제율은 월등히 높았다. 또한, 시료의 농도가 25mg/kg body weight 일 때도 마찬가지로 다시마 첨가 심층수 된장이 다시마 무첨가 심층수 된장에 비해 종양 무게는 낮았고, 억제율은 높게 측정되었다. 따라서 다시마를 첨가함으로써 심층수 된장의 항암효과가 증대됨을 확인할 수 있었다.  When the sample concentration was 12.5 mg / kg body weight, the tumor weight and inhibition rate of deep seaweed doenjang added with kelp were 3.8 ± 0.72 and 23.0 ± 14.66, respectively. The tumor weight and inhibition rate of deep seaweed doenjang without added kelp were 4.27 ± 0.41 and 13.49 ± 8.33, respectively. Tumor weight was significantly lower, and inhibition was much higher than that. Also, when the sample concentration was 25 mg / kg body weight, the kelp-added deep-water miso was lower in tumor weight and higher in inhibition rate than the deep-water miso. Therefore, the addition of kelp was confirmed that the anticancer effect of deep-water doenjang is increased.

고형암Solid rock 성장 저지 확인을 위한  To identify growth jerseys SarcomaSarcoma -180 -180 cellcell 을 이용한 다시마 첨가 해양 심층수 간장 항암실험Deep seawater liver cancer chemotherapy using kelp

상기 실시예 4와 같은 방법으로 고형암 성장 저지 확인을 위한 Sarcoma-180 cell에 대한 해양 심층수 간장의 항암효과를 측정하였다. 이때, 다시마 첨가 심층수 간장과 다시마 무첨가 심층수 간장의 염도를 16%를 한정하였다. In the same manner as in Example 4 for confirming the solid cancer growth inhibition The anticancer effect of deep seawater soy sauce on Sarcoma-180 cells was measured. At this time, the salinity of the kelp added deep water soy sauce and kelp-free deep water soy sauce was limited to 16%.

Figure 112008007881141-pat00010
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시료 농도가 12.5 mg/kg body weight 일 때, 다시마 첨가 심층수 간장의 종양무게와 억제율은 각각 3.58±0.79, 27.45±16.07로 다시마 무첨가 심층수 간장의 종양 무게와 억제율이 4.19±0.64, 14.87±11.54인 것에 비해 종양 무게가 현저히 낮았고 억제율은 월등히 높았다. 또한, 시료의 농도가 25mg/kg body weight 일 때도 마찬가지로 다시마 첨가 심층수 간장이 다시마 무첨가 심층수 간장에 비해 종양 무게는 낮았고 억제율은 높게 측정되었다. 따라서 다시마를 첨가함으로써 심층수 간장의 항암효과가 증대됨을 확인할 수 있었다.  When the sample concentration was 12.5 mg / kg body weight, the tumor weight and inhibition rate of kelp-derived deep soy sauce were 3.58 ± 0.79 and 27.45 ± 16.07, respectively. The tumor weight and inhibition rate of kelp-free deep-water liver were 4.19 ± 0.64 and 14.87 ± 11.54, respectively. The tumor weight was significantly lower and the inhibition rate was much higher. Similarly, when the concentration of the sample was 25 mg / kg body weight, the kelp-containing deep soy sauce was found to have a lower tumor weight and a higher inhibition rate than the kelp-free deep soy sauce. Therefore, it was confirmed that the anticancer effect of deep water liver was increased by adding kelp.

고형암Solid rock 성장 저지 확인을 위한  To identify growth jerseys SarcomaSarcoma -180 -180 cellcell 을 이용한 다시마 첨가 해양 심층수 고추장의 항암실험 Anticancer Test of Marine Deep Sea Kochujang Added with Sea Tangle

상기 실시예 4와 같은 방법으로 Sarcoma-180 cell에 대한 해양 심층수 고추장의 항암효과를 측정하였다. In the same manner as in Example 4 was measured the anticancer effect of marine deep water kochujang on Sarcoma-180 cells.

Figure 112008007881141-pat00011
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시료 농도가 12.5 mg/kg body weight 일 때, 다시마 첨가 심층수 고추장의 종양무게와 억제율은 각각 4.04±0.28ab, 18.2±5.8로 다시마 무첨가 심층수 고추장의 종양 무게와 억제율이 4.53±0.34, 11.47±8.67인 것에 비해 종양 무게가 현저히 낮았고 억제율은 월등히 높았다. 또한, 시료의 농도가 25mg/kg body weight 일 때도 마찬가지로 다시마 첨가 심층수 고추장이 다시마 무첨가 심층수 고추장에 비해 종양 무게는 낮았고 억제율은 높게 측정되었다. 따라서 다시마를 첨가함으로써 심층수 고추장의 항암효과가 증대됨을 확인할 수 있었다. When the sample concentration was 12.5 mg / kg body weight, tumor weight and inhibition rate of kelp-derived deep kochujang were 4.04 ± 0.28 ab and 18.2 ± 5.8, respectively. The tumor weight was significantly lower and the inhibition rate was much higher than that. Also, when the concentration of the sample was 25mg / kg body weight, the kelp-containing deep-watered kochujang had lower tumor weight and higher inhibition rate than the kelp-free deep-water kochujang. Therefore, it was confirmed that the anticancer effect of deep water kochujang was increased by adding kelp.

도 1은 다시마 첨가 심층수 된장과 다시마 무첨가 심층수 된장의 자궁암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 1 is a graph showing the cytotoxic effect on uterine cancer cells of kelp added deep water miso and kelp-free deep water miso.

도 2는 다시마 첨가 심층수 된장과 다시마 무첨가 심층수 된장의 간암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 2 is a graph showing the cytotoxic effects on liver cancer cells of kelp added deep water miso and kelp-free deep water miso.

도 3은 다시마 첨가 심층수 된장과 다시마 무첨가 심층수 된장의 위암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 3 is a graph showing the cytotoxic effects on stomach cancer cells of kelp added deep water miso and kelp-free deep water miso.

도 4는 다시마 첨가 심층수 된장과 다시마 무첨가 심층수 된장의 폐암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 4 is a graph showing the cytotoxic effect on lung cancer cells of kelp added deep water miso and kelp-free deep water miso.

도 5는 다시마 첨가 심층수 된장과 다시마 무첨가 심층수 된장의 유방암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 5 is a graph showing the cytotoxic effects on breast cancer cells of kelp added deep water miso and kelp-free deep water miso.

도 6는 다시마 첨가 심층수 된장과 다시마 무첨가 심층수 된장의 정상세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 6 is a graph showing the cytotoxic effect on normal cells of kelp added deep water miso and kelp-free deep water miso.

도 7은 다시마 첨가 심층수 간장과 다시마 무첨가 심층수 간장의 자궁암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 7 is a graph showing the cytotoxic effects on uterine cancer cells of kelp added deep water and kelp-free deep water soy sauce.

도 8은 다시마 첨가 심층수 간장과 다시마 무첨가 심층수 간장의 간암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 8 is a graph showing the cytotoxic effect on the liver cancer cells of kelp added deep water liver and kelp-free deep water liver.

도 9는 다시마 첨가 심층수 간장과 다시마 무첨가 심층수 간장의 위암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 9 is a graph showing the cytotoxic effect on the stomach cancer cells of kelp added deep water and kelp-free deep water soy sauce.

도 10은 다시마 첨가 심층수 간장과 다시마 무첨가 심층수 간장의 폐암세포 에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 10 is a graph showing the cytotoxic effect on lung cancer cells of kelp added deep water and kelp-free deep water liver.

도 11은 다시마 첨가 심층수 간장과 다시마 무첨가 심층수 간장의 유방암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 11 is a graph showing the cytotoxic effect on the breast cancer cells of kelp added deep water and kelp-free deep water soy sauce.

도 12는 다시마 첨가 심층수 간장과 다시마 무첨가 심층수 간장의 정상세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 12 is a graph showing the cytotoxic effect on normal cells of kelp added deep water and kelp-free deep water soy sauce.

도 13은 다시마 첨가 심층수 고추장과 다시마 무첨가 심층수 고추장의 자궁암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 13 is a graph showing the cytotoxic effects on uterine cancer cells of kelp added deep water kochujang and kelp-free deep water kochujang.

도 14는 다시마 첨가 심층수 고추장과 다시마 무첨가 심층수 고추장의 간암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 14 is a graph showing the cytotoxic effect on liver cancer cells of kelp added deep water kochujang and kelp-free deep water kochujang.

도 15는 다시마 첨가 심층수 고추장과 다시마 무첨가 심층수 고추장의 위암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다.15 is a graph showing the cytotoxic effect on the stomach cancer cells of kelp added deep water kochujang and kelp-free deep water kochujang.

도 16은 다시마 첨가 심층수 고추장과 다시마 무첨가 심층수 고추장의 폐암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 16 is a graph showing the cytotoxic effect on lung cancer cells of kelp added deep water kochujang and kelp-free deep water kochujang.

도 17은 다시마 첨가 심층수 고추장과 다시마 무첨가 심층수 고추장의 유방암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 17 is a graph showing the cytotoxic effect on breast cancer cells of kelp added deep water kochujang and kelp-free deep water kochujang.

도 18은 다시마 첨가 심층수 고추장과 다시마 무첨가 심층수 고추장의 정상세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 18 is a graph showing the cytotoxic effect on normal cells of kelp added deep water kochujang and kelp-free deep water kochujang.

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삭제delete 삭제delete 일반 소금 대신 해양 심층수를 건조하여 얻은 염을 사용하여 제조한 장류에 부재료로 다시마 분말을 추가로 첨가하는 것을 특징으로 하는 해양 심층수를 사용한 장류의 항산화 활성을 증진시키는 방법Method for enhancing the antioxidant activity of seaweeds using deep seawater, characterized in that the addition of kelp powder as a subsidiary material to the soy sauce prepared by using the salt obtained by drying the deep seawater instead of ordinary salts 삭제delete 일반 소금 대신 해양 심층수를 건조하여 얻은 염을 사용하여 제조한 장류에 부재료로 다시마 분말을 추가로 첨가하는 것을 특징으로 하는 해양 심층수를 사용한 장류의 암세포 저해 활성을 증진시키는 방법Method for enhancing the cancer cell inhibitory activity of enteric seaweeds using deep seawater, characterized in that the addition of kelp powder as a subsidiary material to the entertained seaweeds using salts obtained by drying the deep seawater instead of ordinary salts 삭제delete
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