KR100744015B1

KR100744015B1 - 한약재를 이용한 치매 예방용 건강음료

Info

Publication number: KR100744015B1
Application number: KR1020060021087A
Authority: KR
Inventors: 길기정; 황대선; 한신희
Original assignee: 길기정
Priority date: 2006-03-06
Filing date: 2006-03-06
Publication date: 2007-07-30

Abstract

본 발명은 인삼, 산수유, 모과, 오미자의 한약재 추출액으로 치매 예방에 도움을 줄 수 있도록 한 한약재를 이용한 치매 예방용 건강음료에 관한 것이다.

즉, 본 발명은 인삼, 산수유, 모과, 오미자를 2:5:5:3의 비율로 혼합된 한약재에 증류수 1,300㎖을 가하여 열탕추출기에서 3시간 가열하여 얻은 추출액을 KIMTEX로 1회 여과한 후 감압 증류장치로 농축하였고, 이를 다시 동결 건조기를 이용하여 완전 건조한 한약추출물을 deep-freezer 냉동고(-84℃)에 보관한 뒤, 필요한 농도로 희석하여 사용함을 특징으로 한다.

건강음료, 침해방지, 한약재, 알츠하이머병, 추출물

Description

한약재를 이용한 치매 예방용 건강음료{Health drink for dementia prevention using a chinese medicine}

도 1은 CT-105 복제를 나타낸 데이터.

도 2는 AD 병태 생쥐의 행동관찰 데이터.

도 3은 PC-12 세포주의 APP 유전자 발현과 억제효과 관찰 데이터.

도 4는 AChE activity의 억제 효과를 나타내는 데이터.

도 5는 βA로 유도된 AD 병태 생쥐에 대한 기억력 감퇴 억제 효과를 나타내는 데이터.

도 6은 βA로 유도된 AD 병태 생쥐의 뇌세포 분석을 나타내는 데이터.

도 7은 세포 내 TNF-α 발현 억제 효과를 나타내는 데이터.

도 8은 AD 병태 생쥐 뇌조직의 허혈상태 및 조직손상에 미치는 효과를 나타내는 데이터.

도 9는 AD 병태 생쥐의 조직손상에 미치는 효과를 나타내는 데이터.

본 발명은 한약재들의 추출물을 대상으로 치매 치료제 및 예방제로서 사용될 수 있는 추출물을 검색하고 응용성을 타진하여 응용가능한 후보 한약재 추출물들을 대상으로 치매예방용 건강음료제품을 개발하는데 목적을 둠으로써 한약재자원의 고부가가치를 추구하고자 한다.

알츠하이머병(Alzheimer disease, AD)은 50세 이전에 증상이 나타나는 경우가 드물지만 60세 이후로는 나이가 들어감에 따라 발생 빈도가 점진적으로 증가하기 때문에, 노인 인구가 증가하고 있는 나라에서는 중대한 의료, 사회 및 경제적 문제를 야기하고 있다.

실제로 이 병의 유병률은 65-74세 사이에는 3%, 75-84세 사이에는 19%, 85세 이상에서는 47%로 나타나 있다.

현재 서구사회에서는 65세 이상 인구의 약 10%, 80세 이상 인구의 약 40-50%에서 알츠하이머병이 발생되고 있으며, 이미 미국에서는 이 질환 환자가 400만 명에 달하고 있고, 사망률이 심혈관 질환, 악성종양, 그리고 뇌졸중에 이어 제 4위를 점하고 있으며, 2000년대 중반까지는 1500만 명의 환자가 발생되리라 예견된다.

일본과 중국에서도 혈관성 치매에 비해 AD의 발병률이 해마다 증가하고 있어 커다란 사회문제를 야기하고 있다.

우리 나라의 평균수명은 1990년 71.3세에서, 2000년 74.3세, 2020년 76.95세에 이를 것으로 예상되고, 65세 이상의 노인인구도 1990년 2,144천 명에서 2000년 3,168천 명, 2020년에는 6,333천 명에 이르러 전체 인구의 약 12.5%를 점할 것으로 예측되는바, 우리 나라도 21세기에 들어서자마자 노인인구에 많은 각종 퇴행성 뇌질환들이 커다란 의료 및 사회적 문제로 대두하게 될 것이다.

게다가 가족구성이 핵가족 중심으로 급격히 변화하고 전통적인 효에 대한 가치관이 변화함에 따라 퇴행성 질환으로 인해 정상적인 생활을 유지할 수 없는 노인들이 가족의 돌봄을 받지 못하고 길거리를 떠도는 사태도 예측 가능하다.

더욱이 노인성 치매 또는 '노망'은 노령인구에서 '당연히' 일어나는 것이라는 사회적 통념 때문에 노인성 치매환자들이 의료기관에서 집중적인 치료를 받기가 어렵고, AD 환자를 대상으로 한 새로운 치료법의 개발이 어려운 형편이다.

따라서 의학적 관점에서 뿐 아니라 사회-경제적 측면에서도 퇴행성 뇌질환의 연구가 절실한 상태이며, 21세기 복지국가 실현을 위한 보건의료정책을 수립하는데 있어서도 우선적으로 고려되어야 할 분야이다.

한편, 알츠하이머병에서의 신경전달물질의 변화가 관찰되면서 노화에서의 신경전달물질의 변화에 대한 연구가 시작되었으며, 아세틸콜린(acetylcholine), 도파민(dopamine), 세로토닌 (serotonin), GABA의 경우에는 노화에 따라 감소하는 것으로 알려져 있다.

이러한 신경전달 물질의 감소와 그와 관련된 효소 등의 활성변화는 노화에 따른 인지기능 저하, 운동기능 저하 등과 연관이 있을 것으로 생각되고 있다.

이러한 배경으로 한약재에서 추출한 성분을 치매 예방용 건강음료로 제조하여 치매예방에 나선다면 사회적, 경제적, 문화적인 측면에서의 기대뿐만 아니라 한 약재의 고부가 가치를 높이는데 큰 효과가 있으리라 기대된다.

따라서, 본 발명은 상기와 같은 문제를 해결하기 위해 안출된 것으로서, 본 발명의 목적은, 한약재 추출물을 이용하여 치매치료에 효과가 있는 아세틸콜린에스테라아제(acetylcholinesterase (AChE)) 억제물질, 그리고 치매예방제의 원료로서 사용될 수 있는 각종 한약재의 활성을 검색하고 이들의 활성물질을 알아내고, 또한 이들 자료를 바탕으로 치매예방용 건강음료를 제공함에 그 목적이 있다.

상기와 같은 기술적 과제를 해결하기 위해 본 발명은 인삼, 산수유, 모과, 오미자를 2:5:5:3의 비율로 혼합하여 얻어진 추출액으로 만들어짐을 특징으로 한다.

또한, 상기 인삼, 산수유, 모과, 오미자를 2:5:5:3의 비율로 혼합된 한약재에 증류수 1,300㎖을 가하여 열탕추출기에서 3시간 가열하여 얻은 추출액으로 이루어짐을 특징으로 한다.

또한, 상기 인삼, 산수유, 모과, 오미자의 각 한약재 200g에 증류수 1,300㎖을 가하여 열탕추출기에서 3시간 가열하여 얻은 추출액으로 이루어짐을 특징으로 한다.

또한, 상기 인삼, 산수유, 모과, 오미자를 2:5:5:3의 비율로 혼합된 한약재 에 증류수 1,300㎖을 가하여 열탕추출기에서 3시간 가열하여 얻은 추출액을 KIMTEX로 1회 여과한 후 감압 증류장치로 농축하였고, 이를 다시 동결 건조기를 이용하여 완전 건조한 한약추출물을 deep-freezer 냉동고(-84℃)에 보관한 뒤, 필요한 농도로 희석하여 사용함을 특징으로 한다.

또한, 상기 인삼, 산수유, 모과, 오미자의 각 한약재 200g에 증류수 1,300㎖을 가하여 열탕추출기에서 3시간 가열하여 얻은 추출액을 KIMTEX로 1회 여과한 후 감압 증류장치로 농축하였고, 이를 다시 동결 건조기를 이용하여 완전 건조한 한약추출물을 deep-freezer 냉동고(-84℃)에 보관한 뒤, 필요한 농도로 희석하여 사용함을 특징으로 한다.

이하 본 발명의 한약재를 이용한 치매 예방용 건강음료를 첨부되는 도면을 참조하여 설명하면 다음과 같다.

실시예 1.

1) 동물

본 실험을 위하여 사용된 암컷 C57BL/6 생쥐와 BALB/c생쥐는 한국생명과학연구원에서 분양받아 1주 이상 적응시킨 후 실험에 사용하였으며 실험 당일까지 고형사료(조단백질 22.1% 이상, 조지방 8.0% 이하, 조섬유 5.0%이라, 조회분 8.0% 이하, 칼슘 0.6% 이상, 인 0.4% 이상, 삼양사 Co. Korea)와 물을 충분히 공급하고 실 온 22±2℃를 계속 유지하고 2주일간 실험실 환경에 적응시킨 후 실험에 사용한다.

2) 약재

본 발명의 한약재를 이용한 치매 예방용 건강음료 및 그 제조방법에 사용한 한약재는 인삼, 산수유, 모과, 오미자를 사용한다.

3) 검액의 조제

인삼, 산수유, 모과, 오미자를 2:5:5:3의 비율로 혼합된 한약재에 증류수 1,300㎖을 가하여 열탕추출기에서 3시간 가열하여 얻은 추출액을 KIMTEX로 1회 여과한 후 감압 증류장치로 농축하였고, 이를 다시 동결 건조기를 이용하여 완전 건조한 한약추출물을 deep-freezer 냉동고(-84℃)에 보관한 뒤, 필요한 농도로 희석하여 실험에 필요한 농도로 사용한다.

또는, 인삼, 산수유, 모과, 오미자의 각 한약재 200g에 증류수 1,300㎖을 가하여 열탕추출기에서 3시간 가열하여 얻은 추출액을 KIMTEX로 1회 여과한 후 감압 증류장치로 농축하였고, 이를 다시 동결 건조기를 이용하여 완전 건조한 한약추출물을 deep-freezer 냉동고(-84℃)에 보관한 뒤, 필요한 농도로 희석하여 사용한다.

4) CT -105 복제

CT-105를 E. coli에서 발현 정제하기 위해 APP 105 아미노산을 coding 하는 415개의 nucleotides에 대한 primer를 제조하고, open reading frame이 맞도록 Bam HI site를 넣어주었다.

PC-12 세포를 LPS로 자극하고 유전자를 추출하여 RT-PCR(reverse transcription- polymerase chain reaction)을 통해 415 base pair를 증폭한다.

증폭된 절편을 Bam HI로 절단하여 insert를 취해 6×histag을 갖는 pRSET B vector의 Bam HI site에 삽입하고 T7 promoter의 영향을 받도록 방향을 확인한다.

얻어진 발현 벡터를 E. coli BL21 strain에서 형질 전환하였고, 이를 재조합 단백질 생산에 사용한다.

벡터의 유도는 1mM IPTG로 3시간 동안 시행하여 원하는 E. coli를 획득한다.

이 E. coli는 freeze-thaw를 3회 반복하여 세포를 터트리고 DNase와 RNase를 처리하고 3000rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 취해 세포 내 단백질을 얻었다.

얻어진 단백질은 histidin affinity column을 사용하여 고유한 APP의 CT-105를 얻었다(도 1).

5) βA(1～40)

βA는 AD 질환자의 뇌에서 senile plaques 와 diffuse deposits를 주로 유도하는 것으로 알려졌다. Calbiochem 회사에서 공급받아 AD 병태 생쥐모델을 만들었고, 그 아미노산 배열은 다음과 같다(도 2).

H-Asp-Ala-Glu-Phe-Gly-His-Asp-Ser-Gly-Phe-Glu-Val-Arg-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-OH(도 2. Sequence of βA(1~40)).

6) 치매예방물질 검색

(1) PC-12 세포주에서 AD 관련 유전자발현 분석

PC-12 세포주는 24 wells plate에 2x10⁶세포를 각각 분주한 후 12시간 이상 우태아 혈청 결핍 DMEM에서 배양한 후 한약재 추출물(100㎍/㎖, 10㎍/㎖과 1㎍/㎖)의 농도로 첨가하고 1시간 후 CT-105(20μM)와 rIL-1β(100ng/㎖)를 처리하고 5시간 동안 동시 배양한다.

① RNA 추출

PC-12 세포주는 한약재 추출물(100㎍/㎖, 10㎍/㎖과 1㎍/㎖)을 처리하고 1시간 후 CT-105(20μM), rIL-1β(100ng/㎖)와 LPS(2㎍/㎖)를 각각의 well에 첨가하여 5시간 배양한 후 2000rpm에서 5분간 원심분리하여 상층액을 제거한 후 RNAzol^B 500㎕를 넣고 lysis될 때까지 혼합하여 total RNA를 추출한다.

② RT-PCR(역전사-중합효소 연쇄반응)

역전사(reverse transcription) 반응은 준비된 total RNA 3㎍을 75℃에서 5분 동안 변성시키고, 이에 2.5㎕ 10mM dNTPs mix, 1㎕ random sequence hexanucleotides(25pmole/25㎕), RNA inhibitor로서 1㎕ RNase inhibitor(20U/㎕), 1㎕ 100mM DTT, 4.5㎕ 5×RT buffer(150mM Tris-HCl, pH 8.3, 375mM KCl, 15mM MgCl₂)를 가한 후, 1㎕의 M-MLV RT(200U/㎕)를 다시 가하고 DEPC 처리된 증류수로서 최종 부피가 20㎕가 되도록 하여 37℃ 항온 수조에서 60분 동안 반응시켜 first- strand cDNA를 합성한다.

③ cDNA PCR

PCR은 Primus 96 Legal PCR system(with high pressure lid, MWG in germany)를 이용하여 수행한다. 반응은 이미 합성된 3㎕의 cDNA를 주형으로 사용하고, 주형에 대한 primer는 IL-1β(interleukin-1β), IL-6, TNF(Tumor necrosis factor)-α, APP, AChE, GFAP 그리고 G3PDH를 증폭하기 위하여 sense primer(20pmole/㎕)와 antisense primer(20pmole/㎕)를 혼합하여 1㎕를 가하고, 다시 3㎕ 2.5mM dNTPs, 3㎕ 10×PCR buffer(100mM Tris-HCl, pH 8.3, 500mM KCl, 15mM MgCl2), 그리고 0.18㎕ Taq polymerase(5 U/㎕)를 첨가한 다음 최종 부피가 30㎕가 되도록 멸균증류수를 가하고 pre-denaturation(95℃, 5분), denaturation(95℃), annealing(55℃, 1분), elongation(72℃, 1분)을 25회 시행한 뒤 post-elongation을 72℃에서 3분 동안의 조건으로 PCR을 수행한다. 각 PCR products는 20㎕씩 1.2% agarose gel에 loading하여 120 V 조건에서 20분간 전기영동을 통하여 분석한다.

7) AChE 활성도 screening 측정

5ml 유리시험관에 sodium chloride용액 2ml과 Pooled serum 2ml을 혼합하고, 60℃ 항온수조에서 10분 동안 불활성화시키고, ICE에서 5분간 방치한다. 각 시험관(blank,1,2,3,4,5,6)에 Nitrophenol용액 2ml 넣고, 여기에 step①-③의 serum mixture 0.4ml 씩 분주한 후 그리고 아래 Table 1의 column 순서로 add 후 420nm에 서 측정할 것.

Table 1. Standard calibration of cholinesterase activity

Tube Number	Distilled Water (ml)	Acetic Acid Solution cat. No. 420-102 (ml)	Cholinesterase Activity (units/ml)
Blank	3.2	0.0	0
1	3.0	0.2	20
2	2.8	0.4	40
3	2.6	0.6	60
4	2.4	0.8	80
5	2.2	1.0	100
6	2.0	1.2	120

실험군은 saline+m-Nitrophenol+ Acetylcholine+AChE (0.5U/ml)에 각각 한약재 추출물 등을 첨가한 후 25℃ 항온수조에서 30분간 배양한 후 ELISA LEADER (molecular devices, USA) 420nm에서 측정한다.

실시예 2.(동물 model에서 유효성 확립)

1) AD 병태 생쥐 모델 제조 및 기억력 측정

① C57BL/6 생쥐 뇌의 Hippocampus에 βA 주입

βA(10μM)를 준비하고 생쥐를 ketamine과 xylazine으로 마취하고 stereotaxic frame에 고정한 후 생쥐 뇌의 피부를 박리한다.

그 다음 AD 병태 생쥐 모델을 만들기 위하여 βA(10 μM)를 Hippocampus에 주입하는 데, 그 위치는 bregma(두개골 계측점)에서 caudal(꼬리 쪽으로) 1.2㎜, midline에서 right로 0.7㎜, 그리고 pial 표면에서 깊이 1.1㎜로 microinjector의 injection speed 0.1㎕/min와 total volume 0.5㎕의 조건으로 수행한다.

βA 주입이 끝난 생쥐는 피부를 봉합한 뒤 2일 후, 양성대조군인 taurine 투여군(10㎎/㎏)과 한약재 추출물 투여군으로 구분하여 1일 1회 8주 동안 경구투여한다.

② AD 병태 생쥐 모델의 기억력 측정

AD 병태 생쥐는 8주일간 한약재 추출물을 경구투여하면서 Morris water maze에서 1주 1회 반복학습 훈련을 실시한다. Morris water maze란 직경이 90cm이고 높이가 약 30cm인 수조로 수온이 28℃인 수돗물을 2/3정도 채우고, 그 안에 생쥐가 올라갈 수 있는 직경이 10cm인 원통형 platform을 설치한 것이다.

1일 1회 학습시 30초 이내에 pool에서 platform으로 올라가는 생쥐를 선별한다. 선별된 생쥐를 10마리를 한 군으로 하여 대조군, 양성대조군(taurine), 한약재 추출물로 분류하였고, 계속 60일간 1일 1회 약물 투여와 platform에 오르는 반복훈련을 실시한다.

③ 행동 관찰

훈련과 한약재 추출물을 투여 후 4주와 8주 후에 AD 유발생쥐를 water maze에 한 마리씩 넣고, VIDEO TRACK으로 행동을 측정하였으며, video track software로 분석하였다(도 2).

2) AD 병태 생쥐의 뇌세포 분석

① Anti-CD14 단일항체로 생쥐 뇌의 microglial cell 분리

8주간의 한약재 추출물 투여가 종료된 생쥐의 두개골을 열고 뇌를 꺼낸 다음 2회 D-PBS로 세척한다.

brain을 작은 조각으로 절단한 후 conical tube(15㎖)에 넣어 1400rpm에서 5분간 원심분리하고, tube에 RPMI 1640을 넣고 37℃ CO₂ 배양기에서 2시간 동안 배양한 후 0.5% trypsin-0.2% EDTA를 첨가한 후 30분간 계속 배양한다.

배양 후 PBS로 약 2회 1500rpm에서 원심분리하여 세척한 후 anti-CD14 단일항체를 넣고 얼음에서 1시간 배양한다.

3회 인산완충생리식염수로 세척한 후 Cellection Pan anti-mouse IgG-bead로 microglial cell를 분리한 후 세포 release buffer로 anti-CD14⁺ 세포만 포집한다.

② microglial cell내 염증반응 사이토카인 염색법

포집한 microglial cell을 ice-cold FACS 완충용액(0.05% BSA, 0.02% sodium azaide in PBS)으로 3회 수세하고, FACS 완충용액 284㎕와 동량의 인산완충용액(2% paraformaldehyde)을 넣고 혼합한 후 얼음에서 15분간 고정한다.

고정 후 세포는 ice-cold FACS 완충용액으로 수세하고, permeabilization 완충용액(0.1% saponin, 0.05% sodium azide)으로 얼음에서 15분간 방치한 후 FITC-anti-IL-1β와 FITC-anti-TNF-α를 30분간 얼음에서 배양한다.

배양 후 permeabilization완충용액으로 3회 수세하고, 세포를 FACS 완충용액으로 섞은 후 유세포 형광분석기로 마아크로글리아 세포 내 발현된 IL-1β와 TNF-α의 발현량을 CellQuest 프로그램으로 분석한다.

③ AD 병태 생쥐의 뇌세포 형광 유세포 분석

AD 유발 생쥐에게서 허혈이 일어난 뇌조직을 잘게 chopping한 후 collagenase 1㎎/㎖(in 2% FBS + RPMI1640)을 넣고 37℃ shaker (1800rpm, 20min.) 배양기에서 배양한 후 상층액을 회수하는 방법으로 4회 반복한다.

얻어진 뇌세포 부유액을 1% FBS의 FACS 완충용액에 넣어 분리한다.

분리된 뇌세포에 ACK용액을 처리하여 적혈구를 제거하고 4℃에서 면역 형광염색을 실시하였고, 각각에 PE-anti-CD44, FITC-anti-GFAP, FITC-anti-CD68, FITC-anti-CD11b을 넣고 30분간 얼음에서 반응시켰다.

반응 후 3회 이상 인산완충 생리식염수로 수세한 후 flow cytometer의 Cell Quest 프로그램을 이용하여 CD11b/CD44, 그리고 CD68/GFAP 세포수를 분석한다.

3) AD 병태 생쥐 뇌조직에서 허혈 및 조직손상에 미치는 영향

① 뇌조직의 허혈 크기 측정

AD 유발생쥐를 마취한 후 후두부에서 전두부 방향으로 두 개를 열어 그 안에 있는 뇌를 꺼내어 생리식염수에 씻은 후 brain matrix를 이용하여 2㎜의 두께로 자른 후 2% TTC 용액을 가하여 20분간 염색한다.

TTC 용액에 의하여 정상조직은 적색으로 염색이 되고, 허혈된 부분은 염색이 되지 않는다. 허혈 크기의 측정은 Michael의 방법62)으로 수행한다.

허혈의 크기(AT)는 [(A1 / ST1) + (A2 / ST2) + (A3 / ST3) + (A4 / ST4)]이고, A는 사진상에 나타난 허혈 면적, ST는 각각 section(2㎜)의 전체 면적. BH(brain Hipocampus)는 뇌의 hipocampus부분의 면적이며, risk에 대한 허혈 크기 는 전체 면적의 percent로 표현한다.

즉 BH부위의 허혈 면적(LV)은 (AT of area at risk/ST of BH) x 100으로 분석한다.

② 병리조직검사

분리된 AD 병태 생쥐의 뇌를 10% formaldehyde 용액에 고정한 후 세절하여 흐르는 물에 8시간 수세한 다음, 아래의 scheme 1과 같은 과정을 거쳐 포매한다.

이것을 microtome으로 절편을 만들어 Hematoxylin & Eosin염색을 실시하고 광학 현미경상에서 관찰한다.

실시예 3.(예비연구(preliminary study))

1) CMF 추출물이 PC-12 세포주의 APP, AChE, GFAP의 유전자 발현과 AChE activity에 미치는 억제효과

PC-12 세포주의 APP 유전자 발현을 관찰한 결과, CT-105와 rIL-1β만을 처리한 대조군이 141(Ht)인데 비해, 100㎍/㎖, 10㎍/㎖, 1㎍/㎖의 CMF 추출물을 함께 투여한 실험군은 각각 11(Ht), 55(Ht), 112(Ht)로 나타나 100㎍/㎖과 10㎍/㎖에서 발현이 현저하게 억제되었고, AChE 유전자 발현을 관찰한 결과, 대조군이 143(Ht)인데 비해, 100㎍/㎖, 10㎍/㎖, 1㎍/㎖의 CMF 추출물을 함께 투여한 실험군은 각각 25(Ht), 34(Ht), 46(Ht)으로 나타나 농도에 관계없이 발현이 현저하게 억제되었으며(Table 4, Fig. 10), GFAP 유전자 발현은 대조군이 188(Ht)인데 비해, 100㎍/㎖, 10㎍/㎖, 1㎍/㎖의 CMF 추출물을 함께 투여한 실험군은 각각 12(Ht), 18(Ht), 29(Ht)로 나타나 모든 농도에서 발현이 현저히 억제되었다(도 3).

2) AChE activity 의 억제 효과

PC-12 세포주에서의 AChE activity를 측정한 결과, CT-105와 rIL-1β만을 처리한 대조군이 100.0±4.4(%)인데 비해 100㎍/㎖, 10㎍/㎖, 1㎍/㎖의 CMF 추출물을 함께 투여한 투여군은 각각 16.5±4.8(%), 38.7±4.3(%), 51.5±5.3(%)으로 유의성 있는 AChE activity 억제 효과를 보였다(도 4).

3) βA로 유도된 AD 병태 생쥐에 대한 기억력 감퇴 억제 효과

CMF 추출물을 투여 4주 후와 8주 후 stop-through latency를 관찰한 결과, CMF 추출물 투여군은 각각 40.4±6.9(sec), 31.3±6.5(sec)로 모두 대조군에 비해 유의성 있는 시간의 단축을 보였다(도 5).

4) βA로 유도된 AD 병태 생쥐의 뇌세포 분석

① 세포 내 IL-1β 발현 억제 효과

Microglial cell에서의 IL-1β 발현을 관찰한 결과, βA를 뇌에 주입한 대조군이 78.4±6.5(%), Tacrine을 투여한 양성대조군이 59.4±4.3(%), CMF 추출물 투여군은 34.6±4.0(%)으로 나타나 CMF 추출물을 함께 투여한 실험군에서 그 발현이 억제되었다(도 6).

② 세포 내 TNF-α 발현 억제 효과

Microglial cell에서의 TNF-α 발현을 관찰한 결과, βA를 뇌에 주입한 대조군이 94.5±6.7(%), Tacrine을 투여한 양성대조군이 80.5±5.2(%), CMF 추출물 투여군은 70.5±5.7(%)로 나타나 CMF 추출물을 함께 투여한 실험군에서 그 발현이 억제되었다(도 7).

5) AD 병태 생쥐 뇌조직의 허혈상태 및 조직손상에 미치는 효과

AD 병태 생쥐 뇌조직의 허혈 크기를 관찰한 결과 βA를 뇌에 주입한 대조군에서 허혈의 크기가 커진 것에 비해 CMF 추출물을 투여군에서는 감소하였다(도 8).

6) AD 병태 생쥐의 조직손상에 미치는 효과

AD 병태 생쥐 뇌조직의 손상을 관찰한 결과, 정상군은 pyramidal cell layer, neurons, oligodendrocytes 그리고 dentate gyrus 등이 뚜렷이 보였으며, βA로 유발된 허혈상태로 Hippocampus에서의 pyramidal cell layer, nurons 그리고 dentate gyrus등이 사라지고 stratum orion과 stratum radiatum이 유도되고, oligodendrocytes-like cells와 astrocytes-like cells이 강하게 나타남을 볼 수 있었으나, CMF 추출물을 투여군에서는 대조군에서 뇌의 허혈상태로 유도된 stratum orion, stratum radiatum, oligodendrocytes-like cells, astrocytes-like cell 등은 보였지만, 병변 부위에서 사라졌던 pyramidal cell layer, neurons 그리고 dentate gyrus 등은 회복된 것을 볼 수 있었다(도 9).

인류가 지구상에 탄생한 이래로 지니고 있던 가장 큰 소망은 오랫동안 늙지 않고 건강한 삶을 누리는 일이다.

생명의 발생과 더불어 생명체는 끊임없이 성장, 발육하면서 기능을 발휘하다가 점차 기능의 쇠퇴를 가져와서 종국에는 죽음을 맞이한다는 것은 만고불변의 진리이다.

즉, 생명은 탄생한 순간부터 노화(aging)라는 필연적인 과정을 맞이하게 되는 것이다.

생명의 탄생, 발육, 노화라는 세 가지의 가장 기본적인 생명현상은 따로따로 생각할 수 없을 정도로 상호 밀접하게 연관되어 있다.

현재, 우리나라의 평균수명은 남자 67세, 여자 74세로 30~40년 전에 비해 10살 이상 상승하고 있으나, 아직도 65세 이상 노령인구는 전체인구의 약 5% 정도 밖에 차지하고 있지 못하다.

그러나 앞으로 우리나라도 2000년대 후반쯤에는 평균수명이 일본이나 구미 선진국의 현재 수준에 도달하리라고 예상되고 있어서, 노령인구가 차지하는 사회에서의 역할, 노인인구에 대한 사회복지정책 등의 노인문제가 커다란 사회문제를 일으킬 것으로 생각되고 있다.

알츠하이머병으로 알려지고 있는 노인성 치매질환은 노인 인구가 급증하고 있는 현재, 최대의 노화질환일 뿐만 아니라, 앞으로 오는 21세기에는 인류가 당면할 최대의 보건문제로 등장하고 있다.

우리나라에서도 앞으로 평균수명이 증가할수록 이 병이 큰 사회적 문제를 야기하리라 예상되고 있으며, 인간이 태초부터 갈망하던 무병장수에 가장 큰 위험이 되고 있다. 그러나 현재 이 병의 말초적 진단기법이나 치료제는 아직 개발되고 있지 않기 때문에 이 병의 예방과 치료제 개발은 인류의 건강 증진에 크게 기여할 것이다.

Claims

인삼, 산수유, 모과, 오미자를 2:5:5:3의 비율로 혼합된 한약재에 증류수 1,300㎖을 가하여 열탕추출기에서 3시간 가열하여 얻은 추출액을 1회 여과한 후 감압 증류장치로 농축하고, 이를 다시 동결 건조기를 이용하여 완전 건조한 한약추출물을 deep-freezer 냉동고(-84℃)에 보관한 뒤, 필요한 농도로 희석하여 사용함을 특징으로 하는 한약재를 이용한 치매 예방용 건강음료.
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