KR100851957B1 - 벤조퀴나졸린 티미딜레이트 신타제 억제제의 리포솜 제형 - Google Patents

Abstract

리포솜 캡슐화된 벤조퀴나졸린 티미딜레이트 신타제 억제제 제형을 제공한다. 상기 리포솜은 유리 약물에 비해 개선된 약물 동력학과 항종양제로서 향상된 효능을 갖는다. 상기 제형은 하나 이상의 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 벤조퀴나졸린 티미딜레이트 신타제 억제제를 포함하는 리포솜을 포함한다.

Description

벤조퀴나졸린 티미딜레이트 신타제 억제제의 리포솜 제형{LIPOSOMAL BENZOQUINAZOLINE THYMIDYLATE SYNTHASE INHIBITOR FORMULATIONS}

본 발명은 벤조퀴나졸린 티미딜레이트 신타제 억제제를 함유하는 리포솜 제형에 관한 것이다. 더욱이, 본 발명은 상기와 같은 제형의 제조 및 사용 방법에 관한 것이다.

리포솜은 부분적으로, 물에 분산 시 유체 충전된 폐쇄 구를 형성하는 인지질로부터 형성되는 미세한 소낭이다. 벤조퀴나졸린 티미딜레이트 신타제 억제제로서 공지된 화합물 군이 항종양 활성을 갖는 것으로 공지되어 있다(US 5,663,377). 상기 특허에는 벤조퀴나졸린 티미딜레이트 신타제 억제제를 함유하는 리포솜 제형이 개시되어 있다.

본 발명은 하나 이상의 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 벤조퀴나졸린 티미딜레이트 신타제 억제제를 포함하는 리포솜 제형을 제공한다.

리포솜내에 캡슐화된 벤조퀴나졸린 티미딜레이트 신타제 억제제(BTSI)를 포함하는 제형뿐만 아니라 그의 제조 방법을 제공한다. 상기 제형은 항종양 또는 항바이러스제로서의 용도를 포함한 약학적 용도를 갖는다. 또한, 상기 리포솜은 유리 약물에 비해 개선된 약물 동력학 및 항종양제로서 향상된 효능을 갖는다. 상기 제형은 하나 이상의 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 BTSI를 포함하는 리포솜을 포함한다.

본 발명의 벤조퀴나졸린 티미딜레이트 신타제 억제제(본 명세서에서는 본 발명의 화합물(들)로서 지칭함)는 1997년 9월 2일자 미국 특허 제 5,663,337 호에 개시되어 있으며, 상기 특허는 내용 전체, 특히 컬럼 1, 라인 37 내지 컬럼 6, 라인 45가 본 발명에 참고로 인용되어 있다.

따라서, 본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염을 제공한다:

상기 식에서,

점선은 단일 또는 이중 결합을 나타내고,

R¹은 C_1-4 알킬, 또는 C_1-4 알킬, C_1-5 알카노일 또는 벤질 그룹(基)에 의해 임의로 치환된 아미노이고;

R², R³, R⁴ 및 R⁵는 동일하거나 상이하며, 각각 수소, 페닐, 할로, 니트로, 그룹 S(O)_nR⁸[여기에서 n은 0, 1 또는 2의 정수이고, R⁸은 할로 또는 C_1-4 알킬 또는 그룹 NR⁹R¹⁰(여기에서 R⁹ 및 R¹⁰은 모두 수소이다)이다],

그룹 NR¹¹R¹²(여기에서 R¹¹ 및 R¹²는 동일하거나 상이하며, 각각 소수 또는 C_1-4 알킬이다),

그룹 OR¹³[여기에서 R¹³은 수소 또는 할로로 임의로 치환된 C_1-4 알킬; 그룹 OR¹⁴ 또는 NR¹⁴R¹⁵(여기에서 R¹⁴ 및 R¹⁵는 동일하거나 상이하며 각각 수소 또는 C_1-4 알킬이다)로 임의로 치환된 C_1-4 지방족 그룹이다] 중에서 선택되거나, 또는

R² 내지 R⁵ 중 2 개가 함께 결합되어 벤조 그룹을 형성하거나, 또는

R² 내지 R⁵ 중 하나가 그룹 -X-Y-R¹⁶[여기에서 X는 CH₂, NR ¹⁷, CO 또는 S(O)_m이고, 이때 m은 0, 1 또는 2이고, R¹⁷은 수소 또는 C_1-4 지방족 그룹이며, Y는 CH₂, NR^17', O 또는 S(O)_m'이고, 이때 m'는 0, 1 또는 2이며, R^17'는 수소 또는 C_1-4 지방족 그룹이나, 단 X 및 Y는 각각이 CH₂인 경우에만 동일하거나, 또는 -X-Y-는 그룹 -O-, -NR¹⁷-, -CH=CH- 또는 -N=N-이고, 이때 R¹⁷은 상기 정의된 바와 같고, R¹⁶은 C_1-4 지방 족 그룹, 또는 Y에 결합된 하나 이상의 탄소 원자가 제거된 위치에서 그룹 R¹⁸에 의해 임의로 치환된 5 또는 6-원 방향족 고리이며, 이때 상기 5- 또는 6-원 고리는 할로 원자에 의해 임의로 추가로 치환되고, 상기 R¹⁸은 할로, C_1-4 알콕시, 니트로, 니트릴, 할로에 의해 임의로 치환된 C_1-4 알킬, 할로, 또는 그룹 COR¹⁹이고, 이때 R ¹⁹는 하이드록시, C_1-4 알콕시, 또는 하나 또는 2 개의 카르복실 그룹에 의해 임의로 치환된 C_1-6 알킬 또는 그의 C_1-12 에스테르이거나, 또는 R¹⁹는 그룹 NR ²⁰R²¹이고, 이때 R²⁰ 및 R²¹은 동일하거나 상이하며, 각각 수소 또는 하이드록시에 의해 임의로 치환된 C_1-4 알킬이거나, 또는 R¹⁹는 아미노산 그룹 또는 그의 에스테르이고, 여기에서 상기 아미노산 그룹의 첫 번째 질소 원자는 상기 5- 또는 6-원 방향족 고리에 결합되어 추가의 5- 또는 6-원 헤테로사이클릭 고리를 형성하거나, 또는 R¹⁹는 상기 5- 또는 6-원 방향족 고리에 결합되어 추가의 5- 또는 6-원 고리를 형성하는 C_2-3 알킬렌 그룹이다]이고;

R⁶ 및 R⁷은 동일하거나 상이하며, 각각 하이드록시에 의해 임의로 치환된 C_1-4 알킬 또는 C_1-4 알콕시이거나, 또는 이들이 함께 벤조 그룹을 형성하나, 단

R² 내지 R⁷ 중 하나 이상은 수소 이외의 것이고 R⁴는 R¹이 하이드록시 또는 메틸인 경우 메톡시가 아니다.

할로라는 용어는 플루오로, 브로모, 클로로 및 요오도를 의미한다.

C_1-4 지방족 그룹이란 용어는 C_1-4 알킬, 알케닐 또는 알키닐 그룹을 의미한다.

아미노산 그룹이란 용어는 천연 아미노산을 의미한다.

바람직한 아미노산 그룹에는 글리신, 글루탐산 및 폴리글루탐산 그룹이 포함된다.

아미노산 그룹이 5- 또는 6-원 방향족 고리에 결합되는 경우, 상기 결합은 COR¹⁹가 결합된 탄소에 인접한 방향족 고리의 탄소 원자를 통해서이다.

바람직하게는 점선은 이중 결합이다.

방향족 고리 R¹⁶에 적합한 치환체로는 할로, C_1-4 알킬 및 C_1-4 알콕시가 있으며, 이들은 각각 1 내지 5 개의 할로 원자에 의해 임의로 치환된다. 가장 적합하게는 플루오로, 클로로, 메틸, 트리플루오로메틸 및 메톡시 중에서 선택된 하나 또는 2 개의 치환체가 존재하며, 바람직하게는 플루오로이거나 또는 상기 방향족 고 리 상에 치환체가 없다. 하나의 바람직한 실시태양에서, -X-Y-R¹⁶은 그룹

(여기에서 R¹⁸은 상기 정의한 바와 같고, 바람직하게는 상기 정의한 바와 같은 그룹 COR¹⁹이고, R²²는 수소 또는 플루오로이다)이다.

추가의 바람직한 실시태양에서 X-Y-R¹⁶은 그룹

(여기에서 H₂NR^19a는 글루탐산 또는 폴리글루탐산 그룹이고, Z는 CH₂, S 또는 O이다)이다.

적합하게는, R¹은 하나 또는 2 개의 메틸 또는 에틸 그룹으로 임의로 치환된 아미노 그룹이거나, 또는 R¹은 메틸 또는 에틸 그룹이다. 바람직하게는 R¹은 아미노 또는 메틸 그룹이다.

적합하게는, R² 내지 R⁵ 중 기껏해야 단지 3 개, 바람직하게는 단지 2 개만이 수소 이외의 것이고, 이들은 각각 독립적으로 수소, 할로, 하이드록시, 니트로, 하 이드록시에 의해 임의로 치환된 C_1-3 알킬, C_1-2 알콕시, C_1-3 알콕시, 하나 또는 2 개의 메틸 또는 에틸 그룹으로 임의로 치환된 아미노, 및 그룹 S(O)nR²³(여기에서 n은 0, 1 또는 2이고, R²³은 C_1-4 알킬 그룹 또는 하나 또는 2 개의 메틸 또는 에틸 그룹으로 임의로 치환된 아미노 그룹이다) 중에서 선택되거나, 또는 R² 내지 R⁵ 중 하나는 그룹 -X-Y-R²⁴이고, 이때 R²⁴는 그룹

(여기에서 R¹⁸, R^19a, R²² 및 Z는 상기 정의한 바와 같다)이다. 하나의 바람직한 실시태양에서, R¹⁸은 니트로 또는 그룹

(여기에서 R²⁵, R²⁶ 및 R²⁷은 동일하거나 상이하며, 각각 수소 또는 C_1-4 알킬 그룹이고, t는 0 내지 6의 정수이다)이다. 바람직하게는 R²⁵, R²⁶ 및 R²⁷은 수소이고 t는 0이다. 바람직하게는 Z는 CH₂ 또는 S이다.

바람직하게는 R² 내지 R⁵ 중 하나는 상기 정의한 바와 같은 그룹 -X-Y-R²⁴이다. 바람직하게는 R³은 그룹 -X-Y-R²⁴이다.

적합하게는 R⁶ 및 R⁷은 동일하거나 상이하며, 각각 수소, 메틸, 에틸, 또는 브로모, 하이드록시 또는 메톡시에 의해 치환된 메틸이다. 바람직하게는 R⁷은 수소이고 R⁶은 메틸이다.

바람직하게는 -X-Y-는 그룹 -SO₂NR¹⁷- 또는 CH₂NR¹⁷이고, 이때 R¹⁷은 상기 정의한 바와 같다.

적합하게는 R¹⁷은 수소 또는 C_1-4 알킬 또는 알케닐 그룹이고, 바람직하게는 R¹⁷은 수소 또는 메틸이다.

본 발명의 하나의 화합물 그룹은 하기 화학식 Ia의 화합물 또는 그의 염 그룹이다:

상기 식에서,

점선은 단일 또는 이중 결합을 나타내고,

R^1a는 C_1-4 알킬, 또는 C_1-4 알킬, C_1-5 알카노일 또는 벤질 그룹에 의해 임의로 치환된 아미노이고;

R^2a, R^3a, R^4a 및 R^5a는 동일하거나 상이하며, 각각 수소, 할로, 니트로, 그룹 S(O)_nR^8a(여기에서 n은 0, 1 또는 2의 정수이고, R^8a는 할로 또는 C_1-4 알킬 또는 아미노 그룹이다);

그룹 NR^11aR^12a(여기에서 R^11a 및 R^12a는 동일하거나 상이하며, 각각 소수 또는 C_1-4 알킬이다),

그룹 OR^13a[여기에서 R^13a는 수소 또는 할로로 임의로 치환된 C_1-4 알킬; 그룹 OR^14a 또는 NR^14aR^15a(여기에서 R^14a 및 R^15a는 동일하거나 상이하며 각각 수소 또는 C_1-4 알킬이 다)로 임의로 치환된 C_1-4 지방족 그룹이다] 중에서 선택되거나, 또는

R^2a 내지 R^5a 중 하나가 그룹 -X-Y-R^16a[여기에서 X는 CH₂, NR^17a, CO 또는 S(O)_m이고, 이때 m은 0, 1 또는 2이고, R^17a는 수소 또는 C_1-4 지방족 그룹이며, Y는 CH₂ , NR_17'a ^', O 또는 S(O)_m'이고, 이때 m'는 0, 1 또는 2이고, R^17'a는 수소 또는 C_1-4 지방족 그룹이나, 단 X 및 Y는 각각이 CH₂인 경우에만 동일하거나, 또는 -X-Y-는 그룹 -NR^17a-, -CH=CH- 또는 -N=N-이고, 이때 R^17a는 상기 정의된 바와 같고, R^16a는 C_1-4 지방족 그룹, 또는 Y에 결합된 하나 이상의 탄소 원자가 제거된 위치에서 그룹 R^18a에 의해 임의로 치환된 5 또는 6-원 방향족 고리이며, 이때 상기 R^18a는 니트로, 니트릴, 할로에 의해 임의로 치환된 C_1-4 알킬, 할로, 또는 그룹 COR^19a이고, 이때 R^19a는 하나 또는 2 개의 카르복실 그룹에 의해 임의로 치환된 C_1-6 알킬 또는 C_1-4 알콕시, 그룹 CONR^20aR^21a이고, 이때 R^20a 및 R^21a는 동일하거나 상이하며 각각 수소 또는 C_1-4 알킬이거나, 또는 R^19a는 글루탐산 또는 폴리글루탐산 또는 그의 에스테르이고, 여기에서 상기 글루탐산 또는 폴리글루탐산의 첫 번째 질소 원자는 상기 5- 또는 6-원 방향족 고리에 결합되어 추가의 5- 또는 6-원 헤테로사이클릭 고리를 형성할 수 있고;

R^6a 및 R^7a는 동일하거나 상이하며, 각각 하이드록시에 의해 임의로 치환된 C_1-4 알킬 또는 C_1-4 알콕시이거나, 또는 이들이 함께 벤조 그룹을 형성하나, 단

R^2a 내지 R^7a 중 하나 이상은 수소 이외의 것이고 R^4a는 R^1a가 하이드록시 또는 메틸인 경우 메톡시가 아니다.

본 발명 화합물의 추가적인 그룹은 하기 화학식 II의 화합물 또는 그의 염이다:

상기 식에서,

R¹, R⁶, R⁷ 및 점선은 상기 정의된 바와 같고,

R²⁸ 내지 R³¹은 동일하거나 상이하며, 각각 수소, 할로, 니트로, 그룹 S(O)_nR ⁸, 그룹 NR¹¹R¹², 그룹 OR¹³, 및 그룹 OR¹⁴ 또는 NR¹⁴R¹⁵ 로 임의로 치환된 C_1-4 지방족 그룹 중에서 선택되고, 이때 R⁸, R¹¹, R¹², R¹³, R¹⁴ 및 R ¹⁵는 상기 정의된 바와 같으나, 단 R²⁸ 내지 R³¹이 모두 수소는 아니며, R³⁰은 R¹이 하이드록시 또는 메틸인 경우 메톡시가 아니다.

본 발명 화합물의 바람직한 그룹은 하기 화학식 III의 화합물 또는 그의 염이다:

상기 식에서,

R¹, R⁶ 및 R⁷은 상기 정의된 바와 같고,

R³² 내지 R³⁵는 동일하거나 상이하며, 하나는 그룹 X-Y-R¹⁶이고 다른 것들은 동일하거나 상이하며 각각 수소, 할로, 니트로, 그룹 S(O)_nR⁸, 그룹 NR¹¹R¹² , 그룹 OR¹³, 및 그룹 OR¹⁴ 또는 NR¹⁴R¹⁵로 임의로 치환된 C_1-4 지방족 그룹 중에서 선택되고, 이때 X, Y, R⁸, R¹¹, R¹², R¹³, R¹⁴, R¹⁵ 및 R¹⁶은 상기 정의된 바와 같다.

본 발명 화합물의 추가의 바람직한 그룹은 하기 화학식 IV의 화합물 또는 그의 염이다:

상기 식에서,

R¹, R⁶, R⁷ 및 R³² 내지 R³⁵는 상기 정의된 바와 같다.

바람직하게는 R³³은 상기 정의된 바와 같은 그룹 X-Y-R¹⁶이다.

바람직한 화학식 I의 화합물들로는 하기의 것들이 있다:

3-아미노-9-브로모벤조[f]퀴나졸린-1(2H)-온

3-아미노-9-에티닐벤조[f]퀴나졸린-1(2H)-온

N-(4-((3-아미노-1,2,5,6-테트라하이드로-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)술폰아미도)벤조일)-L-글루탐산

N-(4-((1,2,5,6-테트라하이드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)술폰아미도)벤조일)-L-글루탐산

N-(4-((1,2-디하이드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)술폰아미도)벤조일)-L-글루탐산

N-(4-(((1,2-디하이드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-2-플루오로벤조일)-L-글루탐산

N-(4-(((1,2-디하이드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)벤조일)-L-글루탐산

(S)-2-(5-(((1,2-디하이드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산

9-((4-아세틸아닐리노)메틸)-3-메틸벤조[f]퀴나졸린-1(2H)-온

3-메틸090((4-니트로아닐리노)메틸)벤조[f]퀴나졸린-1(2H)-온

N-(4-(((3-아미노-1,2-디하이드로-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)벤조일)-L-글루탐산

3-아미노-9-((4-니트로아닐리노)메틸)벤조[f]퀴나졸린-1(2H)-온

9-((4-아세틸아닐리노)메틸)-3-아미노벤조[f]퀴나졸린-1(2H)-온

(RS)-2-(2-(4-(((1,2-디하이드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)페닐)-2-옥소에틸)글루타르산

에틸-4-(4-(((1,2-디하이드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)페닐)-4-옥소부티레이트

4-(4-(((1,2-디하이드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)페닐)-4-옥소부티르산

N-(4-(((1,2-디하이드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-2-플루오로벤조일)글리신

에틸 N-(4-(((1,2-디하이드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-2-플루오로벤조일)글리시네이트.

몇몇 화학식 I의 화합물들은 비 대칭 탄소 원자를 함유하며, 따라서 광학 이성체로서 존재할 수 있다. 이들의 개별적인 이성체 및 혼합물은 본 발명의 범위 내에 포함된다.

본 발명 화합물의 염은 아미노 그룹으로부터 유도된 산 부가염 또는 화학식 I의 화합물(예를 들어 상기 화합물이 카르복시 그룹으로 치환되는 경우)로부터 유도된 음이온성 종 및 양이온을 포함하는 염을 포함한다. 상기 2 가지 유형의 염 모두에서, 치료 활성은 본 명세서에 정의된 바와 같은 본 발명의 화합물로부터 유도된 잔기에 존재하며, 다른 성분들의 존재는 덜 중요하지만, 치료 및 예방을 목적으로 환자에게 약학적으로 허용 가능한 것이 바람직하다. 약학적으로 허용 가능한 산 부가염의 예로는 무기산, 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 인산, 메타인산, 질산 및 황산, 및 유기 산, 예를 들어 타르타르산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 시트르산, 말산, 락트산, 푸마르산, 벤조산, 글리콜산, 글루콘산, 숙신산 및 메탄술폰산 및 아릴술폰산, 예를 들어 p-톨루엔술폰산으로부터 유도된 염이 있다. 화학식 I의 화합물로부터 유도된 음이온성 종 및 양이온을 포함하는 염의 예로는 암모늄 염, 알칼리 금속 염, 예를 들어 나트륨 및 칼륨 염, 알칼리토 염, 예를 들어 마그네슘 및 칼슘 염, 및 유기 염기와 형성된 염, 예를 들어 모노-, 디- 또는 트리-(저급 알킬) 또는 (저급 알칸올)아민, 예를 들어 트리에탄올아민 및 디에틸아미노-에틸아민으로부터 유도된 아미노 염, 및 헤테로사이클릭 아민, 예를 들어 피페리딘, 피리딘, 피페라진 및 모르폴린과의 염이 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 염은 상기와 같이 허용 가능하지 않은 염들과 함께 본 발명 화합물의 단리 및/또는 정제에 유용하며, 상기 약학적으로 허용 가능하지 않은 염들은 또한 당해 분야에 널리 공지된 기법에 의해 약학적으로 허용 가능한 염들로 전환시키는데 유용하다.

카르복시 그룹을 함유하는 화학식 I의 화합물로부터 형성된 화학식 I 화합물의 에스테르는 종종 모 산의 제조에 유용한 중간체이다.

본 발명의 하나의 특히 바람직한 화합물은 하기 화학식의 화합물, 즉 GW1843(또한 본 발명에서 GW1843U89 또는 1843U89라 칭함)이다:

본 명세서에 사용된 바와 같이 GW1843의 리포솜 제형을 NX1843이라 칭한다.

본 발명에 사용된 "리포솜"이란 용어는 미국 특허 제 4,753,788 호(본 발명에 참고로 인용되어 있음)에 개시된 바와 같은 단층 소낭 또는 다층 소낭을 지칭한다.

"단층 리포솜"(또한 "단일 층 소낭"이라고도 지칭됨)은 단일의 폐쇄된 수성 구획을 한정하는 하나의 지질 이중 막으로 구성된 구형 소낭이다. 상기 이중 막은 2 개의 지질 층, 즉 내부 층 및 외부 층(겹잎의 한 조각)으로 구성된다. 상기 지질 분자의 외부 층은 그의 친수성 머리 부분이 외부의 수성 환경을 향해 배향되 어 있고 그의 소수성 꼬리 부분은 상기 리포솜의 내부를 향해 아래를 가리키고 있다. 상기 내부 지질 층은 외부 층 바로 아래에 직접적으로 놓여있으며, 지질들은 그의 머리가 리포솜의 수성 내부와 면해있으며, 그의 꼬리는 외부 지질 층의 꼬리를 향해 있다.

"다층 리포솜"(또한 "다층 소낭" 또는 "복층 소낭"이라고도 지칭됨)은 하나 이상의 지질 이중 막으로 구성되며, 상기 막은 하나 이상의 폐쇄된 수성 구획을 한정한다. 상기 막들은 양파와 매우 흡사하게 상이한 막들이 수성 구획들에 의해 분리되도록 동심원상으로 배열된다.

본 발명에 사용된 "캡슐화" 및 "포착된"이란 용어는 BTSI의 리포솜 내부에의 혼입 또는 리포솜과의 회합을 지칭한다. BTSI는 리포솜의 내부 수성 공간, 이중 막의 내부 또는 외부 조각 내에 존재하거나, 일부는 상기 이중 막의 외부 조각에 묻혀있고 일부는 리포솜의 외부에 있거나, 또는 리포솜의 표면과 회합(예를 들어 정전기적 상호작용에 의해)되어 있거나, 또는 이들이 복합적으로 존재할 수 있다.

본 발명에 사용된 "부형제"란 용어는 약물 생성물의 안정성, 예를 들어 비 제한적으로 pH 안정성, 리포솜의 콜로이드 성질 안정성, 및 약물 물질 및 인지질의 화학적 안정성을 촉진시킬 수 있는 물질 또는 물질들을 지칭한다. 부형제의 예로는 비 제한적으로 1 가 음이온, 예를 들어 클로라이드, 아세테이트, 락토비오네이트 및 포르메이트; 2 가 음이온, 예를 들어 아스파르테이트, 숙시네이트 및 설페이트; 및 3 가 이온, 예를 들어 시트레이트 및 포스페이트의 산, 나트륨 또는 암모늄 형태가 있다.

"인지질"은 리포솜을 형성할 수 있는 임의의 하나의 인지질 또는 인지질들의 조합을 지칭한다. 포스파티딜콜린(PC), 예를 들어 달걀, 콩 또는 다른 식물 원으로부터 수득되는 것들, 또는 가변적인 지질 쇄 길이 및 불포화도를 갖는 부분적으로 또는 전적으로 합성된 것들이 본 발명에 사용하기 적합하다. 합성, 반 합성 및 천연 포스파티딜콜린 생성물, 예를 들어 비 제한적으로 디스테아로일포스파티딜콜린(DSPC), 수소화된 콩 포스파티딜콜린(HSPC), 콩 포스파티딜콜린(콩 PC), 달걀 포스파티딜콜린(달걀 PC), 디올레오일포스파티딜콜린(DOPC), 수소화된 달걀 포스파티딜콜린(HEPC), 디엘라이도일포스파티딜콜린(DEPC), 디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC) 및 디미리스토일포스파티딜콜린(DMPC)이 본 발명에 사용하기 적합한 포스파티딜콜린들이다. 이들 인지질은 모두 상업적으로 입수할 수 있다. 바람직한 PC는 HSPC 및 DSPC이고; 가장 바람직한 것은 HSPC이다.

또한, 포스파티딜글리세롤(PG) 및 포스파트산(PA)이 또한 본 발명에 사용하기 적합한 인지질이며, 여기에는 비 제한적으로 디미리스토일포스파티딜글리세롤(DMPG), 디라우릴포스파티딜글리세롤(DLPG), 디팔미토일포스파티딜글리세롤(DPPG), 디스테아로일포스파티딜글리세롤(DSPG), 디미리스토일포스파트산(DMPA), 디스테아로일포스파트산(DSPA), 디라우릴포스파트산(DLPA), 및 디팔미토일포스파트산(DPPA)이 있다. 디스테아로일포스파티딜글리세롤(DSPG)은 제형에 사용 시 바람직한 음으로 하전된 지질이다. 음으로 하전된 지질, 예를 들어 DSPG를 제형에 포함시키는 경우, 상기는 전체 지질의 20% 미만, 보다 바람직하게는 5% 미만의 몰 량으로 존재하는 것이 바람직하다. 다른 적합한 인지질로는 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜이노시톨, 및 라우르산, 미리스트산, 스테아로일 및 팔미트산 쇄를 함유하는 포스파트산이 있다. 또한, 인지질을 함유하는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)의 혼입도 본 발명에서 고려된다.

본 발명에 사용된 "비 경구"란 용어는 정맥 내(IV), 근육 내(IM), 피하(서브 Q) 또는 복강 내(IP) 투여를 지칭한다.

효능 있는 임의의 인지질:BTSI 비가 본 발명에서 고려된다. 바람직한 인지질:BTSI 몰비는 5:1 내지 75:1, 보다 바람직하게는 8:1 내지 20:1이다. 바람직한 리포솜 제형은 5:1 내지 2:1.5 범위의 인지질:콜레스테롤 몰비를 포함한다. 가장 바람직한 리포솜 제형은 2:1 PC:콜레스테롤이다. 바람직한 실시태양에서, 리포솜은 100 ㎚ 미만의 중간 크기를 갖는 단층 소낭이며, 여기에서 인지질은 수소화된 콩 포스파티딜콜린(HSPC)이며 콜레스테롤을 2:1의 몰비로 포함하고 BTSI는 GW1843이다.

일반적으로, 본 발명에 포함되는 제형의 제조 방법은 리포솜을 형성하는 용액의 제조로부터 시작한다. 이를 예를 들어 포스파티딜콜린과 콜레스테롤의 양을 칭량하고 이를 유기 용매, 바람직하게는 클로로포름, 또는 용매들의 혼합물, 바람직하게는 클로로포름과 메탄올에 용해시킴으로써 수행한다. 상기 용액을 예를 들어 회전 증발기, 분무 건조기 또는 다른 수단을 사용하여 증발시켜 필름 또는 분말과 같은 고체 액체 상을 형성시킨다. 바람직한 건조 방법은 분무 건조기를 사용하는 것이다. 이어서 상기 필름 또는 분말을 유효 약물을 함유하고 부형제가 존재하거나 존재하지 않는 수용액으로 수화시켜 리포솜 분산액을 제조한다. 상기 약물 용액의 pH 조절을 위한 산 또는 염기 이외에는 부형제를 사용하지 않는 것이 바람직하다. 상기 약물 용액 중에 분산된 액체 필름 또는 분말을 사용되는 인지질에 따라 약 25 ℃ 내지 약 70 ℃의 온도로 가열한다.

다층 리포솜은 분산액을 바람직하게는 진탕 또는 혼합을 통해 교반함으로써 제조한다. 단층 소낭은 에너지, 예를 들어 전단력, 또는 캐비테이션을 예를 들어 초음파 처리에 의해 또는 미세유동화 장치, 또는 압출 장치, 또는 균질화기 또는 프렌치 프레스를 사용하여 상기 액체 고체 상의 수성 분산액에 적용시킴으로써 제조한다. 리포솜을 또한 사출, 동결 및 해동, 지질로부터의 세제 용액의 투석을 사용하거나, 또는 리포솜 제조에 사용되는 다른 공지된 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 리포솜의 크기를 다양한 공지된 기법들, 예를 들어 에너지 적용 지속 기간을 사용하여 조절할 수 있다. 바람직하게는, 균질화 장치를 사용하여 HSPC:Chol 제형에 대해 3,000 내지 20,000 psi, 바람직하게는 10,000 내지 14,000 psi의 압력 및 대략 지질의 응집 전이 온도, 바람직하게는 55 ℃ 이상의 온도에서 100 ㎚ 미만의 직경을 갖는 단층 소낭을 제조한다.

포착되지 않은 부형제 및/또는 약물을 투석, 크기 배제 컬럼 크로마토그래피(세파덱스 G-50 수지) 또는 한외여과(또한 교차 여과로서도 알려짐)(50,000 내지 300,000 분자량 컷 오프)를 사용하여 수용액에 대해 완충 교환시킴으로써 리포솜 분산액으로부터 제거한다.

리포솜의 치료학적 용도는 통상적으로 유리 형태로는 독성인 약물의 전달을 포함할 수 있다. 리포솜 형태에서, 독성 약물을 독성이 일어날 수 있는 민감성 조직으로부터 떨어져서 상기 약물이 치료 효과를 발휘할 수 있는 소정의 영역으로 향하게 할 수 있다. 리포솜을 또한 연장된 기간에 걸쳐 약물을 서서히 방출시킴으로써 향상된 약물 동력학 프로파일을 통해 약물 투여 회수를 감소시키기 위해 치료학적으로 사용할 수 있다. 또한, 리포솜은 정맥 내 전달을 위한 소수성 약물의 수성 분산액의 제조 방법을 제공할 수 있다.

리포솜의 전달 경로는 또한 상기 리포솜의 체 내 분배에 영향을 미칠 수 있다. 리포솜의 수동적인 전달은 다양한 투여 경로, 예를 들어 비 경구적인 경로의 사용을 포함하지만, 다른 유효 투여형, 예를 들어 관절 내 주입, 흡입 미스트, 경구 활성 제형, 경피 이오토포레시스(iotophoresis) 또는 좌약이 또한 고려된다. 각각의 경로는 리포솜의 다양한 편재화를 낳는다.

본 발명은 또한 치료량 또는 유효량의 리포솜 BTSI를 바람직하게는 포유동물의 종양에 전달함으로써 약물 내성이고 약물 과민성인 종양의 성장을 억제하는 방법을 제공한다. 본 발명에서 제형의 개별적인 용량의 최적 양 및 투여 간격은 치료하려는 증상의 성질 및 정도, 투여 형태, 경로 및 부위, 및 치료하려는 특정 환자에 의해 결정될 것이며, 상기와 같은 최적 조건들은 통상적인 기법에 의해 결정될 수 있다. 또한, 당해 분야의 숙련가는 최적의 치료 과정, 즉 소정의 일 수 동안 하루에 제공되는 투여 회수가 통상적인 치료 결정 시험 과정을 사용하여 당해 분야의 숙련가들에 의해 확인될 수 있음을 알 것이다.

중복 약물 내성 암을 포함한, 모든 암과 관련된 종양의 성장 억제가 본 발명에 의해 고려된다. 개시된 리포솜 제형이 억제시키기에 특히 유용할 수 있는 암 은 결장직장암, 난소암, 폐암, 유방암, 머리 및 목 암, 전립선 암, 자궁암, 교모세포종 및 육종이다. 또한, 본 명세서에 개시되고 특허 청구된 제형들을 다른 항암 치료, 예를 들어 비 제한적으로 1) 난소암의 치료를 위한 탁솔(패클리탁셀) 및 백금 착체; 2) 결장직장암의 치료를 위한 5FU 및 류코보린 또는 레바미솔; 3) 폐암의 치료를 위한 시스플라틴 및 에토포시드; 4) 토포 I 억제제, 예를 들어 토포테칸, 이리노테칸 및 NX211, 및 5) 안트라사이클린, 예를 들어 독소루비신 또는 독실과 함께 사용할 수 있다.

도 1은 리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843) 또는 유리 GW1843을 수컷 스프래그 다우리 래트에게 정맥 투여한 후의 로그 전체 혈장 GW1843 농도 대 시간 곡선(평균 ± 표준편차)을 나타낸다. NX1843 데이터를 2 상 지수 등식에 대입하였다.

도 2는 HCT-8 처리된 종양의 종양 성장 곡선을 나타낸다.

도 3은 누드 마우스의 체중에 대한 NX1843 및 GW1843의 효과를 나타낸다.

도 4는 종양 성장 및 체중에 대한 NX1843의 용량-반응 효과를 나타낸다.

도 5는 몰트4 백혈병 모델에서의 NX1843의 효능을 나타낸다.

본 발명은 하기의 실시예를 참고로 보다 충분히 이해될 것이며, 이들 실시예는 본 발명을 예시하고자 하는 것이며 이를 제한하는 것은 아니다. 실시예 1은 GW1843의 리포솜 제형을 개시한다. 실시예 2는 4 개의 리포솜 제형들에 대한 단일 용량 약물 동력학을 개시한다. 실시예 3은 유리 GW1843과 GW1843의 리포솜 제형간의 혈장 약물 동력학 변수들의 비교를 개시한다. 실시예 4는 단일 NX1843 제형의 2 개의 독립적인 로트에 대한 비교를 개시한다. 실시예 5는 상이한 리포솜 제형들에 대한 비교와 혈장 약물 동력학에 대한 동물 체중의 효과에 대한 측정을 개시한다. 실시예 6은 단일의 정맥 내 일시주사 투여에 따른 혈장 약물 동력학을 개시한다. 실시예 7은 TS 억제제 GW1843 및 리포솜 제형 NX1843에 대한 전임상 시험을 개시한다.

실시예 1

GW1843의 리포솜 제형

본 발명에 사용된 인지질 및 콜레스테롤을 아반티 폴라 리피즈(Avanti Polar Lipids), 니폰 파인 케미칼(Nippon Fine Chemical), 리포이드(Lipoid) 또는 사이제나(Sygena)로부터 건조 분말로서 입수하고 추가의 정제 없이 사용하였다. 다른 모든 화학물질들은 시약 등급이며, 추가의 정제 없이 사용하였다.

GW1843의 리포솜 제조는 리포솜의 내부 공간 내에 약물을 캡슐화하는 것으로 이루어진다. 첫 번째로, 수소화된 콩 포스파티딜콜린 및 콜레스테롤을 함유하는 지질 필름 또는 분무 건조된 분말을 제조하였다. 분무 건조 방법을 사용하여 2:1 몰비의 HSPC:Chol을 제조하였다. 상기 지질을 클로로포름에 20% w/w 이하로 용해시켰다. 이어서 유기 용매 용액 중의 지질 성분을 72 내지 78 ℃의 질소 기체를 사용하여 분말로 건조시켰다. 4:1 몰비의 HSPC:Chol을 필름 방법을 사용하여 제조하였다. 지질 필름을 제조하기 위해서, 클로로포름과 메탄올(1:1 부피 비)의 용매 혼합물(273 ㎎/㎖)을 사용하여 지질 성분을 용해시켰다. 이어서 상기 용액을 65 ℃ 욕에서 가열하면서 상기 용액을 통해 질소를 흐르게 함으로써 용매를 제거하였다. 각각의 지질 분말 또는 필름을 7 내지 9의 pH 범위에서 포스페이트 완충액(용액 pH를 완충시키기 위해 사용됨)의 존재 또는 부재 하에 20 내지 225 ㎎/㎖의 농도로 유효 약물을 함유하는 수용액에 100 내지 200 ㎎/㎖ 이하의 최종 생성물 중 지질 농도로 수화시켰다. 샘플 NA-1022-63A, NA-1022-59A, GC-1007-27 및 GC-1020-36을 150 mM 포스페이트 완충액을 사용하여 제조하였다. 다른 샘플들은 포스페이트 완충액 없이 제조하였다. (AT-1084-95B)를 인지질의 상 전이 온도 이상에서 아세트산과 함께 배양시키고, 이에 의해 관찰된 낮은 pH의 최종 생성물이 생성될 수 있었다(표 1A). HSPC:콜레스테롤의 몰비는 4:1 내지 2:1이었다. 이어서 작은 단층 리포솜(<100 ㎚, 마이크로트랙(MicroTrac) 초미세 입자 분석기를 사용하여 측정한 중간 직경)이 탐침 초음파 처리를 사용하여 지질 상 전이 온도(∼55 ℃) 이상의 온도에서 상기 혼합물로부터 형성되었다. 리포솜의 수성 코어에 포착되지 않은 약물 및/또는 부형제를 일반적으로 크기 배제 컬럼 크로마토그래피(세파덱스 G-50 수지)를 사용하여 물 또는 9% 슈크로즈에 대한 완충액 교환에 의해 상기 리포솜 분산액으로부터 제거하였다. 물을 용출제로서 사용하는 제제에 대해서, 리포솜으로부터 포착되지 않은 약물 및/또는 부형제의 분리에 이어서 슈크로즈를 가하였다.

샘플들을 셀룰로즈 아세테이트 또는 폴리에테르 술폰으로 구성된 0.22 미크론 필터를 통해 주변 온도에서 여과하였다. 특성화 결과를 하기 표 1A에 나타낸다.

HSPC 이외의 인지질을 사용하여 다른 제형들을 제조하였다(표 1B). 음으로 하전된 포스파티딜콜린인 DSPG를 또한 하나의 제형에 사용하였다(표 1B). 지질 필름을 AL1230-058, AL1230-052, AL1230-048 및 AL1230-055에 대해 상술한 바와 같이 클로로포름 100 ㎎/㎖ 및 메탄올을 사용하여 제조하였다. 분무 건조된 분말을 AL1230-041에 대해 상술한 바와 같이 제조하였다. 각각의 지질 필름 또는 분말을 100 ㎎/㎖의 약물 용액(pH 7.5)으로 수화시켰다. 혼합 후에, 상기 수화된 지질을 ∼65 ℃ 및 ∼13,000 psi 압력에서 균질화기(니로(Niro)에서 제조된 판다(Panda))를 사용하여 균질화시켜 작은 단층 소낭을 제조하였다. 균질화 후에, 상기 리포솜을 주입 용 물에 대해 교차 여과시켜 캡슐화되지 않은 약물을 제거하였다. 교차 여과의 끝에서 슈크로즈를 상기 부피에 대략 9%의 농도로 가하였다. 상기 리포솜 용액들을 0.2 ㎛ 폴리에테르 술폰(PES) 필터를 통해 여과시켰다. 이들 제형에 대한 시험 결과를 표 1B에 나타낸다.

HSPC:Chol(2:1의 몰비) 제형에 대해서 추가적인 제형들을 상이한 부형제, 예를 들어 슈크로즈, 포스페이트, 시트레이트 및 숙시네이트를 사용하여 제조하였다. 2:1 몰비의 HSPC:Chol의 분무 건조된 분말을 100 ㎎/㎖의 약물 용액(pH 7.5)으로 수화시켰다. 혼합 후에, 상기 수화된 지질을 65 ℃ 및 13,000 psi 압력에서 균질화기(니로에서 제조된 판다)를 사용하여 균질화시켜 작은 단층 소낭을 제조하였다. 균질화 후에, 상기 리포솜을 주입 용 물에 대해 교차 여과시켜 캡슐화되지 않은 약물을 제거하였다. 교차 여과의 끝에서 슈크로즈를 상기 부피에 대략 9%의 농도로 가하였다. 추가적인 완충 부형제들을 목적하는 농도로 가하고(표 1C) 용액 pH를 조절하였다. 상기 리포솜 용액들을 0.2 ㎛ 폴리에테르 술폰(PES) 필터를 통해 여과시켰다. 이들 제형에 대한 일부의 시험 결과를 표 1C에 나타낸다. 상기 제형들의 안정성 데이터를 표 1D에 나타낸다. 상기 제형들은 2 내지 8 ℃에서 한 달 이상에 걸쳐 안정하다.

실시예 2

4 개의 리포솜 제형들에 대한 단일 용량 약물 동력학

단일의 정맥 내 일시주사 투여에 따른 래트에서의 유리 GW1843 및 4 개의 상이한 GW1843 리포솜 제형들(표 1A 참조: GC-1007-27, GC-1020-36, NA-1022-63A 및 NA-1022-59A)의 혈장 약물 동력학을 비교한다. 상기 리포솜 제형들은 리포솜을 장전하는데 사용되는 pH가 상이하였다. NX1843 로트 번호 GC-1007-27, GC-1020-36, NA-1022-63A 및 NA-1022-59A를 각각 pH 7.0, 7.4, 7.3 및 7.5에서 장전하였다.

물질 및 방법

총 15 마리의 스프래그 다우리 래트를 시험에 사용하였다. 각 래트의 체중은 대략 250 g이었다. 3 마리의 동물들을 각 그룹(총 5 개의 그룹)에 할당하였다. 개개의 동물을 체중 측정하고 이소플루렌 마취 하에 꼬리 정맥 내로 정맥 내 일시주사 투여에 의해 체중 ㎏ 당 1 ㎎을 투여하였다. EDTA 혈액 샘플을 이소플루렌 마취 하에 표 2에 나타낸 시점에서 취하여 바로 혈장으로 가공하였다. 혈장을 분석 때까지 -20 ℃에서 보관하였다.

혈장 샘플을 준비하고 확인되지 않은 HPLC 분석을 사용하여 GW1843에 대해 분석하였다. 혈장 단백질의 메탄올 침전에 이어서, 가용성 GW1843을 C-18 역상 컬럼 크로마토그래피에 의해 분리시켰다. 분리는 균등 방법에 의해 수행하였다. 실험 완충액은 80% 아세토니트릴 및 20% 100 mM 암모늄 아세테이트(pH=5.3)로 이루어졌다. 피크 아래의 면적 대 GW1843의 농도를 사용하여 표준 곡선을 작성하였다.

약물 동력학적 변수를 비 구획 분석(WinNonlin 버전 1.5)에 의해 측정하였다. 약물 동력학적 변수를 각 그룹에 대한 평균 농도 대 시간 값을 사용하여 각각의 실험 그룹에 대해 측정하였다. 하기의 변수들을 산출하였다: 최대 혈장 농도(Cmax); 무한 시간(AUCinf) 또는 최종 시점(AUClast)에 대해 외삽(外揷)한 혈장 농도 대 시간 곡선의 면적; 제거 반감기(Elim.T1/2); 평균 체류 시간(MRT) 혈장 소거(Cl) 및 정상 상태에서의 분배 부피(Vss).

결과

각 용량 그룹에 대한 혈장 농도를 표 2에 요약한다. 산정된 약물 동력학적 변수들을 표 3에 나타낸다.

비 구획 분석

비 구획 분석은 잠재적인 약물 동력학 모델에 대한 가정을 만들지 않는다. 혈장에서 최대로 달성되는 농도(Cmax)를 리포솜 제형에 대해 15.5 내지 24.8 ㎍/㎖의 범위 및 유리 약물에 대해 1.3 ㎍/㎖로 추정한다. 4 개의 리포솜 제형 모두에 대해 추정되는 제거 반감기(Elim. 1/2)는 유리 약물에 대한 것보다 현저하게 더 컸다. 리포솜 제형에 대한 제거 반감기는 모두 대략 18.5 시간인 반면, 유리 약물은 대략 0.5 시간의 제거 반감기를 나타내었다. 리포솜 제형에 대한 혈장 농도 대 시간 곡선(AUCinf) 하의 면적은 유리 약물이 단지 263(h x ng/㎖)인 것에 비해 266,740 내지 462,920(h x ng/㎖)의 범위였다. 이러한 결과는 리소폼 제형의 경우 2.16 내지 3.75 ㎖/h의 범위이고 유리 약물에 대해 3,805 ㎖/h인 혈장 소거를 반영한다.

최종적으로, 리포솜 제형에 대한 정상 상태에서의 분배 부피(Vss)는 래트의 예상 혈장 부피(31.2 ㎖/㎏)(3)의 2 내지 3 배 범위인 반면, 유리 약물은 상기 리포솜 제형보다 18 내지 30 배 더 큰 분배 부피를 가졌다.

실시예 3

유리 GW1843과 GW1843 리포솜 제형간의 혈장 약물 동력학적 변수의 비교

물질 및 방법

GW1843(M.W. 500.51 g/몰)을 글락소 웰컴 인코포레이티드(Glaxo Wellcome, Inc.)로부터 입수하고 수성으로서 현탁시켰다. 간단히, GW 1843 616.74 ㎎을 2N NaOH 1.4 ㎖에 현탁시켰다. 상기 용액을 용해될 때까지 혼합하였다. 상기 용해된 용액에 염수 30 ㎖을 가하였다. pH를 2N HCl로 7.15로 조절하였다. 마지막으로, 상기 용액을 염수로 46.545 ㎖로 만들었다. 공칭 농도는 13.25 ㎎/㎖이었다. 4.34 x 104 ㎝^-1 M^-1의 흡광 계수를 기준으로, 266 ㎚에서 0.1N 수산화 나트륨에서의 UV 흡광도는 농도를 결정하였다. UV 분광학에 의한 농도는 13.97 ㎎/㎖(예상치와 5.4% 차이)이었다. 분광학에 의해 측정된 값을 HPLC 분석에 기준으로 사용하였다. NX1843 로트 SMC-991-96(표 1A 참조)을 품질 조절 용액의 제조에 사용하였다.

343.91 내지 420.19 g 중량의 수컷 스프래그 다우리 래트를 시험에 사용하였다. 본 시험의 살아있는 동안의 단계를 동물 복지 및 보호에 대한 지침(실험 동물에 대한 보호와 사용에 관한 NRC 발행 지침서)에 따라 불더 콜로라도(Boulder Colorado)에서 수행하였다. IACUC 프로토콜 번호는 N98010이다. 동물들을 처리 전 및 처리 기간 동안 먹이와 물에 자유롭게 접근하게 하였다.

NX1843으로 처리한 개개의 동물들을 체중 측정하고 이소플루란 마취 하에 있는 동안 꼬리 정맥 내로 정맥내 일시 주사 투여에 의해 체중 ㎏ 당 1 ㎎의 용량으로 투여하였다.

동물들이 이소플루란 마취하에 있는 동안 GW1843 그룹에 대해 투여 후 5, 15, 30 및 45 분, 및 1, 1.5 및 2 시간 째에 일련의 EDTA-혈액 샘플(0.5 ㎖)을 수득하였다. NX1843 그룹에 대해서는, 투여 후 10, 30 및 90 분 및 4, 8, 24, 32, 48, 72 및 96 시간째에 일련의 EDTA-혈액 샘플(0.5 ㎖)을 수득하였다. 상기 EDTA-혈액 샘플을 즉시 혈장으로 가공하고 혈장 샘플을 분석 때까지 -20 ℃에서 보관하였다.

균등한 역상 고 성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 과정을 래트 EDTA-혈장 중의 전체 GW1843 농도의 신속한 측정을 위해 사용하였다. 혈장 단백질의 메탄올 침전(혈장 1 부에 대해 메탄올 2 부)에 이어서, 단백질을 14,000 x g에서 10 분간 원심분리에 의해 제거하였다. 가드 컬럼이 장착되어 있는 ZORBAX Eclipse^TM XBD-C18 컬럼(3 ㎜ x 15 ㎝)을 사용하여 가용성 GW1843(주입 부피 20 ㎕)을 분리시켰다. HPLC 완충액은 80% 100 mM 암모늄 아세테이트(pH 5.3) 및 20% 아세토니트릴로 이루어졌으며, 유속은 0.4 ㎖/분이었다. 총 실행 시간은 7 분이었으며 GW1843이 264 ㎚에서 자외선 흡광도에 의해 검출되었고 정량 분석되었다. 표준 곡선은 유리 GW1843을 가한 래트 EDTA-혈장으로 이루어진 반면 품질 조절 샘플은 NX1843을 가한 래트 EDTA-혈장으로 이루어졌다. 표준 곡선의 범위는 0.1 내지 30.0 ㎍/㎖이었다.

GW1843 또는 리포솜 캡슐화된 GW1843을 정맥 내 투여한 후의 전체 GW1843에 대한 약물 동력학적 변수를 WinNonlin(버전 1.5)을 사용하여 비 구획 방법에 의해 분석하였다. 로그/선형 사다리꼴 법칙을 사용하였다. 비 구획 분석에 대해서, 유리 GW1843의 경우에 모두 3 개의 시점을 제거 단계를 추정하는데 사용한 반면 NX1843의 제거 반감기를 추정하기 위해서는 마지막 5 개의 시점을 사용하였다. Cmax 값을 0 시간에 대한 외삽에 의해 추정하였다. 약물 동력학적 변수를 시험의 각 동물에 대해 측정하였다. 각 그룹에서 수득된 값들로부터 각 변수의 평균 및 표준편차를 측정하였다. 추정된 변수들에는 하기의 것들이 포함되었다:

Cmax 최대 혈장 농도.

AUC(0-최종) 측정된 최종 혈장 시점까지의 혈장 농도 대 시간 곡선 하의 면적.

ke 선형 회귀에 의해 추정된, 종말 제거 단계의 기울기.

t1/2 종말 제거 단계의 반감기(0.693/ke).

MRT(o-inf) 무한대로 외삽된 평균 체류 시간.

AUC(0-inf) 무한대로 외삽된 농도 대 시간 곡선 하의 면적.

투여에 따른 GW1843의 관찰된 소거(CL)를 하기와 같이 산출하였다:

CL = 용량_iv/AUC

처리 그룹들의 비교를 동일한 실험에서 수득된 데이터에 대한 짝을 이루지 않은 t-시험에 의해 수행하였다. <0.05의 p 값이 유의수준으로 간주되었다. 시험을 GraphPad Instat 버전 1.0(GraphPad Software)을 사용하여 수행하였다.

결과

GW1843 및 리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843)에 대한 비 구획 분석

GW1843 투여 그룹에 대한 전체 혈장 농도를 표 4에 요약한 반면 리포솜 캡슐 화된 GW1843(NX1843; SMC-991-96) 투여 그룹에 대한 상응하는 전체 혈장 농도를 표 5에 요약한다. GW1843 및 NX1843에 대해 수회 산정된 약물 동력학적 변수에 대한 추정 치를 각각 표 6 및 표 7에 제공한다. GW1843 투여 그룹에 대한 약물 동력학 값은 3 개의 측정된 모든 GW1843 혈장 농도에 의해 추정된 종말 반감기를 기본으로 한다. 이는 추정 상 상기 반감기를 낮게 어림하며, 따라서 AUC를 약간 낮게 어림한다. 그러나, 상기와 같은 접근 방법은 상기 용량 수준에서 제한된 데이터에 의해 사용이 부득이 하다.

도 1은 2 개의 용량 그룹에 대한 로그 농도 대 시간 곡선을 나타낸다.

NX1843을 공급받은 동물의 혈장 중의 최대로 달성된 농도(Cmax)에 대한 추정치는 전체 GW1843에 대해 22.1 내지 28.7 ㎍/㎖의 범위였다. 이러한 값은 유리 GW1843(범위 1.62 내지 1.99 ㎍/㎖)에 대해 관찰된 것보다 현저하게 더 컸다. 리포솜 제형의 추정된(평균 ± 표준편차) 종말 반감기(Elim. t1/2)는 16.6 ± 0.86인 반면, 유리 약물은 0.142 ± 0.007 시간의 제거 반감기를 나타내었다. 상기 리포솜 제형에 대한 GW1843 혈장 농도 대 시간 곡선[AUC(0-inf)] 하의 면적은 유리 약물에 대해 단지 0.27 ± 0.028 시간.㎍/㎖인 것에 비해 524 ± 55.9 시간.㎍/㎖이었다. 이러한 결과는 혈장 소거를 반영하며, 이는 리포솜 제형에 대해 1.93 ± 0.206 ㎖/시간이었고 유리 약물에 대해서는 3,740 ± 456 ㎖/시간이었다. 최종적으로, 리포솜 제형에 대한 정상 상태에서의 분배 부피(Vss)는 래트의 예상 혈장 부피(31.2 ㎖/㎏)(3)의 2 배 미만인 반면, 유리 약물은 상기 리포솜 제형보다 14.6 배 정도로 더 큰 분배 부피를 가졌다.

GW1843의 리포솜 캡슐화는 유리 약물에 비해 전체 혈장 노출에 있어서 대략 1,940 배의 증가를 제공하였다. 상기 값은 1,000 내지 1,760 배의 증가가 관찰된 실시예 2에서 수득된 값과 유사하다.

일반적으로, 본 실시예에서 관찰된 NX1843의 약물 동력학적 변수는 실시예 2에서 관찰된 것과 유사하였다.

본 실시예에서 NX1843 제형에 대해 측정된 18.0 시간의 평균 종말 반감기는 실시예 2에서 시험된 4 개의 NX1843 제형에 대해 수득된 임의의 종말 반감기(범위 17.7 내지 20.2 시간)와 크게 다르지 않았다.

실시예 4

단일 NX1843 제형에 대한 2 개의 독립적인 로트의 비교

NX1843 로트 번호 SMC-991-96과 SMC-1092-09(표 1A 참조)를 사용하였다.

207.16 내지 219.27 g 중량의 수컷 스프래그 다우리 래트를 시험에 사용하였다. 본 시험의 살아있는 동안의 단계를 동물 복지 및 보호에 대한 지침(실험 동물에 대한 보호와 사용에 관한 NRC 발행 지침서, 1996)에 따라 불더 콜로라도에서 수행하였다. IACUC 프로토콜 번호는 N98010이다. 동물들을 처리 전 및 처리 기간 동안 먹이와 물에 자유롭게 접근하게 하였다.

개개의 동물들을 체중 측정하고 이소플루란 마취 하에 있는 동안 꼬리 정맥 내로 정맥내 일시 주사 투여에 의해 체중 ㎏ 당 1 ㎎의 용량을 투여하였다.

동물들이 이소플루란 마취하에 있는 동안 투여 후 10, 30 및 90 분, 및 4, 8, 24, 32, 48, 72 및 96 시간(공칭 시간)째에 일련의 EDTA-혈액 샘플(0.5 ㎖)을 수득하였다. 상기 EDTA-혈액 샘플을 즉시 혈장으로 가공하고 혈장 샘플을 분석 때까지 -20 ℃에서 보관하였다.

혈장 중의 GW1843의 총 농도를 실시예 3에서와 같이 측정하였다.

리포솜 캡슐화된 GW1843의 정맥 내 투여 후의 전체 GW1843에 대한 약물 동력학적 변수를 실시예 3에 개시된 바와 같이 평가하였다.

처리 그룹들간의 비교를 데이터에 대한 짝을 이루지 않은 t-시험에 의해 수행하였다. <0.05의 p 값은 본페로니(Bonferroni) 보정을 사용하여 중복 비교를 수행한 경우를 제외하고 유의수준으로 간주되었다. 시험을 GraphPad Instat 버전 1.0(GraphPad Software)을 사용하여 수행하였다.

결과

리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843) 로트 SMC-1092-09 투여 그룹에 대한 혈장 농도를 표 8에 요약한 반면 NX1843 로트 SMC-991-96 투여 그룹에 대해 상응하는 혈장 농도는 표 9에 요약한다. NX1843 로트 SMC-1092-09 및 NX1843 로트 SMC-991-96에 대해 수회 산정한 약물 동력학적 변수의 추정치들을 각각 표 10 및 표 11에 제공한다.

NX1843 로트 SMC-1092-09를 공급받은 동물의 혈장 중의 최대로 달성된 농도(Cmax)에 대한 추정치는 전체 GW1843에 대해 16.9 내지 23.1 ㎍/㎖(평균=19.1 ㎍/㎖)의 범위였다. NX1843 로트 SMC-991-96을 공급받은 동물의 혈장 중의 최대 로 달성된 농도(Cmax)에 대한 추정치는 전체 GW1843에 대해 15.0 내지 18.4 ㎍/㎖(평균=16.8 ㎍/㎖)의 범위였다. 각 그룹에 대한 평균 Cmax 값들에서 관찰된 차이는 크게 상이하지 않았다(p=0.2161). 로트 SMC-1092-09 및 로트 SMC-991-96에 대해 수득된 추정된(평균 ± 표준 편차) 종말 반감기(Elim. t1/2)는 각각 12.2 ± 0.06 시간 및 11.7 ± 0.96이었다. 상기 두 로트에 대해 수득된 반감기에서 관찰된 차이는 현저하게 상이하지 않았다(p=0.3386). 마찬가지로, 로트 SMC-1092-09(70.8 ㎖/㎏) 및 로트 SMC-1092-991-96(65.8 ㎖/㎏)에 대한 Vss의 평균에 대해 관찰된 차이는 현저하지 않았다(p=0.2784). 마지막으로, 2 개 로트의 AUC(0-inf)[SMC-1092-09에 대해서 276 ± 21.9 ㎍.시간/㎖ 및 SMC-991-96에 대해서 293 ± 53.8 ㎍.시간/㎖(p=0.5797)], 또는 2 개 로트의 소거[SMC-1092-09에 대해서 3.65 ± 0.28 ㎖/시간.㎏ 및 SMC-991-96에 대해서 3.50 ± 0.59 ㎖/시간.㎏(p=0.6623)] 사이에 관찰된 차이는 현저하지 않았다.

본 실시예에서 로트 SMC-991-96에 대해 수득된 다수개의 약물 동력학적 변수들은 실시예 3에서 상기 동일한 로트에 대해 수득된 것과 현저하게 상이하였다. 상기 두 실시예는 모두 동일한 용량, 투여 경로 및 래트 균주를 사용하였다(실시예 3 참조). 2-테일드, 짝을 이루지 않은 t-시험을 사용하여 5 개의 상이한 약물 동력학적 변수들에 대한 통계학적 유의수준을 시험하였다. 5 개의 비교를 수행하였기 때문에 p<0.01의 값이 유의수준에 필요하도록 본페로니 보정을 수행하였다.

평균에서 관찰된 차이는 시험된 5 개의 변수 모두에 대해 통계학적으로 유의수준이었다. 통계학적으로 의미있는 차이가 혈장 소거(p=0.0024), 정상상태에서 의 분배 부피(p=0.0027), 혈장 종말 반감기(p=0.0003), Cmax(p=0.0022) 및 AUC(0-inf)(p=0.0010)에 대해 관찰되었다.

본 실시예의 AUC(0-inf)는 실시예 3에서 성취된 AUC(0-inf)의 55%였다. 처음 24 시간에 걸친 AUC[AUC(0-24)]의 검사는 본 실시예의 로트 SMC-991-96(206 ± 29.4 ㎍.시간/㎖)이 단지 실시예 3에서 동일한 로트에 대해 성취된 AUC(0-24)(320 ± 27.5 ㎍.시간/㎖)의 64%였음을 보인다. 상기 데이터는 혈장 노출 차이의 대부분이 처음 24 시간 내에 관찰됨을 밝혔다. 그러나, AUC(0-24)가 실시예 3에서는 AUC(0-inf)의 61%인 반면, 본 시험에서는 70%였으며, 이는 본 시험에서 가장 빠른 종말 단계가 또한 전체 혈장 노출의 감소에 한 역할을 하였음을 시사한다.

로트 SMC-1092-09와 SMC-991-96 사이에 통계학적으로 의미있는 약물 동력학적 차이는 관찰되지 않았다.

로트 SMC-991-96에 대해서 본 실시예와 실시예 3의 결과 간에 통계학적으로 의미있는 약물 동력학적 차이가 관찰되었다.

본 실시예와 실시예 3 간의 동물 체중의 차이가 로트 SMC-991-96에 대한 시험들간에 관찰된 약물 동력학적 차이에 기여하는 듯 하였다.

실시예 5

상이한 리포솜 제형들의 비교 및 혈장 약물 동력학에 대한 동물 체중의 효과 측정

물질 및 방법

NX1843 로트 번호 SMC-1092-09, AT-1084-97B, AT-1084-91B 및 AT-1084-88B를 사용하였다.

207.78 내지 228.76 g 중량의 수컷 스프래그 다우리 래트를 모든 로트를 평가하는데 사용하였다. 또한, 403.12 내지 418.28 g 중량의 큰 수컷 스프래그 다우리 래트를 큰 래트에서 로트 AT-1084-91B를 평가하는데 사용하였다. 본 시험의 살아있는 동안의 단계를 동물 복지 및 보호에 대한 지침(실험 동물에 대한 보호와 사용에 관한 NRC 발행 지침서, 1996)에 따라 불더 콜로라도에서 수행하였다. IACUC 프로토콜 번호는 N98010이다. 동물들을 처리 전 및 처리 기간 동안 먹이와 물에 자유롭게 접근하게 하였다.

개개의 동물들을 체중 측정하고 꼬리 정맥 내로 정맥내 일시 주사 투여에 의해 체중 ㎏ 당 1 ㎎의 용량을 투여하였다.

투여 후 10, 30 및 90 분, 및 4, 8, 24, 32, 48, 72 및 96 시간째에 일련의 EDTA-혈액 샘플(0.5 ㎖)을 수득하였다. 상기 EDTA-혈액 샘플을 즉시 혈장으로 가공하고 혈장 샘플을 분석 때까지 -20 ℃에서 보관하였다. 혈장 샘플을 이소플루란 마취 하에서 얻었다.

혈장 중의 GW1843의 총 농도를 실시예 3에서와 같이 측정하였다.

GW1843 또는 리포솜 캡슐화된 GW1843의 정맥 내 투여 후의 전체 GW1843에 대한 약물 동력학적 변수를 실시예 3에 개시된 바와 같이 평가하였다.

통계학적 시험을 짝을 이루지 않은 데이터에 대해 일방적인 ANOVA에 의해 수행하였다. <0.05의 p 값은 유의수준으로 간주되었다. 시험을 GraphPad Instat 버전 1.0(GraphPad Software)을 사용하여 수행하였다.

결과

동물들을 5 개의 그룹 중 하나에 할당하였다(각 그룹에서 n=4). 그룹 A-D는 평균 체중 223 g의 동물들로 구성된 반면, 그룹 E는 평균 체중 409 g의 동물들로 구성되었다. 각 그룹의 동물들에 리포솜 캡슐화된 GW18343 제형 1 ㎎/㎏을 정맥 내 일시주사로 투여하였다. 그룹 A에는 염기성 내부 pH를 갖는 제형인 로트 AT-1084-97B를 투여하였다. 그룹 B, C 및 E에는 각각 표준 NX1843 제형을 투여하였다. 그룹 B에는 로트 SMC-1092-09로부터의 시험 제품을 투여한 반면 그룹 C 및 E에는 로트 AT-1084-91B로부터의 시험 제품을 투여하였다. 그룹 D 동물에게는 지질 대 약물 비율이 높은 로트인 로트 AT-1084-88B를 투여하였다. 각 투여 그룹에서 각 동물에 대한 전체 혈장 GW1843 농도를 표 12 내지 16에 나타내었다. 각 투여 그룹에서 각 동물에 대해 비 구획 분석에 의해 측정된 다수의 산정된 약물 동력학적 변수들에 대한 추정치를 표 17 내지 21에 나타내었다. 일방적인 ANOVA를 5 개 그룹 모두의 소거 시[용량(㎍/㎏)/AUC(0-inf)(㎍.시간/㎖)]에 수행하였다. 상기 시험은 그룹들 간에 현저한 차이를 밝혀내었다(p<0.0001). 7 개의 후 시험(그룹 A와 B, A와 C, B와 C, B와 D, B와 E, C와 D 및 C와 E 사이)을 수행하고 이에 대한 결과를 하기에서 논의한다.

동일한 NX1843 제형의 2 개의 독립적인 로트에 대한 약물 동력학적 변수의 시험 내 분석

NX1843의 동일한 표준 리포솜 제형의 2 개의 독립적인 로트를 동등한 크기(∼220 g)의 래트에서 비교하였다. 그룹 B 동물에 로트 SMC-1092-09를 투여한 반면 그룹 C 동물에는 로트 AT-1084-91B를 투여하였다. 그룹 B에 대해 수득된 혈장 종말 반감기(10.6 ± 1.10 시간)는 그룹 C에 대해 수득된 종말 반감기(11.7 ± 0.535 시간)와 명백히 상이하지 않았다. 그룹 B에 대해 수득된 AUC(0-inf)(253 ± 28.4 ㎍.시간/㎖)가 그룹 C에 대해 수득된 AUC(0-inf)(347 ± 51.2 ㎍.시간/㎖)보다 적은 것으로 나타났지만, 소거에 대한 일방적인 ANOVA 분석에 따른 후 시험은 그룹 B와 그룹 C 간의 소거에서 통계학적으로 의미있는 차이를 나타내지 않았다(p=0.0606).

상기 혈장 소거 결과를 또한 "최저 유의수준"으로서 볼 수도 있지만, GW1843의 동일한 리포솜 캡슐화된 제형(NX1843)의 독립적인 로트에 대한 유사한 시험 내 비교는 명백한 결과를 제공하였다(실시예 4). 이 시험에서, 한 그룹의 수컷 스프래그 다우리 래트는 로트 SMC-1092-09 1 ㎎/㎏을 공급받은 반면, 다른 그룹의 수컷 스프래그 다우리 래트는 로트 SMC-991-96 1 ㎎/㎏을 공급받았다. 상기 시험은 혈장 소거를 포함한 분석된 임의의 혈장 약물 동력학적 변수에 있어서 상기 2 개의 그룹들 간에 통계학적으로 의미있는 차이를 보이지 않았다(p=0.6623).

표 22는 NX1843의 표준 제형의 3 개의 독립적인 로트들에 대한 2 개의 시험(실시예 4 및 5)으로부터 수득된 전체 GW1843 혈장 약물 동력학적 변수를 요약한다. 상기 데이터는 모두 시험 제품 1 ㎎/㎏을 정맥 내 일시주사 투여한 후의 동일 체중의 수컷 스프래그 다우리 래트들로부터 측정되었다. 상기 데이터 전체로 보아 전 체 GW1843 혈장 약물 동력학적 변수들의 로트 간 차이는 동일한 리포솜 제형의 상이한 로트 사이에서 관찰되지 않았다.

같은 중량의 래트에서 GW1843의 표준 리포솜 제형(NX1843)의 동일한 로트를 사용한 2 개의 시험으로부터 수득된 약물 동력학적 변수들에 대한 시험 간 분석

본 실시예에서, 래트(그룹 B)에게 로트 SMC-1092-09 1 ㎎/㎏을 정맥 내 일시주사로 투여하였다. 실시예 4에서, 유사한 체중의 래트 그룹들에게 또한 로트 SMC-1092-09 1 ㎎/㎏을 정맥 내 일시주사로 투여하였다. 본 실시예 및 실시예 4(시험 R990198-138E)에서 시험 제품의 상기 로트를 공급받은 래트에 대해 수득된 전체 GW1843 혈장 약물 동력학적 변수들을 표 22에 나타낸다. 상기 시험들간에 명백한 차이를 탐지할 수 없다. 본 실시예(시험 R2000007-138E)에서 그룹 B에 대해 수득된 혈장 종말 반감기(10.6 ± 1.10 시간)는 실시예 4(시험 R990198-138E)에서 SMC-1092-09에 대해 수득된 종말 반감기(12.2 ± 0.06 시간)와 명백하게 상이하지 않았다. 마찬가지로, 본 실시예에서 그룹 B에 대해 수득된 혈장 소거(3.99 ± 0.417 ㎖/시간.㎏)는 실시예 4(시험 R990198-138E)에서 SMC-1092-09 그룹에 대해 수득된 혈장 소거(3.65 ± 0.283 ㎖/시간.㎏)와 명백하게 상이하지 않았다.

높은 내부 pH 및 높은 지질 대 약물 비의 제형

2 개의 대안적인 리포솜 GW1843 제형들의 약물 동력학적 프로파일을 대략 220 g의 동물에서 검사하였다. 그룹 A에는 높은 내부 pH를 함유하는 제형을 공급한 반면 그룹 D에는 증가된 지질 대 약물 비의 제형을 공급하였다. 비교를 위해서, 그룹 B와 C(또한 ∼220 g 동물들로 구성됨)에게 2 개의 독립적인 로트의 GW1843의 표준 리포솜 제형(NX1843)을 공급하였다.

상기 표준 제형을 공급받은 고 내부 pH 그룹 및 2 개의 그룹들에 대한 혈장 약물 동력학적 변수들 간에는 명백한 차이가 없었다. 중요한 것은 그룹 A의 종말 반감기(9.83 ± 0.215 시간)가 그룹 B(10.6 ± 1.10 시간) 또는 그룹 C(11.7 ± 0.535 시간)에 대해 관찰된 종말 반감기와 명백히 상이하지 않다는 것이다. 마찬가지로, 그룹 A에 대해 수득된 AUC(0-inf)(283 ± 23.7 ㎍.시간/㎖)가 그룹 B(253 ± 28.4 ㎍.시간/㎖)와 그룹 C(347 ± 51.2 ㎍.시간/㎖)에 대해 수득된 AUC(0-inf)의 사이에 있었다. 소거에 대한 일방적인 ANOVA 분석에 이은 후 시험은 그룹 A(3.56 ± 0.295 ㎖/시간.㎏)와 그룹 B(3.50 ± 0.589 ㎖/시간.㎏) 사이, 또는 그룹 A와 그룹 C(2.94 ± 0.489 ㎖/시간.㎏) 사이의 소거에서 통계학적으로 의미 있는 차이를 보이지 않았다.

높은 지질 대 약물 비 그룹(그룹 D)에 대해 관찰된 혈장 약물 동력학적 변수와 표준 제형을 공급받은 2 개의 그룹(그룹 B 및 C)간에는 명백한 차이가 있었다. 중요한 것은 그룹 D에 대한 종말 반감기(11.7 ± 1.88 시간)가 그룹 B(10.6 ± 1.10 시간) 또는 그룹 C(11.7 ± 0.535 시간)에 대해 관찰된 종말 반감기와 명백하게 상이하지 않다는 것이다. 그러나, 그룹 D에 대해 수득된 AUC(0-inf)(169 ± 28.8 ㎍.시간/㎖)는 그룹 B(253 ± 28.4 ㎍.시간/㎖) 또는 그룹 C(347 ± 51.2 ㎍.시간/㎖)에 대해 수득된 AUC(0-inf)보다 작은 것으로 나타났다. 소거에 대한 일방적인 ANOVA 분석에 이은 후 시험은 그룹 D와 그룹 B(p=0.0038) 및 그룹 D와 그룹 C(p=0.0005) 간에 통계학적으로 의미 있는 차이를 보였다.

큰 래트 대 작은 래트에서의 NX1843 약물 동력학

수컷 스프래그 다우리 래트에 대한 선행의 약물 동력학 시험(실시예 2, 3 및 실시예 4)의 조사 결과 리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843)의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시 주사 투여에 따른 전체 GW1843 혈장 소거(㎖/시간.㎏)는 동물 체중에 따라 변할 수 있음을 밝혔다. 이러한 가설을 시험하기 위해서, 본 시험에 2 그룹의 수컷 스프래그 다우리 래트에게 동일한 로트의 NX1843 1 ㎎/㎏을 정맥 내 일시 주사로 투여하였다(그룹 C 및 E). 동물 중량은 그룹 C에서는 평균 226 g인 반면 그룹 E에서는 평균 409 g이 되도록 그룹들간에 차이가 있었다. 생성된 약물 동력학적 변수에 대한 조사는 추정 가능한 차이를 밝혔다. 예를 들어, 그룹 E 동물의 혈장 종말 반감기(14.0 ± 2.03 시간)는 그룹 C 동물(11.7 ± 0.535 시간)보다 더 길었다. 마찬가지로, 그룹 E 동물의 Cmax(25.2 ± 1.33 ㎍/㎖)는 그룹 C 동물(20.4 ± 1.23 ㎍/㎖)보다 더 컸다. 이러한 차이는 또한 그룹 C와 E 간의 AUC(0-inf)의 차이를 반영한다. 그룹 E 동물은 549 ± 58.0 ㎍.시간/㎖의 AUC(0-inf)를 갖는 반면 그룹 C 동물은 347 ± 51.2 ㎍.시간/㎖의 AUC(0-inf)를 가졌다. 그러나, 그룹 C와 E 간의 소거에 대한 일방적인 ANOVA 분석은 단지 "최저 유의수준" 결과(p=0.0522)를 나타내었다. 하지만 선행 실시예들(시험 번호 R990164-138E 및 R990198-138E)로부터의 결과들을 조합할 때 큰 동물과 작은 동물간의 차이는 분명해진다. 표 23은 큰 래트와 작은 래트 모두에서 시험된 NX1843의 동일한 제형에 대한 2 개의 독립적인 로트들로부터 수득된 혈장 약물 동력학적 변수들을 조합한 결과를 나타낸다. 큰 동물에서 2 개의 실험은 유사한 소거 값, 즉 1.93 ± 0.207 ㎖/시간.㎏ 및 1.84 ± 0.191 ㎖/시간.㎏을 가졌다. 그러나, 보다 작은 동물에서, 2 개의 독립적인 실험(3.50 ± 0.589 ㎖/시간.㎏ 및 2.94 ± 0.489 ㎖/시간.㎏)에서 보다 큰 소거 값이 수득되었다. 따라서 상기 조합된 데이터로부터 ㎍/㎏ 기준으로 측정 시 소거 값들이 상이함은 명백하다. 그러나, 상기 소거를 전체 용량(㎖/시간)을 사용하여 측정하는 경우, 상기 수득된 소거 값은 큰 동물과 작은 동물에 대해 유사하다. 전체 투여 방법에 의해 표 23에 나타낸 소거 값에 대한 재 계산은 대략 220 g 동물로 구성된 2 개의 시험에 대해 0.73 ㎖/시간 및 0.65 ㎖/시간을 제공하고 대략 400 g 동물로 구성된 2 개의 시험에 대해서는 0.75 ㎖/시간 및 0.74 ㎖/시간을 제공한다.

동등한 크기의 동물에서, 본 실시예 및 실시예 4에서 수득된 리포솜 캡슐화된 GW1843 제형(로트 SMC-1092-09)의 혈장 소거(㎖/시간.㎏) 간에는 통계학적으로 의미 있는 차이가 관찰되지 않았다.

동등한 크기의 동물에서 동일한 리포솜 캡슐화된 GW1843 제형(NX1843)의 2 개의 독립적인 로트(SMC-1092-09 및 AT-1084-91B) 간에는 통계학적으로 의미 있는 차이가 관찰되지 않았다.

표준 제형에 대한 혈장 제거(㎖/시간.㎏)의 차이는 동물 체중을 기준으로 관찰된다. 이러한 결론은 본 실시예에서 크고 작은 동물에서의 로트 AT-1084-91B의 비교 및 본 실시예 및 실시예 4에서 작은 동물에서의 로트 SMC-1092-09의 비교 및 실시예 4에서 작은 동물 및 실시예 3에서 큰 동물에서의 로트 SMC-996-91의 비교를 근거로 한다. 따라서, PK 차이를 설명하기 위해 실시예 4에 제공된 가설이 입증되었다.

혈장 소거는 [전체 투여(㎍)/AUC(0-inf)(㎍.시간/㎖)]=㎖/시간으로서 계산 시 큰 래트와 작은 래트 간에 일정한 것으로 보인다.

동등한 크기의 동물에서, 높은 지질 대 약물 비의 제형(로트 AT-1084-88B)은 표준 제형(로트 SMC-1092-09 및 AT-1084-91B) 또는 높은 내부 pH 제형(로트 AT-1084-97B)보다 더 신속하게 소거되지만, 여전히 유리 GW1843(실시예 2 및 3)보다는 훨씬 더 느리게 혈장으로부터 소거되었다.

동등한 크기의 동물에서, 높은 내부 pH 제형(로트 AT-1084-97B)은 표준 제형(로트 SMC-1092-09 및 AT-1084-91B)과 유사한 혈장 소거 값을 가졌다. 따라서, 상기 제형은 또한 유리 GW1843(실시예 2 및 3)보다는 훨씬 더 느리게 혈장으로부터 소거되었다.

실시예 6

단일 정맥 내 일시주사 투여에 따른 혈장 약물 동력학

본 실시예의 목적은 리포솜 캡슐화된 GW1843의 대체 제형들에 대한 분석으로 확장시키는 것이다. 본 실시예에서 4:1의 HSPC 대 콜레스테롤 몰비로 이루어진 제형을 시험하였다. 다른 제형들은 2:1 몰비로 이루어졌다. 콜레스테롤은 리포솜 구조를 안정화시키는 것으로 공지되어 있으며, 따라서 증가된 HSPC 대 콜레스테롤 비는 혈장 제거를 증가시키는 것으로 예상된다.

결과

NX1843 로트 번호 AT-1105-32(표 1A)를 사용하였다.

244.57 내지 257.19 g 중량의 수컷 스프래그 다우리 래트를 시험에 사용하였다. 본 시험의 살아있는 동안의 단계를 동물 복지 및 보호에 대한 지침(실험 동물에 대한 보호와 사용에 관한 NRC 발행 지침서, 1996)에 따라 불더 콜로라도에서 수행하였다. 동물들을 처리 전 및 처리 기간 동안 먹이와 물에 자유롭게 접근하게 하였다.

개개의 동물들을 체중 측정하고 꼬리 정맥 내로 정맥내 일시 주사 투여에 의해 체중 ㎏ 당 1 ㎎의 용량을 투여하였다.

투여 후 10, 30 및 90 분, 및 4, 8, 24, 32, 48 및 72 시간째에 EDTA-혈액 샘플(0.5 ㎖)을 수득하였다. 상기 동물들이 마취(이소플루란) 하에 있는 동안 샘플을 취하고 상기 EDTA-혈액 샘플을 즉시 혈장으로 가공하고 혈장 샘플을 분석 때 까지 -20 ℃에서 보관하였다.

혈장 중의 GW1843의 총 농도를 실시예 3에서와 같이 측정하였다.

리포솜 캡슐화된 GW1843의 정맥 내 투여 후의 전체 GW1843에 대한 약물 동력학적 변수를 실시예 3에 개시된 바와 같이 평가하였다.

처리 그룹들간의 비교를 동일한 실험에서 수득된 데이터에 대한 짝을 이루지 않은 t-시험에 의해 수행하였다. <0.05의 p 값은 유의수준으로 간주되었다. 시험을 GraphPad Instat 버전 1.0(GraphPad Software)을 사용하여 수행하였다.

결과

각 동물에 대한 전체 GW1843 혈장 농도를 표 24에 요약한다. 리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843)(4:1의 HSPC 대 콜레스테롤 몰비 제형)에 대한 다수의 산정된 약물 동력학적 변수들의 추정치를 표 25에 제공한다.

혈장 중의 전체 GW1843에 대해 최대로 달성된 농도(Cmax)는 14.4 ㎍/㎖(래트 #2) 내지 17.2 ㎍/㎖(래트 #3)의 범위로 추정되었다. 4 마리의 동물 모두에 대한 평균 Cmax는 15.8 ㎍/㎖이었다. 추정된(평균 ± 표준 편차) 종말 반감기(Elim. t1/2)는 표준 리포솜 캡슐화된 GW1843 제형에 대해 관찰된 범위 내에 있는 9.92 ± 1.98 시간이었다. 전체 GW1843 혈장 농도 대 시간 곡선[AUC(0-inf)] 하의 면적은 213 ± 22.8 시간.㎍/㎖이었다. 상기 곡선 아래의 면적은 표준 리포솜 제형에 대해 관찰된 것보다 다소 적은 것으로 251 내지 342 시간.㎍/㎖이다. 이는 4:1 HSPC 대 콜레스테롤 제형에 대해 수득된 혈장 소거 값(4.74 ± 0.472 ㎖/(시간.㎏))을 반영한다. 거의 동등한 크기의 동물을 사용한 4 개의 실험(실시예 4 및 5)에서 표준 제형의 3 개의 상이한 로트에 대해 수득된 평균 소거 값의 범위는 3.50 내지 3.99 ㎖/(시간.㎏)이었다.

선행의 시험들은 혈장 소거가 ㎖/(시간.㎏)를 기준으로 동물 체중의 증가에 따라 감소함을 보였다(실시예 5). 본 시험에서 동물들의 평균 체중은 250 g인 반면, 표준 리포솜 캡슐화된 GW1843 제형의 비교 시험은 평균 220 g(4 개의 시험에 대한 동물들의 평균 체중 범위는 215 내지 224 g이었다) 중량의 래트를 사용하여 수행되었다. 따라서, 본 시험에서 대략 220 g의 체중을 갖는 동물들의 사용은 관찰된 차이를 증가시킬지도 모른다.

4:1의 지질 대 콜레스테롤 비로 이루어진 NX1843 제형(로트 AT-1105-32)은 표준 리포솜 제형보다 약간 더 빠르게 혈장으로부터 소거되었다. 로트 AT-1105-32에 대한 소거는 4.74 ± 0.472 ㎖/(시간.㎏)이었다. 4 개의 실험에서 3 개의 상이한 표준 제형 로트들에 대해 거의 동등한 크기의 동물들에서 수득된 평균 소거 값의 범위는 3.50 내지 3.99 ㎖/(시간.㎏)이었다. 상기 제형(로트 AT-1105-32)은 여전히 유리 GW1843(실시예 2 및 3 참조) 보다 현저하게 더 느리게 혈장으로부터 소거되었다.

실시예 7

TS 억제제 GW1843U89 및 리포솜 제형 NX1843에 대한 전임상 시험

방법

암컷 Nu/Nu 마우스(18-24 g, 10-14 주 된 것)를 할란 스프래그 다우리(Harlan Sprague Dawley)로부터 입수하고 소형 분리기 여과 선반에 수용하고 여과된 산성 수와 멸균 실험실용 먹이를 자유롭게 제공하였다. 인간 결장 종양 이종이식편 모델(HCT-8, 티미딘 키나제(TK)-/-)를 유세프 엠 러스텀 박사(Dr. Youcef M. Rustum, Roswell Park, Buffalo, New York)로부터 입수하여 티미딜레이트 신타제 억제제의 평가를 위한 유용한 모델로서 연구소 내에서 안정시켰다. 동물들을 종양 세포 이식 전에 1 주일 동안 그들의 새로운 환경에 적응시켰다. 수확된 종양 세포를 단일의 피하 부위로 마우스의 옆구리 겨드랑이 영역에 주입함으로써 종양을 확립시켰다. 종양을 대략 200 ± 50 ㎣의 크기까지 성장시켰다. 이어서 동물들을 체중에 따라 분류하고, 우리 당 4 마리의 동물들을 분류하고 영구적인 식별을 위해서 문신을 하였다. 각각 8 마리의 종양 함유 마우스로 이루어진 그룹들에게 꼬리 정맥을 통해 IV 일시주사에 의해 실험 약제를 매주 투여하였다. 종양 부피를 식 (L x W²/2) 및 체중을 사용하여 버니어 캘리퍼스에 의해 직각으로 측정하였으며 이를 매주 2 회 수집하였다. 데이터를 체중 변화 % 대 시간(일 수), 및 종양 부피 증가% 대 일 수로서 그래프로 작성하였다.

실험 결과로부터 항종양 활성을 계산하는 방법은 하기와 같다:

실험 데이터의 평가에 통상적으로 사용되는 억제 및 퇴행 계산:

% T/C = 100 x 1 - (T/C)

상기 식에서,

T는 처리된 그룹이 컷 오프 크기(2 g)에 도달하기 위한 (평균)일 수이고,

C는 대조용 그룹이 컷 오프 크기(2 g)에 도달하기 위한 (평균)일 수 이며,

10% 미만의 % T/C 값은 현저한 활성을 가리키고;

≤20%의 % T/C 값은 보통의 활성을 가리킨다.

종양 억제%:

% TGI = 100(W_c-W_t)/W_c = 100(1-W_t/W_c)

상기 식에서,

W_c는 시간 x에서 대조용 그룹의 평균 종양 중량이고,

W_t는 시간 x에서 처리된 그룹의 평균 종양 중량이다.

그룹들간에 출발 종양 크기가 큰 경우, 대조용 그룹과 처리된 그룹의 종양 성장의 상대적인 차이(RW)를 사용하여 초기 차이를 보정한다.

RW = W_i/W_o(여기에서 W_i는 시간 x에서 평균 종양 중량이고, W_o는 초기 평균 종양 중량이다).

퇴행% = 100(W_o-W_i)/W_o이고, 여기에서 W_o는 처리 초기에서 처리된 그룹의 평균 종양 중량이고, W_i는 처리 후 소정의 시간 x에서 상기 그룹의 평균 종양 중량이다. 자주, 최종 요법 투여 후 시간 x는 24 내지 48 시간이다.

실험 결과를 평가하는데 사용되는 성장 지연 측정:

sc 성장 종양에 대한 종양 세포사 계산:

log₁₀세포사(그로스) = [T-C 값(일수)/(3.32)(T_d)]

상기에서,

T-C는 소정의 종점에 도달하기 위한 처리된 종양과 대조용 종양간의 시간 차이(일수)이고;

T_d는 대조용 종양의 지수 증식(100 내지 800 ㎎ 범위)에 대한 로그-선형 증식 플롯으로부터 가장 잘 정합되는 직선으로부터의 종양 부피 배가 시간(일수)이다.

상기 T-C 값으로부터 처리 기간의 지속을 감하고 이어서 3.32 x T_d로 나눔으로써 상기 T-C 값을 순 log₁₀ 종양 세포사로 전환시킨다.

HCT-8, TK-/- 이종 이식 모델

NMX-427로 나타내는 초기 실험은 2 개의 상이한 용량 수준, 즉 50 및 100 ㎎/㎏/일 x 17 일에서 GW1843U89의 효과를 시험하였다. 대조용 그룹에는 비히클만을 공급하였다. 상기 실험은 상기 두 용량 그룹들 간에는 거의 차이가 없으며, 상기 두 약물 그룹은 상기 50 및 100 ㎎/㎏ 그룹에 대해 대조군과 각각 3.0 및 3.3의 로그 세포사로 현저한 차이가 있었음을 입증하였다. 2 개의 항구적인 치유가 존재하는데, 상기 용량 그룹들 각각에서 하나가 57 일째에 상기 실험을 종결할 때 까지 남아있었다. 전체 체중 손실에 의해 측정된 부작용 독성은 상기 두 약물 처리된 그룹에서 최소였으며, 대조용 그룹에서 가장 컸다. 이는 일부 능동적으로 성장하는 종양에 의해 유도되는 효과인 종양 유발된 건강 불량 상태를 반영할 수 있다.

두 번째 이종이식 연구는 격일로 7.5 ㎎/㎏을 투여한 리포솜 제형화된 GW1843U89의 항종양 효능(표 1A; NA-1022-59A)을 매일 25 및 50 ㎎/㎏으로 투여한 유리 약물과 비교하였다. 리포솜 약물의 양은 단지 14 일의 투여(7 회 용량)를 허용하였다. 주어진 유리 약물의 총량은 350 ㎎/㎏ 및 700 ㎎/㎏인 반면 NX1843 그룹에서 제공된 전체 약물은 52.5 ㎎/㎏이었다. 표 26은 리포솜 약물이 유리 약물보다 더 효능이 있음을 명백히 입증하며, 이는 덜 빈번한 스케줄로 보다 적은 전체 약물을 투여할 것을 요한다는 결과를 요약한다. 상기 리포솜 약물의 효과는 25 및 50 ㎎/㎏의 유리 약물 그룹(이때 종양 퇴행은 발생하지 않았으며, 이들은 로그 세포사 값이 각각 1.5 및 3.5이었다)에 비해, 83%의 퇴행 및 4.6의 로그 세포사로, 상기 유리 약물보다 우수한 효능을 입증한다. 도 2는 종양 성장 곡선을 나타내며, 유리 약물 그룹의 용량 반응 효과 및 NX1843 그룹에 의한 보다 지연된 종양 성장을 입증한다. 체중에 대한 상기 약물들의 상대적인 효과를 도 3에 나타낸다. 모든 약물 그룹에서 체중 손실은 일시적이고 가역적이었으며, 결코 10%를 초과하지 않았다.

용량 스케줄 연구를 NX1843(표 1A; SMC-991-96)으로 수행하였으며, 이때 HCT-8 종양-함유 누드 마우스에게 NX1843을 하기의 용량 스케줄로 정맥 내 투여하 였다: 25 ㎎/㎏; 전달된 양 1,8; 15 ㎎/㎏; QD(1,3,5) x 2; 7.5 ㎎/㎏; QD(1-5) x 2. 이러한 용량 그룹 이외에, 유리 약물을 1 내지 5 일에 100 ㎎/㎏으로 투여하였으며 두 번째 주 동안 반복하였다. 본 실험에 또한 하기를 포함시켰다: 5-플루오로우라실(SFU)을 제 1 일 및 8 일에 100 ㎎/㎏으로 투여함; 캄토테신 동족체(NX211)의 리포솜 제형을 제 1 일 및 8 일에 6 ㎎/㎏으로 투여함; NX211 + 5FU를 제 1 일 및 8 일에 각각 6 ㎎/㎏ 및 100 ㎎/㎏으로 투여함; NX211을 제 1, 8 일에 6 ㎎/㎏ + 유리 GW1843을 제 1-5 일(x 2)에 100 ㎎/㎏으로 투여함; 및 NX211 + NX1843을 제 1, 8 일에 6 ㎎/㎏ 및 25 ㎎/㎏으로 투여함. 결과를 표 27에 나타내었다. 상기 3 개의 NX1843 용량 그룹은 모두 3.9 내지 4.2 범위의 로그 세포사(LCK)의 동등한 효능을 입증하였으며, 각 그룹에서 1/8의 영속적인 치유를 가졌다. NX211을 NX1843 또는 GW1843과 배합 시, 전체적인 종양 효과는 유사하였으며, 이때 LCK 값은 3.4이었다. 그러나, NX211 + NX1843 조합에 의해서는 2/8의 영속적인 치유가 생성되었다. 5-FU 단독, NX211 단독 및 GW1843 단독의 용량 그룹들은 모두 종양 성장의 억제에서 덜 효과적이었으며, 이때 LCK 값들은 각각 1.5, 1.9 및 2.4였다. 최소의 유효 용량 그룹은 5-FU 단독, NX211 단독 및 5-FU + NX211 조합이었다. 유리 GW1843 용량 그룹은 종양 성장의 제한에서 약간 더 좋았으나, 종양 퇴행 및 종양 성장의 전체적인 억제에 대한 최대의 효과는 NX1843 용량 그룹의 경우였으며, 5/32의 영속적인 치유를 발생시켰다. 체중 손실은 일시적이고 가역적이었으며, 결코 20%를 초과하지 않았다. 그러나, NX211 및 5-FU 함유 약물 그룹은 최대 량의 체중 손실을 나타내었다.

NX1843을 사용하여 수행된 또 다른 실험은 용량 반응 연구로, 이때 HCT-8 종양 함유 마우스에게 NX1843을 제 1 및 8 일에 25, 20, 15, 10, 5 ㎎/㎏의 용량으로 정맥 내 투여하였다. 초기 종양 감소는, 성장을 92 내지 99%까지 억제시킨 다른 4 개의 그룹에 비해 종양 성장을 80%까지 억제시킨 최저의 경우를 제외하고 모든 용량 그룹에서 유사하였다. 상기 용량 그룹 중 어느 그룹에서도 체중에 대해 감지할 정도의 효과를 나타내지 않았으며, 7/32의 치유가 발생하였다. 도 4 및 표 28에서 볼 수 있는 바와 같이, 용량 의존성 종양 반응이 분명하였다.

NX1843의 리포솜 제형에 다수의 변화를 수행하였고 이어서 HCT-8 이종이식 모델에서 현저한 효능의 차이를 측정할 수 있는 지를 시험하였다. 상기 변화에는 4:1 내지 2:1의 HSPC:콜레스테롤 범위, 및 pH 5 내지 9의 상대적인 내부 산도 범위가 포함된다. 결과를 표 29에 나타낸다.

상기 연구는 HCT-8 이종이식 모델에서 NX1843의 상이한 제형들을 비교할 때 항종양 효능이 현저하게 상이하지 않음을 입증하였다. 시험된 상이한 제형들간의 약물 동력학적 차이도 또한 미미하였으며 현저하게 상이하지 않았다.

NX1843을 SCID 마우스에서 몰트4 백혈병 모델에서 추가로 시험하였다. 상기 모델에서 질병률 및 사망률은 측정된 종점들이다. 종양을 1 x 10⁷ 종양 세포를 정맥 내로 이식하고, 4 일간 기다리고, 이어서 처리를 개시함으로써 부과시킨다. 상기 처리 그룹은 NX1843 25 ㎎/㎏ ± 티미딘 포스포릴라제(Tpase)로 이루어졌다. 상기 Tpase 처리는 마우스 순환 티미딘 수준을 인간의 수준(50 내지 100 nM)으로 낮춘다. 대조용 그룹에는 D5W만을 공급하였다. 결과를 도 5에 나타내며, 상기 결과는 NX1843이 Tpase 처리와 상관없이 생존을 증가시킴을 입증한다.

본 발명을 특별히 예시된 실시태양들에 대해서 개시하였다. 그러나, 상기 설명은 본 발명을 상기 예시된 실시태양들로 제한하고자 하지 않으며, 숙련가는 변화를 본 발명의 범위 및 진의 내에서 상기 명세서에 개시된 바와 같이 수행할 수 있음을 인식해야 한다. 본 발명은 첨부된 청구의 범위에 의해 한정된 본 발명의 진정한 진의 및 범위 내에 포함될 수 있는 대안, 변경 및 등가물을 포함한다.

상이한 HSPC:Chol 몰 비, 및 상이한 pH 및 수화 시 약물 용액의 농도에서 제조된 GW1843의 리포솜 제형들
제제 식별#	HSPC:Chol 몰비	수화 시 약물 용액의 pH	수화 시 약물 농도 (㎎/㎖)	최종 생성물 중의 전체 지질 농도 (㎎/㎖)	최종 생성물 중의 GW1843 농도 (㎎/㎖)
AT-1084-88B	2:1	7	20	41	0.33
AT-1084-86B	4:1	7	100	15	0.51
AT-1084-91B	2:1	7	100	50	2.4
AT-1084-95B	2:1	7	100	44	1.7
AT-1084-97B	2:1	9	100	36	1.7
AT-1105-32	4:1	7	100	23	0.74
SMC-1092-09	2:1	7	100	59	3.5
SMC-991-96	2:1	7	100	67	3.2
NA-1022-63A	2:1	8	225	34	2.0
NA-1022-59A	2:1	8	200	32	1.3
GC-1020-36	2:1	7	116	34	2.2
GC-1007-27	2:1	7	100	35	2.5

[표 1A] (계속)

상이한 HSPC:Chol 몰 비, 및 상이한 pH 및 수화 시 약물 용액의 농도에서 제조된 GW1843의 리포솜 제형들
제제 식별#	최종 생성물 중의 HSPC/약물 몰비	최종 생성물 중의 전체 지질/약물 몰비	중간 직경 ㎚	최종 생성물의 pH
AT-1084-88B	63	92	44	7.1
AT-1084-86B	17	21	57	5.5
AT-1084-91B	11	16	55	6.2
AT-1084-95B	14	20	54	3.2
AT-1084-97B	11	16	78	6.1
AT-1105-32	13	17	54	6.5
SMC-1092-09	8.9	13	43	7.0
SMC-991-96	11	16	42	6.9
NA-1022-63A	8.7	13	42	6.1
NA-1022-59A	13	19	60	5.9
GC-1020-36	8.0	12	39	6.0
GC-1007-27	7.2	11	31	7.0

추가적인 GW1843 리포솜 제형들
제제 식별#	지질	지질의 몰비	최종 생성물 중의 GW1843 농도(㎎/㎖)	중간 직경 ㎚	pH
AL1230-058	HSPC:콜레스테롤	4:1	2.7	29	6.5
AL1230-052	DOPC:콜레스테롤	2:1	1.4	30	6.3
AL1230-048	DEPC:콜레스테롤	2:1	1.9	26	6.9
AL1230-055	콩-PC:콜레스테롤	2:1	1.5	43	6.6
AL1230-041	HSPC:콜레스테롤:DSPG	2:1:0.1	3.6	43	6.3

상이한 부형제들을 함유하는 리포솜 제형들
제제 식별#	부형제 및 농도	최종 생성물의 pH
NHC1202-027-4	9% 슈크로즈	6.5
NHC1202-027-1	1 mM 포스페이트 및 9% 슈크로즈	7.5
NHC1202-027-2	5 mM 포스페이트 및 9% 슈크로즈	7.7
NHC1202-027-3	1 mM 시트레이트 및 9% 슈크로즈	7.1
NHC1202-089-2	1 mM 숙시네이트 및 9% 슈크로즈	6.6

상이한 부형제들을 함유하는 리포솜 제형들의 중간 직경 안정성(2 내지 8 ℃)
제제 식별#	T=0	T=3 개월
NHC1202-027-4	35	36
NHC1202-027-1	37	40
NHC1202-027-2	37	41
NHC1202-027-3	38	39
NHC1202-089-2	37	46(1 개월)

래트에서 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 래트에서의 GW1843 혈장 농도
그룹	유리 GW1843			리포솜 pH 7.0			리포솜 pH 7.3
동물#	1	2	3	4	5	6	7	8	9
시간(h)	GW1843 혈장 농도(㎍/㎖)
0.083	0.52	0.76	0.76
0.250	0.18	0.20	0.19
0.500	0.10	0.11	0.10
1.000	BLQ	0.06	0.06
0.166				13.2	14.0	16.1	22.2	22.2	21.8
0.750				10.7	10.8	11.7	16.0	16.1	16.2
2.000				7.98	8.22	9.14	14.7	12.5	12.1
4.000				7.38	8.15	9.07	11.9	12.9	11.3
8.000				6.35	7.49	7.53	11.1	12.6	11.3
24.00				3.75	3.74	4.27	6.10	6.52	5.96
32.00				3.23	3.02	3.25	4.07	4.32	4.27
48.00				1.61	1.54	1.84	2.71	2.77	2.63

[표 2](계속)

래트에서 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 래트에서의 GW1843 혈장 농도
그룹	리포솜 pH 7.4			리포솜 pH 7.5
동물#	10	11	12	13	14	15
시간(h)	GW1843 혈장 농도(㎍/㎖)
0.083
0.250
0.500
1.000
0.166	18.3	17.2	19.9	24.1	22.2	22.3
0.750	18.6	17.1	18.8	15.5	17.0	19.1
2.000	15.3	12.5	14.5	14.7	16.9	17.8
4.000	12.1	10.8	13.7	13.6	15.2	14.8
8.000	12.2	10.6	12.1	14.0	13.4	13.5
24.00	6.87	5.13	6.74	6.75	7.06	6.84
32.00	4.36	4.19	4.96	4.69	4.86	4.37
48.00	2.27	2.44	3.02	3.14	3.00	2.69

래트에서 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 GW1843에 대한 비 구획 분석에 의한 약물 동력학적 변수들
	AUCinf (hxng/㎖)	AUClast (hxng/㎖)	Cl (㎖/hx㎏)	Cmax (ng/㎖)	MRTinf (h)	t1/2 (h)	Vss (㎖/㎏)
유리 약물	263	219	3805	1281	0.5	0.5	1886.8
리포 pH 7.0	266740	220640	3.75	15548	27.4	19.2	102.6
리포 pH 7.3	412307	339339	2.43	24124	27.3	18.7	66.2
리포 pH 7.4	412188	344089	2.43	18541	26.5	18.3	64.3
리포 pH 7.5	462920	387013	2.16	24790	26.1	17.9	56.3

수컷 스프래그 다우리 래트에서 유리 GW1843의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 GW1843 혈장 농도
시간(h)	혈장 중의 GW1843의 농도(㎍/㎖)
	래트 1	래트 2	래트 3	래트 4	평균	표준편차
0.083	0.991	0.823	1.02	0.974	0.952	0.088
0.250	0.214*	0.212	0.270	0.325	0.255	0.054
0.500	0.117	0.091**	0.127	0.138	0.118	0.020
* 0.267 시간에서 실제로 취한 샘플 ** 확립된 LLQ(0.1 ㎍/㎖) 이하의 데이터. 외삽법에 의해 수득된 값

수컷 스프래그 다우리 래트에서 리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843; SMC-991-96)의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 전체 GW1843 혈장 농도
시간(h)	혈장 중의 전체 GW1843의 농도(㎍/㎖)
	래트 5	래트 6	래트 7	래트 8	평균	표준편차
0.167	21.0	23.9	26.6	23.7	23.8	2.29
0.500	22.1	23.3	22.9	20.8	22.3	1.10
1.500	15.7	21.1	21.6	18.0	19.1	2.77
4.000	17.9	17.8	17.9	16.3	17.5	0.78
7.966	14.0	15.6	17.2	13.9	15.2	1.56
24.18	7.22	8.17	8.64	7.09	7.78	0.75
31.98	5.21	7.64	6.71	5.96	6.38	1.04
48.50	2.36	3.25	3.19	2.77	2.89	0.41
72.55	1.01	1.40	1.42	1.13	1.24	0.20
96.33	0.329	0.460	0.487	0.277	0.388	0.101

수컷 스프래그 다우리 래트에서 유리 GW1843의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 GW1843의 혈장 약물 동력학적 변수들(비 구획 분석)
동물 번호	래트 1	래트 2	래트 3	래트 4	평균	표준 편차
변수
중량(㎏)	0.38112	0.39144	0.38346	0.34391	0.37498	0.021
AUC(0-inf) (㎍.시간/㎖)	0.27	0.23	0.29	0.29	0.27	0.028
AUC(0-last) (㎍.시간/㎖)	0.25	0.21	0.26	0.26	0.25	0.024
CL(㎖/시간.㎏)	3,660	4,410	3,470	3,430	3,740	456
Cmax(㎍/㎖)	1.99	1.62	1.98	1.69	1.82	0.193
MRT(0-inf) (시간)	0.18	0.17	0.19	0.21	0.19	0.017
T1/2(시간)	0.14	0.14	0.14	0.15	0.14	0.005
Vss(㎖/㎏)	654	762	650	709	694	52.9

수컷 스프래그 다우리 래트에서 리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843; SMC-991-96)의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 GW1843에 대한 혈장 약물 동력학적 변수들(비 구획 분석)
동물 번호	래트 5	래트 6	래트 7	래트 8	평균	표준 편차
변수
중량(㎏)	0.39031	0.38086	0.37256	0.42019	0.39098	0.021
AUC(0-inf) (㎍.시간/㎖)	469	565	578	482	524	55.9
AUC(0-last) (㎍.시간/㎖)	461	554	566	478	515	52.9
CL(㎖/시간.㎏)	2.13	1.77	1.73	2.08	1.93	0.21
Cmax(㎍/㎖)	22.1	24.3	28.7	25.3	25.1	2.75
MRT(0-inf) (시간)	23.6	25.7	25.3	24.1	24.7	0.99
T1/2(시간)	16.4	17.0	17.5	15.5	16.6	0.86
Vss(㎖/㎏)	50.4	45.5	43.8	50.0	47.4	3.28

리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843) 로트 SMC-1092-09의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 수컷 스프래그 다우리 래트에서 전체 GW1843 혈장 농도
시간(h)	혈장 중의 NX1843의 농도(㎍/㎖)
	래트 5	래트 6	래트 7	래트 8	평균	표준편차
0.183	16.9	15.8	15.5	20.3	17.1	2.20
0.517	13.2	13.5	13.2	16.0	14.0	1.36
1.650	11.7	12.1	11.6	11.5	11.7	0.263
4.100	10.3	9.7	10.3	11.0	10.3	0.532
8.000	8.51	8.34	8.72	9.96	8.88	0.735
24.000	4.79	4.27	4.32	5.71	4.77	0.667
32.000	3.32	2.86	2.57	2.72	2.87	0.324
48.167	1.48	1.08	1.06	1.32	1.24	0.202
72.200	0.379	0.250	BLOQ	BLOQ	-	-
96.000	BLOQ	BLOQ	BLOQ	BLOQ	-	-
BLOQ-정량분석의 하한

리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843) 로트 SMC-991-96의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 수컷 스프래그 다우리 래트에서 전체 GW1843 혈장 농도
시간(h)	혈장 중의 NX1843의 농도(㎍/㎖)
	래트 5	래트 6	래트 7	래트 8	평균	표준편차
0.183	18.0	15.9	15.1	14.6	15.9	1.50
0.500	17.0*	13.0	14.2	13.8	14.5	1.74
1.650	15.5	13.3	10.6	12.2	12.9	2.06
4.100	13.2	10.5	10.2	10.7	11.2	1.38
8.000	11.8	7.8	9.5	9.5	9.7	1.64
24.000	6.00	4.20	5.17	4.45	4.96	0.809
32.000	4.31	2.21	2.97	3.24	3.18	0.869
48.167	1.80	0.864	1.32	1.11	1.27	0.397
72.200	0.470	BLOQ	0.247	BLOQ	-	-
96.000	BLOQ	BLOQ	BLOQ	BLOQ	-	-
* 0.517 분에서 취한 샘플 BLOQ-정량분석의 하한

수컷 스프래그 다우리 래트에서 리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843) 로트 SMC-1092-09의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 GW1843의 혈장 약물 동력학적 변수들(비 구획 분석)
동물 번호	래트 1	래트 2	래트 3	래트 4	평균	표준 편차
변수
중량(㎏)	0.22475	0.20796	0.21927	0.20716	0.21479	0.00864
AUC(0-inf) (㎍.시간/㎖)	285	257	259	302	276	21.7
AUC(0-last) (㎍.시간/㎖)	278	253	240	280	263	19.5
CL(㎖/시간.㎏)	3.51	3.89	3.87	3.31	3.65	0.283
Cmax(㎍/㎖)	19.4	17.2	16.9	23.1	19.2	2.86
MRT(0-inf) (시간)	21.0	18.9	18.7	19.2	19.5	1.05
T1/2(시간)	13.1	11.7	12.0	11.9	12.2	0.63
Vss(㎖/㎏)	73.8	73.5	72.5	63.4	70.8	4.96

수컷 스프래그 다우리 래트에서 리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843), 로트 SMC-991-96의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 GW1843에 대한 혈장 약물 동력학적 변수들(비 구획 분석)
동물 번호	래트 5	래트 6	래트 7	래트 8	평균	표준 편차
변수
중량(㎏)	0.21681	0.21542	0.21783	0.21085	0.21523	0.00308
AUC(0-inf) (㎍.시간/㎖)	368	241	284	278	293	53.6
AUC(0-last) (㎍.시간/㎖)	360	228	280	259	282	56.4
CL(㎖/시간.㎏)	2.72	4.15	3.53	3.60	3.50	0.589
Cmax(㎍/㎖)	18.4	17.9	15.6	15.0	16.7	1.68
MRT(0-inf) (시간)	20.6	17.2	19.2	18.9	19.0	1.40
T1/2(시간)	13.0	10.8	11.2	11.8	11.7	0.96
Vss(㎖/㎏)	56.0	71.4	67.7	68.1	65.8	6.74

높은 내부 pH를 갖는 리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843) 제형(로트 AT-1084-97B)의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 수컷 스프래그 다우리 래트(그룹 A)에서 전체 GW1843 혈장 농도
시간(h)	혈장 중의 GW1843의 농도(㎍/㎖)
	래트 1	래트 2	래트 3	래트 4	평균	표준편차
0.167	16.6	18.5	19.4	15.1	17.4	1.93
0.500	15.6	14.9	15.5	14.2	15.1	0.645
1.567	12.6*	13.7	15.3	12.0**	13.4	1.45
4.000	11.9	10.5	12.9	11.1	11.6	1.04
7.550	10.5	10.7	10.8	9.06	10.3	0.813
24.067	4.78	5.07	5.31	4.41	4.89	0.388
31.917	2.03	2.81	3.38	2.94	2.79	0.562
48.283	0.764	1.10	1.14	0.799	0.951	0.197
72.250	0.135	0.180	0.185	BLOQ	0.167+	0.028+
96.000	NS	NS	NS	NS	-	-
BLOQ-정량분석의 하한 NS-샘플 없음 * 1.583 시간에서 취한 샘플 ** 1.550 시간에서 취한 샘플 + 3 회 측정된 값의 평균 및 표준편차

리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843)(로트 SMC-1092-09)의 표준 제형의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 수컷 스프래그 다우리 래트(그룹 B)에서 전체 GW1843 혈장 농도
시간(h)	혈장 중의 GW1843의 농도(㎍/㎖)
	래트 5	래트 6	래트 7	래트 8	평균	표준편차
0.167	16.9	12.1	14.1	18.5	15.4	2.85
0.500	15.1	11.9	12.3	16.7	14.0	2.29
1.500	13.8	10.4	10.6	14.5	12.3	2.13
3.967	12.3	10.3	11.1	11.3	11.3	0.823
8.000	8.07	7.79	9.08	11.0	8.99	1.45
24.067	3.77	3.61	4.17	3.85	3.85	0.236
32.067	2.49	2.36	2.25	3.40	2.63	0.526
48.167	0.766	0.922	0.932	1.17	0.948	0.973
72.917	0.109	0.133	0.177	0.259	0.170	0.066
96.250	BLOQ	BLOQ	BLOQ	BLOQ	-	-
BLOQ-정량분석의 하한

리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843)(로트 SMC-1084-91B)의 표준 제형의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 수컷 스프래그 다우리 래트(그룹 C)에서 전체 GW1843 혈장 농도
시간(h)	혈장 중의 GW1843의 농도(㎍/㎖)
	래트 9	래트 10	래트 11	래트 12	평균	표준편차
0.167	20.5	17.6	18.4	21.3	19.5	1.74
0.517	19.4*	13.1**	17.4	20.8	17.7	3.35
1.500	15.7	12.4	14.7	14.9	14.4	1.42
3.967	16.2	11.5	13.4	15.7	14.2	2.17
8.000	11.9	9.51	11.5	13.7	11.7	1.72
24.017	6.33	4.59	5.68	6.45	5.76	0.852
32.067	3.92	2.70	3.85	4.06	3.63	0.628
48.167	1.83	0.974	1.53	1.73	1.52	0.382
72.917	0.299	0.273	0.291	0.403	0.317	0.059
96.250	BLOQ	BLOQ	BLOQ	BLOQ	-	-
BLOQ-정량분석의 하한 * 0.500 시간에서 취한 샘플 ** 0.583 시간에서 취한 샘플

높은 지질:약물 비를 갖는 리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843) 제형(로트 AT-1084-88B)의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 수컷 스프래그 다우리 래트(그룹 D)에서 전체 GW1843 혈장 농도
시간(h)	혈장 중의 GW1843의 농도(㎍/㎖)
	래트 13	래트 14	래트 15	래트 16	평균	표준편차
0.167	14.3	14.5	16.8	15.5	15.3	1.14
0.500	12.1	12.5	12.0	12.7	12.3	0.330
1.550	10.7	10.2	10.9	7.34*	9.79	1.66
4.000	7.95	7.75	9.10	6.55	7.84	1.04
7.550	6.61	6.30	6.53	3.51	5.74	1.49
24.067	2.58	2.53	2.11	1.68	2.23	0.420
31.917	1.62	1.69	1.66	1.24	1.55	0.210
48.283	0.674	0.636	0.561	0.432	0.576	0.107
72.250	0.250	0.239	0.187	0.138	0.204	0.052
96.000	NS	NS	NS	NS	-	-
NS-샘플 없음 * 1.533 시간에서 취한 샘플

리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843) 제형(로트 AT-1084-91B)의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 큰 수컷 스프래그 다우리 래트(그룹 E)에서 전체 GW1843 혈장 농도
시간(h)	혈장 중의 GW1843의 농도(㎍/㎖)
	래트 17	래트 18	래트 19	래트 20	평균	표준편차
0.167	24.9	23.3	22.8	24.7	23.9	1.03
0.517	22.1	22.4	19.7	21.8	21.5	1.22
1.500	12.1	19.0	14.4*	18.0*	15.9	3.20
3.967	15.4	ND	17.5	ND	16.5+	1.48+
8.000	19.3	10.6	15.4	14.0	14.8	3.60
24.017	9.27	10.0	7.89	11.7	9.72	1.59
32.067	7.19	7.07	6.45	8.43	7.29	0.829
48.167	3.94	3.06	2.56	4.58	3.54	0.900
72.917	1.30	1.11	0.660	1.73	1.20	0.444
96.250	0.317	0.347	0.390	0.127	0.295	0.116
NS-샘플 없음 * 1.533 시간에서 취한 샘플 + 측정된 2 개의 데이터 점들에 대한 평균 및 표준편차

수컷 스프래그 다우리 래트(그룹 A)에서 높은 내부 pH를 갖는 리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843) 제형(로트 AT-1084-97B)의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 전체 GW1843에 대한 혈장 약물 동력학적 변수들(비 구획 분석)
동물 번호	래트 1	래트 2	래트 3	래트 4	평균	표준 편차
변수
중량(㎏)	0.22201	0.20778	0.22268	0.22589	0.21959	0.00805
AUC(0-inf) (㎍.시간/㎖)	270	290	312	258	283	23.7
AUC(0-last) (㎍.시간/㎖)	268	288	309	247	278	26.6
CL(㎖/시간.㎏)	3.71	3.45	3.20	3.87	3.56	0.295
Cmax(㎍/㎖)	17.1	20.6	21.7	15.6	18.8	2.87
MRT(0-inf) (시간)	15.8	17.5	17.4	17.0	16.9	0.780
T1/2(시간)	9.67	10.1	9.89	9.64	9.83	0.215
Vss(㎖/㎏)	58.7	60.2	55.7	65.8	60.1	4.24

수컷 스프래그 다우리 래트(그룹 B)에서 리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843)의 표준 제형(로트 SMC-1092-09)의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 전체 GW1843에 대한 혈장 약물 동력학적 변수들(비 구획 분석)
동물 번호	래트 5	래트 6	래트 7	래트 8	평균	표준 편차
변수
중량(㎏)	0.23104	0.22129	0.22358	0.22141	0.22433	0.00460
AUC(0-inf) (㎍.시간/㎖)	244	226	250	293	253	28.4
AUC(0-last) (㎍.시간/㎖)	243	224	247	288	251	26.9
CL(㎖/시간.㎏)	4.10	4.42	4.00	3.42	3.99	0.417
Cmax(㎍/㎖)	17.9	12.2	15.1	19.5	16.2	3.21
MRT(0-inf) (시간)	16.0	17.5	17.5	18.3	17.3	0.960
T1/2(시간)	9.42	10.2	10.9	12.0	10.6	1.10
Vss(㎖/㎏)	65.4	77.3	69.9	62.5	68.8	6.45

수컷 스프래그 다우리 래트(그룹 C)에서 리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843)의 표준 제형(로트 AT-1084-91B)의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 전체 GW1843에 대한 혈장 약물 동력학적 변수들(비 구획 분석)
동물 번호	래트 9	래트 10	래트 11	래트 12	평균	표준 편차
변수
중량(㎏)	0.22583	0.22876	0.22839	0.22250	0.22637	0.00289
AUC(0-inf) (㎍.시간/㎖)	375	275	344	395	347	52.5
AUC(0-last) (㎍.시간/㎖)	370	271	339	387	342	51.2
CL(㎖/시간.㎏)	2.67	3.63	2.91	2.53	2.94	0.489
Cmax(㎍/㎖)	21.1	19.8	18.9	21.6	20.4	1.23
MRT(0-inf) (시간)	18.9	18.3	18.9	19.3	18.9	0.412
T1/2(시간)	11.2	12.0	11.3	12.3	11.7	0.535
Vss(㎖/㎏)	50.3	66.5	55.1	48.8	55.2	8.01

수컷 스프래그 다우리 래트(그룹 D)에서 높은 지질:약물 비를 갖는 리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843) 제형(로트 AT-1084-88B)의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 전체 GW1843에 대한 혈장 약물 동력학적 변수들(비 구획 분석)
동물 번호	래트 13	래트 14	래트 15	래트 16	평균	표준 편차
변수
중량(㎏)	0.22711	0.22021	0.21770	0.21706	0.22052	0.00460
AUC(0-inf) (㎍.시간/㎖)	187	183	180	126	169	28.8
AUC(0-last) (㎍.시간/㎖)	182	179	178	124	166	27.9
CL(㎖/시간.㎏)	5.34	5.47	5.54	7.92	6.07	1.24
Cmax(㎍/㎖)	15.5	15.6	19.9	17.1	17.0	2.05
MRT(0-inf) (시간)	18.5	18.0	16.4	16.9	17.5	0.968
T1/2(시간)	14.4	11.4	10.3	10.6	11.7	1.88
Vss(㎖/㎏)	98.8	98.5	90.9	133	105	18.8

0.4 ㎏의 수컷 스프래그 다우리 래트(그룹 E)에서 리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843)의 표준 제형(로트 AT-1084-91B)의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 전체 GW1843에 대한 혈장 약물 동력학적 변수들(비 구획 분석)
동물 번호	래트 17	래트 18	래트 19	래트 20	평균	표준 편차
변수
중량(㎏)	0.41828	0.40312	0.41142	0.40424	0.40927	0.00705
AUC(0-inf) (㎍.시간/㎖)	586	506	494	611	549	58.0
AUC(0-last) (㎍.시간/㎖)	579	499	485	609	543	60.4
CL(㎖/시간.㎏)	1.71	1.98	2.02	1.64	1.84	0.191
Cmax(㎍/㎖)	26.4	23.7	24.4	26.2	25.2	1.33
MRT(0-inf) (시간)	24.9	25.5	23.3	25.5	24.8	1.04
T1/2(시간)	14.3	15.0	15.5	11.0	14.0	2.03
Vss(㎖/㎏)	42.6	50.3	47.2	41.7	45.5	4.03

220 g의 수컷 스프래그 다우리 래트에서 리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843) 표준 제형의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따라 수득된 전체 GW1843에 대한 혈장 약물 동력학적 변수들에 대한 요약 표(비 구획 분석)
변수	NX1843 연구# R990198-138E 로트: SMC-1092-09	NX1843 연구# R990198-138E 로트: SMC-991-96	NX1843 연구# R2000007-138E 로트: SMC-1092-09	NX1843 연구# R2000007-138E 로트: AT-1084-91B
n	4	4	4	4
중량(㎏)	0.215±0.00864	0.215±0.00308	0.224±0.0046	0.226±0.0029
용량(㎎/㎏)	1.00	1.00	1.00	1.00
Cmax (㎍/㎖)	19.1±2.86	16.8±1.70	16.2±3.21	20.4±1.23
AUC(0-inf) (㎍.시간/㎖)	276±21.9	293±53.8	253±28.4	347±51.2
AUC (0-last) (㎍.시간/㎖)	263±19.3	281±56.2	251±26.9	342±56.2
CL (㎖/시간.㎏)	3.65±0.283	3.50±0.589	3.99±0.417	2.94±0.489
T1/2(시간)	12.2±0.06	11.7±0.96	10.6±1.10	11.7±0.535
Vss(㎖/㎏)	70.8±5.00	65.8±6.74	68.8±6.45	55.2±8.01

작은(220 g) 수컷 스프래그 다우리 래트 대 큰(400 g) 래트에서 리포솜 캡슐화된 GW1843(NX1843) 표준 제형의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따라 수득된 전체 GW1843의 혈장 약물 동력학적 변수들에 대한 요약 표(비 구획 분석)
변수	NX1843 연구# R990198-138E 로트: SMC-991-96	NX1843 연구# R990164-138E 로트: SMC-991-96	NX1843 연구# R2000007-138E 로트: AT-1084-91B	NX1843 연구# R2000007-138E 로트: AT-1084-91B
n	4	4	4	4
중량(㎏)	0.215±0.00308	0.391±0.021	0.226±0.0029	0.4093±0.0071
용량(㎎/㎏)	1.00	1.00	1.00	1.00
Cmax (㎍/㎖)	16.8±1.70	25.1±2.75	20.4±1.23	25.2±1.33
AUC(0-inf) (㎍.시간/㎖)	293±53.8	524±55.9	347±51.2	549±58.0
AUC (0-last) (㎍.시간/㎖)	281±56.2	515±52.9	342±56.2	543±60.4
CL (㎖/시간.㎏)	3.50±0.589	1.93±0.207	2.94±0.489	1.84±0.191
T1/2(시간)	11.7±0.96	16.6±0.86	11.7±0.535	14.0±2.03
Vss(㎖/㎏)	65.8±6.74	47.4±3.28	55.2±8.01	55.2±8.01

리포솜 캡슐화된 GW1843(4:1의 HSPC 대 콜레스테롤 몰비)의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른 수컷 스프래그 다우리 래트에서 전체 GW1843 혈장 농도
시간(h)	혈장 중의 전체 GW1843의 농도(㎍/㎖)
	래트 1	래트 2	래트 3	래트 4	평균	표준편차
0.167	16.1	9.40	16.6	13.6	13.9	3.29
0.500	15.1	14.4	15.5*	15.0*	15.0	0.455
1.500	13.4	9.93	11.1	10.7	11.3	1.49
4.000	7.99	7.93	7.81	7.28	7.75	0.324
7.867	7.93	7.74	7.03	6.06	7.19	0.847
24.17	4.19	3.39+	3.23	3.21	3.51	0.464
32.43	2.83	2.53	1.66	2.53	2.39	0.505
47.87	1.10	0.616	0.425	0.921	0.766	0.302
72.37	0.137	BLOQ	BLOQ	BLOQ	-	-
BLOQ-정량분석의 하한 * 0.517 시간에서 취한 샘플 + 24.23 시간에서 취한 샘플

수컷 스프래그 다우리 래트에서 리포솜 캡슐화된 GW1843(4:1의 HSPC 대 콜레스테롤 몰비)의 단일의 1 ㎎/㎏ 정맥 내 일시주사 투여에 따른, 비 구획 분석에 의해 수득된 전체 GW1843의 혈장 약물 동력학적 변수들
동물 번호	래트 1	래트 2	래트 3	래트 4	평균	표준 편차
변수
중량(㎏)	0.25719	0.25305	0.24655	0.24457	0.25034	0.005829
AUC(0-inf) (㎍.시간/㎖)	245	210	191	206	213	22.8
AUC(0-last) (㎍.시간/㎖)	243	201	187	189	205	26.1
CL(㎖/시간.㎏)	4.09	4.77	5.22	4.86	4.74	0.472
Cmax(㎍/㎖)	16.6	14.4	17.2	15.0	15.8	1.32
MRT(0-inf) (시간)	18.1	16.8	14.7	19.8	17.4	2.15
T1/2(시간)	9.66	9.27	8.05	12.7	9.92	1.98
Vss(㎖/㎏)	73.8	80.3	76.7	96.0	81.7	9.90

유리 약물에 대한 NX1843의 비교 결과
약물/용량	종양성장억제% (제 23 일)	퇴행% (제 23 일)	로그 세포사
비히클 대조군	0	0	0
1843; 50 ㎎/㎏; QD1-15	88.4	0	3.5
1843; 25 ㎎/㎏; QD1-15	78	0	1.5
NX1843; 7.5 ㎎/㎏; QD2x7	97.5	83	4.6

5-FU, NX211 및 GW1843과의 조합에 대한 NX1843 용량-스케줄 비교 종양 반응의 요약
처리	TGI%	퇴행% 제 22 일	LCK	치유
대조군	0	0	0	0
NX1843, 25㎎/㎏; QD1,8	97	88	4.2	1
NX1843, 15㎎/㎏; QD3,5x2	95	86	3.2	1
NX1843, 7.5㎎/㎏; QD1-5x2	96	88	3.9	1
GW1843, 100㎎/㎏; QD1-5x2	80	0	2.4	0
5-FU, 100㎎/㎏; QD1,8	72	0	1.5	0
NX211, 6㎎/㎏; QD1,8	78	0	1.9	0
NX211, 6㎎/㎏+5-FU, 100㎎/㎏; QD1,8	78	0	1.9	0
NX211, 6㎎/㎏+NX1843, 25㎎/㎏; QD1,8	97	89	3.4	2
NX211, 6㎎/㎏; QD1,8+GW1843, 100㎎/㎏; QD1-5x2	91	50	3.4	0

NX1843을 사용한 용량 반응 실험의 요약
약물 및 용량	TGI%	퇴행%	치유
D5W 대조군	0	0	0
NX1843; 25㎎/㎏	99	100	4
NX1843; 20㎎/㎏	97	100	2
NX1843; 15㎎/㎏	95	65	1
NX1843; 10㎎/㎏	92	58	0
NX1843; 5㎎/㎏	80	0	0
TGI%와 퇴행을 제 26 일에 측정하였으며, 치유는 제 60 일에 측정하였다.

HCT-8 이종이식 모델에서 10 ㎎/㎏, QD1,8로 투여된 NX1843 제형의 항종양 효능 결과 비교
NX1843로트	TGI%	퇴행%	중간 LCK	치유
AT-1084-86	91	18	2.44	0
AT-1084-91B	94	54	2.41	0
AT-1084-95B	93	56	3.32	0
AT-1084-97B	94	44	3.71	1
SMC-1092-09	93	37	2.54	0
변화 등급 분석은 로트들간에 현저한 차이가 없음을 입증하였다(p=0.2985)

Claims (88)

1. (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산, 콜레스테롤 및 하나 이상의 포스파티딜콜린을 포함하는 리포솜.
2. 제 1 항에 있어서,

   포스파티딜콜린이 디스테아로일포스파티딜콜린, 수소화된 콩 포스파티딜콜린, 콩 포스파티딜콜린, 달걀 포스파티딜콜린, 수소화된 달걀 포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린, 디올레오일포스파티딜콜린, 디엘라이도일포스파티딜콜린 및 디미리스토일포스파티딜콜린으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 리포솜.
3. 제 2 항에 있어서,

   포스파티딜콜린이 수소화된 콩 포스파티딜콜린인 리포솜.
4. 제 2 항에 있어서,

   포스파티딜콜린이 콩 포스파티딜콜린인 리포솜.
5. 제 2 항에 있어서,

   포스파티딜콜린이 디올레오일포스파티딜콜린인 리포솜.
6. 제 2 항에 있어서,

   포스파티딜콜린이 디엘라이도일포스파티딜콜린인 리포솜.
7. 제 2 항에 있어서,

   포스파티딜글리세롤을 추가로 포함하는 리포솜.
8. 제 7 항에 있어서,

   수소화된 콩 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 포스파티딜글리세롤이 약 2:1:0.1의 몰비로 존재하는 리포솜.
9. 제 3 항에 있어서,

   수소화된 콩 포스파티딜콜린 대 콜레스테롤 몰비가 약 5:1 내지 2:1.5인 리포솜.
10. 제 9 항에 있어서,

    몰비가 약 2:1인 리포솜.
11. 제 9 항에 있어서,

    몰비가 약 4:1인 리포솜.
12. 제 10 항에 있어서,

    단일층이고 100 ㎚ 미만인 리포솜.
13. 제 12 항에 있어서,

    수소화된 콩 포스파티딜콜린 대 (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산의 몰비가 약 5:1 내지 75:1인 리포솜.
14. 제 4 항에 있어서,

    몰비가 약 2:1인 리포솜.
15. 제 5 항에 있어서,

    몰비가 약 2:1인 리포솜.
16. 제 6 항에 있어서,

    몰비가 약 2:1인 리포솜.
17. 제 12 항에 있어서,

    수소화된 콩 포스파티딜콜린 대 (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산의 몰비가 약 8:1 내지 20:1인 리포솜.
18. (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산을 캡슐화하여 포함하는 리포솜으로, 수소화된 콩 포스파티딜콜린(HSPC) 및 콜레스테롤로 이루어지고, HSPC:콜레스테롤의 몰비가 약 2:1이며, HSPC:(S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산의 몰비는 8:1 내지 20:1이고, 100 ㎚ 미만의 크기를 갖는 단일층인 리포솜.
19. a) 포스파티딜콜린과 콜레스테롤로 이루어진 지질 필름 또는 분말을 제조하고;

    b) 상기 지질 필름 또는 분말을 (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산을 함유하는 수용액으로 수화시키고;

    c) 에너지를 가하여 단일층이고 100 ㎚ 미만인 리포솜을 수득하고;

    d) 수용액에 교차 여과시켜 캡슐화되지 않은 (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산을 제거함으로써 (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산을 함유하는 리포솜을 수득함;

    을 포함하는 방법에 의해 제조된 제 1 항의 리포솜.
20. 제 19 항에 있어서,

    포스파티딜콜린이 디스테아로일포스파티딜콜린, 수소화된 콩 포스파티딜콜린, 콩 포스파티딜콜린, 달걀 포스파티딜콜린, 수소화된 달걀 포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린, 디올레오일포스파티딜콜린, 디엘라이도일포스파티딜콜린 및 디미리스토일포스파티딜콜린으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 리포솜.
21. 제 20 항에 있어서,

    포스파티딜콜린이 수소화된 콩 포스파티딜콜린인 리포솜.
22. 제 20 항에 있어서,

    포스파티딜콜린이 콩 포스파티딜콜린인 리포솜.
23. 제 20 항에 있어서,

    포스파티딜콜린이 디올레오일포스파티딜콜린인 리포솜.
24. 제 20 항에 있어서,

    포스파티딜콜린이 디엘라이도일포스파티딜콜린인 리포솜.
25. 제 20 항에 있어서,

    리포솜이 포스파티딜글리세롤을 추가로 포함하는 리포솜.
26. 제 19 항에 있어서,

    에너지를 균질화기에 의해 적용시킨 리포솜.
27. 제 21 항에 있어서,

    수소화된 콩 포스파티딜콜린 대 콜레스테롤 몰비가 약 5:1 내지 2:1.5인 리포솜.
28. 제 27 항에 있어서,

    몰비가 약 2:1인 리포솜.
29. 제 27 항에 있어서,

    몰비가 약 4:1인 리포솜.
30. 제 28 항에 있어서,

    리포솜이 단일층이고 100 ㎚ 미만인 리포솜.
31. 제 30 항에 있어서,

    수소화된 콩 포스파티딜콜린 대 (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산의 몰비가 약 5:1 내지 75:1인 리포솜.
32. 제 31 항에 있어서,

    수소화된 콩 포스파티딜콜린 대 (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산의 몰비가 약 8:1 내지 20:1인 리포솜.
33. 제 19 항에 있어서,

    상기 포스파티딜콜린은 수소화된 콩 포스파티딜콜린(HSPC)이며, 상기 HSPC:콜레스테롤의 몰비가 약 2:1이고, 상기 HSPC 대 (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산의 몰비는 8:1 내지 20:1인 리포솜.
34. a) 포스파티딜콜린과 콜레스테롤로 이루어진 지질 필름 또는 분말을 제조하고;

    b) 상기 지질 필름 또는 분말을 (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산을 함유하는 수용액으로 수화시키고;

    c) 에너지를 가하여 단일층이고 100 ㎚ 미만인 리포솜을 수득하고;

    d) 수용액에 교차 여과시켜 캡슐화되지 않은 (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산을 제거함으로써 (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산을 함유하는 리포솜을 수득함;

    을 포함하는, (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산을 포함하는 리포솜의 제조 방법.
35. 제 34 항에 있어서,

    포스파티딜콜린이 디스테아로일포스파티딜콜린, 수소화된 콩 포스파티딜콜린, 콩 포스파티딜콜린, 달걀 포스파티딜콜린, 수소화된 달걀 포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린, 디올레오일포스파티딜콜린, 디엘라이도일포스파티딜콜린 및 디미리스토일포스파티딜콜린으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법.
36. 제 35 항에 있어서,

    포스파티딜콜린이 수소화된 콩 포스파티딜콜린인 방법.
37. 제 35 항에 있어서,

    포스파티딜콜린이 콩 포스파티딜콜린인 방법.
38. 제 35 항에 있어서,

    포스파티딜콜린이 디올레오일포스파티딜콜린인 방법.
39. 제 35 항에 있어서,

    포스파티딜콜린이 디엘라이도일포스파티딜콜린인 방법.
40. 제 35 항에 있어서,

    리포솜이 포스파티딜글리세롤을 추가로 포함하는 방법.
41. 제 34 항에 있어서,

    에너지를 균질화기에 의해 적용시키는 방법.
42. 제 36 항에 있어서,

    수소화된 콩 포스파티딜콜린 대 콜레스테롤 몰비가 약 5:1 내지 2:1.5인 방법.
43. 제 42 항에 있어서,

    몰비가 약 2:1인 방법.
44. 제 42 항에 있어서,

    몰비가 약 4:1인 방법.
45. 제 43 항에 있어서,

    리포솜이 단일층이고 100 ㎚ 미만인 방법.
46. 제 45 항에 있어서,

    수소화된 콩 포스파티딜콜린 대 (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산의 몰비가 약 5:1 내지 75:1인 방법.
47. 제 46 항에 있어서,

    수소화된 콩 포스파티딜콜린 대 (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산의 몰비가 약 8:1 내지 20:1인 방법.
48. 제 34 항에 있어서,

    상기 포스파티딜콜린은 수소화된 콩 포스파티딜콜린(HSPC)이며, 상기 HSPC:콜레스테롤의 몰비가 약 2:1이고, 상기 HSPC 대 (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산의 몰비는 8:1 내지 20:1인 방법.
49. 치료량 또는 유효량의 제 1 항의 리포솜을 사용하는 것을 특징으로 하는, 종양 성장의 억제를 위한 의약을 제조하는 방법.
50. 제 49 항에 있어서,

    종양이 약물 내성 또는 약물 과민성인 방법.
51. 제 49 항에 있어서,

    종양이 난소암, 폐암, 결장직장암, 유방암, 머리와 목암, 전립선암, 자궁암, 교모세포종 및 육종으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 암인 방법.
52. 제 51 항에 있어서,

    포스파티딜콜린이 디스테아로일포스파티딜콜린, 수소화된 콩 포스파티딜콜린, 콩 포스파티딜콜린, 달걀 포스파티딜콜린, 수소화된 달걀 포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린, 디올레오일포스파티딜콜린, 디엘라이도일포스파티딜콜린 및 디미리스토일포스파티딜콜린으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법.
53. 제 52 항에 있어서,

    포스파티딜콜린이 수소화된 콩 포스파티딜콜린인 방법.
54. 제 52 항에 있어서,

    포스파티딜콜린이 콩 포스파티딜콜린인 방법.
55. 제 52 항에 있어서,

    포스파티딜콜린이 디올레오일포스파티딜콜린인 방법.
56. 제 52 항에 있어서,

    포스파티딜콜린이 디엘라이도일포스파티딜콜린인 방법.
57. 제 52 항에 있어서,

    리포솜이 포스파티딜글리세롤을 추가로 포함하는 방법.
58. 제 57 항에 있어서,

    수소화된 콩 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 포스파티딜글리세롤이 약 2:1:0.1의 몰비로 존재하는 방법.
59. 제 53 항에 있어서,

    수소화된 콩 포스파티딜콜린 대 콜레스테롤 몰비가 약 5:1 내지 2:1.5인 방법.
60. 제 59 항에 있어서,

    몰비가 약 2:1인 방법.
61. 제 59 항에 있어서,

    몰비가 약 4:1인 방법.
62. 제 60 항에 있어서,

    단일층이고 100 ㎚ 미만인 방법.
63. 제 62 항에 있어서,

    수소화된 콩 포스파티딜콜린 대 (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산의 몰비가 약 5:1 내지 75:1인 방법.
64. 제 54 항에 있어서,

    몰비가 약 2:1인 방법.
65. 제 55 항에 있어서,

    몰비가 약 2:1인 방법.
66. 제 56 항에 있어서,

    몰비가 약 2:1인 방법.
67. 제 62 항에 있어서,

    수소화된 콩 포스파티딜콜린 대 (S)-2-(5-(((1,2-디히드로-3-메틸-1-옥소벤조[f]퀴나졸린-9-일)메틸)아미노)-1-옥소-2-이소인돌리닐)글루타르산의 몰비가 약 8:1 내지 20:1인 방법.
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