KR100874048B1

KR100874048B1 - 살생물제 보호시스템

Info

Publication number: KR100874048B1
Application number: KR1020027013353A
Authority: KR
Inventors: 알렉스 사바; 스티븐 크리쯜러
Original assignee: 노바팜 리서치(오스트레일리아)피티와이리미티드
Priority date: 2000-04-07
Filing date: 2001-04-05
Publication date: 2008-12-12
Also published as: EP1274304A1; CA2403919A1; KR20030017492A; CN1441636A; MY128592A; EP1274304A4; BR0110144A; US20030165402A1; NZ521494A; JP2003529612A; AR027781A1; AUPQ679000A0; TWI292699B; WO2001076366A1; CN1278606C

Abstract

본 발명은 적어도 1 중량%의 4급 살생물제 (살생물적으로 활성인 4급 암모늄 화합물)를 함유하며, 농축물 1 부에 대해서 20 부의 물로 희석하여 2% 이하의 트립톤 (또는 그의 단백질 등가물)의 존재하에서 24시간 후에, 동일 농도의 단백질의 존재하에서 물 중의 동일한 4급 살생물제의 동일한 농도의 단순용액의 MIC보다 낮은 MIC를 나타내는 희석용액을 생성시킬 수 있는 저장안정성 액체 소독제 농축조성물에 관한 것이다. 4급 살생물제의 살생물 효능은 "효소 안정화제", "효소 안정화 시스템", "미셀 형성 변형제 및 억제제" 및 이들의 배합물로 구성된 그룹으로부터 선택된 "활성보호제"에 의해서 보호될 수 있다. 본 발명은 또한, 농축물로부터 제조된 소독제 작업용액, 및 4급 살생물제를 불활성화로부터 보호하는 방법에 관한 것이다.

Description

살생물제 보호시스템{BIOCIDAL PROTECTION SYSTEM}

본 발명은 4급 살생물제를 이용하는 살생물 시스템 및 이 시스템을 사용한 소독방법에 관한 것이다.

4급 암모늄 화합물은 잘 알려져 있는 살생물제의 부류이다. 이들 중에서는 모노머성 4급 암모늄 화합물이 더 최근에 개발된 폴리머성 4급 암모늄 화합물에 비해서 더욱 강력한 항미생물제이며, 더 저렴하다. 모든 4급 암모늄 화합물이 살생물 특성을 갖거나 서로 동일한 정도의 살생물 특성을 갖는 것은 아니지만, 살생물 특성과 화학적 구조 사이의 상관관계는 문헌에 보고된 광범한 연구의 대상이 되어 왔다. 본 기술분야에서 숙련된 전문가들이 살생물제로서 유용한 것과 살생물 목적으로 유용하지 않은 것을 구분하는데에는 어려움이 없다. 본 명세서에서 약어 "4급 살생물제 (quat. biocide)"는 살생물적으로 활성인 4급 암모늄 화합물을 의미하도록 사용된다.

예를를어, 벤잘코늄 클로라이드와 같은 4급 살생물제는 이들이 일반적 소독에 유용한 넓은 스펙트럼의 저가 살생물제라는 주된 잇점을 갖는다. 4급 살생물제에 의해서 나타나는 주된 단점중의 하나는 이들이 경수중에 존재하는 것과 같은 특정의 이온 및 단백질의 존재하에서 즉시 불활성화 된다는 점이다. 이러한 불활성화의 정확한 기전은 잘 이해되고 있지 않지만, 단백질의 음이온성 부위와 4급 살생물제의 양이온성 부위의 착화합/결합에 일반적으로 관련된 이론이 불활성화의 원인인 것으로 광범하게 인정되고 있다. 폴리머성 4급 화합물은 이들 단점을 동일한 정도까지 갖지 않는 것으로 알려져 있지만, 이들은 모노머성 4급 살생물제에 비해서 효과가 훨씬 더 낮으며 더 고가이다. 따라서, 단백질 및 그밖의 다른 불활성제의 존재하에서 4급 살생물제, 특히 간단한 모노머성 4급 살생물제의 효능을 증진시키는 시스템을 제공하는 것이 유익할 것이다.

4급 살생물제는 단백질에 의해서 매우 용이하게 불활성화되기 때문에, 이들은 일반적으로 단백질성 물질로 오염될 수 있는 표면, 예를들어, 식품제제 표면, 식품제제 기계류, 주방벽, 칸막이 및 마루 등, 또는 병원, 치과 또는 의료 진료시의 작업표면 및 그밖의 다른 표면에 적용하기 위한 소독제로서, 또는 의료 기구, 설비 또는 장치를 소독하기 위해서 사용하기에는 부적합하다. 더구나, 4급 살생물제는 단백질에 의해서 불활성화되기 때문에, 그리고 또한 이들이 효소를 즉시 불활성화시키기 때문에, 4급 살생물제는 효소 (단백질이다)와 함께 살생물적으로 사용될 수 없다.

살생물제의 살생물 효능의 편리한 척도는 그의 최소억제농도 ("MIC")이다. MIC는 규정된 시간, 예를들어 24시간 동안 배양물에서 세균 성장을 방지하는데 성공한 살생물제의 최소농도의 측정치이다.

살생물 효능의 또 다른 척도는 예정된 시간 후에 살생물제의 예정된 농도로 처리한 표준배양물에 대한 사멸율을 계산하는 것이다. 오스트레일리아에서, 살생물제는 TGA에 의해서 등급 B ("Hospital Dirty"), 등급 A ("Hospital Clean"), 등급 C ("household/commercial")로서 규정된 이들의 종류에 대한 시험에 따라 등급이 매겨진다. "TGA 소독제 시험 (The TGA Disinfectant Test)"의 사본은 첨부되어 있다. TGA 시험은 TGO 54로 규정되어 있다. 유사한 시험 및 분류는 다른 나라에서도 적용할 수 있다. MIC 시험의 상세한 사항은 문헌 (Bailey & Scott 'Diagnostic Microbiology', 8^th edition, 1990, page 177)에 제시되어 있다. 본 발명에서 언급된 MIC 시험은 24시간에 걸쳐서 수행된다.

TGA에 의해서 예를들어, 등급 A 소독제 ("hospital grade, clean")로 분류되도록 충분하게 효과적인 농도로 물에 용해된 4급 살생물제는 1% 정도의 낮은 단백질의 존재하에서 적어도 10배 덜 효과적이다. 다른 식으로 말하면, 단백질의 부재하에서 살생물제에 의해서 도달될 수 있었던 것과 같이 1%의 단백질의 존재하에서 세균의 완전한 사멸에 도달하기 위해서는 활성 살생물제의 농도에 있어서 적어도 10배의 증가가 필요할 것이다.

직쇄 및 폴리머성 4급 암모늄 화합물은 그들의 항미생물 특성에 의해서가 아니라 그들의 정적 조절특성에 의하여 세탁용 세제로서; 직물 유연제로서 또는 양이온성 계면활성제로서 사용하도록 제안되고 있다. 연화제로서 또는 계면활성제로서 사용된 4급 암모늄 화합물은 고유적으로 효과적인 살생물제가 아니거나, 이들의 살생물 활성은 제제중의 또는 물 중의 이온에 의해서 불활성화되고, 세탁용 세제에서 사용시에는 실질적으로 살생물 유효성이 전혀 없다.

액체 접시세척용 조성물은 오일/그리스 (grease) 제거에 도움이 되도록 양이온성 세제로서 4급 암모늄 화합물을 비이온성 세제와 배합하여 사용하였다. 일부의 조성물은 개방된 용기내에서 긴 저장기간 중에 세제 조성물에서 세균 성장이 발현하는 것을 방지하는데 도움을 주도록 낮은 농도 (예를들어, 0.001%)의 4급 암모늄염을 함유한다.

현재, 단백질로 오염된 표면의 소독에는 단계 1로 단백질성 오염물을 물리-기계적으로 제거하고, 단계 2로 전-세정된 표면을 소독하는 적어도 2-단계 방법이 필요하다.

때때로, 이 방법은 이어서 제 3 단계로서 잔류 소독제를 씻어내는 단계 3을 수행하여야 한다. 모노머성 4급 살생물제의 주된 잇점은 이들 중의 일부는 낮은 레벨로 적용하였을 때, 식품-접촉면으로부터도 씻어낼 필요가 없다는 점이다.

단백질의 존재하에서 효과적이고 경제적인 표면 소독에 대한 필요성은 여전히 남아있다. 특히, 단백질 오염된 표면을 효소-증진된 세정 및 소독하기 위한 일단계 방법 및 조성물을 제공하는 것이 바람직할 것이다.

본 발명에서 선행기술에 대한 언급은 어떤 것도 본 기술분야에서의 통상적인 일반적 지식의 상태를 나타내는 것으로서 해석되지는 않는다.

본 발명의 목적은 선행기술의 단점 중의 적어도 하나를 극복 또는 개선하거나, 유용한 대안을 제시하는 것이다.

본 발명의 바람직한 구체예 중의 적어도 일부의 목적은 단백질의 존재에도 불구하고 24시간 동안 효과적으로 유지되는 4급 살생물제 조성물을 제공하는 것이다.

이들 바람직한 구체예 중의 적어도 일부의 추가의 목적은 물로 용이하게 희석되어 단백질의 존재에도 불구하고 적어도 24시간 동안 살생물적으로 유효하게 유지되는 작업용액 (working solution)을 제공할 수 있으며, 본 발명의 바람직한 형태로는 또한 세정에 효과적인 액체 농축물 4급 살생물제 조성물을 제공하는 것이다.

바람직한 구체예의 추가의 목적은 단백질에 의한 불활성화로부터 4급 살생물제를 실질적으로 보호하는 방법 및 이 방법을 사용하는 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 매우 바람직한 특정의 구체예의 목적은 또한, 4급 살생물제를 포함하며 상당한 농도의 단백질의 존재하에서, 동일한 농도의 단백질의 존재하에 있는 물 중의 동일 농도의 동일한 4급 살생물제의 단순용액보다 더 낮은 MIC를 갖는 조성물을 제공하는 것이다. 단백질의 "상당한 농도"란 희석용액의 중량을 기준으로 2 wt%의 수용성 트립톤 분말 (OXOID 제품번호 L42)에 대해 등가인 단백질 함량을 의미한다. 등가의 단백질 함량은 물의 리터당, 16 g의 수용성 단백질, 즉 문헌 ("Nitrogen Compounds. Methods for analysis of musts and wines", pp 172-195; Ough, C.S.; Amerine, M.A. (1988), New York: Wiley-Interscience)에 기술된 분석에 의하여 물 리터당, 0.54 g 이상의 아미노 질소인 것으로 정의된다. 개선된 유효성은 2 wt% 미만의 트립톤 (또는 그의 단백질 등가물)의 존재하에서 예상될 수 있으며, 일부의 목적을 위해서는 2 wt% 이상의 레벨의 트립톤 (또는 그의 단백질 등가물)의 존재하에서도 만족스러운 유효성이 유지될 수 있는 것으로 이해된다.

첫번째 관점에 따르면 본 발명은 적어도 1 중량%의 4급 살생물제 및 단백질을 함유하며, 농축물 1 부에 대해서 20 부의 물로 희석하여 2% 이하의 트립톤 (또는 그의 단백질 등가물)의 존재하에서 24시간 후에, 동일 농도의 단백질의 존재하에서 물 중의 동일한 4급 살생물제의 동일한 농도의 단순용액의 MIC보다 낮은 MIC를 나타내는 희석용액을 생성시킬 수 있는 저장안정성 액체소독제 농축조성물을 제공한다.

본 발명의 바람직한 구체예에서는, 단백질성 오염물의 존재하에서 TGA 054 시험에 따라 시험하였을 때, 슈도모나스 에루기노자 (Pseudomonas aeruginosa)의 완전한 사멸에 도달하는데 필요한 희석용액 중의 소독제의 최소량은 동일한 소독제의 단순용액에 비해서 적어도 25% 까지 감소한다.

"저장안정성 (shelf stable)"은 조성물이 18-25℃의 밀봉용기 중에서 12개월 저장한 후에 그의 살생물 효능의 적어도 50%를 보유하는 것을 의미한다. 본 발명의 바람직한 구체예는 이들 조건하에서 98% 이상의 살생물 효능을 보유한다.

본 발명에 따르는 농축물은 작업용액으로 사용될 수 있는데, 여기에서는 농축물을 적어도 20:1로 (즉, 1 부의 농축물에 대해서 20 부의 물) 희석하여 작업용액을 제공한다. 본 발명의 일부의 구체예에서는, 농축물을 훨씬 더 큰 정도까지, 예를들어 100:1 또는 1000:1 또는 그 이상으로 희석할 수도 있다. 그러나, 본 명세서에서 한정적인 목적으로는 20:1의 희석액을 사용한다. 20:1의 작업용액은 물 중의 동일한 4급 살생물제의 동일한 농도의 상응하는 단순용액으로 구성된 대조물에 비해서 더 큰 살생물 효능을 갖는다. 또한, 농축물의 작업용액은 상당량 (예를들어, 희석용액의 2 wt%)의 단백질의 존재하에서 살생물 활성을 보유할 뿐 아니라, 놀랍게도 대조군보다 현저하게 더 큰 효능을 나타낸다. 놀랍게도, 4급 살생물제에 의해서 성취된 보호레벨은 저장-안정성 조성물이 효소의 형태로 단백질을 포함할 수 있을 정도이다. 본 발명의 바람직한 구체예에서, 농축물은 추가로 하나 또는 그 이상의 효소를 함유하는데, 그럼에도 불구하고 희석하여 사용시에 농축물의 저장안정성 및 효소활성을 보유할 뿐 아니라 사용시에 개선된 살생물 효능을 갖는다.

본 명세서 전반에 걸쳐서, MIC는 24시간 후에 측정된 것이다. 바람직하게는, 본 발명에 따르는 조성물의 MIC는 상응하는 대조용 조성물의 MIC의 75% 미만, 더욱 바람직하게는 50% 미만이다.

두번째 관점에 따르면, 본 발명은 단백질의 존재하에서 소독을 위해 희석한 후에 사용하기에 적합하며 적어도 1 중량%의 4급 살생물제, 단백질, 및 "효소 안정화제", "효소 안정화 시스템", "미셀 형성 변형제 및 억제제" 및 이들의 배합물로 구성된 그룹으로부터 선택된 활성보호제 (activity protector)를 포함하는 제 1 항에 따르는 저장안정성 액체 소독제 농축물을 제공한다.

본 발명에 따르는 조성물은 4급 살생물제의 살생물 효능의 손실을 방지하는 "활성보호제"를 포함한다. 바람직한 구체예에서, "활성보호제"는 붕소 화합물, 더욱 바람직하게는 디-(프로필렌 글리콜) 메틸 에테르 ("DPM") 또는 그의 동족체와 함께 붕소 화합물을 함유한다. 붕소 화합물은 효소를 비가역적으로 변성되는 것으로부터 보호하기 위해서 이미 사용되어 왔지만, 단백질의 존재하에서 4급 살생물 활성을 보호하기 위해서는 이전에 사용되지 않았었다. DPM은 미셀 형성을 변형시키는 것으로 알려져 있다. "활성보호제"는 (1) 효소 안정화 화합물 및 시스템을 포함하며 액체 수용액내에서 효소를 안정화시키는데 효과적인 것으로 공지되어 있는 것으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 다른 조성물, (2) 선택된 "미셀 억제제", 및 (1) 및 (2)의 혼합물을 동등하게 이용할 수 있는 것으로 믿어진다. 본 발명의 매우 바람직한 구체예에서, "활성보호제"는 "효소 안정화제"이며, 더욱 특히는 적합한 농도의 붕소 음이온이다. 바람직하게는, 이들은 폴리올내에서 용매화되며, 효소 안정화 상승제 또는 보조제와 배합될 수 있다. 바람직한 "미셀 억제제"는 미셀 형성을 억제할 뿐 아니라 변형시키는 것으로 공지된 종을 포함하며, C1-C6 알칸올, C1-C6 디올, C2-C24 알킬렌 글리콜 에테르, 알킬렌 글리콜 알킬 에테르 및 이들의 혼합물로부터 선택된다. 매우 바람직한 "미셀 억제제"는 디-(프로필렌 글리콜) 메틸 에테르 ("DPM")이다.

효소 안정화제에 대한 DPM의 첨가는 효소가 존재하는 경우에 효소의 활성에 대해 유해한 영향이 없이 4급 살생물제에 대해 부여된 활성보호를 상승적으로 증진시키는 것으로 밝혀졌다.

4급 살생물제는 아릴 4급 화합물, 바람직하게는 벤잘코늄 할라이드인 것이 매우 바람직하다.

효소는 저장중에, 다른 효소의 존재하에서, 및/또는 예를들어 음이온성 계면활성제, 4급 암모늄 화합물 및 세척력 "빌더" (detergency "builder")와 같은 길항적 이온의 존재하에서 변성될 수 있는 것으로 잘 알려져 있다. 다수의 효소 안정화 시스템이 개발되었으며, 효소제제 기술분야에서 잘 알려져 있다. "효소 안정화 시스템"의 예는 과거에 저장중에 및 다양한 생성물에서 단백분해효소 및 그밖의 다른 효소를 보호하기 위해서 단독으로 또는 선택된 다른 보조제 및/또는 상승제 (예를들어, 다작용성 아미노 화합물, 산화방지제 등)와 함께 사용되어 온 붕소 화합물 (예를들어, 붕산)이다. 붕소 및 칼슘과 같은 효소 안정화 시스템은 효소 분자의 활성부위를 그의 활성 공간배열내에 유지시키기 위해서 그 활성부위를 효과적으로 교차결합시키거나 고정시키는 분자내 결합을 형성시키는 것으로 이론화되었다. 효소 안정화제는 지금까지 4급 살생물제의 살생물 활성을 개선시키는데 사용되지는 않았었다. 본 발명은 적어도 일부의 효소 안정화 시스템이 단백질의 존재하에서도 고농도의 4급 살생물제의 살생물 활성을 보호하는데 효과적이며, 희석시에도 여전히 살생물 활성을 나타낸다는 놀라운 발견을 기초로 한다.

본 발명에 따르면, 4급 살생물제에 대한 "활성보호제", 예를들어 붕소의 비율은 바람직하게는 소정의 레벨의 단백질의 존재하에서 4급 살생물제의 MIC를 최소화시키도록 선택된다. 본 발명은 하나 또는 그 이상의 효소와 4급 살생물제를 배합시키는 조성물에서 사용될 수 있는 것으로 이해된다. 4급 살생물제 이외에 효소가 또한 존재하고, 4급 살생물제의 살생물 활성 뿐 아니라 효소의 효소적 활성을 보호하는 것이 요구되는 경우에, 필요한 "활성보호제"의 양은 효소를 보호하기 위해서 필요한 양보다는 더 크도록 하는 것이 필요하며, 효소를 안정화시키고 4급 살생물제의 살생물 활성을 보호하는데 충분하도록 하는 것이 필요하다. 또한, 조성물이 효소에 추가한 외부 단백질성 부하물과 접촉할 것이 예상되는 경우에는, "활성보호제" 농도는 더 크도록 하는 것이 필요하다.

본 발명자들은 놀랍게도 붕소가 단백질의 존재하에서 살생물제의 MIC를 증가시키는 않는 방식으로 및 그러한 정도까지 단백질에 의한 불활성화로부터 4급 살생물제를 보호한다는 것을 발견하였다. 본 발명의 바람직한 구체예에서, MIC는 작업용액의 중량을 기준으로하여 2 wt% 이하의 단백질이 존재함에도 불구하고 현저하게 감소하는데, 예를들면 반감되는 것 이상으로 감소한다. 이로 인해서, 선행기술이 훨씬 덜 효과적이거나 전혀 효과가 없는 환경에서 소독제 또는 항균제로서 효과적으로 유지되는 넓은 범위의 신규하며 유용한 조성물의 제제가 허용된다. 본 발명은 또한 저장-안정성의 살생물적으로 유효한 액체조성물이 4급 살생물제의 더 낮은 농도에서 및 훨씬 더 저렴한 비용으로 제조될 수 있도록 한다.

이론에 얽매임이 없이, 본 발명자들은 폴리머성 보레이트 이온이 양이온성 4급 살생물제와 회합함으로써 단백질과 결합하는 것으로부터 4급 살생물제를 보호하는 것으로 생각하였다. 제제가 희석되는 경우에, 폴리머성 이온은 불안정하게 되고 소독을 위한 4급 화합물을 방출한다. 또 다른 식으로, 4급 살생물제의 살생물 활성은 세포막의 단백질을 변성시키는 것과 현저하게 관련이 있을 수도 있으며, 붕소는 비-생단백질의 하전된 그룹과 착화합하여 변성 비-생단백질 상에서 4급 화합물이 낭비되는 것을 방지할 수도 있다. 어떤 경우든지, 효소는 4급 살생물제와 구조적으로 전혀 상이하며 4급 살생물제가 세균을 사멸시키는 완전한 기전도 또한 불명확하기 때문에, 어떤 효소 안정화제가 4급 살생물제 (효소 길항제)의 살생물 활성을 유지시키는데 효과적일지에 대해서는 이전에 예상할 수 없었다. 4급 살생물제의 활성이 유지되는 기전은 효소가 안정화되는 기전과는 상이할 수 있다.

"활성보호제"는 이하에서 더 상세하게 설명한다.

세번째 관점에 따르면, 본 발명은 추가로 비이온성 계면활성제를 함유하는 첫번째 관점에 따르는 조성물을 제공한다.

바람직하게는, 비이온성 계면활성제는 에톡실레이트 또는 프로폭실레이트 및 이들의 블럭 코폴리머로 구성된 그룹으로부터 선택된 계면활성제 중의 하나 또는 배합물이다.

네번째 관점에 따르면, 본 발명은 추가로 하나 또는 그 이상의 안정화된 단백질을 포함하며, 작업희석액에서의 살생물제의 MIC가 희석용액의 중량 기준으로 단백질 등가물을 2 중량% 까지 추가로 배합시켜도 감소하지 않는 첫번째 내지 세번째 관점 중의 어느 하나에 따르는 조성물을 제공한다.

본 발명에 따르는 조성물은 예를들어, 접시세척용 세제, 가정용 세정제, 샴푸, 소독용 세탁조성물 등과 같은 소비자 제품에서 뿐 아니라 소독, 무균세척제제, 세정용 의료/치과 기구 및 장치, 직물 및 스폰지 내로의 주입 등을 위한 표면 분무 또는 처리로 사용될 수 있으나, 이들로 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 매우 바람직한 구체예는 효소를 함유하고, 농축되거나 희석된 형태로 저장시에 안정하며, 희석시에도 단백질의 존재하에서 살생물성을 유지하는 경제적으로 효과적인 세정 및 소독 조성물을 제공한다.

다섯번째 관점에 따르면, 본 발명은 단백질의 존재하에서 살생물적으로 유효한 소독제의 작업용액을 제공하는데, 이 용액은 적어도 0.5 중량%의 4급 살생물제 및 단백질을 함유하며, 농축물 1부에 대해서 20부의 물로 희석하여 희석용액을 생성시킬 수 있으며, 이 희석용액은 24시간 후에 2% 이하의 트립톤 (또는 그의 단백질 등가물)의 존재하에서 동일한 농도의 단백질의 존재하에서 물 중의 동일한 4급 살생물제의 동일한 농도의 단순용액의 MIC보다 낮은 MIC를 나타낸다.

여섯번째 관점에 따르면, 본 발명은 적어도 0.5 중량%의 4급 살생물제, 단백질, 및 "효소 안정화제", "효소 안정화 시스템", "미셀 형성 변형제 및 억제제" 및 이들의 배합물로 구성된 그룹으로부터 선택된 활성보호제를 함유하며, 단백질의 존재하에서 살생물적으로 효과적인 소독제의 작업용액을 제공한다.

일곱번째 관점에 따르면, 본 발명은 효소 안정화제 및 미셀 불안정화제 또는 이들의 배합물로 구성된 그룹으로부터 선택된 "활성보호제"와 4급 살생물제를 배합시키는 단계를 포함하여 4급 살생물제를 불활성화로부터 보호하는 방법을 제공한다.

그밖의 다른 관점에 따르면, 본 발명은 농축용액 및 그의 작업용액 둘다에서 단백질의 존재하에 4급 살생물제의 효능을 보호하거나 개선시키는 방법, 및 단백질 오염된 표면을 세정하는 방법을 제공한다.

발명을 수행하는 최선의 양식

본 발명은 단지 다양한 구체예를 참고로하여 예를들어 더욱 구체적으로 기술된다.

실시예 1은 저장시에 안정한 농축물이며 사용시에는 물로 200:1 내지 1000:1 (농축물 1 부/wt에 대한 물의 부/wt)로 희석하는 조성물의 제제를 제공한다. 희석 (200:1) 용액은 표면세정제로서 유효하며, 표면상에 소독제를 잔류시켜 적용한 후 적어도 24시간 동안 세균성장을 방지한다. 이것은 표면을 예를들어, 희석용액의 중량을 기준으로하여 2 wt% 트립톤 또는 2 wt% 효모로 전처리한 것처럼 효과적이다.

실시예 1

g/ℓ

벤질 디메틸 암모늄클로라이드, CAS 68424-85-1 150

나트륨 테트라보레이트 데카하이드레이트, CAS 12007-42-0 30

글리세린, CAS 56-81-5 25

테릭 (Terric) GN9 (주 1) 200

디프로필렌 글리콜 메틸 에테르, CAS 34590-94-8 100

나머지는 물 1000 까지

주 1: 테릭 (Terric) GN9는 오리카 (ORICA)로부터 입수할 수 있는 에톡실화 노닐페놀이며, 비이온성 계면활성제이다.

제조

나트륨 테트라보레이트를 80℃에서 글리세롤에 용해/현탁시킨다. 4급 살생물제 및 테릭 (Terric) GN9 (비이온성 세제)를 DPM과 배합시키고 pH를 예를들어, 아세트산을 사용하여 pH 7.2-7.3으로 조정한다. 그후, 보레이트/글리세린 용액을 4급 살생물제와 배합시킨다.

비교 결과

실시예 1의 제제, 및 실시예 1의 성분들의 서브셋트 (subset)를 포함하는 다양한 조성물을 제조하여 20:1로 희석하고, 표 1의 파트 A에 기술한 바와 같이 MIC 시험에 적용하였다. 시험은 이하의 표 1에서 파트 B, C 및 D에 기술된 바와 같이 다양한 단백질을 추가로 함유하는 조성물을 사용하여 반복하였으며, MIC는 QUATs에 대해 가장 내성인 균주중의 하나인 슈도모나스 에루기노자 (Pseudomonas aeruginosa) ATCC No. 15442를 사용하여 문헌 (Bailey and Scott Diagnostic Microbiology, 8^th edition, 1990, p. 177)에 기술된 시험방법에 의해서 측정하였다. 표 1에서, "quat"는 벤질 디메틸 암모늄클로라이드 4급 살생물제에 대한 약어이다.

조성물		MIC, ppm(붕소 비함유)	MIC, ppm(붕소 함유)
A	quat. quat + DPM quat + GN9 quat + DPM + GN9	20*162516	12 8 8<8
B	quat + 2 wt% 트립톤 quat + DPM + 2 wt% 트립톤 quat + GN9 + 2 wt% 트립톤 quat + DPM + GN9 + 2 wt% 트립톤	180*160162128	78665656
C	quat + 2 wt% 효모 quat + DPM + 2 wt% 효모 quat + GN9 + 2 wt% 효모 quat + DPM + GN9 + 2 wt% 효모	240*200200200	108 74 86 52
C	quat + 서브틸리신 (0.1% 프로테아제 효소) quat + DPM + 효소 quat + GN9 + 효소 quat + DPM + GN9 + 효소	50*252525	251212 8
* 대조군을 나타냄 (선행기술에 따르는 quat, A 단독, 단백질과 함께 B, C, D)

표 1, 파트 A는 붕소의 부재하 및 붕소의 존재하 (즉, 본 발명에 따름)에, 단백질의 부재하에서 다양한 4급 암모늄 살생물 조성물의 MIC를 비교한 것이다. 각각의 경우에 비교는 대조군 - "quat" (붕소 비함유)에 의해서 이루어질 수 있다.

표 1, 파트 A는 테릭 (Terric) GN9가 예상된 바와 같이 4급 살생물제를 불활성화시키는 것을 나타낸다. 예기치 않게, DPM은 GN9의 존재하에서 조차도 quat의 활성을 증진시키는 반면, 각각의 경우에 본 발명에 따르는 붕소와의 배합물은 붕소가 결여된 배합물 및 대조군에 비해서 살생물 활성의 현저한 개선을 나타낸다.

표 1, 파트 B는 단백질 (2 wt% 트립톤)의 존재하 및 붕소의 부재하에서 4급 살생물제가 실질적으로 불활성화되는 것을 나타낸다. 불활성화도는 비이온성 계면활성제 GN9의 존재하에서 조차도 DPM에 의해서 감소된다. 그러나, 붕소 음이온의 첨가는 각각의 경우에 단백질의 존재하에서 MIC를 적어도 반감시킨다. 본 발명에 따르는 붕소를 함유하는 조성물은 트립톤을 함유하지만 다른 첨가제는 함유하지 않는 대조용 4급 살생물제보다 훨씬 더 낮은 MIC를 갖는다.

표 1, 파트 C는 베이킹 효모 (baking yeast) 내의 천연 단백질의 혼합물에 대한 상응하는 결과를 나타내며, 표 1, 파트 D는 제 3 단백질 - 단백질 분해효소 서브틸리신에 대한 결과를 나타낸다. DPM을 붕소와 배합시키는 각각의 경우 (즉, 붕소와 DPM의 배합물은 붕소의 활성보호를 상승적으로 개선시킨다)에, 붕소 또는 DPM이 결여된 조성물에 비해서 4급 살생물제의 효능에 있어서 추가의 개선 (MIC에 있어서의 감소)이 있다는 것은 주목할 만하다. 더구나, GN9의 불활성화 효과에도 불구하고 이러한 상승작용은 일어난다.

본 발명의 바람직한 구체예는 실시예 2에 나타내었다. 실시예 2의 조성물은 200 부/wt 물 중에서 1 부/wt 농축물의 희석을 목적으로 하는 농축물이다. 조성물은 수술기구용 전-함침제 (pre-soak)로서의 적용을 목적으로 한다.

실시예 2

성 분	% w/w
A.
노닐페놀 에톡실레이트 (테릭 (Terric) GN9)	3
디(프로필렌 글리콜) 메틸 에테르	5
향료	.1
물	15
B.
나트륨 테트라보레이트 데카하이드레이트	6
글리세롤	4
물	5
C.
아세트산, pH 7.2-7.3으로
D.
에틸렌 글리콜	5
10% 서브틸리신 (알칼라제 (Alcalase) 2.5 DL)	3
E.
벤잘코늄 클로라이드 80%	30
물	100 까지

붕사와 열수 및 글리세린을 전혼합시키고, A에 가하고, pH를 조정하고, 혼합물을 30℃로 냉각시킨 다음, 전혼합된 성분 D를 서서히 가한다. 그후, 벤잘코늄 클로라이드와 전혼합된 물을 가한다.

4급 살생물제

본 발명은 매우 바람직한 4급 살생물제로서 알킬 벤질디메틸 암모늄클로라이드 (또한, 벤잘코늄 클로라이드로도 알려져 있음)를 참고로 하여 예시되었다. 그러나, 본 기술분야에서 숙련된 전문가는 다른 모노머성 4급 암모늄 항미생물성 화합물이 사용될 수도 있다는 것을 알 수 있다.

4급 암모늄 항미생물성 화합물은 하기 화학식 1을 갖는 그룹으로부터 선택되는 것이 바람직하다:

상기 식에서,

R', R", R"' 및 R""는 동일하거나 상이할 수 있으며 치환되거나 비치환되고, 분지쇄 또는 직쇄이며 사이클릭 또는 비사이클릭인 알킬 래디칼이고,

X는 음이온이며, 바람직하게는 할로겐, 더욱 바람직하게는 염소 또는 브롬이다.

매우 바람직한 항미생물성 화합물은 모노-장쇄, 트리-단쇄 테트라알킬 암모늄 화합물, 디-장쇄, 디-단쇄 테트라알킬 암모늄 화합물 및 이들의 혼합물이다. 여기에서, "장"쇄는 대략 C6-C30 알킬을 의미하며, "단"쇄는 C1-C5 알킬, 바람직하게는 C1-C3, 또는 벤질, 또는 C1-C3 알킬벤질을 의미한다. 그의 예로는 세틸트리메틸 암모늄브로마이드 (CTAB)와 같은 모노알킬트리메틸 암모늄염, 모노알킬디메틸벤질 화합물 또는 디알킬벤질 화합물이 포함된다. 클로르헥사딘 글루코네이트와 같은 4급 살생물제가 사용될 수도 있다.

본 발명에서 사용하기에 가장 매우 바람직한 화합물은 치환된 벤질일 수 있는 적어도 하나의 벤질 래디칼을 갖는다. 그의 예로는 C8-C22 디메틸 벤질 암모늄클로라이드, C8-C22 디메틸에틸 벤질 암모늄클로라이드 및 디-C6-C20 알킬디메틸 암모늄클로라이드가 포함된다. 4급 암모늄 화합물은 넓은 스펙트럼 (그람 양성 및 그람 음성)의 항균특성을 위해서 혼입되며, 단백질 또는 그밖의 다른 불활성화제의 부재하에서 그 목적에 효과적일 수 있는 양 이상으로 존재하여야 한다. 놀랍게도, 본 발명에 따르는 조성물은 농축된 형태 및 희석된 형태에서 모두 탁월한 저장안정성을 갖는다.

활성보호제

본 발명에 따르면, 4급 살생물제의 살생물 활성은 사용시에 문헌 ("Handbook of Enzyme Inhibitors", Zollner H., 2^nd ed. VCH 1993)에 기술된 것과 같은 가역적 및 비가역적 효소 억제제 둘다를 포함하는 공지된 "효소 안정화 시스템"의 그룹으로부터 선택된 조성물 (이온, 화합물, 또는 이들의 배합물)인 "활성보호제"에 의해서 보호된다. 바람직한 활성보호제는 붕소 화합물, 또는 더욱 바람직하게는 붕소 화합물과 폴리올의 혼합물이다. 붕소 화합물은 예를들어, 붕산, 산화붕소, 붕사, 또는 나트륨 오르토-, 메타- 또는 피로-보레이트일 수 있다. 몇가지 제제에서는, 표백효과를 얻기 위해서 나트륨 퍼보레이트와 같은 퍼보레이트를 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 가장 바람직한 붕소 공급원은 나트륨 테트라보레이트이다. 붕소 화합물의 보호효과는 포르메이트 또는 칼슘 이온이 존재함으로써, 또는 디- 또는 트리-에탄올아민과 같은 다작용성 아미노 화합물에 의해서 증진될 수 있다. 그밖의 다른 활성보호 증진제, 또는 보조제에는 포스페이트, 시트레이트, 설페이트와 같은 음이온 및 EDTA와 같이 물 연화제로서 사용되는 것과 같은 격리제 (sequestering agent)가 포함된다.

폴리올

효소를 안정화시키기 위해 붕소를 사용하는 시스템에서, 산화방지제 및/또는 다작용성 아미노 화합물의 첨가는 상승적 효소 안정화 효과를 발생시키는 것으로 보고되었으며, 본 시스템에서는 이러한 효소 안정화 상승제의 사용이 포함된다. 본 명세서에서 사용된 용어 "효소 안정화제 시스템"은 안정화제와 증진제, 보조제 및/또는 상승제 등과의 배합물을 나타낸다.

폴리올은 바람직하게는 2-6개의 하이드록실 그룹을 함유하며 단지 C, H 및 O 원자 만을 함유하는 것이다. 대표적인 예는 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 1,2-프로판디올, 부틸렌 글리콜, 및 가장 바람직하게는 글리세롤이다. 만니톨, 소르비톨, 에리트리톨, 글루코즈, 프럭토즈, 락토즈 등과 같은 그밖의 다른 폴리올이 유용할 수도 있다. 폴리올은 붕소를 용매화시키고 조성물 내에서 그의 이온강도를 증가시키도록 선택되며, 일반적으로 붕소 화합물의 양과 적어도 동등한 양으로 존재한다.

미셀 억제제

수혼화성 용매는 바람직하게는 조성물이 그의 목적하는 용도에 따라서 접촉하게 되는 성분 및/또는 물질을 가용화시키는 것을 돕고, 미셀 형성을 피하거나 억제하거나 변형시키기 위해서 포함된다. 이것은 몇몇 경우에서 당연히 살생물 활성을 명백하게 증가시킬 뿐 아니라 "활성보호제"로서 상승적으로 작용한다.

바람직하게는, 수혼화성 용매는 C1-C6 알칸올, C1-C6 디올, C3-C24 알킬렌 글리콜 에테르, 알킬렌 글리콜 알킬 에테르 및 이들의 혼합물로부터 선택된다. 매우 바람직한 용매는 디(프로필렌 글리콜) 메틸 에테르이다. 그밖의 다른 공지된 미셀 길항제에는 보레이트, 락테이트, 시트레이트, 타르트레이트가 포함된다.

효소

붕소 안정화제는 단백질의 존재하에서 계면활성제의 불활성화를 방지하는데 필요한 양으로 첨가된다. 놀랍게도, 본 발명에 따르는 조성물에는 하나 또는 그 이상의 효소를 포함시킬 수 있으며, 효소의 불활성화로부터 4급 살생물제를 보호하고 추가의 단백질 (즉, 효소 이외의 것)에 의한 불활성화로부터 4급 살생물제를 보호하기에 모두 충분한 붕소를 조성물에 제공할 수 있고, 또한 효소가 4급 화합물에 의해 변성되는데 대항하여 효소를 안정화시킬 수 있는 것으로 밝혀졌다. 4급 화합물의 컴플렉스 (예를들어, 단백질과의)는 효소를 가역적으로 보호하는데 참여할지도 모른다. 효소는 예를들어, 단백질 분해효소일 수 있거나, 카보하이드라제, 에스테라제, 하이드라제, 아밀라제, 프로테아제, 카탈라제, 리파제, 아밀라제, 셀룰라제, 퍼옥시다제, 인버타제 등 및 이들의 혼합물로부터 선택될 수도 있다.

계면활성제

본 발명의 바람직한 구체예에는 계면활성제가 존재한다. 계면활성제는 비이온성 계면활성제이며, 이것은 알콕실화 알콜, 알콕실화 페놀 에테르로부터 선택되는 것이 매우 바람직하다. 트리알킬 아민 옥사이드와 같은 그밖의 다른 반극성 (semipolar) 비이온성 화합물이 유용할 수도 있다. 알콕실화 페놀 에테르의 예로는 다양한 알콕실화도를 갖는 옥틸 또는 노닐 페놀 에테르가 포함된다. 페놀의 몰당, 6-10 몰의 에틸렌 옥사이드가 바람직하다. 알킬 그룹은 C6-C16으로 변화시킬 수 있다. 더욱 매우 바람직한 것은 분자당, 6-25 몰의 에틸렌 옥사이드 및/또는 프로필렌 옥사이드를 갖는 저 알콕실화 비이온성 화합물이다.

알콕실화 알콜에는 알콜의 몰당, 각각 약 2-10 몰의 에틸렌 옥사이드 또는 1-10 및 1-10 몰의 에틸렌 및 프로필렌 옥사이드를 갖는 에톡실화 및 프로폭실화 C6-C16 알콜이 포함된다.

아민 옥사이드가 사용되는 경우에, 이들은 모노-장쇄, 디-단쇄 트리알킬 아민 옥사이드일 수 있으며, 에톡실화되거나 프로폭실화될 수 있다. 그의 예는 라우릴 아민 옥사이드, 또는 코코아미도프로필디메틸 아민 옥사이드이다.

계면활성제의 양은 오염물 제거를 위해 충분한 세척력이 제공되도록 선택되며, 일반적으로는 농축물의 0.05% 내지 10%, 더욱 바람직하게는 약 0.5% 내지 6%, 가장 바람직하게는 2%-4%의 범위일 수 있다.

특정한 모노머성 4급 살생물제는 낮은 레벨로 적용하는 경우에 식품-접촉면으로부터도 세정할 필요가 없다는 사실은 단백질성 오염물에 의해서 오염된 식품 접촉면 상에 유용한 일단계 세정제/소독제를 제제화할 기회를 제공한다.

본 발명은 여기에서 "활성보호제"로서 붕소를 참고로 하여 기술하였다. 모든 효소 안정화 시스템이 4급 살생물제 활성보호제로서 효과적인 것은 아닐 수 있지만, 효과적인지 아닌지는 본 명세서의 지침을 기초로 한 통상의 선별방법에 의해서 결정될 수 있다. 본 발명은 본 명세서의 지침을 기초로 하여 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 명백한 다양한 형태로 생성물 제제를 구체화할 수 있다.

TGA 소독제 시험

본 시험방법은 문헌 ("Australian Journal of Hospital Pharmacy", Vol. 8, No. 4; 1978 (152-155))에 반포된 원래의 논문으로부터 저자 및 발행자의 동의를 받아 재현하였다.

1. 원리

병원 등급의 소독제 또는 위생제 (sanitiser)에 적용되는 방법은 필수적으로, 소독제 성능을 시험하기 위해 켈시 (Kelsey)와 마우러 (Maurer) (1)에 의해 제시된 것이다. 이것은 소독제 및 방부제에 대한 규제최소표준 (regulatory minimum standard)에 부착시키기에 적합한 형태로 설정된다. 시험의 더 넓은 적용을 위해서는 보완주석 (supplementary note) A를 참고로 한다.

소독제는 제품 라벨 상의 제조자에 의해서 제안된 희석액으로 시험한다. 시험은 희석된 소독제를 세균 접종물로 공격하고, 소정의 시간이 경과한 후에 샘플을 수거하여 샘플을 적합한 회수배지 (recovery medium)에서 배양하는 것으로 이루어진다. 이 샘플링 후에, 혼합물을 다시 2차 접종물로 공격하고, 2차 간격이 경과한 후에 다시 배양을 위해 샘플링한다. 샘플은 샘플링된 두개의 배양물에서 나타나는 성장의 정도에 따라 합격 또는 실패로 한다. 시험은 시험중인 제품의 라벨상에 제시된 사용-환경에 따라서 유기 오염물로서 살균 효모를 첨가하거나 첨가하지 않고 (각각, 옵션 B 및 A), 또는 둘다의 조건으로 수행할 수 있다.

TGA 소독제 시험을 사용한 소독제 및 방부제 부류에 대한 시험 파라메터의 선택

제품의 부류	시험에 사용된 유기체	원심분리된 유기체의 재현탁을 위한 시험 옵션	공격의 수	접종물 밀도
소독제 -병원등급:위생제	슈도모나스 에루기노자(Ps. aeruginosa)프로테우스 불가리스(Pr. vulgaris)에스케리키아 콜라이(E. coli)스타필로코커스 아우레우스(S. aureus)	A("세정" 조건)	2	2×10⁸-2×10⁹
소독제 -병원등급:위생제		B("오염" 조건)	2	2×10⁸-2×10⁹
소독제 -가정용 또는 시판 등급	에스케리키아 콜라이(E. coli)스타필로코커스 아우레우스(S. aureus)	C	1	2×10⁸-2×10⁹
방부제(완전피부 만을 위한 것은 제외됨)	슈도모나스 에루기노자(Ps. aeruginosa)프로테우스 불가리스(Pr. vulgaris)에스케리키아 콜라이(E. coli)스타필로코커스 아우레우스(S. aureus)	D	1	1×10⁶-2×10⁷

가정용 등급의 소독제의 경우에는, 기재된 첫번째 두개의 유기체 및 두번째 공격은 생략되는 반면에, 모조 오염물의 종류로 옵션 C (영양육즙)가 선택된다. 방부제의 경우에도 두번째 공격은 생략되는 반면에 옵션 D (혈청)가 오염물의 종류로 선택된다.

2. 배지

모든 배지는 반드시 마개를 한 유리용기 내에 담아야 한다. 배지가 저장되는 경우에, 용기는 반드시 단단히 밀봉시키거나, 냉동시켜야 한다.

2.1. 살균 경수

2.1.1. 0.304 g의 무수 염화칼슘 및 0.065 g의 무수 염화마그네슘을 유리-증류수에 용해시키고 1 리터로 만든다.

2.1.2. 유리용기내에 분배시키고 121°±1℃에서 15분 동안 고압살균시킴으로써 살균한다.

2.2. 효모 현탁액

2.2.1. 200 g의 습식 압착된 빵효모를 평량한다. 교반을 위한 중질 유리봉을 사용하여 살균 경수를 점진적으로 첨가하여 크림상으로 만든다. 크림화된 부분을 플라스크 내로 기울여 따르고, 잔류하는 괴상 잔류물에 추가의 물을 가하고, 잔류물이 남지 않고 500 ㎖의 물이 사용될 때 까지 크림화 및 경가를 반복하였다.

2.2.2. 플라스크의 내용물을 격렬하게 진탕하고, 100-메쉬 체를 통해서 걸러내어 잔류하는 괴상물질을 분쇄시킨다.

2.2.3. 500 ㎖의 살균 경수를 가하고, 격렬하게 진탕하고, 1 N 수산화나트륨을 사용하여 pH를 6.9-7.1로 조정한다.

2.2.4. 50 ㎖, 100 ㎖ 또는 200 ㎖의 효모 용액을 스크류-마개를 한 병으로 옮긴다.

2.2.5. 121°±1℃에서 15분 동안 고압살균시키고, 고압살균기를 압력을 해제시키지 않고 냉각시킨다. 저장은 냉동이 아닌 냉각상태에서 한다.

2.2.6. 두개의 페트리 접시를 항량으로 건조시킨다. 각각의 접시에 25 ㎖의 살균된 효모 현탁액을 피펫팅하고, 100℃에서 항량으로 건조시킨다. 현탁액의 평균 고체함량을 계산한다.

2.2.7. 사용하기 전에, 25 ㎖의 살균된 효모 현탁액을 비이커내에 피펫팅한다. 유리전극을 사용하여 pH를 결정하고, pH를 6.9 내지 7.1의 범위내로 조정하는데 필요한 1 N 수산화나트륨 용액의 용적을 결정한다.

2.2.8. 사용하기 직전에 살균된 효모의 각각의 병에 건조 효모의 농도를 5.0%로 조정하고 pH를 6.9-7.1의 범위내로 조정하도록 계산된 살균 경수의 용적 및 1 N 수산화나트륨의 용적을 가한다. 제조한 지 3개월 후의 제조된 효모는 버린다.

2.3. 시험 유기체의 성장을 위한 배지

2.3.1. 증류수내의 10% w/v 덱스트로즈 용액을 제조하고, 121°±1℃에서 15분 동안 고압살균시킴으로써 살균한다. 실온으로 냉각시킨다.

2.3.2. 저자의 방법 (2)에 따라 또는 동일한 조성의 시판제품으로부터 (주석 B) 라이트 앤드 먼디 배지 (Wright and Mundy medium)를 제조하여 121°±1℃에서 15분 동안 고압살균시킴으로써 살균한다. 실온으로 냉각시킨다.

2.3.3. 2.3.2에서 제조된 각각 1 리터의 라이트 앤드 먼디 배지에 2.3.1.에서 제조된 10 ㎖의 살균 덱스트로즈 용액을 가한다.

2.3.4. 원하는 바에 따라 10 ㎖ 또는 15 ㎖의 양을 무균적으로 분배시킨다.

2.3.5. 이 배지는 라이트 앤드 먼디 덱스트로즈 배지 (Wright and Mundy dextrose medium)라고 부른다.

2.4. 회수배지

2.4.1. 이하에 보는 바와 같이, 또는 동일한 조성의 시판제품으로부터 (주석 B) 영양육즙을 제조한다:

970 ㎖의 물에 이하의 성분을 가하고 가열하여 용해시킨다.

우육 추출물 (beef extract) 분말 10 g

펩톤 5 g

염화나트륨 5 g

1 N 수산화나트륨을 사용하여 pH를 8.0-8.4로 조정한다. 10분 동안 비등시키고 여과한다. 냉각시킨다.

2.4.2. 2.4.1.에서 제조된 각 1 리터의 영양육즙 용액에 30 g의 폴리소르베이트 80 (각주 B)을 가한다.

2.4.3. 1 N 수산화나트륨을 사용하여 pH를 7.2-7.4로 조정한다.

2.4.4. 121°±1℃에서 15분 동안 고압살균시키고, 즉시 잘 진탕하여 폴리소르베이트 80을 분산시킨다.

2.4.5. 살균 마개를 한 유리튜브에 10 ㎖의 양으로 무균적으로 분배시킨다.

3. 시험 접종물

3.1. 시험 유기체

지정된 경우를 제외하고는 다음의 4종의 유기체를 사용한다:

슈도모나스 에루기노자 (Pseudomonas aeruginosa) NCTC 6749

프로테우스 불가리스 (Proteus vulgaris) NCTC 4635

에스케리키아 콜라이 (Escherichia coli) NCTC 8196

스타필로코커스 아우레우스 (Staphylococcus aureus) NCTC 4163

3.2. 접종물의 제조

3.2.1. 동결건조된 배양물의 앰플의 내용물을 라이트 앤드 먼디 덱스트로즈 배지내에서 37°±1℃에서 밤새 배양한다.

3.2.2. 맥카트니 (McCartney) 병내의 영양한천 사면상에 배양된 배양물을 접종한다. 4°±1℃에서 3개월 까지의 기간 동안 저장한다.

3.2.3. 시험을 수행하기 전에 적합한 기간에 한천 사면으로부터 10 ㎖ 또는 15 ㎖ 양의 라이트 앤드 먼디 덱스트로즈 배지내로 계대배양한다. 37°±1℃에서 24±2 시간 동안 배양한다.

3.2.4. 4 ㎜ 직경의 접종루프를 사용하여 3.2.3.에서의 배지로부터 신선한 배지로 계대배양한다. 37°±1℃에서 24±2 시간 동안 배양한다.

3.2.5. 단계 3.2.4.를 매일 반복한다. 시험방법을 위해서는 적어도 5회 내지 14회 이하로 계대배양한 배양물 만을 사용한다.

3.2.6. 슈도모나스 에루기노자 (P. aeruginosa) 및 스타필로코커스 아우레우스 (S. aureus)의 시험배양물을 살균 와트만 (Whatmans) 4호 여과지를 통해서 여과한다.

3.2.7. 세포가 치밀하게 될 때 까지 모든 시험배양물을 원심분리하고, 상등액은 파스퇴르 피펫 (Pasteur pipette)으로 제거한다.

3.2.8. 시험 유기체를 원용적의 액체 (즉, 10 ㎖ 또는 15 ㎖)에 재현탁시키고, 몇개의 살균 유리비드와 함께 1 분 동안 진탕한다.

3.2.8.1. 옵션 A의 경우에는, 살균 경수에 재현탁시킨다.

3.2.8.2. 옵션 B의 경우에는, 6 부의 살균 경수에 대한 4 부의 효모 현탁액 (2.2.에서와 같이 제조됨)의 혼합물에 재현탁시킨다.

3.2.8.3. 옵션 C의 경우에는, 영양육즙 (2.4.1. 및 2.4.3.에서와 같이 제조하여 고압살균시킴으로써 살균됨)에 재현탁시킨다.

3.2.8.4. 옵션 D를 위해서는 살균 경수에 재현탁시키고, 살균 경수중에서 1+9로 2회 희석한 다음, 20 분 동안 56℃에서 미리 불활성화된 2 ㎖의 양혈청에 8 ㎖의 최종 희석액을 가하고, 여과에 의해서 살균시킨다.

3.3. 접종물의 열거

시험하기 직전에, 재현탁된 접종물을 샘플링하고, 1/4-역가 링거용액 중의 10-배 희석액 및 혼석평판기술 (pour-plate technique)을 사용하여 열거한다. 이어서 계수한 수는 반드시 밀리리터당, 2×10⁸ 이상 또는 2×10⁹ 이상의 유기체 (또는 옵션 D를 사용하여 1×10⁸-1×10⁷)를 나타내어야 하거나, 시험이 무효인 것으로 간주된다. 대조군 (7.3 및 7.4)에서 사용하기 위한 10^-7 희석액을 함유하는 튜브를 보유한다.

4. 소독제 희석액

소독제의 샘플은 희석제로서 살균 경수를 사용하여 규정된 정도 까지 정량적으로 희석한다. 일차 희석을 위해서는 10 ㎖ 또는 10 g 이상의 샘플을 사용하고, 추후의 희석액을 제조하기 위해서는 1 ㎖ 이상의 희석액을 사용한다. 시험일에 모든 희석액은 유리용기내에서 만든다. 유리용기는 반드시 유리-증류수 중에서 2회 세정하고, 살균시켜야 한다.

5. 온도

에어-컨디쇼닝 (air-conditioning)이 시험용액을 21°±1℃에서 유지시키지 않는 경우에는, 시험이 수행되는 용기를 이 온도에서 수욕중에 고정시킨다.

6. 시험절차

표준이 다른 식으로 지시하는 경우를 제외하고는, 4가지 시험 유기체 (3.1) 각각을 사용하여 이하의 시험을 수행한다. 모든 유기체를 동시에 시험할 필요는 없다.

6.1. 3 ㎖의 희석된 소독제를 마개를 한 유리용기에 가한다.

6.2. 시간측정장치 (timing device)를 작동시킨다. 즉시, 소독제를 1 ㎖의 배양물 (3.2.에서 제조됨)로 접종하고, 소용돌이를 일으켜 혼합시킨다.

6.3. 8분에 1적 (0.02 ㎖±0.002 ㎖)을 회수육즙을 함유하는 5개의 튜브 각각에 계대배양한다. 정확하게 8분에 회수육즙의 첫번째 튜브에 0.02 ㎖가 송달되도록 하기 위해서는, 직전에 소독제 시험혼합물로부터 적합한 양을 수거하는 것이 필요하다. 이것은 반드시 소용돌이를 일으키는 것이 바로 선행되어야 한다. 나머지 샘플은 반드시 시험 혼합물로 복귀시켜야 한다 (참조: 각주 D).

6.4. 지시된 경우를 제외하고는, 10분 째에 소독제를 추가로 1 ㎖의 배양물로 접종하고 소용돌이를 일으켜 혼합시킨다.

6.5. 지시된 경우를 제외하고는, 18분 째에 6.3.에서와 같이 수행한다.

6.6. 회수육즙의 모든 튜브의 내용물들을 소용돌이를 일으켜 혼합시킨다. 37°±1℃에서 48±2 시간 동안 배양한다.

6.7. 성장에 관하여 검사하고 결과를 기록한다.

6.8. 신선한 소독제 희석액 및 새로 제조된 세균 현탁액을 사용하여 연속 2일의 각각에 각각의 시험 유기체에 대하여 단계 6.1-6.7을 반복한다.

대조군

7.1. 회수육즙 오염

회수육즙의 하나의 비접종 튜브를 37°±1℃에서 48±2 시간 동안 배양하고, 성장에 대하여 검사한다. 성장이 일어나면, 회수육즙의 오염으로 인해서 시험은 무효인 것으로 간주된다.

7.2. 소독제 오염

회수육즙의 하나의 튜브에 0.02 ㎖의 희석된 소독제를 가한다. 37°±1℃에서 48±2 시간 동안 배양한다. 성장이 일어나면 시험은 무효인 것으로 간주된다. 7.1이 아닌 7.2에서의 성장은 소독제 시험용액의 오염을 시사한다.

7.3. 수정시험 (fertility test)

회수육즙의 하나의 튜브에 3.3에서 보유된 10^-7 희석액 1.0 ㎖를 가한다. 37°±1℃에서 48±2 시간 동안 배양하고 성장에 대해서 검사한다. 성장이 일어나지 않으면 시험은 뮤효인 것으로 간주된다.

7.4. 불활성화제 효능

회수육즙의 하나의 튜브에 0.02 ㎖의 희석된 소독제 및 3.3에서 보유된 10^-7 희석액 1.0 ㎖를 가한다. 37°±1℃에서 48±2 시간 동안 배양하고 성장에 대해 검사한다. 성장이 일어나지 않으면 시험은 무효인 것으로 간주된다. 7.4에서가 아닌 7.3에서의 성장은 소독제의 부적절한 불활성화를 시사한다.

무효한 대조군의 경우에 절차

어떤 대조군이 시험에서 무효인 경우에, 시험은 반복한다. 대조군의 7.1에서 성장이 일어났거나, 대조군의 7.3 또는 7.4에서 성장이 일어나지 않았다면, 신선한 회수육즙이 사용된다.

소독제 오염이 두 경우에 모두 대조군 7.2에 의해서 시사되었다면, 소독제는 시험에 실패한 것으로 간주된다. 소독제의 부적절한 불활성화가 두 경우에 모두 대조군 7.4에 의해서 시사되었다면, 시험은 무효인 것으로 간주된다 (각주 C).

9. 결과

4개의 유기체 모두를 사용한 세경우 모두에서 6.3에 규정된 5개의 회수육즙 중의 적어도 두개에서 명백한 성장이 일어나지 않거나, 6.5에 규정된 5개의 회수육즙 중의 적어도 두개에서 명백한 성장이 일어나지 않았다면, 희석시험은 시험을 통과한 것이다.

10. 참고문헌

(1) Kelsey, J.C. and Maurer Isobel, M. Pharmaceutical Journal (UK) 213: 528-530, (1974).

(2) Wright Eleanore, S. and Mundy, R.A. Journal of Bacteriology 80: 279-280 (1960).

11. 보완 각주

A. 연구, 개발 또는 비교 목적으로, 세번째 공격을 부가하여 진성 능력시험을 수행하고, 규정된 희석도 이상 또는 이하의 희석도에서 시험하는 것이 유용할 수 있다. 이러한 경우에는 시험의 시기 및 유기체에 관한 켈시 (Kelsey)와 마우러 (Maurer)의 제안을 면밀히 검토하여야 한다. 시험의 생략은 생산 배취의 통상적 시험의 경우에 고려될 수 있다.

B. 라이트 앤드 먼디 (Wright & Mundy) 배지는 "박토 합성육즙 (Bacto Synthetic Broth)" (A.O.A.C. Code No. 0352 (Difco Ltd.))으로 시판품을 이용할 수 있다. 사용되는 영양육즙은 "영양육즙-2호 (Nutrient Broth-No. 2)" (Oxoid Ltd.)로 이용할 수 있다.

C. 부적절한 불활성화가 시사되는 경우에는, 효과적인 불활성제를 찾는 연구가 수행되어야 한다 [참고: Mackinnon, I.H.J. Hyg (London) 73: 189-195 (1974)].

D. 계대배양을 위한 샘플의 수거를 위해서는 일회용 플라스틱 팁 (plastic tips)을 갖는 옥스포드 (Oxford) P-7000 샘플러 시스템 (sampler system)이 추천된다.

허용되는 통상적 명칭

서술적 명칭	통상적 명칭
살균제 (sterilant)	살균제 (sterilant)
기계용 등급 - 높은 레벨 소독제	기계용 등급 - 높은 레벨 소독제 또는 높은 레벨 기계용 소독제 또는 기계용 소독제 - 높은 레벨 또는 높은 레벨 기계용 등급 소독제 또는 높은 레벨 소독제 또는 기계용 등급 소독제
기계용 등급 - 중간 레벨 소독제	기계용 등급 - 중간 레벨 소독제 또는 중간 레벨 기계용 등급 소독제 또는 중간 레벨 기계용 소독제 또는 중간 레벨 소독제
기계용 등급 - 낮은 레벨 소독제	기계용 등급 - 낮은 레벨 소독제 또는 낮은 레벨 기계용 등급 소독제 또는 낮은 레벨 소독제 또는 기계용 등급 소독제 - 낮은 레벨
병원 등급의 소독제 (주로 스프레이로 사용하는 경우에는 이하의 표면 스프레이 참조)	소독제 - 병원 등급 병원 등급 소독제
가정용/시판용 등급의 소독제 (주로 스프레이로 사용하는 경우에는 이하의 표면 스프레이 참조)	소독제 - 가정용 등급, 또는 소독제 - 시판용 등급, 또는 가정용 등급 소독제, 또는 시판용 등급 소독제
표면 스프레이 소독제	표면 스프레이 소독제 - 병원용 등급, 또는 표면 스프레이 소독제 - 가정용 등급, 또는 표면 스프레이 소독제 - 시판용 등급
항균성 직물제제	항균제 (제품의 성질을 시사하는 단어 또는 단어들과 함께)
위생용 유체 (sanitary fluid)	위생용 유체 (sanitary fluid)
위생용 분말 (sanitary powder)	위생용 분말 (sanitary powder)
위생제 (sanitiser)	위생제, 또는 위생용 용액 또는 항균제 (제품의 성질을 시사하는 단어 또는 단어들과 함께)

Claims

1 중량% 이상의 4급 살생물제,

단백질, 및

효소 안정화제, 효소 안정화 시스템, 미셀 형성 변형제 및 억제제, 및 이들의 배합물로 이루어진 군에서 선택된 활성보호제(activity protector)

를 포함하고, 농축물 1 부에 대해서 20 부의 물로 희석하여 2% 이하의 트립톤 (또는 그의 단백질 등가물)의 존재하에서 24시간 후에, 동일 농도의 단백질의 존재하에서 물 중의 동일한 4급 살생물제의 동일한 농도의 단순용액의 MIC(최소억제농도)보다 낮은 MIC를 나타내는 희석용액을 생성시킬 수 있는 저장안정성 액체 소독제 농축물.

제1항에 있어서, 단백질의 존재하에서 소독을 위해서 희석한 후에 사용하기에 적합하며, 1 중량% 이상의 4급 살생물제; 단백질; 및 효소 안정화제, 효소 안정화 시스템, 미셀 형성 변형제 및 억제제, 및 이들의 배합물로 이루어진 군에서 선택된 활성보호제를 포함하는 저장안정성 액체 소독제 농축물.

제2항에 있어서, 단백질이 효소인 농축물.

제3항에 있어서, 효소가 하나 이상의 카보하이드라제, 에스테라제, 하이드라제, 아밀라제, 프로테아제, 카탈라제, 리파제, 아밀라제, 셀룰라제, 퍼옥시다제, 인버타제 등, 및 이들의 혼합물로부터 선택되는 것인 농축물.

삭제

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 4급 살생물제가 모노머성 4급 암모늄 항미생물제인 농축물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 4급 살생물제의 살생물 효능이 붕소 화합물, 폴리올, 포르메이트, 칼슘 이온, 다작용성 아미노 화합물, 포스페이트, 시트레이트, 설페이트 및 격리제 (sequestering agent)로 이루어진 군에서 선택된 활성보호제에 의해서 보호되는 것인 농축물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 미셀 비혼화성 용매를 포함하는 농축물.

제8항에 있어서, 미셀 비혼화성 용매가 C1-C6 알칸올, C1-C6 디올, C3-C24 알킬렌 글리콜 에테르, 알킬렌 글리콜 알킬 에테르, 보레이트, 락테이트, 시트레이트, 타르트레이트 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 것인 농축물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 18-25℃에서 밀봉용기 내에서 12개월 동안 저장한 후에 75% 이상의 살생물 효능을 보유하는 액체 소독제 농축물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 18-25℃에서 밀봉용기 내에서 12개월 동안 저장한 후에 90% 이상의 살생물 효능을 보유하는 액체 소독제 농축물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 10 중량% 이상의 4급 살생물제를 포함하는 농축물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 25 중량% 이상의 4급 살생물제를 포함하는 농축물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 농축물 1 부에 대해서 20 부의 물로 희석하는 경우에, 희석용액이 2% 이하의 트립톤 (또는 그의 단백질 등가물)의 존재하에서 24시간 후에, 동일 농도의 단백질의 존재하에서 물 중의 동일한 4급 살생물제의 동일한 농도의 단순용액의 MIC의 50% 보다 낮은 MIC를 나타내는 농축물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 농축물 1 부에 대해서 20 부의 물로 희석하는 경우에, 희석용액이 2% 이하의 트립톤 (또는 그의 단백질 등가물)의 존재하에서 24시간 후에, 동일 농도의 단백질의 존재하에서 물 중의 동일한 4급 살생물제의 동일한 농도의 단순용액의 MIC의 40% 보다 낮은 MIC를 나타내는 농축물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 추가로 하나 이상의 비이온성 계면활성제를 포함하는 농축물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 4급 살생물제가 하기 화학식 1을 갖는 군에서 선택되는 모노머성 4급 암모늄 항미생물성 화합물인 농축물.

<화학식 1>

상기 식에서,

R', R", R"' 및 R""는 동일하거나 상이하며, 치환되거나 비치환되고, 분지쇄 또는 직쇄이며, 사이클릭 또는 비사이클릭일 수 있는 알킬 래디칼이고,

X는 음이온이다.

제17항에 있어서, X가 염소 또는 브롬인 농축물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 4급 살생물제가 모노-장쇄 알킬쇄, 트리-단쇄 테트라알킬 암모늄 화합물; 디-장쇄, 디-단쇄 테트라알킬 암모늄 화합물 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 것인 농축물.

제19항에 있어서, 4급 살생물제가 모노알킬트리메틸 암모늄염, 모노알킬디메틸벤질 화합물, 디알킬벤질 화합물 및 4급 글루코네이트로 이루어진 군에서 선택되는 것인 농축물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 살생물제가 C8 내지 C22 디메틸벤질 암모늄클로라이드, C8-C22 디메틸에틸벤질 암모늄클로라이드 및 디-C6-C20 알킬디메틸 암모늄클로라이드로 이루어진 군에서 선택되는 것인 농축물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 4급 살생물제가 벤질디메틸 암모늄할라이드인 농축물.

제22항에 있어서, 안정화제가 붕산, 산화붕소, 붕사, 또는 나트륨 오르토-, 메타- 또는 피로-보레이트, 및 퍼보레이트로부터 선택되는 것인 농축물.

제23항에 있어서, 안정화제가 나트륨 테트라보레이트를 포함하는 것인 농축물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 4급 살생물제의 살생물 효능이 붕소 화합물에 의해서 보호되고, 2 내지 6개의 하이드록실기를 갖는 폴리올을 추가로 포함하는 농축물.

제25항에 있어서, 폴리올이 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 1,2-프로판디올 및 부틸렌 글리콜로 이루어진 군에서 선택되는 것인 농축물.

제8항에 있어서, 용매가 디(프로필렌 글리콜) 메틸 에테르 ("DPM")를 포함하는 것인 농축물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 비이온성 계면활성제 및 반극성 비이온성 계면활성제로 이루어진 군에서 선택되는 계면활성제를 포함하는 농축물.

제28항에 있어서, 계면활성제가 알콕실화 알콜, 알콕실화 페놀 에테르 및 트리알킬아민 옥사이드를 포함하는 군에서 선택되는 것인 농축물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 노닐페놀 에톡실레이트를 포함하는 농축물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 농축물 1 부에 대해서 200 부가 넘는 물로 희석시킨 농축물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 농축물 1 부에 대해서 1000 부가 넘는 물로 희석시킨 농축물.

0.5 중량% 이상의 4급 살생물제,

단백질, 및

효소 안정화제, 효소 안정화 시스템, 미셀 형성 변형제 및 억제제, 및 이들의 배합물로 이루어진 군에서 선택된 활성보호제

를 포함하고, 농축물 1 부에 대해서 20 부의 물로 희석하여 2% 이하의 트립톤 (또는 그의 단백질 등가물)의 존재하에서 24시간 후에, 동일 농도의 단백질의 존재하에서 물 중의 동일한 4급 살생물제의 동일한 농도의 단순용액의 MIC보다 낮은 MIC를 나타내는 희석용액을 생성시킬 수 있으며, 단백질의 존재하에서 살생물적으로 유효한 소독제의 작업용액.

0.5 중량% 이상의 4급 살생물제,

단백질, 및

를 포함하고, 단백질의 존재하에서 살생물적으로 유효한 소독제의 작업용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 단백질이 효소인 작업용액.

제35항에 있어서, 효소가 하나 이상의 카보하이드라제, 에스테라제, 하이드라제, 아밀라제, 프로테아제, 카탈라제, 리파제, 아밀라제, 셀룰라제, 퍼옥시다제, 인버타제 등, 및 이들의 혼합물로부터 선택되는 것인 작업용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 희석하기 전에 단백질을 4급 살생물제와 배합하여 형성되는 작업용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 희석시에 단백질을 4급 살생물제와 배합하여 형성되는 작업용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 희석한 후에 단백질을 4급 살생물제와 배합하여 형성되는 작업용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 4급 살생물제가 모노머성 4급 암모늄 항미생물제인 용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 4급 살생물제의 살생물 효능이 붕소 화합물, 폴리올, 포르메이트, 칼슘 이온, 다작용성 아미노 화합물, 포스페이트, 시트레이트, 설페이트 및 격리제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 효소 안정화제 및 안정화 증진제에 의해서 보호되는 것인 용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 미셀 비혼화성 용매를 포함하는 용액.

제42항에 있어서, 미셀 비혼화성 용매가 C1-C6 알칸올, C1-C6 디올, C3-C24 알킬렌 글리콜 에테르, 알킬렌 글리콜 알킬 에테르, 보레이트, 락테이트, 시트레이트, 타르트레이트 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 것인 용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 1.5 중량% 이상의 4급 살생물제를 포함하는 용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 2.5 중량% 이상의 4급 살생물제를 포함하는 용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 2% 이하의 트립톤 (또는 그의 단백질 등가물)의 존재하에서 24시간 후에, 동일 농도의 단백질의 존재하에서 물 중의 동일한 4급 살생물제의 동일한 농도의 단순용액의 MIC의 50% 보다 낮은 MIC를 나타내는 용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 2% 이하의 트립톤 (또는 그의 단백질 등가물)의 존재하에서 24시간 후에, 동일 농도의 단백질의 존재하에서 물 중의 동일한 4급 살생물제의 동일한 농도의 단순용액의 MIC의 40% 보다 낮은 MIC를 나타내는 용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 하나 이상의 비이온성 계면활성제를 추가로 포함하는 용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 4급 살생물제가 하기 화학식 1을 갖는 군에서 선택되는 모노머성 4급 암모늄 항미생물성 화합물인 용액.

<화학식 1>

상기 식에서,

X는 음이온이다.

제49항에 있어서, X가 염소 또는 브롬인 용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 4급 살생물제가 모노-장쇄 알킬쇄, 트리-단쇄 테트라알킬 암모늄 화합물; 디-장쇄, 디-단쇄 테트라알킬 암모늄 화합물 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 것인 용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 4급 살생물제가 모노알킬트리메틸 암모늄염, 모노알킬디메틸벤질 화합물, 디알킬벤질 화합물 및 4급 글루코네이트로 이루어진 군에서 선택되는 것인 용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 살생물제가 C8 내지 C22 디메틸 벤질 암모늄클로라이드, C8-C22 디메틸에틸벤질 암모늄클로라이드 및 디-C6-C20 알킬디메틸 암모늄클로라이드로 이루어진 군에서 선택되는 것인 용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 4급 살생물제가 벤질디메틸 암모늄할라이드인 용액.

제34항에 있어서, 안정화제가 붕산, 산화붕소, 붕사, 및 나트륨 오르토-, 메타- 또는 피로-보레이트, 및 퍼보레이트로부터 선택되는 것인 용액.

제55항에 있어서, 안정화제가 나트륨 테트라보레이트를 포함하는 것인 용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 4급 살생물제의 살생물 효능이 붕소 화합물에 의해서 보호되고, 2 내지 6개의 하이드록실기를 갖는 폴리올을 추가로 포함하는 용액.

제57항에 있어서, 폴리올이 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 1,2-프로판디올 및 부틸렌 글리콜로 이루어진 군에서 선택되는 것인 용액.

제42항에 있어서, 용매가 디(프로필렌 글리콜) 메틸 에테르 ("DPM")를 포함하는 것인 용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 비이온성 계면활성제 및 반극성 비이온성 계면활성제로 이루어진 군에서 선택되는 계면활성제를 포함하는 용액.

제60항에 있어서, 계면활성제가 알콕실화 알콜, 알콕실화 페놀 에테르 및 트리알킬아민 옥사이드를 포함하는 군에서 선택되는 것인 용액.

제33항 또는 제34항에 있어서, 노닐페놀 에톡실레이트를 포함하는 용액.

4급 살생물제를 효소 안정화제, 미셀 형성 변형제 및 억제제, 및 이들의 배합물로 이루어진 군에서 선택된 "활성보호제"와 배합시키는 단계를 포함하는, 4급 살생물제의 불활성화를 방지하는 방법.

제63항에 있어서, 활성보호제가 붕소 화합물, 폴리올, 포르메이트, 칼슘 이온, 다작용성 아미노 화합물, 포스페이트, 시트레이트, 설페이트, 및 격리제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 물질인 방법.

제64항에 있어서, 활성보호제가 붕산, 산화붕소, 붕사, 및 나트륨 오르토-, 메타- 또는 피로-보레이트, 및 퍼보레이트로부터 선택된 하나 이상의 물질인 방법.

제64항에 있어서, 활성보호제가 나트륨 테트라보레이트를 포함하는 것인 방법.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 농축물을 물로 희석하고, 희석된 농축물을 유효 기간 동안 표면에 적용하는 단계를 포함하는, 표면을 소독하는 방법.

제33항 또는 제34항에 따른 용액을 유효 기간 동안 표면에 적용하는 단계를 포함하는, 표면을 소독하는 방법.

제25항에 있어서, 폴리올이 글리세롤, 만니톨, 소르비톨, 에리트리톨, 글루코즈, 프럭토즈 및 락토즈로 이루어진 군에서 선택되는 것인 농축물.

제57항에 있어서, 폴리올이 글리세롤, 만니톨, 소르비톨, 에리트리톨, 글루코즈, 프럭토즈 및 락토즈로 이루어진 군에서 선택되는 것인 용액.