KR100848800B1 - 브라질리안 페퍼 오일을 함유하는 피부용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 주름개선용, 피부미백용, 염증억제용, 항비만용, 항산화용, 면역억제용, 발모 및 탈모방지용 조성물에 관한 것으로서, 본 발명에 따른 주름개선용, 피부미백용, 염증억제용, 항비만용, 항산화용, 면역억제용, 발모 및 탈모방지용 조성물은 브라질리안 페퍼 오일(Brazilian pepper oil)을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 한다. 브라질리안 페퍼 오일을 포함하는 조성물은 피부에 대한 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있을 뿐만 아니라, 콜라겐 합성을 증가시키고 콜라게네이즈 효소활성을 억제하여 주름개선 효과가 뛰어나고, 멜라닌생성과 티로시네이즈활성을 억제하여 우수한 피부미백효과를 나타낸다. 또한 염증억제효과, 항비만효과, 항산화효과, 면역억제효과, 탈모 및 발모효과 등이 있으므로 이를 유효성분으로 함유하는 조성물은 주름개선, 기미나 주근깨 개선 및 피부미백, 염증억제, 비만억제, 면역조절, 탈모방지 및 육모에 매우 효과적이다.

브라질리안 페퍼 오일, 주름개선, 피부미백, 염증억제, 항비만, 면역억제, 탈모방지

Description

브라질리안 페퍼 오일을 함유하는 피부용 조성물{Skincare composition containing Brazilian pepper oil}

도 1은 브라질리안 페퍼 오일(Brazilian pepper oil)에 의한 mushroom tyrosinase 억제효과를 나타낸 것이다 .

도 2은 브라질리안 페퍼 오일(Brazilian pepper oil)에 의한 B16 melanoma세포에서의 멜라닌 생성 억제효과를 나타낸 것이다 .

본 발명은 피부용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 제품 안정성이 우수하고 피부에 대한 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있으며 주름개선효과, 피부미백효과, 항비만효과, 면역조절효과, 탈모방지 및 육모효과가 우수한 브라질리안 페퍼 오일을 포함하는 피부용 조성물에 관한 것이다.

주름은 피부의 노화로 생기며 노화된 피부란 노화의 과정과 연관된 자연적 변화의 총체이다. 피부노화는 크게 두 가지로 구분되며 피부표면 전체에서 나이와 관련된 피부 기능, 구조 모양의 변화를 나타내는 생리적 노화와 자외선에 의한 광노화로 구분된다.

피부에 노화가 진행되면 진피의 변화가 현저한데 70세 이후 나타나는 진피위축은 대표적인 노화현상이다. 진피의 변화는 섬유아세포(Fibroblast)의 숫자와 그들의 합성 능력의 감소로 인하여 세포외 기질중 큰 분자량을 가진 물질들이 변화로 발생된다. 그 구체적인 변화는 콜라겐 다발의 분리, 점다당질 합성감소, 콜라겐과 탄력섬유(elastin)수와 직경 감소, 콜라겐과 탄력섬유 분쇄, 혈관의 팽창 등을 들 수 있다. 일반적으로 피부의 수분 함유량, 콜라겐 함유량 및 외부 환경에 대한 면역 작용 능력 등 여러 가지 복합적인 요인들 중 주름의 형성에 가장 큰 영향을 미치는 것은 콜라겐의 생성량과 콜라겐의 함량을 감소시키는 콜라겐 분해 효소인 콜라게네이즈의 발현량과 활성이다. 브라질리안 페퍼 오일의 콜라겐과 콜라게네이즈 효소에 미치는 영향은 밝혀져 있지 않았으나 본 실험을 통해 브라질리안 페퍼 오일이 콜라겐 합성을 증가시키고 콜라게네이즈 효소를 억제하는 결과를 보였다.

사람의 피부색은 피부 내부의 멜라닌(melanin) 농도와 분포에 따라 결정되어진다. 인체 피부의 멜라닌 세포에서 생성되는 멜라닌 색소는 검은 색소와 단백질의 복합형태를 갖는 페놀계 고분자 물질로서, 자외선으로 발생하는 피부손상을 차단하는 중요한 역할을 하고 있다. 멜라닌 생합성에는 멜라닌 세포에 존재하는 티로시나제의 작용이 가장 중요한 것으로 보고되어 있고, 티로시나제(tyrosinase)는 아미노산의 일종인 티로신(tyrosine)을 멜라닌 중합체 생성의 중간산물인 도파(DOPA), 도파퀴논(dopaquinone)으로 전환함으로써 피부 흑화과정에 핵심적 역할을 수행한다.

환경오염, 자동차배기가스 등으로 인해 호르몬 불균형 현상이 심화되고 있다. 이로 인해 탈모 발생율이 높아지고, 발생연령도 낮아지고 있고, 피부면역시스템의 부조화가 초래되어 아토피와 건선같은 다양한 피부질환 등이 발생하고 있다. 또한 인스턴트 음식, 육류중심의 식생활변화로 어린나이에도 불구하고 비만으로 고통을 받고 있는 인구가 급격히 증가하고 있다.

따라서, 미적인 차원뿐만 아니라 심각한 사회문제가 되고 있는 여러가지 현상 즉, 내인선노화와 자외선에 의한 주름발생, 기미 또는 주근깨, 비만, 면역불균형, 탈모 등과 같은 현상을 효과적으로 해결할 수 있는 물질개발이 심도깊게 연구되고 있다.

이러한 배경 하에서, 본 발명자들은 안전성과 안정성이 높으며, 피부관련 효능이 우수한 화장료를 찾기 위하여 천연식물을 대상으로 유효물질을 검색한 결과, 브라질리안 페퍼오일이 미백, 주름 등을 포함한 다양한 효능을 가지고 있으면서, 안전성과 안정성이 뛰어남을 확인하였다.

브라질리안 페퍼 오일은 브라질리안 페퍼트리(Brazilian peppertree)라 불리는 Schinus terebinthiofolius 나무열매에서 추출된다. 브라질리안 페퍼트리의 핑크색 또는 붉은색의 열매는 휘발성 터펜(volatile terpenes)을 가지고 있으며 pink peppercorns으로 불리기도 한다. 브라질리안 페퍼 오일은 자체의 독특한 향 때문에 음료 첨가제나 음식 제조시 후추 대용으로 이용되고 있으며 알려진 효능으로는 소화개선효과, 항균효과, 항진균 효과, 상처치료 효과등이 있다.

본 발명자들은 주름개선효과, 미백효과, 항비만효과, 탈모방지 및 육모효과, 항산화효과, 면역조절효과가 우수하고 안정성이 높아 피부 부작용이 없는 신규의 단일 물질을 개발하고자 노력한 결과, 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 하나의 목적은 브라질리안 페퍼 오일(Brazilian pepper oil)을 포함하는 주름개선용, 피부미백용, 염증억제용, 항비만용, 항산화용, 면역억제용, 발모 및 탈모방지용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 하나의 목적은 상기 조성물을 포함하는 주름개선용, 피부미백용, 염증억제용, 항비만용, 항산화용, 면역억제용, 발모 및 탈모방지용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 하나의 목적은 상기 조성물을 포함하는 주름개선용, 피부미백용, 염증억제용, 항비만용, 항산화용, 면역억제용, 발모 및 탈모방지용 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.

하나의 양태로서, 본 발명은 브라질리안 페퍼 오일(Brazilian pepper oil)을 포함하는 주름개선용, 피부미백용, 염증억제용, 항비만용, 항산화용, 면역억제용, 발모 및 탈모방지용 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 브라질리안 페퍼 오일은 천연 공급원(Schinus terebinthifolius)로부터 분리하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 브라질리안 페퍼 오일은 Schinus terebinthifolius 열매의 정유를 증기증류법(steam distillation)이나 압착법으로 분리해 낸 것으로, 이러한 추출 및 분리 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다.

본 발명의 브라질리안 페퍼 오일의 피부관련 다양한 효과를 알아보기 위하여, 일반적으로 이용되는 여러종류의 효능측정방법을 사용하여 실험한 결과, 기존 미백제로 알려진 알부틴보다 멜라닌 생성 억제 효능이 우수하였고, 주름개선, 염증억제, 면역조절, 비만억제효과, 항산화효과도 보유하고 있음을 알 수 있었다. 따라서, 본 발명의 브라질리안 페퍼 오일은 주름개선 효과 뿐만 아니라, 상기와 같은 다양한 효능을 가지고 있음을 알 수 있었다.

본 발명의 피부용 조성물에서, 브라질리안 페퍼 오일의 양은 전체 조성물에 대하여 0.0001 내지 10 중량%가 바람직하다. 0.00001 중량% 미만인 경우에는 피부관련 효능이 너무 미약하고, 15 중량%를 초과하는 경우에는 함량의 증가에 따른 효과의 증가가 미비하고 제형상의 안정성이 확보되지 않는 문제점이 있다. 보다 바람직하게는 브라질리안 페퍼 오일은 전체 조성물에 대하여 0.0001 내지 5 중량% 포함된다.

다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 주름개선용, 피부미백용, 염증억제용, 항비만용, 항산화용, 면역억제용, 발모 및 탈모방지용 화장료 조성물에 관한 것이다.

상기 화장료 조성물은 유효 성분으로서의 브라질리안 페퍼 오일 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예를 들어 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및/또는 담체를 포함한다. 또한 상기 화장료 조성물은 주름개선효과를 증진시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테 르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에서, 브라질리안 페퍼 오일의 양은 전체 조성물에 대하여 0.0001 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.0001 내지 5 중량% 포함할 수 있다.

다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 주름개선용, 피부미백용, 염증억제용, 항비만용, 항산화용, 면역억제용, 발모 및 탈모방지용 약제학적 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 약제학적 조성물에서, 브라질리안 페퍼 오일의 양은 전체 조성물에 대하여 0.0001 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.0001 내지 5 중량% 포함할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물의 제형으로는 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 연고, 크림 등의 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 제형화하여 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 비경구, 경구 등의 다양한 경로로 투여될 수 있으며, 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다. 이때, 비경구 경로로는 경피 투여가 바람직하며, 그 중에서도 국소 도포가 가장 바람직하다.

상기 제제의 투여량은 대상자의 연령, 성별, 체중, 증상, 투여 방법에 의해 상이하나, 외용제의 경우는 1일당 1.0 내지 3.0㎖로 이를 1일 1 내지 5회 도포하여 1개월 이상 계속하는 것이 좋다.

또한, 경구형 제형의 경우도 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 0.1 내지 100㎎/㎏의 양을 1일 1회 내지 수회 투여할 수 있다. 또한 그 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

한편, 본 발명의 구체적 실시예에서 브라질리안 페퍼 오일에 대한 피부누적 자극시험 결과 브라질리안 페퍼은 천연 물질로서 인체에 무해한 물질임이 밝혀졌다. 따라서, 본 발명의 브라질리안 페퍼 오일은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 장기간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있으며, 특히 상기한 바와 같은 화장료 조성물 및 약제학적 조성물 등에 안전하게 적용할 수 있다.

이하 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 그러나 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

실시 예 1: 브라질리안 페퍼 오일의 주름개선 효과 측정

주름개선효과는 통상 콜라겐 생합성능과 콜라게네이즈 분해 억제능 및 사람에 대한 이상시험으로서 효과를 측정할 수 있다. 사람의 정상 섬유 아세포 (Human normal fibroblast, 태평양)를 DMEM 배지가 들어 있는 6-웰 마이크로 플레이트에 접종시키고 (2 X 10⁵ 세포/웰) 5% 농도의 CO₂ 배양기에 37℃로 24시간 배양하였다. 24시간 후, 각 웰에서 배지를 제거한 후, 농도별로 시료를 처리한 후, 24시간 동안 다시 배양하였다. 24시간 후, 세포배지를 수집하여 샘플을 제조하였다.

콜라겐 합성량은 콜라겐 측정 키트 (Procollagen Type I C-peptide EIA kit (MK101), Takara, Kyoto, Japan)를 이용하여 프로콜라겐 (procollagen) 타입 I C-펩타이드 (Type I C-peptide: PICP)의 양을 측정하였다. 자세한 시험방법은 Takara의 킷트 설명서에 따라 수행하였다.

콜라겐을 분해하는 효소인 콜라게네이즈의 활성정도를 측정하는 방법으로 콜라게나제에 대한 항체를 이용하였다. 콜라게네이즈 활성을 유도하는물질로 phorbol myristate acetate(PMA)를 처리하였다. 전체적인 시험법은 공지된 상업적으로 판매되는 킷트의 방법에 따라 수행하였다. 타입 I 콜라게나제 어세이 키트 (Amersham Biosciences, RPN2629)를 이용하였으며, ELISA 판독기로 흡광도를 측정하였다. 측정된 표준치는 평균+표준편차의 형태로 표시하였고 SPSS/PC+ 프로그램을 이용하여 t-test로 유의성을 검정하였고 그 결과를 하기 표에 나타내었다.

	브라질리안 페퍼 오일 (1 ppm)	브라질리안 페퍼 오일 (10 ppm)	브라질리안 페퍼 오일 (50 ppm)
콜라겐 합성증가율	2	15	18
콜라게네이즈 억제율	0	10	17

표 1에 나타난 바와 같이, 브라질리안 페퍼 오일은 주름개선 효능을 가지고 있음을 알 수 있었다.

실시예 2: 브라질리안 페퍼 오일을 함유한 화장료의 주름개선 효과 측정

브라질리안 페퍼 오일을 함유한 화장료의 주름 개선효과를 임상 시험을 통하여 측정하였다. 제조예 A (브라질리안 페퍼 오일을 각각 1%, 2%, 5% 함유한 영양 크림), 및 비교 제조예 (정제수를 함유한 영양 크림)에서 제조한 영양 크림을 사용하였다.

주름개선 효과는 피부탄력 변화의 측정을 통해 평가하였다. 피부탄력의 측정은 온도 24 내지 26℃, 습도 38 내지 40%로 일정하게 유지되는 조건에서 건강한 여성 30명 (25 내지 35세)을 대상으로 제조예 A의 3종류와 비교 제조예의 영양 크림을 각각 피검자의 얼굴에 1일 2회씩 3개월 동안 사용하게 한 후, Cutometer SEM 474를 이용하여 측정함으로써 이루어졌으며, 판정기준은 피부탄력이 없는 경우를 0, 많은 경우를 5로 하여 상대적인 값을 비교하였다. 시험결과는 하기 표2에 나타내었다.

브라질리안 페퍼 오일의 피부탄력 개선 효과

시험항목	제조예 A (브라질리안 페퍼 오일1% 함유크림)	제조예 A (브라질리안 페퍼 오일2% 함유크림)	제조예 A (브라질리안 페퍼 오일 5% 함유크림)	비교 제조예 A (브라질리안 페퍼 오일 0% 함유크림)
피부탄력도	2.15	2.31	2.54	2.01

표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명의 제조예 A가 비교 제조예에 비해 주름개선 효과가 훨씬 우수하였으며, 브라질리안 페퍼 오일의 함유 농도가 증가함에 따라 피부탄력도 향상되었다.

실시예 3 : 브라질리안 페퍼 오일에 의한 머쉬룸 티로시나제 활성억제 효과 측정

머쉬룸 티로시네이즈(mushroom tyrosinase)를 이용하여 브라질리안 페퍼 오일에 멜라닌 생성에 중요한 역할을 담당하는 티로시네이즈 억제효과를 측정하였다.

기질인 L-tyrosin(sigma)과 mushroom tyrosinase 그리고 시료를 함께 반응시킨 후 티로신으로부터 생성된 도파크롬의 양을 O.D 값을 통해 확인하였다. 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

시료	처리 농도 (ppm)	멜라닌 생성 억제율 (%)
알부틴	50	32
브라질리안 페퍼 오일	10	33
	50	89

상기 표 3에 기재된 바와 같이, 브라질리안 페퍼 오일이 알부틴보다 머쉬룸 티로시나제 억제율을 높음을 알 수 있었다.

실시예 4 : 브라질리안 페퍼 오일에 의한 멜라닌 생성 억제효과 측정

쥐의 색소세포(B16 melanoma cells)를 이용하여 브라질리안 페퍼 오일에 의한 멜라닌 생성 억제효과를 측정하였으며, 이를 멜라닌 생성을 억제하는 것으로 알려진 알부틴에 의한 멜라닌 생성 억제효과와 비교하였다.

본 실험은 murine melanoma(B-16 F10) 세포를 10%의 FBS(fetal bovine serum)가 함유된 DMEM 배지로 6-well plate에 well당 1× 10⁵ 개로 접종한 후, 5 % CO₂ 및 37 ℃하에서 세포가 well 바닥에 약 80 % 이상 부착될 때까지 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 시료를 적당 농도로 희석된 배지에 교체하고, 5% CO_{2 ,} 37 ℃하에서 3일간 배양하였다. 브라질리안 페퍼오일의 농도범위는 세포독성이 없는 1 μM, 10μM, 50 μM 으로 결정하였다. 배지를 제거한 세포를 PBS(phosphated buffer saline)로 세척하고, 이것을 트립신으로 처리하여 세포를 회수하였다. 회수된 세포는 hematocytometer를 이용하여 세포수를 측정한 후 5,000 내지 10,000 rpm으로 10분간 원심분리한 다음 상등액을 제거하여 pellet을 얻었다. 이 세포 pellet을 60℃에서 건조한 후, 10% DMSO가 함유된 1M 수산화나트륨액 100 ㎕를 넣어 60 ℃ 항온조에서 세포내 멜라닌을 얻었다. 이 액을 가지고 microplate reader로 490 nm에서 흡광도를 측정하여 세포 일정 수당 멜라닌 양을 구하였다. 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

시료	처리 농도 (ppm)	멜라닌 생성 억제율 (%)
알부틴	50	23
브라질리안 페퍼 오일	10	16
	50	49

상기 표 4에 기재된 바와 같이, 처리 농도에서 브라질리안 페퍼 오일은 알부틴보다 멜라닌 생성 억제율이 높음을 알 수 있다.

실시예 5 : 동물수준에서의 미백 효과 평가

사람과 유사하게 자외선에 의해 색소침착이 생긴다고 알려진 갈색 몰모토(Tortoiseshell guinea pigs; Brown guinea pigs)를 사용하여 브라질리안 페퍼 오일에 의한 미백효과를 측정하였다.

상기 갈색 몰모토에서 자외선(UV)에 의한 색소침착을 유발하기 위하여, 갈색 몰모토 배위의 털을 제거한 피부에 3 X 3 cm²의 정방형 창문이 뚫린 차광용 알루미늄 호일을 접착시킨 후, SE lamp(파장 290-320 nm, Toshiba)로 자외선을 조사하였다(총조사 에너지량 = 1350 mJ/cm²). 자외선 조사후 알루미늄 호일을 벗겨내고 아래와 같은 방법으로 시료(브라질리안 페퍼 오일, 및 알부틴)를 도포하였다. 자외선 조사후 2, 3일 후에 색소침착이 나타났으며, 약 2주후에 최고에 도달하였고, 이 때부터 각 시료를 도포하였다.

도포회수는 1일 1회 또는 2회로, 50일간 계속하였다. 시료는 특정한 용매(Propylene Glycol: Ethanol: Water = 5: 3: 2의 혼합용매)를 사용하여 용해 및 희석하였으며, 면봉으로 도포하고, 다른 부위에 반드시 용매를 도포하는 대조부위를 마련하였다. 효과 판정과 함께 누적자극성 여부도 관찰하였다.

색차계(미놀타 CR2002 chromameter)를 사용하여 피부의 흑백정도를 측정하여 효과를 판정하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다. 색을 표시하는데는 L^*A^*B^* 표색계를 사용하며, 본 발명에서는 L^*값을 지표로 하였다. L^*값은 표준 백판으로 교정하며, L^*값은 1개 부위에 5회 이상 반복하여 측정하였고, 색소침착을 균등하게 하였다. 도포 시작시점과 완료시점에서의 피부색의 차이(△L^*)를 구하고 이 값으로 효과를 판정하였다. 그 결과는 하기 표 5에 나타내었다.

실험식 1

△L^* = 도포 00일 후의 L^*값 - 도포 개시일의 L^*값

△L^* 값을 시료도포 부위와 대조군 부위에 대해서 구한 후 비교하면 미백물질의 효과를 알 수 있다.

시료	처리 농도 (%)	미백효과 (△L)
브라질리안 페퍼 오일	0.2	0.27
	1.0	0.31
알부틴	1.0	0.29
대조군	-	0.24

상기 표 5에 기재된 바와 같이, 브라질리안 페퍼 오일은 알부틴보다 우수한 미백효과를 보였으며, 시험물질 도포시험 중 누적 자극을 보인 것은 관찰되지 않아 안전성 또한 우수한 것으로 나타났다.

실시예 6 : 브라질리안 페퍼 오일의 인체 피부에 대한 안전성 확인 실험

브라질리안 페퍼 오일이 인체피부에 안전한지 확인하기 위하여, 피부 안전성 검증 실험을 수행하였다. 이를 위해 피부누적자극시험을 실시하였다.

스쿠알렌을 베이스로 브라질리안 페퍼 오일을 각각 1%, 5%, 10%를 첨가한 제형을 제조하고, 이를 사용하여 건강한 30명의 성인을 대상으로 윗팔뚝 부위에 격일로 총 9회의 24시간 누적 첩포를 시행하여 브라질리안 페퍼 오일이 피부에 자극을 주는지의 여부를 측정하였다.

첩포 방법은 핀 챔버 (Finn chamber, Epitest Ltd, 핀란드)를 이용하였다. 챔버에 상기 각 피부외용제를 15ul씩 적하한 후 첩포를 실시하였다. 매회 피부에 나타난 반응의 정도를 하기 수학식 2를 이용하여 점수화 하였으며, 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다.

평균반응도=[[반응지수x 반응도/ 총피검자수 x 최고점수 (4점)] x 100 ] ÷ 검사회수 (9회)

반응도에서 ± 는 1점, +는 2점, ++는 4점의 점수를 부여하며, 평균반응도가 3 미만일 때 안전한 조성물로 판정된다.

시험물질	반응이 나타난 피검자 수									평균반응도
	1주			2주			3주
	1차	2차	3차	4차	5차	6차	7차	8차	9차
	± ＋ ＋＋	± ＋ ＋＋	± ＋ ＋＋	± ＋ ＋＋	± ＋ ＋＋	± ＋ ＋＋	± ＋ ＋＋	± ＋ ＋＋	± ＋ ＋＋
대조군(스쿠알렌)	0 - -	0 - -	- - -	- - -	- - -	- - -	- - -	- - -	- - -	0.00
브라질리안 페퍼 오일(1%) [시험군 1]	0 - -	0 - -	- - -	- - -	- - -	- - -	- - -	- - -	- - -	0.00
브라질리안 페퍼 오일(5%) [시험군 2]	1 - -	0 - -	- - -	- - -	- - -	- - -	- - -	- - -	- - -	0.09
브라질리안 페퍼 오일(10%) [시험군 3]	2 - -	0 - -	- - -	- - -	- - -	- - -	- - -	- - -	- - -	0.18

상기 표 6에서 시험군 1, 2,3 모두 ±, +, ++에 해당하는 사람의 수가 각각 0명, 1명, 2명이고, 평균 반응도는 0.00, 0.09, 0.18이었다. 그러므로 평균반응도가 3이하의 반응도를 나타내므로, 브라질리안 페퍼오일은 뚜렷한 누적자극 양상을 나타내지 않는 인체 피부에 안전한 물질로 판정되었다.

실시 예 7: 항산화효과

DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)은 색을 띄는 라디칼로 시료의 라디칼 제거능력을 색깔의 변화로 직접 확인할 수 있다. 먼저 용매에 녹인 시료에 20 ul를 96 well 플레이트에 넣고 200 uM DPPH solution을 180 ul씩 다시 넣어준 후, 상온에서 30분간 incubation한다. 남아있는 DPPH의 양을, 540nm에서의 흡광도 측정을 통해 결정한다. 브라질리안 페퍼 오일의 항산화력 결과는 하기 표 7에 나타내었다. 간략하게 효과는 시료에 의한 자유라디칼 제거율을 관찰함으로써, 항산화기능의 유무를 판단하였다.

시료	처리 농도 (ppm)	자유라디칼 제거율 (%)
브라질리안 페퍼 오일	10	5
	100	8
	1000	24

상기 표 7에 기재된 바와 같이, 브라질리안 페퍼 오일은 항산화효과를 가지고 있음을 알 수 있었다.

실시 예 8: 항염증효능 평가

항염증 효과가 있는지 살펴보기 위하여 인간단핵구 세포인 THP-1 세포에서의 통상의 방법에 따라 COX 활성억제능 실험을 시행하였다. COX 활성 측정은 F. J. Van de Ouderaaa and Muytenhek 가 발표한 Method in Enzymology 43, 9(1994)에 따라 시행하였다. COX assay는 THP-1세포주를 배양한다음 24-well plate에 세포들을 분주한다. Well당 incubation volume은 500㎕로 맞추고 lipopolysaccharide(1㎍/㎖)와 하기 표에 표기된 용매에 각각 녹인 test compound 2㎕를 첨가한 다음 24-48시간 동안 같은 조건으로 배양한다. 24-48시간 후 각 well에 calcium ionophore와〔1-14C〕arachidonic acid 1㎕(in EtOH, 0.1μCi/㎖)를 첨가후 같은 조건으로 10분간 배양한다. 배양후 각 well에 citric acid를 첨가하여 pH를 3.5로 맞추어 흔들어 준다음 각 배양액을 500㎕취하여 microcentrifuge tube에 분주한 다음 ethylacetate 700㎕를 첨가하여 10분 동안 진탕추출한다. Ethylacetate층을 500㎕취하여 speed vacuum dryer를 이용하여 20분 동안 농축한다음 농축된 residue는 20㎕ ethylacetate로 녹인다음 TLC plate에 authentic standard와 함께 apply한다. Radioactive band는 authentic eicosanoid standards로 확인하며 확인된 band의 radioactivity는 BAS 2000 bio-imaging analyzer를 통하여 측정하였다 (표 8).

시료	COX활성(%)
LPS (1㎍/㎖)	100
LPS(1㎍/㎖)+ 브라질리안 페퍼오일(1 ppm)	89
LPS(1㎍/㎖)+ 브라질리안 페퍼오일(10 ppm)	70
LPS(1㎍/㎖)+ 브라질리안 페퍼오일(50 ppm)	65

상기 표 8에 기재된 바와 같이, 브라질리안 페퍼 오일은 COX의 활성을 효과적으로 억제하고 있음을 알 수 있다. 이를 통해 염증억제 효능이 있음을 알 수 있다.

실시 예 9: 면역억제능 평가

본 발명에 사용된 시료들이 염증과 관련된 면역관련 반응을 억제하는지의 여부를, IL-2 루시퍼라아제 리포터 활성실험을 통해 다시 조사하였다. IL-2 프로모터는 염증과 관련된 면역관련 시토카인의 생산에 중요한 역할을 한다고 보고되어 있다. IL-2 루시퍼라아제 활성을 측정하기 위해서 다음과 같은 방법을 사용하였다. 인간 T림프구세포주인 Jurkat 세포를 6 well에 각각 1x10⁶개의 세포를 분주한 후, 수퍼펙트 트란스펙션 리에전트(superfect transfection reagent)를 이용하여 IL-2 루시퍼라아제 리포터 프라스미드 DNA (IL-2 luciferase reporter plasmid DNA)를 형질감염(transfection)시켰다. 형질감염 후 24시간이 경과한 후, PHA(Phytohemaglutinin) (100ng/ml)를 처리하여 Jurkat 세포를 활성화시킴과 동시에 각각의 시료를 농도별로 처리하였다. 24시간 후 세포를 수집하여 루미노미터(luminometer)를 이용하여 루시퍼라아제 활성을 측정하였다. 결과를 정리하면 다음과 같다.

시료	IL-2루시퍼라아제 활성
PHA (100ng/㎖)	100
PHA(100ng/㎖)+ 브라질리안 페퍼오일(1 ppm)	99
PHA(100ng/㎖)+ 브라질리안 페퍼오일(10 ppm)	93
PHA(100ng/㎖)+ 브라질리안 페퍼오일(50 ppm)	71

상기 표 9에 기재된 바와 같이, 브라질리안 페퍼 오일은 인터루킨-2의 발현을 억제함으로써 면역조절기능을 가지고 있음을 알 수 있다.

실시 예 10: 항비만효과

비만억제시험은 일반적으로 잘 알려진 동물을 이용한 하기 방법으로 실시하였다. 그 결과를 표에 나타낸다.

(비만억제활성의 측정방법)Crj : 생후 7주된 ICR 계 수컷 마우스(닛폰챨스리버(주))를 1주일 동안 예비사육한 후, 1군 7마리로 실험에 사용하였다. 동물은 온도 23±1℃, 습도 55±5%, 조명시간 12시간/일(day)로 설정된 항온항실에서 사육하고, 사료에 라보MR (닛폰노산 제)을 사용하며 물은 자유롭게 섭취할 수 있도록 하였다. 브라질리안 페퍼 오일은 0.1%, 1%가 되도록 리포좀제형(레시틴 5%에 녹인 것)으로 제조하였다. 각 시료 용액은 마우스 10g당 0.1㎖ 투여되도록 농도조정하여, 투여량을 1.5g/kg, 1g/kg으로 하였다. 또한, 대조군은 5% 레시틴 에멀젼으로 하였다. 마우스는 투여하기 전날부터 절식(絶食) 상태로 하여 다음 날 강제로 단회(單回) 투여하였다. 시험기간은 2주일로 하고, 체중 및 일반증상을 측정, 관찰하였다.

용제	일수	체중(g)
		무처리구	브라질리안 페퍼오일(0.1%)	브라질리안 페퍼오일(1%)
브라질리안 페퍼 리포좀제형	5	35	34	35
	10	41	39	38
	15	49	44	43

결과: 브라질리안 페퍼 오일은 비만억제 효과를 나타내었다. 투여 농도가 높아질수록 그 효능이 우수함을 관찰할 수 있었다.

실시 예 11: 탈모방지 및 육모효과

탈모방지와 육모효과에 대한 효과를 측정하기 위하여 시료를 방부제와 점증제만 함유한 하이드로젤 베이스로 만들어 시험을 실시하였다. 제조한 발모촉진용 외용액제를 이용하여 약화 또는 방사능노출에 따른 탈모 환자 10명의 탈모부위에 1일 2회 각각 3㏄씩 6개월간 적용하였다. 그 결과, 탈모 환자 8명에게서 새로운 모근이 발생하는 등의 우수한 효과가 있는 것으로 나타났다. 시험결과는 다음과 같다. 대조구로서 한미약품에서 판매 중인 목시딜을 사용하였다.

무처리군	목시딜	브라질리안 페퍼오일
-	++	++

-: 효과없음, +: 좋음, ++: 매우 좋음
상기 표 11에서 볼 수 있듯이, 본 발명의 브라질리안 페퍼 오일은 발모제로 판매되고 있는 목시딜과 유사한 발모 효능을 발휘한다는 것을 알 수 있다.

본 발명에 의하면 브라질리안 페퍼오일은 기존 미백제로 알려진 알부틴에 비해 우수한 멜라닌 생성억제율을 보이고 콜라겐합성촉진 능력과 콜라게네이즈 활성 억제효능을 가지고 있다. 또한 인체 안전성 시험에서 어떠한 독성이나 자극도 발생하지 않아 인체사용에 있어 안전한 물질인 것으로 판명되었다. 뿐만 아니라, 면역조절효과, 항염효과, 항산화효과, 비만억제효과, 탈모방지 및 육모효과등을 가지고 있음이 밝혀졌다. 따라서 본 발명의 브라질리안 페퍼오일은 주름개선과 미백효과뿐만 아니라, 다양한 용도의 화장료, 의약 또는 식품 등에 유용하게 사용할 수 있다.

Claims (12)

1. 브라질리안 페퍼 오일(brazilian pepper oil)을 유효성분으로 포함하는 주름개선용 조성물.
2. 브라질리안 페퍼 오일을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물.
3. 브라질리안 페퍼 오일을 유효성분으로 포함하는 염증억제용 조성물.
4. 브라질리안 페퍼 오일을 유효성분으로 포함하는 항비만용 약제학적 조성물.
5. 브라질리안 페퍼 오일을 유효성분으로 포함하는 면역억제용 조성물.
6. 브라질리안 페퍼 오일을 유효성분으로 포함하는 발모 촉진 및 탈모 방지용 조성물.
7. 브라질리안 페퍼 오일을 유효성분으로 포함하는 항산화용 화장료 조성물.
8. 제7항에 있어서, 상기 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 브라질리안 페퍼 오일이 전체 조성물의 총 중량에 대하여 0.0001 내지 10 중량% 포함되는 조성물.
10. 제1항 내지 제3항, 제5항 및 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
11. 제10항에 있어서, 상기 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
12. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.

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