KR100695537B1 - Cosmetic material composition including Rhododendron schlippenbachii root - Google Patents
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Abstract
본 발명은 철쭉뿌리 추출물을 함유하는 아토피성 피부염 또는 습진의 치유 개선 효능을 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition having an effect of improving the healing of atopic dermatitis or eczema containing azalea root extract.
철쭉뿌리, 아토피성 피부염, 습진, 항알러지Azalea root, Atopic dermatitis, Eczema, Anti-allergic
Description
도 1과 도2는 본 발명의 아토피성 피부염 개선효능을 나타내는 사진이고1 and 2 are photographs showing the atopic dermatitis improving effect of the present invention
도 3은 본 발명의 습진 개선효능을 나타내는 사진이다.Figure 3 is a photograph showing the eczema improving effect of the present invention.
본 발명은 천연추출물을 함유하는 피부질환 개선효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 철쭉 (Rhododendron schlippenbachii Maxim. var. schlippenbachii) 뿌리 추출물을 함유함으로써 항염 및 항균효과 등이 나타나 아토피 피부 및 습진의 치유 개선 효능을 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition having a skin disease-improving effect containing a natural extract, and more specifically, Rhododendron schlippenbachii Maxim.var. It relates to a cosmetic composition having an effect of improving healing.
철쭉은 만주, 우수리에 분포하고 우리 나라 각처의 산지 또는 능선의 나출된 모래땅에 나는 낙엽 관목이며 키는 2-5m이다.Azaleas are distributed in Manchuria and Ussuri, and are deciduous shrubs on the outcrop of sandy or mountainous ridges in Korea.
잎은 호생, 가지 끝에서는 5장씩 모여 나서 로제트 모양, 넓은 난형, 가장자리는 밋밋하고, 표면은 녹색, 어린것은 털이 나지만 나중에 없어지고, 뒷면은 연두색, 털이 맥 위에 나 있다.The leaves are revived, gathered at the end of 5 branches, rosette-shaped, broad ovate, flat at the edges, greenish, young hairy, but later disappeared, and the backside is light green, hairy on the veins.
꽃은 잎과 동시에 피고, 연분홍색이며 향기가 있고 독성이 있다. 화관의 위쪽 내부에 자갈색 반점이 있고 수꿀은 10개, 암술은 1개, 열매는 삭과, 선모가 나며, 난형이다. 개화기는 4~5월, 결실기는 10월이다.Flowers bloom simultaneously with leaves, light pink, fragrant and toxic. The upper part of the corolla has brown spots, with 10 honeys, 1 pistil, and the fruit is sulcus, hairy, ovate. The flowering period is from April to May and the fruiting season is from October.
약리작용으로는 꽃을 고혈압 및 악창에 사용하는 것으로 알려져 있으나 본 발명의 아토피성 피부염 또는 습진에 대한 작용은 알려져 있지 않다.As a pharmacological action, it is known to use flowers for hypertension and swelling, but the action on atopic dermatitis or eczema of the present invention is unknown.
아토피란 말은 알레르기 반응을 일으키게 하는 면역 물질인 면역글로불린 E를 쉽게 형성하는 경향을 갖으며, 특정 질환 군인 천식, 고초열, 알레르기성 비염, 아토피 피부염을 잘 일으키는 유전적 경향을 보이는 경우를 말한다. 아토피 피부염은 이러한 아토피성 체질을 가진 사람에서 발생되는 만성 피부염으로 혼히 태열이라고 부르는 유아 습진으로 시작되며, 만성, 재발성 경과를 보인다. 자각 증상으로 심한 소양감을 특징으로 하는데 발병 시기에 따라 특징적인 병변의 분포와 양상을 보이고 때로 알레르기성 비염, 천식 등 다른 아토피 질환의 과거력이나 가족력을 동반하기도 한다. 여러 가지 피부 자극이 아토피 피부염의 악화 요소가 될 수 있는데 이중 비교적 잘 알려져 있는 것에는 지나친 목욕, 과다한 비누 사용, 습도가 낮은 환경 등에 의한 피부 건조, 모제품 속옷, 거친 화학섬유 제품, 타월 목욕 등에 의한 피부 자극, 심리적 긴장 상태, 피부감염, 땀과 고열, 음식물(우유, 계란, 밀, 견과, 해산물 등) 등이 있다. 이외에 집먼지 진드기, 동물의 털이나 분비물 등 다양한 항원이 아토피 피부염의 악화 요인으로 작용할 수 있다. 이러한 음식, 꽃가루, 먼지 및 기타 흡입성 원인 물질은 때로 피부 반응 검사나 혈청 검사로 증명되기도 하는데 위양성과 위음성 반응이 나타나기 때문에 검사 결과가 절대적인 것은 아니다.The term atopy tends to easily form immunoglobulin E, an immune substance that causes an allergic reaction, and refers to a case where the genetic tendency to cause disease-specific asthma, high fever, allergic rhinitis, and atopic dermatitis. Atopic dermatitis is a chronic dermatitis that develops in people with such atopic dermatitis. It begins with infant eczema, which is called fever, and has a chronic and recurrent course. Subjective symptoms are characterized by severe pruritus, depending on the time of onset, the characteristic distribution and appearance of the lesions, sometimes accompanied by allergic rhinitis, asthma and other history of atopic diseases or family history. Various skin irritation can be a deteriorating factor in atopic dermatitis, and relatively well known ones include excessive bathing, excessive soap use, dry skin due to low humidity conditions, mother's underwear, coarse chemical fiber products, towel bath, etc. Skin irritation, psychological tension, skin infections, sweat and fever, and foods (milk, eggs, wheat, nuts, seafood, etc.). In addition, various antigens such as house dust mites, animal hair and secretions may act as aggravating atopic dermatitis. These foods, pollen, dust and other inhalable agents are sometimes proved by skin tests or serum tests, but the results are not absolute because of false positive and false negative reactions.
아토피 피부염은 환자의 연령에 따라 비교적 특징적인 피부 병변과 분포 양상을 보여 이를 영아기(생후 2세까지), 소아기(3-11세), 청년기(12세-20세) 및 성인기(20세 이후) 등 3시기로 나눈다. 영아기에는 주로 머리, 얼굴, 몸통 부위에 붉고 습하며 가피를 형성하는 병변으로 나타난다. 소아기에는 주로 팔, 다리, 손목, 발목 등 피부가 접히는 부위에 구진, 태선화, 인설 등의 건조한 피부 병변이 나타나고 이마의 태선화, 눈 주위의 발적 및 인설, 귀 주위의 피부 균열 및 가피 증상도 흔히 동반된다. 청년기 및 성인기에는 머리, 얼굴, 목, 몸통, 사지, 손발 등에서 구진, 인설, 색소 침착, 태선화 등의 병변을 보인다. 이러한 증상은 나이가 들면서 증상이 대체로 호전되나 때로 성인기까지 중증의 피부염이 지속될 수 있다. 아토피 피부염의 주증상은 가려움증인데 환자는 정상인에 비해 가려움증을 쉽게 느끼며 사소한 자극에도 민감한 반응을 나타내게 된다. 또 가려워서 긁으면 피부가 습진성 병변으로 발전하고 이러한 병변이 진행되면서 다시 더 심한 소양증이 유발되어 더 심하게 긁음으로써 피부염이 심해지는 일련의 악순환이 반복되게 된다.Atopic dermatitis is characterized by the characteristics of skin lesions and their distribution according to the age of the patient. Infant (up to 2 years), childhood (3-11 years), adolescence (12-20 years) and adult (after 20 years) Divided into three periods. In infancy, they appear as red, moist, crusty lesions on the head, face, and trunk. In childhood, dry skin lesions such as papules, thymus glands, and scales appear in areas where the skin is folded, such as arms, legs, wrists, and ankles. do. In adolescence and adulthood, there are lesions such as papules, scales, pigmentation, and lichenitis in the head, face, neck, torso, limbs and limbs. These symptoms usually improve with age, but sometimes severe dermatitis can persist until adulthood. The main symptom of atopic dermatitis is itching. The patient feels itching more easily than a normal person and is sensitive to minor irritation. When itching to scratch, the skin develops into eczematous lesions, and as the lesion progresses, a more severe pruritus is caused again, which causes more severe scratching, causing a series of vicious cycles.
습진성 피부염은 가장 흔한 피부 질환 중의 하나로 외인성 및 내인성의 다양한 요인에 의하여 발생하는 피부의 염증반응을 말하며, 대부분 그 원인을 밝히기 어려운 경우가 많다. 이 질환은 육안으로 보이는 모양에 의해 진단되고 병변의 분포 상태 혹은 원인이 밝혀진 경우 그 원인이 되는 요인에 따라 분류될 수 있다. 습진은 대개 다양한 정도의 소양증을 동반하며, 크게 급성과 만성으로 나눌 수 있다. 급성기에는 수포성 구진, 홍반, 부종 등이 나타나고 심한 경우 삼출성의 병변을 보 이고, 만성기에 이르면 육안적으로 피부가 두꺼워지는 태선화 현상이 나타나고 때때로 인설이 보인다. 습진성 피부염은 그 분류에 있어서 다소 차이가 있으나 크게 3가지 즉, 외부 요인에 의한 것, 내부 요인에 의한 것, 기타 원인 미상에 의한 것으로 나눌 수 있다. 외부 요인에 의한 습진성 피부염에는 원발성 자극피부염 및 알레르기성 접촉피부염, 광독성 및 광알레르기성 접촉피부염, 다형 광선 유발성 피부염, 감염성 습진양 피부염 등이 있으며, 내부 요인에 의한 습진성 피부염에는 약물에 의한 습진성 피부염, 자가감작 또는 자가습진성 병변, 및 울체 피부염 등이 있고 기타 원인 미상의 습진성 피부염에는 아토피 피부염, 지루 피부염, 화폐상 습진, 신경 피부염, 한포진, 백색비강진, 건성 습진, 유아 습진, 영양결핍성 피부염 및 박탈성 각질 박리증 등이 있다. 아토피 피부염이나 습진의 발병시 환자는 병·의원 및 약국에서 스테로이드의 연고 및 내복약(주사제 포함)으로 치료받고 있으나, 스테로이드를 내복약이나 주사제로 사용할 경우, 피부에서 피하울혈, 색소침착, 탈모, 가려움증, 안면홍반 등의 부작용이 보고되어 있고, 내분비계 부작용으로, 속발성 부신피질 기능 부전, 당뇨병, 소화기계 부작용으로 소화성궤양, 위염, 정신신경계 부작용으로, 우울상태, 두통, 근·골격계 부작용으로 골다공증, 단백질 대사부작용으로 야유견, 질소 불평형, 전해질계 부작용으로 혈압상승, 눈에 안압항진, 녹내장 등을 유발한다고 알려져 있으며, 스테로이드계 연고를 사용할 경우 피부에 피부감염증, 스테로이드 좌창, 스테로이드 피부염, 그밖에도 뇌하수체 부신피질계 기능 억제 등의 심각한 부작용을 가져오고 있음이 보고되어 있다.Eczema dermatitis is one of the most common skin diseases and refers to an inflammatory reaction of the skin caused by various factors of exogenous and endogenous, and in many cases it is difficult to identify the cause. The disease is diagnosed by visual appearance and can be classified according to the causative factor of the distribution or cause of the lesion. Eczema is usually accompanied by varying degrees of pruritus and can be divided into acute and chronic. In the acute phase, bullous papules, erythema, and edema appear, and in severe cases, exudative lesions occur. Eczema dermatitis is somewhat different in its classification, but it can be classified into three types, namely, external factors, internal factors, and other unknown causes. Eczema dermatitis caused by external factors includes primary irritant dermatitis and allergic contact dermatitis, phototoxic and photoallergic contact dermatitis, polymorphic photo-induced dermatitis, infectious eczema dermatitis, and internal eczema dermatitis caused by drugs. Eczema dermatitis, self-sensitizing or self-eczema lesions, and ulcerative dermatitis, and other causes of unknown eczema dermatitis include atopic dermatitis, seborrheic dermatitis, molecular eczema, neurodermatitis, herpes zoster, white nasal eczema, dry eczema, infant eczema , Malnourished dermatitis and deprived keratin exfoliation. When atopic dermatitis or eczema develops, patients are treated with steroid ointments and oral medications (including injections) in hospitals, clinics and pharmacies.However, when steroids are used as oral or injectables, subcutaneous blood, pigmentation, hair loss, itching, Side effects such as facial erythema have been reported, such as side effects of endocrine system, secondary adrenal insufficiency, diabetes, side effects of digestive system, peptic ulcer, gastritis, mental nervous system side effects, depressive state, headache, musculoskeletal side effects, osteoporosis, protein It is known that metabolic reactions cause squeaking dogs, nitrogen imbalance, electrolyte side effects, blood pressure rise, hypertension in eyes, glaucoma, etc.If steroid-based ointment is used, skin infections, steroid acne, steroid dermatitis, and other parts of the pituitary gland Has serious side effects such as suppression of neocortical function. Reported.
본 발명자들은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 천연 생약제를 이용한 아토피성 피부염 및 습진에 효과가 있는 화장료를 개발하기 위하여, 항히스타민 및 항균활성을 통하여 연구하던 중 철쭉뿌리 추출물이 강한 히스타민 유리 저해활성 및 항균활성을 모두 보유함을 발견하고, 철쭉뿌리 추출물을 유효성분으로 함유하여 피부에 적용시 부작용을 일으키지 않으면서 아토피성 피부염 또는 습진을 치료하는 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.The inventors of the present invention to solve the above problems, in order to develop cosmetics that are effective in atopic dermatitis and eczema using natural herbal medicines, a histamine glass inhibitory activity of the azalea root extract during the study through antihistamine and antibacterial activity And found to possess both antimicrobial activity, containing azalea root extract as an active ingredient confirmed that the effect of treating atopic dermatitis or eczema without causing side effects when applied to the skin and completed the present invention.
따라서, 본 발명의 목적은 아토피성 피부염 또는 습진을 치료하는 효과가 있는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a cosmetic composition that is effective in treating atopic dermatitis or eczema.
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이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명의 아토피성 피부염 또는 습진 치료용 철쭉뿌리 추출물은 히스타민 활성을 저해하는 항염 및 가려움을 억제하는 작용과 세균감염을 방지하기 위한 항균작용을 보유한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
Azalea root extract for treating atopic dermatitis or eczema of the present invention possesses anti-inflammatory and anti-itch action that inhibits histamine activity and antibacterial action for preventing bacterial infection.
철쭉의 꽃, 잎 및 또는 뿌리에 5내지 20배의 증류수, 메탄올 또는 에탄올 또는 이들의 혼합용매를 가한 후 50∼100℃에서 5∼10시간 2회 반복 추출한 다음 여과하고, 감압 농축시켜 화장품 제조시 첨가한다.5 to 20 times of distilled water, methanol or ethanol or a mixed solvent thereof is added to the flowers, leaves and / or roots of azaleas, and then extracted twice at 50 to 100 ° C. for 5 to 10 hours, then filtered and concentrated under reduced pressure. Add.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 제조된 철쭉뿌리 추출물을 0.01∼50중량%로, 바람직하게는 0.1-10 중량%가 되게 함유하는 것을 특징으로 한다.The cosmetic composition according to the present invention is characterized in that it contains 0.01 to 50% by weight, preferably 0.1 to 10% by weight of the azalea root extract prepared above.
본 발명의 아토피성 피부염 또는 습진 치료 또는 개선용 화장료 조성물은 통 상의 제형을 가질 수 있으며, 예를 들면 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 바디로션, 바디오일, 바디에센스 등으로 제형화 될 수 있다. 이들 각 제형의 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다. 이하에, 아토피성 피부염 또는 습진 치료용 조성물의 대표적인 스킨과 로션 조성물을 예를 들어 대표적인 기제 성분과 첨가물들에 대해 설명한다.The cosmetic composition for treating or improving atopic dermatitis or eczema of the present invention may have a conventional formulation, for example, formulated with softening longevity, astringent longevity, nourishing longevity, nutrition cream, body lotion, body oil, body essence, etc. Can be. The composition of each of these formulations may contain a variety of bases and additives necessary for the formulation of the formulation and are suitable, and the types and amounts of these components can be readily selected by those skilled in the art. In the following, representative skin and lotion compositions of the composition for treating atopic dermatitis or eczema will be described, for example, representative base ingredients and additives.
또한 본 발명에 따른 아토피성 피부염 또는 습진 치료용 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.In addition, the cosmetic composition for treating atopic dermatitis or eczema according to the present invention may be used according to a conventional method of use, and the number of times of use may vary depending on the skin condition or taste of the user.
이하, 본 발명의 실시예를 통하여 본 발명의 아토피성 피부염 치료용 화장료 조성물을 보다 상세히 설명하지만, 본 발명이 이들 실시예 에만 국한되는 것은 아니다.Hereinafter, the cosmetic composition for treating atopic dermatitis of the present invention will be described in more detail with reference to examples of the present invention, but the present invention is not limited to these examples.
실시예 1 : 철쭉뿌리 물추출물의 제조Example 1 Preparation of Water Extract of Azalea Root
건조한 철쭉뿌리 1kg 에 10L의 증류수를 가한 후 95℃에서 8시간 2회 반복 추출한 다음 400 메쉬 여과포로 여과하고 0.45 ㎛의 필터 여과한 후 감압 농축하여 추출물 172 g, 을 얻었다.10 L of distilled water was added to 1 kg of dried azalea roots, followed by repeated extraction for 8 hours at 95 ° C., filtered through a 400 mesh filter cloth, filtered through a filter of 0.45 μm, and concentrated under reduced pressure to obtain 172 g of an extract.
실시예 2 : 철쭉뿌리 메탄올 추출물의 제조Example 2 Preparation of Azalea Root Methanol Extract
철쭉뿌리 1kg에 10L의 메탄올을 가한 후 70℃에서 6시간 2회 반복 추출한 다음 400 메쉬여과포로 여과하고 0.45 ㎛의 필터 여과한 후 감압 농축하여 추출물 131 g, 을 얻었다.10 L of methanol was added to 1 kg of azalea roots, followed by repeated extraction for 6 hours at 70 ° C., followed by filtration through 400 mesh filters, 0.45 μm filter filtration and concentration under reduced pressure to obtain 131 g of an extract.
실시예 3 : 철쭉뿌리 에탄올 추출물의 제조Example 3 Preparation of Azalea Root Ethanol Extract
건조한 철쭉뿌리 1kg 에 10L의 에탄올을 가한 후 80℃에서 7시간 2회 반복 추출한 다음 400 메쉬 여과포로 여과하고 0.45 ㎛의 필터 여과한 후 감압 농축하여 추출물 57g을 얻었다.10 L of ethanol was added to 1 kg of dried azalea roots, followed by repeated extraction for 7 hours at 80 ° C., filtered through a 400 mesh filter cloth, filtered through a filter of 0.45 μm, and concentrated under reduced pressure to obtain an extract 57 g.
실시예 4 : 철쭉뿌리 50 wt% 메탄올 추출물의 제조Example 4 Preparation of 50 wt% Methanol Extract of Azalea Root
건조한 철쭉뿌리 1kg 에 10L의 50 wt% 메탄올을 가한 후 70℃에서 6시간 2회 반복 추출한 다음 400 메쉬 여과포로 여과하고 0.45 ㎛의 필터 여과한 후 감압 농축하여 추출물 153g을 얻었다.10 L of 50 wt% methanol was added to 1 kg of dried azalea roots, followed by repeated extraction for 6 hours at 70 ° C., followed by filtration through a 400 mesh filter cloth, filtered through a 0.45 μm filter, and concentrated under reduced pressure to obtain 153 g of an extract.
실시예 5 : 철쭉뿌리 50 wt% 에탄올 추출물의 제조Example 5 Preparation of 50 wt% Ethanol Extract of Azalea Root
건조한 철쭉뿌리 1kg 에 10L의 50 wt% 에탄올을 가한 후 80℃에서 7시간 2회 반복 추출한 다음 400 메쉬 여과포로 여과하고 0.45 ㎛의 필터 여과한 후 감압 농축하여 추출물 89g을 얻었다.10 L of 50 wt% ethanol was added to 1 kg of dried azalea roots, and extracted twice at 80 ° C. for 7 hours, filtered through a 400 mesh filter cloth, filtered through a 0.45 μm filter, and concentrated under reduced pressure to obtain 89 g of an extract.
실시예 6: 항균효과 실험Example 6: Antimicrobial Effect Experiment
상기 혼합추출물 중 상기 실시예 1 ∼ 5에 대하여 항균효과를 측정하였다.The antimicrobial effect of the mixed extracts was measured for Examples 1 to 5.
항균성 실험은 페이퍼 디스크 (paper disc)를 이용한 아가 확산(agar diffusion)법으로 측정하였다. 균주는 다음과 같은 미생물 공시균주로 사용하였다. 대장균 [Escherichia coli (ATCC25922)], 칸디다 알비칸[Candida albicans (ATCC 10259)], 스타필로코커스 아우레우스 [Staphylococcus aureus (ATCC 29737)], 바실러스 섭틸리스 [Bacillus subtilis (ATCC 6633)]을 선택하였다. 배지로는 대장균의 경우 트립티케이스 소이 아가(Tripticase soy agar)를 사용하였으며, 칸디다 알비칸, 스타필로코커스 아우레우스, 바실러스 섭틸리스의 경우 뉴트리언트 아가(Nutrient agar)를 사용하였다. 균주들을 액체배지 100 ㎖에 한 백금이를 접종하여 32 ℃에서 20시간 배양하여 활성화시켰다. 그 액을 각각의 배지에 100 ㎕접종(107 ∼ 108 cfu/㎖)하여 플레이트 위에 덮고 각 추출물을 멸균된 디스크 플레이트 표면 위에 올려놓고 시료 20 ㎕씩 점적하였다. 36시간 배양하여 디스크 주위에 생성된 저해환의 직경(mm)으로 항균력을 측정하였다(표 1).Antimicrobial experiments were measured by agar diffusion using a paper disc. The strain was used as the following microbial test strain. Escherichia coli (ATCC25922), Candida albicans (ATCC 10259), Staphylococcus aureus (ATCC 29737), Bacillus subtilis (ATCC 6633) are selected. It was. As a medium, trypticase soy agar was used for E. coli, and nutritic agar was used for Candida albican, Staphylococcus aureus, and Bacillus subtilis. Strains were inoculated with 100 ml of liquid medium and incubated at 32 ° C. for 20 hours to activate. The solution was inoculated in 100 μl (107-108 cfu / ml) in each medium, covered on a plate, and each extract was placed on a sterile disc plate surface and 20 μl of the sample was instilled. Incubation for 36 hours to determine the antimicrobial activity by the diameter (mm) of the inhibitory ring formed around the disk (Table 1).
[표 1]TABLE 1
실시예 7: 항히스타민 활성 시험Example 7: Antihistamine Activity Test
10마리의 기니아피그 (Gunia pig) 암컷 (약 250g)으로부터 폐 조직 (마리당 약 2.8 g)을 분리하여 지방조직과 기관지, 혈액을 제거한 후 Ca2+, Mg2+ 및 0.1% 젤라틴이 함유된 티로이드 완충액 (TGCM buffer)을 사용하여 15, 15, 25분 동안 3번 효소처리 (5mg/㎖ 콜라게나제(collagenase), 1.8unit/27㎕ 엘라스타아제(elastase)) 하였다. 각 효소처리마다 나일론 메쉬(nylon mesh)와 메탈 메쉬(metal mesh)(100㎛)로 여과한 후 원심 분리하였다(단순분산된 비만세포라 함). 펠릿(pellets)을 Ca2+, Mg2+ -free, 0.1% 젤라틴 함유 완충액(TG buffer) 16㎖에 현탁(suspension)시켜 러프 퍼콜(rough Percoll) (1.041mg/㎖ 밀도)에 부하(loading)시켜 20분간 1,500rpm에서 원심 분리하여 펠릿을 얻었다. 다시 TG buffer 8㎖에 세포를 현탁시켜 불연속 퍼콜(discontinuous Percoll) (1.06-1.10mg/㎖ 밀도)에 부하하여 20분간 1500rpm에서 원심 분리하여 다양한 세포층으로 분리하였다. 그 중 3, 4층에 주로 비만세포가 존재하므로 이 층의 세포를 얻어 TGCM buffer로 두 번 세척하였다. 전체세포 및 비만세포는 각각 트립판 블루(trypan blue) 및 알시안 블루(alcian blue)로 염색하고 현미경으로 세포수를 측정하여 비만세포의 순수도 (purity)를 측정한 결과 약 80~90%를 얻었다.Lung tissue (approximately 2.8 g per horse) was isolated from 10 guinea pig females (approximately 250 g) to remove adipose tissue, bronchus and blood, followed by a tea containing Ca 2+ , Mg 2+ and 0.1% gelatin. Enzyme treatment (5 mg / ml collagenase, 1.8 unit / 27 μl elastase) was performed for 15, 15 and 25 minutes using Lloyd's buffer (TGCM buffer). Each enzyme treatment was filtered through a nylon mesh (nylon mesh) and a metal mesh (metal mesh) (100㎛) and centrifuged (called simple dispersed mast cells). The pellets are suspended in 16 ml of Ca 2+ , Mg 2+ -free, 0.1% gelatin-containing buffer (TG buffer) and loaded into rough percoll (1.041 mg / ml density). The pellet was centrifuged at 1500 rpm for 20 minutes to obtain pellets. The cells were suspended in 8 ml of TG buffer and loaded into discontinuous Percoll (1.06-1.10 mg / ml density) and centrifuged at 1500 rpm for 20 minutes to separate them into various cell layers. Since mast cells exist mainly in layers 3 and 4, cells of this layer were obtained and washed twice with TGCM buffer. Whole cells and mast cells were stained with trypan blue and alcian blue, respectively, and the number of cells was measured under a microscope to measure the purity of mast cells. Got it.
비만세포(4105 cells)에 해명 IgG1 항체 (anti-OVA 1㎖/106 cells)를 가하여 37℃에서 45분간 반응시킨 후 비만세포 막에 결합되지 않은 anti-OVA 항체를 제거하기 위하여 TGCM 완충액으로 세척하였다. 세포를 1㎖ TGCM에 현탁시킨 후 각 농도의 약물(검색하고자 하는 물질)로 5분 동안 전 처치하였다. 1.0㎍/㎖ OVA(ovalbumin)로 감작하여 10분 동안 반응시킨 후 얼음에서 냉각하여 원심분리 후 상층 액에서 히스타민을 측정하였다.After elucidating IgG1 antibody (anti-OVA 1ml / 106 cells) to mast cells (4105 cells) and reacting for 45 minutes at 37 ° C, the cells were washed with TGCM buffer to remove the anti-OVA antibody not bound to the mast cell membrane. . The cells were suspended in 1 ml TGCM and then pretreated for 5 minutes with each concentration of drug (substance to be searched). Histamine was measured in the supernatant after centrifugation after cooling with ice for 10 minutes by sensitization with 1.0 μg / ml OVA (ovalbumin).
각 시료에 유리된 히스타민 양은 시라가니언(Siraganian)의 방법을 변형하여 자동화된 연속-흐름 추출(automated continuous-flow extraction) 및 플루오로메트릭 분석기(flourometric analyzer)(Astoria analyzer series 300, Astoria-pacific international, Oragon, USA)를 사용하여 측정하였다. 1N-염산, 0.73M 인산, 5N 수산화나트륨, 1N 수산화나트륨, 염분 희석제 및 시료 세척(saline diluent and sampler wash), o-프탈알데히드(o-phthalaldehyde) 용액을 준비하여 분석기(analyzer)에 연결된 튜브를 연결한 후 히스타민 저장 용액을 20ng, 10ng, 5ng, 3ng, 1ng로 희석하여 표준 곡선의 농도-의존적 결과를 얻은 후, 2% 과염소산으로 각 시료를 희석하여 히스타민 양을 측정하였다. 각 시료에 함유된 히스타민의 양은 천체 사용된 세포에 함유된 히스타민 양에 대한 백분율로 표시하였다 (표2).The amount of histamine liberated in each sample is modified by the method of Siraganian, which is based on automated continuous-flow extraction and fluorometric analyzer (Astoria analyzer series 300, Astoria-pacific international). , Oragon, USA). Prepare a 1N-hydrochloric acid, 0.73M phosphoric acid, 5N sodium hydroxide, 1N sodium hydroxide, saline diluent and sampler wash, o-phthalaldehyde solution and connect the tube connected to the analyzer. After ligation, the histamine stock solution was diluted to 20 ng, 10 ng, 5 ng, 3 ng, and 1 ng to obtain concentration-dependent results of the standard curve, and then each sample was diluted with 2% perchloric acid to measure the amount of histamine. The amount of histamine contained in each sample was expressed as a percentage of the amount of histamine contained in astronomically used cells (Table 2).
[표 2]TABLE 2
처방예 1 및 비교처방예 1 : 본 발명 아토피성 피부염 치료효과가 있는 스킨로션의 제조Formulation Example 1 and Comparative Example 1: Preparation of skin lotion having a therapeutic effect on atopic dermatitis of the present invention
하기 표 3에 나타난 바와 같은 조성 비율로 스킨로션을 제조하였다.A skin lotion was prepared at the composition ratio as shown in Table 3 below.
[표 3] 스킨로션의 처방예[Table 3] Prescription of skin lotion
시험예 1 : 본 발명 스킨로션의 아토피성 치유 개선효과 확인시험Test Example 1 Test for Confirming the Atopic Dermatitis Improvement Effect of the Skin Lotion
3년 이상 아토피 피부염을 앓고 있고, 병원 치료를 받았으나 효과를 얻지 못한 두 어린아이를 대상으로 아토피 개선효과를 조사하였다. 대상 환자의 가장 심한 아토피 발생 부위인 엉덩이(도1)와 다리(도2) 부위에 처방예 1의 스킨로션을 14일간 아침과 저녁으로 피부에 1일 2회 14일간 도포한 후 아토피 상태 개선을 확인하였다. 도1 및 도2의 각 왼쪽 사진에서의 처방예1 도포전에 비하여 14일 후 오른쪽 사진들에서 나타난 바와 같이 엉덩이 및 다리 부위에 심한 아토피 증상이 완전히 개선된 결과를 얻었다.Two children who had atopic dermatitis for more than three years and who received hospital treatment but did not receive any effects were examined. The skin lotion of Formulation Example 1 was applied to the skin twice a day for 14 days in the morning and evening for 14 days on the hips (Fig. 1) and legs (Fig. 2), the site of the most severe atopic dermatitis, and improved atopic condition. Confirmed. As shown in the photographs on the right after 14 days compared to before application of Formulation Example 1 in each photograph on the left in FIG. 1 and FIG. 2, severe atopic symptoms were completely improved.
실시예 9 : 본 발명 아토피성 피부염 치료효과가 있는 밀크로션의 제조Example 9 Preparation of Milk Lotion Having an Atopic Dermatitis Treatment Effect
하기 표 4에 나타난 바와 같은 조성 비율로 스킨로션을 제조하였다.A skin lotion was prepared at the composition ratio as shown in Table 4 below.
[표 4] 밀크로션 처방예[Table 4] Prescription milk lotion
시험예 2 : 본 발명 밀크로션의 아토피성 치유 개선효과 확인시험Test Example 2: Confirmation test to improve the atopy healing effect of the present invention milk lotion
2년 이상 아토피 피부염을 앓고 있는 7세에서 18세의 환자 24명을 대상으로 아토피 개선효과를 조사하였다. 동일인에게 왼쪽 다리에는 처방예 2의 밀크로션을, 오른쪽 다리에는 비교처방예 2의 밀크로션을 매일 저녁 세정 후, 피부에 1일 1회 14일간 도포한 후 아토피 상태 개선을 확인하기 위하여 아토피 상태 개선 정도를 측정하였다.Twenty four patients aged 7 to 18 who had atopic dermatitis for more than 2 years were examined for atopic improvement. The same person washes the milk lotion of Formulation Example 2 on the left leg and the milk cream of Comparative Example 2 on the right leg every evening, and then applies it to the skin once a day for 14 days and then improves the atopic condition to confirm the improvement of atopic condition. The degree was measured.
[표5]Table 5
시험예 3 : 본 발명 밀크로션의 습진 치유 개선효과 확인시험Test Example 3: Confirmation test for improving the eczema healing of the milk lotion of the present invention
습진환자를 대상으로 부위에 처방예 2의 밀크로션을 14일간 아침과 저녁으로 피부에 1일 2회 14일간 도포한 후 아토피 상태 개선을 확인하였다. 환자의 가장 심한 습진 발생 부위인 손등에 처방예 2의 밀크로션을 14일간 아침과 저녁으로 피부에 1일 2회 14일간 도포한 후 습진 개선을 확인하였다. 도3의 왼쪽 사진에서의 처방예2의 도포전에 비하여 14일 후 오른쪽 사진들에서 나타난 바와 같이 놀라울 정도로 습진 증상이 완전히 개선된 결과를 얻었다.Eczema patients were applied to the site of the milk lotion of Formulation Example 2 twice a day for 14 days in the morning and evening for 14 days, and then confirmed the improvement of atopic condition. Milk lotion of Formulation Example 2 was applied to the skin twice a day for 14 days in the morning and evening for 14 days on the back of the hand, the site of the most severe eczema of the patient, and the improvement of eczema was confirmed. Surprisingly, eczema symptoms were completely improved, as shown in the right photographs after 14 days, compared to before application of Formulation Example 2 in the left photograph of FIG. 3.
이상에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 철쭉뿌리 추출물은 항균 및 항히스타민 활성을 갖으며 아토피 피부의 치유에 효능을 가지므로 화장품으로 활용될 수 있다.As can be seen from the above, the azalea root extract of the present invention has antibacterial and antihistamine activity and can be used as a cosmetic since it has an effect on the healing of atopic skin.
이와 같이 본 발명의 조성물은 천연물질이기 때문에 부작용의 위험성 없이 우수한 항히스타민 활성을 나타내어, 알러지, 천식, 또는 감기의 치료 및 예방을 위한 의약품 또는 건강기능식품으로 사용할 수 있다.As described above, the composition of the present invention exhibits excellent antihistamine activity without the risk of side effects because it is a natural substance, and can be used as a medicine or health functional food for the treatment and prevention of allergy, asthma, or cold.
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학위논문, 정민아(2002.2); 식물 추출물에서 β-Amylo |
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