KR100697309B1

KR100697309B1 - 식물 추출물을 포함하는 항바이러스 조성물

Info

Publication number: KR100697309B1
Application number: KR1020050030359A
Authority: KR
Inventors: 권두한; 최화정; 윤병구; 이상수
Original assignee: 한국생명공학연구원
Priority date: 2005-04-12
Filing date: 2005-04-12
Publication date: 2007-03-20
Also published as: KR20060108163A

Abstract

본 발명은 코로나바이러스에 대한 항바이러스 활성을 가지는 바나바, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 추출물; 또는 바나바, 어성초, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 추출물의 배합물을 포함하는 조성물 및 상기 조성물을 투여하여 코로나바이러스 감염을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이다.

코로나바이러스, 항바이러스제, 바나바, 세이지, 라벤더, 로즈마리

Description

식물 추출물을 포함하는 항바이러스 조성물{Antiviral composition comprising plant extracts}

코로나바이러스(coronavirus)는 코로나비리데(Coronaviridae) 과에 속하는 바이러스로 코로나바이러스 감염으로 인한 질병은 매우 다양하다. 코로나바이러스는 포유류와 조류에서 호흡기질환, 소화기 질환, 간질환, 뇌질환 등을 일으키는 RNA 바이러스로서(Thomas M. et al. irology, 279(2): 371-374; Wege et al. (1982) Curr. Top. Microbiol. Immunol. 99: 165-200) 사람에게는 거의 감염되지 않고 주로 개, 돼지, 소 등의 동물에 감염되는 바이러스로 인식되어 왔다. 사람에게 감염될 때에도 호흡기 증상을 유발하는 여러 바이러스 가운데 하나로 단순한 감 기를 유발하거나(Baker SC. Pediatric Infect. Dis J. (2004) 23(11):1049-1050) 어린이의 설사 등 장질환을 일으키는 경우가 있었지만 위험성이 높지 않았다. 그러다 2003년 3월 중순 처음으로 발생해 세계적으로 774명이 넘는 사망자와 9,000여 명의 환자를 발생시킨 중증급성호흡기중후군(severe acute respiratory syndrome; SARS)의 원인병원체가 신종(변종) 코로나바이러스인 것으로 알려지면서 주목받기 시작하였다.

코로나바이러스는 축산업에서도 심각한 경제적 손실을 유발하는데 다른 코로나바이러스의 일종인 돼지 유행성 설사 바이러스(porcine epidemic diarrhea virus: PEDV)는 매우 전염성이 높은 바이러스성 질병으로 위장관 소화기계통에 침입하여 구토, 설사로 인한 탈수와 고열을 일으키며 치사율도 높아서 상당한 경제적 손실을 유발하는 바이러스이다(Duarte M, Laude H (1994) Sequence of the spike protein of the porcine epidemic diarrhea virus. J Gen Virol. 75 (Pt 5) : 1195-200). 돼지에서 높은 치사율을 나타내는 돼지 전염성 위장염 바이러스(transmissible gastroenteritis virus; TGEV)도 코로나바이러스에 속하며 이외에도 생쥐 코로나바이러스는 간염을, 쥐 코로나바이러스는 중증 호흡기질환을, 소 코로나바이러스는 신경질환을 유발하는 등 여러 동물에서 다양한 질환을 유발한다(Brian DA, Baric RS Curr. Top. Microbiol. Immunol. (2005). 287: 1-30).

이에, 바이러스 감염을 방지하기 위한 백신개발연구가 진행되고 있으나 아직 효율성이 떨어지는 실정이다[Alonso S, Sola I, Teifke JP, Reimann I, Izeta A, Balasch M, Plana-Duran J, Moormann RJ, Enjuanes L (2002) In vitro and in vivo expression of foreign genes by transmissible gastroenteritis coronavirus-derived minigenomes. J Gen Virol. 83(Pt 3) : 567-79].

바이러스 감염을 치료하기 위한 약물로 다음과 같은 항바이러스제들이 널리 사용되고 있다: 리바비린(Ribavirin)은 C형 간염(Foster 24004. Semin Liver Dis. 24(suppl.2):97-104), SARS, 에볼라 바이러스(Ebola virus) 감염 치료에 이용되고 있으며(Gunther 등 2004. Antiviral Res. 63:209-215), 아시클로비르(acyclovir)는 허피즈 바이러스(herpesvirus) 치료에 이용되고 있고(Dewhurst 2004. Herpes 11:105A-111A), 이지도싸이미딘(azido thymidine)은 AIDS의 치료에 이용되고 있으며(Coovadia 2004, N Eng J Med 351:289-292), 글리시리진(glycyrrhizin)은 SARS 치료에 이용되고 있는 약제이다(Chen 등 2004, J. Clin. Virol.:69-75).

상기 항바이러스제들은 이들 약물에 대한 바이러스의 내성 및 부작용으로 지속적인 사용에 문제가 있는 것으로 알려져 있다. 그러나 독성과 부작용이 적고, 효과가 뛰어난 천연물 소재의 코로나바이러스에 특이적인 항바이러스제의 개발은 미흡한 상태이다.

천연물 중에서 식물의 경우, 여러 질병에 대한 치료수단으로 오랫동안 사용되어 왔고(Seeff LB, Lindsay KL, Bacon BR, Kresina TF, Hoofnagle JH (2001) Complementary and alternative medicine in chronic liver disease. Hepatology, 34(3) : 595-603; Langmead L, Rampton DS (2001) Herbal treatment in gastrointestinal and liver disease―benefits and dangers. Aliment Pharmacol Ther. 15(9) : 1239-52) 일부 식물의 경우, 항바이러스 활성이 있음이 보고되었으 나(Kinghorn AD (1994) The discovery of drugs from higher plants. Biotechnology, 26: 81-108; Patrick L (1999) Hepatitis C: epidemiology and review of complementary/alternative medicine treatments. Altern Med Rev. 4(4) : 220-38), 식물 추출물이 기존의 항바이러스제보다 효능이 뛰어나지 않아 바이러스 감염 치료에 적용되는 사례는 아직까지 없었다.

이에, 본 발명자들은 코로나바이러스에 대하여 우수한 항바이러스 활성을 갖는 생약재를 찾고자 노력한 결과, 바나바, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 추출물: 또는 바나바, 어성초, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 추출물의 배합물을 포함하는 조성물이 세포독성 없이 코로나바이러스에 대하여 특이적 증식 억제능을 가지고 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 코로나바이러스에 대하여 항바이러스 활성을 가지는 바나바, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 추출물; 또는 바나바, 어성초, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 추출물의 배합물을 포함하는 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 바나바, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 추출물; 또는 바나바, 어성초, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 추출물의 배합물을 포함하는 조성물을 투여하여 코로나바이러스 감염을 예방 또는 치료하는 방법을 제공하는 것이다.

하나의 양태로서, 본 발명은 코로나바이러스에 대하여 항바이러스 활성을 가지는 바나바, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 추출물; 또는 바나바, 어성초, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 추출물의 배합물을 포함하는 조성물을 제공한다.

본 발명의 목적상 바이러스는 코로나바이러스를 지칭한다. 코로나바이러스는 코로나비리데에 속하는 단쇄의 RNA 바이러스이며 뉴클레오캡시드(N) p50과 3개의 당단백질(glycoprotein)을 지니고 있다. 대표적인 코로나바이러스로는 돼지 유행성 설사 바이러스(PEDV), 돼지 전염성 위장염 바이러스(TGEV), 사스 바이러스(SARS virus) 등이 있다.

본 발명에서 용어, “항바이러스(antiviral) 활성”이란 코로나바이러스 입자 생성을 억제하는 능력, 즉 숙주세포, 특히 인간을 포함하는 포유동물에서 코로나바이러스의 형성 및/또는 복제를 효과적으로 억제하는 능력을 의미한다. 본 발명에서 제공하는 조성물은 바이러스 복제(replication) 또는 증식(proliferation) 등에 필요한 기작을 방해하여 항바이러스 활성을 가진다.

본 발명에서 용어, "추출물"은 식물로부터 분리된 활성성분, 여기서는 코로나바이러스에 대한 항바이러스 활성을 가지는 유효성분을 가지는 물질을 의미하며, 물 또는 알코올(예: 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등) 등의 유기 용매를 이용하는 추출 과정에 의하여 제조된다. 추출물은 수 또는 유기용매 추출액, 이의 건조 분말 또는 이를 이용하여 제형화된 모든 형태를 포함한다.

본 발명에서 용어, “바나바(Lagerstroemia speciosa Pars)”는 천연, 잡종 또는 변종 바나바의 줄기, 잎, 꽃을 모두 포함하나 바람직하게는 바나바 잎을 의미한다. 바람직하게는, 바나바의 수추출물을 코로나바이러스에 대한 항바이러스 조성물로 사용할 수 있다.

바나바는 혈당조절능이 있어서 당뇨병 질환에 치료효과가 있다고 보고되었고(Judy WV et al, 2003, J Ethnopharmacol. 87(1):115-117), 대한민국 특허출원 2004-0070652에는 당뇨병 치료 효과를 가지는, 바나바 추출물, 호로파 추출물 및 여주 추출물을 고체 발효시킨 발효물을 유효 성분으로 함유하는 혈당강하용 약학적 조성물에 대해 기재하고 있고, 본 발명자가 출원한 대한민국 특허출원 2004-90898에서는 라이노바이러스 증식억제능에 대한 바나바 추출물을 유효성분으로 하는 약학적 조성물에 대해 기재하고 있으나 코로나바이러스에 대한 항바이러스 활성을 살펴본 예는 아직까지 없다.

본 발명에서 용어, “세이지(Salvia officinalis)"는 천연, 잡종 또는 변종 세이지의 줄기, 잎, 꽃을 모두 포함하나 바람직하게는 세이지 잎을 의미한다. 바람직하게는, 세이지의 수추출물을 코로나바이러스에 대한 항바이러스 조성물로 사용할 수 있다. 세이지의 카페인산(caffeic acid)과 살비놀산(salvinolic acid) K 성분은 인터페론과 유사한 면역조절기능을 높여서 간접적으로 뇌염바이러스의 세포파쇄능을 억제함이 알려져 있다 (Radtke OA 등 J. Naturforsch. 58(60);395-400). 또한, 미국출원 US 6,117,903에서는 세이지의 산추출물이 항바이러스 활성을 나타낸다고 기술하고 있으나, 이는 인간ㆍ원숭이ㆍ고양이 면역결핍바이러스(Humanㆍ Simianㆍ Feline immunodeficiency virus), 인간 파필로마바이러스(human papilloma virus)에 대해 항바이러스 활성에 대해서만 기술하고 있을 뿐이며, 세이지의 추출물이 코로나바이러스에 대해 항바이러스 활성을 갖는다는 것에 대해서는 개시하거나 암시한 바 없다.

본 발명에서 용어, “라벤더(Lavandula officinalis 또는 Lavandula angustifolia)”는 천연, 잡종 또는 변종 라벤더의 줄기, 잎, 꽃을 모두 포함하나 바람직하게는 라벤더 잎을 의미한다. 바람직하게는, 라벤더의 수추출물을 코로나바이러스에 대한 항바이러스 조성물로 사용할 수 있다. 라벤더에서는 항바이러스능이 보고되어 있지 않으며 더구나 코로나바이러스에 대한 항바이러스능도 보고된 바 없다.

본 발명에서 용어, “로즈마리(Rosmarinus officinalis)"는 천연, 잡종 또는 변종 로즈마리의 줄기, 잎, 꽃을 모두 포함하나 바람직하게는 로즈마리의 잎을 의미한다. 바람직하게는, 로즈마리의 수추출물을 코로나바이러스에 대한 항바이러스 조성물로 사용할 수 있다.

로즈마리는 화장품 조성물로 많이 사용되었으나 항바이러스 활성, 특히 코로나바이러스에 대한 항바이러스 활성을 살펴본 예는 아직까지 없었다.

바나바, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 수추출물(50㎍/㎖)이 갖는 코로나바이러스 증식억제에 대한 개별 활성에서 바나바는 32.29±3.41%, 세이지는 22.76±2.25%, 라벤더는 26.02±6.36%, 로즈마리는 22.44±3.78%를 보였다.

한편, 본 발명자에 의한 특허출원 제2004-97587호에서는 어성초가 코로나바 이러스에 대해 항바이러스 활성이 있음을 기술한 바 있으며, 어성초는 상기 수추출물과 동일한 조건하에서 32.76±4.57%의 증식억제능을 나타내었다.

본 발명에 따라 상기 추출물 및 어성초 추출물을 배합하여 처리하는 경우, 다양한 배합물의 형태가 사용될 수 있으며, 상기 바나바, 세이지, 라벤더, 로즈마리 및 어성초 중에서 선택되는 2개 이상, 바람직하게는 2개 또는 3개를 선택하여 배합할 수 있다. 이러한 예시로서, 바나바와 어성초, 바나바와 세이지, 바나바와 라벤더, 바나바와 세이지와 어성초, 바나바와 세이지와 라벤더, 바나바와 세이지와 로즈마리, 바나바와 어성초와 로즈마리의 배합을 들 수 있다. 이들 배합물은 코로나바이러스에 대해 상승작용적 증식억제 효과를 나타낸다. 구체적으로, 바나바, 어성초, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리 단일 수추출물의 항바이러스능은 50㎍/㎖의 농도에서 32.29%, 32.76%, 22.76%, 26.02%, 22.44%이었으나, 각 추출물의 배합조성물에서는 바나바와 어성초 배합물이 10㎍/㎖의 농도에서 32.76%로 0.2배의 농도조건에서도 동등한 항바이러스능을 나타내었으며, 50㎍/㎖의 농도에서는 45.02%로 약 2배의 항바이러스능을 나타내었다. 이러한 현상은 다른 추출물 배합조성물에서도 나타났으며, 바나바와 세이지 배합물은 10㎍/㎖의 농도에서 33.26%로 0.2배의 농도조건에서도 동등한 항바이러스능을 나타내었으며 50㎍/㎖의 농도에서는 67.25%로 약 2배의 항바이러스능을 나타내었고, 바나바와 라벤더 배합물은 10㎍/㎖의 농도에서 34.88%로 0.2배의 농도조건에서도 높은 항바이러스능을 나타내었으며 50㎍/㎖의 농도에서는 53.675%로 약 2배의 항바이러스능을 나타내었다. 또한, 바나바와 세이지와 어성초 배합물은 10㎍/㎖의 농도에서 37.32%로 0.2배의 농도조건에서도 높은 항바이러스능을 나타내었으며 50㎍/㎖의 농도에서는 36.85%로 약 1배의 항바이러스능을 나타내었고, 바나바와 세이지와 라벤더 배합물은 10㎍/㎖의 농도에서 53.31%로 0.2배의 농도조건에서도 높은 항바이러스능을 나타내었으며 50㎍/㎖의 농도에서는 55.31%로 1배 이상의 항바이러스능을 나타내었다. 바나바와 세이지와 로즈마리 배합물은 10㎍/㎖의 농도에서 41.55%로 0.2배의 농도조건에서도 높은 항바이러스능을 나타내었으며 50㎍/㎖의 농도에서는 62.19%로 약 1.5배 이상의 항바이러스능을 나타내었으며, 바나바와 어성초와 로즈마리 배합물은 10㎍/㎖의 농도에서 33.85%로 0.2배의 농도조건에서도 높은 항바이러스능을 나타내었으며 50㎍/㎖의 농도에서는 50.75%로 약 1.5배 이상의 항바이러스능을 나타내었다.

본 발명의 조성물은 바나바, 어성초, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 추출물을 배합 사용할 경우에는 개개 성분들을 배합하여 추출하거나 개개 성분들로부터 각각 추출한 후 배합할 수 있으며, 바람직하게는 최적의 조건에서 추출한 후 배합할 수 있다.

본 발명의 조성물은 각각의 추출물을 단독으로 사용하거나 각각의 추출물을 배합하여 사용하는 경우 모두 세포독성 부작용을 나타내지 않았다(표 2).

본 발명의 바나바, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 추출물, 또는 이의 배합물을 포함하는 조성물은 약효를 증가시키지는 않으나 약재 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가성분을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 비타민 B₁, B₂, B₆, C, E, 니아신, 카르니친, 베타인, 엽산 판토텐 산, 비오틴, 아연, 철, 칼슘, 크롬, 마그네슘, 이들의 배합물 등의 무기, 유기 첨가물들을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함되는 바나바, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리는 물 또는 유기 용매로 추출하여 바로 사용될 수 있으나 보다 바람직하게는 추출액을 여과하고 여과액을 건조하여 사용한다.

바람직한 본 발명의 추출물 제조 과정은 약재를 분쇄하는 단계; 용매로 추출하는 단계; 추출액을 여과하는 단계; 및 여과액을 건조하는 단계를 포함한다.

추출 용매로는, 물 또는 알코올 등의 유기 용매를 사용하며 생약의 유효성분이 파괴되지 않거나 최소화된 조건에서 진행하고 열 추출 또는 냉침 추출한다. 여과는 추출액으로부터 부유하는 고체 입자를 제거하는 과정으로, 여과지, 면, 나일론 등을 이용하여 입자를 걸러내거나 냉동여과법, 원심분리법 등을 사용할 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 여액을 건조하는 단계는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조, 감압건조, 분무건조, 포말건조, 고주파건조, 적외선건조 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 건조공정을 통하여 수분함량을 10% 이하로 줄일 수 있으며, 또한 건조 전에 여과액을 농축기에 넣고 수분함량을 줄이는 공정을 추가할 수 있다. 경우에 따라, 최종 건조된 추출물을 분쇄하는 공정을 추가할 수도 있다.

수추출하는 경우, 본 발명의 조성물의 성분들을 물에 가하여 50℃ 내지 70℃에서, 30분 내지 2시간 정도 가열하는 것이 바람직하다. 높은 온도에서 가열하는 경우 시간은 줄어들지만 유효성분이 파괴되어 손실될 수 있고, 상기 온도보다 낮은 온도에서 가열하게 되면 배합물의 유효성분이 완전하게 추출되지 않으므로 온도 조절과 시간을 적절하게 조절하는 것이 중요하다. 본 발명의 구체적 양태에서는 바나바, 어성초, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리가 들어있는 물을 60℃에서 1시간 가열하여 추출하였고, 불용성 물질을 원심분리하여 여과하였으며 상등액을 동결건조시켜 수추출물을 제조하였다.

유기 용매를 사용하여 추출하는 경우, 메탄올, 에탄올, 이소프로탄올, 부탄올, 에틸렌, 아세톤, 에테르, 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 디메틸포름아미드(N, N-Dimethylformamide), 디메틸설폭사이드(Dimethylsulfoxide) 등을 이용하여 실온에서 또는 가온하여 유기 용매로 추출할 수 있다. 추출하는 유기 용매에 따라 약제의 유효성분의 추출 정도와 손실 정도가 차이가 날 수 있으므로, 알맞은 유기 용매를 선택하여 사용하도록 한다. 바람직하게는 20℃ 내지 30℃에서, 12시간 내지 48시간 정도 방치하여 추출한다. 본 발명의 구체적 양태에서는 바나바, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리를 알코올을 사용하여 실온에서 24시간 방치하여 추출하였다. 이어서, 와트만(Whatman) 여과지를 사용하여 불용성 물질을 여과하였으며, 여과액을 감압 건조시켜 유기용매 추출물을 제조하였다.

본 발명의 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 담체는 경구 투여 시에는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소, 향료 등을 사용할 수 있으며, 주사제의 경우에는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제 등을 혼합하여 사용할 수 있으며, 국소 투여용의 경우에는 기제, 부형제, 윤활제, 보존제 등을 사용할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 제형은 상술한 바와 같은 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합하여 다양하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 경구 투여 시에는 정제, 트로키, 캡슐, 엘릴시르, 서스펜션, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 제조할 수 있으며, 주사제의 경우에는 단위 투약 앰플 또는 다수 회 투약 형태로 제조할 수 있다.

또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 조성물을 코로나바이러스의 감염이 의심되는 환자에게 투여하여 코로나바이러스 감염 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명에서 용어, “코로나바이러스 감염 질환”이란 코로나바이러스의 감염으로 유발되는 질환을 일컫으며, 사람에서는 코감기, 기침, 가래, 기관지염(Nokso-Koivisto et al. (2000), Padiatric Infect. Dis J. 19(6):164-166) 또는 중증호흡기질환 (Peiris et al. (2004) Nature Medicine 10(12):s88-s97) 등을 예시할 수 있으며, 동물에서는 간염, 뇌염, 신경질환(Foley 와 Leutenegger (2001) J. Vet. Intern. Med. 15(5):438-444), 중증호흡기질환(Schickili et al. (1997) J. Virol. 71(12):9499-9507), 심한 설사 (Smerdou et al.(1996) Viris Res. 41:1-9)나 호흡기질환(Laude et al.(1993) Vet. Res. 24(1):25-50), 복막염(Rottier (1999) Vet. Microbiol.69(1-2):117-125)을 예시할 수 있다. .

본 발명에서 용어, "예방"이란 조성물의 투여에 의해 바이러스 감염을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에서 용어, "치료"란 조성물의 투여에 의해 바이러스 감염에 의한 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.

상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 제약 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.

본 발명의 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다.

용어 "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질병 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

일반적으로, 1일 당 20 내지 100㎎/㎏, 바람직하게는 40 내지 60㎎/㎏, 보다 바람직하게는 50㎎/㎏의 양을 투여되도록 하며, 1회 내지 4회 분할 투여할 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제공한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 본 발명이 하기의 실시예에 의하여 제한되는 것은 아니다.

제조예 1: 각 식물의 수추출물 제조

상수허브(주)에서 수확한 재료(로즈마리의 잎, 세이지의 잎, 라벤더의 잎)와 외국에서 직수입한 바나바의 잎, 경남농업기술원에서 수확한 어성초의 잎을 생초 중량의 25%가 될 때까지 건조시킨 다음 믹서로 갈아 분말로 제조하였다. 각 식물 분말은 각각의 중량에 대해 증류수 10배량을 넣어 60℃에서 1시간 동안 중탕하고 12000rpm으로 20 분간 원심분리하여 상등액을 여과지에 통과시킨 용액을 동결건조시켜 수용성 추출물을 제조하였다.

제조예 2: 각 식물 수추출물의 배합조성물 제조

바나바의 수추출물에 세이지의 수추출물, 라벤더의 수추출물, 로즈마리의 수추출물 또는 어성초의 수추출물을 더하여 각각 다른 종류의 배합조성물을 제조하였다 (표 1).

각 식물 배합조성물의 배합조성비

구분	배합조성물 성분	배합비율
1	바나바: 어성초	1:1
2	바나바: 세이지	1:1
3	바나바: 라벤더	1:1
4	바나바: 세이지: 어성초	5:3:2
5	바나바: 세이지: 라벤더	5:3:2
6	바나바: 세이지: 로즈마리	5:3:2
7	바나바: 어성초: 로즈마리	5:3:2

실시예 1: 바이러스의 배양

상기 참조예 1에서 얻은 식물 추출물에 대한 항바이러스능을 측정하기 위해 사용된 바이러스는 코로나바이러스의 하나인 PEDV를 대상으로 하였으며, 코로나바이러스는 베로(Vero) 세포에 감염시켜서 증식 배양하였다. 베로 세포는 소태아혈청이 10% 포함된 최소필수배지(Minimum Essential Media)를 사용하여 37℃ 배양기에서 배양하였으며 바이러스 증식배양 및 항바이러스능 측정에 사용된 배지는 무혈청 배지에 트립신(0.005%)이 포함된 배양배지를 사용하였다.

실시예 2: 바이러스 억제능 분석

상기 제조예 1에서 얻은 식물 추출물의 코로나바이러스에 대한 바이러스 증식억제능을 측정하기 위해서, 2x10⁴개의 베로 세포를 96 웰 플레이트(well plates)의 각 웰에 넣고 24시간 배양하였다. 24시간 후에 각 웰의 배양 상등액을 제거하고 코로나바이러스 감염용액을 각 웰에 넣은 다음, 각 식물 추출물을 0.1, 1, 10, 100㎍/㎖ media이 되도록 각 웰에 투여하였다. 각 추출물의 바이러스 증식 억제능 측정은 72시간 후에 실시하였으며 본 발명자가 특허출원한 방법(대한민국 특허출원 2004-0101863)에 의거하여 항바이러스능을 측정하였다. 96 웰 플레이트의 각 웰에서 배양액을 제거하고 인산완충액으로 1회 세척한 후 50% 아세톤 액을 100㎕씩 첨가하여 20분 동안 -20℃에 방치하였다가 50℃ 건조기에서 건조한 후 1%(v/v) 아세트산에 녹인 0.4% (w/v) 설포로다민 B(sulforhodamine B; SRB) 용액 100㎕를 첨가해 30분 동안 염색시켰다. 세포와 결합하지 않은 SRB 염색액은 1%(v/v) 아세트산으로 수회 세척한 다음 다시 건조시켰다. 각 웰에 10mM 트리스 용액(pH 10.5) 100㎕를 각 웰에 가하여 세포와 결합되어 있는 염색제를 충분히 녹인 후 560㎚에서 흡광도를 측정하였다. 각 처리군은 바이러스를 처리하지 않은 군(A), 수용성 추출물만을 처리한 군(B), 바이러스만을 처리한 군(C), 바이러스와 수용성 추출물을 같이 처리한 군(D)으로 표기하였고 각각 식물추출물의 비교세포성장률(%)(수학식 1)과 식물추출물의 바이러스에 대한 증식억제능을 감염 후 세포생존율(%)(수학식 2)로 계산하였다. 결과에 대한 통계는 동일한 조건에서 수행한 3번의 실험결과 수치에 대한 평균값과 표준편차로 계산한 값을 제시하였다.

생약 추출물들의 세포독성

상기 제조예 1에서 분리한 각 식물의 수용성 추출물의 세포독성능은 단일식물 추출물은 50㎍/㎖의 농도에서, 추출물 혼합물은 10㎍/㎖ 또는 100㎍/㎖의 농도에서 추출물을 가하지 않은 웰의 세포와 비교하였다. 상기 추출물을 가하지 않은 웰의 흡광도를 100%로 기준으로 하여 추출물을 가한 웰의 흡광도를 비율로 표시하였다(표 2).

각 식물 수추출물 및 배합조성물의 세포증식 평가능

구분	시험농도	세포증식 평가능(%)
바나바 수추출물	50㎍/㎖	117.57%
어성초 수추출물	50㎍/㎖	109.15%
세이지 수추출물	50㎍/㎖	110.06%
라벤더 수추출물	50㎍/㎖	107.31%
로즈마리 수추출물	50㎍/㎖	91.10%
바나바, 어성초 배합조성물	10㎍/㎖ 100㎍/㎖	109.09% 117.57%
바나바, 세이지 배합조성물	10㎍/㎖ 100㎍/㎖	105.60% 109.15%
바나바, 라벤더 배합조성물	10㎍/㎖ 100㎍/㎖	113.85% 110.06%
바나바, 세이지, 어성초 배합조성물	10㎍/㎖ 100㎍/㎖	115.74% 102.73%
바나바, 세이지, 라벤더 배합조성물	10㎍/㎖ 100㎍/㎖	113.39% 107.03%
바나바, 세이지, 로즈마리 배합조성물	10㎍/㎖ 100㎍/㎖	118.03% 90.03%
바나바, 어성초, 로즈마리 배합조성물	10㎍/㎖ 100㎍/㎖	95.57% 97.63%

바나바, 어성초, 세이지, 라벤더 및 로즈마리의 수추출물은 50㎍/㎖의 농도에서 추출물을 가하지 않은 웰과 비교할 때 세포증식능이 로즈마리만을 제외하고 100% 이상을 나타내어 세포성장 및 대사에 영향을 미치지 않음을 알 수 있으며, 로즈마리도 91%의 세포생존율을 나타내어 세포독성이 매우 낮음을 알 수 있다. 이들 추출물 배합조성물도 바나바, 어성초, 로즈마리 배합조성물만이 100% 이하로 나타났고 다른 추출물 배합조성물은 모두 100% 이상을 나타내어 세포에 대한 성장 억제나 세포독성이 없음을 알 수 있다.

생약 추출물들의 항바이러스능

제조예 1에서 얻은 추출물 또는 배합조성물의 코로나바이러스에 대한 항바이러스능을 각각 표 3 및 표 4에 나타내었다. 코로나바이러스에 대한 개별 식물의 추출물 농도는 50㎍/㎖에서 실시하였다. 바나바, 세이지, 라벤더, 로즈마리는 감기 등 호흡기질환에 대한 전통적인 치료법에서도 사용된 바 없으며 더욱이 이들 배합조성물도 감기 등 호흡기질환에 대한 치료법으로 사용된 바 없다.

식물 추출물의 코로나바이러스에 대한 개별 증식억제능 시험

구분	시험농도	코로나바이러스 증식억제능 (%)
비감염대조군		100± 6.06
바이러스 감염군		0±11.69
바나바	50㎍/㎖	32.29± 3.41
어성초	50㎍/㎖	32.76± 4.57
세이지	50㎍/㎖	22.76± 2.25
라벤더	50㎍/㎖	26.02± 6.36
로즈마리	50㎍/㎖	22.44± 3.78

식물 추출물의 배합조성물의 코로나바이러스에 대한 항바이러스능 시험

구분	시험농도	항바이러스능 (%)
바나바, 어성초 배합조성물	10㎍/㎖ 100㎍/㎖	32.76±7.15 41.02±4.62
바나바, 세이지 배합조성물	10㎍/㎖ 100㎍/㎖	33.26±2.87 66.66±8.86
바나바, 라벤더 배합조성물	10㎍/㎖ 100㎍/㎖	34.88±8.15 53.67±7.36
바나바, 세이지, 어성초 배합조성물	10㎍/㎖ 100㎍/㎖	37.32±10.77 36.85±0.21
바나바, 세이지, 라벤더 배합조성물	10㎍/㎖ 100㎍/㎖	53.31±5.53 55.31±5.36
바나바, 세이지, 로즈마리 배합조성물	10㎍/㎖ 100㎍/㎖	41.55±11.85 62.19±7.86
바나바, 어성초, 로즈마리 배합조성물	10㎍/㎖ 100㎍/㎖	33.85±23.25 50.75±3.24

따라서 본 발명에서는 바나바의 수추출물, 세이지의 수추출물, 라벤더의 수추출물 또는 로즈마리의 수추출물들이 코로나바이러스에 대하여 새로운 억제효능이 있음을 밝혀냈으며 이들의 배합조성물은 이들 수추출물을 단독으로 사용하는 것보다 2배 이상의 코로나바이러스 억제효능을 보임으로써 이들 식물 추출물들이 산업적으로 유용한 가치를 가지고 있음을 확인하였다.

본 발명의 바나바, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 추출물; 또는 바나바, 어성초, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 추출물의 배합물을 포함하는 조성물은 감기 등의 호흡기질환을 유발하는 주원인 바이러스인 코로나바이러스 감염을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있으며, 독성 및 부작용이 적다는 장점이 있다.

Claims

바나나, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는, 코로나바이러스 감염을 예방 또는 치료하기 위한 조성물.
제1항에 있어서, 바나바, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 잎 추출물이 수추출물인 조성물.
바나바, 어성초, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 잎추출물 중 2개 이상의 추출물의 배합물을 포함하는, 코로나 바이러스 감염을 예방 또는 치료하기 위한 조성물.
제3항에 있어서, 바나바, 세이지, 라벤더 또는 로즈마리의 잎 추출물이 수추출물인 조성물.
제3항에 있어서, 배합물이 바나바와 어성초; 바나바와 세이지; 바나바와 라벤더; 바나바와 세이지와 어성초; 바나바와 세이지와 라벤더; 바나바와 세이지와 로즈마리; 또는 바나바와 어성초와 로즈마리의 배합물인 조성물.
제1항 또는 제3항에 있어서, 코로나바이러스가 사람에 감염질환을 유발하는 코로나바이러스인 조성물.
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