KR100832745B1 - Composition for controlling plant diseases which comprises lignan compounds, resorcinol compounds or nutmeg extract and method for controlling plant disease using same - Google Patents

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Abstract

본 발명은 리그난(lignan)계 화합물, 레조시놀(resorcinol)계 화합물 또는 이를 포함하는 육두구(nutmeg) 추출물을 유효성분으로 함유하는 식물병 방제용 조성물 및 이를 이용한 식물병 방제방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 방제용 조성물은 천연물로부터 유래하여 인체에 무해하고 환경오염을 유발하지 않으면서 다양한 식물병에 대하여 높은 방제활성을 나타내므로 환경친화적인 천연물 살균제의 개발 및 고부가가치의 유기농산물 생산에 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to a plant disease control composition comprising a lignan compound, a resorcinol compound or a nutmeg extract comprising the same as an active ingredient, and a plant disease control method using the same. The control composition according to the present invention is derived from natural products and is harmless to the human body and exhibits high control activity against various plant diseases without causing environmental pollution, and thus is useful for the development of environmentally friendly natural product disinfectants and the production of high value-added organic products. Can be used.

Description

리그난계 화합물, 레조시놀계 화합물 또는 이를 포함하는 육두구 추출물을 함유하는 식물병 방제용 조성물 및 이를 이용한 식물병 방제방법{COMPOSITION FOR CONTROLLING PLANT DISEASES WHICH COMPRISES LIGNAN COMPOUNDS, RESORCINOL COMPOUNDS OR NUTMEG EXTRACT AND METHOD FOR CONTROLLING PLANT DISEASE USING SAME}COMPOSITION FOR CONTROLLING PLANT DISEASES WHICH COMPRISES LIGNAN COMPOUNDS, RESORCINOL COMPOUNDS OR NUTMEG EXTRACT AND METHOD FOR CONTROLLING PLANT DISEASE USING SAME}

도 1은 본 발명의 실시예 2에 따라 육두구로부터 방제 활성성분을 분리, 정제하는 과정을 도식화한 것이다. 1 is a diagram illustrating a process of separating and purifying the active ingredient from a nutmeg according to Example 2 of the present invention.

본 발명은 리그난(lignan)계 화합물, 레조시놀(resorcinol)계 화합물 또는 이를 포함하는 육두구(nutmeg) 추출물을 유효성분으로 함유하는 식물병 방제용 조성물 및 이를 이용한 식물병 방제방법에 관한 것이다.The present invention relates to a plant disease control composition comprising a lignan compound, a resorcinol compound or a nutmeg extract comprising the same as an active ingredient, and a plant disease control method using the same.

재배 작물의 집약적 단지화와 연중 재배체계 등으로 인해 병이나 해충의 발 생 빈도와 정도가 심화되어 방제를 하지 않을 경우 작물에 따라서는 30 내지 100%의 수확량 감소가 야기된다. 전 세계적으로 식량확보를 통하여 인류를 기아에서 해방시키는데 합성농약이 중요한 역할을 한 것은 사실이나, 병, 해충과 잡초방제에 오남용이 되고 있으며, 이에 따라 인축에 대한 독성 및 환경오염 등 여러 가지 문제점들이 야기되고 있다. Intensive complexation of cultivated crops and year-round cultivation systems intensify the incidence and extent of disease and pests, resulting in a yield reduction of 30 to 100%, depending on the crop. Synthetic pesticides have played an important role in freeing humanity from hunger through food security worldwide, but they are being misused in controlling diseases, pests and weeds. It is caused.

생물농약은 환경친화적 작물보호제로서 합성농약과는 달리 인축 및 생태계에 안전하여 부가가치가 높은 농산물을 생산할 수 있고, 합성농약으로 방제하기 어려운 병해충을 효과적으로 방제하여 안전한 농작물의 생산량을 증대시킴과 동시에 합성농약의 오남용으로 인한 문제점을 해결할 수 있다. 최근에는 환경 및 다른 생물계에 미치는 영향은 최소화하면서 효과적으로 작물을 보호하는 환경친화형 생물농약을 개발하고자 하는 연구가 전 세계적으로 활발히 수행되고 있다. 이러한 연구의 일환으로, 미국과 유럽에서는 다양한 미생물농약(microbial pesticides), 생화학농약(Biochemical pesticides), 천연물농약, 신호화학물질(semiochemicals) 등이 개발되어 시판되고 있다. 국내에는 살균제 5종과 살충제 14종 등 총 19개 품목의 미생물농약이 등록되어 있으나 이중 12종은 수입 미생물이다. 식물 추출물이나 식물 유래 물질 등을 이용한 생화학농약의 경우에는 2005년에 등록 규정이 마련되었으나, 현재까지 등록된 생화학농약은 전혀 없는 실정이다. Biopesticides are environmentally friendly crop protection agents, unlike synthetic pesticides, which are safe for human farming and ecosystems, which can produce high value-added agricultural products. It can solve the problems caused by misuse. Recently, researches are being actively conducted around the world to develop environmentally friendly biopesticides that effectively protect crops while minimizing their impact on the environment and other biological systems. As part of this research, various microbial pesticides, biochemical pesticides, natural product pesticides and signal chemicals have been developed and marketed in the US and Europe. A total of 19 microbial pesticides are registered in Korea, including 5 fungicides and 14 pesticides, of which 12 are imported microorganisms. In the case of biochemical pesticides using plant extracts or plant-derived substances, registration regulations were established in 2005, but there are no registered biochemical pesticides.

한편, 육두구(nutmeg, Myristica fragrans Houtt.)는 동남아 열대지방에서 자라는 육두구과의 상록교목으로, 이의 열매를 따서 씨만을 꺼내어 말린 후 검은색의 단단한 씨껍질을 제거한 후 석회즙에 하룻밤 담갔다가 상온에서 말린 것을 육두 구(nutmeg; Myristicae Semen)라 하며, 육질의 겉껍질을 벗겨서 말린 것을 육두구화(mace)라 한다. 육두구는 정유성분과 고형지방을 함유하고 있고, 방향성 건위약, 구풍, 흥분제, 향신료, 머리염색약으로 사용된다. 또한, 육두구는 환각제와 비슷한 성질을 가져 많이 복용할 경우 환각현상과 환영현상이 증가한다. 국내에서는 육두구 추출물을 이용한 가공식품(대한민국 특허등록 제387994호), 피부용 조성물(대한민국 특허공개 제2002-91487호), 구강케어 조성물(대한민국 특허공개 제2006-24369호) 및 살조활성(대한민국 특허등록 제517519호) 등에 대한 발명이 공개되어 있다. 또한, 육두구로부터 분리한 다이하이드로구아이아레트산(dihydroguaiaretic acid)의 항암활성(대한민국 특허공개 제1999-34285호)에 대한 발명도 공개되어 있다.Nutmeg, Myristica fragrans Houtt. It is called nutmeg (Myristicae Semen), and peeled and dried meat skin is called mace. Nutmeg contains essential oils and solid fats and is used as a fragrance for stomach, sensation, spice, hair dye. In addition, nutmeg has similar properties to hallucinogens, so if you take a lot of hallucinations and phantoms increase. In Korea, processed foods using nutmeg extract (Korea Patent Registration No. 387994), skin compositions (Korea Patent Publication No. 2002-91487), oral care compositions (Korea Patent Publication No. 2006-24369), and algae activity (Korea Patent Registration) No. 517519) is disclosed. Moreover, the invention about anticancer activity (Korean Patent Publication No. 1999-34285) of dihydroguaiaretic acid isolate | separated from nutmeg is also disclosed.

육두구는 리그난계 화합물과 레조시놀계 화합물인 말라바리콘(malabaricone) 등을 활성성분으로 포함하는데, 리그난 화합물에 대해서는 항암활성 및 항산화활성(Filleur 등, Planta Med. 67: 700-704, 2001), 항세균활성(Nakatani 등, Phytochemistry 27: 3127-3129, 1988), 간효소활성에의 변화(Woo 등, Phytochemistry 26: 1542-1543, 1987), 항바이러스활성(Hwu 등, J. Med. Chem. 41: 2994-3000, 1998), DNA 중합효소 Ⅰ과 Ⅱ 저해활성(Li 등, Biol. Pharm. Bull. 27: 1147-1150, 2004) 등이 보고되어 있다. 또한, 레조시놀 화합물인 말라바리콘의 생리활성에 대해서는 항산화활성(Birija 등, J. Agric. Food. Chem. 53: 6912-6918, 2005), 아르그-진지페인(arg-gingipain) 저해활성(Shinohara 등, Biosci. Biotechnol. Biochem. 63: 1475-1477, 1999), 항세균활성(Shinohara 등, Biosci. Biotechnol. Biochem. 63: 1475-1477, 1999; Orabi 등, J. Nat. Prod. 54: 856-859, 1991), 칸디다 알비칸스(Candida albicans)에 대한 항진균활성(Orabi 등, J. Nat. Prod. 54: 856-859, 1991) 등이 알려져 있다. 그러나, 식물병원곰팡이를 포함하여 사상곰팡이에 대한 육두구 추출물 및 이의 활성성분인 리그난계 화합물과 레조시놀계 화합물의 항균활성에 대해서는 보고된 바가 없다.Nutmeg contains the lignan compound and the resorcinol compound malabaricone as an active ingredient, and for the lignan compound anticancer activity and antioxidant activity (Filleur et al., Planta Med. 67: 700-704, 2001), anti Bacterial activity (Nakatani et al., Phytochemistry 27: 3127-3129, 1988), changes in liver enzyme activity (Woo et al., Phytochemistry 26: 1542-1543, 1987), antiviral activity (Hwu et al ., J. Med. Chem . 41 : 2994-3000, 1998), DNA polymerase I and II inhibitory activity (Li et al . , Biol. Pharm. Bull . 27: 1147-1150, 2004). In addition, antioxidant activity (Birija et al ., J. Agric. Food. Chem . 53: 6912-6918, 2005), and arg-gingipain inhibitory activity, Shinohara et al ., Biosci. Biotechnol. Biochem . 63: 1475-1477, 1999), antibacterial activity (Sinohara et al ., Biosci. Biotechnol. Biochem . 63: 1475-1477, 1999; Orabi et al ., J. Nat. Prod . 54: 856-859, 1991) and antifungal activity against Candida albicans (Orabi et al . , J. Nat. Prod . 54: 856-859, 1991). However, the antimicrobial activity of nutmeg extracts and their active ingredients, lignans and resorcinol compounds, against filamentous fungi, including phytopathogenic fungi, has not been reported.

상기에서 언급한 바와 같이 합성농약의 여러 문제점과 유기농산물에 대한 수요 급증에 따라 그 어느 때 보다도 효과가 우수한 생물농약의 개발이 필요한 실정이다. 이에 본 발명자들은 천연추출물 및 물질을 이용하여 인체에 무해하면서 환경친화적인 천연물 살균제를 개발하기 위하여 연구 노력한 결과, 리그난계 화합물, 레조시놀계 화합물 또는 이를 포함하는 육두구 추출물이 다양한 식물병에 대하여 매우 높은 방제활성을 나타냄을 발견하고, 이를 식물병 방제를 위한 천연물 살균제로 사용할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다. As mentioned above, there is a need for the development of biopesticides that are more effective than ever, due to various problems of synthetic pesticides and demand for organic products. Therefore, the present inventors have conducted research to develop an environmentally friendly natural product fungicide that is harmless to the human body using natural extracts and materials. As a result, the lignan compound, resorcinol compound, or nutmeg extract containing the same is very high for various plant diseases. The present invention was completed by finding that it exhibits control activity and confirming that it can be used as a natural fungicide for controlling plant diseases.

본 발명의 목적은 천연물로부터 유래하여 인체에 무해하고 환경오염을 유발하지 않으면서 벼 도열병, 토마토 역병, 밀 붉은녹병, 보리 흰가루병 및 고추 탄저병 등 다양한 식물병에 대해 우수한 방제활성을 나타내는 환경친화적인 식물병 방제용 조성물을 제공하는 것이다.An object of the present invention is an environmentally friendly plant which is derived from natural products and shows excellent control against various plant diseases such as rice blast, tomato late blight, wheat red rust, barley flour and red pepper anthrax without harming the human body and causing environmental pollution. It is providing the composition for bottle control.

또한, 본 발명의 목적은 상기 방제용 조성물을 이용한 식물병의 방제방법을 제공하는 것이다.It is also an object of the present invention to provide a method for controlling plant diseases using the composition for controlling the above.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1의 리그난계 화합물, 화학식 2의 넥탄드린-B, 화학식 3의 레조시놀계 화합물 또는 이를 포함하는 육두구 추출물을 함유하는 식물병 방제용 조성물을 제공한다:In order to achieve the above object, the present invention provides to the lignan compound, nektan gave -B, resorcinol when phenolic compound or a composition for controlling plant diseases comprising a nutmeg extract containing them of the formula (III) of formula 2 of the formula :

Figure 112006031680716-pat00001
Figure 112006031680716-pat00001

상기 식에서, Where

R1 및 R2는 각각 독립적으로 OMe 또는 OH이거나, 함께 연결되어 -OCH2O-를 형성한다.R 1 and R 2 are each independently OMe or OH, or are linked together to form —OCH 2 O—.

Figure 112006031680716-pat00002
Figure 112006031680716-pat00002

Figure 112006031680716-pat00003
Figure 112006031680716-pat00003

상기 식에서,Where

R1 및 R2는 각각 독립적으로 H 또는 OH이다.R 1 and R 2 are each independently H or OH.

또한, 본 발명은 상기 방제용 조성물을 작물 또는 토양에 처리하여 다양한 식물병을 방제하는 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for controlling various plant diseases by treating the control composition to crops or soil.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 천연물로부터 유래하여 인체에 무해하고 환경오염을 유발하지 않으며, 다양한 식물병에 대하여 높은 방제활성을 나타내는 상기 화학식 1의 리그난계 화합물, 화학식 2의 넥탄드린-B, 화학식 3의 레조시놀계 화합물 또는 이를 포함하는 육두구 추출물을 유효성분으로 하는 식물병 방제용 조성물을 제공한다.The present invention is derived from natural products, harmless to the human body and do not cause environmental pollution, the lignan compound of formula (1 ), nectandrin-B of formula (2 ), resorcinol system of formula (3) exhibiting high control against various plant diseases It provides a compound or a composition for controlling plant diseases comprising the nutmeg extract containing the same as an active ingredient.

본 발명에서 다양한 식물병에 대하여 방제활성을 나타내는 바람직한 화합물로는 상기 화학식 1의 리그난계 화합물로서 에리스로-오스트로베이리그난-6(erythro-austrobailignan-6; R1-R2=-OCH2O-)와 메조-다이하이드로구아이아레트산(meso-dihydroguaiaretic acid; R1=OMe, R2=OH); 리그난계 화합물인 화학식 2의 넥탄드린-B(nectandrin-B); 및 상기 화학식 3의 레조시놀계 화합물로서 말라바리콘-A(malabaricone-A; R1=R2=H), 말라바리콘-B(R1=H, R2=OH) 및 말라바리콘-C(R1=R2=OH)를 사용할 수 있다.Preferred compounds exhibiting antifungal activity against a variety of plant diseases in the present invention is a lignan compound of the formula (1) erythromycin-Ost bay lignans -6 (erythro -austrobailignan-6; R 1 -R 2 = -OCH 2 O- ) And meso- dihydroguaiaretic acid (R 1 = OMe, R 2 = OH); Nectandrin-B of Formula 2, which is a lignan compound; And when dry as resorcinol phenolic compound of the formula (3) barikon -A (malabaricone-A; R 1 = R 2 = H), do barikon -B (R 1 = H, R 2 = OH) and do barikon -C (R 1 = R 2 = OH) can be used.

본 발명에 사용되는 식물재료로는 육두구(nutmeg, Myristica fragrans Houtt.)와 상기 화학식 1 내지 3의 방제 활성성분들을 생산하는 것으로 알려진 미 리스티카 알젠티아(M. argentea ; Papuya-type nutmeg)를 포함한 육두구속(Myristica)에 속하는 100여종의 식물체의 종자 또는 종피를 사용하는 것이 바람직하다.Plant materials used in the present invention include nutmeg ( Myristica fragrans Houtt.) And M. argentea ( M. argentea ) known to produce the active ingredients of the control formula (1) to ( 3 ); It is preferable to use seeds or seedlings of about 100 plants belonging to Myristica , including Papuya-type nutmeg.

본 발명에 따른 육두구 추출물은 육두구의 종자 또는 이의 건조물과 육두구화(mace), 즉 육두구의 종피를 유기용매로 추출함으로써 제조할 수 있다. 본 발명에서 추출용 유기용매로는 메탄올, 메탄올 수용액, 에탄올 및 에탄올 수용액과 같은 저급알콜, 헥산, 에틸아세테이트, 아세톤, 메틸렌클로라이드 등을 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있다.The nutmeg extract according to the present invention can be prepared by extracting seeds of nutmeg or dried products thereof, and nutmeg (mace), that is, the seed of nutmeg with an organic solvent. As the organic solvent for extraction in the present invention, lower alcohols such as methanol, aqueous methanol solution, ethanol and aqueous ethanol solution, hexane, ethyl acetate, acetone, methylene chloride, etc. may be used alone or in combination.

예를 들어, 건조시킨 육두구 1 ㎏에 약 5 내지 20 ℓ, 바람직하게는 8 내지 12 ℓ의 저급알콜을 가하고 20 내지 60℃, 바람직하게는 상온에서 6시간 내지 3일 동안 침출시켜 저급알콜 추출물을 얻은 후, 이를 다른 유기용매로 추가로 추출하여 유기용매 추출물을 얻는다. 본 발명에서는 또한 당분야에서 통상적으로 사용되는 분획 공정을 수행할 수도 있다. For example, about 5 to 20 L, preferably 8 to 12 L, of lower alcohol is added to 1 kg of dried nutmeg, and the lower alcohol extract is leached at 20 to 60 ° C, preferably at room temperature for 6 hours to 3 days. After obtaining, it is further extracted with another organic solvent to obtain an organic solvent extract. In the present invention, it is also possible to carry out the fractionation process commonly used in the art.

상기 화학식 12로 표시되는 리그난계 화합물, 바람직하게는 에리스로-오스트로베이리그난-6, 메조-다이하이드로구아이아레트산 및 넥탄드린-B, 또는 화학식 3으로 표시되는 레조시놀계 화합물, 바람직하게는 말라바리콘-A, B 및 C는 육두구 추출물로부터 분리·정제하거나 화학적으로 합성할 수 있다.Lignan-based compounds represented by the above formulas (1) and ( 2 ), preferably erythro-ostrobayignan-6, meso-dihydroguaiaretic acid and nectandrin-B, or a resorcinol-based compound represented by formula (3 ), Preferably Malabaricone-A, B and C can be isolated, purified or chemically synthesized from the nutmeg extract.

구체적으로, 상기 6종의 방제활성을 갖는 리그난계 화합물 및 레조시놀계 화합물은 육두구의 유기용매 추출물을 컬럼 크로마토그래피로 분획하여 분리·정제하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다(도 1 참조). 이때, 사용가능한 컬럼은 실리카겔 컬럼, 역상실리카겔 컬럼 또는 세파덱스 컬럼 등이 있고, 용출액으로는 헥산, 에틸아세테이트, 클로로폼, 메틸렌클로라이드, 아세톤, 저급알콜 등과 같은 유기용매 및 이들의 혼합액을 사용할 수 있다. Specifically, the lignan compound and the resorcinol compound having the six control activities can be prepared by a method comprising separating and purifying the organic solvent extract of nutmeg by column chromatography ( FIG. 1). Reference). In this case, the usable column may be a silica gel column, a reverse phase silica gel column or a Sephadex column, and the eluent may be an organic solvent such as hexane, ethyl acetate, chloroform, methylene chloride, acetone, lower alcohol, and a mixture thereof. .

본 발명의 바람직한 실시예에서는, 건조된 육두구를 메탄올로 추출하고 감압 농축하여 얻은 메탄올 추출물을 증류수로 용해한 후, 이를 에틸아세테이트와 같은 유기용매로 추출하여 얻은 추출물을 감압 농축한 다음, 농축액을 반복적인 실리카겔 컬럼 크로마토그래피와 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 에리스로-오스트로베이리그난-6, 메조-다이하이드로구아이아레트산, 넥탄드린-B, 말라바리콘-A, B 및 C를 순수하게 분리한다. In a preferred embodiment of the present invention, the dried nutmeg extracted with methanol and concentrated under reduced pressure to dissolve the methanol extract obtained by distilled water, and then extracted with an organic solvent such as ethyl acetate and concentrated under reduced pressure, the concentrated solution is repeated Purification was performed by silica gel column chromatography and Sephadex LH-20 column chromatography to purify erythro-ostroglyignan-6, meso-dihydroguaiaretic acid, nectanrin-B, malariconic-A, B and C pure water. To separate.

본 발명에 따른 육두구의 메탄올 추출물, 이로부터 분리·정제된 에리스로-오스트로베이리그난-6, 메조-다이하이드로구아이아레트산, 넥탄드린-B, 말라바리콘-A, B 및 C의 방제활성을 조사한 결과, 육두구의 메탄올 추출물은 벼 도열병, 토마토 역병, 밀 붉은녹병, 보리 흰가루병 및 고추 탄저병에 대하여; 에리스로-오스트로베이리그난-6은 벼 도열병, 밀 붉은녹병 및 보리 흰가루병에 대하여; 메조-다이하이드로구아이아레트산은 벼 도열병, 벼 잎집무늬마름병 및 밀 붉은녹병에 대하여; 넥탄드린-B는 벼 도열병, 벼 잎집무늬마름병, 토마토 역병 및 밀 붉은녹병에 대하여 방제활성을 나타내었다. 그리고, 말라바리콘-A와 B는 벼 도열병, 밀 붉은녹병 및 고추 탄저병에 대하여; 말라바리콘-C는 벼 도열병, 토마토 역병, 밀 붉은녹병 및 고추 탄저병에 대하여 방제활성을 나타내었다(표 13 참조). Methanol Extract of Nutmeg according to the Present Invention, Control Activity of Erythro-Ostrobeirignan-6, Meso-Dihydroguaiaretic Acid, Nectandrin-B, Malabaricone-A, B and C As a result of the investigation, methanol extract of nutmeg was used against rice blast, tomato late blight, wheat rust, barley flour and red pepper anthrax; Erythro-austrobayignan-6 is used against rice blast, wheat rust and barley flour; Meso-dihydroguaiaretic acid is used against rice blast, rice leaf blight and wheat rust; Nectandrin-B showed control against rice blast, rice leaf blight, tomato blight and wheat rust. And Malabaricon-A and B are against rice blast, wheat rust and pepper anthrax; Malabaricon-C showed control activity against rice blast, tomato late blight, wheat rust and pepper anthrax (see Tables 1 and 3 ).

상기와 같은 특성을 나타내는 본 발명의 에리스로-오스트로베이리그난-6, 메조-다이하이드로구아이아레트산, 넥탄드린-B, 말라바리콘-A, B 및 C 또는 이를 포함하는 육두구 추출물은 인체에 무해하고 환경오염을 유발하지 않으면서 다양한 식물병에 대해 높은 방제활성을 나타내므로 벼 도열병, 벼 잎집무늬마름병, 토마토 역병, 밀 붉은녹병, 보리 흰가루병 및 고추 탄저병에 대한 천연물 살균제로 유용하게 사용될 수 있다.Erythro-Ostrobayrignan-6, meso-dihydroguaiaretic acid, nectandrin-B, Malabaricon-A, B and C or nutmeg extracts comprising the same according to the present invention exhibiting such characteristics are It is harmless and has high control activity against various plant diseases without causing environmental pollution, so it can be usefully used as natural product disinfectant for rice blast, rice leaf blight, tomato blight, wheat rust disease, barley flour and pepper anthrax. .

따라서, 상기 리그난계 화합물, 레조시놀계 화합물 또는 이를 포함하는 육두구 추출물을 유효성분으로 하는 벼 도열병, 벼 잎집무늬마름병, 토마토 역병, 밀 붉은녹병, 보리 흰가루병 및 고추 탄저병 방제용 조성물 역시 본 발명의 범위에 포함된다.Therefore, the composition for the control of rice blast, rice leaf blight, tomato blight, wheat red rust, barley flour and red pepper anthracnose, comprising the lignan compound, resorcinol compound or nutmeg extract containing the same as an active ingredient, is also within the scope of the present invention. Included in

본 발명의 방제용 조성물은 통상적으로 이용되는 살충제 또는 살균제에 함유되는 물질을 더욱 포함할 수 있으며, 상기 활성성분 이외에 부형제로 약제학적으로 허용 가능한 고체 담체, 액체 담체, 액체 희석제, 액화된 기체 희석제, 고체 희석제, 또는 기타 적당한 보조제, 예를 들면 유화제, 분산제 또는 기포제 등의 계면활성제를 더욱 포함할 수 있다. 본 발명의 방제용 조성물은 활성성분과 상기 부형제를 혼합하여 농업용 조성물로 제제화시켜 사용할 수 있고, 농업용 조성물로 제제화하는 방법으로 당분야에서 통상적으로 사용되는 방법은 모두 적용할 수 있다. The control composition of the present invention may further include a substance contained in a commonly used insecticide or fungicide, and in addition to the active ingredient, a pharmaceutically acceptable solid carrier, liquid carrier, liquid diluent, liquefied gas diluent, Solid diluents, or other suitable auxiliaries such as emulsifiers, dispersants or foaming agents, may further be included. The control composition of the present invention may be used by formulating an agricultural composition by mixing the active ingredient and the excipient, and all methods commonly used in the art may be applied as a method of formulating an agricultural composition.

본 발명의 방제용 조성물은 수화제, 입제, 분제, 유제, 스프레이상, 연막제, 캅셀형 및 젤상의 제형이 바람직하고, 조성물의 부력을 위해 도넛형과 같은 제형을 통한 접촉제로서 제공되는 것이 바람직하다.The control composition of the present invention is preferably a formulation of a hydrating agent, granule, powder, emulsion, spray, smokescreen, capsule and gel, and is preferably provided as a contact through a formulation such as donut for buoyancy of the composition. Do.

본 발명의 방제용 조성물은 벼 도열병, 벼 잎집무늬마름병, 토마토 역병, 밀 붉은녹병, 보리 흰가루병 및 고추 탄저병을 효과적으로 방제하기 위하여 육두구 추출물은 100 ㎍/㎖ 내지 3,000 ㎍/㎖의 농도로, 에리스로-오스트로베이리그난-6, 메조-다이하이드로구아이아레트산, 넥탄드린-B, 말라바리콘-A, B 및 C는 각각 100 ㎍/㎖ 내지 1,000 ㎍/㎖의 농도로 포함하는 것이 바람직하나, 이는 작물의 종류, 생육 정도, 경작지 환경, 식물병의 발병 정도 등을 고려하여 적절하게 조절할 수 있다. In order to effectively control rice blast, rice leaf blight, tomato blight, wheat red rust, barley flour and red pepper anthrax, the nutmeg extract has a concentration of 100 µg / ml to 3,000 µg / ml. Ostrobeirignan-6, meso-dihydroguaiaretic acid, nectandrin-B, Malabaricon-A, B and C are preferably included at a concentration of 100 μg / ml to 1,000 μg / ml, respectively. This can be appropriately adjusted in consideration of the type of crop, the degree of growth, the cultivated land environment, the extent of the development of plant diseases.

상기와 같이 제형화된 본 발명의 방제용 조성물을 방제가 필요한 식물체 또는 지역에 처리함으로써 벼 도열병, 벼 잎집무늬마름병, 토마토 역병, 밀 붉은녹병, 보리 흰가루병 또는 고추 탄저병을 방제할 수 있다. 바람직한 방법은 상기 방제용 조성물을 식물 병원균과 직접 접촉할 수 있도록 적용하여 방제하는 것으로, 토양에 혼화 처리하거나 작물에 직접 분무하는 방법이 가장 바람직하다.By treating the control composition of the present invention formulated as described above to plants or areas that need control, rice blast, rice leaf blight, tomato blight, wheat rust, barley flour or pepper anthrax can be controlled. The preferred method is to apply the control composition so as to be in direct contact with the plant pathogens to control, the most preferred is a method of mixing the soil or spraying directly to the crop.

이하 본 발명을 하기 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following examples. However, the following examples are only for illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not limited thereto.

<실시예 1> 육두구 추출물의 식물병에 대한 방제활성Example 1 Control Activities of Nutmeg Extracts against Plant Disease

시중에서 구입한 육두구(Myristica fragrans)의 종자 건조시료 100 g당 1 ℓ의 메탄올을 첨가하고 실온에서 24시간 동안 침출하여 얻은 추출물을 여과지를 사용하여 여과하였다. 이로부터 얻어진 메탄올 추출물은 완전히 감압 농축한 후 실 험에 사용할 때까지 냉장 보관하였다. 1 l of methanol was added per 100 g of the dried seeds of Myristica fragrans , and the extract obtained by leaching at room temperature for 24 hours was filtered using a filter paper. The methanol extract thus obtained was concentrated under reduced pressure completely and refrigerated until use in the experiment.

메탄올 추출물의 식물병에 대한 방제활성을 조사하기 위하여, 대표적인 식물병인 벼 도열병, 벼 잎집무늬마름병, 토마토 잿빛곰팡이병, 토마토 역병, 밀 붉은녹병, 보리 흰가루병 및 고추 탄저병에 대한 방제활성 실험을 하기와 같이 수행하였다. 먼저, 메탄올 추출물을 메탄올에 용해시킨 후 250 ㎍/㎖의 트윈 20(Tween 20) 용액으로 희석하여 최종 농도가 3,000 ㎍/㎖이 되도록 준비하였다. 이때, 메탄올의 최종 농도는 5% 수준이 되도록 하였고, 증류수 30 ㎖에 1.5 ㎖의 메탄올(최종 농도 5%)과 7.5 ㎎의 트윈 20(최종 농도 250 ㎍/㎖)을 첨가한 용액을 음성 대조군으로 사용하였다. 이와 같이 제조된 메탄올 추출물과 대조군 시료들을 각각 병원균 접종 1일전에 식물체 유묘의 엽면에 분무 살포한 후 상온에서 24시간 동안 건조시켰다.To investigate the control activities of methanol extracts against plant diseases, we conducted experiments on the control activities of representative plant diseases rice blast, rice leaf blight, tomato ash mold, tomato late blight, wheat rust disease, barley flour and pepper anthrax. It was performed together. First, the methanol extract was dissolved in methanol and diluted with 250 µg / ml Tween 20 solution to prepare a final concentration of 3,000 µg / ml. At this time, the final concentration of methanol was 5%, and a solution containing 1.5 ml of methanol (final concentration 5%) and 7.5 mg of Tween 20 (final concentration 250 μg / ml) was added to 30 ml of distilled water as a negative control. Used. Methanol extracts and control samples thus prepared were spray sprayed on the foliar of plant seedlings 1 day before inoculation of the pathogen, and then dried at room temperature for 24 hours.

실험에 사용한 벼, 토마토, 보리 및 밀은 지름 4.5 ㎝의 플라스틱 포트에 수도용 상토 또는 원예용 상토를 70% 정도 채운 후, 종자를 파종하여 25±5℃의 온실에서 1주 내지 4주간 재배하였다. 벼 도열병은 3∼4엽기의 유묘에 도열병의 원인균인 마그나포르테 그리세아(Magnaporthe grisea, 한국화학연구원)의 포자 현탁액(5×105 포자/㎖)을 분무 접종하고, 25℃의 습실상에서 하루 동안 습실처리한 후, 25℃의 항온실에서 5일간 배양하여 발병을 유도하였다. 벼 잎집무늬마름병은 잎집무늬마름병의 원인균인 타네이트포러스 큐큐메리스(Thanatephorus cucumeris, 한국화학연구원)를 배지(밀기울 90 g, 왕겨 15 g 및 증류수 100 ㎖)에서 7일간 배양하여 얻은 배양물을 5엽기 유묘에 접종하고 25℃의 습실상에서 4일간 습실처리한 후, 25℃의 항온실에서 4일간 배양하여 발병을 유도하였다. 토마토 역병은 3∼4엽기 토마토 유묘에 역병의 원인균인 파이토프토라 인페스탄스(Phytophthora infestans, 강릉대학교)의 유주자낭(105 유주자낭/㎖)에서 나출된 유주자 현탁액을 분무 접종한 후 25℃의 습실상에서 2일간 습실처리하고 25℃의 항온항습실에서 2일간 배양하여 발병을 유도하였다. 토마토 잿빛곰팡이병은 토마토 3∼4엽기 유묘에 잿빛곰팡이병의 원인균인 보트리티스 시네리아(Botrytis cinerea, 한국화학연구원)의 포자 현탁액(106 포자/㎖)을 처리한 후, 20℃의 습실상에서 3일간 배양하여 발병을 유도하였다. 밀 붉은녹병은 1엽기 유묘에 활물기생균으로 알려진 녹병의 원인균인 퍽시니아 리콘디타(Puccinia recondita, 인천대학교)의 포자를 250 ㎍/㎖의 트윈 20 용액에 0.67 g 포자/ℓ의 양으로 현탁하여 분무 처리하고 20℃의 습실에서 하루 동안 습실처리한 후 20℃의 항온실로 옮겨 6일간 배양하여 발병을 유도하였다. 보리 흰가루병은 보리의 1엽기 유묘에 숙주 식물에서 계대배양된 흰가루병의 원인균인 에리시페 그래미니스 폼 스피시스 호르데이(Erysiphe graminis f. sp. hordei, 한국화학연구원)의 포자를 털어서 접종하고 20℃의 항온실에서 7일간 배양하여 발병을 유도하였다. 벼 도열병, 밀 붉은녹병, 보리 흰가루병은 접종 7일 후, 벼 잎집무늬마름병은 접종 8일 후, 그리고 토마토 잿빛곰팡이병과 토마토 역병은 각각 접종 3일과 4일 후에 병반면적율을 조사하였다.Rice, tomatoes, barley and wheat used in the experiment were filled with water or clay for horticulture 70% in plastic pots with a diameter of 4.5 cm, and then seeded and grown in a greenhouse at 25 ± 5 ℃ for 1 to 4 weeks. Rice blasts are sprayed with 3-4 leaf seedlings and sprayed with a spore suspension (5 × 10 5 spores / ml) of Magnaporthe grisea (Korea Research Institute of Chemical Research), which is the causative agent of blasting disease, After the wet treatment, the incubation was induced by incubation for 5 days in a constant temperature room at 25 ℃. Rice foliar blight is cultured by culturing 7 days of cultivation of Thanatephorus cucumeris , a causative agent of blight blight, in medium (90 g of wheat bran, 15 g of chaff and 100 ml of distilled water). The seedlings were inoculated to seedlings, wet-treated in a wet chamber at 25 ° C. for 4 days, and then cultured in a constant temperature room at 25 ° C. for 4 days to induce the onset. The tomato late blight is caused by Phytophthora infestans (Gangneung University) After inoculation of the influenza suspension extracted from the incubator sacs (10 5 incubator sac / ml), the incubation was induced by incubation for two days in a humidified environment at 25 ° C. and incubated in a constant temperature and humidity room at 25 ° C. for two days. Tomato gray mold disease was treated with spore suspension (10 6 spores / ml) of Botrytis cinerea (Korea Research Institute of Chemical Technology), which is the causative agent of gray mold disease, in tomato seedlings of 3-4 leaves. In fact, 3 days incubation was induced to induce. Wheat red rust sprays spores of Puccinia recondita (University of Incheon), the causative agent of rust, known as biolactic bacteria, in a single-leaf seedling, suspended in 250 µg / ml Tween 20 solution with 0.67 g spores / ℓ. After treatment for one day in a 20 ℃ humid room and transferred to a 20 ℃ constant temperature room was incubated for 6 days to induce the onset. Barley powdery mildew is inoculated with spores of Erysiphe graminis f. Sp. Hordei (Korea Research Institute of Chemical Technology), which is the causative agent of powdery mildew, passaged from host plants, in barley seedlings. Incubation was induced by incubation for 7 days in a constant temperature room. The area ratios of rice blast, wheat rust, and barley flour were 7 days after inoculation, 8 days after inoculation for rice leaf blight, and 3 and 4 days after inoculation for tomato ash and tomato blight, respectively.

한편, 고추 탄저병에 대한 방제활성 실험을 위해서는, 지름 7.0 ㎝의 플라스 틱 포트에 원예용 상토를 70% 정도 채운 후 최아된 고추 종자를 파종하고, 이를 온실에서 5∼6엽기까지 키운 다음 상기에서 준비된 육두구의 메탄올 추출물 시료를 엽면 살포하였다. 시료 살포 후 24시간 동안 상온에서 건조시킨 다음 고추 탄저병원균인 콜레토트리쿰 코코데스(Colletotrichum coccodes, 고려대학교)의 포자 현탁액(1×106 포자/㎖)을 분무 접종하였다. 습실상에서 2일간 발병시킨 후 25℃의 항온실에 1일간 방치하였고, 접종 3일 후에 병반면적율을 조사하였다.On the other hand, for the control activity test for pepper anthracnose disease, 70% of horticultural soils are filled in a plastic pot with a diameter of 7.0 ㎝, sowing the seeds of the lowest pepper, growing them in the greenhouse to 5 to 6 leaves and then prepared above. Methanol extract samples of nutmeg were foliarly sprayed. After spraying the sample was dried at room temperature for 24 hours, and then spray inoculated with a spore suspension (1 × 10 6 spores / ml) of the red pepper Anthrax bacterium Colletotrichum coccodes (Korea University). After 2 days of invasion in a humid room, it was left in a constant temperature room at 25 ° C. for 1 day, and the lesion area ratio was examined after 3 days of inoculation.

이로부터 얻은 병반면적율을 이용하여 하기 수학식 1에 따라 방제가를 계산하였고, 상기 7가지 식물병에 대한 육두구의 메탄올 추출물의 방제활성을 하기 표 1에 나타내었다.The control value was calculated according to the following Equation 1 using the disease area ratio obtained therefrom, and the control activities of the methanol extract of nutmeg against the seven plant diseases are shown in Table 1 below.

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상기 표 1에 나타난 바와 같이, 육두구의 메탄올 추출물은 벼 도열병, 토마토 역병, 밀 붉은녹병, 보리 흰가루병 및 고추 탄저병에 대하여 매우 높은 방제활성을 나타내었다. As shown in Table 1 , the methanol extract of nutmeg showed very high control against rice blast, tomato late blight, wheat red rust, barley flour and red pepper anthrax.

<실시예 2> 방제 활성성분의 분리 및 정제Example 2 Isolation and Purification of the Controlled Active Ingredient

육두구의 건조시료 100 g에 1 ℓ의 메탄올을 가한 후 상온에서 1일간 침출하여 얻은 메탄올 추출물을 여과지를 사용하여 여과한 다음 여과액을 감압 농축하였다. 상기 육두구의 메탄올 추출물을 500 ㎖의 80% 메탄올에 용해시킨 후 동량의 헥산(hexane)으로 2회 추출한 후 헥산층과 수용액층을 감압 농축하였다. 농축한 수용액층을 다시 500 ㎖의 증류수로 용해한 후 동량의 에틸아세테이트(ethylacetate)와 뷰탄올(butanol)로 2회씩 각각 추출하였다. 상기에서 얻은 세 가지 유기용매 추출물 및 수용액층을 감압농축한 후 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 7가지 식물병에 대한 방제활성을 조사하였다.1 L of methanol was added to 100 g of the dried sample of nutmeg, and the methanol extract obtained by leaching at room temperature for 1 day was filtered using filter paper, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. After dissolving the methanol extract of the nutmeg in 500 ml of 80% methanol, and extracted twice with the same amount of hexane (hexane), the hexane layer and the aqueous layer was concentrated under reduced pressure. The concentrated aqueous layer was again dissolved in 500 ml of distilled water and extracted twice with the same amount of ethylacetate and butanol. The three organic solvent extracts and the aqueous solution layer obtained above were concentrated under reduced pressure, and the control activities for the seven plant diseases were investigated in the same manner as in Example 1.

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그 결과, 상기 표 2에 나타난 바와 같이, 에틸아세테이트층이 7가지 식물병에 대해 전반적으로 가장 높은 방제활성을 보여 이 에틸아세테이트층을 방제 활성성분의 분리 및 정제에 사용하였다.As a result, as shown in Table 2 , the ethyl acetate layer showed the highest overall control activity against the seven plant diseases, this ethyl acetate layer was used for the separation and purification of the active ingredient control.

상기 에틸아세테이트층(11.4 g)으로부터 방제 활성성분을 분리하기 위하여, 상기 추출물에 대하여 클로로폼:메탄올의 혼합액(1%→100% 메탄올 농도구배)을 전개용매로 하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(5×60 ㎝, 카이젤 겔 60, 70-230 메쉬, 500 g: 머크사)를 실시하였다. 이로부터 얻은 용출액을 분취한 후 클로로폼:메탄올의 혼합액(99:1 또는 95:5, v/v)을 전개용매로 하는 박층 크로마토그래피(카이젤 겔 60 F254, 0.25 ㎜; 머크사)로 분석하였다. TLC의 패턴에 따라 F1 내지 F7의 7개 분획으로 나누고(클로로폼:메탄올의 혼합액(95:5)에서의 Rf 값; F1 = > 0.7, F2 = 0.6 - 0.7, F3 = 0.4 - 0.6, F4 = 0.3 - 0.4, F5 = 0.1 - 0.3, F6 = 0.05 - 0.1, F7 = < 0.05), 각 분획을 메탄올로 용해한 후 250 ㎍/㎖의 용액으로 각각의 분획이 2,000 ㎍/㎖ 농도가 되도록 희석하였고, 실시예 1과 동일한 방법으로 7가지 식물병에 대한 이들의 방제활성을 조사하였다. In order to separate the active ingredient from the ethyl acetate layer (11.4 g), silica gel column chromatography (5 × 60) was used as a developing solvent with a mixture of chloroform: methanol (1% → 100% methanol concentration gradient). Cm, Kaigel gel 60, 70-230 mesh, 500 g: Merck). The eluate obtained therefrom was separated and analyzed by thin layer chromatography (Kaygel gel 60 F254, 0.25 mm; Merck) using a mixture of chloroform: methanol (99: 1 or 95: 5, v / v) as the developing solvent. . Divide into seven fractions of F1 to F7 according to the pattern of TLC (Rf value in a mixture of chloroform: methanol (95: 5); F1 => 0.7, F2 = 0.6-0.7, F3 = 0.4-0.6, F4 = 0.3-0.4, F5 = 0.1-0.3, F6 = 0.05-0.1, F7 = <0.05), each fraction was dissolved in methanol and diluted with a solution of 250 µg / ml to a concentration of 2,000 µg / ml, In the same manner as in Example 1, their control activities against seven plant diseases were investigated.

그 결과, F1, F2, F3, F4 및 F5 분획이 높은 방제활성을 보였다. F1 분획(345 ㎎)으로부터 메틸렌클로라이드:헥산:메탄올(5:5:1, v/v/v)을 이용한 세파덱스-LH20 컬럼 크로마토그래피를 통하여 물질 1(191 ㎎)을 순수하게 분리하였다. F2 분획(1.3 g)으로부터는 실리카겔 컬럼에 가한 다음 헥산:에틸아세테이트(2:1, v/v)로 용출하여 물질 2(441 ㎎)를 순수하게 분리하였다. F3 분획(811 ㎎)으로부터는 클로로폼:메탄올(99:1, v/v)을 이용한 실리카겔 컬럼을 통하여 활성이 있는 두 개의 분획, 즉 F31 분획과 F32 분획을 획득하였다. F31 분획(103 ㎎)으로부터는 100% 메탄올을 이용한 세파덱스-LH20 컬럼 크로마토그래피를 통하여 물질 3(29 ㎎)을 순수하게 분리하였고, F32 분획(190 ㎎)으로부터는 메틸렌클로라이드:헥산:메탄올(5:5:1, v/v/v)을 이용한 세파덱스-LH20 컬럼을 통하여 물질 4(74 ㎎)를 순수하게 분리하였다. F4 분획(847 ㎎)으로부터는 클로로폼:메탄올(95:5, v/v)을 용출용매로 한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 통하여 물질 5(176 ㎎)를 순수하게 분리하였다. 마지막으로, F5 분획(2.2 g)으로부터는 클로로폼:메탄올(95:5, v/v)을 이용한 실리카겔 컬럼을 통하여 물질 6(522 ㎎)을 순수하게 분리하였다. As a result, the F1, F2, F3, F4 and F5 fractions showed high control activity. From the F1 fraction (345 mg), substance 1 (191 mg) was isolated purely through Sephadex-LH20 column chromatography using methylene chloride: hexane: methanol (5: 5: 1, v / v / v). F2 fraction (1.3 g) was added to a silica gel column and eluted with hexane: ethyl acetate (2: 1, v / v) to separate substance 2 (441 mg) purely. From the F3 fraction (811 mg), two active fractions were obtained through a silica gel column using chloroform: methanol (99: 1, v / v), that is, the F31 fraction and the F32 fraction. From the F31 fraction (103 mg), substance 3 (29 mg) was isolated purely by Sephadex-LH20 column chromatography using 100% methanol. From the F32 fraction (190 mg), methylene chloride: hexane: methanol (5 : 4 (74 mg) was isolated purely through Sephadex-LH20 column using: 5: 1, v / v / v). From the F4 fraction (847 mg), substance 5 (176 mg) was purified purely through silica gel column chromatography using chloroform: methanol (95: 5, v / v) as the eluent. Finally, substance 6 (522 mg) was purely separated from the F5 fraction (2.2 g) through a silica gel column using chloroform: methanol (95: 5, v / v).

<실시예 3> 방제 활성성분의 구조 결정Example 3 Structure Determination of a Control Active Ingredient

상기 실시예 2에서 육두구의 메탄올 추출물로부터 순수하게 분리된 6개의 방제 활성성분들을 질량분석기(JEOL JMS-DX303; JEOL Ltd., Tokyo, Japan)를 이용하여 분석하였다. 전자충돌(electron impact) 질량 스펙트럼(mass spectrum)으로 분석한 결과, 물질 1은 분자이온인 [M]+m/z 328에서 나타났고, 주요 분절이온이 m/z 137(기본피크), 315, 122, 105, 94, 77 등에서 검출되어, 오스트로베이리그난-6으로 추정되었다. 또한, 1H 및 13C-핵자기공명 분석 결과, 물질 1은 나카타니 등(Nakatani et al., Phytochemistry 27: 3127-3129, 1998; Nakatani et al., Chemistry Express 2: 627-630, 1987)이 보고한 에리스로-오스트로베이리그난-6(erythro-austrobailignan-6; 이하, “eA-6”로 약칭함)과 일치하는 것으로 확인되었다. Six control active ingredients isolated purely from the methanol extract of nutmeg in Example 2 were analyzed using a mass spectrometer (JEOL JMS-DX303; JEOL Ltd., Tokyo, Japan). Analysis by electron impact mass spectrum showed that substance 1 had a molecular ion [M] + at m / z 328, with a major segment ion at m / z 137 (base peak), 315 , 122, 105, 94, 77 and the like, and was estimated to be Ostrobayignan-6. In addition, as a result of 1 H and 13 C-nuclear magnetic resonance analysis, substance 1 was obtained by Nakatani et al. (Nakatani et al., Phytochemistry 27: 3127-3129, 1998; Nakatani et al., Chemistry Express 2: 627-630, 1987). reported that erythromycin - Australasia Bay in lignans 6; were found to match (erythro -austrobailignan-6 abbreviated as follows, "eA-6").

물질 2는 질량분석 결과, 분자이온인 [M]+m/z 326에서 나타났고, 주요 분절이온이 m/z 308, 293, 204, 189, 175, 165, 152, 137(기본피크), 91 등에서 검출되었다. 또한, 1H 및 13C-핵자기공명 분석 결과, 프루샷하만 및 사라다(Purushothaman and Sarada, J. Chem. Soc., Perkin Trans. I, 587-588, 1977)와 팜 등(Pham et al., Tetrahedron 56: 1707-1713, 2000)이 보고한 말라바리콘-A(malabaricone-A, 이하, “M-A”로 약칭함)와 일치하였다. Mass 2 showed that the molecular ion [M] + was found in m / z 326, and the major segment ions were m / z 308, 293, 204, 189, 175, 165, 152, 137 (base peak), 91 and the like. In addition, 1 H and 13 C-nuclear magnetic resonance analysis showed that Purushothaman and Sarada, J. Chem. Soc., Perkin Trans. I , 587-588, 1977 and Pham et al. , Malabaricone-A (abbreviated as “MA”) reported by Tetrahedron 56: 1707-1713, 2000.

물질 3은 질량분석 결과, [M]+m/z 330에서 나타났고, 주요 분절이온이 m/z 297, 192, 165, 152, 137(기본피크), 122, 94 등에서 검출되었다. 또한, 1H 및 13C-핵자기공명 분석 결과, 나카타니 등(Nakatani et al., 상동)이 보고한 메조-다이하이드로구아이아레트산(meso-dihydroguaiaretic acid, 이하, “mDA”로 약칭함)과 일치하였다. Mass 3 showed that [M] + was found at m / z 330, and major segment ions were detected at m / z 297, 192, 165, 152, 137 (base peak), 122, 94 and the like. In addition, it is abbreviated as meso- dihydroguaiaretic acid (hereinafter referred to as “mDA”) reported by Nakatani et al. (The homology) as a result of 1 H and 13 C-nuclear magnetic resonance analysis. ).

물질 4는 질량분석 스펙트럼에서 분자이온인 [M]+m/z 344에서 나타났고, 주요 분절이온들이 m/z 192(기본피크), 177, 161, 145, 137, 124 등에서 나타났다. 또한, 1H 및 13C-핵자기공명 스펙트럼은 나카타니 등(Nakatani et al., 상동)이 보고한 넥탄드린-B(nectandrin-B=malabaricanone-A, 이하, “N-B”로 약칭함)와 일치하였다. Material 4 showed molecular ions [M] + at m / z 344 and major segment ions at m / z 192 (base peak), 177, 161, 145, 137 and 124. In addition, 1 H and 13 C-nuclear magnetic resonance spectra are consistent with nectandrin-B (nectandrin-B = malabaricanone-A, hereinafter abbreviated as “NB”) reported by Nakatani et al. (Homologous). It was.

물질 5와 6의 질량분석 결과, 물질 5는 [M]+m/z 342에서 보였고, 주요 분절이온으로는 m/z 165, 152, 137(기본피크), 120, 107, 91 및 77을 보였다. 물질 6은 [M]+m/z 358에서 보였고, 주요 분절이온은 m/z 248, 220, 165, 149, 137(기본피크) 및 123이었다. 상기 두 물질에 대한 핵자기공명 분석을 실시한 결과, 두 물질의 1H 및 13C-핵자기공명 스펙트럼은 프루샷하만 및 사라다(Purushothaman and Sarada, 상동)와 팜 등(Pham et al., 상동)이 보고한 말라바리콘-B(이하, “M-B”로 약칭함)와 말라바리콘-C(이하, “M-C”로 약칭함)와 각각 일치하였다.Mass spectrometry of substances 5 and 6 showed that substance 5 showed [M] + at m / z 342 and the major segment ions were m / z 165, 152, 137 (base peak), 120, 107, 91 and 77. Seemed. Material 6 showed [M] + at m / z 358 and major segment ions were m / z 248, 220, 165, 149, 137 (base peak) and 123. As a result of nuclear magnetic resonance analysis of the two materials, the 1 H and 13 C-nuclear magnetic resonance spectra of the two materials were obtained from Purushothaman and Sarada (homologous) and Pham et al. (Homologous). The reported Malabaricon-B (hereinafter abbreviated as "MB") and Malabaricon-C (hereinafter abbreviated as "MC") are consistent with each other.

<실시예 4> 육두구 추출물 유래 방제 활성성분의 식물병에 대한 방제활성Example 4 Control Activity against Plant Diseases of Nutmeg Extract-Derived Active Ingredients

상기 실시예 3에서 육두구 추출물로부터 분리동정된 eA-6, mDA, N-B, M-A, M-B 및 M-C의 생체 내(in vivo) 방제활성을 조사하기 위하여, 벼 도열병, 벼 잎집무늬마름병, 토마토 잿빛곰팡이병, 토마토 역병, 밀 붉은녹병, 보리 흰가루병 및 고추 탄저병 등의 총 7가지 식물병에 대하여 하기와 같이 방제활성 실험을 수행하였다. In order to investigate the in vivo control activity of eA-6, mDA, NB, MA, MB and MC isolated from the nutmeg extract in Example 3, rice blast, rice leaf blight, tomato gray mold disease A total of seven plant diseases, including tomato blight, wheat rust, wheat flour and pepper anthrax, were tested as follows.

6가지 활성성분 각각을 아세톤에 용해시킨 후 250 ㎍/㎖의 트윈 20 용액을 가하여 최종 농도를 125, 250 및 500 ㎍/㎖로 조절하였으며, 모든 시료의 최종 아세톤 농도는 10%로 맞추었다. 이때, 대조군으로는 10% 아세톤과 250 ㎍/㎖의 트윈 20을 함유하는 용액을 사용하였다. 각 식물병당 2개의 포트를 이용하였고, 활성성분 시료를 엽면에 분무 살포한 후 24시간 동안 풍건한 다음 각각의 식물 병원균을 접종하였다. 이들 7가지 식물병에 대한 방제활성은 실시예 1에 기재된 방법에 따라 조사하였고, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다. After dissolving each of the six active ingredients in acetone, 250 μg / ml Tween 20 solution was added to adjust the final concentrations to 125, 250 and 500 μg / ml and the final acetone concentrations of all samples were adjusted to 10%. At this time, a solution containing 10% acetone and 250 μg / ml Tween 20 was used as a control. Two pots were used for each plant disease, and the active ingredient samples were spray-sprayed on the foliar and air-dried for 24 hours before inoculating each plant pathogen. The control activity against these seven plant diseases was investigated according to the method described in Example 1, and the results are shown in Table 3 below.

Figure 112006031680716-pat00007
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상기 표 3에 나타난 바와 같이, 분리한 6개의 물질들 모두 벼 도열병과 밀 붉은녹병에 대해서는 높은 활성을 보였으나, 토마토 잿빛곰팡이병에 대해서는 거의 효과가 없는 것으로 나타났다. 다른 4가지 식물병에 대해서는 물질에 따라 서로 다른 방제활성을 보였다. 벼 잎집무늬마름병에 대해서는 리그난계 화합물 중에서 mDA와 N-B만이 중간정도의 활성을 보였고, 토마토 역병의 경우에는 리그난계 화합물 중에서 N-B가 높은 활성을 보였으며, 레조시놀계 화합물 중에서는 M-C만이 높은 활성을 보였다. 보리 흰가루병에 대해서는 6가지 물질들 중에 eA-6만이 높은 방제활성을 보였다. 그리고, 고추 탄저병에 대해서는 M-B가 가장 높은 활성을 보였고, eA-6을 제외한 나머지 물질들은 중간정도의 방제활성을 보였다.As shown in Table 3 , all six substances isolated showed high activity against rice blast and wheat rust, but little effect on tomato gray mold. The other four plant diseases showed different control activities depending on the substances. In rice leaf blight, only mDA and NB showed moderate activity in lignan-based compounds, NB showed high activity in lignan-based compounds, and only MC in resorcinol-based compounds. . Among barley powdery mildew disease, only eA-6 showed high control activity. In addition, MB showed the highest activity for pepper anthrax and all other substances except eA-6 showed moderate control activity.

<실시예 5> 추출용매에 따른 방제가의 비교Example 5 Comparison of Control Values According to Extraction Solvents

육두구로부터 방제 활성성분 분리시 사용되는 추출용매에 따른 방제 활성을 비교하기 위하여, 육두구의 건조시료 10 g씩을 비이커에 넣은 다음 헥산; 헥산/에틸아세테이트(헥산으로 추출한 후 남은 시료를 다시 에틸아세테이트로 추출함); 에틸아세테이트; 메틸렌클로라이드; 아세톤; 및 메탄올의 6개 용매를 각각 100 ㎖씩 첨가하고 상온에서 12시간 동안 침출하였다. 이로부터 얻은 각각의 용매 추출물을 여과한 후 감압 농축하였다. 각각의 용매 추출물 시료를 아세톤 또는 메탄올에 용해시켰는데, 헥산, 에틸아세테이트, 헥산/에틸아세테이트 및 메틸렌클로라이드 추출물은 아세톤 3 ㎖에, 아세톤 및 메탄올 추출물은 메탄올 1.5 ㎖에 용해시켰다. 250 ㎍/㎖의 트윈 20 용액으로 각 시료의 부피를 30 ㎖로 맞추어 농도를 500, 1000 및 2000 ㎍/㎖이 되도록 희석한 후, 상기 7가지 식물병들 중에서 고추 탄저병을 제외한 6가지 식물병에 대한 방제활성을 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 조사하였다.In order to compare the control activity according to the extraction solvent used to separate the active ingredient from the nutmeg, 10 g of dried samples of nutmeg were placed in a beaker, followed by hexane; Hexane / ethyl acetate (extract the remaining sample after extraction with hexane again with ethyl acetate); Ethyl acetate; Methylene chloride; Acetone; And 6 ml of methanol each was added 100 ml and leached at room temperature for 12 hours. Each solvent extract obtained from this was filtered and concentrated under reduced pressure. Each solvent extract sample was dissolved in acetone or methanol, with hexane, ethyl acetate, hexane / ethyl acetate and methylene chloride extracts dissolved in 3 ml of acetone and acetone and methanol extracts in 1.5 ml of methanol. After diluting each sample to 30 ml with 250 µg / ml Tween 20 solution, the concentration was 500, 1000 and 2000 µg / ml. The control activity against was investigated in the same manner as in Example 1.

Figure 112006031680716-pat00008
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그 결과, 상기 표 4에 나타난 바와 같이, 헥산 추출물이 가장 낮은 방제활성을 나타낸 반면, 헥산/에틸아세테이트 추출물이 가장 높은 방제활성을 나타내었다. As a result, as shown in Table 4 , the hexane extract showed the lowest control activity, while the hexane / ethyl acetate extract showed the highest control activity.

한편, 6개의 추출물에 대하여 딸기 꽃잎과 과일, 잎, 화탁 및 화경 등에 대한 약해를 조사하였다. 각각의 추출물을 1000, 2000 및 4000 ㎍/㎖으로 트윈 20 용액(250 ㎍/㎖)에 용해한 후 딸기에 분무 살포하였고, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.On the other hand, the six extracts were investigated for their effects on strawberry petals, fruits, leaves, haze and flower garden. Each extract was dissolved in Tween 20 solution (250 [mu] g / ml) at 1000, 2000 and 4000 [mu] g / ml and spray sprayed onto strawberries, and the results are shown in Table 5 below.

Figure 112006031680716-pat00009
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(+++: 약해 면적이 >30% ; ++: 약해 면적이 5% - 30% ; +: 약해 면적이 1% - 5% ; ±: 약해 면적이 0.1 - 1% ; -: 무약해)(+++: weak area> 30%; ++: weak area 5%-30%; +: weak area 1%-5%; ±: weak area 0.1-1%;-: weak)

상기 표 5에서 보는 바와 같이, 아세톤 추출물과 메탄올 추출물이 가장 강한 약해를 일으킨 반면, 헥산 추출물이 가장 약한 약해를 일으켰다. 헥산/에틸아세테이트 추출물과 에틸아세테이트 추출물 및 메틸렌 클로라이드 추출물은 중간 정도의 약해를 보였다. As shown in Table 5 , the acetone extract and the methanol extract caused the strongest weakness, while the hexane extract caused the weakest weakness. Hexane / ethyl acetate extract, ethyl acetate extract and methylene chloride extract showed moderate weakness.

상기에서 살펴본 바와 같이, 육두구 추출물, 이로부터 분리, 정제된 리그난계 화합물 또는 레조시놀계 화합물을 유효성분으로 하는 본 발명의 방제용 조성물은 천연물로부터 유래하여 인체에 무해하고 환경오염을 유발하지 않으면서 벼 도열병, 벼 잎집무늬마름병, 토마토 역병, 밀 붉은녹병, 보리 흰가루병 및 고추 탄저병에 대하여 높은 방제활성을 나타내므로 환경친화적인 천연물 살균제의 개발 및 고부가가치의 유기농산물 생산에 유용하게 사용될 수 있다.As described above, the composition for control of the present invention comprising the nutmeg extract, the lignan compound or the resorcinol-based compound purified therefrom and purified from the natural product is harmless to the human body and does not cause environmental pollution. It has high control against rice blast, rice leaf blight, tomato blight, wheat red rust, barley flour and pepper anthracnose, so it can be useful for developing eco-friendly natural product disinfectant and producing high value-added organic products.

Claims (7)

에리스로-오스트로베이리그난-6, 메조-다이하이드로구아이아레트산, 넥탄드린-B, 말라바리콘-A, 말라바리콘-B, 말라바리콘-C 또는 이들 중 하나 이상을 포함하는 육두구 추출물을 유효성분으로 함유하는, 벼 도열병, 벼 잎집무늬마름병, 토마토 역병, 밀 붉은녹병, 보리 흰가루병 또는 고추 탄저병의 방제용 조성물.A nutmeg extract comprising erythro-austrobayignan-6, meso-dihydroguaiaretic acid, nectandrin-B, Malabaricon-A, Malabaricon-B, Malabaricon-C or one or more of these is effective A composition for control of rice blast, rice leaf blight, tomato late blight, wheat rust disease, barley flour or pepper anthrax containing as an ingredient. 삭제delete 삭제delete 제 1항에 있어서,The method of claim 1, 육두구 추출물이 메탄올, 메탄올 수용액, 에탄올, 에탄올 수용액, 아세톤, 헥산, 에틸아세테이트, 메틸렌클로라이드 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 용매를 사용하여 제조된 것임을 특징으로 조성물.Wherein the nutmeg extract is prepared using a solvent selected from the group consisting of methanol, aqueous methanol solution, ethanol, aqueous ethanol solution, acetone, hexane, ethyl acetate, methylene chloride and mixtures thereof. 제 1항에 있어서, The method of claim 1, 육두구 추출물이 100 ㎍/㎖ 내지 3,000 ㎍/㎖의 농도로 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.The nutmeg extract is characterized in that it comprises a concentration of 100 μg / ㎖ to 3,000 μg / ㎖. 제 1항에 있어서,The method of claim 1, 에리스로-오스트로베이리그난-6, 메조-다이하이드로구아이아레트산, 말라바리콘-A, 말라바리콘-B 또는 말라바리콘-C가 100 ㎍/㎖ 내지 1,000 ㎍/㎖의 농도로 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.Erythro-Ostrobayrignan-6, Meso-dihydroguaiaretic acid, Malabaricon-A, Malabaricon-B or Malabaricon-C are included at a concentration of 100 μg / ml to 1,000 μg / ml Composition. 제 1항의 식물병 방제용 조성물을 작물 또는 토양에 처리하는 것을 포함하는, 벼 도열병, 벼 잎집무늬마름병, 토마토 역병, 밀 붉은녹병, 보리 흰가루병 또는 고추 탄저병의 방제방법.A method of controlling rice blast, rice leaf blight, tomato blight, wheat red rust, barley flour or red pepper anthracnose comprising treating the plant disease control composition of claim 1 to crops or soil.
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